Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Фармакологическая коррекция монооксигеназной системы легких и печени присенсибилизации

• . : 1 ' и " *' ^

/ 'Г ;.« >

министерство здравоохранения руз

второй ташкентский государственный медицинскип

институт

На правах рукописи

ГРИФУЛИНА Анжела Леонидовна

ФАРМА КОЛО Г И Ч Е С КАЯ КОРРЕКЦИЯ МОНООКСИГЕНАЗНОП СИСТЕЛ1Ы ЛЕГКИХ И ПЕЧЕНИ ПРИ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ

14.00.16 — патофизиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ташкент — 1993

Работа выполнена в Первом н Втором Ташкентских медицинских институтах.

Научные руководители:

доктор медицинских наук профессор Каримов X. Я.,

кандидат медицинских наук с. и. с. Комарин А. С.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Хакбердыев М. М., доктор медицинских наук, профессор Усманов Р. И.

Ведущая организация: Ташкентский институт усовершенствования врачей

со

Защита состоится « » МО^ 1993 г. в /V часов на заседании специализированного совета Второго медицинского института Д.087.09.22 по адресу: 700109, Ташкент, ул. Фароби, 2

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Первого и Второго Ташкентских государственных медицинских институтов

Автореферат разослан < » ИЛЛ^Р 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

БАТЫРБЕКОВ А. А.

Актуальность проблемы. Поиск путей фармакологической коррекции нарушенной функции монооксигеназной системы. (КОС) у больных с аллергическими заболеваниями представляет собой актуальную проблему иммун(фармакологии и иммунотоксикологии (Ковалёв К.Е., Полевая 0,1). 1965; Ковалёв И.Е., Аэизов Р.Г., 1986; Лопаткин H.A., Лопухин D.M., 1989). Перспективным направлением в изучении регуляции МОС при аллер-гозах является исследование механизмов действия индукторов или ингибиторов лекарственного метаболизма (Ковалёв И.Е. и др.1990; Хлопушина Т.Г., Кринская A.B., 1991; Хлопушина Т.Г. и др. 1992). Важность изучения фармакологических препаратов, обладающих различным механизмом влияния на функииона.-'ное состояние МОС в организме, обусловлена тем, что активность этой системы изменяется в различной степени и направлении в зависимости от периода развития патологического процесса при сенсибилизации (Галкин Б.Н. и др., 1984; Марокко И.Н. и др., 1990; Алимова А.О., 1991; Ко-марин А.С,.и др. 1992). Последнее обстоятельство указывает на необходимость дифференцированного подхода к изучению селективны* корректоров лекарственного метаболизма в зависимости от конкретных условий функционирования МОС с учётом дозы изучаемых препаратов, их химической структура, фармакологической актипкости, сроков и кратности введения в разные периоды аллергизации организма .

Как известно, при фармакотерапии аллергических состояний важное значение пр!даётся назначению антигистаминных препаратов. Установлено, что их влияние на уровень гистамина определяется не только блокированием Hj-и ¡^ - рецепторов, но и изменением функциональной активности системы биотрансформации. В частности, димедрол оказывает умеренное бифазное, в циметидин - угнетаюиеа действие на ДОС органов (Ьендер К.И., Луцевич А.Н., 1588; <£tah.ai*dL M.i. <А ai.,1986). Следо лтельно, можно ожидать, что фармакологические препараты с различным механизмом действия на систему биотрансформации будут по-разному влиять на уровень гистамина и на свой собственный метаболизм в зависимости от периода сенсибилизации организма. С другой стороны, фармакологическая коррекция системы биотрансфораации будет не только изменять уровень гистамина в органах, но и супественно модифицировать чувствительность тканей к его токсическому действии под влиянием лекарственных средств, назначаемых с лечебной целью.

В тс же время а литературе не обнаружено данных о влиянии димедрола к циметидина в сравнении с действием бензонала - индуктора лекарственного метаболизма - на активность МОС печени и лёгких в функциональной взаимосвязи с уровнем в них гиста-мина в разные периоды алл<"~гизации организма.

• Изучение путей целенаправленной фармакологической коррекции ферментов детоксикации печени и лёгких с помощью лекарственных средств селгктивного действия на МОС с учётом функционально-метаболической активности органов, уровня в них гистами-иа и его токсичности (ЛД^д) в разные периоды сенсибилизации позволит, с одной стороны, с патофизиологических позиций решить многие вопросы, касающиеся нарушения резистентности и гиперреактивности организма к действию гистамина, чувствительности к фармакологическим препаратам и осложнений, развивающихся при фармакотерапии больных с аллергозами [Четвериков Г.Н.,1987; Гершвин М.Э., 1534; Латышева Т.В. и др, 1968, Трескунов В.К. и др., 1990, Шелюг» ¿.А^И, 1аеяег<£. 1981),

С другой - разработать теоретические предпосылки для патогенетически обоснованного применения лекарственных препаратов с различным механизмы действия на МОС с целью эффективного и рационального лечения больных с аллергозами с минимальным риском развития у них побочных реакций и токсических эффектов.

У25ь_и_зааачи_исследования. Целью исследования явилось изучение: - некоторых патогенетических механизмов, лежащих в осноге изменения, функциональной активности МОС печени и лёгких в разные периоды формирования процесса сенсибилизации, и толерантности организма к анафилактическому шоку (АЫ) при воздействии лекарственных средств; - возможных лутей коррекции нарушенной Функции МОС печени и лёгких а помощью препаратов избирательного действия на эту систему в сравнении с влиянием фармакологических средств, являющихся Н^- и Н2- блокаторами гисташновых рецепторов, при профилактическом их введении е различные периоды формирования процесса сенсибилизации, на развитие АШ, чувствительность к токсическому действию (ВДвд) гистамкна основания и на действие тест-препаратов, фармакологический аффект*которых в организме, как установлено, зависит от функционального состояния мокооксигеназ.

связи с этим были поставлены следующие задачи.

1. Изучить активность монооксигеназ печени и лёгких - содержание цитохромов Р-450, В^, активность НАДЗН-цитохром с-ре-дуктазы, бенз(а)пиренгидроксилазы (Б-А-10 ,//-декетилази амидопирина, глюкозо-6-фосфотазы (Г-6-0) в разные периоды сенсибилизации и в период развития АШ.

2. Изучить МОС печени и лёгких в период развития А111 после предварительного введения в разные периоды сенсибилизации димедрола, циметидина и бензонала в сравнительном аспекте.

3. Изучить токсичность ДД^д и ЛДэд гистамина основания,

в разные периоды сенсибилизации, а также после предварительного введения димедрола, циметидина и бензонала.

4. Изучить содержание гистамина в пег-°ни, лёгких и крови в разные периоды сенсибилизации организма и при развитии АШ.

5. Изучить влияние различных концентраций гистамина основания на ферментативную активность НДЦФН-цитохром с-редуктаэы и конверсию цитохрома Р-450 в его инактивировянчую форму цито-хром'Р-420. ... ;

ШЖФЗЗ Л22:ШЗ • Влерше установлено, что при сенсибилизации коррекция и ответная реакция нарушенной функции МОС в органах животных в значительной степени определяется свойством фармакологического препарата (индуктора или ингибитора лекарственного метаболизма) избирательно влиять на эту систему, его органотропность и периодом развития патологического процесса. Впервые в сравнительном аспекте, выявлены положительные и отрицательные стороны фармакологического действия бензонвлз (индуктора), циметидина (ингибитора) и димедрола на развитие АО, а также токсического эффекта иЩд,}) гистамина основания е разные периоды сенсибилизации.

Впервые показано, что в патогенетических механизмах нарушения функции монооксигеназ печени лёгких и чувствительности к действии фармакологических препаратов в зависимости от периода сенсибилизации важная роль принадлежит изменения в организме уровня гистамина.

Полученные экспериментальные данные значительно расширяют научные представления об определяющей ролл МОС печени л лёгких в патогенезе развития АШ, побочных реакция организма на действие лекарственных средств у больных аллергоэами, а также указывают на необходимость осторожного использования лекарственных

средств, избирательно влияющих на систему биотрансформации органов в зависимости от периода развития процесса сенсибилизации .

Практическая ^енность_работы. В работе установлено, чю чувствительность сенсиби/ зированного организма к действию лекарственных средств обусловлена процессами нарушения активности монооксигенаэ, прежде всего в печени и лёгких, что имеет важное значение для теоретического обоснования механизмов, лежащих в основе возникновения тяжёлых осложнений и развития побочных и токсических явлений, отмечаемых нередко при проведении фармакотерапии у больных с аллергозами. В то же время фармакологическая коррекция нарушенной функции КОС препаратами индуктивного и ингибирущего действия без учёта функциональной активности этой системы в зависимости от периода развития процесса сенсибилизации, таит в себе, наряду с положительным эффектом, заключающимся в нормализации чувствительности организма на введение лекарственных средств, и отрицательные стороны. Так, в •предприступный период может наблюдаться усиление токсического влияния аллергена и провокация развития АРНТ. Отмеченный положительный 5фект индуктора МОС бенэонала по предупреждению развития АШ позволяет рекомендовать его в качестве патогенетически обоснованного средства в комплексное лечение аллергозов.

9£Ы°5ЙУ§_П252?§НЙ5ж_Бындсимые_на_задиту

1. В зависимости от периода сенсибилизации значительно изменяется Функциональная активность монооксигенаэ печени и лёгких.

2. йармакологическая коррекция нарушенной детоксикацконной функции печени и лёгких димедролом, циметидином и бензоналом при их предварительном введении в разные периоды сенсибилизации приводит к разнонаправленным изменениям активности монооксигенаэ в этих органах и числа смертных случаев при воспроизведении анафилактического шока.

3. Одним из возможных патогенетических механизмов нарушения детсксикационной системы окисления в печени, лёгких и повышения чувствительности организма животных к действию лекарственных средств является изменение уровня гистамина в органах при сенсибилизации организма и АШ.

Ап£обауия_£аботы. Основные положения и материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях ДНИЛ ТашГосШ (1988,1989,1990,1991,1992), на У1 Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент, 1988), на конференции по проблемам региональной аллергологии (Тапкент,1989), на областноЯ конференции "Вторичные иммунодефицита инфекционной и неинфекционной этиологии" (Харьков, 1989), на ХУ конференции по клинической фармакологии (Волгоград, 1990), на Республиканском симпозиуме "МОС. Теоретические и прикладные аспекты" (Ташкент, 1992), на международном симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии (Алма-Ата, 1992).

С?рукт^ра_и_об^м_£иссертапии. Диссертация излажена на 114 страницах машинописи, содержит таблиц 8 и 8 рисунков и состоит из введения, обзора литературы (I глава), материала и методов исследования (П глава), экспериментальной части (Ш,1У, У, У1, Л1 главы), обсуждения результатов (УШ глава), выводов и указателя литературы, включающего 131 отечественных и 101 иностранных источников.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано б научных работ. Разработано I рационализаторское предложение № 972, от II.I0.88r.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ №териалы_и_методы_исследования

Эксперименты проведены на половозрелых морских свинках -самцах массой ЗЬ0-500г, находившихся в стандартных условиях вивария. Каждая экспериментальная группа состояла из 6-10 морских свинок, всего в эксперименте использовано 568 животных.

Животных сенсибилизировали 3-кратным через день подкожным введением 0,5 мл яичного белка в разведении 1:5 физиологическим раствором с равным объёмом вазелинового масла.

Все биохимические исследования проводили на 1-е и 21-е сутки после последнего дня введения антигена, что услозно соответствует индуктивному и продуктивному периоду сенсибилизации (Митина Т.В., 1981). Анафилактический шок (АШ) у животных воспроизводили путём введения на 21 день сенсибилизации I мл ка-тивного яичного белка внутрибршинно.

Проведено 5 серий опытов. В 1-й серии на интактных животных, а также в разные периода сенсибилизации исследовалйсь токсичность (JUJ^q) гистамина основания, во 2-й - эффективность фармакологического действия димедрола, циметидина и бензонала на развитие токсического эфф~кта гистамина основания (.ВД^) в индуктивный и продуктивный период иммуногенеза, а также на развитие АIi!. В 3-й серии изучались фармакологические эффекты: снотворное действие гексенала, анальгетическое и гипотермичес-кое действие амидопирина, воспроизведение клонико-тонических судорог при введении коразола в разные периоды формирования процесса сенсибилизации у животных. В 4-й серии изучалось влияние лекарственных средств - димедрола, циметидина и бензонала на активность монооксигеназ печени и лёгких и содержание в этих органах гистамина в разные периоды сенсибилизации животных и на воспроизведение АШ. В 5-й серии в опытах "La i/Ысй " с изолированными микросомами печени интактных животных изучалось влияние различных концентраций гистамина основания на конверсию цитохрома Р-450 в его инактивированную форму - цитохром Р-420.

Все препараты, кроме бензонала ¡j циметидина, вводили вну-трибрваинно в р-де водных растворов в дозах: гексенал - 100 мг/кг, коразол - 25мг/кг, амидопирин - 30 мг/кг, димедрол .- 5 мг/кг. Бензонал и циметидин вводили внутрижелудочно с помощью зонда с оливой: бензонал на крахмальном геле в дозе 25 мг/кг, циметидин в виде водной суспензии в дозе 2,5 мг/кг.

О действии гексенала судили по продолжительности времени - вызываемого им сна, действии коразола - по развитию у животных клонико-тонических судорог. Анальгетическую активность амидопирина оценивали по глубине и продолжительности анальгезии, определяемой механическим сдавлением задней лапки на приборе 3.3.Ха-кимова, А.С.Комарина (1981).

Микросомальную фракцию исследуемых органов получали с помощью препаративной ультерацентрифуги "1/AL-60I".

Количественный уровень цитохрома Р-450 и В^ определяли по методуТ,Omurdf Jl. ia-io (1964), активность V-деметилазы амидопирина по -Я. Bcvil с4 ai,((1981), анилингидроксилазы по А.И.Арчакову и соавт. (1973), НдЦ2Н-цитохром с-редуктазы по tf/il'Jicd 1973), Ь-А-Г - по d.i. Van^i.PJ. X:d\a (1978), Г-6-0 по л/. С. Ьпл^еЫ. (1963). Ьелок определяли по методу ¿о^м id al.(1951). Результаты экспериментов обработаны математическими методами статистики многофакторного анализа на персональной ЭВМ

типа ЕМ. PC/AT с применением критерия Стьюдента - Лидера.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ЮС ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ результатов исследования показал различную степень изменения функционального состояния системы детоксикации в печени и лёгких в зависимости от периода развития процесса сенсибилизации организма животных (табл.1). 3 индуктивный период иммуногенеза наблюдается однонаправленное снижение всех изучаемых показателей активности МОС как в печени, так и в лёгких. В продуктивный период в печени почти все показатели, кроме активности анилингидрокеилазы и (Ь-А-П), статистически значимо возрастали, а в лёгких, кроме активности/- деме^илазы амидопирина продолжали оставаться на низком уровне по сравнению с таковыми в контроле и в предыдущий срок исследования. При АШ функциональная активность МОС в печени и лёгких оказалась резко угнетенной, что возмогло, является следствием сосудистой и бронхоконстрикторной реакции с развитием в организме острой гипоксии.

Раэнонаправленность в изменении активности МОС печени в зависимости от периода развития процесса_ сенсибилизации, по данным И.Н>. Марокко и соавт. (1990), является результатом фазо-вости скорости обновления микросомального белка. Снижение суммарного содержания цитохромов и активности микросомальных ферментов в период индуктивного иммуногенеза связано с ускорением катаболизма микросомальных гемопротеидов. При этом снижение скорости обновления цитохромов, возможно, направлено на стабилизацию их содержания. Возрастание у сенсибилизированных животных в период продуктивного иммуногенеза, с 14 по 21 день, активности монооксигеназ характеризуется увеличением уровня гемопротеинов, что и проявляется в наших исследованиях повышением содержания и активности ряда гчкросомальных ферментов в печени животных. Угнетение активности монооксигеназ в лёгких независимо от периода сенсибилизации животных, возможно, связано с особенностями метаболизма в лёгочной ткани (Хыиитуев и др., 1991).

Отмечено, что в продуктивный период и в печени, и в лёгких увеличивается активность л/-деметилазы амидопирина ( I тип), тогда как активность анилингидрокеилазы С П тип) и Б-Л-П (смешанный тип) угнетается. Возможно, это указывает на различную

Активность микросамальных ферментов в органах в разные периоды сенсибилизации (М + м)

Табл. I

Сроки введения препаратов

Органы

¡Содержание цито-!НАД£Н-ци-! Анилин- !Бенэ(а)пи-1хромов нмоль/мг ' тохром ! гидрок- !ренгидрок-! белка . с-редуг- I силаза 1 силаза

I----------------1 таза | нмоль п.-! нмоль/мг

1 о /г.п I о Iнмоль/мг I аминофе-! белка/мин I I йо Iбелка/мин! нола мг I

! I ! I белка/мин!

1Амидопи- !Глюкозо-6-• рин //-до-1фосфотаза •метилаэа !мкг Р не! нмоль !орг/мг !КСОН/мг !белка/20 1 белка/мин! мин I 1

печень

Контроль

Индуктивный период

печень

легкие

печень

Продуктивный период

легкие

печень

Анафилактический шок лёгкие

1,104+ 0,803+ 100,25+ 1,280+ 2,53+ 5,89+ 71,20+

0,080 0,072* 1,19~ 0,090~ 0,19" 0,75 5,52"

0,141+ 0,029+ 51,75+ 0.П7+ 0,19+ 1,64+ ■з2,58+

0,071 о.ооГ 3,22 0,002 0,02~ о,п" 2,09~

0,740+ 0,635+ • 66,15+ 0,750+ 1,40+* 3,23+* 47,65+*

0,050 0,051" 1,08~ 0,050 0,09 1,09~ 2,41

0,130+ 0,032+ 75,11+ 0,101+ 0,22+ 4,23+* 28,36+

0,010 0,002 3,29~ 0,010 0,01 0,75" 1,82

1,870+ 0,928+ 158,45+* 0,890+* 0,97+* 9,34+* 60,13ь

0,090 0,074 1,13" 0,030 0,07~ 0,71" 7,69

0,102+* 0,018+* 37,59+* 0,080+* 0,08+* 5,81+* 19.44+5

0,005 0,001" 2,16 0,004 о,оГ 0,92 1,18

0,250+* 0,114+* 29,35+* 0,310+* 0,51+* 1,15+* 29,52+5

0,060" 0,082 2,4?" 0,020 0,05 0,99 2,77

0,040+* 0,009+* 19,35+* 0,026+* 0,06+* 0,29+* 10,53+

о,93б 0,001 1,84 0,002 0,02 0,06 0,95

я •п

л о я к а

Я •г)

я*

о о

ГС-

я

3 О

I О

в о а: к в

I

сэ

I

чувствительность изоформ цитохрома Р-450. Направленное повышение активности //-деметилазы амидопирина в это! период, по-видимому, связано с усилением реакции У-деметилирования для поддержания в организме на высоком уровне содержания гистамина, что имеет важное значение в регуляции иммунного статуса (Кома-рин A.C. и др., 1992). Также представляло интерес изучение в сравнительном аспекте характера изменения МОС в период развития АШ при предварительном введении димедрола и циметидина, широко применяемых в клинике аллергозов, и бензонала - мощного селективного индуктора лекарственного метаболизма - (Надхимутдинов К.Н. и др. 1992).

Результаты исследования показали, чт^ введение димедрола и циметидина в период индуктивного иммуногенеза не изменяло общей картины угнетения функциональной активности микросомаль-ных ферментов печени и лёгких по сравнению с этими показателями в группах животных, у которых Aili воспроизводили без предварительного введения лекарственных средств (табл. 2,3,4). В то же • время в группах животных, которые получали бензонал, анафилаксия развивалась в лёгкой степени и не было ни единого случая смертельного исхода, а в печени и лёгких содержание цитохрома Р-450 оказалось выше в 5,8'и 5,5 раза, В^ - в 7,8 и 5,6 раза, активность.НАД^Н-цитохром с-редуктазы - в 4,6 и 3,6 раза, анилингидроксилазы - в 3,7 и 5,8 раза, Б-А-Г1 - в 7,3 и 3,3 раза, л/-деметилазы амидопирина - в 1,9 и 3,6 раза и Г-б-0 - в 2,0 и 2,4 раза. Введение препаратов за шесть дней до конца опыта, т.е. в период продуктивного иммуногенеза, характеризовалось различной степенью изменения активности монооксигеназ в печени и лёгких в зависимости от их фармакологических сзоЯстэ. Так, при введении димедрола в этот период наблюдался высокий уровень метаболической активности (кроме Г-б-i) всех изучаемых ыикросомальных ферментов печени и : "гких. В то же время действие циметидина проявилось в поддержании на высоком уровне лишь активности//-деметилазы амидопирина печени: а остальные показатели были близки к значениям, которые отмечались при АШ без введения препаратов. Особенность фармакологического действия бензонала в этот период исследования заключалась в том, что активность всех микросомальных ферментов печени и лёгких угнеталась ещё в большей степени, чем это наблвдалось при АШ в группах животных с "чистой" сенсибилизацией. Так, содержание

Табл. 2

Влияние димедрола на активность мик^осомальных ферментов при анафилактическом шоке ( М + м)

! I

Сроки !

введения! Органы ! препарата! !

1 Содержание цито-!хром нмоль/мг 1 белка

»

} Р-450 I %

I

!НАДФН-ци- I Анилин- 1Бенз(а)пи-

I тохром ! гидрок- !ренгидрок-

1 с-редук- ! силаза ! силаза

'! таза . I нмоль п- ! нмоль/мг

нмоль/мг 1 ашнофе- !белка/мин белка/мин! ИХ«}

!Амидопи- !Глюкозо-6 !рин л/-де-!-фосфота-¡метилаза !за мкг Р ! нмоль ' еорг/мг ! НСОН/мг ! белка/20

} белка/мин {

Ранее

Позднее

печень

легкие

печень

легкие

0,340+* 0,205+**

0,020" 0,030 .

0,049+* 0,011+*

0,003" 0,002"

0,510+** 0,420+**

0,19С~ 0,050~

0,071+ 0,016+**

0,015~ 0,00б"

30,57+* 2,16

17,49+* 1,51"

41,16+** 2,75

27,18+** 3,45~

0,200+* 0,030

0,050+** 0,003

0,620+** 0,150

0,040+** 0,005

0,390+* 0,050

0,070+* 0,003"

0,600+* 0,070

0,090+** 0,002

2,71+* 0,09~

0,45+** О, Об"

3,25+** 0,82~

0,83+** 0,08"

25,14+* 1,15"

9,19+0,78*

23,19+ 2,01

11,18+ 1,15

0

1

Примечание: к Рс 0,05 по отношению к контролю

хк Р<0,05 по отношению к анафилактическому шоку (см.табл. I)

Табл. 3

Влияние циметидина на активность мйкросомальных ферментов при анафилактическом шоке (М + м)

^ I Содержание цито- I НДДм!Н-цито-! Анилин- !Бенз(а)пи- !Амидопи- 1Глю:<озо-! ! хромов нмоль/мг I хром ! гидрок- !ренгидрокси-1рин//-де- 16-фосфо-

Сроки I Органы 1 белка !с-редктаза 1 силаза !лаза 1метилаза !таза мкг

введения ! !-------------------!нмоль/мг ! нмоль п.-! нмоль/мг 1нмоль !Р неорг/мг

! ! ! ! белка/мин I аминофз- ! белка/мин !НС0Н/мг ! белка/20

! I Р-450 ! Вь I I нола/мг ! I белка/мин I мин

I ! ! ! ' ! белка/мин! ! I

печень °>3I0±X 0,152+* 27,15+* • . 0,300+* 0,420+* 2,44+** 24,75+*

0,050 0,060 2,13 0,050 0,030 0,69~ 1,68" ,

63 лёгкие 0,039+* 0,010+* 22,19+* 0,031+* 0,060+* 0,31+* 8,95+* £

0,001 0,002 1,25 0,001 0,006 0,05~ 0,бГ ,

печень °.280i* 0,168+** 33,36+* 0,440+* 0,590+* 3,15+* 22,11+*

Позднее 0,030 °'030 2,65~ ' °'020 0,020 °»S0 1,17

лёгкие 0,027°.оп±* 20,23+* 0,025+* 0,048+ 0,20+** 8,22+*

0,025 0,202 2,II" 0,002 0,003 0,03~ 0,49~

Примечание: к Р<0,05 по отношении к контролю

кк Р<0,05 по отношению к анафилактическому шоку (см.табл. I)

Табл. 4

Влияние бензонала на активность микросомальных ферментов при анафилактическом шоке (М + м)

Сроки введения препарата

IСодержание цито-!хромов нмоль/мг I белка !--------Г

{ Р-450 {

I !

Органы {-—2§3!<а----------

%

!НАДФН-ци- ! Анилин

! тохром I !с-редук-! таза

! нмоль/мг ! .......

1 белка/мин ! нола/мг

I

!Еенз(а)пи-!Амидопи- Ц'лгокозо-б-гидрок- 1ренгидрок-!р;ш//-де- !фосфотаза . силаза ! силаза !мстилаэа !мкг Р не! нмоль п.- ! нмоль/мг !нмсль !"рг/мг аминофе- ! л д ШСЮН/мг !_. елка/20 I 0елка/мш!о'елка/мин! шн

! белка/мин I

!

Ранее

Позднее

печень 1,460+ 1,12+** 136,01+**' 1,140+* 3,710+** 2,21+* 58,35+*

• 0,085~ 0,21~ 10,25" 0,050 0,560~ о.п" 4,27

лёгкие 0,22+** 0,050+** 69,71+** 0,152+*н 0,208+* 1,05+* 25,17+*

0,05~ 0,003" 2,64_ 0,022 0,015 0,05 1,19

печень 0,020+хх 0,026+** 11,29+** 0,050+** 0,104+** 0,090+** 5,19+**

0,001 0,001 2,56 о.ооГ 0,002 0,003 0,62

лёгкие 0,0010+** 0,0010+** 3,15+** 0,0010+** 0,0020+** 0,0070+** 1,12+**

0,0002 0,0002_ 1,67 0,0001 0,0002 0,0001 0,05

го 1

примечание : х Р-^О.Об по отношению к контролю

хх Р<0.05 по отношению к анафилактическому шоку (см.табл.1)

цитохрома Р-450 оказалось сниженным в печени в 12,5, а в лёгких в 4,0 раза, % - в печени в 4,4 раза, а в лёгких не изменилось, активность НАД£Н цитохром с-редуктаза в печени снизилась в 2,6 раза, а в лёгких - в 6,1 раза, анилингидроксилазы - в 6,2 и 2,6 раза, Б-A-Ii - в 4,9 и 3,1 раза,//~деметилазы амидопирина - в 12,8 и 4,1 раза, Г-6-Ф-в 5,7 и 9,4 раза соответственно.

Различная степень и направленность изменения активности монооксигеназ в печени и лёгких при'АШ в группах животных, получавших лекарственные средства, возможно, свгзана как с особенностями фармакологического действия препаратов, так и с исходным состоянием ЮС в органах в различные периоды сенсибилизации организма. Вполне понятно, что в индуктивный период, когда МОС была угнетена, бензонал за счёт своих фармакологических свойств не только восстанавливает метаболическую активность, но и стимулирует её в печени и лёгких, что в конечном счёте способствует повышению резистентности организма к токсическому проявлению введения разрешающей дозы аллергена и полному предотвращению развития АРНТ. В этот же период исследования димедрол и цимети-дИн, которые в основном метаболизируются в печени (Бендер К.И., Луцевич А.Н.,1988)-и обладают фазностью действия на МОС, т.е. в начале проявляют ингибирующий, а затем индуцирующий эффект ( $.e.nn.c\rcL M.i. ¿i ¡А, 1986), не способствовали восстановлению нарушенной функции монооксигеназ в печени и лёгких, что практически не повлияло на изменение чувствительности сенсибилизированного организма при введении разрешающей дозы аллергена. Однако фармакологический эффект димедрола и циметидина в продуктивный период иммуногенеза, когда отмечается резкое повышение метаболической активности микросомальных ферментов печени и их угнетение в лёгких, проявился существенным повышением активности МОС как печени, так и лёгких, что в наших исследованиях явилось одной из причин снижения числа смертных случаев у животных при развитии у них АШ до 77,3% и 17,5% соответственно.

В то же время стимулирующее действие бензонала на систему МОС печени и лёгких в продуктивный период сенсибилизации при значительно повышенной её функциональной активности привело, вместо ожидаемого аддитивного эффекта на ЫОС печени и лёгких в условиях развития АШ к её угнетению, что в наших исследованиях характеризовалось 100$ гибелью квотных. Одна из возможных причин такого явления - срыв компенсаторных и адаптационных

механизмов за счёт чрезмерного усиления функционально метаболической активности МОС печени и увеличения содержания в ней и лёгких токсических продуктов обмена в результате усиления выработки при взаимодействии аллергизированной ткани с антигеном, продуктов летального синтеза, в частности свободного интермеди-аторного гистамина (Комарин A.C., и др. 1992), вследствие активации процессов свободнорадикального окисления (1^тцин И.С.,Цин-каловский О.Г., 1990; Алимова А.Ф., 1991).

Увеличение, в продуктивный период иммуногенеза, уровня гистамина при анафилаксии у животных предварительно получавших бензонал, в результате стимулирования его освобождения из фракций микросом печени и лёгких активированными полиненасыщенными жирными кислотами, происходит, по-видимому, вследствие накопления в тканях продуктов ПОЛ. Считают, что триггером освобождения гистамина являются свободные радикалы, образующиеся при окислении арахидоновой и линолевой кислот (J4a<jina £. си.., 1990). По данным A.C. Комарина и соавт. (1990), в.зависимости от концентрации гистамина и периода аллергизации изменяется скорость ПОЛ в мембранах микросом. Это приводит к нарушению их фосфо-липидного матрикса, увеличению проницаемости и накоплению отрицательно действующих биологически активных веществ. С другой стороны, наблюдаемая в результате нарушения микроциркуляции в печени и лёгких при анафилактическом шоке в условиях повышенной метаболической активности их тканей, стимулированной в наших исследованиях одновременно действием бензонала и собственного метаболизма в продуктивный период иммуногенеза, острая гипоксия терминального кровообращения (Овсяников В.Г., Вашети-на С.М., 1975; Адо А.Д., 1978) ещё в большей степени повышает риск развития деструктивных процессов в тканях, вплоть до гибели организма (Меерсон £.3., 1981). Можно также предположить, что предварительное введение животным бензонала на фоне высокого содержания гистамина в органах при анафилаксии приводило к образованию его метаболитов, разрушающих цитохром Р-450 в его восстановленном состоянии. Причём этот устойчивый интермедиат -цитохром P-450-комплекс, по-видимому, играет ключевую роль в стимулировании метаболизма собственного гистамина (Комарин A.C. и др. 1992).

Поскольку гистамину отводится важное место в механизме формирования иммунного ответа, развития анафилаксии немедленного

типа, регуляции активности монооксигенаэ в печени и лёгких, и учитывая, что выделенный под влиянием аллергенов гистамин плохо управляется фармакологическими средствами антигистаминного действия ( Л п У. , 1985), нам было интересно выяснить, как будут влиять димедрол и циметидин в сравнении с бензоналом при предварительном их введении в разные периоды сенсибилизации на развитие смертельного АШ под влиянием токсической дозы (ЛД^) гистамина основания.

Результаты исследования показали, что смертность после введения гистамина основания в дозе ЛДад» вычисленной по Литчфилду и Уилконсону соответственно сроку наблюдения в индуктивный и продуктивный период иммуногенеза составила 80% от общего числа животных, взятых в опыт. После предварительного введения димедрола, циметидина и бензонала в индуктивный период иммуногенеза показатель смертности в этот срок исследования составил 60%, 70% и 50%, а в продуктивный период - 70%, 80% и 0% соответственно. При.профилактическом введении сенсибилизированным животным препаратов, но уже в продуктивный период иммуногенеза, этот показатель был равен 40% и 60% при введении димедрола и циметидина и 100% -(т.е. на 20% выше, чем у животных с "чистой" сенсибилизацией) - при введении бензонала.

Если повышение чувствительности к экзогенному гистамину у сенсибилизированных животных в разные периоды исследования можно объяснить за счёт высокого сод^ряания гистамина в органах и организме в целом и "готовности" тканей к его токсическому проявлению, то как объяснить различную реакцию сенсибилизированного организма на экзогенный гистамин при предварительном введении в разные периоды иммуногенеза изучаемых лекарственных средств? Возможно, что положительный фармакологический эффект после предварительного введения препаратов антигистаминного действия на смертность животных при введении токсической дозы ДЦд4 гистамина основания в индуктивный и продуктивный период иммуногенеза связан, с одной стороны, с блокированием Н^- и Нечувствительных к гистамину рецепторов; с другой - защищённостью и модификацией цитохрома Р-450 от токсического действия гиста мина. Как известно, димедрол и циметидин обладают конкурентными с гистамином свойствами за точки связывания с активным центром цитохрома Р-450 (Карабанович А.К.и др.1990; 1986). Отсутствие ожидаемого эффекта (снижение числа случаев смертнос-

ти животных) в продуктивный период сенсибилизации, когда димедрол и циметидин предварительно вводили в индуктивный период иммуногенеза, возможно, связано с особенностями фармакометаболи-эирулдей функции органов в разные периоды сенсибилизации, фактором времени последействия, фармакокинетическиыи параметрами препаратов, элиминацией и их выделением, а также недостаточным влиянием этих препаратов на биотрансформацию как гистамина, так и других токсических продуктов обмена, участвующих в формировании иммунного ответа.

Протективный эффект бензонала после его предварительного введения в индуктивный период иммуногенеза в опытах, в которых отмечается 50$-е и 10055-е снижение числа смертных случаев от введения дозы гистамина ЛД^, возможно, связан с тем, что в период формирования процесса нллергизации с угнетением активности ыикросомальных ферментов, в исследуемых органах нараста-етуровень гистамина. Бензонал стимулирует в печени и лёгких МОС, способствуя тем самым повышению реактивности организма к альтерирующему действию гистамина. Согласно концепции И.Е.Ковалёва (1981) о сопряжённости между имунной и монооксигеназной системами, снижение функциональной активности одной из них ведёт к усилению другой и наоборот. Возможно, что бензонал прерывает эту связь через гистамин, стимулируя его биотрансформацию. Это предположение вполне согласуется с данными ряда авторов (Лысенко Т.Е. и др., 1989; Каримов Х.Я. и др.,1990, Алимова А.Ф;1991), которые показали значительное снижение содержания гистамина в гомогенатах печени и лёгких и повышение фармакометаболизирутдей функции этих органов при введении бензонала в ранний срок сенсибилизации животных. В то же время, если иммунный статус организма сформировался, несмотря на то, что введение бензонала в несколько раз повысило активность МОС, оно также стимулировало, как это было показано выие, интенсивность свободнорадикального окисления, способствуя тем самым ещё большему повышению содержания гистамина у сенсибилизированных животных и их "готовности" к токсической дозе экзогенно введённого гистамина, а также, возможно, того, который в наших опытах выделился из тканей исследуемых органов при АШ.

Поскольку образовавшийся гистамин, поступающий в жидкие тканевые среды, в кровь и лимфу, по своему физиологическому и токсикологическому действию соответствует характеристикам фар-

макологического эффекта гистамина основания, введённого извне (Швец Ф.,1963), представляло интерес изучить в опытах "1п ^ло" влияние разных концентраций гистамина на различные звенья НАДОН-цитохром - Р-450 зависимой цепи. При инкубации микросом печени интактных животных с гистамином в зависимости от его концентрации происходят разнонаправленные изменения как содержания цитохрома Р-450 - терминального звена электронотранспорт-ной системы, - так и начального его участка - НАДОН-цитохром с-редуктазы. Так, в пределах близких к физиологической норме, при содержании гистамина основания в ячейке 10~%, наблюдается повышение содержания цитохрома Р-450 на 32%, а активности НАДФН-цитохром с-редуктазы - на 37%. В дальнейшем с увеличением дозы в среде инкубации до 10~'м содержание цитохрома Р-450 снижается на 25%, а его инактивированной формы - цитохрома Р-420 - возрастает на 19,1%. В этой же дозе гистамин продолжает поддерживать на высоком уровне (выше контрольного) активность НАДФН-цитох-ром с-редуктазы. Начиная с дозы изучаемого амина ЮМ в инкубационной среде, т.е. превышающей в несколько раз верхнюю границу гог?остаза, что имеет место в сенсибилизированном организме и при АШ, отмечается однонаправленное снижение содержания цитохрома Р-450 и его превращение в изоформу Р-420, а также угнетение активности НАДОН-цитохром с-редуктазы. Следовательно, можно предположить, что гистамин при сенсибилизации и АШ оказывает на МОС двоякое влияние. В дозах несколько превышающих физиологическую норлу, в период продуктивного иммуногенеза он стимулирует метаболическую активность микросомальных ферментов печени и некоторые изсформы Р-450 в лёгких. Однако, превышая в 2-3 раза предельно допустимые границы физиологической нормы, в частности при АШ, гистамин за счёт прямого действия на начальное звено - НАДЬН-цитохром с-редуктазы и терминальное звено -цитохром Р-450 ингибирует их метаболическую активность, связываясь с ними в комплекс.

Возможно, что именно введение бензонала в индуктивный период иммуногенеза стимулирует монооксигеназы в органах и усиливает метаболизм гистамина, призодя к снижению его уровня в орга-чз-ме н повышению резистентности тканей к токсическому действию аллергена, что подтверждают как наши исследования, так и работы ряда авторов (А.й.Алимова, 1991, Х.Л.Каримов, 1991).

Отмеченная стехиометрия между снижением содержания в микро-сомальной фракции печени цитохрома Р-450 с одноРременным-

повышением уровня его изоформи цитохрома Р-420 при увеличении в инкубационной среде количества гистамина основания указывает на отсутствие значительных повреждений белков структуры гемопро-теида. (ЛсУ^^нлаЯ^агпило Н., 1967,1970). Возможно, что конвер-. сия цитохрома Р-450 в Р-420 связана с функциональным изменением гидрофобного взаимодействия гема с фосфолипидами матрикса микросом. (Лгла^ и. 2а4й И., 1967;&ипг«™;гН., 1974). Последнее предположение вполне обоснованно повышением активности НАДОН-цито-хром с-редуктазы, важного фермента, чувствительного к повреждающему действию факторов окружающей среды (Владимиров Ю.В.,1987), в частности к высокому содержанию изучаемого амина. В то же время, обнаруженное в опытах "¿г\ как повышение, так и сни-

жение содержания цитохрома Р-450 и активности НАДСН-цитохром .. с-редуктазы микросом, по-видимому, обусловлено различной степенью биолоступности окисленного субстрата и его реакционной способности, что, возможно, связано с наличием в имидазольном кольце гистамина основания подвижного протона электрона, участвующего в поддержании баланса про- и антиаксидантов, выполняющих гуморальную регуляцию окислительных процессов (Коробова Л.И. и др.1983).

Таким образом, при сенсибилизации наблюдается равнонаправлен-ное изменение активности монооксигеназ в печени и лёгких, зависящее от периода развития процесса иммуногенеза в организме. Ватное значение в регуляции активности МОС принадлежит фактору изменения уровня гистамина: так, регулирующее действие бензонала в индуктивный, а димедрола и циметидина - в продуктивный период иммуногенеза на метаболическую активность МОС в изучаемых органах опосредовано изменением уровня гистамина при сенсибилизации. Проведенные исследования указывают на важную роль подбора лекарственных средств, оказывающих избирательное действие на МОС с учётом её активности в зависимости от пегчода сенсибилизации организма, для повышения эффективности лечения больных с аллергозами.

ВЫВОДЫ

I.Сенсибилизация организма оказывает разнонаправленное действие ' на активность МОС печени и лёгких:

- в печени наблюдается фазное изменение активности монооксигеназ

- угнетение в индуктивный период и стимуляция в продуктивный период иммуногенеза;

- в лёгких активность МОС снижается как в индуктивный, так и в продуктивный периоды иммуногенеза.

2. В период развития А111 и при профилактическом введении

в разные периоды сенсибилизации димедрола, циметидина и бензо-нала - лекарственных средств с различными фармакологическими свойствами - наблюдается различная степень угнетения активности МОС печени и лёгких:

- предварительное введение в индуктивный период иммуногенеза димедрола и циметидина при развитии АШ не огазывало влияния на активность ЫОС печени и лёгких; в то же время существенно повышало её, но не до уровня контроля, при их введении в продуктивный период иммуногенеза;

- после предварительного введения в индуктивный период иммуногенеза бензонала при воспроизведении АШ активность МОС печени и лёгких не изменяется по сравнению с контролем; при введении бензонала в продуктивный период иммуногенеза активность МОС значительно угнетается.

3. Гистамин основания в опытах "¿.п с изолированными мик~осомами печени интактных животных вызывает дозозависи-м'ое снижение содержания СО-связанного цитохрома Р-450 и его конверсию в неактивную форму цитохром Р-420; оказывает бифазное действие на активность НДЦ£Н-цитохром с-редуктазы в зависимости от дозы: стимулирующее - в дозах 10"®, ЮМ и угнетающее - в дозах 10"2, 10~3, Ю"5М.

4. Гистамину в разные периоды сенсибилизации отводится важное патогенетическое значение в механизмах изменения функциональной активности МОС в печени и лёгких.

5. Изменение чувствительности животных к действию тест-препаратов - амидопирина, гексенала и коразола в зависимости

от периода развития процесса сенсибилизации организма, возможно связано с особенностями их метаболизма и активности МОС печени и лёгких.

6. ъензонал при его профилактическом введении в период индуктивного иммуногенеза может служить препаратом выбора для коррекции нарушенной функции МОС печени, лёгких и снижения чувствительности сенсибилизированного организма к действию лекарственных средств. В то же время при введении бензонала в продуктивный период сенсибилизации повышается токсический эффект гиста-кина и действие разрешающей дозы аллергена при анафилактическом шоке, что необходимо учитывать при фармакотерапии больных, нахо-

-годящихся в предприступном периоде аллергического состояния организма.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Действие димедрола, циметидина, бензонала на токсичность (ЛД§о) гистамина и развитие анафилактического шока у морских свинок. Тез.докл. У1 Всесоюзного съезда фармакологов.Т.,1988,с.97.

2. Влияние препаратов с различным механизмом действия на цитохром - Р-450 - зависшею монооксигеназную систему и активность гистамина в лёгких и печени при сенсибилизации и аллергической реакции немедленного типа. Материалы конференции по проблемам региональной аллергологии. Т.,1989, с.124.(в соавт.).

3. Значение функциональной взаимосвязи между иммунной и ■пнооксигеназной системами в терапии аллергических состояний. Материалы т Областной конференции: Вторичные иммунодефицита инфекционной и неинфекционной этиологии. Харьков, 1989,с.52 (в соавт.).

4. Влияние индукторов лекарственного метаболизма на развитие аллергического шока. В сб.:Актуальные вопросы клинической фармакологии, (тезисы докладов ХУ конференции по клинической фармакологии с международным участием). Волгоград, 1990, с.63. (в соавт.).

5. Взаимосвязь митохондриальных и микросомальных ферментов в метаболизме гистамина. Материалы республиканского симпозиума: Монооксигеназнаа система. Теоретические и прикладные аспекты. Т.,1992, с.103-104. (в соавт.).

6. Ноше пути фармакологической коррекции при аллергизации организма. Материалы международного симпозиума по аллергологии и клинической иммунологии. Алма-Ата, 1992, с.52-53 (в соавт.).

РЕЗЮМЕ

Денгиз чуч1$асшшнг сенсибилизация даврига караб (I-2I кун давомида) жигар ва упка монооксигенаэ систенаси активлигининг яиддий уэгариши анш^ланди. Жигар ва ^тшанинг монооксигенаэ системасининг бузилган вазифасини сенсибилизациянинг турли даврларида димедрол (5мг/кг), циметидин (2,5 мг/кг), бензонал (25 мг/кг) билан фармакологик коррекцияси, бу органлардаги монооксигенаэ. ферментларнинг активлигини хар хил Луналишларда узга-ртиради, з^амда аиафилактик шок чш£иришдаги улим холлартшнг сони ва сенсибилизациянинг хар Х!ш даврларидаги гистанининг ДДо4 доза-даги холларининг узгаришига олиб келади.

Гистамин-асоснинг НАДОН-цитохром Р-450 ijapai.i системасининг цитохром Р-450 -терминаль булгашшшг ва НАДОН-цитохром с-редуи-таза - бошланрич булшининг ми^орига ва активлигича тугридсн-турри таъсир ^илшвд, жигар ва jouta детоксипацион вазифасишшг бузилиш механизмларидан бири эканлиги ва даволся препаратлари (тест'-препаратлар) - амидопирин, гексенал ва коразолларнинг хаЯвсн организмига юборилганда организм сезувчанлигининг ошипи-га сабаб булиши ани^ланда.

Тажрибадан олинган маълумотлар, анофилактип шокнинг ривоз-лашш патогенеэида жигар ва упка монооксигенаэ системасининг аниуювчч ролини, аллергоэ касаллиги билан касалланган беморлар организмига фармакологик препаратларшшг нохуш таъсири туррисидя илмий тушунчаларш кенгаЛтнради, шунингдеп, организининг сенсибилизация жараёнининг ривожланиш даврига боглщьлид, биологик узгариш аъзолар системасига айнан таъсир цилодигол доривор поситаларни э^тиёткорлик билон ишлатиш sapyp лигини курмтпдн.

ABSTRACT

It № established in the study that the liver and lung monooxygenase system aotivity changed depending on the period (1 —£1 days) of guinea pig sensitization. Pharmaaologio oorreation of the hepatio and . pulmonary monooxygenase system funotion impaired with diphenylhydramine hydrochloride (5 mg/ kg), oimetidine (2p ng/kg) and benzonal (25 mg/kg) when administered prophylaotioally in different sensitization periods resulted in differently dircated changes in the monooxygenase en-zymatio aotivity of those organs as well as both in the number of lethal outcomes during an anaphylactic chock reproduction and jthen they were administered in various periods of hint amine base sensitization at the dose of (LDQ^).

It is established that one of possible mechanisms of disturbance of hepatio and pulmonary detozioation function, enhancement in sensitivity of animals to administration of ' suoh drug as aminopyrinn, hexenal, corasole (test-drugs) is a dirsot impact of a histamine-base on the content of cytochrome r-450, nhioh is the terminal element of NADPH-oytochroma P-450 -dependent electron transport system, and the activity of KADPH-oytoohrome P-450-reduotase being the initial link of the system.

The experimental findings obtained significantly expand the saientifio notions on a definitive role of the hepatio and pulmonary nrnooxygenase system in the pathogenesis ■ of anapliylaotio shock development, incidence of side effeots in the organism in response to the effeot of pharmacologic drugs in allergio patients and they ales indloate that the drugs producing a selective effeat on an organ biotransformation system in depend nee on the period of the body sensitization should be utilized carefully.