Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Влияние ежемесячных курсов энтеросорбции на течение и исход хронического токсического поражения печени

РГБ ОД

2 8 1ГП

ЭНСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦШСКИЙ ИНСТИТУТ

УДК 616.36-C02.2-0S5.246 2

Цыбулько Натальи Павловна

ВЛИЯНИЕ ЕЖЕМЕСЯЧНЫХ КУРСОВ ЭНТЕРОСОРБЦИИ НА ТЕЧЕНИЕ И ИСХОД ХРОНИЧЕСКОГО ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Минск - 1.999

Работа выполнена в Минском государственном медицинском институте

Научный руководитель

Научный консультант

- засл. деятель науки БССР, доктор медицинских наук, профессор Кривчкк А. А.

- засл. работник народного образования РБ,

доктор медицинских наук, профессор Леонтюк А. С.

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор Остапенко В. А.

- доктор медицинских нгук Ся1ковский В. А.

Оппонирующая организация - НИИ гематологии и переливания кропи

Защита состоится июня 1999 г. в /-5 часов на заседании совета по защите диссертаций (Д 03. 18. 03) при Минском государственном медицинском инсгитуте (220116, г. Минск, пр-г Дзержннского 83, тел. 272-55-98)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Минского медицинского института.

Автореферат разослан мая 1999 г.

Ученый секретарь-совета по защите диссертаций доктор медицинских наук, профессор

'Х/^И- "" Кравцова Г. И.

Р 1//Ъ . 5Ю.И/- ь 2/ 0

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации. Несмотря на прогресс современной гепатологии, связанный с внедрением новых методов лабораторной и инструментальной диагностики, расшифровкой этиологии и патогенеза многих форм заболеваний печени, а также уточнением конкретных механизмов изменений на клеточном и молекулярном уровнях, лечение больных с острыми и хроническими поражениями печени все еще остается крайне сложной и, в ряде случаев, далекой от удовлетворительного решения проблемой (По-дымова С. Д., 1993, Хазанов А. И., 1998). Неуклонный рост удельного веса болезней печени, в том числе острых и хронических гепатитов и гепатозов. цирроза органа, смертности от данного вида патологии, недостаточная эффективность используемых традиционных методов ее терапии диктуют необходимость поиска более оптимальных подходов к лечению болезней печени, особенно, средств их патогенетической терапии (Беляков Н. А., 1991).

Для борьбы с развивающимся при токсических поражениях печени синдромом экзогенной и эндогенной интоксикации организма в комплекс лечебных мероприятий все чаще включаются различные методы экстракорпоральной детоксикации, которые сами по себе не безразличны для организма, сопровождаются рядом побочных эффектов, требуют для своего осуществления наличия определенной аппаратуры и специально подготовленного персонала (Лопаткин Н. А., Лопухин Ю. М., 1989). В этой связи актуальным для современной гепатологии является разработка не только высокоэффективных, но и простых, доступных для большого числа больных и многократного применения методов детоксикации организма (Деденко И. К., 1996, 1997). К одному из них относится энтеросорбция (ЭС).

Несмотря на многочисленные экспериментальные и клинические исследования по изучению эффективности ЭС при различных заболеваниях ее влияние на течение и исход диффузных хронических поражений печени при многократном курсовом проведении практически не изучено.

Учитывая все вышеизложенное, теоретически важно и практически полезно было изучить влияние систематических многократных ежемесячных курсов ЭС при развитии хронического токсического поражения печени (XI1111) на выраженность эндогенной интоксикации организма, степень цитолиза в органе, структурно-функциональное его состояние.

Поскольку жизнедеятельность как здоровой, так и пораженной патологическим процессом печени во многом определяется состоянием ее субклеточных структур, изменения со стороны которых носят опережающий характер по отношению к органу и организму в целом, (Кривчик А. А., 1973, Саркисов Д. С., 1977) представлялось целесообразным изучить реакцию важнейших субклеточных структур гепатоцитов (митохондрий, лизосом, микро-сом) на систематическое курсовое введение сорбента.

Компонентом ХТПП, усугубляющим нарушение ее функционального состояния, является разрастание соединительной ткани с последующим нередким формированием цирроза органа (Логинов А. С., 1985). Цирроз печени является тяжелым исходом многих гепатопатий и обусловливает высокую смертность (Tomas А. В. R., Shaffer Е. А., 1992). Важно было выяснить, как повлияет при данной патологии проведение ежемесячных курсов гастроинте-стинальной сорбции на процесс фиброгенеза в печени.

Связь работы с крупными программами, темами. Диссертационная работа является логическим продолжением и развитием темы НИР кафедры патофизиологии МГМИ «Разработка путей коррекции патологических и компенсаторных реакций организма в ходе развития болезни на модели патологии печени, сердца, мозга, опухолевой болезни» (1992-1995 г; № государственной регистрации 19943208). Глава 5 диссертации - фрагмент темы НИР кафедры «Влияние энтеросорбции на структурно-функциональную перестройку митохондрий и лизосом гепатоцитов (количественная оценка) при хроническом токсическом поражении печени» (1996-1998 г; № государственной регистрации 1996271).

Цель и задачи исследования. Цель работы - выяснить влияние многократных ежемесячно повторяемых курсов ЭС на течение и исход ХТПП.

В соответствии с этой целью в рамках диссертационной работы были поставлены следующие задачи:

1. Изучить влияние многократных ежемесячных семидневных курсов ЭС на состояние экспериментальных животных, показатели токсемии, цитолиза в печени и функциональное состояние органа при хроническом токсическом его поражении CCL4.

2. Получить сведения о влиянии многократных курсов ЭС на состояние субклеточных структур (митохондрий, лизосом и микросом) гепатоцитов.

3. Дать сравнительную оценку влияния однократного и многократных ежемесячных курсов ЭС на изучаемые показатели при ХТПП.

4. Установить возможное влияние многократных курсов ЭС на процесс фиброгенеза в печени, характерный для хронических ее поражений.

Объект и предмет исследования. Объект исследования - печень и ее компоненты - гепатоциты, митохондрии (MX), лизосомальная (JI3) и микро-сомальная системы, соединительно-тканный матрикс. Предмет исследования - влияние энтеросорбции на вышеназванные структуры при ХТПП.

Гипотеза. Учитывая имеющиеся данные, в частности результаты исследований кафедры патофизиологии МГМИ (Гринько И. В., 1985-1995, Глинская Т. Н., 1992, Хаджуз А. Н., 1992), о положительном влиянии однократного курса ЭС, проведенного в различные стадии процесса, на проявления хронического поражения печени холестатического и токсического характера (выраженность эндотоксемии, цитолиза в органе, функциональное его состояние и состояние субклеточных структур гепатоцитов), можно было

ожидать, что многократные ежемесячно повторяемые курсы ЭС при развитии ХТПП дадут намного более ощутимые позитивные сдвиги в течении и исходе заболевания, возможно, затормозят процесс фиброгенеза в печени.

Методология и методы проведенного исследования. Моделирование ХТПП осуществляли путем подкожного интермиттирующего введения CCL4 (Логинов A.C., 1982; Гринько И.В., 1985). Хронический эксперимент со сроками наблюдения 4, 5 и 6 месяцев проведен на 312 беспородных крысах-самцах со строгим соблюдением правил проведения работ с лабораторными животными.

Сорбент ваулен вводили интрагастрально через зонд семидневными курсами в конце каждого очередного месяца.

О степени эндогенной интоксикации организма судили по содержанию в сыворотке крови средних молекул (СМ) и степени токсичности сыворотки крови (СТК), определяемой по ее влиянию на кариоциты селезенки интакт-ного животного (Радькова О. А. и соавт., 1989). Учитывали помесячную смертность крыс, выраженность цитолиза в печени по уровню в сыворотке крови аланинаминотрансферазы (АЛТ) и ее отношению к аспартатами-нотрансферазе (АЛТ/ACT), функциональное состояние печени, оцениваемое по результатам бромсульфалеиновой пробы (БСФ) и продолжительности наркотического сна (ПНС), которая в значительной степени определяется способностью микросомальной системы печени к биоконверсии ксенобиотиков.

На этапах 4- и 6-месячного ХТПП проводили морфометрическое изучение гистологических срезов печени, окрашенных по Маллори, для определения планиметрическим методом удельного объема соединительной ткани в органе и электронную микроскопию срезов печени с последующим морфо-метрическим исследованием MX и количественно-информационным анализом лизосомальной системы гепатоцитов.

Снятие крыс с опыта осуществляли по общепринятой методике путем декапитации в конце 4 (после 4 курсов ЭС), 5 (после 5 курсов ЭС) и 6 месяцев (после 6 курсов ЭС) ХТПП, на следующий день после последней процедуры ЭС в одни и те же часы.

Полученные результаты подвергались статистической обработке при помощи параметрических и непараметрических критериев.

Научная новнзна и значимость полученных результатов.

1. Впервые изучено влияние многократных ежемесячно повторяемых курсов ЭС на течение и исход хронического токсического поражения печени.

2. Дана комплексная оценка эффективности многократных ежемесячно повторяющихся курсов ЭС при данном виде патологии, включающая характеристику состояния и поведения организма, степень выраженности токсемии, цитолиза в печени, функцию органа, сдвиги со стороны внутрикле-

точных структур (MX, ЛЗ и микросом гепатоцитов). Установлено высоко положительное влияние такого метода и тактики проведения сорбционной детоксикации организма при X I I111 на все изучаемые показатели, что демонстрирует их патогенетическую направленность и значимость.

3. Проведена сравнительная оценка однократного семидневного курса ЭС, осуществляемого в конце 4 месяца ХТПП, и многократных ежемесячно повторяемых курсов ЭС с подведением итогов на том же этапе эксперимента. Доказано, что результативность второго метода по всем показателям в 1,5-5,5 раза выше однокурсовой ЭС, проведенной спустя длительный срок от начала процесса.

4. Получены убедительные доказательства существенного тормозящего влияния многократных курсов ЭС на процесс фиброгенеза в печени при ХТПП, что подтверждает ведущую роль хронической токсемии в патогенезе фиброза органа и патогенетическую обоснованность проведения систематических курсов ЭС при данной форме патологии с целью его профилактики.

Практическая значимость полученных результатов. Результаты экспериментальных исследований, свидетельствующие о положительном влиянии многократных ежемесячно повторяемых курсов ЭС на течение и исход хронического токсического поражения печени, заключающемся в выраженном уменьшении степени эндогенной интоксикации организма, значительном улучшении функционирования органа и состояния субклеточных структур гепатоцитов, резком снижении удельного объема соединительной ткани в печени, намного большая эффективность повторного курсового введения сорбента по сравнению с однократным курсом гастроинтестинальной сорбции, обосновывают правомерность и целесообразность более широкого использования ЭС, в частности ежемесячное курсовое ее проведение, в комплексе лечебных мероприятий X I1111.

Основные положения диссертации, выноснмые на защиту.

1. Многократные ежемесячно повторяемые курсы ЭС являются эффективным патогенетически обоснованным методом лечения хронического токсического поражения печени.

2. Положительное влияние многократных курсов ЭС при ХТПП проявляется заметным снижением уровня токсемии, степени цитолиза в печени, нормализующим влиянием на функцию органа, улучшением состояния субклеточных структур гепатоцитов, уменьшением выраженности фиброза печени, значительным повышением выживаемости экспериментальных животных.

3. Эффективность многократных ежемесячно повторяемых курсов ЭС, проводимых в течение 4 месяцев ХТПП, намного выше однократного цикла гастроинтестинальной сорбции, проведенной в конце 4 месяца ХТПП по всем изучаемым показателям: выраженности токсемии, степени цитолиза

в органе, функционального состояния печени и субклеточных структур гепатоцитов.

Лнчный вклад соискателя. Автор принимал непосредственное участие в выполнении работы по всем разделам диссертации, включая организацию и проведение экспериментальных, лабораторных и морфолопгческих исследований, статистическую обработку полученных данных, обобщение и анализ результатов работы. Определение уровня средних молекул и активности АЛТ, ACT в сыворотке крови, степени ее токсичности, поглотительно-экскреторной функции печени, гастродуоденальное зондирование крыс проводилось самостоятельно. Экспериментальная часть работы выполнена на базе экспериментально-биологической клиники и лаборатории физиологии и экспериментальной патологии ЦНИЛ МГМИ. Морфологический раздел работы выполнен совместно с сотрудниками кафедры патофизиологии МГМИ канд. мед. наук В. Ю. Зиновкиной и Т. Н. Глинской, асс. кафедры гистологии МГМИ И. Н. Мельниковым; постановка пробы ПНС - со старшим научным сотрудником лаборатории физиологии и экспериментальной патологии канд. биол. наук Никифоровой И. Н.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты работы доложены и обсуждены на: Республиканских научных конференциях молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной медицины» (Минск, 1997, 1998, 1999); II Белорусско-Российском симпозиуме «Биохимические механизмы эндогенной интоксикации» (Гродно, 1997); VI Международной научно-практической конференции «Экология человека в постчернобыльский период» (Минск, 1998); III Белорусской научно-практической конференции «Эфферентные и физико-химические методы терапии» (Могилев, 1998), научной сессии Минского медицинского института (1999), заседаниях кафедры патофизиологии МГМИ (1996-1999), совместном заседании кафедры патофизиологии МГМИ и городского общества патофизиологов (1999).

Опублнкованность результатов. По материалам диссертации опу бликовано 10 работ, из них 5 статей в журнале и сборниках, 4 тезисов. Одна работа депонирована в БелИСА. Общее количество страниц опубликованных материалов составляет 42 страницы.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста и состоит из: введения, общей характеристики работы, обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, списка литературы, включающего 377 источников. Работа иллюстрирована 27 рисунками, содержит 7 таблиц.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Эксперимент со сроком наблюдения 4 (1 серия), 5 (2 серия) и 6 меся-

цев (3 серия) проведен на 312 половозрелых беспородных белых крысах-самцах с исходной массой 200-250 г, содержавшихся на обычном общеви-варном пищевом рационе. X11111 вызывали интермиттирующим подкожным введением гепатотропного яда - CCL4, разведенного в соотношении 1:1 подсолнечным маслом. CCL4 вводили дважды в неделю с интервалом в 2-3 дня в 1 неделю в дозе 0,5 мл/100 г и в последующем - 0,3 мл/100 г массы тела.

Экспериментальные животные в каждой серии были разделены на 3 группы: интактные крысы (контроль); крысы, получавшие гепатотропный яд без лечения (XI1111) и на фоне ежемесячно повторяющихся семидневных курсов ЭС (ХТПП+4 ЭС; ХТПП+5 ЭС; ХТПП+6 ЭС). Крысы без лечения в это время получали интрагастрально воду. Для энтеросорбции использовали углеволокнистый сорбент ваулен («актилен I марки А») в виде 2,5% водной взвеси, которую вводили животным интрагастрально через зонд из расчета 1 мл/100 г массы в течение последней недели каждого очередного месяца.

В динамике оценивали внешний вид, общее состояние и поведение экспериментальных животных, регистрировали изменение их веса и помесячно смертность крыс.

Снятие крыс с опыта осуществляли по общепринятой методике путем декапитации в конце 4 месяца (после 4 курсов ЭС), 5 (после 5 курсов ЭС) и 6 месяцев (после 6 курсов ЭС), на следующий день после последней процедуры ЭС в одни и те же часы.

Во всех случаях проводили лапаротомию для выявления наличия или отсутствия асцита, оценки внешнего вида ЖКТ и печени, взятия ее образцов для морфологического исследования. Образцы брали из правой латеральной доли органа, фиксировали в 9% растворе формалина, растворе Карнуа и заключали в парафин. Депарафинированные срезы печени окрашивали гематоксилином, эозином, по Ван-Гизону, по Маллори. Определение удельного объема соединительной ткани в органе для суждения о степени выраженности фиброза печени производили, используя срезы, окрашенные по Маллори. Материал для электронной микроскопии фиксировали в 2,5% растворе глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере. Электроно-граммы изучали для анализа реакций митохондрий и лизосомальной системы на периодическое курсовое проведение ЭС в условиях XI1111.

Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови производили колориметрическим динитрофенилгидразиновым методом (Колб В. Г., Камышников В. С., 1982 г.); содержания веществ группы «средних молекул» сыворотки крови - методом, разработанным Николайчиком В. В. с со-авт. (1989 г.); степени токсичности сыворотки крови - способом, разработанным Радьковой О. А. и соавт. (1985 г.) и основанным на наличии в пробе не-лизированных тестовых клеток, которые предварительно инкубируют в пробирке с сывороткой крови. Изучение поглотительно-экскреторной функции печени выполняли под тиопенталовым наркозом (внутрибрюшинно в дозе 50

мг/кг), используя БСФ пробу в модификации Путятиной Т. К. с соавт. (1989 г.) для мелких лабораторных животных - крыс. Различные модификации этой функциональной пробы основаны на том, что удаление красителя БСФ из крови замедлено при болезнях печени. Детоксикационную способность печени исследовали с помощью определения ПНС, являющейся прижизненным показателем активности микросом монооксигеназой системы органа. Тиопентал натрия вводили в вену хвоста в дозе 20 мг/кг. О продолжительности тиопенталового сна судили по времени нахождения крыс в боковом положении. Статистическая обработка цифровых результатов исследования произведена с использованием критерия «t» Стьюдента и непараметрического критерия «U» - Вилкоксона-Манна-Уитни.

Материал для электронной микроскопии, взятый от трех крыс каждой изучаемой группы, фиксировали 2,5% раствором глутарового альдегида (фирма «Serva»), приготовленном на фосфатном буфере (рН=7,4), с последующей дофиксацией раствором четырехокиси осмия и заливали в эпоксидные смолы типа «ЭПОН-812». Обезвоживание препаратов осуществляли с помощью ряда спиртов возрастающей концентрации. Срезы препаратов получали на ультрамикротоме LKV-8810 и контрастировали уранилацетатом с цитратом свинца. Исследования проводили на электронном микроскопе JEM-100 при увеличении в 29000 раз с помощью тестовой системы для морфомет-рии. От каждого животного анализировали по 30 электронограмм для количественного изучения состояния митохондрий и по 25 ЭГ для количественного и информационного анализа лизосомальной системы гепатоцитов.

Количественный анализ состояния митохондрий. Определяли следующие морфометрические показатели: 1) среднее количество МХ в одной ЭГ; 2) среднюю относительную суммарную площадь МХ в ЭГ; 3) среднюю относительную площадь одной МХ; 4) отношение площади внутренней мембраны МХ к наружной, умноженное на среднее количество МХ в ЭГ (Sb/Sh х пМХ) (И. В. Гринько - рационализаторское предложение МГМИ № 1175 от 7. 08. 84 г.).

Количественный и информационный анализ изменений лизосомальной системы гепатоцитов. Определяли: общее количество лизосомальных структур, соотношение первичных и вторичных форм, среднюю площадь ли-зосом в субпопуляциях первичных и вторичных форм, логарифмы площадей первичных и вторичных лизосом, коэффициент элонгации (отношение длинной оси лизосомы к короткой).

Информационный анализ морфометрических показателей осуществляли с помощью построения гистограмм распределения лизосом по 8 классам с шагом для субпопуляции первичных форм - 0,18318, для вторичных -0,24754. На ЭВМ рассчитывали информационные показатели для каждой группы: энтропию, характеризующую степень однородности системы; относительною энтропию - показатель упорядоченности или организации систе-

мы и избыточность - показатель надежности передачи в системе регулятор-ных импульсов.

Статистическую обработку проводили с использованием критериев «Ь> Стьюдента и Фишера.

Для определения долевого вклада соединительной ткани в объем печени использовали планиметрический метод. Планиметрию производили при помощи окулярной измерительной сетки для цитогистометрических исследований (Автандилов Г. Г., 1991 г.). Сетка представлена 4 квадратами. Каждый квадрат имеет 25 точек. Объемные соотношения в ткани печени измеряли при увеличении 70х. Для этого учитывали количество точек окулярной сетки, случайно совпадающих с соединительной тканью. Адекватная характеристика всей генеральной совокупности получена с использованием случайного отбора препаратов и полей зрения. Для определения объема представительной выборки был проведен ориентировочный подсчет удельного объема соединительной ткани в печени и вычислено необходимое количество тестовых точек, обеспечивающих заданный уровень безошибочного суждения. Каждая исследуемая группа экспериментальных животных включала 5-6 крыс, число полей зрения в группах составило 134-335 (в зависимости от величины удельного объема соединительной ткани в печени). Полученные результаты обработаны с помощью альтернативной статистики (Автандилов Г. Г., 1991 г.).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Ежемесячные 7-дневные курсы ЭС в ходе развития ХТПП оказали выраженное позитивное влияние на все изучаемые показатели. Улучшались внешний вид, общее состояние и поведение подопытных крыс. Они были более опрятны, подвижны, адекватнее реагировали на внешние раздражители, чем животные с ХТПП, которым ЭС не проводилась. На разных этапах ХТПП смертность экспериментальных животных снизилась на 78-22 % (рис. !)•

Проведение многократных курсов ЭС существенно отразилось на проявлениях степени токсемии. На этапе 4-месячного ХТПП у животных, получивших к этому времени 4 курса ЭС, содержание СМ в сыворотке крови было на 22 % (Р<0,001) ниже соответствующих значений у крыс с ХТПП, не подвергавшихся систематической детоксикации. Через 6 месяцев от начала процесса эта разница между «сорбированными» (6 курсов ЭС) и «несорбиро-ванными» животными составила 27 % (Р<0,001). Показатель токсичности крови был выше у нелеченных крыс по сравнению с получавшими сорбент, соответственно на 127 % (Р<0,005) и 171 % (Р<0,005). Важно отметить, что значения СМ и СТК у леченных животных, как на этапе 4-, так и 6-месячного ХТПП, приближались к уровням контроля.

Рис. 1. Влияние ежемесячных курсов ЭС на смертность крыс в ходе развития ХТПП.

Снижение под влиянием ЭС токсемии в организме отчетливо отразилось на степени выраженности патологического процесса в печени, что проявилось значительным уменьшением цитолиза и улучшением функционального состояния органа. Активность АЛТ, возросшая у нелеченных крыс к концу 4 месяца в 2,4 (Р<0,001) раза по сравнению с контролем, у животных, получавших сорбент, лишь на 27 % (Р<0,001) превышала контрольный уровень и на 46 % (Р<0,001) была ниже значений, зарегистрированных у крыс с ХТПП без ЭС. Отношение АЛТ/АСТ, превышавшее у нелеченных животных контрольные значения первой серии эксперимента в 2,3 (Р<0,05) раза, у крыс с ХТПП+4 курса ЭС практически приближалось к значениям интактных крыс. На этапе 6-месячного ХТПП разница по данным показателям в группах «леченные - нелеченные животные» была еще чуть более значительной.

Под влиянием ежемесячных курсов ЭС существенно улучшалась поглотительно-экскреторная функция печени. Степень задержки БСФ в крови у крыс, которым на протяжении 4 месяцев регулярно проводили курсы ЭС на 10 минуте после введения препарата составила 62 % (Р<0,01) и на 15 минуте - 41 % (Р<0,01) уровня нелеченных животных. Спустя шесть месяцев разница в показателях БСФ-пробы у «сорбированных» (6 курсов ЭС) и нелеченных животных продолжала оставаться высокой - 32 % (Р<0,005) на 10 и 56 %

(Р<0,005) на 15 минутах.

Особенно выраженный положительный сдвиг отмечен со стороны микросомальной системы печени: ПНС у крыс с 5-месячным X11111, которые в течение этого срока получили 5 курсов ЭС, была в 4,4 (Р<0,005) раза меньше, чем у нелеченных животных.

Как и следовало ожидать, степень выраженности эффекта ЭС существенно возросла при систематическом повторении ее курсов в ходе развития ХТТТП по сравнению с однократным циклом ЭС на конечном этапе эксперимента (рис. 2).

Рис. 2. Величина позитивных сдвигов ряда изучаемых показателей (%) при 4-месячном XI1111 после проведении однократного и 4-кратных ежемесячных курсов ЭС.

Так, величины позитивных сдвигов со стороны показателей токсемии (СМ и СТК) составили к концу 4 месяца XI1111 после проведения ежемесячных 4 курсов ЭС соответственно 0,22 ммоль/л (Р<0,001) и 1,9 единиц (Р<0,005), превысив соответствующие позитивные сдвиги после однократного курса ЭС в конце срока наблюдения в 1,5 (Р<0,001) и 2,5 (Р<0,001) раза. Позитивные сдвиги в активности АЛТ и отношении АЛТ/АСТ после 4 курсов ЭС были выше величины положительных сдвигов, достигнутых одним курсом ЭС в 1,7 (Р<0,001) и 1,5 (Р>0,05) раза соответственно. Результаты показателей БСФ-пробы стали лучше таковых по сравниваемым режимам применения ЭС на 10 мин в 1,4 (Р>0,05 ) и на 15 мин - в 1,9 (Р>0,05) раза. Особенно значительной оказалась разница в эффективности действия 4-кратных и од-

нократного курса ЭС на состояние микросомальной системы печени (ее де-токсицирующие потенции) - 450 % (Р<0,05). Иначе, по изучаемым показателям эффективность многократных курсов ЭС при XI1111 оказалась в 1,5-5,5 раза выше однократного.

Четыре ежемесячных 7-дневных курса ЭС вызвали существенные позитивные ультраструктурные сдвиги со стороны МХ (рис. 3).

Рис. 3. Изменение (в % по отношению к уровню нелеченных животных) морфометрических показателей МХ печени крыс с 4-месячным ХТПП после проведения одно- и 4-кратных курсов ЭС (1 - среднее количество МХ в одной ЭГ; 2 - средняя суммарная площадь МХ в ЭГ; 3 - средняя площадь одной МХ; 4 - Бв/Бн х пМХ).

Среднее количество МХ в одной ЭГ составило 141 % (Р<0,05) и коэффициент Бв/Бн х пМХ - 132 % (Р<0,05) уровня интактных животных, и соответственно 119 % (Р<0,05) и 128 % (Р<0,05) уровня нелеченных крыс.

Причем, если у животных с ХТПП без лечения увеличение среднего количества МХ в одной ЭГ сопровождалось ростом суммарной площади МХ в ЭГ (134 % уровня интактных крыс; Р<0,05) и средней площади одной орга-неллы (121 % уровня контроля; Р<0,05), что свидетельствует об уменьшении числа молодых форм органелл, то при проведении 4 ежемесячных курсов ЭС средняя площадь одной МХ уменьшилась (88 % уровня контроля; Р<0,05), сочетаясь с увеличением количества МХ в одной ЭГ, т. е. отмечался рост ко-

личества молодых форм МХ. Последнее является признаком стимуляции процессов органоидной регенерации. В группе ХТПП+4ЭС увеличение среднего количества МХ в одной ЭГ и средней суммарной площади органелл сопровождалось значительным ростом коэффициента Бв/Бн х пМХ, превысившего таковой у крыс, не получавших сорбент, на 28 % (Р<0,05), отчетливо свидетельствуя об улучшении биоэнергетической способности МХ.

Значительные позитивные сдвиги после проведения 4 курсов ЭС крысам с ХТПП наблюдались в состоянии лизосомальной системы гепатоцитов. Последнее выразилось в увеличении общего количества лизосом, преимущественно за счет первичных форм органелл (рис. 4), росте среднего логарифма площади сечения первичных лизосом (за счет максимального содержания первичных лизосом 5-6 классов, наиболее активных в функциональном отношении), появлении некоторого количества «молодых» форм (1-3 классов) первичных лизосом, нормализации гистограммы распределения логарифмов вторичных форм. Все это может расцениваться как усиление компенсаторных реакций со стороны данной системы.

Рис. 4. Общее количество лизосом гепатоцитов, содержание их первичных и вторичных форм у интактных крыс, животных с 4-месячным ХТПП без лечения и после проведения одно- и 4-кратных курсов энтеросорбции.

Количественно-информационные показатели (энтропия, относительная энтропия, избыточность) субпопуляций первичных и вторичных лизосом у крыс с ХТПП не претерпевали сколько-нибудь значимых изменений после проведения как одно- так и 4-кратных курсов ЭС .

Изучение гистоструктуры печени на этапах 4- и 6-месячного ХТПП, развивающегося у крыс, не получавших сорбент и у «сорбированных» животных подтвердило правомерность сделанного нами предположения о тормозящем влиянии систематических курсов ЭС на формирование фиброза органа (рис. 5).

%

4 мес

6 мес

Рис. 5. Влияние ежемесячных курсов ЭС на удельный объем соединительной ткани в печени крыс при развитии ХТПП.

Результаты морфометрических исследований по определению удельного объема соединительной ткани в образцах печени интактных крыс и животных с 4- и 6-месячным ХТПП, развивающимся в обычных условиях эксперимента (без лечения) и на фоне проведения ежемесячных 7-дневных курсов ЭС, сводятся к следующему.

Удельный объем соединительной ткани в печени интактных крыс невелик и в среднем составляет 1,4±0,07 %. В конце 4 месяца ХТПП удельный объем соединительной ткани в печени крыс заметно увеличился, достигнув 4,5±0,11 %, что выше в 3,2 (Р<0,001) раза уровня интактных животных. На 6 месяце ХТПП изучаемый показатель был уже 12,2+0,28, то есть в 9,4 (Р<0,001) раза превышал уровень контроля.

В группах крыс, ежемесячно получавших курсы ЭС, удельный объем соединительной ткани оказался значительно меньше, чем у нелеченных животных. В конце 4 месяца изучаемый показатель у «сорбированных» крыс составил 3,2±0,10 %, лишь в 2,3 (Р<0,001) раза превысив уровень контроля и на 29 % (Р<0,001) был ниже уровня крыс с ХТПП, не получавших курсы ЭС. После 6 курсов ЭС изменения были еще более разительными. Удельный объем соединительной ткани в печени оказался в 3,8 (р<0,001) раза ниже, чем у «несорбированных» животных с 6-месячным сроком ХТПП, лишь в 2,5 (Р<0,001) раза превышая аналогичный показатель интактных крыс.

Проведенный корреляционный анализ с использованием коэффициента корреляции рангов Спирмена установил прямую достоверную высоко значимую взаимосвязь (0,943-0,886; Р<0,005-0,05) между удельным объемом соединительной ткани в печени и показателями ЭИ организма (степенью токсичности сыворотки крови и содержания в крови СМ) на этапах 4- и 6-месячного ХТПП. Последнее свидетельствует о решающей роли эндотоксе-мии в процессе фиброгенеза в печени.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе изучено влияние многократных ежемесячных курсов энтеро-сорбции вауленом на течение и исход хронического токсического поражения печени, вызываемого подкожным интермиттирующим введением гепато-тропного яда (ССЬ4) экспериментальным животным - беспородным крысам-самцам.

Поводом для проведения настоящего исследования послужили следующие факты и обстоятельства:

• неуклонный рост числа острых и хронических заболеваний печени, в том числе и токсической этиологии (поражения печени, связанные с алкоголизмом, загрязнением, в ряде случаев катастрофическим, окружающей среды продуктами промышленного и сельскохозяйственного производства, бытовой химии, радионуклидами, что для Беларуси в последние 12 лет стало особенно значимым, возрастающим и бесконтрольным применением лекарственных препаратов и др.);

• недостаточная эффективность обычно применяемых традиционных методов лечения хронических гепатитов и гепатозов;

• все более частый переход хронических гепатитов и гепатозов в цирроз печени, отсутствие эффективных мер его профилактики;

• большой объем информации, накопленной кафедрой патофизиологии МГМИ, о влиянии сорбционных методов детоксикации организма, в частности, однократных 7-, 10- и 14-дневных курсов энтеросорбции, на многие разносторонние проявления хронических диффузных поражений печени ток-

сического и холестатического характера;

• неизученность последствий регулярных ежемесячных курсов энте-росорбции при развитии хронического токсического поражения печени.

Для объективной оценки эффекта ежемесячных курсов энтеросорбции при хроническом токсическом поражении печени использованы показатели, отражающие состояние различных уровней интеграции организма:

• организменного (общее состояние и поведение экспериментальных животных, смертность крыс);

• системного (содержание средних молекул в сыворотке крови, токсичность крови);

• органного (степень цитолиза в печени, поглотительно-экскреторная функция органа);

• тканевого (удельный объем соединительно-тканного матрикса печени);

• субклеточного (способность микросом печени к биоконверсии ксенобиотика тиопентала, структурное состояние митохондрий и лизо-сом гепатоцитов).

Дана сравнительная оценка влияния ежемесячных курсов ЭС, проводимых в течение 4 месяцев развития XI1111, и однократного ее цикла, который получили экспериментальные животные в конце исследуемого срока наблюдения.

Выводы, вытекающие из анализа полученных в ходе проведения исследования результатов, сводятся к следующим основным положениям:

1. Энтеросорбция является высокоэффективным, патогенетически обоснованным методом лечения хронического токсического поражения печени, результативность которого существенно возрастает при систематическом ежемесячном курсовом ее проведении [3,7, 10].

2. Систематические ежемесячные курсы энтеросорбции при развитии хронического токсического поражения печени значительно уменьшают степень выраженности цитолиза в печени, проявления эндотоксемии, отчетливо улучшают структурно-функциональное состояние важнейших субклеточных структур гепатоцитов (митохондрий, лизосом, микросом) и органа в целом, резко сокращают смертность экспериментальных животных (крыс) на всех этапах развития процесса [ 1, 2, 5, 6, 8, 9].

3. Сравнительная оценка по всем изучаемым показателям эффективности однократного семидневного курса энтеросорбции, проведенного на заключительном этапе эксперимента (в конце четвертого месяца развития хронического токсического поражения печени) и многократных ежемесячно повторяемых курсов энтеросорбции при тех же сроках эксперимента позволяет считать правомерным и обоснованным включение в комплекс лечебных мероприятий при данной форме патологии проведение систематических повторных курсов энтеросорбции [7].

4. Характерное для хронического поражения печени гепатотропным ядом разрастание соединительной ткани в органе, завершающееся нередко формированием цирроза, значительно тормозится проведением ежемесячных систематических курсов энтеросорбции [4].

5. Высокая достоверность и значимость прямой корреляционной связи, выявленная между выраженностью токсемии и степенью фиброза в печени при хроническом ее поражении гепатотропным ядом, дают основание считать эндотоксемию ведущим звеном фиброгенеза в органе и рассматривать ежемесячные курсы энтеросорбции, существенно тормозящие этот процесс, как патогенетически обоснованный метод профилактики фиброза при избыточной токсической нагрузке на печень [4].

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Кемежук (Цыбулько) Н. П., Никифорова И. Н. Влияние повторных курсов энтеросорбции на детоксикационную функцию печени крыс при хроническом токсическом поражении органа // Экология человека в постчернобыльский период: Материалы VI Межд. науч.-практ. конф.-Минск, 1998. -С. 318-320.

2. Цыбулько Н. П., Кривчик А. А. Влияние ежемесячных курсов энтеросорбции на проявления цитолиза и печеночно-клеточной недостаточности при хроническом токсическом поражении печени // Тр. молодых ученых / Минск, гос. мед. ин-т: Сб. ст. / Под ред. С. Л. Кабака. - Минск, 1998. - С. 180-184.

3. Цыбулько Н. П., Кривчик А. А. Влияние ежемесячных курсов энтеросорбции на течение и исход хронического токсического поражения печени // Здравоохранение. - 1999. - № 3. - С. 24-25.

4. Влияние ежемесячных курсов энтеросорбции на состояние субклеточных структур гепатоцитов и выраженность фиброгенеза в печени при хроническом токсическом поражении органа / Н. П. Цыбулько, В. Ю. Зиновкина, Т. Н. Глинская, А. А. Кривчик, А. С. Леонтюк, И. А. Мельников; Минск, мед. ин-т.- Минск, 1999.- 21 с. - Деп. в БелИСА 27. 04. 99. - № Д199961 // Реф. сб. непубликуемых работ. - № 2 (13).

5. Кемежук (Цыбулько) Н. П. Влияние повторных курсов энтеросорбции на функциональное состояние печени и выживаемость крыс при хроническом токсическом поражении органа // Актуальные проблемы современной медицины: Тезисы докл. Респ. науч. конф. - Минск, 1997,- С. 33-34.

6. Кемежук (Цыбулько) Н. П., Никифорова И. Н. // Тест для оценки эффективности детоксикационной терапии у крыс // Биохимические механизмы эндогенной интоксикации: Материалы II Белорус.-Рос. симп. - Гродно,

1997.-С. 110.

7. Кривчик А. А., Цыбулько Н. П., Хаджуз А. Н. Сравнительная оценка влияния однократного и многократных курсов энтеросорбции на показатели эндотоксемии и функциональное состояние печени при ее хроническом токсическом поражении // Эфферентные и физико-химические методы терапии: Материалы III Белорус, науч.-практ. конф. - Могилев, 1998. - С. 33-35.

8. Цыбулько Н. П. Влияние ежемесячных курсов энтеросорбции на течение эндогенной интоксикации в условиях экспериментального хронического токсического поражения печени // Эфферентные и физико-химические методы терапии: Материалы III Белорус, науч.-практ. конф. - Могилев,

1998.-С. 47-49.

9. Цыбулько Н. П., Кривчик А. А. Экспериментальное обоснование преимуществ энтеросорбции перед гемосорбцией при диффузных хронических поражениях печени // Актуальные вопросы гепатологии: Материалы III Респ. симп. гепатологов, Гродно, 7-8 окт. 1998 г. - Минск, 1998. - С. 162.

Ю.Экспериментальное обоснование преимуществ энтеросорбции перед гемосорбцией при диффузных хронических поражениях печени / А. А. Кривчик, И. В. Гринько, Т. Н. Глинская, А. Н. Хаджуз, Н. П. Цыбулько // Актуальные вопросы гепатологии: Материалы III Респ. симп. гепатологов, Гродно, 7-8 окт. 1998 г. - Минск, 1998. - С. 162.

РЭЗЮМЭ Цыбулька Наталля Паулауна Уздзеянне штомесячных курсау энтэрасорбцьн на працяканне 1 зыход храшчнага такачнага пашкоджання печаш

Ключавыя словы: храшчнае такачнае пашкоджанне печаш (ХТПП), таксем1я, энтэрасорбцыя (ЭС), ваулен, .чптахондрьи (МХ), л1засомы (ЛЗ), ф1броз.

Аб'ект даследавання: печань, яе кампаненты - МХ, л1засамальная 1 м1красамальная сютэмы, злучальна-тканкавы матрыкс. Прадмет даследавання: уздзеянне ЭС на вышэйазначаныя структуры пры ХТПП. Мэта работы: высветлщь уздзеянне штомесячных курсау ЭС на працяканне 1 зыход ХТПП.

У храшчных экспериментах на пацуках з тэрмшам наз1рання 4, 5, 6 месяцау з дапамогай функцыянальных, б!ях1м1чных, марфалапчных 1 морфаметрычных метадау даследавання вызначана, што перыядычныя штомесячные курсы ЭС ва умовах ХТПП значна памяньшаюць ступень выяуленасщ цытол1за у печаш 1 эндатаксемп, паляпшаюць структурна-функцыянальны стан важнейшых субклетачных структур гепатацытау (МХ, ЛЗ, мжрасом) 1 органа у целым, рэзка скарчваюць смяротнасць эксперыментальных жывел на уах этапах развщця працеса. Параунальная ацэнка па уах вывучаных паказчыках эфектыунасщ аднаразовага сямщзеннага I мнагаразовых штомесячна паутораных курсау ЭС дазваляе Л1чыць правамерным 1 абгрунтаваным уключэнне у комплекс лячэбных мерапрыемствау пры гэтай форме паталогп правядзенне перыядычных паутаральных курсау ЭС. Характэрнае для ХТПП разрастание злучальнай тканю у органе, яков завяршаецца нярэдка фарм1раваннем цырозу, значна тармазщца правядзеннем штомесячных перыядычных курсау ЭС. Высокая верагоднасць 1 значнасць прамой карэляцыйнай су вяз! пам1ж выяуленасцю таксеми 1 ступенню ф1броза у печаш пры ХТПП, даюць падставу Л1чыць таксем1ю вядучым звяном ф1брагенеза у органе 1 разглядаць штомесячныя

. v *

курсы ЭС, як1я грунтоуна тармазяць гэты працэс, як патагенетычна абгрунтаваны метад прафшактьш ф1броза пры залшняй такс1чнай нагрузцы на печань. Вынш эксперыментальных даследаванняу абгрунтоуваюць мэтазгоднасць больш шырокага выкарыстання ЭС, у прыватнасщ, штомесячнае курсавое яе правядзенне у комплексе лячэбных мерапрыемствау ХТПП.

РЕЗЮМЕ Цыбулько Наталья Павловна Влияние ежемесячных курсов энтеросорбции на течение и исход хронического токсического поражения печени

Ключевые слова: хроническое токсическое поражение печени (ХТПП), токсемия, энтеросорбция (ЭС), ваулен, митохондрии (МХ), лизосо-мы (ЛЗ), фиброз.

Объект исследования: печень и ее компоненты - МХ, лизосомальная и микросомальная системы, соединительно-тканный матрихс. Предмет исследования: влияние ЭС на вышеназванные структуры при ХТПП. Цель работы: выяснить влияние ежемесячных курсов ЭС на течение и исход ХТПП.

В хронических экспериментах на крысах со сроками наблюдения 4, 5, 6 месяцев с применением ряда функциональных, биохимических, морфологических и морфометрических методов исследования установлено, что многократные ежемесячные курсы ЭС, проводимые в ходе развития ХТПП, значительно уменьшают степень выраженности цитолиза в печени, проявления эндотоксемии, отчетливо улучшают структурно-функциональное состояние важнейших субклеточных структур гепатоцитов (МХ, ЛЗ, микросом) и органа в целом, резко сокращают смертность экспериментальных животных на всех этапах развития процесса. Сравнительная оценка по всем изучаемым показателям эффективности однократного семидневного курса ЭС, проведенного на заключительном этапе эксперимента (в конце четвертого месяца ХТПП) и многократных ежемесячно повторяемых курсов ЭС при тех же сроках опыта позволяет считать правомерным и обоснованным включение в комплекс лечебных мероприятий при данной форме патологии проведение систематических повторных курсов ЭС. Характерное для ХТПП разрастание соединительной ткани в органе, завершающееся нередко формированием цирроза, значительно тормозится проведением ежемесячных систематических курсов ЭС. Высокая достоверность и значимость прямой корреляционной связи между выраженностью токсемии и степенью фиброза в печени при ХТПП, дают основание считать токсемию ведущим звеном фиброгенеза в органе и рассматривать ежемесячные курсы ЭС, существенно тормозящие этот процесс, как патогенетически обоснованный метод профилактики фиброза при избыточной токсической нагрузке на печень. Результаты экспериментальных исследований обосновывают целесообразность более широкого использования ЭС, в частности, ежемесячное курсовое ее проведение в комплексе лечебных мероприятий ХТПП.

ABSTRACT Tsybulko Natallia Pavlovna The influence of monthly enterosorptions on the run and outcome of the liver chronic toxic impairment

Key words: the liver chronic toxic impairment (LCTI), toxaemia, en-terosorption (ES), vaulen, mitochondria (MH), lysosoma (LS), fibrosis.

The object of the investigation: liver and its components - MH, LS and microsomal system, fibrous septa. The subject of the investigation: the influence of enterosorption on the aforesaid structures in the time of the LCTI. The aim of the investigation: to study the influence of monthly ES on the run and outcome of the LCTI.

The effect of the monthly ES in the time of the LCTI have been studied in 4-, 5-, 6-monthes of chronic experiments in white male rats. Using a functional, biochemical, morphological and morphometric methods, it has been established that monthly ES in the time of the LCTI contribute to the decreasing of the liver cytolyses degree, endotoxaemia manifestation. The monthly ES improve the structural-functional condition of the hepatocytes subcellular structures (MH, LS, microsoma) and of the organ as a whole. It reduces mortality rate of the experimental animals at all studies of this process. The comparative estimation of the monthly ES and one ES course in the 4-mounthes LCTI showed the considerable efficiency of the multiple monthly ES.

The development of liver fibrosis and cirrhosis was inhibited by multiple mounthly enterosorptions. A highly significant correlation between the extent of fibrous septa and the level of endotoxaemia confirms that latter is a leading chain in the pathogenesis of experimental fibrosis in the liver chronic toxic impairment. That is why we can consider that the mounthly enterosorptions as the pathogenic wellfounded method of prophylactic measures of liver chronic toxic fibrosis. The experimental investigation results enable to use the monthly enterosorptions in the liver chronic toxic impairment.

Подписано а печать-¿8.05.99 . Формат 60х84Л16. Объем 1 печ.л. Заказ ¿15". тираж 100. Бесплатно.

Отпечатано а МГМИ. г. Минск, ул. Ленинградская. 6.