Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Разработка новых методов фармакотерапии алкоголизма на основе анализа генетических и средовых факторов формирования алкогольных расстройств

На прзваз рукопхсн

ВИГШШКАН L'pissa Еяадаыкровиа

РАЗРАБОТКА НОВЫХ ГЕТОДОВ ü4FHAKDTEFATOöf АЛКОГОЛИЗМА НА ОСНОВЕ АНАЛИЗА ГЕНЕТИЧЕСКИХ H СРЕД05ЫХ ФАКТОРОВ íOPtUFGBAHira АЖЗГОЛЫШХ РАССТРОЙСТВ.

14. СО.£5 - 0г.рлжа?,олгя

АВТОРЕФЕРАТ

джсертащщ на согхгкашге ученой стекши доктора бкоясгкчасгоЕ наук

SCISA 1S37

На правах рукописи

ВИГЛИНСКАЯ Ирина Владимировна

РАЗРАБОТКА НОВЫХ МЕТОДОВ ФАРМАКОТЕРАПИИ АЛКОГОЛИЗМА НА ОСНОВЕ АНАЛИЗА ГЕНЕТИЧЕСКИХ И СРЕДОВЫХ ФАКТОРОВ ФОРМИРОВАНИЯ АЛКОГОЛЬНЫХ РАССТРОЙСТВ.

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА 1997

Работа выполнена в НИИ фармакологии РАМН (директор - академик РАМН Середенин С.Б.)

Научный консультант:

доктор мед. наук, проф., академик РАМН Середенин С.Б. Официальные оппоненты:

доктор мед. наук, проф., академик РАШ Анохина И. П. доктор мед. наук, проф., член-корр. РАШ Любимов Б.И. доктор биол. наук, проф., Чепурнов С.А.

Ведущая организация - Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова.

Защита диссертации состоится " ^^ " 1997г.

в у С' час на заседании диссертационного совета Д. 001.25.01 в НИИ фармакологии РАШ по адресу: 125315, Москва, ул. Балтийская, 8. С диссертацией можно ознакомиться в Ученой части НИИ фармакологии РАМН

Автореферат разослан "_"_1997 г.

Учений секретарь диссертационного совета

кандидат мед. наук Е.А.Вальдман

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Неодинаковое влияние алкоголя на разных людей определяет необходимость изучения индивидуальных особенностей формирования алкоголизма и, соответственно, разработки адекватной фармакотерапии. Из клинических исследований следует, что воздействие противоалкогольных средств должно быть направлено на подавление влечения к спиртному и, на более поздних стадиях, на выведение из абстинентных состояний (Анохина, 1985, 1996; Морозов, 1976; Буров, Ведерникова, 1985; Пятницкая, 1996; Anton, Mann, 1996). Такая, возникшая из практики, задача требует совершенствования экспериментальных подходов к оценке эффективности антиалкогольных средств. Попытки создания экспериментальных моделей алкоголизма на беспородных животных сменили фармакогенетические методы, были селекционированы линии и популяции разнопыощих животных (Crabbe, Harris, 1991; Crabbe, 1996). Однако, обе методологии пока не привели к значимы;.! достижениям в поиске индивидуальных средств лечения.

Наиболее распространенной точкой зрения на формирование алкогольной мотивации является ее связь с эмоционально-стрессовой реакцией (ЭСР) (Pohorecky, 1990, 1991; Rogland, Ames, 1996). При безусловной доказанности антиалкогольной эффективности бензодиазепинов (Malka, 1988), практически отсутствуют работы, учитывающие зависимость их действия от фенотипа ЭСР ÍSeredenin et al., 1986, 1994), в то же время генетическая детерминация свободного выбора алкоголя установлена еще несколько десятилетий назад (McClearn, 1962; Rodgers, McClearn, 1962; Rodgers, 1966) и, что наиболее важно, в числе изученных генотипов, противоположных по предпочтению этанола, оказались мыши линий C57BL/6 и BÀLB/C, характеризующиеся типичными для млекопитающих различиями в ЭСР (Seredeniri et al., 1986, 1992, 1994). Поэтому очевидна необходимость изучения взаимосвязи эмоционально-стрессовой реакции и алкогольного поведения в рамках специфических фенотипов, так же как и выявление зависимости антиалкогольного действия психотропных средств от фенотипа ЭСР.

Неясен вопрос и о соотношении роли генетических и средовых факторов при длительной алкоголизации. Не обсуждая, оставаясь

- г -

в пределах медицинской области, имитацию долговременного злоупотребления алкоголем человеком добровольной или насильственной алкоголизацией животных, само наличие доступа к алкоголю о эксперименте могло рассматривать как важнейший средовой фактор. Выполнение длительных опытов на инбредных и беспородных животных позволит оценить особенности развития алкоголизма на стадии сформировавшегося заболевания, а также осуществить контроль эффективности средств его лечения.

Для разработки подходов к дифференцированной фармакотерапии в обоих случаях следует определить набор характеристик исследуемых фенотипов, пригодных как для экстраполяции, на человека и их испытаний в качестве предикторов назначения, так и параметров клинико-фармакологического контроля действия препаратов.

Цель» работы явилось выявление особенностей формирования алкогольной зависимости и анализ эффективности различных психотропных препаратов у инбредных и беспородных животных с определением возможных предикторов и параметров кдинико-фармако-логического контроля антиалкогольного действия.

Для ее достижения представилось необходимым решить следующие задачи:

1. Методами экспериментальной психофармакологии охарактеризовать особенности поведения животных, селекционированных по предпочтению этанола.

2. На отобранных моделях изучить закономерности формирования алкогольной мотивации и развития зависимости от этанола у инбредных и беспородных животных с разными фенотипами эмоционально-стрессовой реакции.

3. Разработать экспериментальную методологию поведенческого и ЭЭГ контроля развития алкогольной зависимости и оценки эффективности антиалкогольной фармакотерапии.

4. Оценить эффекты психотропных препаратов'из групп транквилизаторов, антидепрессантов, ноотропов на разных стадиях формирования алкогольной зависимости.

5. На основании полученных данных сформулировать предложения по использованию изученных психотропных средств с целью фармакотерапии алкоголизма.

Научная новизна исследования.

Впервые установлены различия в алкогольной мотивации, спе-

цифичные для фенотипа эмоционально-стрессовой реакции (ЭСР). Поглзано, что активные в стрессовой ситуации крысы MNRA аналогично мышам C57BL/6 при свободном выборе предпочитают алкоголь по сравнению с пассивными крысами MR, сходными с мышами BALE/c. Разделенные по реакции на эмоционально-стрессовое воздействие беспородные животные обладают сходными различиям!.

Установлено, что по мере добровольной хронической алкоголизации зависимость от алкоголя в большей степени развирается у животных с пассивным фенотипом ЭСР, склонных к депрессивным состояниям. Показано, что надежным признаком типироваиия характера ЭСР в беспородной популяции является "бензодиазепино-вая проба" в тесте "открытое поле".

С помощью комплекса поведенческих и ЗЭГ методов разработана система экспериментальной оценки развившейся физической зависимости от алкоголя, а также критерии оценки алкогольного абстинентного синдрома.

Экспериментально изучены антиалкогольные эффекты психотропных средств. Установлена высокая эффективность нового оригинального анксиолитика, антагониста холецистокипинового В рецептора 6У150013, а также группы небензодиазепиновых препаратов, сочетающих свойства анксиолитиков и ноотропов. Показано, что при регуляции бензодиазепиновой рецепции алкогольные нарушения устраняются лишь частично.

Разработана ЭЭГ методология оценки циклов сна. Доказана эффективность ее использования для анализа стадии зависимости от алкоголя и контроля эффективности антиалкогольной фармакотерапии.

Научно-практическая ценность.

Выявление взаимосвязи алкогольного поведения с фенотипом эмоционально-стрессовой реакции и рекомендация бензодиазепиновой пробы для характеристики фенотипов ЭСР, позволяют- разработать подходы для дифференцированной фармакотерапии алкоголизма, связанного с эмоционально-стрессовыми расстройствами. Разработана зиспершентальная модель развития аякогольной зависимости и система оценки эффективности фармакологических средств в процессе алкогольного старения. Среди изученных психотропных средств выявлены препараты ацетил-L-карнития (Сигма-Tay, Италия) , GV150013 {Глаксо,Италия), гидазепам. тетриндол, ДСИП, оптимальные для фармакотерапии алкоголизма и сформулированы

показания для их использования. Метол регистрации ЭЭГ сна рекомендован для оценки степени развития алкогольных расстройств и контроля эффективности антиалкогольной фармакотерапии.

Основные сведения об апробации работы. Основные результаты диссертации доложены на 4-м конгрессе венгерского общества фармакологов (Будапешт, 1985), Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент, 1988), заседании Всесоюзного научного общества фармакологов (Москва, 1990), Международной конференции "Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам" (Ростов-на-Дону, 1990), 8-м ' Советско-Итальянском симпозиуме по нейропсихофармакологии (Ленинград, 1990), 11-м и 12-м Международных симпозиумах по лабораторным животным и экспериментальной медицине (Западный Берлин, 1990, 1991), Международной конференции по фармакологической активности аце-тил-Ь-карнитина (Санта-Маргарита, Италия,1991), 9-ы Советско-Итальянском симпозиуме по нейропсихофармакологии (Урбино, Италия, 1992), 2-й Международной конференции "Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам, Москва, 1993), научном семинаре Центра по исследованию проблем алкоголизма Университета Северной Каролины (Ча-пел-Хилл, США, 1993), 10-м Российско-Итальянском симпозиуме по нейропсихофармакологии (Иркутск, 1994), 1-м Европейском Конгрессе по фармакологии (Милан, Италия, 1995), 1-й Съезде Российского научного общества фармакологов (Волгоград, 1995), Международной конференции "Нейрохимия и фармакология наркоманий и алкоголизма" (Санкт-Петербург, 1996), Международном НЗАЛЗВНА Конгрессе по алкоголизму (Вашингтон, США, 1996), 1-й и 2-й Европейских конференциях по биохимии, фармакологии и поведению (Морзин, Франция, 1996, 1997).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 32 работы в отечественных и зарубежных изданиях.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, б глав собственных исследований, заключения и выводов. Работа иллюстрирована таблицами и рисунками. Библиографический указатель включает наименований.

- 5 -

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились на инбредных линиях, специально селеюцгопировашшх популяциях и на беспородных крысах. Все эксперименты выполнены на самцах. Использованы следующие экспериментальные! модели: алкоголь-предпочитающие Р и алкоголь -непредпочитащие NP крысы, выведенные по предпочтение алкоголя при свободном выборе с водой (Lumeng et al., 1977; Li et al., 1988); алкоголь-потребляющие AA. и алкоголь-отвергающие ANA крысы, селекционированные по идентичному признаку (Eriksson, 1968; Sinclair et al., 1989); алкоголь-потребляющие FH крысы, отличающиеся дефицитом серотонинергической системы сопоставлялись с алкоголь-отвергаюшями FRL животными, для которых характерна сниженная холинергическая чувствительность (Overstreet et al., 1993). Кроме того, были использованы инб-редные линии крыс, селекционированные по признаку эмоциональности и реакции страха в условиях эмоционально-стрессового воздействия: Еысокозмоциональные с выраженной реакцией страха Maudsley Reactive (MR) крысы и низкоэмоциональные, с активным фенотипом ЭСР Maudsley Non-Reactive (ШКА) крысы (Broadhurst, 1975; Blizard, 1981). Разведение MR и MNRA крыс, полученных в 1993 году из питомника Winston-Salem (Северная Каролина, США) налажено в настоящее время в питомнике "Светлые Горы" (РАМН) и виварии на базе НИИ фармакологии РАМН. Наряду с инбредныш, были использованы беспородные крысы-самцы из питомника "Столбовая" (РАШ).

Для изучения особенностей поведения, а таске оценки фармакологической активности препаратов применяли следующие методики:

- "открытое поле'ЧОШ (Бородин, Беляев, 1974) использовали для изучения характеристик ЭСР и выявления анксиолитических - и анксиоселективных свойств транквилизаторов;

- методика "приподнятый крестообразный лабиринт"- "(ДКЛ) (Pellow et al., 1985) использовалась для-оценки уровня ^'тревожности и страха; '' v.

- плавательный тест (ИТ) применяли с целью выявления склонности к развитию депрессивных состояний (Porsolt et al., 1978);

- условный рефлекс активного избегания (УРАЛ) применяли

- б -

для оценки способности к обучению (Criswell, Breese, 1989).

- тесты "горячая пластинка" (ГП) и предпочтение сахарина (ПС) были выбраны с целью оценки порога болевой чувствительности и активности ' эндогенной опиоидергической системы (Kär.pov-Polevoy et al., 1996);

- конфликтный тест (KT) (Vogel et al., 1971; Молодавкин с еоавт., 1993) в разных модификациях применяли для доказательства наличия физической зависимости от этанола, а также для оценки анксиолитических свойств изучавшихся препаратов;

- крестообразный лабиринт (КЛ) (Салимов, 1988) использовали для оценки функциональной локомоторной асимметрии при изучении проявлений зависимости от алкоголя.

Потребление алкоголя у животных изучали в ситуации свободного выбора между растворами этанола и водой с ежедневной регистрацией среднесуточного количества выпитых жидкостей. Уровень развития патологического влечения к алкоголю по мере хронической алкоголизации оценивали по единовременному (за 90-мк-нутный сеанс) потреблению раствора этанола после его деприва-ции, т.е. по алкоголь-депривационному эффекту (АДЭ).

Исходя из хорош известных клинических наблюдений о выраженных расстройствах сна у лиц, злоупотребляющих спиртным на поздних стадиях заболевания и отчетливыми проявлениями в картине сна признаков алкогольной абстиненции (Mendelson, 1977; Левин, Вейн, 1996), в настоящем исследовании с целью оценки динамики формирования патологического пристрастия к алкоголю и зависимости от него, а также для анализа эффективности изучавшихся препаратов проводили электрофизиологическое изучение структуры сна на разных стадиях хронической алкоголизации и во время лишения доступа к этанолу. Крыс оперировали под ингаляционным наркозом, вживляя им хронические электроды в область дорзального гиппокампа (De Sroot, 1959) и в дорзальную группу шейной мускулатуры для последующей электроэнцефало'графической регистрации структуры сна. Злектроды фиксировали на черепе животного при помощи специальной быстрозатвердевающей пластмассы. Через неделю после операции и нескольких дней адаптации к условиям эксперимента, проводили непрерывную четырехчасовую регистрацию сна с использованием 16-канального электроэнцефалографа фирмы iiihon Rohden (Япония) с 12:00 до 16:00. При обработке электроэнцефалограммы оценивали следующие параметры

процесса сон-бодрствование: общее время сна (ОВС) в мин, абсолютное время фавы медленного сна (®ЛС) и фавц быстрого сна (ФБС), 7. ФБС от ОВС, число эпизодов ФБС и их среднюю продолжительность, латентный период ФБС, время наступления первого полного цгагла "■ШС-ФЕС", среднее время сна без пробуждений, характеризующее процесс засыпания, среднее время сна бес пробуждений за весь период регистрации, характеризующее глубину сна, абсолютное время бодрствования, число пробуждений и их среднюю продолжительность. Набор перечисленных показателей позволил охарактеризовать структуру сна экспериментальных животных как в количественном, так и в качественном отношении. Четырехчасовую злектроэнцефалографическую запись процесса сон-бодрствование оценивали визуально. Весь остальной цифровой материал поведенческих и ЗЭГ экспериментов обрабатывали статистически на PC 386SX-33 (FTech USA) с использованием стандартного набора статистических программ "Pharmstat".

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучение особенностей поведения инбредных крыс, различных по потреблению этанола.

Анализ характеристик поведения у крыс, селекционированных по предпочтению алкоголя, позволил выявить ряд междипенйых различий. Tai-;, р крысы были более активны б оп, однако, не отличались от NP крыс по числу дефекаций, отражающему эмоциональность (Archer, 1973); у этих жиеотных не выявлено различий во времени, проведенному в открытых рукавах ПКЛ, т.е. в уровне страха и тревожности, однако, отмечено, что NP крысы более иммобильны ь ПТ, что говорит об их предрасположенности к развитию депрессии. Р крысы ь гесте УРАН доказали лучшую способность к обучению, они потребляли больше раствора сахарина, но не отличались от NP крыс по порогу болевой чувствительности в тесте ГП (табл. 1,2).

Сравнительный анализ параметров поведения АА и ANA крыс позволяет заключить, что две линии не различаются по уровню двигательной зктивности в ОП, однако, AUA крысы ь данном тесте более эмоциональны. Не выявлено различий в уровне страха и тревожности в ПКЛ. ь ПТ АА крысы более иммобильны в отличие от ANA животных; линии не различаются по сдособиости к обучению;

Таблица 1.

ЫИШИЕЙШЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОВЕДЕНИЯ В ОП У АЛКОГОЛЬ-ПРЕДПОЧИТАЮЩИХ И АЛКОГОЛЬ-НЕПРЕДПОЧИТАЮЩИХ КРЫС.

Линии крыс ОДА Измеряемые параметры в ОП ЦА ВА Число деф.

Р НР 84.9*7.9 67.б±8.4 9.1±2.0 19.4+2.5 7.8+2.9 20.9+3.4 1+0.42 1.9±0.43

АА АНА 42.б±б.3 45.3±6.4 9.1*2.5 8.2±2.2 6.4*2.0 10.1±1.95 0*0 5.1*0.7**

га га. 62.8*8.3 20.7i9.Ei** 6.7*1.9 25.8*3.9 2.6±2.1 3.9*2.0** 1.67+0.58 1.6*0.79

МЕШШНЕШШЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОВЕДЕНИЯ В ТЕСТЕ ПКЛ.

Линии ирис ОДА Измеряемые параметры в ПКЛ Время в открытых рукавах ПКЛ Число деф.

Р ИР 8.5±1.2 5.4±1.3 24.3±7.5 19*8.2 0.1±0.1 0.3*0.2

АА АНА 8.3±0.7 11.3±0.8* 17.4*6.1 10.1±3.4 0*0 4*1.2**

га та 8.25*0.6 6.2±0.8 30.4*6.7 74.7±15.3* 0*0 0.1±0.1

* - р<0.05; ** - р<0.01 - достоверные межлинейные различия. п=10 в каждой экспериментальной группе нрыс.

Таблица 2.

ОСНОВНЫЕ ИЗУЧАВШИЕСЯ ПАРАМЕТРЫ АЛКОГОЛЬ- ПРЕДПОЧИТАЮЩИХ И НЕП-РЕДПОЧИТАЮЩИХ КРЫС В ТЕСТАХ ПГ, ГП И УРАИ. МЕЖЛИНЕЙНИЕ РАЗЛИЧИЯ В ПОТРЕВЛЕЮШ 0.12 РАСТВОРА САХАРИНА.

Линии пт ГП УРАИ Потребление

крыс ОВИ (сек) Порог болевой Число избеганий 0.1% р-ра

чувствит.(сек) за последние сахарина

75 сеансов (мл/кг/день)

р 182.7±32.1 31.4±3.5 58.3*2.5 210.6±16.4

НР 308.9*10.9** 38.1±3.7 40.0+3.9* 98.5±7.5**

АА 238.7*24.3 48±4.5 40.8±8.5 148.7±20.8

АНА 221.3+12.0* 78.2±6.8** 46.2±8.5 76.7 +10.2*

га 252.5± 25.8 50.3±2.0 37.1*4.2 373.5+23.5

РРА 244.5423.7 31±4.1** 44.8±3.4 107-6411.5*'

* - р<0.05; ** - р<0.01 - достоверные межлинейные различия.

п-ве менее 10 в каждой экспериментальной группе животных.

ХАРАКТЕРИСТИКИ АЛКОГОЛЬНОГО ПОВЕДЕНИЯ У АЛКОГОЛЬ-ПРЕДПОЧИТАЮЩИХ И -НЕПРЦЦПОЧИТАЮЩИХ ИНБРЕДШХ КРЫС.

Линии Потребление этанола Предпочтете этанола

животных (г/кг/сутки) (% алкоголь/суьшарный

объем выпитой жидкости)

Р 5.29 ± 0.70 76.1 ±7.8

НР 0.43 ± 0.10 ** 6.9 ± 1.9 **

АА 5.48 + 0.40 73.9 ± 5.3

АНА 0.52 ±0.09** 9.1 + 1.8 **

И 3.87 ± 0.50 40.1 ± 3.8

ПИ 2.28 ±0.41** 33.2 ±7.0*

Примечание: * - р<0.05; ** - р<0.01 - статистически значима межлинейные различия.

у ДА крыс отмечен более высокий порог болевой чувствительности, имеются различия в уровне потребления сахарина, являющегося специфическим предиктором предрасположенности к алкоголю tKampov-Polevoy et al., 1996) (табл. 1,2).

Что касается различий между пьющей линией FH и непьющей FRL, то FH крысы более активны в 0П, однако, не отличаются по эмоциональности; FRL крысы демонстрируют наиболее высокий показатель времени в открытых рукавах ПКЛ, что свидетельствует о низком уровне тревожности и страха, не -имеется различий в общем времени иммобилизации (ОВИ) в ПТ, линии не различаются по способности к обучению. FH крысы менее чувствительны к боли и потребляют больше раствора сахарина в отличие от FRL животных (табл. 1,2).

Изучение алкогольного поведения описанных линий животных полностью подтвердило наличие еысокой алкогольной мотивации у Р, АА и FH линий в отличие от NP, ANA и FRL крыс (табл.3), свидетельствующее о генетическом контроле данного признака.

Таким образом, проведенные наблюдения показали, что имеются определенные различия по ряду параметров поведения между парными линиями алкоголь-предпочитающих и алкоголь-непредпочи-тающих животных. Однако, отмеченные отличительные особенности носят весьма разнонаправленный характер и не позволяют определить специфические поведенческие предикторы предрасположенности к потреблению алкоголя, что, по-видимому, обусловлено наличием разл!!чных наследственных механизмов контроля. Последнее, в свою очередь, определяет необходимость фармакогенетических разработок для каждого из выявленных фенотипов.

2. Изучение особенностей поведения инбредных крыс, селекционированных по характеру ЭСР.

Не вызывает сомнений наличие выраженного стресс-протектив-ног'о действия алкоголя, в результате чего злоупотребление спиртным с целью устранения эмоционального напряжения, тревож--ности, повышенного уровня страха часто приводит к развитию-хронического алкоголизма (Ragland, Ames, 1996). 8 связи с этим, наибольший интерес, на наш взгляд, представили эксперименты по изучению особенностей поведения у крыс, селекционированных по реакции страха и эмоциональности, а именно, у эмоциональных и тревожных в стрессовой ситуации MR крыс и животных,

- 11 -

с активным фенотипом ЭСР - Ш!?А.

Результаты проведенных экспериментов показали, что Ш крыса более эмоциональны и тревожны в ОП, демонстрируют повьшен-шй уровень страха в ПКЛ, характеризуются склонностью к развитию депрессивно- подобного состояния в ПТ (таблица 4). Порог болевой чувствительности у Ш крыс и уровень потребления сахарина несколько ниж'е; животные не различаются между собой по способности к обучению в гесте УРАй.

Таким образом, МаисМеу крысы представляются наиболее средпочтительными линиями для изучения индивидуальной чувствительности к алкоголю, поскольку имеют различные фенотипы ЭСР и развития депрессии, на фоне чего возможно изучение особенностей их алкогольного поведения.

Анализ динамики алкогольного поведения у МаисЫеу крыс показал, что на начальных этапах контакта с алкоголем МИНА крысы с активным фенотипом ЭСР характеризуются его более высоким потреблением в отличие от Ш животных с пассивным фенотипом ЭСР, склонных также к развитию депрессии. После более длительного (3-4-месячного) свободного доступа к этанолу имеет место шверсия в его потреблении: у Ш крыс уровень потребления ал-вэголя значительно возрастает и превышает таковой у МИРА животных (рис,1), вероятно ввиду стресс-дротективного и, возможно , антидепрессивного действия, что согласуется с клиническими шблюдениями (С}иа1<3 е1 а1., 1996).

Таким образом, из результатов проведенных экспериментов (невидно наличие различных генетически детерминированных признаков, вероятно, вовлеченных в механизмы развития экспериментального алкоголизма, среди которых немаловажными могут быть ^вствительность к стрессу, склонность к развитию депрессии. Т/ширование по признакам ЭСР может поэтому представлять особый шиерес для прогнозирования динамики развития алкоголизма.

Возможность использования "бекзодиазепиновой пробы" для шшрования характера ЭСР у инбредных крыс. Многочисленными фармакогенетическими исследованиями последних лет с использо-ьаиием инбредных. мышей линий С57В1У6 и ВАЬБ/с досказана зависи-юсть анксиолитического эффекта бензодиазепиновых транквилизаторов от фенотипа ЭСР (ЗегесЗепхп е1 а1., 1986. 1990, 1992, 1994).

Таблица 4.

ОСОБЕННОСТИ ПОВЕДЕНИЯ MR И »IRA КРЫС В ТЕСТАХ ОП, ПКЛ И ПТ.

Изучаемые показатели поведения MR ДОКА

Тест "открытое поле" (ОП) (время тестирования 5 мин)

Общая двигетельная активность (ОДА) 27.8 ± 3.8 58.5 ± 5.8 **

Периферическая ДА 22.5 ± 2.9 40.4 ± 3.4 **

Центральная ДА 0.4 ± 0.21 3.6 ± 1.2 *

Вертикальная ДА 4.8 ± 1.2 14.4 ± 2.1 **

Число дефекаций 4.8 ± 0.5 2.6 ± 0.6 *

Тест "приподнятый крестообразный лабиринт" (ПКЛ) (время тестирования 300 сек)

Время в открыта рукавах 26.3 ± 6.61 65.3 ± 7.97 **

Число заходов в открытые рукава ПКЛ 1.7 ± 0.33 4.8 t 0.64 **

Латентный период 1-го захода в открытые рукава 146.6 ± 32.5 49.7 ± 15.3 *

Плавательный тест (ПТ) (время тестирования 600 сек)

Общее время иммобилизации

(ОВИ) 334.0 ± 247.0 278.0 ± 24.0 **

Примечание: результаты представлены как М±ЗЕ;*-Р<0.05;**-Р<0.01.

Рис.1.

ДИНАМИКА ПОТРЕБЛЕНИЯ АЛКОГОЛЯ У ИНБРЕДНЫХ Ш? И №ША КРЫС.

Среднесуточное потребление алкоголя (г/кг/сутки)

2 недели 4 месяца

Сроки добровольной алкоголизации * - р<0.05 - различия между 2-й неделей и 4-м месяцем

С целью воспроизведения этих результатов на другом виде животных (крысах) с различными фенотипами ЭСР, а также для возможности титрования характера ЭСР с использованием "беизо-диазепиновой пробы", проведено изучение влияния диазепама на поведение MR и MNRA крыс в тесте ОП.

Установлено (рис.2), что диазепам в малых дозах оказывал анксиолитическое действие с активирующим компонентом на поведение животных с пассивным фенотипом ЭСР, в то время ¡сак с увеличением дозы препарата у крыс с активным фенотипом ЭСР тлела место тенденция к седации. Эти результаты полностью согласуются с ранее проведенными исследованиями на инбредных мышах и являются основанием для переноса данной методологии на беспородную популяцию крыс, а также с целью дальнейшей экстраполяции экспериментальных данных на человеческую популяцию. Кроме того, такого рода эксперименты представляются целесообразными с точки зрения изучения индивидуальной чувствительности к транквилизаторам, находящим широкое применение в клинике алкоголизма.

Изучение особенностей поведения крыс беспородной популяции.

Из 400 беспородных крыс-самцов в тесте ОП были отобраны животные с низкой двигательной активностью и высоким уровнем дефекаций, так называемые, низкоактивные крысы (НА), сходные по поведению с эмоциональными инбредными MR крысами и BALB/c мышами, а также высокоактивные (ВА) в ОП животные, аналогичные по поведению MNRA крысам и C57BL/6 мышам. Показатели их поведения в ОП отражены в таблице 5. Очевидно, что тест ОП позволил выявить среди животных беспородной популяции особей с различными фенотипами ЭСР.

Еензодиазепиновые транквилизаторы диазепам (табл.6) и фе-назепам (табл.8) в малых дозах оказывали на НА крыс анксиолитическое с активирующим компонентом действие. У ВА крыс с повышением дозы препаратов имела место тенденция к седации' (табл.6,3). Дневной транквилизатор гидазепам активировал НА животных и не влиял на поведение ВА особей ни в одной из изученных доз (табл.7), что отличает его от других бензодиазепи-нов по возможности диссоциации анксиолитического и седативного эффектов, зависящей от генетически детерминированного типа ЭСР.

Таким образом, результаты поведенческих экспериментов на

- 15 - Рис.2.

ВЛИЯНИЕ ДИАЗЕПАМА НА ПОВЕДЕНИЕ MR КРЫС В ТЕСТЕ ОП.

ОДА ПА ДА BÀ

1- контроль; 2- диазепам (0.125 мг/кг); *-p<0.05-, **-р<0.01

ВЛИЯНИЕ ДИАЗЕПАМА НА ПОВЕДЕНИЕ bSNRA КРЫС В ТЕСТЕ ОП.

1 - контроль; 2 - диазепам (0.5 мг/кг); * - р<0.05.

ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОВЕДЕНИЯ ОТОБРАННЫХ ПО ОП ВЫСОКОАКТИВНЫХ (ВА) И НИЗКОАКТИВНЫХ (НА) БЕСПОРОДНЫХ КРЫС.

Показатели поведения ВА крысы НА крысы Т-критерий в тесте ОП (п=50) (п=50) Стьюдента

Общая двигательная активность (ОДА)

111.7*34.5 17.7*10.1

18.8

Перифенрическая активность (ПА)

87.9*32.6 13.1*7.9

15.6

Центральная активность 19.0*17.0 1.1*2.6 7.4 (ЦА)

Вертикальная

активность (ВА) 23.6*8.1 4.6*3.5 14.6

Число дефекаций

2.8*2.5

3.7*2.4

2.0

Показатели поведения ВА крысы НА крысы Т-критерий в ПТ (п=18) (п=23) Стьюдента

Общее время иммобилизации (ОВИ) сек 142.9*12.7 244.2*10.2 ** 7.17 . (время тестирования 600 сек).

Примечание: результаты представлены как М*БЕ.

Таблица 6.

ВЛИЯНИЕ ДИАЗЕ11АМА НА ПОКАЗАТЕЛИ ПОВЕДЕНИЯ В ОП У НА И ВА БЕСПОРОДНЫХ КРЫС.

Крысы Показатели Контроль Диазепам (доза в мг/кг)

поведения 0.125 0.25 0.5

НА ОДА 7.0±2.7 48.4*12.0** 5.8*2.0 5.1*4.0

ПДА 4.2±1.5 30.1*6.7** 2.8*1.0 4.6+3.7

ИДА 1.5±1.1 7.7±3.2 0.11:0.1 0.1+0.1

ВА 1.3*0.5 10.213.2* 2.9*1.1 0.4+0.3

ДЕФ. 3.3*0.6 5.2*0.7 2.4*0.4 2.2+0.4

ВА ОДА 43.4+12.4 32.3*14.8 34.91:9.4 26.0*7.2

ПДА 26.9±6.3 19.7±9.9 24.5*6.7 20.0*5.6

ВДА 8.8+5.6 6.3*3.2 2.3*1.8 1.81:0.8

ВА 7.5+2.6 6.3+3.6 7.2*1.7 4.1*1.3

ДЕФ. 4.3*1.0 3.3±1.2 3.0*0.6 3.0*0.7

Примечание: * - р<0.05; ** - р<0.01; п=10 в каждой группе крыс.

Таблица 7.

ВЛИЯНИЕ ГИДАЗЕПАКА НА ОБЩ) ДВИГАТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ В ОП У НА И ВА БЕСПОРОДНЫХ КРЫС.

Крисы Контроль Ридазепам (доза в мг/кг)

0.1 0.5 1.0 2.0

НА 7.0*1.9 5.7*1.6 20.9*5.7* 18.1*5.4 7.8*3.9

п=10 п=7 п=10 П=12 п=8

ВА 33.2*5.2 41.8*11.4 42.1*12.6 31.2±8.8 24.0+6.7

П=9 п=7 п=10 п=10 п=6

Примечание: * - р<0.05. Данные представлены как М*Я).

ВЛИЯНИЕ ФЕНАЗЕПАМА НА ОБЩУЮ ДВИГАТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ В ОП У НА И ВА БЕСПОРОДНЫХ КРЫС.

Контроль/доза препарата НА ВА

Контроль 16.3 ±3.2 108.7 ± 5.2

(п=10) (п=10)

0.02 мг/кг 32.9 ± 8.3 * 52.4 ± 10.6 *

(п=10) (П=10)

Контроль 15.8 ± 2.7 104.2 ± 7.3

(п=10) (п=10)

0.05 мг/кг 4.1 ± 1.2 ** 28.4 ± 9.7 **

(п=10) (п=10)

Контроль 15.8 ± 4.0 117.7 ±7.4

(п=10) (п=11)

0.1 мг/кг 13.7 ± 4.9 26.7 ± 6.7 **

(п=10) (п=11)

Примечание: * - р< 0.05; ** - р< 0.01.

отобранных по фенотипу ЭСР беспородных животных согласуются с предыдущими исследованиями на инбредных мышах и крысах и подтверждают известные клинические наблюдения об индивидуальных различиях в фармакологических эффектах транквилизаторов, включая их анксиолитическое и гилноседативное действие, что может быть полезным и в клинике алкоголизма. Использование "бензоди-азепииовой пробы" оказалось надежным методом титрования ЭСР в беспородной популяции животных.

Изучение поведения отобранных по ОП крыс в тесте ПКЛ показало, что НА животные обладают повышенной реакцией тревожности и страха, проводя меньше времени в открытых рукавах лабиринта в отличие от ВА крыс. Кроме того, эти животные более иммобильны в ПТ (табл. 5), что Х'оворит об их склонности к развитию депрессивных состояний. Указанные особенности поведения ВА и НА крыс согласуются с результатами экспериментов на инбредных Ш и ШЙА животных, что послужило основанием для изучения их алкогольного поведения в следующих сериях опытов.

Изучение динамики добровольного потребления алкоголя у

беспородных ВА и ВА крыс.

Проведенные исследования показали, что при первичных контактах с алкоголем ВА крысы добровольно потребляют больше этанола, чем НА (рис.3). При дальнейшей алкоголизации эти различия нивелируются и среди НА животных у многих особей вырабатывается устойчивое влечение к этанолу, отмечаемое та!сг.е и по показателю АДЭ. Эти результаты согласуются с ранее описанными наблюдениями, показавшими, что у крыс, склонных к развитию депрессивно-подобного сотояния формируется устойчивая алкогольная мотивация (Кашевская, 1985).

Можно полагать, что патологическое влечение к алкоголю формируется в большей степени у особей эмоциональных, высоко тревожных, склонных к развитию депрессии и, по-видимому, длительный доступ к алкоголю может приводить к необратимым патологическим процессам, связанным с развитием алкоголизма.

Таким образом, полученные данные согласуются с результатами фармакогенетических исследовании и позволяют заключить, что состояния повышенной стрессируемости и склонности к депрессии генетически связаны с чувствительностью к алкоголю и развитием влечения к нему.

- 20 -

Рис.3.

ДИНАМИКА ДОБРОВОЛЬНОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ АЛКОГОЛЯ У ВА И НА БЕСПОРОДНЫХ КРЫС.

Этанол (г/кг/сутки)

$

1-я неделя 2-я неделя 4-й месяц

1 - Высокоактивные крысы (ВА); 2 - Низкоактивные крысы (НА)

* - Р< 0.05 - различия между ВА и НА животными;

$ - Р< 0.05 - различия между потреблением этанола за 1-м неделю и 4-й месяц.

Изучение взаимосвязи ЗЗГ структуры сиа с фенотипами ЭСР.

Существуют хорошо документированные сведения о генетическом контроле различных ЭЭГ признаков (Vogel, Motulsky, 1989). В наших предыдущих исследованиях доказана информативность и надежность метода эдектроэнцефалографической регистрации структуры сна для оценки эффектов алкоголя и ряда психотропных препаратов (Буров, Вяглинская, 1981). В настоящем исследовании этот метод использовали для анализа различий в ЭЭГ сна в зависимости от фенотипа ЭСР.

У беспородных ВА и НА крыс с помощь» корреляционного анализа оценивали взаимосвязь между параметрами поведения в эмоционально-стрессовой ситуации (ОП) и ЭЭГ показателями структуры сна. На корреляционной матрице (табл.9) можно видеть группу значимых корреляций (р<0.05). У крыс с активным фенотипом ЭСР обнаружена активация триггерных механизмов ФБС, но не систем, ее поддерживающих. Эти механизмы имеют, по некоторым данным, неодинаковую природу и несут неоднозначные функции в регуляции сна (Salin-Pascual et al., 1991). Можно полагать, что триггер-ные механизмы вовлечет в исследовательское поведение и играот немаловажную роль в адаптации к стрессу (Ротенб&рг, Аршавский, 1S84). Отрицательная корреляция, выявленная между уровнем ЦА в ОП и средней продолжительностью отдельных эпизодов ФБС, вероятно, свидетельствует о специфической взаимосвязи между реакцией страха и системами, поддерживающими быстрый сон, как известно, связанными с эмоциональной сферой (Вейн, 1974). Повышенный уровень тревожности и страха в стрессовой ситуации ассоциировался с редукцией ОБО за счет обеих фаз, что свидетельствует о выраженных отклонениях от физиологической нормы. Возвращаясь к указанным выше наблюдениям о развитии устойчивой алкогольной мотивации у инбредных и беспородных животных с пассивным фенотипом ЭСР в процессе длительной хронической алкоголизации можно полагать, что алкоголь может быть им необходим частично дла нормализации отклонений в структуре сна.

Кроме того очевидно, что нейрофизиологические особенности в виде специфических характеристик структуры сна у особей с различными фенотипами ЭСР могут быть использованы в качестве прогностических признаков индивидуальной чувствительности к анксиолитическим эффектам алкоголя и других психотропных

Таблица 9.

ТРЕУГОЛЬНАЯ МАТРИЦА КОРРЕЛЯЦИЙ МЕЖДУ ПОКАЗАТЕЛЯМИ ПОВЕДЕНИЯ В ОП И ИЗУЧАВШИМСЯ ПАРАМЕТРАМИ СТРУКТУРЫ СНА У БЕСПОРОДНЫХ КРЫС.

Н признака

2 0.89* 1.00

3 0.90* 0.94* 1.00

4 -0.70* -0.51 -0.72* 1.00

5 0.42 0.32 0.56* -0.85* 1.00

6 0.37 0.42 0.60* -0.73* 0.93* 1.00

7 0.30 -0.12 0.12 -0.59* 0.53 0.18 1.00

8 0.67* 0.38 0.55 -0.66* 0.28 0.05 0.65* 1.00

9 -0.39 -0.55* -0.43 0.01 0.38 0.23 0.48 -0.34

Н при-

знака

1 2 3 4 5 6 7 8

Примечание: Н 1 - общая двигательная активность в ОП (ОДА); М 2 - центральная активность в ОП (ЦА); Н 3 - вертикальная активность в ОП (ВА) Н 4 - эмоциональность (число дефекаций в ОП); Н 5 - общее время сна (ОВС); N 6 - фаза медленного сна (ФМС); Л 7 - фаза бистрого сна (ФБС); Н 8 - число эпизодов $БС; N 9 - средняя продолжительность эпизодов ®С. * - Р<0.05.

средств.

Изучение структуры сна животных с различными фенотипами депрессии по1сазало, что у НА в ПТ крис. предрасположенных к развитию депрессивно-подобного состояния. количественная представленность ФБС значительно выше, чем у ВА, менее иммобильных в ПТ животных. Этанол в относительно невысокой дозе (1.0 г/кг) нивелировал эти различия, вероятно, за счет специфического антидепрессивного действия (табл.10).

Тагаш образом можно заключить, что злектрофизиологическая регистрация структуры сна является эффективным методом оценки чувствительности к алкоголю. Выявлены специфические признаки, позволяющие прогнозировать склонность к развитию алкогольной мотивации в зависимости от различных фенотипов ЭСР.

3. Экспериментальная оценка динамики формирования зависимости от алкоголя.

Как следует из вышеизложенного, особенности эмоционально-стрессовой реакции играют важную роль на начальных этапах контакта с алкоголем, а именно в процессе формирования алкогольной мотивации. При хроническом поступлении этанола в организм ЭСР перестает быть одним из определяющих факторов в развитии патологического пристрастия к алкоголю, а у изначально малопьющих особей с пассивным фенотипом ЭСР формируется устойчивое влечение к спиртовому раствору, оцениваемое по уровню среднесуточного и последепривационного его потребления.

В процессе длительного добровольного стабильно высокого потребления алкоголя развивается толерантность, а на более поздних стадиях - зависимость от него, что может сопровождаться функциональной перестройкой организма, часто необратимыми нарушениями на биохимическом, эндокринном, нейрофизиологическом уровнях.

С точки зрения эффективности назначения фармакологических корректоров вызванных алкоголем нарушений создается необходимость дифференцировать временные интервалы, в течение которых формируется толерантность и физическая зависимость от него.

Использование метода ЗЗГ регистрации структуры сна для оценки различных стадий экспериментального алкоголизма. У крыс после 4-6-месячной хронической алкоголизации оценивали элект-р-офцоиологическую структуру ела ка Фоне потребления алкоголя,

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ СНА НА И ВА ПО ПЛАВАТЕЛЬНОМУ ТЕСТУ БЕСПОРОДНЫХ КРЫС. ВЛИЯНИЕ ОДНОКРАТНЫХ ИНЪЕКЦИЙ ЭТАНОЛА.

Параметры сна

НА крысы

ВА крысы

Фон

Этанол (1г/кг)

Фон

Этанол (1г/кг)

ОВС (мин) 132.7±5.4 117.5+8.0 106.0+17.2 105.21:11.3

Ш (мин) 110.8*3.2 100.4*6.7 98.3±1б.7 92.1*6.1

$БС (мин) 21.9+2.6 17.3+2.0 7.7+4.8* 13.1+6.3

Число эпизодов 12.3+1.3 7.5±0.8£$ 4.2*1.8** б.2±2.3 ®С

Ср. длительность эпизодов ®С

1.8±0.2 2.3±0.1$

1.4±0.4

1.6*0.4

Латентный период ®С

69.7±10.7 100.4±17.3 1ГО.0±28.5* 113.9±36.5

Бодрствование 105.8*5.1 122.5*8.0 131.0*18.4 133.5*11.2 (мш)

Примечание: * - р<0.05; ** - р<0.01 - статистически значимые различия между фоновыми параметрами сна у-НА и ВА крыс. $ - р<0.05; $$ - р<0.01 - статистически значимые различия между фоновыми показателями сна и его параметрами после однократной инъекции этанола.

а также через 24 и 48 часов после прекращения доступа к нему. Установлено, что картина сна животных резко нарушена на фоне алкоголизации (табл.11). ОВС значительно снижено за счет обеих фаз сна. ухудшен процесс засыпания, увеличено число пробуждений и их средняя продолжительность, сон неглубокий, поверхностный. Отмена алкоголя сопровождается восстановлением сна и улучшением его качества. Процесс сон-бодрствование практически достигает физиологической нормы. При более длительной хронической алкоголизации (после 10 месяцев и более) изменения в структуре сна выражены иначе (табл.12). На фоне потребления алкоголя картина сна практически не отличается от физиологически нормальной. Отмена же этанола (алкогольная абстиненция) сопровождается резкими расстройствами процесса сон-бодрствование, что проявляется как в количественной представленности отдельных стадий, так и в соотношении между ними. Отмеченные особенности полностью согласуются с известными клиническими наблюдениями о максимальных расстройствах сна во время алкогольной абстиненции у больных алкоголизмом на стадии развившейся зависимости.

Таким образом можно полагать, что 4-6-месячная алкоголизация приводит к развитию патологического влечения к алкоголю, но не зависимости от него, в то время как более длительные сроки контакта с этанолом сопровождаются формированием физической зависимости, объективно оцениваемой на нейрофизиологическом уровне при алкогольной абстиненции.

Использование комплекса поведенческих методик, позволивших подтвердить наличие зависимости от алкоголя. Факт наличия зависимости от этанола вследствие длительной хронической алкоголизации животных был дополнительно доказан на других экспериментальных моделях. Tai-;, применив модифицированный конфликтный тест было показано, что в результате' депривации алкоголя у крыс существенно возрастает количество наказуемых взятий его несмотря на электроболевую стимуляцию по сравнению с неалкого-лизированными животными после предварительной водной деярива-ции (табл.13), что свидетельствует о патологическом влечении именно к этанолу. Использование ПКЛ позволило выявить анксио-генные проявления во время алкогольной абстиненции по уровню повышенной тревожности и страха. Методика крестообразного ла-

Таблица 11.

ИЗМЕНЕНИЯ В СТРУКТУРЕ СНА КРЫС ПОСЛЕ 6-ЫЕСЯЧН0Г0 ДОБРОВОЛЬНОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ 15% РАСТВОРА АЛКОГОЛЯ.

Параметры УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА.

сна. На фоне алкоголя Через 24ч после отмены алкоголя Через 48ч после отмены алкоголя

ОВС (мин) 126.8+34.2 150.6+22.6 170.8*26.5**

ФМС (мин) 110.3+27.0 133.5*16.1* 140.3*16.8**

ФЕС (мин) 16.5*8.8 17.1*9.4 30.4+13.2**

©с г 12.1+5.4 10.8+5.2 17.3+5.0*

Число эпкз.ФБО 8.0+4.2 10.0+5.1 15.7*6.7**

Ср.длительность эпизодов ®С 1.9*0.7 1.6+0.2 2.0+0.3

Латентный период ®С 29.0+14.4 32.5+22.9 12.3*10.5**

Ср.время сна без пробужд.за латентн. период ®С 2.0*1.0 3.0*2.3 3.5*1.8*

То же за ОВС 2.8*1.1 2.8*0.7 3.6*0.7*

Время бодрствования 113.2+34.2 89.4+22.6 69.3+26.5**

Число пробуждений 48.0*13.0 55.6+14.8 48.8*11.9

Средняя длительность пробуждений 2.6±1.2 1.8*0.9 1.6+1.0*

* - Р<0.05; ** - Р<0.01. п=12 в каждом эксперименте.

Таблица 12.

ИЗМЕНЕНИЯ В СТРУКТУРЕ СНА КРЫС ПОСЛЕ 24-МЕСЯЧНОГО ДОБРОВОЛЬНОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ 15% РАСТВОРА АЛКОГОЛЯ.

Параметры УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

сна. На фоне алкоголя Через 24ч после отмены алкоголя Через 48ч после отмены алкоголя

ОВС (мин) 151.3*24.7 112.5*12.7** 113.2*26.4*

ФУС (мин) 129.8*20.0 88.3*12.4** 91.8*16.2**

®С (мин) 21.5*6.1 24.2*4.3 21.3*11.2

®с г 14.2*2.7 21.5*4.3** 17.5*6.4

Число эпиз.ФБС 13.8*4.8 13.8*1.9 11.0*5.0

Ср. длительность эпизодов ФБС 1.6*0.3 1.7*0.2 1.9*0.3

Латентный период ®С 19.0*5.5 5.7*2.4*** 14.3*11.0

Ср.время сна без пробужд.за латентн. период ®С 2.1*0.5 2.7*1.1 1.8*0.8

То же за ОВС 2.6*0.4 1.8*0.3** 1.9*0.5

Время бодрствования 88.7*24.7 127.5*12.7** 126.8*26.4*

Число пробуждений 59.0*8.8 63.2*10.4 64.0*18.6

Средняя длительность пробуждений 1.6*0.6 2.2*0.5 2.2*0.9

* - р<0.05; ** - р<0.01. п=6 в каждом эксперименте.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕПЕНИ ВЫРАЖЕННОСТИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРИСТРАСТИЯ К АЛКОГОЛЮ ПО МЕТОДУ КОНФЛИКТНОЙ СИТУАЦИИ.

Число ненаказуемых взятий воды и этанола через 24ч после начала питьевой депривации (п=8)

неадкоголизи- алкоголизиро-рованные крысы ванные крысы

число взятий число взятий воды этанола

Число наказуемых взятий воды и этанола через 48ч после начала питьевой депривации Ссила тока О.БшА, п=8)

неалкоголизи- алкоголизиро-рованные крысы ванные крысы

число взятий число взятий воды этанола

350.2±279.5

Т = Р =

745.2*257.1 2.94 0.005

7.6±2.4

Т =

Р =

111.3*135.1 2.17 0.02

биринта оказалась пригодной для оценки нарушений функциональной локомоторной асимметрии, характерных для развившегося хронического алкоголизма в результате длительного злоупотребления спиртным.

Таким образом, применение комплексного экспериментального подхода, основанного на использовании набора поведенческих и электрофизиологических методов, позволило выявить динамику формирования физической зависимости от алкоголя и всесторонне охарактеризовать алкогольный абстинентный синдром у животных после длительной добровольной алкоголизации, проведенные наблюдения позволяют заключить, что установленные стадии развития экспериментального алкоголизма при экстраполяции на человеческую популяцию соответствуют именно тем этапам развития заболевания, когда необходимо фармакологическое вмешательство.

Фармакотерапия экспериментального алкоголизма.

4.1 Изучение антиалкогольной активности фармакологических препаратов на стадии формирования влечения к алкоголю. В период развития толерантности к алкоголю, когда его среднесуточное и последепривационное потребление находятся на высоком уровне, целесообразен поиск фармакологических препаратов, способных ослаблять патологическое влечение к этанолу и снижать его потребление.

Как следует из таблицы 14, эффективными в этом отношении оказались четырехциклические антидепрессанты, ингибиторы МАО типа А со стимулирующим компонентом - пиразидол и тетриндол. Пиразндол в дозе 10 мг/кг при ежедневном в/б введение в течение 14 дней ослаблял влечение к алкоголю, что отражалось на снижении единовременного потребления алкоголя после его 3-суточной депривации. Эффект сохранялся и после прекращения введения препарата. Тетриндол проявил антиалкогольную активность в дозе 2.5 мг/кг, достоверно снизив среднесуточное потребление алкоголя после 2-й недели введения; препарат также ослаблял патологическое влечение к алкоголю, оцениваемое по показателю АДЭ. Полученные данные свидетельствуют о большей эффективности тетриндола по сравнению с пиразидолом относительно антиалкогольных свойств при его использовании в меньшей дозе, что подтверждает ранее опубликованные наблюдения о его преимуществах ь качестве антидепрессивного средства (Машковский.с со-

Таблица 14.

ВЛИЯНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ НА ХАРАКТЕР АЛКОГОЛЬНОГО ПОВЕДЕНИЯ КРЫС С СФОРМИРОВАВШИМСЯ ВЛЕЧЕНИЕМ К ЭТАНОЛУ.

Препарат На фоне препарата После отмены препарата

12 1 2

Контроль (п=11) Пирацетам 400мг/кг (п=10)

34.1+11.1 35.7+10.9

3.3+1.8 2.9+1.7

33.9*9.0 32.3±10.2

3.0+2.0 4.6+2.6

Контроль (п=10) Пиразидол Юмг/кг (п=11)

39.3+12.4 36.7±9.9

4.1+1.5 1.2+1.6*

55.4+12.2 42.8+16.6

3.6+2.1 1.6±1.1*

Контроль (п=11) Тетриндол 2.5мг/кг (п=11)

37.7*5.3 20.5*4.4*

3.1±1.3 0.4±0.2*

36.9*4.7 28.4+5.6

4.3+1.2 2.9+0.7

Контроль (п=11) Гидазепам 50мг/кг (п=11)

47.2+4.4 4.7±1.2 27.1*5.6 3.7*1.6 22.1*2.4** 0.6*0.4** 33.6+3.0 2.2+0.9

Контроль (п=11) ГВС-111 2.5мг/кг (п=11)

34.8*8.4 53.6*8.1

3.4*0.9 4.2+2.1

39.7*10.4 43.2*8.7

4.6+2.4 4.8+1.7

Контроль (п=10) ДСИП 0.1мг/кг (п=10)

10-1 0.1мг/кг (п=10)

35.9*11.3 2.7*0.6 36.3*9.3 3.9*2.2 33.9*13.6 3.3*1.5 37.3*9.2 4-2*0.7

34.5*14.4 3.1+2.0 48.5*7.2 2.9*0.8

* - р<0.05; ** - р<0.01; п - число животных в группе

1 - среднесуточное потребление этанола (ил/кг/сутки);

2 - единовременное (за 90 мин) потребление этанола после 3-су-точной депривадии (мл/кг).

авт., 1993). Отечественный дневной транквилизатор бензодиазе-пшовой структуры гидазепам обладал выраженными антиалкогольными свойствами, снижая среднесуточное и последепривационное потребление этанола, эффект сохранялся после прекращения введения препарата. Антагонист 5НТ-3 рецепторов латран снижал среднесуточное потребление алкоголя в невысокой дозе 1 мг/кг и не у всех животь^я, что, вероятно, может свидетельствовать об индивидуальных, возможно генетических различиях в его анксио-литическом действии. Препарат с ноотропшм спектром фармакологической активности - БУБ-Ш не оказывал влияния на сформировавшуюся устойчивую алкогольную мотивацию. То же можно сказать и об эндогенном нейрорегуляторе ДСИП. Таким образом, в процессе формирования устойчивого влечения к алкоголю наиболее выраженным антиалкогольным действием обладали препараты из групп транквилизаторов и антидепрессантов, что согласуется с описан-ндаи ранее фактами о предрасположенности к алкоголю животных с активными фенотипами ЗСР и депрессии и подтверждает целесообразность индивидуального подбора фармакотерапии для ослабления алкогольной мотивации.

4.2 Изучение антиалкогольных свойств препаратов при раз-вивиейся зависимости от этанола. Купирование алкогольного абс-ткаентного синдрома. Самой тяжелой, с трудом поддающейся лечению является стадия развившейся физической зависимости от алкоголя, характеризующаяся необратимыми расстройствами глк на /ровне ЦКС, так и различными патологическими изменениями вегетативных функций. Развитие зависимости почти всегда сопровождается резкими нарушениями сна, достигающими своей кульминации в состоянии алкогольной абстиненции. Поэтому фармакологическая коррекция абстинентных проявлений в структуре сна является актуальной и оправданной. Ряд методических подходов, описанных ранее для доказательства наличия развившейся зависимости от ачкоголя был использован также длй контроля эффективности фармакологических препаратов в качестве потенциальных корректоров расстройств при алкогольной зависимости и для купирования алкогольного абстинентного синдрома. Поскольку физическая зависимость формируется в результате длительного добровольного потребления алкоголя, этот процесс может сопровождаться естественным и отчасти алкоголь-индуцируемым старением. Поэтому при выборе препаратов для изучения были учтены имеющиеся в да-

тературе сведения об их возможном применении в геронтологичес-кой практике.

С использованием методики ЗЗГ регистрации сна установлена эффективность эндогенного нейрорегулятора ДСИП для коррекции абстинентных проявлений. Препарат купировал абстинентный синдром у животных с разным типом ЭЗГ расстройств (рис.4), т.е. обладал индивидуальными регулирующими и нормализующими сон эффектами, что делает его перспективным при подборе индивидуальной фармакотерапии.

Эффективным для коррекции проявлений алкогольного старения оказался разработанный фирмой Сигма-Тау (Италия) препарат ацетил-Ь-карнитин, рекомендованный в качестве ноотропного средства в геронтологической практике и успешно используемый за рубежом на ранних стадиях болезни Альцгеймера (Моз51пдЬс^£", 1996). Ацетил-Ь-карнитий проявлял наибольшую активность после длительного (6 месяцев) применения у старых алкоголь-зависимых животных, полностью предотвращая основные нейрофизиологические нарушения в состоянии алкогольной абстиненции (рис.5), чего нельзя отметить при его менее длительном использовании.

Антагонист кальциевых каналов - лацидипин (Глаксо, Италия) оказался неэффективным как для купирования алкогольного абстинентного синдрома, так и в качестве ингибитора патологического пристрастия к зтанолу на стадии развившейся зависимости от него.

Производное бензодиазепинового ряда под шифром БД-798 обладало выраженной седативно-снотворной активностью в период отмены-этанола, увеличивая на ЭЗГ медленноволновую активность, однако, не восстанавливало структуру сна до физиологической нормы и не регулировало основных соотношений между отдельными стадиями сна.

Очень эффективным в широком диапазоне доз показал себя разработанный научным центром Глаксо (Италия) антагонист рецепторов холецистокинина типа В препарат под шифром 6У150013, являющийся адамантильным производным 1,5-бензодиазепинов. лишенный основных побочных эффектов, присущих транквилизаторам бензодиазепиновой структуры ((Зау1га§М е1 а1., 1995; Нев^аги еЬ а1., 1995). Препарат разработан в качестве высокоэффективного селективного анксиолитика.

В настоящих экспериментах 67150013 не потенцировал парко-

- 33 - Рис.4.

ВЛИЯНИЕ ДСИП (0.1 мг/кг) НА ЭЭГ ПАРАМЕТРЫ СНА В ПЕРИОД АЛКОГОЛЬНОЙ АБСТИНЕНЦИИ У КРЫС С ОТНОСИТЕЛЬНЫМ ДЕФИЦИТОМ ФБС.

200 -И *

ОВС ФМК ФБС /эп.ФБС Длит.эп Бодрст.

1 - Сон при абстиненции; 2 - сон на фоне ДСИП; * - р<0.05.

- 34 - Рис.5.

ВЛИЯНИЕ АЦЕТИЛ-Ь-КАРНИТИНА НА ПАРАМЕТРЫ СНА В ПЕРИОД АЛКОГОЛЬНОЙ АБСТИНЕНЦИИ.

200

150 -

100-

50 -

ФБС £!эп.®С Длит.эп Бодрст.

ВЛИЯНИЕ ССК-В АНТАГОНИСТА 07150013 НА ПАРАМЕТРЫ СИА В ПЕРИОД АЛКОГОЛЬНОЙ АБСТИНЕНЦИИ.

200

150

100 -

50

2

***

1 - Структура сна при абстиненции; 2 - сон на фоне введения препарата. *-р<0.05; **-р<0.01; ***-р<0.001.

тические эффекты этанола, что позволило использовать препарат при различных проявлениях экспериментального алкоголизма.

С помошью электрофизиологической регистрации структуры сна установлено, что бУ^СШЗ полностью купирует проявления алкогольной абстиненции у алкоголь-зависимых крыс в широком диапазоне доз (рис.5). Кроме того препарат в дозах от 0.5 до 50.0 мкг/1сг улучшает нарушенную естественным процессом старения структуру сна 24-месячных неалкоголизированных животных, приводя ее к полной физиологической норме (табл.15). Наряду с этим ВУ150013 не оказывает елияния на физиологически нормальную картину сна молодых интактных крыс в том же дозовом диапазоне (табл.16), что свидетельствуе о его эффективности тленно при патологических процессах, связанных с алкоголизмом и старением.

Важным в действии Ш50013 оказалось, что он статистически значимо снижает уровень среднесуточногого потреблении алкоголя у зависимых животных, а также значительно ослабляет патологическое влечение к этанолу в последепривационный период (табл.17).

Эти результаты послужили основанием для более углубленного изучения ССК-В антагониста на других экспериментальных моделях.

Применение методики ПКЛ позволило установить выраженную анкисолитическую активность БУ150013 во время алкогольной абстиненции. Лишенные алкоголя зависимые от него животные находились более длительное время в открытых рукавах лабиринта после введения 67150013 по сравнению с контрольными крысами, а также животными, которым вводили диазепам, что свидетельствует о большей эффективности ССК-В антагониста по сравнению с эталонным бензодиазепиновым транквилизатором.

Кроме того, ОУ150013 обладал выраженной анкисолитической активностью в конфликтном тесте при различных режимах электроболевого раздражения (табл.18).

Таким образом, у антагониста ССК-В рецепторов была выявлена выраженная анксиолитическая и антиалкогольная активность. Кроме того, представляется перспективным использование препарата при естественном старении в качестве средства, способного нормализовать процесс сон-бодрствование.

Таблица 15.

ВЛИЯНИЕ £57150013 НА ЭЛЕКТРОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ СНА СТАРЫХ (24-МЕСЯЧНЫХ) НЕАЛКОГОЛИЗИРОВАННЫХ КРЫС.

Параметры сна. Контроль п=6 (7/15003 (0.5мкг/кг) П=6 57150013 (5.0мкг/кг) п=6

ОВС (мин) 129.9*7.7 190.0+6.2*** 174.7+3.5***

ЙЮ (юоО 121.9+7.5 163.3+5.7** 156.8+2.5**

®С (мин) 8.0±2.6 26.7+2.4*** 17.9+1.1**

ФБС X 6.1*1.7 14.0±1.2** 10.2+0.4*

Число эпиз.ФБС 4.7+1.4 11.5+0.96** 8.8+0.5*

Ср.длительность эпизодов $БС 1.7+0.18 2.3*0.17* 2.1±0.1

Латентный период ®С 65.4*14.3 38.2*5.1 48.1+10.2

Ср.время сна без пробуад.за латентный период <ШС 3.0*0.4 4.2*0.9 3.2*0.4

То же за ОВС 2.8*0.4 4.4+0.48* 3.6*0.4

Время бодрств. 110.1*7.8 50.6*6.2*** 65.3*3.5***

Число пробуждений 48.7±4.б 45.5*3.5 51.3*5.99

Средняя длительность пробуждений 2.3*0.2 1.1*0.09*** 1.4+0.1**

* - р<0.05; ** - р<0.01; *** - р<0.001 по сравнению с контролем

ВЛИЯНИЕ (37150013 НА ЗЛЕКТРОФИЗИОДОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ СНА МОЛОДЫХ ИНТАКТНЫХ КРЫС.

Параметра Контроль (Ш50013 6У150013 57150013

сна. О.бмкг/кг 5.0мкг/кг бО.Омкг/кг

п=6 п=6 п=6 п=б

ОВС (кии) $МС (мин) ФБС (мин)

ФБС г

Число эп.ФБС

Ср.длительн. эпизодов ФБС

Латентный период ФБС

Ср.время сна без пробу ад. за лат.пер.ФБС

То же за ОВС

Время бодрств.

Число пробужд.

Ср. длительность пробужд.

171.4±7.5 171.8±2.2

150.4*8.7 150. 4*2.8 21.0+4.5 21.4+1.2 12.4±2.5 12.5*0.7 9.7+1.7 10.2*0.9

2.1+0.1

3.1*0.3 4.0*0.4 68.7*7.5 43.7*2.5

1.6*0.2

2.2+0.1

34.0*7.7 25.2*5.1

3.5*0.4 3.8+0.06 68.2*2.2 45.7*0.6

1.5±0.06

171.2*7.4 160.7*4.5

144.7+5.8 141.7+7.1

26.6+5.5 19.0±3.9

15.6+2.8 12.0*2.7

11.2+1.8

2.3+0.2

4.1+1.4 3.8+0.3 68.8+7.4 45.8*2.2

1.5*0.2

8.8+1.3

2.1*0.2

21.9*5.7 23.7*2.4

3.0+0.4 3.5+0.2 79.3*4.5 46.2+2.9

1.8*0.2

ВЛИЯНИЕ (7/150013 НА ПОКАЗАТЕЛИ СРЕДНЕСУТОЧНОГО И ПОСЛЕДЕПРИВА-ЦИОННОГО ПОТРЕБЛЕНИЯ 15% ЭТАНОЛА У КРЫС ПОСЛЕ 15-МЕСЯЧНОЙ ДОБРОВОЛЬНОЙ АЛКОГОЛИЗАЦИИ.

УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА

Фон 67150013 за 10 О.ОЗмг/кг дней 10 даней

67150013 СТ150013 О.Обмг/кг после от-10 дней 10 дней

Среднесуточное потребление алкоголя (мл/кг) 47.21:3.1 45.Б+1.9 ** 24.7*5.6 39,9*3.9

Однократное

(за 90 мин) по- * **

требление алко- 11.2+1.5 4.6*1.5 1.7*0.5 9.4*2.8

голя после деп-

ривации (мл/кг)

Примечание: п=10 (число животных); * - р<0.05; ** - р<0.01.

Таблица 18.

ВЛИЯНИЕ 13715001 ИА ПОВЕДЕНИЕ КРЫС В КТ ПРИ ЭЛЕКТРОБОЛЕВОМ РАЗДРАЖЕНИИ РАЗЛИЧНОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ.

0.25 шА

Контроль (р-ритель) п=14 Диазепам (4 мг/кг) п=11 СУ150013 (доза) 0.5мкг/кг 5.Омкг/кг п=14 п=13 50.Омкг/кг п=14

905.7+117.5 ** 1870.6+131.3 ** 1411+116.6 ** 1451.2+125.1 1194+110.2

0.40 шА

Контроль (р-ритель) п=20 Диазепам (4 мг/кг) п=11 ет150013 (доза) 0. 5мкг/кг 5.Омкг/кг п=19 п=21 50.Омкг/кг п=24

166.2*31.1 ** 619.5*157 266.3+50.7 ** 518.7+86.7 ** 414.5+80.4

0.50 шА

Контроль (р-ритель) п=23 Диазепам (4 мг/кг) п=12 СТ150013 (доза) 0.5мкг/кг 5. Омкг/кг т»=20 п=18 50.Омкг/кг п=22

47.95*6.8 ** 220.5+51.8 ** 79.25+9.6 67.3+7.5 ** 92.8*14.5

0.60 шА

Контроль (р-ритель) п=14 Диазепам (4 мг/кг) п=14 0.5мкг/кг п=14 67150013 (доза) 5. Омкг/кг 50.Омкг/кг п=13 п=13

19.0*3.4 52.0+13.6* 30.6+4.8 39.2+19.2 28.6*7.4

Примечание: п - число животных в группе; *-р<0.05; **-р<0.01.

- 40 -ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Проведенное исследование подтвердило справедливость его исходных предпосылок о важной роли генетических факторов в формировании алкоголизма. Вместе с тем, анализ поведения животных, селекционированных по потреблению этанола, не позволил сделать выводы о сцепленном наследовании регистрируемых признаков и влечения к алкоголю. В каждой из изученных пар животных выявлены специфические для пары поведенческие характеристики, сопряженные с отношением к этанолу. Проведенный анализ позволяет сделать заключение о существовании различных систем генов, [юнтролируюших влечение к этанолу, что определяет необходимость постановки новых научных задач по выяснению сопряженных признаков в рамках выделенных фенотипов.

Углубленное изучение связи алкогольной мотивации с фенотипом эмоционально-стрессовой реакции позволило установить гомологию по данным характеристикам между мышами С5?ВЬ/б и крысами МША и между мышами ВАЬВ/с и крысами № соответственно. Более того, прогностические признаки развития алкоголизма - пассивный фенотип ЭСР и склонность к депрессии, установленные на инбредных животных, были подтверждены на беспородной популяции крыс, разделенных по реакции на эмоционально-стрессовое воздействие. Эти данные позволили найти с одной стороны объективные критерии развития алкогольной зависимости, а с другой -целенаправленно оценить эффективность различных психотропных препаратов как на стадии формирования влечения к алкоголю, так и для купирования абстинентного синдрома. Показано, что для типирования эмоционально-стрессовой реакции может быть использована "бензодиазепиновая проба". Найдены объективные ЭЭГ параметры, характеризующие алкогольные расстройства на стадии сформировавшейся зависимости.

Показано, что в качестве индивидуальных средств фармакотерапии могут быть рекомендованы транквилизаторы и антидепрессанты - для подавления влечения к этанолу, а для купирования абстинентного синдрома - небеязодиазепиновые препараты, сочетающие ноотропные и анксиолитические свойства, нейропептид дельторан. Впервые описаны антиалкогольные свойства препарата - антагониста ССК-Б рецепторов.

Таким образом, в результате исследований, проведенных с использованием эксперйшнтально-фармакогенетиче-ской методоло-

гии, разработал комплекс рекомендаций как для диагностики, так и для фармакотерапии алкогольных расстройств.

ВЫВОДЫ.

1. У животных, селекционированных по предпочтению этанола, установлены поведенческие характеристики, специфичные для каждой пары изученных линий. Общих признаков поведения, наследственно сцепленных с влечением к этанолу не зарегистрировано.

2. Установлены гомологичные различия в алкогольном поведении у мышей и крыс с "активны)/" и "пассивным" фенотипом эмоционально-стрессовой реакции. Показано, что MR крысы с пассивной реакцией на эмоциональный стресс, склонные к депрессии, изначально потребляют алкоголя меньше, чем активные MNRA животные. Длительная алкоголизация приводит к инверсии эффекта. Зависимость от алкоголя в большей степени развивается у животных с пассивным фенотипом ЭСР. Сходные закономерности установлены у беспородных крыс, разделенных по типу реакции на эмоциональный стресс.

3. Доказано, что "бензодиазепиновая проба" в тесте "открытое поле" может быть использована для титрования эмоционально-стрессовой реакции в беспородной популяции животных.

4. С использованием комплекса поведенческих и ЭЭГ тестов разработана система оценки зависимости от алкоголя. Установлено, что алкогольный абстинентный синдром, выявляемый у крыс в процессе длительной добровольной алкоголизации, является важным и необходимым критерием алкогольной зависимости.

5. Установлено, что на стадии сформировавшейся алкогольной мотивации наиболее эффективными фармакологическими средствами, снижающими потребление алкоголя и ослабляющими влечение к нему являются четырехциклические антидепрессанты тетриндол и пира-зидол, а также дневной транквилизатор гидазепам.

6. Разработана ЭЭГ методология оценки циклов сна, адекватная для анализа зависимости от этанола и контроля эффективности ее фармакотерапии.

7. Установлено, что с целью купирования алкогольного абстинентного синдрома может быть рекомендован нейропептид дель-таран. Препарат с ноотропными свойствами ацетил-L-карнитин при хроническом применении может быть исиольэован в качестве корректора алкогольных и возрастных расстройств.

8. Комплексное изучение ССК-В антагониста GV150013 позволяет рекомендовать его для нормализации расстройств сна при естественном и апкоголь-индуцируемом старении, для снижения патологического пристрастия к алкоголю на стадии развившейся зависимости, а также в качестве анксиолитического средства в стрессовой ситуации.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ethanol effects on the sleep pattern in rats with different level of alcohol motivation.// In: "4th Congress of the Hungarian Pharmacological Society with International Participation", Budapest, Hungary, 1985.

2. Средство для лечения алкогольного абстинентного синдрома. //Авторская заявка N 4021898/14 (24542), Приоритет от 13.02.86г. (Соавторы: Буров Ю.В., Варков А.Я., Климова Н.В., Пятин Б.М. ).

3. Возможные корреляции между уровнем алкогольной мотивации и электрофизиологической структурой сна у крыс. //Еюлл. эксперим. биологии и медицины. - 1987. - N4. -с.394-396 (соавтор: Буров Ю.В. ).

4. Изучение возможной роли зон положительного подкрепления в механизмах болевой регуляции и их связи с эндогенной опиат-ной системой. //Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 1987. -N 5. - с. 577-579 (соавторы: Буров Ю.В., Жуков В.Н.).

5. Корреляции между скоростью элиминации этанола и психофизиологическими особенностями крыс. //Еюлл. эксперим. биологии и медицины. - 1987. - N5. -с. 579-580 (соавтор: Власова Н.В.).

6. Изучение центральных и периферических механизмов, определяющих выраженность алкогольной мотивации у крыс. //Фарма-кол. и токсикол. - 1987. - N6. - с. 82-84 (соавтор: Власова Н.В.).

7. Комплексный подход к оценке факторов, определяющих предрасположенность к развитию изначальной алкогольной мотивации у крыс. //Вопросы наркологии. - 1988. - N1. -с. 21-24 (со-автро: Власова Н.В. 1.

8. Проблемы моделирования при доклиническом изучении средств для дифференцированной фармакотерапии алкоголизма. //Фармакология и тучно-технический прогресс: тез.докл. VI

Всесоюзного съезда фармакологов. 25-27 октября. -Ташкент, 1983. - с. 232 (соавторы: Майский А.И., Кожечкнн С.Н., Кам-пов-Полевой А.Б. и др.).

9. Оценка ускоренного развития устойчивой алкогольной мотивации у крыс с целью изучения потенциальных противоалкогольных средств. //Бюлл. зксперим. биологии и медицины. - 1990. -И 4. - с. 364-366 (соавтор: Салимов P.M.).

10. Влияние пептвда дельта-сна на злектрофизиологические параметры сна крыс в период алкогольной абстиненции. //Бюлл. зксперим. биологии и медицины. - 1930. - N 9. -с. 281-283 (соавторы: Салимов P.M., Майский А.И.).

И. Поведенческие, нейрофизиологические и нейрохимические особенности индивидуальной чувствительности к этанолу как основа поиска потенциальных антиалкогольных средств. //Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам: тез. докл. всес. конф. Ростов-на-Дону, 22-24 мая 1990г. - Ростов-на-Дону. 1990. - с.8-9 (соавторы: Салимов P.M., Кокина Е.Е., Минеева М.Ф.).

12. Критерии экспериментальной оценки динамики формирования патологического влечения и зависимости от алкоголя. //VII Советско-Итальянский симпозиум по нейропсихофарыакологии: тез. докл. Ленинград, 25-27 октября 1990г. - Москва 1990. - с. 12.

13. Multivariate analysis of behavior related to alcohol abuse in rats. //Drug and Alcohol Dependence. - 1991. -H27. -p.p. 135-137 (co-author: Salimov R.M.).

14. Reduction of laboratory animals number in alcohol abuse and dependence research. //Tierlaboratorium. Herausgegeben von den Zentralen Tierlaboratirium und dem Institut fur Tierschutz, Verhaetenslehre und Versuchstierkunde der Freien Universität Berlin. - 1991. - N 14. -p.p: 130-140 (со-authors: Molodavkln S.M., Yoronina Т.A.).

15. Experimental: approaches to the evaluation of alcohol abuse and dependence development. //Drug and Alcohol Dependence. - 1992. -N 30. - p.p. 111-115.

16. Experimental approaches to the development of pharmacological drugs for the . treatment of alcoholism. //Molecular Pharmacology of the CMS. Joint meeting of Russian and Italian neuropharmacologists. Collegio del Colle, Urbino, October 14-16, 1992. - p.2.

17. Behavioral and electrophysiological predictors of individual sensitivity to psychotropic drugs and inclination to experimental alcoholism development. //Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs: Abstracts, 2nd International Conference, Moscow, Russia, 22-26 May, 1993. -Moscow. - p.92 (co-authors.: Kashevskaya O.p., Seredenin S.B.}.

18. The phamacogenetic approach to the evaluation of the effect of tranquillisers. //Biological Basis of Individual Sensitivity to Psychotropic Drugs. Golden Ring Conference. Ed. by Seredenin S.B., Longo V., Gaviraghu G. - 1994 Graffham Press Ltd., Edinburg. -p.p. 47-56 (co-authors: Seredenin S.B., Kashevskaya O.P.').

19. Differences in open field behavior in rat strains with differences in alcohol intake. //Alcoholism. Clinical and Experimental Research. - 1994. -Abstr. N 18. v.Z. -p. 485 (co-authors: Halikas J., Seredenin S.B., Qverstreet D. et al.).

20. Elevated fluid intake during access to saccharin is associated with subsequent high alcohol intake. //Alcoholism. Clin.and Experirn.Res.- 1994.-18.- 2.-p.490 (co-authors: Qverstreet D.H., Rezvani A.H., Halikas J.A et al.).

21. Behavioral correlates of alcohol preferring and -nonpreferring rats. //Alcoholism. Clin, and Experim. Res. -ISBRA Abstr. - 1994, -18. -2.- p.50A. (co-authors: Qverstreet D.H., Seredenin S.B., Rezvani A.H. et al.).

22. Interaction between saccharin and alcohol. /'/The Int. Workshop on Emotional and Motivational Mechanisms of Behavior: Neurobiological, Pharmacological and Psychological Aspects. Warsaw, October 1994. Abstr. - p.284 (co-authors: Kampov-Pole-vov Л.В., Overstreet D.H., Kashevskaya O.P. et al.).

23. Экспериментальная оценка поведенческих особенностей формирования пристрастия к алкоголю. //Зксперим. и клин, фар-макол. - 1995.-'т. 18. -N 1. - с. S7-5S (соавторы: Молодавкин Г.М., Середенин С.Б., Воронина Т.А.).

24. EEG analysis of acute alcohol intoxication in rats. //Laboratornye Zhyvotnye.-1995.-V.2.-p.p.82-89 (со-authors: Koshechkin S.H.. Krapivin S.V., Mazurkevich Z.B.).

25. Benzodiazepine tranquillizers effects dependence on emotional stress reaction phenotype.//Pharnsacological Research: Abstract book. 1st European Congress of Pharmacology. Milan,

Italy, June 16-19, 1995. -p.278 (co-authors: Badishtov B.A., Kuropatkina L.Q., Seredenin S.B.).

£6. Фармакогенетическое изучение индивидуальной чувстви-телыюсти к бензодиазепиновым транквилизаторам и алкоголю. // Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств. Сборник тезисов 1-го Съезда Российского научного общества фармакологов. 9-13 октября 1995г. Волгоград. Москва 1995. -с.80 (соавторы: Куропаткина Л.Г., Середенин С.Б.).

27. То drink or not to drink: open-field behavior in alcohol-preferring and alcohol-nonpreferring rat strains. //Physiol. Behav. -1995. -v. 57. -p.p. 585-589 (co-authors: Badishtov B.A., Overstreet D.H., Seredenin S.B. et al.).

28. To drink or not to drink: tests of anxiety and Immobility in alcohol-preferring and alcohol-nonpreferring rat strains. //Physiol. Behav. - 1995. -v. 57. -p.p.937-941. (co-authors: Overstreet D.H., Kashevskaya O.P., Halikas J.A. et al.).

29. Experimental evaluation of alcohol dependence development. Pharmacological treatment of ethanol withdrawal in rats. //Neurochemistry and pharmacology of drug addiction and alcoholism. International Conference. Abstracts. St.-Petersburg June 8-10, 1996. -p.57 (co-author: Seredenin S.B.).

30. Experimental indices of alcohol dependence development and the effectiveness of alcohol withdrawal pharmacotherapy in rats. //Alcoholism. Clin, and Experlm. Res.- 1996 Joint Scientific Meeting of the RSA and the ISBRA. -June 22-27, 1996. -Washington, D.C.. -1996. -v.20. -N 2. p.22A- 109 (co-authors: Seredenin S.B., Overstreet D.H., Halikas J.A.).

31. Suppressant effects of bemithylum, a novel Russian non-sedative anxiolytic, on alcohol intake in alcohol preferring P rats. //Alcoholism. Clin, and Experlm. Res.-19S6.

- Joint Scientific Meeting of the RSA and the ISBRA. - June £2-27. 1996. -Wasington, D.C. - 1996.- V.20.-N2.-p.93A-536 Ceo-authors: Seredenin S.B., Kaipov-Polevoy A.B., Overstreet D.H., Resvani A.H.).

32. Pain sensitivity arid .saccharin intake in alcohol-preferring and -nonpreferring rat strains. //Physiol. Behav.- 1996.

- v. 59. -p.p.683-688 (co-authors: Kampov-Polevoy A.B., Sinclair J.D., Seredenin S.B. et al.).