Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Показатели функциональной активности печени под влиянием энтеросорбентов при хроническом токсическом гепатите

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НОВОСИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

на правах рукописи

БАШКИРОВА ЮЛИЯ ВАЛЕРЬЕВНА

РГБ ОД

3 1 АБГ 1993

ПОКАЗАТЕЛИ ФУНКЦИОНАЛЬНОМ АКТИВПОСТИ ПЕЧЕНИ ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭПТЕРОСОРБЕНТОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

НОВОСИБИРСК 1999

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН, Новосибирском медицинском

институте

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор А.В.Ефремов

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор М.С.Любарский

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор H.H. Маянская доктор медицинских наук, профессор В.Ю. Куликов

совета К 084.52.03. при Новосибирском медицинском институте (630091, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52, т. 22-22-86).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского медицинского института.

Ведущая организация: Институт терапии СО РАМН

Jk 1999

Защита диссертации состоится 999 г. в ___ _ов на заседай

__ -ов на заседании диссертационного

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, К 084.52.03. д.м.н., профессор

В.И. Шарапов

РШЪ.Ь/О./'/ -Ъ?0

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Частота заболеваний печени в общей структуре болезней человека и смертность от этого вида патологии неуклонно растет даже в экономически развитых странах (Комаров Ф.И., Гребенев A.JL, 1996). Вследствие усиливающегося загрязнения среды обитания человека различными техногенными отходами, стремительного распространения вирусов гепатита увеличивается число людей, страдающих хроническими заболеваниями печени токсической, токсико-аллергической, а также вирусно-токсической этиологии (Соринсон С.Н., 1998).

Ведущим синдромом при хронических диффузных заболеваниях печени является синдром эндогенной интоксикации организма (Хаджуз А.Н., 1992). Поэтому при патологии печени различного генеза все более широкое распространение получают эфферентные методы, к которым относится и энтеро-сорбция (Лопаткин H.A., Лопухин Ю.М.,1989; Беляков H.A., 1991; Бородин Ю.И. и соавт., 1995).

Лечение больных с острыми и хроническими заболеваниями печени, несмотря на прогресс современной гепатологии, связанной с внедрением новых методов лабораторной и инструментальной диагностики, расшифровкой этиологии и патогенеза многих форм заболеваний печени на клеточном и молекулярном уровне, все еще остается крайне сложной и в ряде случаев далекой от удовлетворительного решения проблемой (Аммосов А.Д., 1998; Ястребова О Н., 1998). Применение сорбционных методов в лечении заболеваний печени основано на возможности быстро и в значительных количествах удалить из организма токсические продукты эндогенной и экзогенной природы, разгрузить печеночную клетку от избытка метаболитов, создав таким образом пораженному органу временный функциональный покой, способствующий быстрой морфологической и физиологической реституции больной печени. Отмечено положительное влияние энтеросорбцни на восстановление функциональной активности печени при гепатитах различной этиологии, циррозе печени, патологии желчевыводящих путей (Возианова Ж.И.. и соавт., 1990; Мамырбаев A.M., Тахтаев Ф.Х., 1990; Кривчик A.A. и соавт., 1992, Беляков H.A., 1994; Габитов В.Х. и соавт., 1995; Скалыга И.М., Жигаренко Н.И., 1998).

В клинической практике, в том числе и в гепатологии, нашли свое место энтеросорбенты различной химической структуры - углеродные, углеродми-неральные, ионообменные, минеральные, полимерные (Рачковская Л.Н., 1996, Беляков H.A., 1997). Они значительно отличаются друг от друга по текстуре и химической природе поверхности (Беляков H.A., 1991; Картель Н.Т. 1995). Имеющиеся в литературе данные, касающиеся эффективности применения различных энтсросорбентов, отрывочны и противоречивы, носят в основном узкоклинический характер, практически отсутствуют данные о сравнительной эффективности сорбентов (Данилишин Н И., 1991; Беляков H.A., 1994, Рачковская Л.Н., 1996). В связи с этим актуальным представляется изучение реактивности организма под влиянием энтеросорбентов различной химической структуры, которые применяются для коррекции наруше-

ний, возникающих при хроническом токсическом гепатите и их сравнительная оценка в эксперименте и клинике.

Данная работа является продолжением многолетних исследований по теоретическим и прикладным проблемам энтеросорбции, проводимых в Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной лимфоло-гии СО РАМН под общим руководством академика РАМН Ю.И.Бородина. Работа выполняется в рамках темы: «Исследование механизмов адаптивных, патологических реакций при гипоксии, ишемии, формировании хронических воспалительных процессов и разработка способов и средств их коррекции», № государственной регистрации 01.95.0000566.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучить показатели функциональной активности печени при экспериментальном хроническом токсическом гепатите на фоне энтерального применения различных адсорбентов.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ ]. Исследовать биохимические показатели сыворотки крови - маркеры ци-толитического, холестатического, мезенхимально-воспалительного синдромов ■— у крыс с хроническим токсическим гепатитом при использовании энтеросорбентов СУМС-1, СУМС-1 с адсорбированным ферментом липооризином, «Энтеросгель».

2. Изучить содержание продуктов перекисного окисления липидов - малонового диальдегида и диеновых конъюгатов — в плазме крови и микросо-мальной фракции печени крыс с хроническим токсическим гепатитом на фоне энтерального применения различных энтеросорбентов.

3. Изучить содержание церулоплазмина и токоферола - основных антиокси-дантов плазмы крови и микросомальной фракции печени - на фоне течения хронического токсического гепатита у крыс с применением различных энтеросорбентов.

4. Оценить функциональное состояние печени у крыс с хроническим токсическим гепатитом на фоне энтерального применения различных энтеросорбентов по изменению скорости метаболизма ксенобиотиков (анилина, эритромицина, амидопирина).

5. Провести сравнительное изучение влияния энтеросорбентов и гепатопро-тектора сирепара на функциональную активность печени крыс в разные сроки течения хронического токсического гепатита.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Впервые дана комплексная оценка влияния энтеросорбентов с различной химической структурой на течение хронического токсического гепатита у крыс, включающая сывороточные маркеры повреждения печени, состояние системы про - и антиоксидантов, функциональное состояние печени.

Впервые изучено влияние углеродминерального сорбента СУМС-1 с адсорбированным комплексным ферментом липооризином на течение экспериментального хронического токсического гепатита.

Создана схема механизма действия сорбционного препарата СУМС-1 с липооризином, в состав которого входят ряд ферментов липолитического, гидролитического, протеолитического действия.

Впервые показано, что применение углеродминеральных энтеросорбентов и препаратов на его основе оказывает более выраженный корригирующий эффект при экспериментальном хроническом токсическом гепатите в сравнении с полиорганосилоксановым адсорбентом «Энтеросгель».

Впервые показано, что применение углеродминеральных энтеросорбентов имеет преимущество перед традиционно используемым гепатопротектором сирепаром.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Впервые в эксперименте показана оптимизация восстановительных процессов при хроническом токсическом гепатите на фоне использования энте-росорбента СУМС-1 с адсорбированным на нем липолитическим ферментом липооризином.

Разработана методика энтеросорбции с применением СУМС-1 с липооризином для коррекции синдрома эндогенной интоксикации при экспериментальном хроническом токсическом гепатите.

Fla модели хронического токсического гепатита впервые проведено комплексное изучение эффективности энтеросорбентов СУМС-1, СУМС-1 с липооризином, «Энтеросгеля», что является теоретической предпосылкой для продолжения этих исследований в клинической практике

Результаты исследования расширяют и дополняют сведения о возможных механизмах действия и эффектах энтеросорбентов при хронических токсических гепатитах.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Сорбционная терапия с использованием углеродминерального адсорбента СУМС-1 оказывает позитивное влияние на функциональную активность печени крыс с хроническим токсическим гепатитом за счет уменьшения активности процессов липидной пероксидации, биохимических проявлений мезен-химально-воспалителыюго, цитолитического, холестатического синдромов, восстановления функции микросомальной системы биотрансформации ксенобиотиков.

Наиболее эффективно корректирует показатели функциональной активности печени крыс с хроническим токсическим гепатитом сорбционный препарат СУМС-1 с адсорбированным комплексным ферментом липооризином, использование которого, в отличие от других адсорбентов, приводит к полному купированию биохимических проявлений мезенхимально-воспалительного синдрома и нормализации процессов перекисного окисления лигшдов.

Применение углеродминеральных адсорбентов при экспериментальном хроническом токсическом гепатите более предпочтительно по сравнению с полиорганосилоксановыми адсорбентами.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты работы используются в лаборатории лимфотропной терапии и лимфодиагностики НИИКиЭЛ СО РАМН, клинике НИИКиЭЛ СО РАМН, на кафедре патологической физиологии Новосибирского медицинского института в лекционном курсе «Патофизиология болезней печени», на кафедре фармакологии Новосибирского медицинского института в лекционном курсе «Общая фармакология».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертации докладывались на 3-ем международном симпозиуме «Проблемы саногенного и патогенного эффекта экологического воздействия на внутреннюю среду организма», Чолпон-Ата, 1997, конференции молодых ученых, Новосибирск, 1998, международной конференции, посвященной памяти А.Д.Слонима, Магадан, 1998, международном симпозиуме «Проблемы лимфологии и эндоэкологии, Новосибирск, 1998, IV Российской гастроэнтерологической неделе, Москва, 1998.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 6 печатных работ, оформлено 1 рационализаторское предложение.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ Диссертация изложена на 126 страницах машинописного текста. Состоит из введения, 4-х глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов и выводы. Список литературы включает 152 работы отечественных и 101 работу зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 5 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Лабораторные животные.

Работа выполнена на 450 крысах-самках линии Вистар массой 150-180 г в зимне-весенний период. Крысы были получены из вивариев гг. Новосибирска и Томска. Животные содержались в условиях естественного освещения на стандартном рационе. Перед проведением экспериментов животных адаптировали к местным условиям не менее двух недель.

По методам "лечения" животные были разделены на несколько групп: контрольную группу составили животные, которым никакие методы воздействия не применялись. В опытных группах после создания модели хронического токсического гепатита использовали энтеросорбенты СУМС-1, СУМС-1

6

с адсорбированным липолитическим ферментом липооризином, Энтеросгель в течение 28 дней. Группами сравнения служили животные, которые получали гепатопротектор сирепар так же в течение 4-х недель, и животные, оставленные после окончания загранки без коррекции.

Модель хронического токсического гепатита Хронический токсический гепатит у крыс вызывали по методике, описанной Н.П.Скакуном и соавт. (1992) путем введения 25% масляного раствора четыреххлористого углерода через желудочный зонд в дозе 0.1 мл на 100 г веса животного два раза в неделю и 5% этилового спирта вместо воды ежедневно в течение четырех недель. Исследования проводили через 28 дней от начала токсического воздействия, а также 28 дней после прекращения токсического воздействия (56-е сутки от начала эксперимента соответственно). Планирование экспериментов проводилось с таким расчетом, чтобы свести до минимума влияние возрастных и сезонных изменений в организме животных на результаты исследований. Продолжительность каждой серии исследований была максимально сжата.

Приготовление сорбционного препарата СУМС-1 с адсорбированным липооризином Энтеросорбционный препарат готовили путем адсорбции на сорбенте СУМС-1 фермента липооризина, основное действие которого - липолитиче-ское (Нимаев В.В., 1995). В состав препарата также входят: липаза, глюкона-за, глюкоамилаза, нейгральная и щелочная иротеазы, пектиназа.

Оценка функциональных проб печени (данный раздел исследований выполнен на кафедре фармакологии НМИ, зав. кафедрой д.м.н., профессор О.Р.Грек).

Для оценки состояния функциональных проб печени (ФГЕП) в плазме крови определяли концентрацию общего билирубина (ОБ), конъюгированного билирубина (КБ), активность аланинаминотрансферазы (АлАТ), аспартата-минотрансферазы (АсАТ), щелочной фосфатазы (1ЦФ) с помощью диагностических наборов фирмы "Вектор-Бест", показатели тимоловой пробы (ТП) с использованием диагностических наборов ВЮ LACHEMA-тест фирмы "Lachema" (Чехия).

Изучение функциональной активности печени Функциональную активность печени оценивали по скорости метаболизма амидопирина, анилина и эритромицина в микросомальной фракции печени (данный раздел исследований выполнен на кафедре фармакологии ИМИ, зав. кафедрой д.м.н., профессор О.Р.Грек).

Выделение микросомальной фракции печени. Микросомальную фракцию печени выделяли дифференциальным центрифугированием (Tala J.R., 1969). 25% гомогенат готовили в среде, содержащей

0.154 М КС1, 5 мМ ЭДТА, 5 мМ трис-НС1-буфер (рН=7.4). Среда инкубации содержала 40 мМ трис-НС1-буфер (рН=7.4), 0.5 мМ ЭДТА и 16 мМ хлорида магния.

Определение скорости микросомального метаболизма. Скорость N-деметилирования амидопирина (AM) определялась по количеству образовавшегося формальдегида (Smucklec Е.А. et al., 1967) с помощью цветной реакции по методу T.Nash (1953). Скорость N-деметилирования эритромицина (ЭР) определяли с помощью цветной реакции с Nash-реактивом (Nash Т., 1953) по количеству образовавшегося формальдегида по методу G.Fabre et al. (1988). Скорость р-гидроксилирования анилина (АН) оценивалась по количеству образовавшегося р-аминофенола (Imai Y. et al., 1966). Активность метаболизма амидопирина, эритромицина и анилина пере-считывалась на 1 мг белка микросом за единицу времени по калибровочным кривым известных концентраций р-аминофенола и формальдегида.

Концентрацию белка микросом определяли с помощью реактива Фолина по методу O.H.Lowry et al. (1951). В качестве стандарта использовали кристаллический бычин сывороточный альбумин.

Изучение активности процессов перекисного окисления липидов в плазме крови и микросомалыюй фракции печени Для оценки активности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и состояния системы антиоксидантов в плазме крови определяли концентрацию церулоплазмина, малонового диальдегида, диеновых конъюгатов, в микросомальной фракции определяли концентрацию токоферола, малонового диальдегида, диеновых конъюгатов. Концентрацию церулоплазмина (ЦП) в плазме определяли по реакции с пара-фенилендиамином (Теп Э.В., 1981). Концентрацию токоферола (ТФ) определяли спектрофлуориметриче-ски в этанол-гексановом экстракте из микросомальной фракции печени (Teylor S.L. et al., 1976). Концентрацию малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и микросомальной фракции печени определяли по реакции с тиобарбитуровой кислотой (Каган В.Е. и соавт., 1986). Определение диеновых конъюгатов (ДК) и суммарных липидов проводили спектрофотомет-рически микрометодом, описанным Н.Г.Колосовой и соавт. (1988).

Статистическая обработка результатов. Экспериментальные данные обрабатывали статистически с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (т). Достоверность различий (Р) экспериментальных данных рассчитывали с использованием простого и парного критериев Стьюдента, непараметрического критерия Колмогорова-Смирнова. Полученные данные обрабатывались на компьютере IBM PC 486АТ с использованием пакета статистических программ Microsoft Excel, Sigmaplot. Различия считали значимыми при Р<0,05 (Г.Ф.Лакин, 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Проведенное изучение динамики функциональных проб печени у животных с хроническим токсическим гепатитом выявило, что использование сорбционных препаратов по-разному влияло на реактивность организма (Рис.1). Проявления лабораторного синдрома цитолиза нормализовались при использовании всех методов коррекции, при этом все сорбционные препараты были более эффективны, чем сирепар. Следует отметить, что активность АсА'Г в плазме при использовании «Энтеросгеля», хотя и не отличалась от показателей интактных животных, была выше, чем при использовании уг-леродминеральных сорбентов. Поскольку уровень АсАТ в плазме отражает преимущественно состояние мембран внутриклеточных органелл, в частности, митохондрий (Хазанов А.И., 1998), то не исключено, что процессы восстановления проницаемости мембран протекали более эффективно именно при использовании углеродминеральных сорбентов. Это подтверждается и динамикой активности щелочной фосфатазы. Только при применении «Энтеросгеля» и сирепара в течение 28 суток не отмечалось нормализации активности этого фермента. Концентрация общего и конъюгированного билирубина ни в одной из опытных групп не восстанавливается до параметров интактных животных. Но применение углеродминеральных сорбентов приводит к снижению ОБ и КБ по сравнению с группой животных, оставленных без лечения, в то время как при использовании ЭГ положительной динамики но этим показателям не отмечается. Примечательно, что уровень общего билирубина при использовании ЭГ оказался таким же, как на 28-е сутки эксперимента, т. е. сразу после окончания токсического воздействия, и был при этом выше в 2.1 раза, чем в группе животных без лечения. Подобная картина наблюдается и с активностью ЩФ: применение ЭГ не повлияло на активность этого фермента (она осталась такой же, как и в группе животных, оставленных без лечения). Это может свидетельствовать о сохранении синдрома холестаза на фоне применения ЭГ. Нужно сказать, что сирепар, хотя и не нормализовал активность ЩФ, ОБ и КБ, но был намного эффективнее, чем все сорбционные препараты для уменьшения гипербилирубинемии. Проявления мезенхимально-воспалптельного синдрома, оцениваемого по уровню тимоловой пробы, в течение 28 суток восстановительного периода после токсического воздействия эффективно купировались использованием СУМС-1 с липооризином, полностью нормализуя значения данного параметра. Другие методы коррекции не изменяли течения воспалительного синдрома по сравнению с группой животных без «лечения». Самый высокий уровень тимоловой пробы оказался при использовании "Энтеросгеля" и сирепара. он был выше, чем при применении углеродминеральных сорбентов. Что же касается ЭГ, то значения ТГ1 на фоне его приема восстанавливались медленнее, чем, в группе без «лечения» (ТП в группе с применением ЭГ выше, чем в группе без «лечения» в 1.4 раза).

Таким образом, показано, что для коррекции цитолитического и мезен -

липоориэином

Рисунок 1. Сывороточные маркеры повреждения печени {% от контроля), достоверность различий ло сравнению с контролем

химально-воспалигельного синдромов, а также внутрипеченочного холестаза целесообразнее использовать углеродминеральные сорбенты; особенно эффективен СУМС-1 с адсорбированным липооризином. Не исключено, что за счет более мощного, в отношении среднемолекулярных веществ, сорбцион-ного действия ЭГ и чрезмерной сорбции билирубин-гшокуронида и желчных кислот происходит напряжение холепродуцирующей функции гепатоцитов, что приводит к повышению активности ЩФ и гипербилирубинемии. Подобный эффект энтеросорбентов, по мнению А.И. Мосунова и соавт. (1997), имеет место при хронических диффузных заболеваниях печени с синдромом холестаза.

Изменения сывороточных печеночных синдромов могут быть связаны с активностью процессов перекисного окисления липидов, рассматриваемого как универсальный повреждающий фактор в механизме развития любого патологического процесса (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972; Коган А.Х., 1999), в том числе, и хронического токсического гепатита (Cedillo A. et. al., 1996). В усилении ПОЛ при токсическом воздействии существенное значение имеют снижение активности антиоксидантной защиты, рост восстановленное™ в клетках - накопление восстановленных пиридиннуклеотидов, накопление неэстерифицированных жирных кислот - субстратов ПОЛ, активация симпатоадреналовых влияний, в результате чего активируются липазы и накапливаются жирные кислоты; в процессе метаболизма катехоламинов образуются активные формы кислорода, а переизбыток катехоламинов перегружает цепь переноса электронов, что также стимулирует ПОЛ (Gilberto E.J., Allen P.L., 1991). Кроме этого, активация фосфолипаз и протеинкиназ при СС14-гепатите приводит к деструкции мембран и увеличивает доступность липидов мембран для перекисного окисления (Greene E.L., Palier M.S., 1991).

липоормзинон

Рисунок 2. Содержание продуктов ПОЛ (% от контроля) в плазме и , микросомальной фракции печени. - достоверность различий с контролен

Показано, что в плазме крови крыс первой группы отмечается повышение содержания МДА и снижение концентрации ДК, что может объясняться активным расходованием последних в реакциях ПОЛ (Каган В.Е. и соавт., 1986). Применение ЭГ нормализует содержание в плазме первичных и вторичных продуктов ПОЛ - ДК и МДА (Рис. 2), в то время как углеродмине-ральные сорбенты мало влияли на концентрацию молекулярных продуктов ПОЛ в плазме, хотя СУМС-1 с липооризином и восстанавливал до уровня интактных животных содержание ДК. Учитывая, что содержание МДА и ДК является результатом двух одновременно протекающих процессов образования и распада, а с другой стороны уровень продуктов ПОЛ в плазме не всегда коррелирует с их концентрацией в тканях пораженного органа, нельзя однозначно судить о локальной интенсивности процессов ПОЛ только лишь по уровню молекулярных продуктов, определяемых in vivo (Доценко Б.М. с соавт., 1993). Тем более что содержание ферментативноактивного церулоплаз-мина - основного антиоксиданта плазмы (Ромм А.Р. и соавт., 1988) увеличивалось при использовании углеродминеральных сорбентов, как СУМС-1, так и СУМС-1 с липооризином (Рис.3), что могло уменьшать прооксидантный потенциал плазмы и сдвигать на качественно новый уровень состояние системы про- и антиоксидантов.

В связи с этим были проведены исследования по определению продуктов ПОЛ и токоферола в микросомальной фракции печени (Рис.2). Показано, что наилучшие антиоксидантные свойства проявил сирепар, гепатопротективный эффект которого связан как раз с антиокислительным действием (Скакун Л.Н., 1985; Епишин A.B., Рудяк Г.И., 1990; Скакун Н.П. и соавт., 1992). СУМС-1 с липооризином также восстанавливал до уровня интактных животных содержание МДА и ДК в микросомальной фракции печени. Приме-

но 120

100

; ао

GO

«О

20

О

Эитсросгель Сирелар СУМС-1 СУ1.1С-1 с липосриэимоц

Рисунок 3. Уровонь цкрупоплимина ■ плате и токофгрола в микросомальной фракции почони (% от контроля). ф-достоверность рашичий е контролем

нение ЭГ задерживало восстановление до контрольных значений уровня ДК в микросомах (уровень ДК в группе с применением ЭГ был выше такового в группе без «лечения» в 1.4 раза). Следует отметить, что уровень ТФ в микро-сомальной фракции печени на фоне применения ЭГ в течение 28 дней был ниже соответствующих значений интактных животных, группы, в которой применялся СУМС-1 с липооризином, и животных, не получавших лечения (Рис.3). По-видимому, СУМС-1, если и сорбирует токоферол в желудочно-кишечном тракте, то в меньшем количестве, чем «Энтеросгель». Учитывая, что содержание токоферола в микросомах при применении ЭГ уменьшается, можно предположить, что «Энтеросгель» может в значительном количестве сорбировать на своей поверхности витамины, в частности, токоферол. С другой стороны ЭГ может препятствовать всасыванию витаминов, поступающих с пищей, вследствие своего обволакивающего эффекта. Таким образом, снижение концентрации токоферола в микросомальной фракции печени совпадало с увеличением содержания продуктов ПОЛ в микросомальной фракции, гипербилирубинемией, высокой активностью ЩФ в плазме. Вместе с тем, только со снижением содержания ТФ объяснить увеличение концентрации продуктов ПОЛ не представляется возможным, поскольку введение сирепара, в состав которого в частности входит и токоферол (Скакун Л.Н., 1975; Скакун Н.П. и соавт., 1992), нормализовало уровень продуктов ПОЛ, но не влияло существенно на содержание токоферола. Защитное действие сирепара при хроническом токсическом поражении печени скорее обусловлено всем комплексом антиоксидантов, содержащимся в нем, а не только токоферолом. Не исключено, что использование углеродминеральных сорбентов, более эффективно по сравнению с ЭГ уменьшающих проявления эндо-токсикоза, активизирует белоксинтезирующую функцию печени, при этом увеличивается концентрация церулоплазмина. И это является еще одним

возможным механизмом уменьшения содержания продуктов ПОЛ в микросомах при использовании углеродминеральных сорбентов.

Для оценки состояния функциональной активности печени при хроническом токсическом гепатите на фоне применения сорбционных препаратов было проведено изучение активности ферментных систем биотрансформации ксенобиотиков по скорости метаболизма анилина, амидопирина и эритромицина. Выбор этих субстратов был не случаен, поскольку метаболизм анилина протекает с участием изоформы цитохрома Р450 2Е1, метаболизирующей и четьтреххлористый углерод (Levin W., 1990), а другие субстраты традиционно используются для комплексной оценки метаболической функции печени, поскольку отражают активность различных изоформ - Р450 2В1 и Р450 ЗА6 (Кесова И.Г., Цырлов И.Б., 1991; Гуляева Л.Ф. и соавт., 1994; Murray М., Reidy G.F., 1994).

Установлено, что применение сирепара у крыс с хроническим токсическим гепатитом не восстанавливало до уровня интактных животных скорость метаболизма изучаемых субстратов (Рис.4).

180 -J

-1-5-

Энтеросгель Сирепар СУМС-1 СУМС-1 с лмгюоризииом

Рисунок 4. Скорость метаболизма ксенобиотиков (% от контроля).

-V- - достоверность различий по сравнению с контролем

Использование углеродминеральных сорбентов было одинаково эффективно: они восстанавливали до уровня интактных животных скорость биотрансформации анилина и амидопирина, а по эритромицину полученные результаты превосходили показатели интактных животных на 40 - 50%. Применение ЭГ у животных с хроническим токсическим гепатитом нормализовало активность всех изучаемых изоформ цитохрома Р-450. Нужно отметить, что у крыс этой группы скорость метаболизма АН возросла более чем в 5 раз по сравнению с этим показателем на 28-е сутки токсического воздействия, когда угнетение ферментных систем биотрансформации было максимальным. В то же время как в группах с применением углеродминеральных сорбентов это увеличение составило 1.9-2 раза.. Таким образом, если углерод-минеральные сорбенты наиболее эффективно восстанавливали ЭР-Ы-деметилазную активность, то применение. ЭГ увеличивало преимущественно гидроксилазную активность. В условиях поражения печени четыреххлори-

13

стым углеродом, когда именно на изоформу Р-450 2Е1 ложится основной токсический прессинг, вряд ли можно назвать целесообразным модуляцию активности как раз этого фермента. Поскольку изоформа Р-450 2Е1 способна генерировать активные формы кислорода (Wang P. Y. et al., 1997), то этот механизм также может иметь некоторое значение в увеличении концентрации продуктов ПОЛ в микросомальной фракции печени при использовании ЭГ. Таким образом, использование углеродминеральиых сорбентов представляется более приемлемым для коррекции метаболической функции печени, поскольку переключают кислородпотребляющие процессы в микросомах на те процессы, которые не генерируют активные формы кислорода.

Суммируя вышеприведенные факты, можно сказать, что применение углеродминеральиых сорбентов уменьшает проявления цитолитического, холе-статического, мезенхимально-воспалительного синдромов. СУМС-1 с адсорбированным липооризином практически по всем показателям не отличается от использования СУМС-1 без липооризина, однако, на фоне использования СУМС-1 с липолитическим ферментом зарегистрировано снижение значений ТП, уровня МДА и ДК до показателей интактных животных, в то время как на фоне других сорбентов уровни продуктов ПОЛ и ТП оставались повышенными. Использование гепатопротектора сирепара имеет менее выраженное позитивное действие. По данным Н.П.Скакуна и соавт. (1992) эффективность применения сирепара при данной модели хронического токсического гепатита увеличивается в сочетании его с витогепатом и карсилом. По данным, полученным в ходе проведенного исследования, применение энте-росорбции углеродминеральными адсорбентами также эффективнее использования только одного сирепара, хотя с учетом того, что сиренар оказывает лучшее действие на систему прооксидаптов, можно предположить, что соче-танное использование гепатопротектора сирепара и улгеродминеральных эн-теросорбентов может повысить эффективность лечения хронического токсического гепатита. При использовании ЭГ выявлено увеличение скорости метаболизма анилина (Р-450 2Е1), что возможно связано с так называемым синдромом раздраженной печени, когда на фоне возросшей нагрузки печень начинает работать в усиленном режиме (Подьтмова С.Д., 1988). В то же время на фоне усиления метаболизма сохраняются цитолиз (относительно других сорбционных препаратов и сирепара), холестаз, воспаление. Такое повышение функциональной активности печени вряд ли целесообразно в условиях сохраняющегося повреждения. Тем более что усиление метаболизма ксенобиотиков вызывает образование продуктов метаболизма и свободных радикалов, которые продолжают повреждение, замыкая, таким образом, порочный круг.

Поскольку наиболее эффективным из изучаемых сорбционных препаратов оказался СУМС-1 с липооризином, то несомненным становится интерес к изучению эффектов комбинированного сорбционного препарата с адсорбированным на СУМС-1 липолитическим ферментом липооризином. Подобный препарат никогда раньше не использовался для лечения заболеваний внутренних органов. Применение же этого препарата при хроническом гепатите

представляется обоснованным, поскольку при гепатите страдает желчеобразование и желчевыведение, экскреторная функция поджелудочной железы, а так же моторика кишечника, что затрудняет процессы переваривания и всасывания (Логинов A.C., Блок Ю.Е., 1987; Подымова С.Д., 1988). Использование сорбента с ферментом оказывает протективиое действие не только на лимфатическую систему, уменьшая всасывание токсинов, но еще и на поджелудочную железу, печень, кишечник. СУМС-1 с липолити'йским ферментом липооризином обеспечивает в условиях нарушения внешнесекреторной функции поджелудочной железы и желчевыводящих путей более качественное расщепление компонентов химуса, улучшение всасывания жиров и жирорастворимых веществ, в частности, витаминов, поставку субстратов ПОЛ, замещающих собственные липиды в реакциях липидной пероксидации. Кроме того, не исключено, что эффект утлеродминерального сорбента с липооризином объясним с позиций системной энзимотерапии.

Фармакологические эффекты комбинированных энзимных препаратов проявляются в усилении гидролитической гуморальной активности, снижении белков острой фазы и циркулирующих иммунных комплексов, повышении активности макрофагов и естественных киллеров, уровня фактора некроза опухоли, модуляции уровня цитокинов, активности комплемента, адгезивных молекул (Zavadova Е. et al., 1995; Штаудер Г., 1996). Хотя точные молекулярные основы действия полиферментных препаратов до конца не изучены.

В связи с фармакологическими эффектами энзимотерапии открывается возможность для комплексного лечения и профилактики различных заболеваний, в том числе и заболеваниях печени. Поскольку при хроническом токсическом гепатите нарушаются процессы перекисного липидов, страдает липидный обмен, возникает гиперлипидемия (Krell Н. et al., 1989), представляется обоснованным применение полиферментного препарата липооризина при хронических гепатитах в связи с тем, что основное действие липооризина липолитическое. Но кроме этого, в нем содержатся еще ряд ферментов протеолитического и амилолитического действия, что еще более придает сходства липооризину с препаратами для системной энзимотерапии. С учетом описанных ранее прямых и опосредованных эффектов энтеросорбции (Беляков H.A., 1991;. Картель Н.Т., 1995; Григорьев В Н., 1995; Любарский М.С. и соавт., 1997) схема действия СУМС-1 с адсорбированным липооризином представлена на рисунке 5.

Вышеизложенное позволяет заключить, что использование энтеральных сорбционных препаратов (углеродминералышх и кремнийорганических) улучшает течение восстановительных процессов после хрошгческого воздействия четыреххлористым углеродом и этанолом. При этом наиболее значимое улучшение параметров функциональной активности печени у крыс с хроническим токсическим гепатитом отмечается при энтеральном применении сорбционного препарата СУМС-1 с адсорбированным липолитическим ферментом липооризином. Применение ЭГ, в отличие от углеродминераль-ных сорбентов, па данной модели хронического диффузного заболевания

печени в течение 28 дней приводит к увеличению холестаза и сорбции токоферола.

улучшение дренажа стенки кишки, связывание газов

сороцкя токсинов, разрыв круга энтеро-эктералыюй циркуляции токсинов

улучшение всасывания жиров и жирорастворим ых веществ

лнмфопротекгивное и нммунорегуляторно е действие

качественное расщепление компонентов химуса

поставка субстратов ПОЛ, замещающих собственные литсиды в процессах шшидной пероксндашш

модуляция активности макрофагов, естественных киллеров, уровня фактора некроза опухоли

Рисунок 5. Саногенетические механизмы действия СУМС-1 с липо-оризином при хроническом токсическом гепатите

ВЫВОДЫ

1. Восстановление функционального состояния печени после прекращения хронического токсического воздействия активизируется при энтерапьном использовании сорбционных препаратов, о чем свидетельствуют уменьшение цитолиза, снижение активности ПОЛ в плазме и микросомальной фракции печени, увеличение концентрации церулоплазмина в плазме.

2. Активность трансаминаз в плазме, как проявление цитолиза, нормализуется при использовании углеродминеральных и кремнийорганических сорбентов. Применение Энтеросгеля увеличивает активность ЩФ и гипербилиру-бинемшо, в то время как углеродминеральные сорбенты уменьшают проявления холестаза.

3. Углеродминеральные сорбенты одинаково эффективно снижают лабораторные показатели повреждения печени, за исключением тимоловой пробы, которая нормализуется только при использовании СУМС-1 с липооризином.

4. Наблюдаемое при использовании СУМС-1 с липооризином восстановление до физиологических значений интенсивности процессов перекисного окисления липидов, оцениваемой по уровню МДА и ДК в микросомальной фракции печени, сопровождается увеличением концентрации церулоплазмина в плазме крови. При использовании других адсорбентов уровень продуктов перекисного окисления липидов сохраняется повышенным, при этом использование ЭГ приводит к снижению уровня токоферола в микросомальной фракции печени в 1.5 раза.

5. Активность ферментных систем биотрансформации ксенобиотиков у крыс с хроническим токсическим гепатитом восстанавливается при использовании всех адсорбентов в отличие от препарата сравнения гепатопротектора сирепара. При этом углеродминеральные сорбенты увеличивают преимущественно N-деметилазную активность, а ЭГ - гидроксилазную.

6. Коррекция функциональной активности печени при хроническом токсическом гепатите с использованием углеродминеральных энтеросорбентов более эффективна по сравнению с гепатопротектором сирепаром за счет уменьшения значений тимоловой пробы и щелочной фосфатазы, а также увеличения активности ферментных систем биотрансформации ксенобиотиков.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Савицкая И.В., Волхонская Т.Б., Гилинская О.М., Башкирова Ю.В. Эндо-экологические методы воздействия на лимфатическую систему // «Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологического воздействия на внутреннюю среду организма»,- Мат. III Международ, симп.- Чолпон-Ата - 1997,-Ч. III.-С, 151-154.

2. Башкирова Ю.В. Функциональная активность печени при экспериментальном хроническом токсическом гепатите // Тез. докл. 59-й итоговой науч. конф. молодых ученых. - Новосибирск,- 1998,- С. 32.

3. Любарский М.С., Колпаков М.А., Грек О.Р., Ефремов A.B., Башкирова Ю.В., Мичурина С В., Рачковская Л.Н., Начаров Ю.В. Сорбционная коррекция активности монооксигеназ печени при экспериментальном токсическом хроническом гепатите // «Адаптация организма к природным и экосоциальным условиям среды»,- Тез. докл. Международ, конф., посвященной памяти профессора А.Д.Слонима,- Магадан,- 1998,- Ч. II,- С. 5556.

4. Колпаков М.А., Башкирова Ю.В., Любарский М.С., Грек О.Р., Ефремов A.B. Влияние Энтеросгеля на метаболизм ксенобиотиков при экспериментальном хроническом токсическом гепатите // «Проблемы лимфологии и эндоэкологии»,- Труды НИИКиЭЛ СО РАМН - Новосибирск,- 1998,- Т. 7,-С. 148- 149.

5. Мичурина C.B., Ищенко И.Ю., Томилова Ю.А., Колпаков М.А., Башкиро-ва Ю.В. Морфометрический анализ микроциркуляторного русла и синусоидальных клеток тканевого микрорайона печени крыс при хроническом гепатите в условиях коррекции экстрактом лапчатки кустарниковой // Там же,-С. 198-200.

6. Колпаков М.А., Башкирова Ю.В., Любарский М.С., Грек O.P. Сравнительная эффективность сорбентов СУМС-1 и «Энтеросгель» при экспериментальном хроническом токсическом гепатите // Росс. журн. гастроэнте-рол. гепатол. колопроктол.- 1998,- T. VIII, № 5, Приложение № 5,- Мат. Четвертой Российской Гастроэнтерологической Недели,- С. 254 - 255.

Соискатель:

Подписано в печать 06.05.99. Формат 60x84/16. Заказ № 90. Бумага офсетная, 80 гр./м-

Печ.л. 1. Тираж 100.

Отпечатано на полиграфическом участке издательского отдела Института катализа им. Г.К. Борескова СО РАН 630090, Новосибирск, пр. Академика Лаврентьева, 5