Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:Влияние холецистокинина на поведенческие и нейрохимические эффекты этанола у крыс

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ р - ДТОСУ^АрЛВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ

. » На правах рукописи

1 4 И:оп 1Я97

^<3. О/У. ¥6.¿-7?.

МЕДВЕДЕВА ОЛЬГА ФЕЛИКСОВНА

ВЛИЯНИЕ ХОЛЕЦИСТОКИНИНА НА ПОВЕДЕНЧЕСКИЕ И НЕЙЮХИМИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЭТАНОЛА У КРЫС

14.00.45. - Наркология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 1997

Работа выполнена в лаборатории нейробиолопш влечений Государственного Научного Центра наркологии МЗ РФ

Научные руководители - академик РАМН ИЛАнохина

доктор медицинских наук С.КСудаков

Официальные оппоненты - доктор биологических наук, профессор ААКаменский, доктор медицинских наук В.П.Нужный

Ведущие учреждение - Институт нормальной физиологии РАМН им ГЪКАнохина

Зашита диссертации состоится "24" июня 1997 года в 10 часов на заседании Специализированного ученого совета Д 074.50.01 при Государственном Научном Центре наркологии МЗ РФ (121921, Москва, Малый Могильцевский пер., 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного Научного Центра наркологии МЗ РФ.

Автореферат разостлан "¡1" ЬисиР . 1997 года

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат биологических наук О.Ф.Львова

Актуальность проблемы. Широкий спектр фармакологических свойств, включая пааожительно-подкрепляющие, транквилизирующие, психостимулирующие, и легкая доступность делают этанол наиболее популярным психотропным средством, позволяющим быстро достигать необходимого эмоционального состояния. Способность алкоголя вызывать эйфорические ощущения у человека и активацию структур положительных эмоций у животных является важнейшим фактором развития влечения к алкоголю и зависимости от него. Проведенные исследования указывают на наличие определенной зависимости между способностью этанола активировать систему положительного подкрепления и возникновением влечения к алкоголю. Множественные и разнообразные эффекты этанола не оставляют сомнений о влиянии его на функции медиаторных систем ЦНС (Анохина, Коган, 1984, Коган, 1989). Одним из основных звеньев действия этанола на катехоламинергическую систему мозга является активация высвобождения и разрушения нейромедаатора дофамина (Анохина, 1990). Именно избыточным высвобождением дофамина из нервных окончаний нейронов мозга можно объяснить фазу психического и двигательного возбуждения, которое наблюдается после приема этанола. После выброса катехоламинов срабатывает система обратной регуляции, которая не просто нормализует состояние системы, но создает временный дефицит катехоламинов в синаптичеекой щели. Возможно, это служит побуждающим фактором к повторному приему этанола. По мнению многих исследователей, в основе положительно-подкрепляющих свойств этанола лежит активаиия дофаминовой передачи в лимбической системе, главным образом в прилежащем ядре (Samson, et al, 1992, Diana, et al 1992, Diana, et al, 1993, Yan, et al, 1996). Дофаминергические волокна, проходяшие через вентральную покрышку к прилежащему дпру могут принимать основное участие в регуляции положительно-подкрепляюших свойств згансша (Johnson and Ccwen, 1993).

При длительном потреблении этанола, состояние сниженного выхода, усиленной деградации и повышенного обратного захвата дофамина приводит к дефициту этого нейромедаатора. Прием умеренной дозы этанола на этом фоне вызывает усиленный выброс имеющегося в связанном состоянии дофамина, что на короткое время улучшает функции ЦНС Однако, высвобожденный дофамин быстро разрушается и дефицит его в ЦНС является еще более значительным. Таким образом создается "порочный круг", который может лежать в основе психической зависимости от алкоголя.

Исхода из этого, для успешного лечения патологического влечения к алкоголю необходимы средства, избирательно воздействующие на катехоламинергическую систему, и оказывающие нормализующее действие на изменения,, вызываемые этанолом.

Одаим из таких веществ может являться нейропептид холеиистокинин (ХЦК). Холеиистокинин, один из первых гастроинтестиналыных пептидов, который был обнаружен в мозге млекопитающих (Vanderfiaegen et al, 1975). Исследования

показали, что около 90% ХЦК в центральной нервной системе составляет С-концевой октапептцд с сульфатной группировкой на сед ьмой позиции у молекулы тирозина (Larsson, Rehfeld, 1979, Dockraу, 1980). В различных отделах ЦНС холецистокинин содержится вместе с дофамином (Bourin, et al, 1991, Laitinen, et al, 1990). Методами иммуногисюхимии и гибридазадаи in situ было обнаружено, что ХЦК высвобождается из тех же клеток, что и дофамин, по крайней мере в 40% нейронов среднего мозга (Hokfelt, et al, 1980, Freeman, et al, 1991). Известно, что холецистокинин является мощным регулятором дофаминовой передачи в мезсшимбической системе, и в частности в прилежащем ядре (Freeman, et al, 1991, Sills and Vaccarino, 1991 Laduxelle, et al, 1995). Сосуществование ХЦК и дофамина в одних и тех же нервных клетках позволяет предположить, что ХЦК может влиять на различные процессы в организме, опосредованные через дофаминергическую систему (Vaccarino, 1994), включая систему положительного подкрепления (Crawley, 1991, Ladurelle, 1993).

Таким образом, немалый интерес вызывает изучение влияния ХЦК-Ss на влечение к алкоголю. В 1984 году было экспериментально установлено, что ХЦК-Ss снижает потребление этанола у крыс (Kulkosky and Chavez, 1984). Этот эффект ХЦК-& бьш подтвержден в более поздних исследованиях (Анохина и др., 1990, Kulkosky, et al, 1988, Kulkosky, et al, 1993) и опробован в клинике алкоголизма (Анохина, Иванец, 1988). Однако, авторы использовали только периферическое введение пептида, а данные о проникновении его через гематоэнцефалический барьер носят противоречивый характер (Громов, 1992). Кроме этого, механизмы, лежащие в основе этого эффекта остаются не выясненными, и требуют дальнейшего изучения. В связи с этим, ЦЕЛЬЮ нашей работы было выявление влияния ХЦК-8 на активирующий, расслабляющий, анксислитический и атаксический эффекты этанола, а так же на потребление алкоголя, и определение возможных механизмов этого влияния. В ходе исследования решались следующие ЗАДАЧИ:

1. Сравнить влияние центрального и периферического введения холеиистокинина на активирующий, расслабляющий, анксиолитический и атаксический эффекты введения этанола.

2. Сравнить влияние центрального и периферического введения холеиистокинина на добровольное потребление этанола интактными крысами.

3. Изучить влияние холеиистокинина на метаболизм дофамина и серотонина в прилежащем ядре после введения этанола.

4. Изучить влияние холеиистокинина на потребление этанола хронически-алкоголизированными крысами.

Наичная новизна.. В работе установлено, что, как центрально, так и периферически вводимый холецистокинин препятствует развитию активирующего и депрессивного эффекта этанола на двигательную активность крыс, а также развитию анксиолитического эффекта этанола. Впервые показано, что XUK-8s

препятствует атаксии, вызываемой введением этанола. В работе также показано однонаправленное действие центрально и периферически вводимого холецистокинина на потребление алкоголя у интакгных крыс. Установлено также, что ХЦК-Ss, вводимый в боковой желудочек мозга, препятствует увеличению уровня метаболитов дофамина и серотонина в прилежащем ядре мозга крыс после введения этанола. Обнаружено, что ХЦК снижает потребление алкоголя только у хронически-алкогшизированных крыс, склонных к потреблению этанола, и не влияет на хронически-алкоголизированных крыс, потребляющих этанол в незначительных количествах.

Практическая ценность работы. Полученные в работе результаты представляют интерес для разработки новых средств терапии алкоголизма. Исследование влияния холецистокинина на различные фармакологические эффекты этанола дает возможность создания новых средств для лечения алкоголизма на основе холецистокинина, в частности, препаратов, снижающих патологическое влечение к алкоголю путем воздействия на положительно подкрепляюшце свойства этилового спирта, а также средств, препятствующих развитию острой алкогольной интоксикации.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: заседании Российского Нейрохимического Общгства 22 февраля 1996 года; заседании Проблемной комиссии по вопросам наркологии Государственного Научного Центра Наркологии 13 марта 1997 года.

Структура диссертации. Диссертация изложена на f страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, посвященного нейрохимическим механизмам действия холецистокинина на организм, материалов и методов исследований, трех глав результатов исследований, обсуждения результатов, выводов и библиографии, включающей . названий. Диссертация содержит ¿3.. рисунков, 3 таблицы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

/.Влияние холеимстокитна на эффекты острого введения этанола.

1.1. Влияние ХЦК на двигательную активность и другие поведенческие показатели

крыс в тесте "открытое поле" после введения этанола.

Как было отмечено, прием алкоголя оказывает возбуждающее и анксиолитическое действие. В опытах на животных обнаружено активирующее и депрессивное влияние этанола на двигательную активность. При введении этанола в низких дозах (0.25 - 1.0 г/ кг) наблюдается увеличение локомоторной активности крыс (Imperato and Chiara, 1986), а высокие дозы (2.5 - 4.5 г/кг) вызывают подавление двигательной активности (Grabbe, 1983, Imperato and Chiara, 1986). Задачей нашего исследования было определить влияние

холецистокинина на двигательную активность и другие показатели крыс в тесте "открытое пале". Мы изучали влияние центрального (в б/ж мозга) и периферического (в/б) введения холецистокинина на поведение в "открытом поле" после введения этанола в дозе 1.5 г/ кг. В раде работ (Colombo, et al, 1990, Ycshimoto, et al, 1992, Benjamin, et al, 1993, Rozetti, et al, 1993,) показано, что эта доза оказывает выраженное фармакологическое действие, не приводя к сильным, токсическим изменениям в поведении (Stodulka, 1991).

Для изучения влияния центрально вводимого ХЦК-Ss, 40 крысам (4 группы по 10 крыс) вживляли канюлю для внутримозговой инъекции. Животным первой группы (кошраль) вводили физиологический раствор в боковой желудочек мозга. Через 20 минут после инъекции вводили в/б физиологический раствор. Животным второй группы вводили ХЦК (0.75 цг) в б/ж мозга. Животным третьей группы вводили в/б 12% раствор этанола (1.5 г/кг). Животным четвертой группы вводали в б/ж мозга ХЩ (0.75 цг), через 20 минут вводили в/б раствор этанола. Для исследования влияния периферически вводимого ХЦК также использовались 4 группы животных. Животным первой группы вводили в/б физиологический раствор. Через 20 минут вводили физиологический раствор внутрижелудочно. Животным второй группы вводили в/б ХЦК (15 цг). Животным третьей группы вводили в/ж 12% раствор этанола (1.5 г/кг). Животным четвертой группы вводили в/б ХЩ (15 цг), через 20 минут вводали в/ж раствор этанола.

Животных помещали в "открытое поле" (ОП) на 3 минуты через 30, 60, 90 и 120 минут после введения этанола. Регистрировали горизшталшую активность, вертикальную активность (стойки), суммарное время груминга, количество выходов в центр псля и количество "отряхиваний".

Внутримозловое введение холецистокинина не влияло на поведение крыс в ОП. Внутрибрюшиндае введение этанола оказывало некоторый активирующий и ашсиодитический эффект через 30 минут после введения (рис.1). Горизонтальная активность несколько увеличивалась. Также наблюдалось снижение продолжительности груминга и увеличение выходов в центр поля и количества "отряхиваний". Через 60 и 90 минут не было замечено существенных изменений в поведенческих показателях крыс, которым вводали этанол, по сравнению с контрольными крысами. Через 120 минут после введения этанола наблюдался расслабляющий эффект, который выражался в снижении горизонтальной двигательной активности, продолжительности груминга и "отряхиваний" (рис. 2). Предварительное введение холецистокинина в боковой желудочек мозга препятствовало развитию этих эффектов этанола У животных, которым вводили холецистокинин перед введением этанола, через 30 минут после введения этанола горизонтальная активность была несколько понижена, по сравнению с крысами, которым вводили только этанол. Продолжительность груминга имела тенденцию к повышению, а количество выходов в центр и "отряхиваний" было ниже. Причем

о -+

N801

2 3 4 5

| ахщс-жа ИМаС!-этанол • ХЦК-этанол

рис.1. Влияние внутримозгового введения ХЦК на поведение крыс в тесте "открытое поле" через 30 минут после в/б введения этанола.

¡-горизонтальная двигательная активность, 2-вертикальная двигательная активность, 3-продолжителькость груминга, 4-количество выходок в центр поля, 5-количество "отряхиваний".

по оси ординат - поведенческие показатели, выраженные в процентах по отношению к контролю. Показатели контрольной группы животных приняты за 100% * - р<0.05, по сравнению с контролем; + - р<0.05, по сравнению с этанолом

□ ХЦК-№С|

О ЫаС1-ггакол

■ ХЦК-этанол !

______I

рис.2. Влияние в/м введения ХЦК на поведение крыс в тесте "открытое поле" через 120 минут после введения этанола. Обозначения те же. что и на рис.1

12 3 4 5

| РХЦК-NaCl ■И«С1-этмол ЧЩК-уганол |

рис.3, влияние внутрибрюшинного введения ХЦК на поведение крыс в "открытом поле" через 120 минут после внутрижедудочного введения этанола. Обозначения те же, что и на рис. 1и 2.

все эти показатели у крыс, которым вводили холецистокинин перед введением этанола, практически соответствовали показателям контрольной группы (рис. 1). Через 120 минут после введения этанола у животных, которым вводили холецистокинин перед этанолом, двигательная активность, продолжительность груминга и количество "стряхиваний" были выше, чем у крыс, которым вводили только этанол, и приближались к значениям контрольной группы (рис. 2). Следовательно, ХЩ-& вводимый в б/ж мозга препятствовал активирующему и расслабляющему эффекту внутрибрюшинного введения этанола.

Внутрибрюшинно вводимый XUK-8s также не влиял на поведение крыс в "открытом псше". Внугрижелудочное введение этанола не изменяло поведения крыс через 30, 60 и 90 минут после введения Через 120 минут после введения этанола наблюдался активирующий эффект, выражавшийся в увеличении горизонтальной и вертикальной активности и некотором увеличении времени груминга и выходов в центр (рис. 3). Предварительное в/б введение ХЦК препятствовало такому увеличению двигательной активности и продолжительности груминга Таким образом, холецистокинин, вводимый как центрально, так и периферически, препятствовал активирующему и релаксирующему эффекту этанола на двигательную активность и другие поведенческие показатели крыс в тесте "открытое пате".

1.2. Влияние холецистокинина на развитие анксисштического эффекта этанола

Так как в наших экспериментах по изучению поведения в "открытом попе" были получены некоторые данные, говорящие о подавлении холецистокинином анксиолитического действия этанола, задачей следующей части исследования было оценить влияние ХЦК-Ss на анксиолитический эффект этанола в тесте "крестообразный приподнятый лабиринт" В ряде работ показано, что, кроме общего возбуждения, введение этанола оказывает ярко выраженный анксиолитический эффект в специфических тестах, отражающих уровень тревожности у животных. Внутрибрюшинное введение этанола в различных дозах оказывает анксиояитическое действие в тесте "крестообразный приподнятый лабиринт" (Blanchard, et al, 1990, Lepóla, 1994), что выражается в увеличении количества выходов на открытые лучи, количества переходов из луча в луч и времени нахождения на открытых лучах у крыс и мышей (Haie, et al, 1990, Paivarint and Corpi, 1993, Criswell, Knapp, et al, 1994). Внутрижелудочное введение этанола оказывает анксиолитический эффект в "крестообразном лабиринте" в более высоких дозах (2, 3, и 4 г/кг)(Ргипей, et al, 1994).

Мы изучали влияние центрально и периферически вводимого холецистокинина на поведение крыс в установке "крестообразный приподнятый лабиринт" после введения этанола. Для каждого случая использовали 40 крыс (4 группы по 10 крыс). ХЦК и этанол вводили в тех же дозах и теми же способами, как при изучении поведения в "открытом поле".

Животных помещали в установку на 5 минут, через 30 минут после введения этанола. Регистрировали следующие показатели: ориентировочно-исследовательская активность (количество переходов из луча в луч), отдельно -количество выходов на открытые лучи, время нахождения на открытых лучах, время замирания, количество реакций груминга и суммарное время груминга, количество стоек, число заглядываний в открытые лучи и количество дефекаций.

Введение холецистокинина в боковой желудочек в дозе 0.75 цг оказывало анксиогенный эффект. Количество переходов из луча в луч, количество выходов на открытые лучи было несколько меньше. Время нахояедения та открытых лучах у этих животных снижено, по сравнению с животными контрольной группы (р<0.05)(таб.З). Введение ХЦК не оказывало значимого влияния на время груминга, по сравнению с крысами контрольной группы. Время замирания у животных, которым вводили ХЦК в боковой желудочек несколько увеличивалось, по сравнению с крысами контрольной группы (таб. 1).

Внутрибрюшинное введение этанола оказывало анксиолитический эффект. Количество переходов из луча в луч и количество выходов на открытые лучи у животных, которым вводили этанол, было значительно выше, чем у животных контрольной группы (р<0.05)(таб. 1). Введение этанола не оказывало существенного влияния на время груминга у крыс, по сравнению с крысами контрольной группы. Время нахождения на открытых лучах у животных, которым вводили этанол, было значительно выше, чем у крыс контрольной группы

Таблица 1. Влияние внутримозгового введения ходеиисгокинию на поведение крыс

Показатели 1 №СШаС1 ВДШаО ЫаО-этаиал ХЩ-этанал

Количество | 1.5 ± 0.8 переходов из луча 1 влуч 1 0.5 ± 0.3 6.7 ± 2.4 * 22 ± 1.6®

Количество выходов на открытые лучи 0.7 ± 0.4 0.2 ± 0.2 2.8 ± 0.8 * 1.0 ± 0.6

Время нахождения на открытых лучах (сек) 9.8 ± 2.9 2.8 ± 0.9 * 23.5 ± 5.4 * 8.1 ±4.7®

Суммарное время груминга (сек) 16.5 ± 11.5 18.8 ±11.8 23.5 ± 12.5 1.0 + 0.7®

Время замирания (сек) 86 7 ± 30.3 902 ± 23.5 55.8 ± 29.4 64.7 ± 17.5

Дефекации 1.3 ± 0.5 0.8 ± 0.4 0.3 ± 0.3 1.0 ±0.4

* - р<0.05, по сравнению с контрольной группой; ® - р<0.05, по сравнению с группой крыс, получавшей этанол;

(таб. 1 )(р<0.0б). Время замирания у крыс, которым ввели этанол, было несколько снижено, по сравнению с крысами контрольной группы. Введение ХЦК в боковой желудочек мозга за 20 минут до введения этанола блокировало анксиояитический эффект этанола в этом тесте. Количество переходов из луча в луч, время нахождения на открытых лучах и время груминга у животных, которым вводили ХЦК перед введением этанола, бьио снижено, по сравнению с крысами, которым Бюдали только этансщ (р<0.05)(таб. 1) и бьио практически равно значению этого показателя у животных контрольной группы (таб. 1). Количество выходов на открытые лучи также незначительно уменьшалось. Время замирания у крыс, которым вводили холецистокинин и этанол, имело тенденцию к повышению, по сравнению с крысами, которым вводили только этанол (таб. 1).

Таким образом, можно заключить, что введение ХЦК в боковой желудочек мозга в дозе 0.75 цкг за 20 минут до введения этанола препятствует развитию анксиолитического эффекта этанола.

Внутрибрюшинное введение холецистокинина также оказывало анксиогенный эффект. Количество переходов из луча в ..луч и количество выходов на открытые лучи у животных, которым вводили холецистокинин внутрибрюшинно в дозе 15 рг, было ниже, чем у животных контрольной группы (р<0.05)(таб. 2). Введение ХЦК-& не оказывало значимого влияния на время нахождения на открытых лучах (таб. 2). Время груминга и время замирания у крыс, которым вводили ХЦК-8б, было значительно выше, чем у животных контрольной труппы (р<0.05)(таб. 2).

и

Таблица 2. Влияние внутрибрюшинное введения холеиистокинина на поведение крыс в

Показатели Naö-NaQ ХЦК-NaCl Nad-этанол ХЦК-этанод

Количество переходов из луча в луч 3.9 ± 0.7 2.3 ± 0.5 * 42 ± 0.7 4.0 ± 0.7

Количество выходов на открытые лучи 1.7 ± 0.S 0.9 ± 0.3 1.7 ± 0.6 1.9 ± 0.7

Время нахождения на открьпых лучах (сек) 17.0 ± 6.8 18.4 ± 9.5 21.4 ±8.9 22.6 ± 11.2

Суммарное время груминга (сек) 0.9 ± 0.5 7.6 ± 4.5 * 1.0 ± 0.3 1.3 ±1.1 ,

Время замирания (сек) 157.4±12.8 182.8±11.6 * 126.7±13.16* 148.6 ±212

Дефекадая 1.4 ±0.4 0.6 ±0.2* 1.7 ±03 1Л ± 0.3

* - р<0.05, по сравнению с контрольной группой; ® - р<0.05, по сравнению с группой крыс, получавшей этанол;

Внутрижелудочное введение этанола не влияло на большинство показателей в лабиринте (таб. 2). Только время замирания у крыс, которым вводили этанол, было ниже, чем у крыс контрольной группы (р<0.05)(таб. 2).

Совместное введение XUK-8s в/б и этанола (спустя 20 минут после введения ХЦК-&) также не изменяло поведения в лабиринте. Только время замирания у крыс, которым вводали холецистокинин перед введением этанола, имело тенденцию к увеличению по сравнению с крысами, которым вводили только этанол (таб. 2), и почти соответствовало этому показателю у животных контрольной группы.

Таким образом, результаты проведенных экспериментов показали, что предварительное введение холецистокинина препятствует развитию анксислитического эффекта этанола. Однако, сам холецистокинин, введенный и в боковой желудочек мозга, и внутрибрюшинно, повышает уровень тревожности крыс в тесте "крестообразный приподнятый лабиринт".

1.3 Влияние холецистокинина на атаксический эффект, вызываемый введением этанола.

Кроме возбуждающего и анксиалитического эффекта, этанол в больших дозах провоцирует атаксический эффект. В ряде работ отмечается, что введение больших доз этанола (2г/кг и выше) вызывает нарушение координации движений, миорелаксациго, и состояние, соответствующее состоянию алкогольного опьянения у людей (Dar, 1992, Dar, Bowman, 1994, Colombo, 1995). В нашей работе мы оценивали влияние холецистокинина на изменение состояния

животного после введения относительно большой дозы этанола, используя тест "вертикальная сетка". Крысу с расстояния 0.5м бросали на сетку и оценивали способность животного удерживаться на ней и перемешзться вверх или в сгорону. Предлагали 5 попыток для каждого животного. Три и более успешные решения задачи крысой расценивали как выполнение условий теста.

Использовали 60 животных (6 групп по 10 крыс в каждой). Животным первой группы вводили в/б физиологический раствор, через 20 минут вводили физиологический раствор внутрижелудочно. Животным второй группы вводили ХЦК в дозе 15 цг в/б. Животным третьей и четвертой групп вводили в/ж раствор этанола в дозах 1.5 и 3 г/кг. Животным пятой и шестой групп за 20 минут до введения этанола вводили ХЩ-& в/б в дозе 15 рг. Эксперимент проводили через 30 минут после введения этанола.

В/б введение ХЦК-& не алияло на способность крыс удерживаться на вертикальной сетке. Введение этанола в дозе 1.5 г/кг также не влияло на этот показатель Предварительное введение холецистокинина в этом случае также не оказывало никакого действия. Введение этанола в дозе 3 г/кг резко нарушало двигательную активность, вызывало миорелаксацию, и, как следствие, снижало способность крыс удерживаться и перемешзться по сетке. У животных контрольной группы количество успешно выполненных реакций в среднем по группе составляло 4.0 ± 0.5. После введения этанола количество реакций у крыс в среднем по группе было 0.3 ± 0.16 (р<0.001, по сравнению с контрольной группой). Введение XDK-& за 20 минут до введения этанола препятствовало развитию этих нарушений. У животных, которым вводили ХЦК-&, количество успешно выполненных реакций составляло 2.9 ± 0.5 (р<0.01, по сравнению с животными, которым вводили только этанол).

Таким образом, ХЦК-Ss препятствует развитию нарушений, вызываемых введением этанола в больших дозах.

2. Влияние холецистокинина на добровольное потребление этанола интактными крысами.

В экспериментах по изучению влияния ХЦК на различные эффекты этанола нами было обнаружено, что холецистокинин противодействует активирующему, депрессивному, анксиолитическому и атаксическому эффектам этанола. Можно предположить, что холецистокинин может влиять также на положительно-годарепляюшие свойства этанола. Исходя из этого, задачей этой части исследования было определить влияние ХЦК, вводимого центрально и периферически на потребление этанола у крыс.

Для изучения влияния ХЦК на потребление этанола были отобраны крысы, которые в течение недели потребляли более 1 г этанола на кг веса в сутки при свободном выборе между 12% раствором этанола и водой. Использовали две группы животных по 10 в каждой. Эксперимент продолжался 12 дней. После 24-часовой водной депривации животным первой группы вводили в боковой

желудочек (б/ж) мозга физиологический раствор. Через 20 минут предоставляли две поилки, с 12% раствором этанола и водой. Через 2 часа регистрировали количество потребляемых жидкостей. После этого поилки убирали. Процедуру повторяли в течение четырех дней. В следующие четыре дня животным в б/ж мозга вводили 0.75 рг хопецистокинина ежедневно. В последние четыре дня эксперимента животным в б/ж мозга снова вводили изотонический раствор. Регистрировали количество потребляемых жидкостей по описанной выше схеме. У животных второй группы изучали влияние внугрибрюшинного введения ХЦК-& на потребление этанола по описанной выше схеме.

Видно, что центрально вводимый холецистокинин (в дозе 0.75 цг) снижал потребление алкоголя, по сравнению с предыдущими днями (р<0.05)(таб. 3). В следующие 4 дня, при замене хсшецистокинина на физиологический раствор потребление алкоголя увеличилось, но не достигло исходного уровня.

Таблица 3. Потребление алкоголя иягакгными крысами (в г этилового спирта на кг веса крысы)

физиологический раствор хопецистскинин физиологический раствор

внугримозговое введение neirmaa 0.67±023 0.16S±0.09* 0.4б±0.42

внутрибрюшинное введение пегтщда 0.96±0.18 0.7±0.2 2.01 ±0.24*«

* - р<0.05, по сравнению с физиологическим раствором

*** - р<0.001, по сравнению с XUJt

Внутрибрюшинно вводимый ХЦК-Ss в дозе 15 цг также уменьшал потребление алкоголя у крыс, да в меньшей степени, чем вводимый центрально (таб. 3). После прекращения введения ХЦК-&, в следующие 4 дня, когда крысам снова вводили физиологический раствор, потребление алкоголя крысами значительно увеличилось (р<0.001)(таб. 3).

Таким образом, холецистокинин, введенный как в желудочки мозга, так и внутрибрюшинно, действует одаонапрааленно, и снижает потребление алкоголя интактными крысами.

3. Влияние холецистокиниш на метаболизм дофамина в прилежащем ядре мозга крыс.

Поскольку в наших экспериментах бьшо обнаружено, что холецистокинин препятствует реализации эффектов этанола, а также снижает влечение к алкоголю, мы предполагаем, что холецистокинин обладает способностью снижать положительно-подкрепляющие свойства этанола Так как известно, что в основе положительно-подкрепляюших свойств этанола лежит активация дофаминовой передачи в лимбической системе, главным образом в прилежащем ядре (Samson, et al, 1992, Diana, et а! 1992, Diana, et al, 1993, Yan, et al, 1996), нам казалось целесообразным определить, может ли холецистокинин влиять на изменение

уровня дофамина и его метаболитов: ДОФУК и ГВК, а также метаболита серотонина Бюксиивдолилуксусной кислоты (5-ОИУК) под действием этанола.

Работа проделана совместно с сотрудниками лаборатории биомедешинского исследовательского центра компании АЖО, Хельсинки, Финляндия.

Влияние ХЦК-& на метаболизм дофамина в прилежащем ядре мозга крыс изучали методом микродиализа на свободно движущемся животном. Для проведения эксперимента зовд с полупроницаемой мембраной укрепляли в предварительно вживленной канюле таким образом, что кончик зонда располагался в прилежащем ядре мозга крысы. Через зовд прокачивали раствор Рингера для микродаализа со скоростью 1.5 рл/мин. Первую фракцию собирали через 3 часа после установки зовдз, последующие - каждые 10 минут. Концентрацию моноаминов в пробах диализата оценивали методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием электрохимической детекции.

Использовано 30 животных (5 групп по 6 крыс). В течение первых 90 минут собирали пробы диализата для определения фонового уровня моноаминов в прилежашем даре. Далее, в боковой желудочек мозга вводили ХЦК-& в дозах 0.1875, 0.375, 0.75 и 1.5 цг на крысу. Контрольной группе животных вводили физиологический раствор. Через 20 минут в/б вводили 12% раствор этанола в дозе 1.5 г/кг. Далее пробы диализата собирали в течение двух часов.

После в/б введения этанола, уровень дофамина в пробах диализата увеличивался на 51.1 ± 24% (р<0.05, по сравнению с фоновым уровнем). Пик приходится на 3040 минуты после введения этанола. К 80 минуте после введения этанола концентрация дофамина постепенно снизилась до исходного уровня (рис. 4а). XL1K-8S, введенный в боковой желудочек в дозах 0.1875 и 0.75 рг, за 20 минут до введения этанола не оказывал значительного влияния на изменение уровня дофамина после введения этанола. Введение ХЦК-Ss в дозах 0.375 и 1.5 мг препятствовало увеличению уровня дофамина в прилежащем ядре после введения этанола (рис. 4а), по сравнению с крысами, которым вводили только этанол, но различия между контрольной и опытными группами были выражены слабо.

После введения этанола внеклеточная концентрация даоксифенилуксусной кислоты также значительно повышалась (р<0.05, по сравнению с фоновым уровнем). Через 50 минут после введения этанола концентрация метаболита увеличилась на 67.3 ± 24.9% по сравнению с уровнем до введения (рис. 46). ХВД-Ss в дозе 0.1875 цг не влиял на изменение уровня ДОФУК под действием этанола. Введение холеиистокинина в дозе 0.375 цг за 20 минут до введения этанола приводило к тему, что уровень ДОФУК после введения этанола имел только незначительную тенденцию к повышению. К 60 минуте уровень метаболита увеличился на 16.3 ± 34.8% по сравнению с фоновым уровнем. ХЦК в дозе 1.5 рг также препятствовал увеличению уровня метаболита. Уровень

рис. 4 Влияние ХЩ-&, вводимого в б/ж мозга на изменение урони дофамина, ДОФУК. и ГВК в лрияежширм дпре после введения этанола в/б в дозе 1.5 г/кг, 1-внутрижелудсчковая инъекшш, 2 - введет« этаяода; по оси абсцисс - время эксперимента в минутах, по оси ортшг - ковджградия веществ в % от фонового уровня.

А - уровень дофамина; Б - уровень ДСХШК; В - уровень ГВК * - р<0-05 (по сравнению с физиожгачесим раствором)

рис.5 Влияние ХЦК&, ввсдамого в б/ж мозга на изменение уровня 50ИУК в прилежащем даре после введения этанола в/б в дрэе 1.5 г/кг; 1-внутрижелуяочковая иньекщи, 2 - введение этанола; т оси абсцисс -время эксперимента в минутах, по оси ординат - кшщаггравдя вещэств в % от фоновош уровня.

даоксифенилуксусной кислоты после введения этанола повысился к 60 минуте на 27.6 ± 12.4% по сравнению с фоновым уровнем, но различия между опытной и контрольной группой статистически недостоверны. ВведениеХЦК-&в дозе 0.75 цг за 20 минут до введения этанола полностью подавляло действие этанола на уровень ДОФУК (рис. 46), т.е. уровень метаболита после введения этанола не отличался от уровня до введения (р<0.05 по сравнению с животными, которым вводили только этанол).

Наибольшее увеличение уровня ГВК наблюдалось через 110 минут после введения этанола (на 91.4 ± 43% по сравнению с фоном) (рис. 4в). Предварительное введение ХЦК-& в дозах 0.1875, 0.375 и 1.5 рг препятствовало росту уровня метаболита после введения этанола. Уровень ГВК после введения этанола увеличился через 110 минут на 57.2 ± 15.4%, 28.9 ± 26.5% и 41.7 ± 12.5% соответственно, по сравнению с уровнем до введения. Введение хсяеиистокинина в дозе 0.75 цг препятствовало развитию эффекта этанола на уровень ГВК (рис. 4в), концентрация ГВК после введения этанола не отличалась от концентрации до введения (р<0.05, по сравнению с животными, которым вводили только этанол).

Введение этанола вызывало также увеличение уровня метаболита серотонина, Б-оксиивдодилуксусной кислоты в прилежащем ядре. Через два часа после инъекции уровень &ОИУК повысился на 60.9 ± 38.2% по сравнению с уровнем до введения этанола (рис. 5). Хопеиистокинин в дозах 0.1875 и 0.375 цг не влиял на изменение уровня 5чжсиивдолилуксусной кислоты. Введение холевдстокинина в дозе 1.5 рг за 20 минут до введения этанола приводило к тому, что уровень метаболита через 120 минут после введения этанола увеличивался на 41.4 ± 21.4% по сравнению с фоновым уровнем, что на 20 % меньше, чем у крыс контрольной группы. У животных, которым вводили

холецнстокинин в дозе 0.75 рг за 20 минут до введения этанола уровень исследуемого метаболита после введения этанола имел незначительную тенденцию к увеличению. Через 120 минут уровень &ОИУК увеличился только на 20.9 ± 33.3% (рис. 5).

По результатам этих экспериментов можно заключить, что халецисгокинин в дозе 0.75 рг не влияет на увеличение уровня дофамина, и, возможно, серотонина, но препятствует возрастанию уровня их метаболитов в прилежащем ядре мозга крыс после введения згганола. Введение ХЦК в дозе 0.375 и 1.5 рг препятствует возрастанию уровня дофамина во внеклеточном пространстве после введения этанола, но эффект этих доз на метаболиты дофамина и серотонина менее выражен.

4 Влияние халецистокиншш на потребление этанола и хрошчесш-алкоголизированных крыс.

В результате проведенных экспериментов можно считать доказанным, что холеиистокинин принимает участие в регуляции острых эффектов этанола и в формировании влечения к алкоголю, снижая положителшоподкрепляюшие свойства этанола. Мы предполагаем, что холецнстокинин может участвовать и в формировании хронической алкогольной зависимости. Исходя из этого, в этой части экспериментов мы оценивали влияние ХЦК-& на потребление этанола у хронически-алгалшизированных крыс.

Таблица 4. Добровольное пстрбление этанола хровдчежиналкогшшрованньми крысами (в г этилового спирта на кг веса крысы).__

фюиологическш раствор халецисгокинин

крысы, склонные к потреблению этанола 1.69±0.35 0.94±0.18*

крысы, не склонные к потреблению этапеша 0.33 ±0.12 0.27+0.14

* - р<0.05, по срашкнио с физисдогическим раствором

Для изучения влияния ХЦК на потребление этанола хронически-алкотлизированными крысами использовали животных, которым в течение 4-х месяцев в качестве единственного источника жидкости был предоставлен 12% раствор этанола. Из них были отобраны дае группы крыс по 10 в каждой. Животные первой группы потребляли более 50% раствора этанола от общего количества потребляемой за сутки жидкости при свободном выборе между алкоголем и водой. Животные второй группы практически не потребляли алкоголь, предпочитая воду. У животных обеих групп определяли влияние центрально вводимого ХЦК-& на потребление алкоголя. Эксперимент проводили в течение 8 даей по описанной выше схеме. Первые четыре дня крысам вводили в боковой желудочек мозга физиологический раствор, в последующие четыре дая

крысам вводили в боковой желудочек ХЦК-fe в дозе 0.75 цг. Определяли количество потребляемого этанола за два часа в г чистого этанола на кг веса животного.

Введение в желудочки мозга холеписгокинина в дозе 0.75 цг приводило к тому, что потребление этанола у крыс, склонных к нему, снижалось (р<0.05)(таб. 4), Внугримозговое введение ходевдстокинина не влияло на потребление этанола крысами, потребляющими этанол в незначительных количествах (таб. 4).

Таким образом, холецисгокинин, введенный в желудочки мозга, снижает потребление раствора этанола только у крыс, у которых в результате хронической алкоголизации развивается влечение к алкоголю.

обсуждение результатов.

В результате проведенных экспериментов мы обнаружили, что халевдстокинин, вводимый центрально и периферически препятствует развитию активирующего, релаксирующего и анксиолитического эффектов этанола и угнетает потребление этанола. При этом стоит отметить, что центрально и периферически ввод имый ХЦК-& действует одаонапрааленно. По-видимому, и на центральном, и на периферическом уровне эффекты XLQv-Ss реализуются через один и тот же тип рецепторов. Следовательно, действие хсшецистокинина на эффекты этанола не зависит от типа введения пептида.

Способность алкоголя оказывать активирующий и релаксируюшии эффект, а так же анксиадитическое и транквилизирующее действие алкоголя являются основой положительно-подкрепляющих свойств этанола. Причина потребления этанола крысами, по-видимому, лежит в способности его оказывать положительно-подкрепляющие свойства. Показано, что потребляют раствор этанола только те животные, у которых алкоголь повышает активность системы положительного подкрепления, т.е. потребление этанола происходит в связи с возникновением после его приема положительных эмоций, возбуждения, снятия напряжения, снижения тревожности. Проведенные исследования указывают на наличие определенней зависимости между способностью этанола активировать систему положительного подкрепления и возникновением влечения к алкоголю. Стимулирующий эффект этанола на двигательную активность опосредуется через медааторные системы мозга, главным образом через дофаминовую и серотониновую (Yoshimoto at all, 1992, Benjamin at all, 1993, Rozetti at all, 1993). В развитии релаксирующего эффекта этанола принимает участие также ГАМК-ергическая система (Gessa, et al, 1990, Becker and Anton, 1990). Анксиолитический эффект этанола, по всей видимости, модулируется через ГАМК-А рецепторы (Gessa, et al, 1990, Becker and Anton, 1990). По мнению некоторых исследователей, стимулирующий эффект этанола на двигательную активность, и

анксиолитический эффект этанола регулируются двумя разными механизмами (Haie, et al, 1990). Следовательно, положительно-подкрепляющие свойства этилового спирта обусловлены его влиянием на нейромеднаторные системы ЦНС. Большинство исследователей убеждены, что мезолимбическая дофаминергическая система играет главнейшую роль в развитии положительно-подкрепляюшцх свойств этанола (Koob and Weiss, 1990, Samson, et al, 1991, Koob, 1992). При этом центром регуляции их является прилежащее ядро (Samson, et al, 1993, Weiss, et al,

1993, Lança, et al, 1994). Положительно-подкрепляющие свойства этанола усиливаются при аппликации в прилежащее ядро агонистов дофаминовых рецепторов (Hodge, et al, 1992), в то время как аппликация антагонистов дофаминовых рецепторов ослабляет эти свойства (Samson and Hodge, 1993), в частности реакцию самовведения этанола (Rassiniok, et al, 1993). Следовательно, положительно-пощфешшющие свойства этанола можно объяснить увеличением дофаминовой передачи в лимбической системе, главным образом в прилежащем ялре (Samson, et al 1992, Diana, et al 1992, Diana, et al, 1993, Yan, et al, 1996).

Кроме дофамина, также могут участвовать в регуляции положительно-подкрепляющих свойств этанола некоторые другие медиаторы, из которых наиболее важным является серотонин (Lyness and Smith, 1992, Le Marquand, et al,

1994, Blomqvist, et al, 1994). Введение различных блокаторов серотониновых рецепторов может снижать потребление этанола, и, кроме того, блокировать высвобождение дофамина, вызванное этанолом (Panocka and Massi, 1992, Johnson and Cowen, 1993, Myers, et al, 1993, Panocka, 1993, Tomkins, et al, 1995). Известно, что самовведение этанола увеличивало уровень дофамина и серотонина в прилежащем ядре (Weiss, et al, 1996). Кроме этого, показано, что введение этанола стимулирует ГАМК-индуцируемое открытие Cl" каналов в нейронных мембранах (Gessa, et al, 1990). Также было отмечено, что введение диазепама снижало потребление этанола (Gewis, et al, 1991, June, et al, 1994), что подтверждает участие ГАМК-ергаческой передачи в положительном подкреплении этанола (Hodge, et al, 1995).

Таким образам, дофаминергическая, серотонинерпическая, ГАМК-ергическая, а также опиоидаая системы вовлечены в регуляцию потребления этанола и фармакологических эффектов этанола (McBride et al, 1990, Samson, et al, 1990, George and Ritz, 1991, Nevo and Hamor, 1995). Эти же системы тесно связанны с действием сульфатированного холецистокинина в центральной нервной системе (Crawley, 1991, Vaccarino, 1994)

Известно, что холеиистокинин является мощным регулятором дофаминовой передачи в мезолимбической системе, и в частности в прилежащем ядре (Freeman, et al, 1991, Sills and Vaccarino, 1991 Ladurelle, et al, 1995). Холеиистокинин содержится вместе с дофамином в нейронах мезолимбической системы, где он может модулировать различные физиологические функции (Crawley, 1991, Josselyn, et al, 1996), включая систему положительного

подкрепления и пищевое поведение (Crawley, 1991, Ladurelle, et al, 1993). Введение холеиистокинина уменьшало процесс самовведения кокаина (Vaccarino, et al, 1993,), а так же ослабляло реакцию "предпочтение места", обусловленную введением морфина (Higgins, et al, 1992). Выявленное в нашей работе влияние ХЦК-Ss на эффекты этанола, по всей видимости, объясняется взаимодействием холеиистокинина с нейромедааторными системами, участвующими в реализации эффектов этанола. В наших экспериментах обнаружено, что предварительное введение холецистокинина в боковой желудочек мозга в дозах 0.375 и 1.5 рг препятствовало увеличению уровня дофамина и его метаболитов, а введение ХЦК-8s в дозе 0.75 рг препятствовало росту уровня метаболитов дофамина и серотонина, но не влияло на уровень дофамина в прилежащем ядре. Следовательно, холецистокинин противодействует активации дофаминергической и серотонинергической систем, вызванной введением этанола. Эта результаты согласуются с ранее опубликованными данными, и расширяют их. В ряде работ показано, что холецистокинин способен как стимулировать дофаминергаческие нейроны, усиливая выброс дофамина (Marshall, et al, 1990, 1991, Ladurelle, 1993), так и угнетать, и подавлять выброс дофамина и его метаболитов (Tanganelli, et al, 1990, Marshall, et al, 1991), причем активирующий эффект опосредован через ХЦК-А рецептор, а угнетающий через ХЦК-Б (Marshall, et al, 1991, Ladurelle, 1993). Кроме того холецистокинин обладает способностью препятствовать выбросу дофамина, индуцируемому различными фармакологическими агентами, например галоперидолом и амфетамином, причем этот эффект опосредуется, по-видимому, через ХЩ-Б рецептор (Tanganelli, et al, 1990, Khara, et al, 1992,1993, Crawley, 1992). Таким образом, обнаруженное нами угнетающие действие ХЦК-& на активацию метаболизма дофамина и серотонина, вызываемую этанолом, позволяет предположить, что XUK-8s ослабляет ппложшельно-подкрепляющие свойства этанола, модифицируя дофаминергическую и серотонинергическую передачу в прилежащем япре. Следовательно, холецистокинин снижает влечение к алкошлю и препятствует реализации различных эффектов этанола, обуславливающих влечение к нему. Тем не менее, поскольку в регуляции стимулирующего и анксиолитического эффекта этанола участвует не только дофаминовая и серотониновая нейропередача в прилежащем ядре, видимо механизм подавляющего влияния холеиистокинина на эти параметры более сложен и охватывает нескольких медиаторных систем в целом мозге. Так, возможно, подавление холецистокинином ансиолитического эффекта, вызванного этанолом, связано с ингибируюшим влиянием ХЦК-& на ГАМКертическую систему, то есть взаимодействием холеиистокининовой и ГАМК-ергической систем на центральном уровне. По мнению некоторых исследователей, взаимодействие холецистокинина с ГАМК-ергической нейролередачей, осуществляется через ХЦК-Б рецептор, и может быть основой тревожного действия пептида (Harm, Pold, et al, 1990, Harro and Vasar, 1991).

Также в своих экспериментах мы обнаружили, что холецистокинин препятствует атаксическому эффекту, вызываемому введением этанола. Атаксический эффект этанола может объясняться изменением активности различных нейрохимических систем мозга: аденозиновой (Dar, 1990, Meng and Dar, 1994), хслинергической (Dar, Bowman, 1994), бензодиазепиновой (Paer and Myers, 1990) а также катехоламинергичсской (Paul, et al, 1992). По всей видимости, действие ХЦК объясняется влиянием нейропептида на активность одной или нескольких из данных нейромедааторных систем.

Также в нашей работе показано ушстающие влияние ХЦК на потребление этанола у хронически-алкоголизированных крыс. Обнаружено, что ХЦК снижает потребление этанола только у животных, склонных к потреблению этанола и не влияет на животных, не склонных потреблять этанол. Различия в формировании влечения к алкоголю у крыс обусловлены, по ввдимому, чувствительностью животных к потожительно-подкрепляюшим свойствам этанола. По мнению некоторых исследователей, различия в серотониновой и дофаминовой системах мозга могут быть причиной различий в потреблении алкоголя крысами (McBride et al, 1990, Faloska, 1993, Myers, et al, 1993, Riley, et al, 1993). Генетические линии крыс, различающиеся по потреблению алкоголя могут отличаться по уровню серотонина и дофамина в различных лимбических структурах ЦНС, в частности прилежащем ядре, фронтальной коре, гипоталамусе и обонятельной луковице (McBride et al, 1993, Faloska, 1993). Потребление этанола увеличивает уровёнь ДОФУК и ГВА только у этанал-предпочитаюших крыс (Colombo, et al, 1990). Видимо, холеыистокинин способен модулировать дофаминовую нейропередачу и у хронически-алкоголизированных крыс. По всей видимости, ХЦК действует по тому же механизму, что и в случае с неалкогшизированными крысами, ослабляя положтельно-подкрешшюшие свойства этанола. Мы предполагаем, что у крыс, не склонных к потреблению алкоголя, понижена чувствительность к положительвд-подкрепляюшим свойствам этилового спирта, и, как следствие, действие ХЦК-& у них не выражено.

Таким образом, полученные нами результаты позволяют заключить, что холецистокинин препятствует активации катеходаминовой и серотониновой систем, вызываемой алкоголем. Холецистокинин предотвращает различные проявления острой алкогольной интоксикации и угаетает потребление алкоголя, ослабляя положителшо-подкрепляюшие свойства этанола. Возможно, сульфатированный хшецистокинин-октапептвд является эндогенным фактором, регулирующим потребление этанола у млекопитающих.

ВЫВОДЫ

1. Центрально и переферически вводимый холецистокинин оказывает однонаправленное действие, и препятствует развитию активирующего, релаксирующего, анксиолитического и атаксического эффекта этанола.

2. Центральное и периферическое введение халецисггокинина снижает добровольное потребление алкоголя ингактными крысами.

3. Холецистокинин препятствует активации метаболизма дофамина и серогонина в прилежащем ядре мозга крыс, вызываемой этанолом,

4. Холецистокинин снижает потребление этанола крысами, у которых в результате хронической алкоголизации развивается влечение к алкоголю.

5. Результаты исследований дают основание полагать, что холецистокинергическая система мозга принимает участие в регуляции острых эффектов этанола и в формировании алкогольной зависимости. Воздействие на холецистокининергическую систему может быть использовано как в лечении хронического алкоголизма, так и в предупреждении острой алкогольной интоксикации.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Медведева О.Ф. Возможные нейрохимические механизмы модулирующего влияния холецистокинина - окталептида на эффекты этанола./ /«Нейрохимия», 1996,N2, стр. 149

2. Медведева О.Ф., Судаков С.К, Анохина И.П., Кианмаа К. Влияние холецисгокининаюктапептвда на вызванные этанолом изменения двигательной активности и метаболизма дофамина в прилежащем ядре мозга крыс.//«Экспериментальная и клиническая фармакология», 1996,t.59,N 6, стр. 4447

3. Medvedeva O.F., Sudakov S.K., Anochina LP., Kiianmaa К. Inhibition oí Alcohol Consumption by i.c.v.CCK-8(S)./ / Abstract of X World Congress of Psychiatry, 1996, 23-28 August, Madrki, Spain