Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Влияние факторов персистенции золотистого стафилококка на хемотаксическую активность нейтрофилов и иммунологические показатели периферической крови у пациентов с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с S. Aureus

На правах рукописи

ГОРОДЕЧЫЫЙ Павел Петрович

ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ ПЕРСИСТЕНЦИИ ЗОЛОТИСТОГО СТАФИЛОКОККА НА ХЕМОТАКСИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ С ДИСБАКТЕРИОЗОМ КИШЕЧНИКА, АССОЦИИРОВАННЫМ С 8.АШЕШ

14 00 36 - аллергология и иммунология 03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2007

003160134

Работа выполнена в лаборатории экологической иммунологии НИИ иммунологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ" и лаборатории дисбиозов Государственного учреждения «Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук»

Научные руководители:

доктор медицинских наук,

профессор Зурочка Александр Владимирович

доктор медицинских наук Гриценко Виктор Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Сашенков Сергей Львович

доктор медицинских наук Брудастов Юрий Авенирович

Ведущая организация:

Государственное учреждение "Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук" г Пермь

Защита состоится « 07.» ноября 2007 г в_часов на заседании

диссертационного совета Д 208 117 03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ" по адресу 454092, г Челябинск, ул Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования "Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ "

Автореферат разослан « 01 » октября 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Телешева Л Ф

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Изучение микроэкологии человека относится к одному из наиболее актуальных направлений медицинской науки и практики Сегодня можно уверенно говорить, что нет ни одной функции организма, на которую прямо или косвенно не влияло бы состояние микробиоценоза человека (Бондаренко В М , Мацулевич Т В, 2007) В этой связи активно обсуждается роль нарушений микробиоценоза в патогенезе широкого круга заболеваний человека (Кулагина Е П, 1995, Бухарин О В и соавт, 2005) При этом наибольшее клиническое значение, безусловно, имеют микроэкологические нарушения кишечника (дисбакгериоз кишечника как клинико-лабо-раторный синдром), приводящие к различным негативным последствиям Многочисленные данные свидетельствуют о вовлеченности дисбиотических изменений кишечной флоры в патогенез целого ряда заболеваний, таких как синдром раздраженной кишки, ишемическая болезнь сердца, атеросклероз, ожирение, дислипопрогеидемии, онкопатология различной локализации, ан-лергопатология, поражения кожи и другие заболевания, ассоциированные с нарушением функционирования иммунной системы (Дисбиоз кишечника , 2007) Кроме того, показано, что длительное течение дисбактериоза кишечника приводит к изменениям иммунологического статуса по типу вторичного иммунодефицита, клиническим проявлением которого являются рецидивирующие и хронические воспалительные заболевания различных органов и систем, обусловленные потенциально патогенными микроорганизмами, в том числе Staphylococcus aureus (Билибин АФ и соавт, 1975, Маталыгина О А, 1986, Красноголовец В Н, 1989, Хаитов РМ, Пинегин Б В , 1999, Бондаренко В М , Мацулевич Т В , 2007)

Вместе с тем объективная оценка лабораторных показателей иммунитета у больных с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с золотистым стафилококком, затруднена, что усложняет верификацию нарушений иммунологического статуса, подбор адекватной терапии и назначение индивидуальной иммунокоррекции у таких пациентов У этих больных недостаточно полно изучена функциональная активность полиморфно-ядерных лейкоцитов (нейтрофилов), которые обеспечивают первую линию защиты от инфекции Кроме того, открытым остается вопрос о патогенетическом значении обнаруженной у бактерий, в том числе S aureus, группы свойств, отражающей их способность инактивировать отдельные эффекторы иммунитета макроорганизма, в частности лизоцим, катионные белки лейкоцитов и тромбоцитов, систему комплемента и др (Бухарин О В , Усвяцов Б Я, 1996, Бухарин О В , 1999, Бухарин О В и соавт, 2002)

Учитывая, что дисбакгериоз кишечника относится к широко распространенной патологии и служит фактором риска развития ряда инфекционно-воспалительных заболеваний (Бухарин О В и соавт, 2006, Дисбиоз кишечни-

ка , 2007), решение этих вопросов является важным как в теоретическом, так и практическом отношении

Цель исследования - оценить состояние иммунной системы и изучить влияние стафилококков с различной выраженностью факторов персис-тенции йа функциональную активность нейтрофилов и иммунологические показатели у пациентов с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с золотистым стафилококком

Задачи исследования

1 Оценить характер изменений показателей иммунной системы у пациентов с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с золотистым стафилококком

2 Определить наличие и выраженность ряда биологических, в том числе персистентных, характеристик, у копроизолятов S aureus, выделенных от пациентов с дисбактериозом кишечника

3 Изучить влияние золотистых стафилококков с разными персистент-ными свойствами на хемотаксис нейтрофилов при экспериментальной гнойной инфекции стафилококковой этиологии

4 Охарактеризовать особенности хемотаксической реакции нейтрофилов периферической крови на S aureus с различной выраженностью факторов персистенции в норме и у пациентов с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с золотистым стафилококком

5 Проанализировать характер влияния продуктов секреции золотистых стафилококков с персистентными характеристиками на продукцию ци-токинов лейкоцитами периферической крови

Научная новизна. Впервые показано, что персистирующие в кишечнике человека золотистые стафилококки характеризуются различной устойчивостью к катионным белкам лейкоцитов ("интерцид") и тромбоцитов (тром-бодефенсины) Среди копроштаммов S aureus большинство изолятов проявляет относительно высокую чувствительность к указанным катионным белкам, но часть культур обладает высокой устойчивостью и даже "суперрезистентностью" к их бактерицидному действию

Впервые установлено, что у пациентов с кишечным дисбактериозом (при вегетировании в кишечнике золотистых стафилококков с различной экспрессией факторов персистенции) наблюдаются разнонаправленные иммунопатологические процессы и выраженные изменения функциональных характеристик фагоцитов крови, которые могут способствовать персистенции потенциально патогенных микроорганизмов, в том числе S aureus При этом выявлен ряд закономерностей, характерных для больных с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с S aureus подавление экспрессии мембранных молекул CD3, CD4, CD8, CD10, CD34 и CDllb на лимфоцитах периферической крови, угнетение хемотаксическях реакций нейтрофилов, снижение их ферментативной (эстеразной) и кислородзависимой киллинговой

активности, ингибирование у мигрирующих нейтрофилов продукции молекул CD1 lb и CD13, что в совокупности свидетельствует о существенных нарушениях механизмов вовлечения лимфоцитов и нейтрофилов в процесс элиминации патологических агентов Подана заявка на патент РФ «Способ выявления нарушения функции фагоцитов при развитии рецидивирующих инфекционных процессов»

Впервые обнаружено, что в процессе формирования дисбактериоза кишечника при селекции золотистых стафилококков происходит изменение специфики взаимодействия между персистирующей флорой и иммунной системой макроорганизма Характер этого взаимодействия, с одной стороны, носит позитивно-приспособительную направленность для микроорганизмов (избегание S aureus бактерицидных и фагоцитарных систем), с другой стороны, отражает активацию компеясаторно-адптивной системы макроорганизма, нацеленную на преодоление развития хронического инфекционного процесса и мобилизацию механизмов регуляции по ТЫ-типу Об этом, в частности, свидетельствуют особенности продукции цитокинов лимфоцитами крови (угнетение продукции IL4 на фоне стимуляции продукции ILip и IFNy) под влиянием фильтратов копроштаммов S aureus, изолированных от больных с дисбактериозом кишечника

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость результатов исследования состоит в расширении знаний о характере иммунологических нарушений и особенностях функциональной активности нейтрофилов у пациентов с дисбактериозом кишечника, ассоциированным с золотистыми стафилококками, обладающими разной выраженностью персистентных свойств

Выявленное угнетение хемотаксической и ферментативной активности нейтрофилов и зафиксированные разнонаправленные изменения состояния иммунной системы при дисбактериозе кишечника в зависимости от выраженности факторов персистенции S aureus позволят разработать рациональные подходы к этиотропной и патогенетической терапии данной патологии Терапия должна быть направлена на элиминацию из кишечника стафилококков и одновременную коррекцию нарушений функции клеток, участвующих в противоинфекционной защите организма, путем восстановления хемотаксической, поглотительной и киллинговой функций фагоцитов, а также переключение иммунного ответа с Thl - на Th2-xnn реагирования (активацию В-лимфоцитов), с учетом индивидуальной активности основных про-воспалительных и противовоспалительных цитокинов Положения, выносимые на защиту

1 При дисбактериозе кишечника нарушаются механизмы вовлечения в воспалительную реакцию лимфоцитов, и формируется дисбаланс иммунной системы, о чем свидетельствует уменьшение содержания CD3+-, CD4+- и CD8+-лимфоцитов, снижение соотношения CD4/CD8 и количества CDllb-no-зитивных лимфоцитов

2 Золотистые стафилококки, персистирующие в кишечнике человека при дисбактериозе, характеризуются своеобразными биопрофилями, особенностями которых являются редкое наличие у копроштаммов S aureus антилизоцимного признака, частое присутствие у них лизоцимной и гемолитической активности и вариабельный уровень устойчивости к бактерицидному действию катионных белков лейкоцитов и тромбоцитов человека

3 Дисбактериоз кишечника, ассоциированный с персистирующими S aureus, сопровождается угнетением хемотаксических реакций нейтрофилов, нарушением ферментативных и кислородзависимых механизмов киллинга фагоцитированных микроорганизмов При этом преимущественно страдают хемотаксис и адгезия

4 Персистирующие стафилококки активируют компенсаторно-приспособительные системы макроорганизма, направленные на преодоление хронического инфекционного процесса и мобилизацию механизмов регуляции по Thl-типу, что сопровождается угнетением продукции IL4 при стимуляции продукции ILip и IFNy, что свидетельствует снижении функциональной активности ТЪ2-лимфоцитов

Внедрение результатов в практику. Результаты исследования внедрены в практику городского центра лечения дисбактериозов Клиники ЧелГ-МА, лаборатории экологической иммунологии НИИ иммунологии ЧелГМА, МСЧ ГОУ ВПО «Оренбургский государственный университет», в учебный процесс кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии ЧелГМА и ОрГМА, самостоятельного курса клинической лабораторной диагностики ЧелГМА, а также в научно-практическую работу лаборатории дисбиозов ГУ «Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН»

Апробация работы. Результаты проведенных исследований доложены и обсуждены на Всероссийском научном Форуме имени академика В И Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге Молекулярные основы имму-норегуляции, иммунодиагностики и иммунотерапии» (г Санкт-Петербург, 2005, 2006, 2007), Конференции иммунологов Урала (г Челябинск, 2003, г Оренбург, 2006), Российской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (г Оренбург, 2006) Работа поддержана грантами Правительства Челябинской области (2004,2006)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 199 с границах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, материалы и методы, 5 глав собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации и список литературы Указатель литературы включает 117 отечественных и 57 иностранных источников Иллюстрации представлены 27 таблицами и 4 фотографиями

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В процессе работы проведено исследование иммунного статуса у 51 пациента с длительной персистенцией золотистого стафилококка в кишечнике (стафилококк-ассоциированный дисбактериоз кишечника) и 59 практически здоровых людей Группа пациентов формировалась врачом- инфекционистом городского центра лечения дисбактериозов Клиники ГОУ ВПО «Чел-ГМА Росздрава» на основании бактериологического исследования испражнений (Эппхтейн-Литвак РВ , Вилыпанская Ф Л, 1969) Критерием включения являлось повторное обнаружение в течение 6-и месяцев S aureus в титре 104 и более (Коровина Н А и др , 1995) Группа практически здоровых лиц сформирована врачом-терапевтом ГКБ №2 г Челябинска после проведения углубленного профилактического осмотра, включавшего консультацию врача аллерголога-иммунолога Практически здоровые лица не болели острыми воспалительными заболеваниями в течение предшествующего месяца и не имели соматических, аллергических, аутоиммунных заболеваний и хронической инфекционно-воспалительной патологии

Кроме того, дана оценка хемотаксической активности нейтрофилов 34 мышей линии СВА в эксперименте в норме и в условии гнойной стафилококковой инфекции

Для оценки иммунологических показателей в периферической крови определяли общее количество лейкоцитов, относительное и абсолютное содержание ПМЯЛ, моноцитов и лимфоцитов Содержание различных субпопуляций лимфоцитов оценивали по методике иммунофенотипирования в модификации С В Сибиряка и др (1997) с использованием моноклональных антител серии ICO анти-СБЗ, анти-СБ4, анти-СБ8, анти-CDlO, алпги-CDllb, анти-CDI 6, анги-С020, анти-С025, affra-CD34, анти-С056, анти-СБ95, аяти-HLA-DR ("Медбиоспектр", Россия) Для изучения функциональной активности нейтрофилов человека исследовали лизосомальную активность (Фрей-длин И С , 1984), фагоцитарную функцию на модели поглощения частиц латекса (Фрейдлин И С , 1976), кислородзависимый метаболизм с помощью спонтанного и индуцированного НСТ-теста (Маянский А Н, Виксман М Е, 1979) Уровни иммуноглобулинов А, М и G в сыворотке крови определяли методом G Mancinietal (1965) в модификации А А Тихомирова (1997) Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов оценивали по методу В Г Гашковой и др (1978) Исследование уровня общей гемолитической активности комплемента (СН50) и его компонентов (CI, С2, СЗ, С4, С5) проводилось методом молекулярного титрования (Резникова Л С , 1967, Красиль-ников А П , 1984)

Показатели цитокинового статуса оценивались путем определения продукции цитокинов лейкоцитами in vitro в супернатантах цельной крови (Кетлинский С А , 1998) при спонтанной продукции, стимуляции фитогемаг-

гаютинином или липополисахаридом Escherichia coli, фильтратами суточных культур Staphylococcus aureus, а также оценивалась продукция цитоки-нов при комбинированном воздействии стандартных митогенов и фильтратов культур стафилококков, по концентрации IFNy, ILlß, ILIO, IL4 Уровень цитокинов определяли методом иммуноферментного анализа с использованием соответствующих тест-систем, произведенных ООО «Цитокин» (г Санкт-Петербург) Оценка хемотаксиса проводилась методом, предложенным R D Nelson et al (1975), основанном на оценке миграционной активности лейкоцитов под агарозным гелем в модификации ЛЯ Эберта и др (1985) Учет активности неспецифических эстераз и уровня экспрессии CD1 lb и CD 13 в зонах миграции проводилась по модифицированной нами методике Для изучения хемотаксической активности фагоцитов в эксперименте у мышей были использованы нейтрофилы перитонеального экссудата мышей

У выделенных копроизолятов S aureus определен комплекс биологических свойств (биопрофиль), для чего изучены такие вирулентные и персистент-ные характеристики, как гемолитическая активность - ГА (Справочник , 1982), лизоцимная активность — ЛА (Бухарин OB и соавт, 1985), антилизоцимная активность - АЛА (О В Бухарин и др, 1984), а также устойчивость к катион-ным белкам лейкоцитов («интерцид») и тромбоцитов (тромбодефенсины) человека (Гриценко В А, Гриценко Я В , 2005, Гриценко В А и др, 2006)

Исследования проведены в лаборатории экологической иммунологии НИИ иммунологии ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава», иммунологическом отделе Центральной научно-исследовательской лаборатории ЧелГМА, бактериологической лаборатории Клиники ЧелГМА, а также на базе лаборатории дисбиозов ИКВС УрО РАН (г Оренбург)

Полученные результаты обрабатывались на компьютере под управлением операционной системы Windows ХР с применением пакета прикладных программ "Statistica for Windows 6 0" (Боровиков В , 2003) Статистическая обработка результатов исследований проводилась стандартными методами, с определением средней арифметической вариационного ряда (М) и ошибки средней арифметической (ш) Достоверность отличия оценивалась по критериям Mann-Whitney, Wald-Wolfowitz, Wilcoxon При проведении корреляционного анализа применяли коэффициент ранговой корреляции Spearman Различия считали значимыми при р<0,05 (Гланц С , 1999, Боровиков В, 2003)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Проведение анализа иммунологических показателей 51 пациента с длительной персистенцией золотистого стафилококка в кишечнике выявило достоверное увеличение общего количества лейкоцитов крови и доли сегмен-тоядерных нейтрофилов и эозинофилов в лейкоцитарной формуле Данные лабораторные показатели свидетельствуют о наличии воспалительного процесса у этих пациентов, сопровождающегося ростом количества зрелых гра-

нулоцитов Изучение иммуноморфологии лимфоцитов периферической крови пациентов показало снижение содержания СБЗ1 -лимфоцитов при снижении экспрессии СБ4- и СБ8-молекул на лимфоцитах Снижение соотношения СБ4/СВ8 говорит о формировании дисбаланса клеток иммунной системы с истощением функциональных резервов лимфоцитов, т к наблюдается снижение экспрессии СОЮ- и С034-молекул, маркирующих незрелые клетки, и усилением готовности к Баз-зависимому апоптозу, о чем говорит повышение содержания СВ95+-яимфоцитов без усиления экспрессии СБ25 Наряду с этим отмечено снижение количества СБПЬ-позитивных лимфоцитов, что может сопровождаться нарушением процессов адгезии и процессинга антигенов

При отсутствии повышения количества иммуноглобулинов в крови наблюдается достоверное усиление продукции пяти первых компонентов системы комплемента, что можно расценивать как активацию системы комплемента по альтернативным путям Как результат этого, регистрируется усиление гемолитической активности комплемента и повышение количества циркулирующих иммунных комплексов

Отсутствие специфической реакции гуморального звена иммунитета может быть обусловлено формированием явления толерантности В-лимфо-цитов гастро-ассоциированной лимфоидной ткани к золотистому стафилококку, как элементу нормальной микрофлоры

Поскольку важнейшим звеном в элиминации патогенов являются фагоциты, целесообразным предвиделась оценка их поглотительной активности Оценка фагоцитарной реакции нейтрофильных гранулоцитов на латекс отразила угнетение этой функции у пациентов с дисбиозом, а также было отмечено снижение спонтанной и индуцированной латексом кислородзави-симой активности нейтрофилов в НСТ-тесте, снижение их лизосомальной активности, что подтверждает наличие длительно текущего воспалительного процесса Об этом же свидетельствует снижение функционального резерва нейтрофилов Все это может быть следствием угнетающего действия эндо- и экзотоксинов бактерий на данные функции фагоцитов

Выявленные изменения иммунологических показателей пациентов, привели к необходимости оценки персистентных характеристик золотистых стафилококков, выделяемых из кишечника

Следует отметить, что наиболее часто, в 77% случаев, золотистый стафилококк высевался в умеренно-повышенных титрах - 104-105 КОЕ/г, что может косвенно свидетельствовать о сохранности некоторых механизмов регуляции численности микроба как со стороны макроорганизма, так и со стороны микробиоценоза Кроме этого, прослеживается четкий антагонизм со стороны кишечной палочки Особое внимание следует обратить на резкое снижение содержания элементов облигатной флоры кишечника - бифи-добактерий и лактобактерий, которые высевались только в 35-59% случаев при снижении титров их высева

Анализ активности персистентных факторов отобранных изолятов стафилококков, показал, что большинство штаммов обладает резистентностью ниже 40% к действию интерцида Подобный уровень устойчивости копрои-золятов S aureus к интерциду характерен для коагулазоотрицательных стафилококков и значительно ниже показателей устойчивости золотистых стафилококков, выделенных из гнойно-воспалительных очагов Следует отметить, что выбранные копроштаммы S aureus отличаются высокой степенью гетерогенности по анализируемому параметру Об этом, в частности, свидетельствует широкий диапазон варьирования индекса резистентности к интерциду - от 1 0,00 до 118,75%

Так, доля штаммов с устойчивостью до 20% составила 11,76%, а с устойчивостью к интерциду от 20 до 40% - 72,55% Доля высокорезистентных к интерциду стафилококков составила 15,69%, в том числе - 3,92% стафилококков, индекс устойчивости которых составил более 100%

Характеристика резистентности стафилококков к катионному белку тромбоцитов в целом подобна резистентности к интерциду При этом, количество штаммов с устойчивостью до 20% было практически таким же, как и с устойчивостью от 20 до 40% Следует обратить внимание на то, что среди выделенных изолятов не было представителей с устойчивостью более 40% Подобная устойчивость характерна для стафилококков, выделяемых при гнойно-воспалительных поражениях

Кроме этого, большинство выделенных штаммов обладало лизоцимной и гемолитической активностью и не обладало антилизоцимной активностью, что также характерно для стафилококков из гнойно-воспалительных очагов

Полученные данные о персистентных свойствах кишечных стафилококков позволяют сделать заключение, что при стафилококк-ассоциирован-ном кишечном дисбактериозе в кишечнике могут находиться различные по уровню устойчивости к катионным белкам лейкоцитов S aureus, некоторые из которых способны проявлять "супер-резистентность" к данным эффекторам иммунитета Помимо того, эти стафилококки обладают низкой способностью ингибировать катионный белок тромбоцитов, а также очень редко проявляют аитилизоцимную активность Последние обстоятельства косвенно свидетельствуют о роли кишечника как потенциального источника возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний стафилококковой этиологии

Учитывая полученные данные, было необходимо оценить характер воздействия персистирующих в кишечнике человека стафилококков на иммунную систему и, прежде всего, на нейтрофилы при гнойно-воспалительной патологии

Для этого была применена модель гнойно-воспалительного поражения на мышах Животным опытной группы формировали локальную стафилококковую инфекцию путем однократного введения S aureus «Cowan 209» в дозе 108 бактерий/мл в объеме 0,1 мл под ладонный апоневроз левой лапки

Поскольку хемотаксис на бактерии разных видов у человека был неоднократно описан, мы сочли необходимым оценить характер хемотаксичес-кой реакции нейтрофилов на стафилококки с различными персистентными характеристиками в эксперименте на животных для выявления общебиологических закономерностей влияния персистентных свойств бактерий на иммунную систему Для выделения нейтрофилов применили модель асептического перитонеального воспаления Оценку их хемотаксической активности проводили по отношению к S aureus «Cowan 209», копроштаммам стафилококков 531, 190,551 и С5а фрагменту комплемента в качестве стандартизованного индуктора хемотаксического ответа

Наши исследования показали, что при развитии локальной стафилококковой инфекции наблюдается усиление спонтанной и индуцированной стафилококками подвижности нейтрофильных гранулоцитов Подобное усиление подвижности нейтрофилов является свидетельством мобилизации их из депонированных пулов при развитии гнойной инфекции Отмечено при этом, что нейтрофилы здоровых мышей достоверно менее активно реагируют на стафилококки, выделенные от пациентов с дисбактериозом, чем на стандартный хемоаттракгант Таким образом, мы наблюдаем явление хемотаксической деактивации при ответе на штамм стафилококка, вызывающий гнойно-воспалительный процесс и неоднозначное влияние персистирующих штаммов на хемотаксис нейтрофилов А именно - они вызывают выраженное торможение хемотаксического ответа у здоровых животных, но не оказывают этого эффекта при формировании воспаления То есть стафилококки, обладающие персистентными характеристиками у здоровых животных способны угнетать хемотаксис нейтрофилов, что, вероятно, приводит к их длительной персистенции в организме, но при развитии воспаления, это угнетение становится менее выраженным, что может приводить к формированию других воспалительных очагов, инициированных персистирующими микроорганизмами

В связи с неоднозначным влиянием разных штаммов стафилококков на хемотаксическую реакцию нейтрофилов необходимо было изучить активность ферментов лизосом, ответственных за эффекторную стадию фагоцитоза Для этого мы оценили активность неспецифических эстераз нейтрофилов в зонах миграции Ввиду неоднозначности реагирования ферментных систем клеток в процессе хемотаксиса наряду с общепринятым термином «хемотаксическая активация/деактивация», который обозначает усиление/ ослабление хемотаксического ответа на определенный хемоаттрактант, мы решили ввести термин «хемотаксическая метаболическая активация/деактивация», под которым мы понимаем усиление/ослабление метаболической активности клеток в процессе хемотаксиса

Отмечено, что при формировании гнойного воспаления происходит активация неспецифических эстераз в спонтанно мигрирующих нейтрофи-

лах и нейтрофилах, миграция которых индуцирована стафилококками штаммов «Cowan 209» и 190, то есть эти штаммы вызывают хемотаксическую метаболическую активацию нейтрофилов при воспалении

Чтобы оценить связь персистентных характеристик стафилококков и хемотаксической активности нейтрофилов, необходимо было провести корреляционный анализ между этими показателями

Анализ связей между активностью фагоцитов при миграции и наличием у стафилококков лизоцимной активности выявил, что у здоровых мышей действие лизоцим-позитивных стафилококков на нейтрофилы приводит к активации хемотаксиса и угнетению ферментов лизосом, а при формировании воспаления эти ферментные системы, наоборот, активируются под влиянием штаммов стафилококков, продуцирующих лизоцим

Взаимосвязь персистентных свойств микроорганизмов и изменений хемотаксической функции нейтрофилов, выявленная в эксперименте с мышами, значительное угнетение фагоцитарной и кислород-продуцирующей активности нейтрофилов крови человека при стафилококк-ассоцииро ванном дисбактериозе кишечника, продиктовали необходимость изучения хемотаксической функции нейтрофилов крови людей на штаммы стафилококков, имеющих нерсистентяые свойства

Для характеристики влияния персистентных свойств золотистых стафилококков на нейтрофилы, был изучен хемотаксический ответ нейтрофилов 36 практически здоровых людей на стафилококки, персистировавшие в кишечнике пациентов с дисбактериозом

Исследование хемотаксического ответа нейтрофилов на персистентные стафилококки штаммов S aureus 2727 и 2767 показало, что они обладают наиболее выраженными хемоаттрактантными свойствами, превышающими силу хемотаксического ответа на «музейный» стафилококк При этом наблюдается хемотаксическая метаболическая деактивация нейтрофилов, отвечающих на штамм 2727, что проявлялось в падении активности неспецифических эстераз и индексов их активации Это согласуется с данными эксперимента, при котором было показано, что у здоровых животных штаммы стафилококков, обладающие лизоцимной активностью, угнетают ферментные системы нейтрофилов Хемотаксис на штаммы 2634 и 2807 был значительно угнетен, что также сопровождалось снижением активности эстераз в зоне движения к штамму 2634 Но при этом наблюдалось явление хемотаксической метаболической активации, что может свидетельствовать о компенсированном нарушении метаболической функции агрессивными факторами стафилококков штамма 2634

Изучение иммуноморфологии мигрирующих нейтрофилов также выявило неоднозначность реакции на разные персистентные штаммы золотистого стафилококка Так уровень экспрессии CDllb при ответе на S aureus штаммов 2634, 2767 и 2807 был значимо ниже, чем при ответе на S aureus

«Cowan 209», а при ответе на S aureus 2727 - выше Однако это не отразилось на индексе активации CD1 lb, который для всех персистентных штаммов оказался ниже, чем для S aureus «Cowan 209» Поскольку связывание этих рецепторов инициирует у нейтрофилов формирование фаголизосомы и, в конечном итоге, киллинг поглощенных частиц, можно заключить, что угнетение экспрессии CD1 lb является одним из механизмов выявленного угнетения фагоцитарной функции нейтрофилов при длительной персистенции стафилококков

Изменения уровней экспрессии CD 13 на нейтрофилах было однонаправленным — при ответе на все четыре штамма количество клеток, положительных по данному маркеру было меньше, чем при ответе на S aureus «Cowan 209», а индекс активации CD13 оказался выше Вероятно, это связано с тем, что наряду с белковыми продуктами, стафилококки продуцируют некоторые пептидные молекулы, такие как октапептид RAP, бактериальные пептидные антибиотики, деградацию которых осуществляет мембранная ами-нопептидаза N Это может быть одним из механизмов торможения фагоцитарной реакции нейтрофилов, выявленной у пациентов с дисбактериозом кишечника

Ввиду выявленных у пациентов с дисбактериозом, ассоциированным со S aureus, нарушений иммунной системы, несостоятельности поглощающей и кислородзависимой киллинговой активности нейтрофильных грану-лоцитов, а также повреждающего действия персистирующих копроизолятов на нейтрофилы практически здоровых людей, представлялось необходимым изучить хемотаксическую функцию нейтрофилов у этих пациентов

При оценке миграционной активности нейтрофилов было выявлено усиление спонтанной подвижности нейтрофилов, усиление их движения по направлению к S aureus «Cowan 209» и индуцированного им хемокинеза, что сопровождается активацией неспецифических эстераз На этом фоне отмечается формирование явления хемотаксической деактивации при ответе на С5а фрагмент комплемента и S aureus «Cowan 209», причем последний вызывает и метаболическую хемотаксическую деактивацию Полученные изменения указывают на этиологическую роль стафилококков в формировании воспалительного процесса у данной категории пациентов, в частности за счет нарушения киллинговой активности нейтрофилов

При миграции отмечается снижение экспрессии молекул CDllb и CD 13 на мембранах нейтрофилов пациентов, что свидетельствует об угнетающем воздействии продуктов жизнедеятельности стафилококка на их экспрессию

Учитывая, что аминопептидаза N (CD 13), не только разрушает различные пептидные структуры, но и является хемоаттрактантом Th-лимфоцитов, то можно предположить, что угнетение экспрессии CD13 приводит к снижению привлечения нейтрофилами в очаг воспаления Т-хелперов Повышение индекса экспрессии CD 13 на С5а фрагмент комплемента может быть обус-

ловлено попыткой нейтрофилов разрушить пептидную структуру, вызывающую блокаду аппарата распознавания хемоаттрактанта, и тем самым отменить торможение хемотаксического ответа Возможна и обратная ситуация, при которой усиление экспрессии CD13 приводит к разрушению хемоаттрактанта и торможению хемотаксиса

Характеризуя изменение индексов экспрессии CD1 lb при хемотакси-ческом ответе отмечено, что С5а фрагмент комплемента и S aureus «Cowan 209» угнетают мобилизацию этих молекул, что может быть одним из ключевых элементов патогенеза снижения кислородзависимой киллинговой активности нейтрофилов, их адгезивных свойств и способности к агрегации В этой связи следует акцентировать внимание на снижении экспрессии CD1 lb на лимфоцитах периферической крови пациентов с дисбактериозом кишечника Это свидетельствует об универсальности механизма повреждения функций клеток, опосредуемых этими молекулами, а прежде всего — адгезии и активации процессинга антигенов

Формирование столь выраженных нарушений хемотаксической функции нейтрофилов пациентов по отношению к стандартным индукторам хемотаксиса делает необходимым оценить влияние факторов персистенции штаммов золотистого стафилококка, выделенных от пациентов, на хемотаксис нейтрофилов этих пациентов

В результате было отмечено, что нейтрофилы пациентов значительно более активно движутся к аутоштаммам стафилококков, нежели к стандартным хемоатграктантам Это можно объяснить тем, что штаммы, выделенные от пациентов, обладают значительно большим набором патогенных свойств, большей активностью факторов персистенции, чем «музейный» штамм

Подобные изменения наблюдаются и при оценке активности неспецифических эстераз лизосом нейтрофилов в зонах миграции — активность и интенсивность неспецифических эстераз при ответе на персистирующие штаммы выше, чем при ответе на С5а фрагмент комплемента Однако индекс суммарного цитохимического коэффициента эстераз при ответе на аутош-таммы достоверно ниже, чем при ответе на анафилотоксин, то есть мы наблюдаем явление штаммоспецифической метаболической деактивации

Иммунофенотипирование нейтрофилов в зонах миграции выявило неоднородность изменений экспрессии CD1 lb- и CD13-молекул Так экспрессия CDllb практически не отличалась при ответе на аутоштаммы, «музейный» штамм стафилококка и анафилотоксин-С5а Необходимо также отметить, что индекс экспрессии CDllb при ответе на аутоштаммы был значимо выше, чем при ответе на С5а, и ниже, чем при ответе на S aureus «Cowan 209» Это дополнительно подтверждает то, что факторы персистенции патогенных стафилококков угнетают фагоцитарную функцию нейтрофилов и одним из механизмов этого является угнетение экспрессии рецепторного комплекса CD1 lb В то же время, определение CD13 на мембранах нейтрофилов в зонах

миграции к аутоштаммам было выше, чем при ответе на «музейный» стафилококк, и ниже, чем при ответе на С5а фрагмент комплемента (таблица 1)

Таблица 1

Хемотаксический ответ нейтрофилов пациентов с дисбактериозом на аутоштаммы стафилококков

Параметры Стат показ Хемоатгракгант

С5а-ФК S aureus «Cowan 209» Аутоштамм S aureus

п=51 n=51 п=51

Величина хемотаксиса, уел мм М±т 30,69±3,58 38,30±2,72 * 43,31±3,80 *' **

Индекс хемотаксиса, у е М±т 1,01±0,03 1,35±0,04 * 1,64±0,10 *' **

Активность эстераз, % М±т 31,23±2,74 37,59±3,39 * 38,00±3,29 *

ИАЭ, у е М±т 1,06±0,07 0,92±0,07 * 1,08±0,05 **

СЦК эстераз, % М±т 52,31 ±4,60 66,29±6,07 * 64,77±6,64 *

ИСЦК, у е М±т 1,12±0,10 0,94±0,07 * 1,06±0,05 *• **

Экспрессия СШ1Ь, % М±т 7,69±0,95 8,06±1,04 8,77±1,16 '

Индекс экспрессии СИ 11Ь, уе М±т 0,91±0,08 1,44±0,16 * 1,10±0,12 * **

Экспрессия СЕ) 13, % М±т 11,92±1,55 7,95±0,72 * 9,61±0,66 *' **

Индекс экспрессии СШЗ, уе М±т 1,82±0,30 1,09±0,07 * 1,21±0ДЗ *' **

Примечание * — достоверность отличий от С5а фрагмента комплемента по Mann-Whitney и Wald-Wolfowitz р<0,05, ** - достоверность отличий от «музейного» S aureus «Cowan 209» по Mann-Whitney и Wald-Wolfowitz p<0,05

Сопоставление динамики изменений индекса хемотаксиса и индекса CD 13 позволяет укрепить предположение о том, что усиление экспрессии аминопептидаз на мембранах нейтрофилов приводит к торможению хемотаксиса, индуцированного короткими аминокислотными последовательностями, такими как С5а Поскольку большинство факторов патогенности стафилококков представляет собой белковые субстанции, то и количество нейтрофилов, несущих CD 13-маркер, в зонах хемотаксиса незначительно

Таким образом, формирование дисбиоза кишечника, ассоциированного с S aureus, имеющим персистентные характеристики, сопровождается изменением активности клеток иммунной системы как на уровне всего организма, так и локально Стафилококки, имеющие персистентные характеристики воздействуют на фагоциты через определенный механизм с одной стороны - угнетая хемотаксические реакции нейтрофилов, а с другой - нарушая механизмы киллинга фагоцитированных микроорганизмов При этом преимущественно страдают механизмы хемотаксиса и адгезии Одновременно или вследствие этого страдают и механизмы, связанные с ферментативным киллинговым потенциалом этих клеток

Это приводит к длительному контакту иммунокомпетентных клеток с персистиругощими штаммами стафилококков

Чтобы выяснить, с каким механизмом связаны нарушения вовлечения в воспалительную реакцию лимфоцитов, мы изучили влияние фильтратов суточных культур микроорганизмов на продукцию цитокинов лейкоцитами в смешанной культуре клеток крови практически здоровых лиц Так как в организме человека микроорганизмы оказывают влияние не по отдельности каждой секретируемой молекулой, а суммарно всем своим секреторным потенциалом, было решено использовать суммарные супернатанты стафилококков Поскольку микроорганизмы воздействуют на организм в целом, для изучения состояния системы регуляции лейкоцитов и влияния на нее факторов персистенции стафилококков было проведено исследование продукции цитокинов в супернатантах цельной крови и рассчитаны коэффициенты соотношения их продукции по спонтанной и индуцированной продукции IFNy, IL4, IL 1 ß и ILIO Стимуляцию продукции интерлейкинов осуществляли стандартными митогенами (фитогемагтлютинином и липополисахари-дом Escherichia coli) и фильтратами суточных культур Staphylococcus aureus Также оценивали продукцию этих цитокинов при комбинированном воздействии стандартных митогенов и фильтратов культур стафилококков С целью оценки стафилококк-индуцированной продукции цитокинов были взяты те же штаммы S aureus, что и для изучения влияния на хемотаксис нейтрофи-лов практически здоровых людей

Исследования показали достоверное усиление продукции ILlß, ILIO и IFNy в ответ на стимуляцию фитогемагглютинином и липополисахаридом, что свидетельствует о сохранности реакции регуляторных систем на стандартные раздражители Было показано, что штамм золотистого стафилококка «Cowan 209» практически не влиял на продукцию цитокинов в культурах клеток, однако, клинические штаммы значимо усиливали продукцию ILlß, ILIO и IFNy и снижали выработку IL4 Отмечено повышение соотношения IFNyAL4 при ответе на фитогемагппотинин и копроштаммы 2634,2727 и 2767 (таблица 2)

Это изменение цитокиновой активности лейкоцитов свидетельствует о параллельной активации Thl- и ТЬ2-лимфоцитов Но при этом наблюдаем, что активация гуморально-направленных Т-хелперов происходит по пути торможения продукции IL4, что в конечном итоге приводит к преобладанию активности Thl-лимфоцитов

Копроизоляты стафилококков, выделенных от пациентов, при одновременном воздействии с фитогемагглютинином значимо снижают продукцию IL4 и IFNy, усиливая выработку IL1 ß, а штамм 2807 усиливает продукцию ILIO Соотношение IFNy/IL4 при воздействии клинических штаммов стафилококков значимо снизилось только при влиянии 5 aureus 2807 Несколько иначе стафилококки влияли на продукцию цитокинов, индуцированную липополисахаридом все штаммы, выделенные от пациентов усиливали про-

Показатели спонтанной и индуцированной продукции цитокинов (п=14)

Цитокины Индукторых Стаг показ ILIO, пг/мл IL4, пг/мл IL lß, нг/мл IFNy, пг/мл Соотношение IFNy/IL4, ye

Спонтанная продукция M±m 99,90±22,30 86,01±15,42 340,80±49,84 636,27± 179,87 12,58±2,59

ФГА M±m 422,87±33,02* 132,27±10,69 425,36±64,51* 7373,58±487,37* 65,25±9,75*

ЛПС M±m 165,28±18,67* 116,00±11,63 588,71±101,03* 1171,08±269,15* 12,26±3,24

S aureus «Cowan 209» M±m 132,77±16,61 98,42±14,05 472,61±64,73 732,59±302,20 10,98±4,05

S aureus 2634 M±m 165,32±22,19* 33,79±3,68* 869,01±114,19* 1714,75±262,73* 118,71±50,99*

S aureus 2727 M~m 175,02±30,65* 38,90±1,17* 934,40±75,90* 1352,71±253,85* 35,21±6,68*

S aureus 2767 M±m 169,59±27,18* 35,99±1,43* 965,85±97,87* 1544,99±219,71* 44,65±7,07*

S aureus 2807 M±m 166,05±12,55* 42,56±3,16* 998,24±106,13* 1264,79±319,80 32,73±9,77

Примечание * - достоверность отличий от спонтанной продукции цитокинов по критерию Wilcoxon р<0,05

Ивдукция продукции цшокинов фитогемагглютинином или липополисахаридом на фоне влияния стафилококков

(п=14)

Цитокины Индукторы4^ Стат показ ILIO, пг/мл IL4, пг/мл IL lß, пг/мл IFN-y, пг/мл Соотношение IFN-y / IL4, ye

Спонтанная продукция M±m 99,90±22,30 86,01±15,42 340,80±49,84 636,27±179,87 12,58±2,59

ФГА M±m 422,87±33,02* 132,27±10,69 425,36±64,51* 7373,58±487,37* 65,25±9,75*

ЛПС M±m 165,28±18,67* 116,00±11,63 588,71±101,03* 1171,08±269,15* 12,26±3,24

S aureus «Cowan 209» M±m 132,77±16,61 98,42±14,05 472,61±64,73 732,59±302,20 10,98±4,05

S aureus 2634 M±m 165,32±22,19* 33,79±3,6R* 869,0Ш 14,19* 1714,75±262,73* 118,71±50,99*

S aureus 2727 M±m 175,Q2±30,65* 38,90±1,17* 934,40±75,90* 1352,71±253,85* 35,21±6,68*

S aureus 2767 Mim 169,59±27,18* 35,99±1,43* 965,85±97,87* 1544,99±219,71* 44,65±7,07*

S aureus 2807 M±m 166,05±12,55* 42,56±3,16* 998,24±106,13* 1264,79±319,80 32,73±9,77

Примечание * - достоверность отличий от продукции цитокинов без влияния стафилококков по критерию Wilcox on р<0,05

дукцию ILIO, ILlß и тормозили выработку IL4, а штаммы 2634 и 2767 повышали продукцию IFNy При этом соотношение IFNy/IL4 повышалось при воздействии всех штаммов стафилококков, выделенных от больных, но для штамма 2807 это повышение было незначимо, что следует особенно отметить, принимая во внимание реакцию на совместное воздействие с фитогемаг-гаютинином (таблица 3)

Для того чтобы оценить, какие факторы персистенции имеют значимую связь с продукцией цитокинов лейкоцитами, мы провели корреляционный анализ и выявили, что наибольшее количество корреляционных связей с активностью изучаемых цитокинов формирует индекс резистентности стафилококков к катионному белку тромбоцитов

Суммируя результаты проведенного исследования, можно предположить определенный механизм формирования дисбактериоза кишечника, ассоциированного с длительной персистенцией золотистого стафилококка

Золотистые стафилококки, обладающие лизоцимной активностью, низкой и очень низкой устойчивостью к катионным белкам, при попадании в кишечник человека индуцируют активное поглощение их фагоцитами, но при этом последние недостаточно активируются для адекватного киллинга фагоцитированных микробов, ввиду угнетения экспрессии CD11Ь и эстераз-ной активности Одновременно активируются альтернативные пути комплементарного киллинга, что приводит к продукции большого количества ана-филотоксинов, привлекающих в очаг присутствия стафилококков дополнительные нейтрофилы из костномозгового и пристеночного интравазального депо На этом этапе мы наблюдаем лейкоцитоз, обусловленный нейтрофила-ми Секретируемые продукты метаболизма стафилококков, кроме этого, оказывают влияние и на специфическое звено иммунитета, что сопровождается угнетением активности ТЬ2-клеточного звена с дальнейшим формированием дисфункции B-лимфоцитов, что находит отражение в «нереагировании» иммуноглобулинового спектра, и переключением на Thl-тип иммунного реагирования, предназначенный для борьбы с внутриклеточным паразитизмом, но характеризующийся деструкцией не только пораженных клеток, но и расположенных рядом интактных

Выявленные нами изменения состояния иммунной системы и микробиоценоза ставят вопрос о необходимости разработки подходов к этиотроп-ному и патогенетически обоснованному лечению этой категории пациентов, включая сначала проведение целенаправленной коррекции микрофлоры кишечника, основной целью которой должна быть элиминация стафилококков, с последующей коррекцией нарушений функции клеток, участвующих в противоинфекционной защите организма, направленной на восстановление хемотаксической, поглотительной и киллинговой функции фагоцитов и переключение иммунного ответа на ТЬ2-тип реагирования (активацию B-лимфоцитов), с учетом активности основных провоспалительных и противовоспалительных цитокинов

Выводы

1 При дисбактериозе кишечника, ассоциированном с S aureus, формируются нарушения иммунного статуса, проявляющиеся увеличением общего количества лейкоцитов крови с увеличением доли сегментоядерных нейтрофилов и эозинофилов, снижением содержания CD3+-, CD4+-, CD8+-, С011Ь+-лимфоцитов и соотношения CD4/CD8 на фоне повышения содержания С095+-лимфоцитов, циркулирующих иммунных комплексов и активности системы комплемента, а также изменением функциональной активности нейтрофилов с угнетением их фагоцитарной реакции, снижением спонтанной и индуцированной кислородзависимой активности, лизосомальной активности и функционального резерва

2 Золотистые стафилококки, персистирующие в кишечнике человека при дисбактериозе, часто проявляют лизоцимную и гемолитическую активности (соответственно в 80,39% и 88,24%), редко обладают антилизоцимным признаком (7,8%) и гетерогенны по устойчивости к бактерицидному действию катионных белков лейкоцитов ("интерцид") и тромбоцитов (тромбоде-фенсины) человека Уровни устойчивости копроизолятов S aureus к интер-циду и тромбодефенсинам составляют 36,9±3,4% и 20,5±1,2% соответственно, причем 3,9% золотистых стафилококков характеризуются "супер -интер-цид-резистентно стью"

3 Формирование дисбактериоза кишечника, ассоциированного с 5 aureus, имеющим выраженные персистентные характеристики, сопровождается усилением спонтанной подвижности нейтрофилов, спонтанной метаболической хемотаксической активацией, снижением экспрессии молекул CD1 lb и CD13 на нейтрофилах при их миграции

4 Копроштаммы S aureus, выделенные от больных со стафилококк-ассоциированным дисбактериозом, при действии на нейтрофилы практически здоровых лиц обладают выраженными хемоаттрактантными свойствами, а также вызывают угнетение активности неспецифических эстераз, снижение индекса экспрессии CD1 lb и повышение индекса экспрессии CD 13 в мигрирующих нейтрофилах

5 Фильтраты культур копроизолятов золотистых стафилококков с пер-систентными характеристиками усиливают продукцию ILlß, ILIO и IFNy и снижают выработку IL4 в культуре клеток крови При комбинированном влиянии фитогемагтлютинина и фильтратов копроштаммов S aureus на культуру клеток крови лейкоциты усиливают выработку ILlß на фоне угнетения продукции IFNy и IL4, а при комбинированном воздействии липополисаха-рида и фильгратов культур стафилококков повышается выработка ILlß, IFNy, ILIO и снижается продукция IL4 Эти особенности продукции цитокинов отражают возможность активации компенсаторно-адаптивных систем макроорганизма, обеспечивающих преодоление формирующегося хронического инфекционного процесса и мобилизацию механизмов регуляции по Thl-типу при свижении функциональной активности Th2-лимфоцитов

Практические рекомендации

1 У пациентов со стафилококк-ассоциированным дисбактериозом кишечника необходимо определять выраженность устойчивости к ийтерци-ду и тромбодефенсинам копроштаммов S aureus и, при определении у них низких уровней устойчивости к этим веществам, осуществлять активную элиминацию из кишечника персистирующих золотистых стафилококков для предотвращения формирования иммунопатологических состояний

2 Для профилактики развития эндогенных инфекционно-воспалитель-ных заболеваний стафилококковой этиологии у больных с кишечным дисбактериозом требуется проводить иммунокоррекцию, направленную на активацию сниженной функциональной (хемотаксической, поглотительной, кил-линговой) активности нейтрофилов и восстановление регуляции лимфоци-тарного звена иммунной системы для переключения иммунного ответа на Th2-THn реагирования (активацию В-лимфоцитов)

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Зурочка, А В Взаимодействие фагоцитов с бактериями, особенности хемотаксического ответа нейтрофилов на бактериальные хемоаттрактан-ты / AB Зурочка, А В Чукичев, Ю С Студеникина, АН Скороходов, П П Городечный//Иммунология Урала -2001 -Xsl (1) -С 11

2 Зурочка, А В Особенности хемотаксического ответа моно - и поли-нуклеаров при взаимодействии клеток с бактериями / А В Зурочка, А В Чукичев, Ю С Студеникина, А Н Скороходов, П П Городечный // Мат VIII съездаВОЭМП -М,2002 -ТЗ -С 268-269

3 Зурочка, А В Изучение хемотаксической активности нейтрофилов крови больных синдромом раздраженного кишечника (СРК) / А В Зурочка, В А Гриценко, Т В Журавлева, П П Городечный, А Н Скороходов, М В Ка-шеварова // Медицинская иммунология - 2003 - Т 5, № 3-4 - С 296

4 Скороходов, А Н Оценка хемотаксической, метаболической и адгезионной активности нейтрофилов больных синдромом раздраженного кишечника /АН Скороходов, А В Зурочка, В А Гриценко, Т В Журавлева, ПП Городечный, М В Кашеварова//Иммунология Урала -2003 -№1(3) -С 60

5 Городечный, П П Влияние золотистых стафилококков, имеющих факторы персистенции, на функциональную активность нейтрофилов мышей при экспериментальной стафилококковой инфекции / П П Городечный, В А Зурочка, А В Зурочка, В А Гриценко, Д В Погодин, Е Ю Вяткин // Иммунология Урала -2005 -№1 (4) - С 126-127

6 Городечный, П П Корреляционные связи в системе антибактериальной резистентности у условно-здоровых доноров г Челябинска / П П Городечный, Е Е Дворчик, АН Скороходов, А В Зурочка, В А Гриценко, ТВ Журавлева//Медицинская иммунология -2005 -Т7, №2-3 - С 220-221

7 Городечный, П П Влияние факторов персистенции золотистого стафилококка на продукцию цитокинов лейкоцитами периферической крови практически-здоровых лиц / П П Городечный, А В Зурочка, В А Гриценко / / Иммунология Урала -2006 -№1 (5) - С 11-12

8 Городечный, П П Комплексное изучение иммунологического статуса больных дисбактериозом кишечника стафилококковой этиологии / П П Городечный, А В Зурочка, Е Е Кузьмина, Е Ю Исакова, И JI Батурина // Russian Journal of Immunology -2006 - Vol 9 Supp 3 -P 97

9 Городечный, П П Анализ влияния факторов персистенции золотистого стафилококка на продукцию цитокинов лейкоцитами периферической крови условно-здоровых лиц / П П Городечный, А В Зурочка, В А Гриценко, Е Е Кузьмина // Медицинская иммунология - 2006 - Т 8, № 2-3 - С 259260

10 Городечный, П П Особенности хемотаксического ответа нейтрофи-лов крови на аутоштаммы золотистого стафилококка при дисбакгериозе кишечника / П П Городечный, Е Е Кузьмина, В В Дукардт // Вестник РГМУ -2006 -№2(49) -С 355

11 Зурочка, А В Устойчивость к катионному белку лейкоцитов "ин-терциду" копроизолятов Staphylococcus aureus и их влияние на хемотаксис полиморфноядерных лейкоцитов у лиц со стафилококк-ассоцииро ванным дисбактериозом кишечника / А В Зурочка, П П Городечный, В А Гриценко, Я В Гриценко, В В Дукардт, ЕЕ Кузьмина//Вестник ОГУ - 2006 -№12 -С 20-22

ГОРОДЕЧНЫЙ Павел Петрович

ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ ПЕРСИСТЕНЦИИ ЗОЛОТИСТОГО СТАФИЛОКОККА НА ХЕМОТАКСИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ С ДИСБАКТЕРИОЗОМ КИШЕЧНИКА, АССОЦИИРОВАННЫМ С ^АШЕШ

14 00 36 - аллергология и иммунология 03 00 07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск -2007

Подготовлено к печати в издательстве «Челябинская государственная медицинская академия» Лицензия № 01906 Отпечатано в ООО "ИМСИ" Подписано к печати 06 09 07 г Объем 1 п л Формат 64x84 Гарнитура «Times New Roman суг» Бумага для офисной техники, 80 мг/м2 Тираж 100 экз