Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Влияние эмоксипина на некоторые показатели иммунитета и перекисного окисления липидов на фоне использования препаратов антихеликобактерной терапии в эксперименте

На правах рукописи

064601865

СТЕНЬШИНА АЛЛА ВЛАДИМИРОВНА

ВЛИЯНИЕ ЭМОКСИПИНА НА НЕКОТОРЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНИТЕТА И ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ НА ФОНЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТОВ АНТИХЕЛИКОБАКТЕРНОЙ ТЕРАПИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 3 МАЙ 2010

Старая Купавна - 2010

004601865

Работа выполнена на кафедре поликлинической терапии и функциональной диагностики ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва»

Научный руководитель: Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Зорькина A.B.

доктор медицинских наук, профессор Шилова Е.В.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Митрохин Н.М.

доктор медицинских наук, профессор Козлов И.Г.

Ведущая организация - Московский государственный

медико-стоматологический университет

Защита состоится « 19 » МЛл._2010 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (142450, Московская область, пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ по адресу (142450, Московская область, пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23) и на сайте www.vncbav.ru

Автореферат разослан << » сцузгия_2010 года

Учёный секретарь диссертационного совета

д.б.н., профессор JI.B. Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одним из важных патогенетических факторов развития хронического гастрита и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки у 80% больных является хеликобактериоз, и проведение эрадикационной терапии является обязательной в стандартах лечения Hp-позитивных пациентов (Васильев Ю.В., 2007; Циммерман Я.С., 2007, 2009; Щербаков П.Л., 2008). Кроме того, высока значимость хеликобактериоза в развитии рака желудка и MALT-лимфомы, что также предопределяет необходимость своевременного проведения комплексной терапии (Исаков В.А., Домарадский И.В., 2003; Логинов А.Ф., 2006).

Существующие схемы лечения хеликобактерной инфекции предусматривают использование в различных комбинациях двух антибактериальных препаратов в сочетании с антисекреторным средством (Хуцишвили М.Б., Рапопорт С.И., 2002). В России наибольшее распространение получили омепразол, амок-сициллин и кларитромицин (Лазебник Л.Б., Хомерики С.Г., 2008; Ющук Н.Д., Маев И.В, 2008).

Однако столь мощная антибактериальная терапия нередко приводит к развитию аллергических реакций, гематологических нарушений, различных побочных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта (Мироджов Г.К. с соавт., 2007), органов дезинтоксикации, иммунной системы и ряда других (Маев И.В. с соавт., 2002; Козлова И.В. с соавт., 2005). В том числе, одним из механизмов развития побочных эффектов может быть активация процессов пере-кисного окисления липидов (Хомерики Н.М., Хомерики С.Г., 2005), что само по себе является интересным объектом для терапевтического воздействия (Буня-тян Н.Д. с соавт, 2007).

Немаловажным является и тот факт, что в ходе антибактериальной терапии возрастает количество кокковых форм, а любое ухудшение условий обитания Helicobacter pylori (Hp) создаёт опасность активации окислительных ферментов микроорганизма с усилением генерации активных форм кислорода в слизистой оболочке желудка (Исаков В.А., Домарадский И.В., 2003). Учитывая имеющиеся перекисно-иммунологические параллели (основными продуцентами активных форм кислорода являются фагоциты) и данные о влиянии на иммунологический статус антиоксидантов, представляется целесообразным изучить возможность коррекции изменений ряда параметров перекисного и иммунного гомеостаза путём дополнительного назначения лекарственных средств с антиоксидантным типом действия (Подопригорова В.Г., 2000, 2004).

В последнее время получены экспериментальные данные, свидетельствующие об антиульцерогенном эффекте лекарственных средств с антиокси-дантной активностью (Начкина Э.И. с соавт., 2001; Ямашкина Е.И. с соавт., 2004; Куняева Т.А., 2005; Бунятян Н.Д. с соавт., 2007), в том числе и эмоксипи-на (Зорькина А.В. с соавт., 2001). Препарат ингибирует свободнорадикальные стадии синтеза простагландинов, катализируемых циклооксигеназой и липоок-

сигеназой, соотношение простациклин / тромбоксан Аг и тормозит образование лейкотриенов (Смирнов Л.Д, с соавт., 1989), играющих ведущую роль в процессе язвообразования. Перспективы его применения подтверждаются и обнадеживающими данными использования препарата в лечении язвенной болезни (Подопригорова В.Г., 2000, 2004).

Вышесказанное обуславливает целесообразность исследования возможных побочных фармакологических эффектов комбинированного применения эмоксипина с препаратами, входящими в комплекс антихеликобактерной терапии.

Данная работа является разделом комплексных программ исследований Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарёва «Коррекция побочного действия лекарственных средств» (номер государственной регистрации темы 01.2.00004102) и «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии» (номер государственной регистрации темы 01.2.00704781).

Цель работы: изучить возможность коррекции изменений ряда показателей иммунитета и перекисного окисления липидов на фоне введения омепразо-ла, амоксициллина, кларитромицина и их комбинации путем дополнительного применения эмоксипина в эксперименте.

В соответствии с поставленной целью в ходе выполнения работы решались следующие задачи:

1. Исследовать влияние омепразола, амоксициллина и кларитромицина при их комплексном введении и в виде монотерапии на некоторые показатели иммунитета, клеточного состава периферической крови и перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов подопытных животных.

2. Оценить влияние, оказываемое эмоксипином, на некоторые показатели перекисного окисления липидов при его комбинированном применении с омеп-разолом, амоксициллином и кларитромицином.

3. Изучить некоторые показатели клеточного и гуморального иммунитета при сочетанном введении комплекса препаратов антихеликобактерной терапии и эмоксипина в эксперименте.

Научная новизна.

Показано, что комбинированное применение эмоксипина и омепразола оказывает позитивное влияние на показатели иммунитета, способствуя повышению активности фагоцитоза, ограничивая выраженность развивающейся нейтропении и активацию процессов перекисного окисления липидов в крови, тканях желудка, кишечника, селезенки, наблюдающиеся на фоне введения омепразола. Отмечено, что дополнительное применение эмоксипина на фоне введения амоксициллина снижает эозинофилию, уровень генерации активных форм кислорода нейтрофилами и активность процессов перекисного окисления липидов в крови, способствует росту антиоксидантной защиты эритроцитов, тканей печени, селезёнки, тонкой кишки, повышает содержание иммуноглобу-

лина А по сравнению с данными на фоне введения амоксициллина.

Показано снижение содержания эозинофилов, повышение иммуноглобулинов М и А, снижение уровня генерации активных форм кислорода нейтрофи-лами на фоне роста антиоксидантной защиты крови и тканей внутренних органов при комбинации кларитромицина с эмоксипином по сравнению с введением антибиотика в виде монотерапии.

Выявлено, что дополнительное применение эмоксипина на фоне комбинированного введения препаратов антихеликобактерной терапии (омепразола, амоксициллина и кларитромицина) не оказывает существенного значимого влияния на показатели иммунной защиты и активность процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов, но способствует росту антиоксидантной защиты сыворотки крови и эритроцитов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение омепразола, амоксициллина, кларитромицина и их комбинаций в изученных дозах оказывает достоверное влияние на клеточный состав периферической крови, отдельные показатели иммунитета и активность процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов.

2. Дополнительное применение эмоксипина на фоне введения омепразола, амоксициллина, кларитромицина и их комплексного использования оказывает влияние на некоторые показатели клеточного и гуморального иммунитета.

3. Одновременное введение с препаратами, входящими в комплекс эради-кационной терапии, эмоксипина достоверно влияет на состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантную защиту в крови и тканях изучаемых внутренних органов.

Практическая значимость диссертационного исследования

Полученные результаты расширяют представления о механизмах побочных эффектов комплексной антихеликобактерной терапии и позволяют прогнозировать возможные изменения показателей клеточного состава крови, иммунитета, процессов перекисного окисления липидов, развивающиеся при курсовом введении омепразола, амоксициллина и кларитромицина, а также наметить перспективы коррекции иммунологических нарушений путем дополнительного использования эмоксипина.

Апробация работы

Результаты проведённого исследования и основные положения диссертации доложены на XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); XIII, XIV и XV Российской Гастроэнтерологической неделе (Москва 2007, 2008, 2009); Юбилейной Российской научной конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения С.П. Боткина (Санкт-Петербург, 2007); XII научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета (Саранск, 2007); XIII Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2008); IX Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в

XXI веке» (Москва, 2008); XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молодые учёные в медицине» (Казань, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 1 - в издании, рекомендованном ВАК.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 165 страницах текста компьютерного набора в традиционном стиле: включает в себя обзор литературы, материалы и методы исследования, четыре главы результатов собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации, приложение, список использованной литературы, представленный 186 источниками, в том числе 59 зарубежными. Работа иллюстрирована 37 таблицами, 40 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объектов исследования были выбраны следующие лекарственные препараты:

Омепразол - 5-метокси-2-[[(4-метокси-3,5-диметил-2-пиридинил)метил]-сульфинил]-1Н-бензимидазол. Ингибирует фермент Н+К+АТФ-азу («протонный насос») в париетальных клетках желудка и блокирует тем самым заключительную стадию синтеза соляной кислоты (Ивашкин В.Т., 2003; Вахрушев Я.М., Муравцева О.В., 2006). В работе использовался препарат «Гастрозол» капсулы по 20 мг производства ОАО «Фармстандарт - Октябрь», Россия, г. Санкт-Петербург.

Амоксициллин - (2S, 5R, 6К)-6-[(11)-2-амино-2-(4-гидроксифенил) аце-тамидо]-3,3-диметил-7-оксо-4тиа-азабицикло [3.2.0] гептан-2-карбоновой кислоты тригидрат. Антибактериальное бактерицидное кислотоустойчивое средство широкого спектра действия из группы полусинтетических пенициллинов. Ингибирует транспептидазу, нарушает синтез пептидогликана (опорный белок клеточной стенки) в период деления и роста, вызывает лизис бактерий (Ивашкин В.Т., Лапина Т.Л., 2003, 2008; Корниенко Е.А., Паролова Н.И., 2006). Форма выпуска: капсулы по 250 мг производства Hemofarm концерн А.Д., Сербия и Черногория.

Кларитромицин - (2R, 3S, 4S, 5R, 6R, 8R, 10R, 11R, 12S, 13R)-3-(2,6- ди-деокси-З-С, 30 диметил-а-Ь-рибогексопиранозилокиси)-11, 12-дигидроки-6-метокси-2,4,6,8,10,12-гексаметил-9-оксо-5-(3,4,6-тридеокиси-3-диметиламино-р-В-ксило-гексопиранозилокиси-13-олид. Полусинтетический антибиотик из группы макролидов. Подавляет синтез белка в микробной клетке путём взаимодействия с 50S рибосомальной субъединицей бактерий. Высокоактивен в отношении Helicobacter pylori (Даниляк И., 2004; Дехнич Н.Н., Козлов С.Н., 2007), накапливается в полиморфно-ядерных нейтрофилах, макрофагах, моноцитах, ингибирует изофермент цитохрома Р-450 СУРЗА4, осуществляющий метаболизм препарата в печени (Пиманов С.И., Макаренко Е.В., 2005). Форма выпуска: «Клабакс» таблетки по 250 мг производства РАНБАКСИ Лабораториз Лимитед, Индия.

Эмоксипин - 3-окси-6-метил-2-этилпиридина гидрохлорид. Синтезирован в Институте химической физики АН СССР Л.Д.Смирновым и K.M. Дымае-вым (1982) и относится к водорастворимым антиоксидантам. Основными эффектами эмоксипина являются торможение ПОЛ и активация антиоксидантной системы; изменение активности мембраносвязанных ферментов; модификация метаболической, рецепторной и транспортной функций клеточных мембран (Шанин Ю.Н. и соавт., 2003; Подопригорова В.Г., 2004). Ингибирует агрегацию тромбоцитов и нейтрофилов, обладает фибринолитической, антигипоксической активностью, увеличивает содержание циклических нуклеотидов в тканях. Используется как ангио- и ретинопротектор, как кардиопротективное средство при нестабильной стенокардии и инфаркте миокарда, у больных с хронической сердечной недостаточностью, преходящими нарушениями мозгового кровообращения и дисциркуляторной энцефалопатией (Симоненко В.Б., 1998; Волче-горский И.А. и соавт., 2004; Заславская P.M. и соавт., 2004). Форма выпуска: раствор для инъекций 1% в ампулах по 1 мл. Изготовитель: Федеральное государственное унитарное предприятие «Московский эндокринный завод», г. Москва, Россия.

Все животные получены из филиала «Столбовая» ГУ «Научный центр биомедицинских технологий РАМН». После получения животные содержались в стандартных условиях вивария Центральной научно-исследовательской лаборатории ГОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева». Экспериментальные исследования проводились в соответствии с требованиями нормативных правовых актов, регламентирующих проведение исследований безопасности и эффективности фармакологических веществ в Российской Федерации (Федерального закона «О лекарственных средствах» №86-ФЗ от 22.06.1998, Приказа МЗ РФ «Об утверждении правил лабораторной практики» №267 от 19.06.2003) и международными правилами правовых и этических норм использования животных.

Эксперименты выполнены на 216 белых нелинейных половозрелых крысах обоего пола массой 180-230 гр. Проведено 8 серий опытов (п=24 в каждой) (табл.1). Исследуемые базовые лекарственные средства вводились в течение 7 дней внутрижелудочно зондовым способом в дозировках, рассчитанных на основании среднетерапевтических доз с учётом коэффициента межвидового переноса доз. Интактную группу составили 24 животных. Эмоксипин вводился внутримышечно в дозе 10 мг/кг один раз в день.

Выведение животных из опыта осуществлялось после предварительной наркотизации тиопенталом натрия внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг. После де-капитации забиралась кровь для биохимических и иммунологических исследований, стабилизация - 0,1 мл (500 ЕД) гепарина.

У интактных особей и животных опытных групп проводились подсчёт лейкоцитарной формулы, определение в крови общего количества циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом преципитации с различными конечными концентрациями - 2,5, 3,5 и 7% полиэтиленгликоля; концентрации

иммуноглобулинов класса М, А и G (Ig М, Ig А и Ig G) по Манчини; фагоцитарной активности нейтрофилов (по способности клеток захватывать St. aureus), НСТ-теста.

В крови и гомогенатах тканей внутренних органов (желудка, двенадцатиперстной кишки, тонкого и толстого кишечника, печени, селезёнки) определяли уровень малонового диальдегида (МДА) при спонтанном и железоиндуциро-ванном окислении (Fe-МДА) (Конюхова С.Г., 1989), активность фермента ан-тиоксидантной защиты каталазы (Королюк М.А., 1988).

Таблица 1.

Структура эксперимента

№ Условия проведения эксперимента п

1 Омепразол по 2 мг/кг 2 р/с + раствор №010,9% 0,2 мл 1 р/с в/м 24

2 Омепразол по 2 мг/кг 2 р/с + эмоксипин 10 мг/кг 1 р/с 24

3 Амоксициллин по 100 мг/кг 2 р/с + раствор №С1 0,9% 0,2 мл 1 р/с в/м 24

4 Амоксициллин по 100 мг/кг 2 р/с + эмоксипин 10 мг/кг 1 р/с 24

5 Кларитромицин по 50 мг/кг 2 р/с + раствор ИаС1 0,9% 0,2 мл 1 р/с в/м 24

6 Кларитромицин по 50 мг/кг 2 р/с + эмоксипин 10 мг/кг 1 р/с 24

7 Омепразол по 2 мг/кг 2 р/с + амоксициллин по 100 мг/кг 2 р/с + кларитромицин по 50 мг/кг 2 р/с + раствор ШС10,9% 0,2 мл 1 р/с в/м 24

8 Омепразол по 2 мг/кг 2 р/с + амоксициллин по 100 мг/кг 2 р/с + кларитромицин по 50 мг/кг 2 р/с + эмоксипин 10 мг/кг 1 р/с 24

Рассчитывали антиоксидантную активность (АОА= Ре-МДА - МДА) и резерв липидов для перекисного окисления (РЛПО) (Кузьменко Д.И., Лаптев Б.И., 1999) крови и тканей по формуле:

РЛПО = Ьс-МДА-МДА % МДА

Рассчитывали коэффициент соотношения активности каталазы сыворотки и эритроцитов (Кс/Кэ), косвенно характеризующий проницаемость мембран эритроцитов.

Гомогенаты готовились следующим образом: взвешивались кусочки тканей, растирались в фарфоровой ступке с кварцевым песком, после чего добавлялся 0,9 % раствор №С1 из расчета 1 мл на 100 мг веса.

Измерения биохимических показателей проводились с использованием фотоэлектрокалориметра КФК-2МП и спектрофотометра СФ-46.

Для гистологического исследования забирали материал из стенки желудка, тонкого и толстого кишечника, печени. Кусочки тканей фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Окраску парафиновых срезов осуществляли гематоксилином и эозином. При микроскопическом исследовании светооптическим способом срезы подвергали микрофотосъёмке.

Статистическую обработку результатов экспериментальных исследований проводили с помощью t-критерия Стьюдента (Закс JI., 1976) на персональном компьютере IBM PC / Pentium с использованием пакета прикладных программ Exel 7.0 и Biostat 4.03. Результаты представлены в виде средней арифметической и ошибки её среднеквадратичного отклонения (М±ш). Степень достоверности различия показателей определяли в каждой серии по отношению к значениям интактных животных (р) и к показателям в контрольных сериях (pi). Различия считались достоверными при уровне значимости р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование влияния комбинированного применения омепразола и эмокснпина на некоторые метаболические показатели и клеточный состав

периферической крови

Ингибиторы протонной помпы являются базисным компонентом большинства схем антихеликобактерной терапии (Пиманов С.И., Макаренко Е.В., 2005). На фоне курсового введения омепразола наблюдалось повышение уровня эозинофилов в 2,7 раза (с 0,429±0,197 до 1,17±0,30%, р<0,05) и значительное снижение - на 74% (с 25,0±3,22 до 6,5±0,83%, р<0,001) относительного содержания в крови сегментоядерных нейтрофилов, играющих в организме важную защитную роль. Количество моноцитов достоверно не менялось (р>0,05), а количество лимфоцитов увеличивалось на 23% (с 74,0±3,35 до 91,17±0,75%, р<0,001). Вместе с тем в 2,3 раза (с 4,0±0,91 до 9,29±0,89 усл. ед., р<0,01) возрастало образование ЦИК на фоне снижения на 39% активности фагоцитоза (с 3,75±0,5 до 2,29±0,35%, р<0,05) (рис.1). Концентрация иммуноглобулинов А и М достоверно не менялась, составив 39,43±2,15 и 28,57±2,97 мг/% соответственно (рис.3). Необходимо отметить, что содержание Ig G во всех сериях эксперимента оказалось настолько низким, что провести точный подсчёт и оценить его динамику не представлялось возможным.

Уровень НСТ-теста, свидетельствующего о генерации активных форм кислорода нейтрофилами, возрастал на 46% (с 1,86±0,38 до 2,71±0,38%, р<0,05). Следует отметить, что рост НСТ-теста на фоне параллельного снижения активности фагоцитоза свидетельствует о гиперактивации нейтрофильных грануло-цитов.

Комбинация омепразола с эмоксипином позволила повысить относительное содержание сегментоядерных гранулоцитов на 83% (до 11,88±1,69%, р<0,05) и полностью предотвратить развитие эозинофилии (0,375±0,163%) (рис. 2.). Содержание лимфоцитов снижалось до 83,4±2,1% (р<0,05), а моноцитов -

не менялось (0,88±0,52%, р>0,05). Антиоксидант способствовал удалению из организма ЦИК - показатель снизился на 67% (до 3,08±0,97 усл.ед., р<0,01), достигнув уровня интактной группы. Иммуномодулирующее влияние эмокси-пина проявилось и в росте активности фагоцитоза с 2,29±0,35 до 28,55±1,31% (р<0,001). Кроме того, наблюдалось снижение показателя НСТ-теста по сравнению с данными на фоне введения омепразола на 54% (до 1,25±0,25%, р<0,05). Полностью предотвращая рост показателя по сравнению с данными интактной группы.

омеп.+эмок.

амок.+эмок.

клар.+эмок.

О+А+К+Э

76 Г#

омеп.+эмок. амок.+эмок. клар.+эмок.

О+А+К+Э

□ интактные

□ контроль Шопыт

200 150 % 100 50 0

Рис. 1. Влияние дополнительного применения эмоксипина (Э) на фоне введения омепразола (О), амоксициллина (А) и кларитромицина (К) на некоторые показатели иммунитета (в % к данным интактной серии); * - достоверность различия р<0,05 с данными интактной группы; # - с данными контрольной группы; контроль- данные серий с введением базовых препаратов в виде монотерапии; О+А+К - тройная терапия.

омеп.+эмок. амок.+эмок. клар.+эмок. О+А+К+Э

Стимулировался синтез иммуноглобулинов: класса М - в 3 раза (до 86,0±6,39 мг/%, р<0,01), класса А - на 33% (до 52,3±1,09 мг/%, р<0,001).

На фоне введения омепразола наблюдался рост содержания МДА и Ре-МДА: в сыворотке крови - на 28% (р<0,001) и 97% (р<0,001) соответственно, а в эритроцитах - на 60% (р<0,001) и 32% (р<0,001) (рис.5). Коэффициент АО А также повышался - на 149% в сыворотке и на 56% в эритроцитах (р<0,001). Однако параллельно отмечалось угнетение активности каталазы более чем наполовину (в сыворотке с 0,58±0,05 до 0,22±0,01 мкКат/с-л, р<0,001, в эритроцитах - с 1,13±0,02 до 0,49±0,01 мкКат/с-л, р<0,001) (рис.4). Дополнительное введение эмоксипина не повлияло на содержание МДА в сыворотке, но способствовало снижению его в эритроцитах практически до результата интактных животных, а также несколько ограничивало в крови рост РеМДА (р<0,05). В эритроцитах увеличивался РЛПО (р<0,001). Использование антиоксиданта способствовало повышению активности каталазы в сыворотке крови и эритроцитах.

1500

500

-1312' £г

Эозинофилы

87#

В.

133#

1 ЖЗ 1

□ контроль

омеп.+эмок. амок.+эмок. клар.+эмок. -Сегментоядерные-

О+А+К+Э

100

%

50

нейтрофилы

ГП 48*# рЬ-т

ш

Ш

59* 56*

□ интактные

□ контроль

омеп.+эмок.

амок.+эмок.

клар.+эмок.

О+А+К+Э

Рис.2. Влияние дополнительного применения эмоксипина (Э) на фоне введения омепразола (О), амоксициллина (А) и кларитромицина (К) на относительное количество эозинофилов и сегментоядерных нейтрофилов (в % к данным ин-тактной серии); * - достоверность различия р<0,05 с данными интактной группы; # - с данными контрольной группы; контроль- данные серий с введением базовых препаратов в виде монотерапии; О+А+К - тройная терапия.

В тканях на фоне введения омепразола наблюдалось снижение содержания МДА в гомогенатах печени на 31% (р<0,001), увеличение АОА (р<0,001) и РЛПО (р<0,001). В гомогенатах тканей желудка и кишечника содержание вто-

ричных продуктов ПОЛ и величина АОА сохранялись на уровне интактных животных. Уровень РЛПО возрастал на 62% в ДПК (р<0,01) и снижался на 25% в толстой кишке (р<0,01).

На фоне комбинированного применения омепразола с эмоксипином по сравнению с данными, полученными при введении омепразола в виде моиоте-рапии, наблюдался рост содержания МДА в тканях желудка (на 44%, р<0,05), ДПК (на 29%, р<0,05), снижение его в селезёнке (на 14%, р<0,05). Количество Ре-МДА снижалось в тонком и толстом кишечнике (на 24% и 16% соответственно, р<0,01). В тканях селезёнки введение антиоксиданта приводило к выраженному увеличению АОА и РЛПО почти в 2,5 раза (р<0,01). Активность ката-лазы при использовании эмоксипина повышалась только в печени (на 17%, р<0,05) и сохранялась без изменений в гомогенатах других исследуемых органов.

Дополнительное применение эмоксипина не оказывало влияния на структуру желудка, тонкой кишки и печени по сравнению с введением омепразола в виде монотерапии, а в толстой кишке уменьшало выраженность отека подсли-зистой оболочки и лимфогистиоцитарной инфильтрации.

Исследование влияния комбинированного применения амоксицил-лина и эмоксипина на некоторые показатели гомеостаза и клеточный состав периферической крови

У подопытных животных при введении амоксициллина в изученной дозе на третьи сутки эксперимента выявлялись признаки энтерита - учащалась дефекация, кал становился кашицеобразным, светло-оранжевого цвета. При вскрытии животных у 50% особей наблюдалось вздутие кишечника, особенно толстого, кишечное содержимое было полужидким. Данные явления можно объяснить развивающимся при антибиотикотерапии дисбактериозом. У двух животных в желудке обнаруживались язвы.

При введении амоксициллина наблюдалось снижение числа сегментоя-дерных нейтрофилов на 60% (до 10,0±1,35%, р<0,001) при одновременном увеличении в 13 раз количества эозинофилов (до 5,63±0,6%, р<0,001), что может свидетельствовать об аллергизации. Наблюдалось снижение концентрации ^ А на 45% (с 43,0±3,3 до 23,63±0,72 мг/%, р<0,001), рост НСТ-теста на 61% (с 1,86±0,38 до 3,00±0,32%, р<0,05), а содержания ЦИК - в 2 раза (с 4,00±0,91 до 8,0±1,0 усл.ед., р<0,05).

В опытных группах животных дополнительное применение эмоксипина не влияло на выраженность нарушения стула, наблюдающегося на фоне введения амоксициллина. Однако позволило значительно ограничить эозинофилию (до 1,33±0,61, р<0,001), хотя и не предотвращало снижения числа сегментоя-дерных клеток (10,29±0,90). Активность фагоцитоза и образование ЦИК (7,14±1,22 усл.ед.) при этом не менялись (р>0,05). Уровень НСТ-теста снижался на 43% (с 3,0±0,32 до 1,71±0,41, р<0,05). Концентрация ^ А повышалась на

53% (с 23,63±0,72 до 36,17±1,66 мг/%, р<0,001), приближаясь к результату ин-тактных особей. Синтез ^ М сохранялся на уровне контрольной группы (24,2±2,56 мг/%, р>0,05).

122*# ¡а А

омел.+эмок. амок.+эмок. клар.+эмок. О+А+К+Э

Рис.3. Влияние дополнительного применения эмоксипина (Э) на фоне введения омепразола (О), амоксициллина (А) и кларитромицина (К) на содержание А и ^М в сыворотке крови (в % к данным интактной серии); * - достоверность различия р<0,05 с данными интактной группы; # - с данными контрольной группы; контроль - данные серий с введением базовых препаратов в виде монотерапии; О+А+К - тройная терапия.

При изучении состояния ПОЛ в организмах подопытных животных на фоне введения амоксициллина в сыворотке крови наблюдалось повышение содержания МДА и Ре-МДА на 25% (р<0,01) и 30% (р<0,001), а АОА - на 27% (р<0,01). В эритроцитах количество вторичных продуктов ПОЛ также увеличивалось, причём более значительным был рост МДА (на 88%, р<0,001), в связи с чем расчётный показатель АОА сохранялся на уровне интактной группы, а РЛПО снижался на 41% (р<0,001). Использование антибактериального препарата не влияло на каталазу сыворотки (0,51±0,03 мкКат/сл, р>0,05), но угнетало активность антиперекисного фермента в эритроцитах на 19% (с 1,13±0,02 до 0,92±0,02 мкКат/с-л, р<0,001) и приводило к росту коэффициента Ксыв/ Кэр на 25% (р<0,05).

Дополнительное применение эмоксипина способствовало снижению содержания вторичных продуктов ПОЛ как в сыворотке, так и в эритроцитах более чем в два раза сравнению с данными контрольных животных (р<0,001). В сыворотке наблюдался рост РЛПО (р<0,001). Активность каталазы в сыворотке не менялась (0,515±0,035 мкКат/с-л, р>0,05), а в эритроцитах - повышалась на

12% (с 0,920±0,016 до 1,03±0,01 мкКат/с-л, р<0,001). Тем самым предотвращалось и повышение коэффициента Ксыв/ Кэр.

Введение амоксициллина привело к росту содержания МДА в желудке, тонком и толстом кишечнике, снижению расчетных показателей АОА и РЛПО (р<0,05). Активность каталазы компенсаторно возрастала на 18% (с 3,75±0,15 до 4,46±0,2 мкКат/с-л, р<0,05) только в тонкой кишке. В гомогенатах ДПК наблюдалось снижение концентрации Ре-МДА на 41% (р<0,001), а АОА - почти в 2 раза (р<0,01). В печени отмечалось снижение МДА - на 38%, Ре-МДА - на 24% (р<0,001). В тканях селезёнки наблюдалось повышение каталазной активности (с 2,4±0,19 до 4,99±0,26 мкКат/с-л, р<0,001).

При комбинированном введении амоксициллина и эмоксипина в гомогенатах тканей желудка и селезёнки изменений изучаемых показателей ПОЛ не наблюдалось. В тканях ДПК содержание МДА не менялось, а количество Ре-МДА хотя и было на 25% (р<0,05) выше, чем при монотерапии амоксицилли-ном, но оставалось ниже уровня интактных животных. Параллельно повышалась величина АОА. В тканях тонкого кишечника отмечался рост РЛПО в 2,4 раза (р<0,001), восстанавливая показатель до уровня интактной группы. Активность каталазы во всех отделах кишечника сохранялась в пределах значений контрольной серии эксперимента. В тканях печени возрастал уровень АОА и РЛПО и на 31% стимулировалась активность каталазы (р<0,001).

На фоне введения амоксициллина в желудке отмечался выраженный отёк подслизистой оболочки, диффузно-очаговая полиморфноклеточная инфильтрация, умеренные атрофические изменения слизистой. В тонкой кишке - атрофия слизистой оболочки, выраженная диффузная гистиоцитарная инфильтрация с образованием поверхностных эрозий, дистрофические и атрофические изменения. В толстой кишке - очаговая атрофия слизистой оболочки, множественные микроэрозии, полиморфноклеточная инфильтрация мышечной оболочки, гиперплазия лимфоидных фолликулов, отёк подслизистой оболочки. В печени -лимфогистиоцитарная инфильтрация. Дополнительное применение эмоксипина способствовало уменьшению выраженности полиморфноклеточной и гистио-цитарной инфильтрации в тонкой, толстой кишке и печени. Исследование влияния комбинированного применения кларитромицина и эмоксипина на некоторые показатели клеточного состава периферической крови, иммунитета и перекисного окисления липидов

У подопытных животных при введении кларитромицина также, как и при курсовом введении амоксициллина, на третьи сутки отмечались признаки энтерита. При вскрытии у 62,5% животных наблюдалось вздутие кишечника. На фоне введения кларитромицина регистрировалось снижение числа сегментоя-дерных нейтрофилов на 61% (с 25,0±3,22 до 9,8±1,9, р<0,01) и рост в 4,3 раза количества эозинофилов (до 1,86±0,40%, р<0,01) и на 14% (р<0,01) - лимфоцитов. Содержание ^ А при этом снижалось на 28% (с 43,00±3,34 до 31,00±1,97 мг/%, р<0,05). Активность фагоцитоза повышалась на 55% (с 3,75±0,5 до

5,8±0,33, р<0,01), рост уровня ЦИК не носил статистически достоверного характера (7,00±1,22, р>0,05). Наблюдалось увеличение НСТ-теста на 53% (с 1,86±0,-37 до 2,83±0,31%, р<0,05)

При комбинации кларитромицина с эмоксипином предотвращалось развитие эозинофилии (0,57±0,20%), наблюдаемой при монотерапии изучаемым макролидом. Отмечался рост относительного содержания моноцитов (с 0,43±0,2 до 1,71±0,19, р<0,01). Содержание М возрастало на 28% (с 40,8±3,15 до 52,17±3,4 мг%, р<0,05) по сравнению с контролем, а ^ А - на 23% (с 31,00±1,97 до 38,00±1,84, р<0,05), предотвращая снижение показателя относительно данных интактной группы (43,00±3,34 мг%, р>0,05). Активность фагоцитоза и показатель ЦИК (6,68±1,67, р>0,05) не менялись. По сравнению с данными на фоне введения кларитромицина наблюдалось снижение НСТ-теста (до 1,86±0,43%) до уровня интактных животных (р>0,05).

Оценивая влияние кларитромицина на процессы ПОЛ, следует отметить, что содержание в сыворотке и эритроцитах МДА и Бе-МДА снижалось в среднем на 25-36% (р<0,001). При этом в сыворотке АОА также уменьшалась на 30% (р<0,001). В эритроцитах РЛПО возрастал на 38% (р<0,01), активность ка-талазы снижалась на 12% (с 1,13±0,02 до 1,0±0,02 мкКат/с-л, р<0,001).

260 ------------------.---;-------------------219* #1

О + Э

А + Э

К + Э

О + А + К + Э

200 1 50 100 50

□ Интактные ОЯКонтроль ЕЗОпыт

Эритроциты

Рис.4. Влияние комбинированного применения эмоксипина (Э) с омепразолом (О), амоксициллином (А) и кларитромицином (К) на активность каталазы сыворотки крови и эритроцитов (в % к данным интактных животных), * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными интактной группы, # - по сравнению с данными соответствующей контрольной группы.

При дополнительном введении эмоксипина уровень МДА в сыворотке повышался по сравнению с данными контрольных животных (р<0,001), но не превышал данные интактной группы. Содержание Ре-МДА в крови также восстанавливалось до результатов интактных особей. В эритроцитах наблюдалось более чем двукратное увеличение расчётных показателей АОА и РЛПО (р<0,001). Активность каталазы в крови не менялась.

Под влиянием кларитромицина в гомогенатах тканей желудка и ДПК содержание вторичных продуктов ПОЛ снижалось (в среднем на 16-19%, р<0,05). РЛПО повышался в желудке на 41% (р<0,01), в ДПК - на 81% (р<0,001). В тонком и толстом отделах кишечника количество МДА оставалось без изменений, Ре-МДА - уменьшалось на 30% (р<0,001). Значительно снижались (в 4 раза) показатели АОА и РЛПО. В толстой кишке наблюдалось угнетение активности каталазы на 21% (с 3,78±0,04 до 3,02±0,09 мкКат/с-л, р<0,001). В печени содержание МДА было на 35% ниже, чем в интактной группе (р<0,001). Активность каталазы снижалась на 13% (с 2,81±0,11 до 2,45±0,08 мкКат/с-л, р<0,05). В тканях селезёнки также уменьшалось количество вторичных продуктов ПОЛ (р<0,001).

На фоне комбинированного применения кларитромицина и эмоксипина в тканях желудка, ДПК и толстой кишки содержание МДА и Ре-МДА сохранялось на уровне интактной группы. АОА в ДПК повышалась на 17% (р<0,01). В тканях тонкой кишки отмечался рост АОА и РЛПО по сравнению с результатами контрольной группы: в 3,1 раза и в 5 раз соответственно (р<0,001). В печени и селезенке концентрация МДА не менялась, а уровень Ре-МДА - повышался. При этом в печени возрастала величина расчётных показателей: АОА - на 77%, РЛПО - на 88% (р,<0,001). Одновременно с этим увеличивалась активность каталазы: в печени на 24% (с 2,45±0,08 до 3,03±0,13 мкКат/с-л, р!<0,01), в селезёнке - на 64% (с 2,22±0,04 до 3,65±0,15 мкКат/с-л, р,<0,001).

На фоне введения кларитромицина отмечался незначительный отёк под-слизистой оболочки желудка с мелкими единичными очагами инфильтрации, в тонкой кишке явления некробиоза слизистой оболочки, в толстой кишке - явления атрофии слизистой оболочки, выраженная полиморфноклеточная инфильтрация слизистой, подслизистой, а на отдельных участках - мышечной оболочки и жировой клетчатки, с очагами эрозии и изъязвлений слизистой. В печени умеренно выраженная очаговая и перипортальная инфильтрация, дистрофические изменения гепатоцитов, ступенчатые некрозы. Дополнительное применение эмоксипина на фоне введения кларитромицина не оказало корригирующего влияния на структуру желудка, кишечника и печени. Исследование влияния введения эмоксипина на фойе комбинированного применения омепразола, амоксициллина и кларитромицина на некоторые метаболические показатели и клеточный состав периферической крови

На фоне комбинированного введения базовых препаратов антихеликобак-терной терапии явления диареи наблюдались уже к концу вторых суток. При

вскрытии животных у всех особей наблюдалось вздутие кишечника, истончение стенок желудка и кишечника, у нескольких животных в желудке обнаруживались язвы. Эмоксипин не оказывал существенного влияния на энтерические явления, но язвообразования макроскопически у животных в желудке и кишечнике не выявлялось.

На фоне комбинированного введения омепразола, амоксициллина и кла-ритромицина наблюдался рост относительного содержания эозинофилов в 4 раза (до 1,714±0,286%, р<0,05), снижение числа сегментоядерных нейтрофилов на 41% (с 25,0±3,22 до 14,63±1,29, р<0,01) при одновременном увеличении на 13% (с 74,0±3,35 до 83,63±1,31, р<0,05) количества лимфоцитов. Образование ЦИК в этой серии не менялось (3,13±1,11 усл. ед., р>0,05). Не наблюдалось также достоверного изменения синтеза ^ А (47,50±2,87мг%, р>0,05) и ^ М (34,29±2,71 мг%, р>0,05). Повышалась активность фагоцитоза в 5,3 раза (с 3,75±0,5 до 19,88±0,92, р<0,001) при параллельном снижении НСТ-теста на 66% (до 0,63±0,26, р<0,01). Дополнительное применение эмоксипина предотвращало развитие эозинофилии (0,57±0,20%), но не оказало достоверно значимого влияния на другие изучаемые показатели иммунной защиты.

В крови при введении комплекса антихеликобактерных препаратов наблюдалось снижение количества вторичных продуктов ПОЛ как в сыворотке, так и в эритроцитах (р<0,001). РЛПО в сыворотке крови повышался на 35% (р<0,01). В эритроцитах АОА уменьшалась на 34% (р<0,01). Активность ката-лазы в сыворотке возрастала на 22% (с 0,58±0,05 до 0,71±0,02 мкКат/с-л, р<0,05), а в эритроцитах снижалась на 16% (с 1,13±0,02 до 0,95±0,01 мкКат/с-л, р<0,001). Коэффициент соотношения данных величин был на 33% выше, чем в интактной группе (р<0,01), что могло косвенно свидетельствовать о развитии гемолиза.

На фоне дополнительного применения эмоксипина в сыворотке крови и эритроцитах концентрация МДА не менялась, а уровень Бе-ЫДА повышался (р<0,001). В связи с этим в крови величина АОА превышала контрольный показатель на 64% (р<0,001), достигая данных интактной группы. Активность ката-лазы в крови повышалась относительно результатов, полученных при использовании только средств эрадикационной терапии: в сыворотке - на 79% (с 0,71±0,02 до 1,27±0,03 мкКат/с-л, р1<0,001), в эритроцитах - на 66% (с 0,95±0,01 до 1,58±0,01 мкКат/с-л, р|<0,001), превышая показатели интактной группы. Коэффициент Ксыв/ Кзр не менялся.

В гомогенатах желудка на фоне сочетанного введения омепразола, амоксициллина и кларитромицина содержание вторичных продуктов ПОЛ и активность каталазы достоверно не менялись по сравнению с данными интактных животных. Но при этом отмечался рост АОА и РЛПО, соответственно на 37% (р<0,05) и 83% (р<0,01). Концентрация МДА в ДПК и тонкой кишке не отличалась от данных интактной группы (р>0,05), а в толстой кишке - снижалась на

16% (р<0,05). Содержание Ре-МДА снижалось: в ДПК на 42% (р<0,001), в тонком кишечнике - на 35% (р<0,001), в толстой кишке - на 29% (р<0,001). Активность каталазы в гомогенатах ДПК повышалась на 12% (с 3,58±0,11 до 4,02±0,09 мкКат/с-л, р<0,01). В печени содержание МДА снижалось на 32% (р<0,001), в селезёнке - на 31% (р<0,001). Содержание Ре-МДА в печени также было ниже уровня интактной группы на 15% (р<0,01). В селезёнке данный показатель оставался без изменений. Параллельно этому в данных органах происходило более, чем двукратное увеличение АОА и РЛПО (р<0,001). Активность каталазы достоверно не изменялась.

О + Э А + Э К + Э О + А + К + Э

О+Э А+Э К+Э О+А+К+Э

Рис. 5. Влияние комбинированного применения эмоксипина (Э) с омепразолом (О), амоксициллином (А) и кларитромицином (К) на содержание МДА сыворотки крови и эритроцитов (в % к данным интактных животных), * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными интактной группы, # - по сравнению с данными соответствующей контрольной группы.

Дополнительное применение эмоксипина не оказало значимого влияния на показатели ПОЛ в тканях желудка, тонкого кишечника и печени. В толстой кишке введение с изучаемыми препаратами эмоксипина позволило сохранить показатели МДА, Ре-МДА и АОА на уровне интактных животных, превышая результаты контрольной группы соответственно на 24% (р<0,05), 50% (р<0,001) и 51% (р<0,01). В гомогенатах тканей селезёнки показатели МДА, Ре-МДА и каталазы достоверно не отличались от полученных в контрольной группе.

На фоне комбинированного введения базовых препаратов антихеликобак-терной терапии в желудке наблюдались явления очаговой атрофии, инфильтрация слизистой и подслизистой с поверхностными эрозиями, язвообразованием и очаговой кишечной метаплазией желёз. В тонкой и толстой кишке - выраженная полиморфноклеточная инфильтрация слизистой и подслизистой оболочек с поверхностными эрозиями и атрофией слизистой. В печени - дистрофические изменения и очаговые некрозы гепатоцитов с полиморфноклеточной инфильтрацией. Сосуды расширены с внутрисосудистым лейкоцитозом. При дополнительном введении эмоксипина в желудке в значительной степени ограничивалась инфильтрация и отек, в толстой кишке и печени уменьшалась выраженность инфильтрации.

Таким образом, дополнительное применение эмоксипина оказывает более выраженное корригирующее действие на показатели иммунитета и перекисного окисления липидов на фоне применения омепразола, амоксициллина или кла-ритромицина по сравнению с тройной терапией антихеликобактерными препаратами.

ВЫВОДЫ

1. Курсовое введение омепразола, амоксициллина или кларитромици-на приводит к развитию относительной нейтропении, эозинофилии, росту генерации активных форм кислорода нейтрофилами, снижению антиоксидант-ной защиты в эритроцитах, к снижению фагоцитоза (омепразол), росту содержания вторичных продуктов ПОЛ в крови (омепразол, амоксициллин), в желудке, тонком и толстом кишечнике (амоксициллин), росту содержания циркулирующих иммунных комплексов в крови (омепразол, амоксициллин) и снижению иммуноглобулина А (амоксициллин, кларитромицин).

2. Комбинированное введение омепразола, амоксициллина и кларит-ромицина на фоне развития выраженных явлений энтерита приводит к нейтропении, лимфоцитозу, росту фагоцитоза и снижению НСТ-теста, снижению содержания вторичных продуктов ПОЛ в крови, тканях кишечника, печени и селезенки.

3. Комбинация омепразола и эмоксипина в изученных дозах по сравнению с изолированным введением омепразола способствует повышению активности фагоцитоза, ограничивает снижение количества нейтрофилов и предупреждает рост генерации гранулоцитами свободных радикалов кислорода, снижает содержание вторичных продуктов перекисного окисления липидов в крови, тканях желудка, кишечника, селезенки.

4. Комбинированное использование амоксициллина и эмоксипина позволяет снизить содержание эозинофилов и уровень НСТ-теста, повышает содержание ^ А, способствует снижению содержания вторичных продуктов ПОЛ в сыворотке, эритроцитах и повышению активности каталазы в эритроцитах и печени, а также росту расчетных показателей антиокислительной активности в селезёнке, тканях тонкой кишки и печени по сравнению с данными

на фоне введения амоксициллина в виде монотерапии.

5. При комбинации кларитромицина с эмоксипином по сравнению с введением кларитромицина в виде монотерапии предотвращает развитие эози-нофилии, повышает содержание Ig М и Ig А, моноцитов, снижает уровень НСТ-теста и способствует восстановлению содержания вторичных продуктов ПОЛ в сыворотке крови, эритроцитах и тканях желудка и кишечника до уровня интактной группы на фоне роста антиоксидантной защиты печени, селезенки, тонкой кишки и крови.

6. Дополнительное применение эмоксипина на фоне комбинированного введения омепразола, амоксициллина и кларитромицина способствовало росту антиоксидантной защиты сыворотки крови и эритроцитов и не оказывало значимого влияния на изученные показатели иммунной защиты в сыворотке крови и активности процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Необходимо осторожно подходить к назначению препаратов антихелико-бактерной терапии у пациентов с нарушениями неспецифического иммунитета и проводить контроль лейкоформулы.

Полученные результаты обосновывают целесообразность дальнейших клинических исследований возможности применения эмоксипина с иммуномо-дулирующей целью на фоне введения омепразола, амоксициллина или кларитромицина.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Динамика показателей перекисного окисления липидов на фоне введения гастрозола, амоксициллина, кларитромицина / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, О.М. Кияйкина II XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тезисы докладов. - Москва. - 2007. -С. 216.

2. Изменение некоторых показателей иммунитета на фоне введения гастрозола, амоксициллина, кларитромицина / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, О.М. Кияйкина // XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тезисы докладов. - Москва. - 2007. - С. 216-217.

3. Анализ влияния препаратов эрадикационной терапии на показатели перекисного окисления липидов и иммунной системы в эксперименте / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, О.М. Кияйкина // Материалы «Юбилейной Российской научной конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения С. П. Боткина». - Санкт-Петербург. - 2007. - С.68-69.

4. Влияние противоязвенной терапии на показатели перекисного окисления липидов в эксперименте / A.B. Стеньшина // Материалы XII научной

конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева: в 2 ч. Ч. 2: Естественные и технические науки. - Саранск. - 2007. - С.14-15.

5. Влияние гастрозола, амоксициллина и кларитромицина на некоторые показатели перекисного окисления липидов в желудке / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, Е.И. Ямашкина // Материалы XIII Российской Гастроэнтерологической недели, 22-24 октября 2007г., г. Москва.

- Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктоло-гии. - 2007. - Том XVII. - №5. - Приложение № 30 - С. 130.

6. Влияние препаратов первой линии эрадикационной противоязвенной терапии на процессы липопероксидации в печени в эксперименте / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, Е.И. Ямашкина // Материалы XIII Российской конференции «Гепатология сегодня», 17-19 марта, 2008 г., г. Москва. - Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 2008. - Том XVIII. - №1. - Приложение № 31 -С. 84.

7. Влияние эмоксипина на лейкоформулу крови при экспериментальном введении амоксициллина и кларитромицина / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, Е.И. Ямашкина // Материалы XIV Российской Гастроэнтерологической недели, 6-8 октября 2008г., г. Москва. - Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 2008.

- Том XVIII. - №5. - Приложение № 32 - С. 149.

8. Свободнорадикальные процессы в двенадцатиперстной кишке при использовании препаратов антигеликобактерной терапии в эксперименте / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, В.М. Мамыкина, Е.И. Ямашкина // Материалы XIV Российской Гастроэнтерологической недели, 6-8 октября 2008г., г. Москва. - Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - 2008. - Том XVIII. - №5. - Приложение № 32 - С. 149.

9. Влияние гастрозола, амоксициллина и кларитромицина при монотерапии и комплексном введении на процессы липопероксидации в тонком кишечнике / A.B. Стеньшина, A.B. Зорькина, Н.В. Кочеткова, О.В. Султанова // Научные труды IX международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» «Влияние космической погоды на биологические системы в свете учения A.JI. Чижевского», 27-30 ноября 2008 г., г. Москва. - С. 463-464.

10. Влияние эмоксипина на содержание иммуноглобулинов в условиях моделирования комплексной антихеликобактерной терапии / A.B. Стеньшина, Е.И. Горшенина // Материалы XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молодые учёные в медицине», 29-30 апреля 2009г., г. Казань. - Приложение к журналу «Городское здравоохранение». - С. 140.

11. Влияние препаратов первой линии эрадикационной терапии на процессы липопероксидации в тканях паренхиматозных органов / A.B. Стеньшина // Материалы XV Российской Гастроэнтерологической недели, 12-14 октября 2009г., г. Москва. - Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепа-тологии, Колопроктологии. - 2009. - Том XIX. - №5. - Приложение № 34 -С.137.

12. Влияние эмоксипина на некоторые показатели иммунной защиты на фоне введения препаратов первой линии эрадикационной терапии / A.B. Зорькина, A.B. Стеньшина // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. -2010. -№!.- С. 13-17.

Подписано в печать 15.04.10. Объем 1,25 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 641. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

Инфекция Helicobacter pylori (Hp) широко распространена во всём мире: до 60% популяции земного шара инфицировано этими микроорганизмами, значимость которых в развитии хронического гастрита, язвенной болезни, рака желудка и MALT-лимфомы уже не подвергается сомнению (Григорьев П.Я. с соавт, 2002; Perez G.I. et al., 2004; Martel de C. et al., 2005). А в последние 7-10 лет стали появляться сообщения о возможной его связи с заболеваниями других органов, т.е. проблема хеликобактериоза вышла далеко за пределы желудка - основной экологической ниши Hp (Горячкина Л.А., Борзова Е.Ю., 2004; Соколова Т.В., 2004; Карельская И.А., Игнатьев В.К., 2005; Ильченко А.А., 2008; Хлынова О.В., Туев А.В., 2009; Tsang K.W. et al.,2000).

Основным методом лечения Helicobacter pylori-зависимых заболеваний является прежде всего проведение эрадикационной терапии (Васильев Ю.В., 2007; Циммерман Я.С., 2007, 2009; Щербаков П.Л., 2008).

Существующие схемы лечения хеликобактерной инфекции предусматривают использование в различных комбинациях двух антибактериальных препаратов в сочетании с антисекреторным средством (Хуцишвили М.Б., Рапопорт С.И., 2002). В России наибольшее распространение получили омепразол, амок-сициллин и кларитромицин (Лазебник Л.Б., Хомерики С.Г., 2008; Ющук Н.Д., Маев И.В., 2008). Этот, в своё время эмпирически разработанный состав, имеет серьёзное обоснование — данные средства взаимно усиливают эффект друг друга.

Однако столь мощная антибактериальная терапия нередко приводит к развитию аллергических реакций, гематологических нарушений, различных побочных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта (Мироджов Г .К. с соавт., 2007), органов дезинтоксикации, иммунной системы и ряда других (Маев И.В. с соавт., 2002; Козлова И.В. с соавт., 2005). В том числе, одним из механизмов развития побочных эффектов может быть активация процессов перекисного окисления липидов (Хомерики Н.М., Хомерики С.Г., 2005), что само по себе является интересным объектом для терапевтического воздействия

Немаловажным является и тот факт, что в ходе антибактериальной терапии возрастает количество кокковых форм, а любое ухудшение условий обитания Hp создаёт опасность активации окислительных ферментов микроорганизма с усилением генерации активных форм кислорода в слизистой оболочке желудка (Исаков В.А., Домарадский И.В., 2003). Учитывая имеющиеся перекис-но-иммунологические параллели (основными продуцентами активных форм кислорода являются фагоциты) и данные о влиянии на иммунологический статус антиоксидантов, представляется целесообразным изучить возможность коррекции изменений ряда параметров перекисного и иммунного гомеостаза путём дополнительного назначения лекарственных средств с антиоксидантным типом действия (Подопригорова В.Г., 2000, 2004).

В последнее время получены экспериментальные данные, свидетельствующие об антиульцерогенном эффекте лекарственных средств с антиокси-дантной активностью (Начкина Э.И. с соавт., 2001; Ямашкина Е.И. с соавт., 2004; Куняева Т.А., 2005; Бунятян Н.Д. с соавт., 2007), в том числе и эмоксипина (Зорькина А.В. с соавт., 2001). Препарат ингибирует свободнорадикаль-ные стадии синтеза простагландинов, катализируемых циклооксигеназой и ли-пооксигеназой, соотношение простациклин / тромбоксан А2 и тормозит образование лейкотриенов (Смирнов Л.Д. с соавт., 1989), играющих ведущую роль в процессе язвообразования. Перспективы его применения подтверждаются и обнадеживающими данными использования препарата в лечении язвенной болезни (Подопригорова В.Г., 2000, 2004).

Вышесказанное обуславливает целесообразность исследования возможных побочных фармакологических эффектов комбинированного применения эмоксипина с препаратами, входящими в комплекс антихеликобактерной терапии.

Данная работа является разделом комплексных программ исследований Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарёва «Коррекция побочного действия лекарственных средств» (номер государственной регистрации темы 01.2.00004102) и «Оптимизация фармакологической терапии соматической и психической патологии» (номер государственной регистрации темы 01.2.00704781).

Цель работы: изучить возможность коррекции изменений ряда показателей иммунитета и перекисного окисления липидов на фоне введения омепра-зола, амоксициллина, кларитромицина и их комбинации путем дополнительного применения эмоксипина в эксперименте.

В соответствии с поставленной целью в ходе выполнения работы решались следующие задачи:

1. Исследовать влияние омепразола, амоксициллина и кларитромицина при их комплексном введении и в виде монотерапии на некоторые показатели иммунитета, клеточного состава, периферической крови и перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов подопытных животных.

2. Оценить влияние, оказываемое эмоксипином, на некоторые показатели перекисного окисления липидов при его комбинированном применении с омепразолом, амоксициллином и кларитромицином.

3. Изучить некоторые показатели клеточного и гуморального иммунитета при сочетанном введении комплекса препаратов антихеликобактерной терапии и эмоксипина в эксперименте.

Научная новизна.

В представленной работе показано, что комбинированное применение эмоксипина и омепразола оказывает позитивное влияние на показатели иммунитета, способствуя повышению активности фагоцитоза, ограничивая выраженность развивающейся нейтропении и активацию процессов перекисного окисления липидов в крови, тканях желудка, кишечника, селезенки, наблюдающиеся на фоне введения омепразола. Отмечено, что дополнительное применение эмоксипина на фоне введения амоксициллина снижает эозинофилию, уровень генерации активных форм кислорода нейтрофилами и активность процессов перекисного окисления липидов в крови, способствует росту антиокси-дантной защиты эритроцитов, тканей печени, селезёнки, тонкой кишки, повышает содержание иммуноглобулина А по сравнению с данными на фоне введения амоксициллина.

Показано снижение содержания эозинофилов, повышение иммуноглобулинов М и А, снижение уровня генерации активных форм кислорода нейтрофилами на фоне роста антиоксидантной защиты крови и тканей внутренних органов при комбинации кларитромицина с эмоксипином по сравнению с введением антибиотика в виде монотерапии.

Выявлено, что дополнительное применение эмоксипина на фоне комбинированного введения препаратов антихеликобактерной терапии (омепразола, амоксициллина и кларитромицина) не оказывает существенного значимого влияния на показатели иммунной защиты и активность процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов, но способствует росту антиоксидантной защиты сыворотки крови и эритроцитов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Введение омепразола, амоксициллина, кларитромицина и их комбинаций в изученных дозах оказывает достоверное влияние на клеточный состав периферической крови, отдельные показатели иммунитета и активность процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов.

2. Дополнительное применение эмоксипина на фоне введения омепразола, амоксициллина, кларитромицина и их комплексного использования оказывает влияние на некоторые показатели клеточного и гуморального иммунитета.

3. Одновременное введение с препаратами, входящими в комплекс эра-дикационной терапии, эмоксипина достоверно влияет на состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантную защиту в крови и тканях изучаемых внутренних органов.

Практическая значимость диссертационного исследования

Полученные результаты расширяют представления о механизмах побочных эффектов комплексной антихеликобактерной терапии и позволяют прогнозировать возможные изменения показателей клеточного состава крови, иммунитета, процессов перекисного окисления липидов, развивающиеся при курсовом введении омепразола, амоксициллина и кларитромицина, а также наметить перспективы коррекции иммунологических нарушений путем дополнительного использования эмоксипина.

Апробация работы

Результаты проведённого исследования и основные положения диссертации доложены на XIV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007); XIII, XIV и XV Российской Гастроэнтерологической неделе (Москва 2007, 2008, 2009); Юбилейной Российской научной конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения С.П. Боткина (Санкт-Петербург, 2007); XII научной конференции молодых учёных, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета (Саранск, 2007); XIII Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2008); IX Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2008); XIV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молодые учёные в медицине» (Казань, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, в том числе 1 — в издании, рекомендованном ВАК.

Структура и объём работы

ВЫВОДЫ

1. Курсовое введение омепразола, амоксициллина или кларитромицина приводит к развитию относительной нейтропении, эозинофилии, росту генерации активных форм кислорода нейтрофилами, снижению анти-оксидантной защиты в эритроцитах, к снижению фагоцитоза (омепразол), росту содержания вторичных продуктов ПОЛ в крови (омепразол, амоксициллин), в желудке, тонком и толстом кишечнике (амоксициллин), росту содержания циркулирующих иммунных комплексов в крови (омепразол, амоксициллин) и снижению иммуноглобулина А (амоксициллин, кларитромицин).

2. Комбинированное введение омепразола, амоксициллина и кларитромицина на фоне развития выраженных явлений энтерита приводит к нейтропении, лимфоцитозу, росту фагоцитоза и снижению НСТ-теста, снижению содержания вторичных продуктов ПОЛ в крови, тканях кишечника, печени и селезенки.

3. Комбинация омепразола и эмоксипина в изученных дозах по сравнению с изолированным введением омепразола способствует повышению активности фагоцитоза, ограничивает снижение количества нейтрофи-лов и предупреждает рост генерации гранулоцитами свободных радикалов кислорода, снижает содержание вторичных продуктов перекисного окисления липидов в крови, тканях желудка, кишечника, селезенки.

4. Комбинированное использование амоксициллина и эмоксипина позволяет снизить содержание эозинофилов и уровень НСТ-теста, повышает содержание Ig А, способствует снижению содержания вторичных продуктов ПОЛ в сыворотке, эритроцитах и повышению активности каталазы в эритроцитах и печени, а также росту расчетных показателей антиокислительной активности в селезёнке, тканях тонкой кишки и печени по сравнению с данными на фоне введения амоксициллина в виде монотерапии.

5. При комбинации кларитромицина с эмоксипином по сравнению с введением кларитромицина в виде монотерапии предотвращает развитие эозинофилии, повышает содержание Ig М и Ig А, моноцитов, снижает уровень НСТ-теста и способствует восстановлению содержания вторичных продуктов ПОЛ в сыворотке крови, эритроцитах и тканях желудка и кишечника до уровня интактной группы на фоне роста антиоксидантной защиты печени, селезенки, тонкой кишки и крови.

6. Дополнительное применение эмоксипина на фоне комбинированного введения омепразола, амоксициллина и кларитромицина способствовало росту антиоксидантной защиты сыворотки крови и эритроцитов и не оказывало значимого влияния на изученные показатели иммунной защиты в сыворотке крови и активности процессов перекисного окисления липидов в крови и тканях внутренних органов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Необходимо осторожно подходить к назначению препаратов антихеликобактерной терапии у пациентов с нарушениями неспецифического иммунитета и проводить контроль лейкоформулы.

Полученные результаты обосновывают целесообразность дальнейших клинических исследований возможности применения эмоксипина с иммуно-модулирующей целью на фоне введения омепразола, амоксициллина или кларитромицина