Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние некоторых производных 3-оксипиридина на противоопухолевую активность этопозида и метотрексата.

На правах рукописи

003488720

МАЛАНЬИНА ЕКАТЕРИНА СЕРГЕЕВНА

ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 3-ОКСИПИРИДИНА НА ПРОТИВООПУХОЛЕВУЮ АКТИВНОСТЬ ЭТОПОЗИДА И МЕТОТРЕКСАТА (экспериментальное исследование)

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 3 ДЕК 2009

Старая Купавна -2009

003488720

Работа выполнена на кафедре поликлинической терапии и функциональной диагностики ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н. П. Огарева»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Зорькина Ангелина Владимировиа

Научный консультант:

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Галенко - Ярошевский Павел Александрович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Березовская Ирина Владимировна

доктор медициснких наук, профессор Моисеева Инесса Яковлевна

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет»

Защита состоится «_»_2009 года в_часов на заседании

Диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (142450, Московская область, пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ.

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Л.В. Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Злокачественные новообразования остаются одной из актуальных проблем клинической медицины (Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В., 2004; Wingo P.A., Tong Т., Bolden S., 1995). Причем, значительное количество пациентов выявляются в поздних стадиях, что обуславливает актуальность вопросов паллиативного лечения как для медицинской общественности, так и для общества в целом. Основным методом лечения в этом случае является химиотерапия.

Известно, что одним из патофизиологических факторов возникновения и развития онкологических заболеваний является активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Залесский В.Н., Великая Н.В., 2003). Однако широкому использованию антиоксидантных препаратов в клинической практике препятствует их недостаточно изученное взаимодействие с элементами современной общепринятой схемы комплексного химиотерапевтического лечения онкологических больных (Бурлакова Е.Б., 1998; Аксель Е.М. с соавт., 2001). И хотя ряд работ отражает возможность повышения противоопухолевой эффективности отдельных цитостатиков при их комбинированном применении с антиоксидантами, полученные результаты не могут быть перенесены на все компоненты комплексного химиотерапевтического лечения и нуждаются в дальнейших подробных исследованиях, касающихся конкретных схем комбинированного применения (Богдашкина О.Н., 2002; Есина

0.В., 2003; Абдельгафур Омар А.Ю., 2003; Скопин П.И. с соавт., 2005; Kang S.W., Shae H.Z., Seo M.S. 1998). Интересна в этом отношении разработка применения отечественных производных 3-оксипиридина, оказывающих широкий спектр фармакологического воздействия.

Выполненная работа является разделом комплексной программы исследований Мордовского государственного университета «Фармакологическая коррекция повреждений, возникающих при гипоксических, токсических и радиационных воздействиях». Номер государственной регистрации темы 01200004103.

Целью работы явилось изучение влияния производных 3-оксипиридина - эмоксипина и мексидола на некоторые показатели эндотоксикоза мышей линии BDF1 и противоопухолевую активность этопозида и метотрексата в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16.

В ходе проводимых исследований решались следующие задачи:

1. Исследовать влияние эмоксипина и мексидола на острую токсичность этопозида и метотрексата.

2. Изучить влияние этопозида и метотрексата, а также их комбинации с эмок-сипином и мексидолом на продолжительность жизни мышей в условиях роста меланомы В16 и карциномы Льюиса.

3. Исследовать влияние мексидола и эмоксипина на некоторые показатели противоопухолевой активности этопозида и метотрексата в условиях роста меланомы В16 и карциномы Льюиса.

4. Изучить влияние дополнительного применения мексидола и эмоксипина на некоторые метаболические показатели, данные электролитного и клеточного состава периферической крови мышей линии BDF1 на фоне введения этопози-да и метотрексата.

Научная новизна. Показано отсутствие достоверного влияния производных 3-окспиридина в изученных дозах на острую токсичность этопозида и метотрексата. Отмечено увеличение продолжительности жизни мышей линии BDF1 при комбинированном применении эмоксипина или мексидола с этопозидом или метотрексатом на фоне роста карциномы Льюиса LLC и при комбинации с этопозидом приросте меланомыВ16. Показано повышение противоопухолевого эффекта этопозида и метотрексата при комбинации с производными 3-оксипиридина.

При комбинации этопозида с эмоксипином или мексидолом отмечено ограничение или предотвращение развития лейкопении, увеличение количества тромбоцитов в условиях роста карциномы Льюиса, предотвращение развития анемии при росте меланомы, ограничение маркеров цитолиза и нарушений белкового и углеводного обмена. При комбинации метотрексата с эмоксипином или мексидолом в условиях экспериментальной неоплазии выявлено снижение количества тромбоцитов, повышение количества эритроцитов, гемоглобина, снижение содержания калия и магния, рост маркеров цитолиза, снижение содержания общего белка.

Научно-практическая ценность работы. Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием целесообразности дальнейших клинических исследований возможности дополнительного применения эмоксипина и мексидола на фоне введения этопозида и метотрексата с целью усиления противоопухолевой активности препаратов химиотерапии. Положения, выносимые на защиту:

1. Эмоксипин и мексидол в изученных дозах не оказывают достоверного влияния на острую токсичность этопозида и метотрексата.

2. Комбинированное применение этопозида и метотрекстата с производными 3-оксипиридина способствует усилению противоопухолевого эффекта химиопрепаратов и увеличению продолжительности жизни подопытных животных в условиях экспериментальной неоплазии.

3. Комбинация этопозида и метотрексата с производными 3-оксипиридина оказывает корригирующее влияние на ряд показателей клеточного состава крови, данные белкового, углеводного обмена и электролитного состава плазмы крови в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16 в эксперименте.

Апробация работы.

Результаты работы и основные положения, полученные в результате собственных исследований, доложены на XI-X11I науч. конф.молодых ученых, ас-

пирантов и студентов мед.факультета Мордовского госуниверситета «Медицинские проблемы жизнедеятельности в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2007, 2008); на научно-практич. конф мед.факультета «Применение цитопротекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний» (Саранск, 2008); XIV и XV Российских национальных Конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2008); на научной конференции Мордовского госуниверситета «XXXVI Огаревские чтения» (Саранск, 2008);

По теме диссертационного исследования опубликовано 8 работ, в том числе одна - в издании, рекомендованном ВАК (Уральский медицинский журнал).

Структура и объем работы. Диссертация включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, четыре главы собственных исследований, обсуждение полученных результатов, выводы, практические рекомендации и список использованной литературы, содержащий 196 источников, из которых 113 отечественных и 83 зарубежных. Работа изложена на 172 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 39 рисунками и 38 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе исследованы следующие препараты:

Этопозид - деметилпиподофиллотоксин 9-[4,6-0-11)-этилиден]-Ы> гликопиранозид - цитотоксический лекарственный препарат растительного происхождения, получаемый из экстракта мандрагоры. Влияет на позднюю 8 и С-2 фазы деления клеток, взаимодействует с системой клеточных микротрубочек и ингибирует топоизомеразу А2 и синтез ДНК. Применяется при мелкоклеточном раке легкого, раке яичка, молочной железы, хорионкарциноме, саркоме Юинга и т.д. В работе использован препарат Ластет («Ниппон Кайяку» Япония) в ампулах по 100мг/5мл в дозе 6,5 мг/кг (5% от ЬО50) в/м через 1 день 5 раз.

Метотрексат - (Ме1Ьо1гехаШт) - дезокси-4-амино-Ы метилфолиевая кислота, является антиметаболитом-антагонистом фолиевой кислоты, подавляет клеточный митоз, рост активно пролиферирующих тканей (в том числе костного мозга), тормозит рост злокачественных новообразований. Назначают при остром лимфобластном, миелобластном лейкозе, лимфосаркоме, при комбинированной химиотерапии у больных раком молочной железы, легкого, саркоме Юинга и т.д. В работе использовался препарат Веро-метотрексат производства ООО «ЛЭНС-Фарм» (Россия) в ампулах для инъекций по 50 мг/Змл. В эксперименте вводился в дозе 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза.

Эмоксипин - 3-окси-6-метил-2-этил-пиридина гидрохлорид, вещество относящееся к классу р-оксипроизводных азотистых гетероароматических ан-тиоксидантов, обладает антигипоксической, ангиопротекторной, антиагрегаци-

онной активностью. Отмечен выраженный адаптирующий эффект препарата при различных стрессорных воздействиях (Логинов В.И., 1993; Зорькина A.B., 1997), при гипоксии (Гербильский Л.В., 1993; Чукаев С.А. с соавт., 1993), гипо-барической оксигенации (Косолапов В.А: с соавт., 1994). В работе использован препарат эмоксипин производства Московский эндокринный завод 1%-1,0 в ампулах в дозе 17 мг/кг, примерно соответствующей 5%otLD50.

Мексидол - 3-окси-6-метил-2-этил-пиридина сукцинат - относится к классу ß-оксипроизводных азотистых гетероароматических антиоксидантов (Смирнов Л.Д. с соавт., 1992, 2001; Нестерова E.H., 1997; Воронина Т.А. с соавт., 2001, 2003), оказывает ингибирующее влияние на ферментативное и неферментативное ПОЛ (Базанов Г.А., 1995), обладает широким спектром фармакологической активности (Дюмаев K.M. с соавт., 1995; Гофман с соавт., 1997; Иванов Ю.В., Яснецов В.В., 2000). Оказывает антиишемическое, антиги-поксическое (Артюков О.П., 1997), антиамнестическое, анксиолитическое, ан-тистрессорное и противосудорожное действие (Меринг Т.А. с соавт., 1991), обладает антиоксидантными и мембранопротекторными свойствами (Дюмаев K.M. с соавт., 1997). В работе использовался препарат мексидол 5% раствора для инъекций производства ООО «Фармасофт» в дозе 33 мг/кг, условно соответствующей 5% от LDso.

Острая токсичность этопозида и метотрексата была изучена на нелинейных белых мышах обоего пола массой 20-25 г. LD5o при однократном внутримышечном введении оценивалась по методу Литчфилда-Уилкоксона. Исследуемые препараты эмоксипин и мексидол вводились однократно внутрибрю-шинно за 30 минут до введения цитостатиков в дозах 17 мг/кг и 33 мг/кг соответственно.

В ходе эксперимента использованы две модели неоплазии, создаваемые путем перевивки опухолевых штаммов - саркома Льюиса LLC и меланома мышей В-16 (НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН) на 174 мышах-самках линии BDF1. Перевивка опухоли осуществлялась под кожу в правую подмышечную область с соблюдением асептики.

Продолжительность жизни изучалась на 84 мышах линии BDF1 с перевитыми опухолями (табл.1).

В третьем этапе экспериментов исследовали влияние изучаемых комбинаций на ряд показателей гомеостаза организма опухоленосителя и параметры роста опухоли (на 90 мышах-самках линии BDF1). Было поставлено 14 опытных серий (препараты и дозы аналогичны указанным в табл. 1). Интактную группу составили 6 животных. Оценка результатов проводилась на 16 сутки после перевивки опухоли. Эвтаназия животных осуществлялся гильотинным способом после внутрибрюшного введения раствора тиопентала натрия в дозе 50 мг/кг.

Таблица 1.

Структура эксперимента (продолжительность жизни мышей линии ВЭР1 в условиях экспериментальной неоплазии)

№ Условия проведения исследования п

1 0,9% р-р №С1 -0,5 мл в/м в течение 14 суток (контроль) 6

2 Этопозид 6,5 мг/кг (5% от ЬО50) в/м через 1 день 5 раз 6

3 Этопозид 6,5 мг/кг (5% от 1^05о) в/м через 1 день 5 раз +эмоксипин 17 мг/кг в/м ежедневно 14 суток 6

4 я и о Этопозид 6,5 мг/кг (5% от ЬО50) в/м через 1 день 5 раз + мекси-дол 33 мг/кг в\м ежедневно 14 суток. 6

5 J ч Метотрексат в/м 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза. 6

9 л 5? а Метотрексат 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза +эмоксипин 17 мг/кг в/м ежедневно 14 суток 6

10 я ь Метотрексат 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза

о а. + мексидол 33 мг/кг в\м ежедневно 14 суток

И Физиологический раствор 0,5 мл в/м 14 суток (контроль) 6

12 Этопозид 6,5 мг/кг (5% от ЬО50) в/м через 1 день 5 раз 6

13 1-4 м 3 Этопозид 6,5 мг/кг (5% от ЬОм) в/м через 1 день 5 раз +ЭМОКСИПИН 17 мг/кг в/м ежедневно 14 суток 6

14 о X а Ч Этопозид 6,5 мг/кг (5% от Ь[)50) в/м через 1 день 5 раз + мексидол 33 мг/кг в\м ежедневно 14 суток. 6

18 S Метотрексат в/м 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза. 6

19 о в. Метотрексат 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза +эмоксипин 17 мг/кг в/м ежедневно 14 суток 6

20 Метотрексат 13 мг/кг 2 раза в неделю 4 раза + мексидол 33 мг/кг в\м ежедневно 14 суток 6

Всего 84

Оценивали массу животных опухоленосителей, массу первичного опухолевого узла, рассчитывали индекс массы опухоли (ИМО), индекс торможения роста опухоли (ИТРО), собственную массу животного (без учета веса опухоли).

В плазме крови определяли уровень креатинина по цветной реакции Яффе, мочевины по диацетилмоноксимному методу, активность аланиновой (AJ1T) и аспарагиновой (ACT) трансаминаз методом Райтмана-Френкеля (1980), содержание глюкозы - глюкооксидазным методом по окислению О-толуидина (Меньшиков В.В., 1987), содержание общего белка и альбуминов. В плазме крови определяли некоторые показатели электролитного состава: содержание хлора (С1), магния (Mg), калия (К), натрия (Na). В печени, миокарда и легких,

в ткани опухоли определяли содержание малонового диальдегида при спонтанном (МДА) и железоиндуцированном окислении (РеМДА) (С.Г. Конюхова, 1989), рассчитывали антиокислительную активность (АОА) (Клебанов Г.И., 1999), определяли активность каталазы (М.А. Королюк, 1988) и супероксид-дисмутазы (СОД) по методу С. Чевари (1990). Рассчитывали резерв липидов для перекисного окисления по формуле [РЛПО=(РеМДА-МДА)/МДА] (Кузь-менко Д.И., Лаптев Б.И., 1999).

Для биохимических исследований использовали спектрофотометр «СФ-46» и фотоэлектроколориметр «КФК-2 МП».

Гематологические методы исследования включали определение содержания гемоглобина в крови, количества эритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, анализ лейкоформулы, величиныгематокрита и цветного показателя (ЦП).

Для гистологического исследования участки опухоли центральной и периферической зон фиксировались в 10% буферном растворе формалина, заливались парафином. Депарафинированные срезы окрашивались гематоксилином и эозином, заключались в смолу канадского клена. Гистологические препараты для подсчета количества митозов просматривали с использованием светового бинокулярного микроскопа (Карамышева А.Ф., 2000).

Результаты исследования обрабатывали методами вариационной стати-сти-ки на персональном компьютере с использованием программы Exel путем расчёта средних арифметических (М) и ошибок средних (±ш). Достоверность различий (р) между сравниваемыми вариационными рядами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента, методики Изменения считали достоверными, если р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Эмоксипин и мексидол в изученных дозах не оказали достоверного влияния на острую токсичность этопозида, метотрексата и доксорубицина при внутримышечном введении (табл.2), хотя и наблюдалась некоторая тенденция к снижению токсичности препаратов сравнения.

Комбинированное применение эмоксипина с этопозидом и метотрексатом позволило увеличить продолжительность жизни мышей линии BDF1 при росте карциномы Льюиса LLC по сравнению с показателями контрольной группы соответственно на 63% и 110%, а мексидола соответственно на 83% и 110%. При этом комбинированное введение метотрексата и эмоксипина увеличивало продолжительность жизни мышей по сравнению с введением метотрексата в виде монотерапии на 69% (табл.3).

Комбинированное применение этопозида и эмоксипина в отличие от введения только этопозида привело к увеличению продолжительности жизни мышей на 32% на фоне роста меланомы В,6. Комбинация этопозида с мексидолом увеличила продолжительность жизни животных на 87% по сравнению с кон-

трольной группой и на 65% по сравнению с данными группы с введением этопозида в виде монотерапии.

Таблица 2.

Исследование влияния эмоксипина (Э) и мексидола (М) на острую токсичность _ этопозида, доксорубицина и метотрексата_

Исследуемый препарат По методу Литчфилда и Уилкоксона

Интервал LDS0 М±ш

Этопо-зид - 128(106,6- -53,6) 128±25,6

Эмоксипин 160(147,5- -173,6) 160±13,6, р>0,05

Me кс идол 181 (168,3- -194,5) 181±13,5, р>0,05

Мето-трексат - 258 (237,7 - - 279,9) 258±21,9

Эмоксипин 285 (257,9 - -314,9) 285±29,9, р>0,05

Мексидол 314(292-337,5) 314±23,5, р>0,05

Примечание: достоверность различия р рассчитана к данным группы с введением соответствующего препарата сравнения.

Таблица 3.

Влияние комбинированного применения этопозида и метотрексата с эмокси-пином и мексидолом на продолжительность жизни мышей линии ВЭР! в усло-

виях экспериментальной неоплазии (М±т)

Условия проведения эксперимента Продолжительность жизни, сутки

Карцинома Льюиса LLC Меланома В|б

Контроль 14,5±2,1 18,20±1,66

Этопозид 19,20±3,35 20,60±1,89

Этопозид +Эмоксипин 23,60±3,27* 24,0±2,0*

Этопозид +Мексидол 26,6±3,1* 34,00±3,39*#

Метотрексат 18,00±1,58 18,4±2,7

Метотрексат +Эмоксипин 30,4±4,0*# 23,20±2,97

Метотрексат +Мексидол 30,5±5,3*# 26,00±3,61

Примечание: * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными контрольной группы, # - с показателями серии с введением соответствующего препарата сравнения.

Комбинация метотрексата с эмоксипином или мексидолом на фоне роста карциномы увеличивала продолжительность жизни животных на 69%. В условиях роста меланомы В16 указанные комбинации не оказывали достоверного влияния на показатель.

В сериях с исследованием роста карциномы Льюиса LLC применение этопозида в изученной дозе позволило снизить массу первичного опухолевого узла на 32%, снижалась собственная масса животных на 13% (табл. 4). Комби-

нация этопозида и эмоксипина не оказала достоверного влияния по сравнению с монотерапией этопозидом на массу опухоли и ИТРО, но в отличие от указанной группы сравнения привела к снижению ИМО от показателей контроля на 31%. Особенностью комбинации явилось также увеличение общей массы животных за счет роста собственной массы тела. Применение комбинации мекси-дола и этопозида привело к снижению массы опухоли и ИМО по сравнению с показателями монотерапии этопозидом на 57% и 58% соответственно и к увеличению ИТРО на 86% и собственной массы животных.

Таблица 4.

Влияние комбинированного применения этопозида и метотрексата с эмоксипи-ном (Э) и мексидолом (М) на некоторые показатели роста опухоли карциномы

Льюиса LLC (M±m)

Опытные серии Собственная Масса ИМО ИТРО

масса, г опухоли, г % %

Интактные 25,58±0,54 - - -

Контроль 25,37±0,22 4,05±0,33 13,58±0,90 -

Этопозид 22,17±0,77* 2,75±0,40* 11,06±1,53 38,27±9,27

Этопозид+Э 24,15±0,52*# 2,50±0,41* 9,39±1,54* 45,68±8,52

Этопозид+М 24,00±0,45*# 1,17± 0,22*# 4,66±0,87*# 71,19±5,36#

Метотрексат 25,55±0,44 4,02±0,44 13,47±1,3 10,08±4,78

Метотрексат+Э 21,40±0,47°*# 3,18±0,29 12,92±1,09 25,44±5,17#

Метотрексат+М 22,17±0,35°*# 2,17±0,22*# 8,88±0,85*# 46,5±5,36#

Примечание: 0 - достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными ин-тактной группы, * - с показателями контроля, # - с данным серии с введением соответствующего препарата сравнения в виде монотерапии.

На фоне роста меланомы Bi6 применение этопозида в изученной дозе не привело к достоверному уменьшению массы опухоли и ИМО по сравнению с контролем (табл. 5). Наблюдалось уменьшение собственной массы животных. Комбинированное использование этопозида и эмоксипина уменьшило массу опухоли по сравнению с контрольной группой на 33%, что сопровождалось снижением собственной массы животных по сравнению с серией при введении только этопозида на 13% и ростом ИТРО на 82%. Комбинированное применение этопозида и мексидола снижало массу опухоли не только по сравнению с контролем, но и по отношению к показателям животных, получавших этопозид в виде монотерапии, на 57%. ИМО снижался на 55%, ИТРО - возрастал на 223% по сравнению с монотерапией этопозидом, увеличивался собственный вес животных.

Введение метотрексата на фоне роста карциномы Льюиса LLC в изученной дозе не влияло на массу опухоли и ИМО. Комбинированное применение метотрексата и эмоксипина привело к снижению собственной массы животных на 16%, ИТРО возрос в 2,5 раза по сравнению с данными введения метотрекса-

та. Комбинация мексидола и метотрексата привела к снижению массы опухоли на 46%, ИМО - на 34% и росту ИТРО в 4,6 раза по сравнению с введением ме-торексата. Собственная масса животных снижалась на 13%.

Таблица 5.

Влияние комбинированного применения этопозида и метотрексата с эмоксипи-ном (Э) и мексидолом (М) на некоторые показатели роста опухоли меланомы

В16 (М±т)

Опытные серии Собственная Масса ИМО ИТРО

масса, г опухоли, г % %

Интактные 25,58±0,54 - - -

Контроль 24,27±0,46 5,23±0,401 17,75±1,35 -

Этопозид 22,25±0,49°* 4,17±0,35 15,77±1,15 20,30±6,01

Этопозид+Э 19,15±0,36°*# 3,50±0,26* 15,42±1,07 36,90±4,01#

Этопозид+М 23,7±0,50°# 1,80±0,49*# 7,02±1,93*# 65,58±9,44#

Метотрексат 19,65±0,15°* 4,60±0,28 18,87±0,91 12,90±4,40

Метотрексат+Э 21,87±0,37°*# 2,83±0,28*# 11,63±1,09*# 44,87±5,05#

Метотрексат+М 22,85±0,48°*# 1,82±0,24*# 7,32±0,84*# 65,27±4,17#

Примечание: ° - достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными ин-тактной группы, * - с показателями контроля, # - с данным серии с введением с ответствующего препарата сравнения в виде монотерапии.

Введение метотрексата на фоне роста меланомы привело к снижению собственной массы - на 19%. Не наблюдалось достоверной динамики массы опухоли, ИМО. ИТРО составил 12,9±4,4%. Комбинация метотрексата с эмоксипи-ном снижала массу опухоли на 38%, ИМО - на 38%, увеличивала ИТРО в 3,5 раза по сравнению с данными при введении метотрексата. Собственная масса животных возросла на 11%. Комбинация метотрексата с мексидолом привела к уменьшению массы опухоли на 60%, ИМО - на 61%, росту ИТРО в 5 раз и росту собственной массы тела на 16%.

На фоне роста карциномы Льюиса введение этопозида в изученной дозе снижало количество митозов на 27% (с 3,433±0,072 до 2,50±0,045, р<0,001) по сравнению с контрольной группой. Комбинированное применение этопозида и эмоксипина - еще на 37% (до 1,566±0,033, р<0,001), а этопозида и мексидола -на 56% (до 1,100±0,052, р<0,001) по сравнению с данными при введении этопозида. На фоне роста меланомы этопозид в изученной дозе приводил к снижению количества митозов в ткани опухоли на 36% (с 3,75±0,022 до 2,383±0,0873, р<0,001), а комбинация этопозида с эмоксипином - еще на 30% (до 1,633±0,042, р<0,001), с мексидолом - на 50% (до 1,200±0,0365, р<0,001) относительно серии с введением этопозида в виде монотерапии.

Введение метотрексата при росте карциномы Льюиса снижало количество митозов в ткани опухоли на 16% (до 2,883±0,0749, р<0,005) относительно контроля; комбинация метотрексата с эмоксипином - на 42% (до 1,667±0,056, р<0,001), а с мексидолом - на 53% (до 1,367±0,056, р<0,001) относительно данных на фоне введения только метотрексата. При росте меланомы метотрексат

снижал количество митозов на 33% (до 2,517±0,048, р<0,001); комбинация ме-тотрексата с эмоксипином - на 31% (до 1,733±0,021, р<0,001), а с мексидолом -на 49% (до 1,283±0,060, р<0,001) относительно данных с введением метотрек-сата в виде монотерапии.

В условиях экспериментальной неоплазии и введения цитостатических препаратов наблюдались изменения некоторых показателей электролитного состава сыворотки крови мышей линии BDF1. Так, на фоне роста карциномы Льюиса LLC снижалось содержание хлора на 13% (р<0,05), магния - на 38% (р<0,05), калия - на 26% (р<0,01), развивалась гипернатриемия (р<0,05). На фоне роста меланомы В]6 также наблюдалась гипохлоремия, гипомагниемия, ги-покалиемия.

120 100 80

40 20

□ Интактные ■ Контроль и Этопозид

□ Этопозид +ЭМОКСИПИН S Этопозид +Мексидол

120 100 80 60 40 20 0

Рис. 1. Влияние комбинированного применения этопозида, эмоксипина и мек-сидола на содержание электролитов в плазме крови мышей линии BDF1 при росте карциномы Льюиса LLC (А) и меланомы В16 (Б) (в % к данным интакт-ной группы). Примечание * - достоверность различия р<0,05 к данным интакт-ной группы; #- к данным контрольной группы; л - к данным группы с введением этопозида.

Этопозид купировал гипохлоремию и снижал уровень натрия (р<0,05) на фоне роста карциномы Льюиса LLC. На фоне комбинированного применения этопозида и эмоксипина восстанавливалось только содержание натрия. Комбинированное применение этопозида и мексидола привело к восстановлению всех изученных показателей электролитного обмена до уровня данных интактной группы. На фоне роста меланомы В16 введение этопозида и комбинации этопозида с эмоксипином в изученных дозах не влияло на содержание электролитов. Комбинированное введение этопозида и мексидола уменьшало выраженность гипокалиемии (р<0,005) и полностью предотвращало гипохлоремию.

Введение метотрексата на фоне роста карциномы Льюиса LLC привело к росту содержания калия на 20% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

При комбинированном введении метотрексата и эмоксипина предотвращалась гипернатриемия, но содержание калия было на 14% (р<0,05) ниже , чем при монотерапии метотрексатом. При комбинации мексидола и метотрексата все показатели не отличались от контрольных данных. На фоне роста меланомы В|6 введение метотрексата в изученной дозе также повышало содержание калия по сравнению с контрольными данными (на 21%, р<0,05). По сравнению с введением метотрексата в виде монотерапии, комбинированное применение метотрексата с эмоксипином привело к снижению содержания магния, а метотрексата и мексидола - магния (на 26%, р<0,05) и натрия (на 9%, р<0,05).

120 100 80 00 40 20

□ Интактные я Контроль 0 Метотрексат в Метотрексатч-эмоксипич ез Метотрексатч-мексидол___

120 100 80 60 40 20 0

Рис.2. Влияние комбинированного применения метотрексата, эмоксипина и мексидола на содержание электролитов в крови мышей линии BDFJ при росте карциномы Льюиса LLC (А) и меланомы В16 (Б) (в % к данным интактных животных). Примечание: ^достоверность отличия р<0,05 с данными интактной группы; # - с данными контроля, А - с данными введения метотрексата.

Рост карциномы Льюиса LLC привел к увеличению показателей цитоли-тического синдрома, росту содержания общего белка, альбуминов. При введении этопозида наблюдалось дальнейшее увеличение активности трансаминаз и рост мочевины, а также снижение содержания креатинина, общего белка и глюкозы. По сравнению с введением этопозида в виде монотерапии комбинация этопозида и эмоксипина снижала активность АЛТ - на 74%, ACT - на 58%. Наблюдался рост креатинина до 23,3±1,8 ммоль/л (р<0,001), содержания общего белка и глюкозы (до уровня интактной группы). Комбинация этопозида с мексидолом снижала активности АЛТ на 69%, ACT- на 44%, содержание альбуминов на 23%, увеличивала содержание креатинина на 51%, общего белка-на 10%, глюкозы - на 42% (табл.5). На фоне роста меланомы В,6 отмечалось увеличение содержания альбумина, мочевины и активности ACT (табл.6). Введение этопозида не влияло на изученные показатели. При комбинированном введении этопозида и эмоксипина возрастала активности ACT на 48%, АЛТ

снижалась на 27%. Снижалось содержание креатинИна на 38%, мочевины - на 18%, альбумина на 14% и глюкозы - на 23%. Общий белок возрастал. Комбинация этопозида с мексидолом снижала активности AJ1T на 40%, креатинин - на 36%, альбумин - на 39% и глюкозу - на 14%.

Введение метотрексата в условиях роста карциномы Льюиса LLC снижало активность АЛТ, содержание мочевины, общего белка, увеличивало уровень глюкозы по сравнению с контролем (табл. 6). На фоне комбинации метотрексата с эмоксипииом по сравнению с введением метотрексата снижалось содержания общего белка на 20%, глюкозы - на 28%, креатинина - на 44%, росло содержание мочевины на 28% и активность ACT. При комбинации метотрексата с мексидолом активность ACT повышалась на 42%, росло содержание мочевины на 46%, снижалось содержание креатинина на 45% и общего белка на 15%. Введение метотрексата на фоне роста меланомы привело к снижению активности трансаминаз, содержания альбуминов, мочевины (табл. 7). Комбинация с эмоксипином - к росту активности ACT на 51%, АЛТ на 20% (до уровня контроля), снижению содержания общего белка на 11%, креатинина на 46%, глюкозы на 25% и росту мочевины на 23% по сравнению с введением метотрексата в виде монотерапии. Комбинация с мексидолом - к росту активности АЛТ на 36% и ACT - на 43%, альбуминов - на 19%, снижению креатинина на 47%.

Дополнительное применение производных 3-оксипиридина оказало влияние на некоторые показатели процессов перекисного окисления липидов и ан-тиоксидантной защиты ткани опухоли. На фоне введения этопозида при росте карциномы Льюиса содержание МДА росло на 72%. При комбинации этопозида и эмоксипина показатель снижался по сравнению с введением только этопозида на 30%. При комбинации этопозида с мексидолом содержание МДА в ткани опухоли составило 3,55±0,05 ммоль/л (р>0,05), снижаясь на 38% по сравнению с данными введения этопозида (р<0,001). В условиях роста карциномы Льюиса LLC этопозид, а также комбинация этопозида с эмоксипином не оказали влияние на содержание РеМДА в ткани опухоли. При комбинации же этопозида с мексидолом показатель снижался на 23% (с 20,33±0,3 ммоль/л до 15,77±0,92 ммоль/л, р<0,05). При этом снижались и расчетные показатели -АОА и РЛПО. Активность СОД при введении этопозида (19,95±0,44 усл.ед), при комбинации с эмоксипином (20,55±0,24) и мексидолом (19,80±0,16) не менялась по сравнению с контролем (20,05±0,14, р>0,05).

В условиях роста меланомы В|б введение этопозида в изученной дозе привело к росту содержания МДА в ткани опухоли на 51% (с 3,98±1,18 ммоль/л до 6,0±0,17 ммоль/л, р<0,001). При комбинации с эмоксипином показатель снижался до уровня данных контрольной группы (3,48+0,74ммоль/л, р>0,05). На фоне комбинации с мексидолом содержание МДА не отличалось от монотерапии этопозидом. Содержание РеМДА при введении этопозида и при его комбинации с эмоксипином не менялось. Однако, при комбинации с мексидолом, показатель возрастал на 32% (с 22,62±0,60 ммоль/л при введении этопозида до 29,82±0,41 ммоль/л, р<0,001).

Таблица 6.

Влияние этопозида и метотрексата и их комбинации с производными 3-оксипиридина на некоторые биохимиче-_ские показатели плазмы крови при росте карциномы Льюиса LLC (M±m)_

Серии АЛТ ммоль/л ACT ммоль/л Альбумин г/л Общий белок, г/л Креатинин мкмоль/л Глюкоза ммоль/л Мочевина ммоль/л

Интактные 0,37+0,036 2,5310,25 16,5310,18 54,1110,98 14,23+1,15 8,84+0,22 11,9710,98

Контроль 1,06±0,22* 6,075±0,311* 29,82+1,57* 62,7+1,1* 14,411,1 8,2510,26 12,7910,66

Этопозид 1,64+0,30* 12,5811,49*# 27,68+1,65* 52,111,8 # 9,910,7*# 6,29+0,36*# 15,210,69*#

Этопозид+ эмоксипин 0,42+0,03# 5,30+0,59* 27,97+1,38* 59,0512,48 23,311,8*# 9,7110,59# 15,4210,46*#

Этопозид+ мексидол 0,51±0,08*# 7,09±0,71 * 21,4±1,4*# 57,310,9 *# 14,9311,41 8,88+0,48 16,1111,83 *

Метотрексат 0,5710,04*# 5,41+0,281* 19,8+0,5*# 59,110,9*# 15,9710,37 9,29+0,35# 10,24+0,34#

Метотрексат+ эмоксипин 0,628+0,034* 8,16±0,32*# 22,311,2*# 47,4±1,9*# 8,8810,42*# 6,65+0,89* 13,1510,64

Метотресат +мексидол 0,62510,029*# 7,75±0,30*# 21,32+1,02* 49,911,0*# 8,7810,36*# 9,2810,23# 14,9310,56*#

Примечание: достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными интактных животных, # - по сравнению с данными контроля, жирным шрифтом выделены показатели, достоверность отличия которых от данных с введением соответствующего препарата сравнения в виде монотерапии р<0,05.

Таблица 7.

Влияние этопозида, доксорубицина и метотрексата и их комбинации с производными 3-оксипиридина на неко-_торые биохимические показатели плазмы крови при росте меланомы В16 (М+т)__

Серии АЛТ мкмоль/л АСТ мкмоль/л Альбумин г/л Общий белок, г/л Креатинин мкмоль/л Глюкоза мкмоль/л Мочевина ммоль/л

Интактные 0,37+0,036 2,5310,25- 16,53+0,18 54,11±0,98 14,2311,15 8,84+0,22 11,9711,98

Контроль 0,653±0,02* 6,88±0,30* 32,78±2,44* 55,598±1,77 17,65+1,35 9,5710,46 14,1510,499*

Этопозид 0,683+0,048* 9,43+2,55* 33,8311,71* 52,18310,33 17,3511,37 9,8310,49 13,3311,08

Этопозид+ эмоксипин 0,497±0,039*# 13,9710,30*# 28,97±0,99* 55,9111,26 10,7010,46# 7,6010,27*# 10,910,445#

Этопозид+ мексидол 0,408±0,01# 11,35±0,33*# 20,58+0,36*# 52,9+0,67 10,9310,41# 8,5010,31 11,4510,3#

Метотрексат 0,50310,017*# 5,31810,231*# 20,2±0,811*# 56,0811,74 17,3310,57 9,5810,24 12,3410,48#

Метотрекс.+ эмоксипин 0,603±0,029* 8,058Ю,16*# 22,6±0,939*# 50,1210,55* 9,3310,60*# 7,1710,68# 15,1810,36

Метотрексат + мексидол 0,682±0,023* 7,63+0,20* 24,08±0,54*# 53,58+0,73 9,1310,41 *# 9,0510,38 13,75+0,38

Примечание: достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными интактных животных, # - по сравнению с данными контроля, жирным шрифтом выделены показатели, достоверность отличия которых от данных с введением соответствующего препарата сравнения в виде монотерапии р<0,05.

На фоне роста меланомы активность СОД при введении этопозида не менялась (42,45±1,38усл.ед) по сравнению с контролем (42,57±1,29). При комбинации этопозида и эмоксипина - снижалась на 17% (35,22±1,15усл.ед, р<0,05), при комбинации этопозида и мексидола - на 13% (37,05±1.39усл.ед., р<0,05).

Введение метотрексата в изученной дозе на фоне роста карциномы Льюиса LLC привело к увеличению содержания МДА с 3,32+0,35 до 6,35+0,17 ммоль/л (р<0,001) и FeMflA - на 23% (с20,48±1,73 до 25,13+1,10 ммоль/л, р <0,001) и повышало активность СОД на 90% (с 20,05±1,14 до 38,15±1,29 усл.ед., р<0,05). Комбинация метотрексата с эмоксипином позволила достоверно увеличить содержание МДА в опухоли на 12% по сравнению с монотерапией метотрексатом (до 7,12+0,7 ммоль/л, р<0,01), не повлияла на уровень FeMflA (25,42+1,ЗЗммоль/л, р<0,001) и активность СОД (37,6±1,93 усл.ед.). Достоверно выше данных с монотерапией цитостатиком было содержание МДА и при комбинированном использовании метотрексата с мексидолом (6,78+0,13ммоль/л, р<0,05). РеМДА (26,17+1,16 ммоль/л) и активность СОД (36,98±1,65 усл.ед.) не менялись ( р>0,05). На фоне роста меланомы В,6 введение метотрексата обеспечило рост содержания МДА в ткани опухоли на 61% (с 3,98+0,18 до 6,43+0,18 ммоль/л, р<0,001), РеМДА при этом (24,02+0,7ммоль/л, р>0,05) и активность СОД (38,95±1,12) не менялись. При комбинации метотрексата с эмоксипином в изученной дозе содержание МДА в опухоли достигало 7,02+0,17 ммоль/л (р<0,05), FeM/JA повышалось на 19% (до 28,47+0,45 ммоль/л, р<0,05), а активность СОД не менялась (38,07+1,48) по сравнению с монотерапией метотрексатом. При комбинации метотрексата с мексидолом уровень МДА возрастал до 6,98+0,10 ммоль/л (р<0,05) по сравнению с монотерапией метотрексатом, РеМДА - до 30,12+0,88ммоль/л (р<0,001), активность СОД не менялась (37,0±1,21, р>0,05).

Некоторые изменения изученных показателей ПОЛ наблюдались и в тканях внутренних органов. Так, на фоне роста карциномы Льюиса регистрировался рост содержания МДА в легких (на 38%), РеМДА в печени, миокарде и легких (на 22-16 -14% соответственно), рост АОА на 32% в печени, на 20% в миокарде, снижение РЛПО в легких на 36%, рост активности каталазы на 77-79% и угнетение активности СОД на 12%-14% в изученных средах по сравнению с показателями интактной группы (р<0,05). По сравнению с данными контроля введение этопозида в изученной дозе привело к росту содержания МДА в ткани печени на 30%, росту активности СОД в печени и легких, снижению активности каталазы в миокарде на 23%, в легких - на 27%, снижению РЛПО в печени и росту показателя в тканях легких на 30%, снижению АОА на 23% и 20% в печени и миокарде. Комбинированное применение этопозида и эмоксипина на фоне роста карциномы Льюиса по сравнению с монотерапией этопозидом привело к росту содержания МДА в миокарде на 21%, в легких - на 22%, росту активности каталазы в миокарде на 19% и в легких - на 16%; к снижению РЛПО в миокарде на 49%, в легких на 40%, к снижению АОА в тканях печени на 13%, в миокарде - на 33%, в легких - на 20%. При комбинации этопозида с мексидо-

лом наблюдалось снижение FeMflA в печени на 17%, в легких - на 14%, в миокарде - на 15%; снижение АОА в печени на 32%, в миокарде и легких - на 22%; снижение РЛПО в печени на 34%, в миокарде - на 44%, в легких - на 34%; снижение активности каталазы в печени на 17%. При использовании обеих комбинаций в легких предотвращалось угнетение активности СОД - показатель сохранялся на уровне интактных животных.

На фоне роста меланоМы В|6 к 16 суткам эксперимента по сравнению с данными животных интактной группы наблюдалось снижение содержания МДА на 51% в тканях печени, на 51% в миокарде; рост Fe МДА на 16% в тканях печени, в легких на 15%; рост активность СОД в тканях печени на 82%, в миокарде - на 85%, в легких - на 81%. На фоне введения этопозида по сравнению с показателями контроля был отмечен рост МДА в ткани печени и миокарде (при этом показатель не превысил уровень интактной группы); рост содержания Fe МДА в печени на 9%, в миокарде - на 23%. На фоне комбинированного применения эмоксипина и этопозида наблюдалось снижение FeMflA в ткани печени и в миокарде на 11%; снижение активности СОД в ткани печени и миокарде на 50%, а в легких - до уровня интактных животных. При комбинации мексидола и этопозида в изученных дозах содержание МДА возросло в ткани печени на 15%, в легких - на 24%. Отмечалось снижение активности СОД в изученных средах на 50-54% до уровня интактной группы.

В отличие от контрольной серии животных на фоне роста карциномы Льюиса при введении метотрексата было отмечено снижение содержания МДА в миокарде на 18% и в легких - на 34%; рост РЛПО в миокарде на 30%, в легких - на 20%; рост АОА в легких на 22%; снижение активности каталазы в печени на 12%, в миокарде - на 14%; рост активности СОД в печени на 73%, в миокарде и легких - на 78%. На фоне введения комбинации метотрексата и эмоксипина наблюдалось снижение активности СОД в печени, легких и миокарде в среднем на 12%; рост активности каталазы в печени на 21%, в легких - на 19%, в миокарде - на 17%; рост РЛПО в печени на 18%. Комбинация метотрексата с мексидолом привела к росту содержания FeMflA в ткани печени и миокарде на 15%, в ткани легких - на 12%; росту АОА в печени, миокарде и легких на 2022%; росту РЛПО в печени и миокарде на 17%, в легких - на 20%; снижению активности СОД в изученных средах на 17%.

В условиях роста меланомы на фоне введения метотрексата в изученной дозе наблюдался рост содержания МДА в печени на 108%, в миокарде - на 92%, при этом показатели не превышали данные интактных животных. Наблюдалось снижение АОА в ткани печени на 23%, в миокарде - на 16%; снижение РЛПО в печени на 62%; снижение активности СОД в гомогенатах изученных органов на 17%. Отмечалось снижение активности каталазы в ткани печени на 18%. По сравнению с данными серии на фоне введения метотрексата в виде монотерапии, при комбинированном введении метотрексата с эмоксипи-ном было отмечено снижение активности каталазы в печени и легких на 16%, в миокарде - на 15%. При комбинированном применении метотрексата и мекси-

дола наблюдался рост содержания Ре МДА в ткани печени на 18%, в миокарде и легких - на 19%; рост АОА в печени на 18%, в легких - на 20%; снижение активности СОД в печени и легких на 18%, в миокарде -на 30%; снижение активности каталазы в печени на 33%, в миокарде - на 34%, в легких - на 28% по сравнению с серией, где метотрексат вводился на фоне роста меланомы В16 в виде монотерапии.

И МДА В Ре МДА

в! сод

S АОА

□ РЛПО

Рис. 4. Влияние метотрексата, эмоксипина и мексидола на некоторые показатели ПОЛ в ткани печени мышей линии BDFlHa фоне роста карциномы Льюиса LLC (в % к данным интактной группы): * - достоверность различия р<0,05 по сравнению с данными контроля, # - серии с введением метотрексата.

Комбинация этопозида и метотрексата с производными 3-оксипиридина позволила в значительной степени ограничить изменения клеточного состава периферической крови, развивающиеся на фоне курсового введения цитоста-тиков. На фоне роста карциномы Льюиса в контрольной группе по сравнению с интактными животными наблюдалось увеличение количества лейкоцитов на 49% (с 10,7±0,8х109 до 15,9±1,0х109, р<0,05), тромбоцитов на 69% (281,2±31,6 х109 до 474,0±48,0х 109, р<0,05), эритроцитов на 18% (р<0,05), содержание гемоглобина не менялось. Введение этопозида привело к развитию лейкопении (до 4,97±0,71хЮ9, р<0,05). На фоне комбинации этопозида и эмоксипина в изученных дозах наблюдался рост содержания лейкоцитов на 80% (до 8,93±0,75 х109) по сравнению с показателями на фоне введения этопозида в виде монотерапии (р<0,001). Наблюдался рост содержания тромбоцитов (на 88%, р<0,05). Комбинация этопозида с мексидолом по сравнению с введением этопозида также способствовала росту количества лейкоцитов в 2,4 раза (12,07±0,84 х 109, р<0,001), достигнув уровня интакных животных. Содержание эритроцитов и уровень гемоглобина не менялись (р>0,05), содержание тромбоцитов повышалось на 28% (493,5±26,3, р<0,05).

На фоне роста меланомы В)6у животных контрольной группы наблюдалось значительное снижение содержания лейкоцитов на 62% от показателей интактной группы (с 10,7±0,80 хЮ9 до 4,05±0,41х109/л, р<0,001) и рост количества тромбоцитов на 108 % (с 281,2 ±31,5x109 до 586,5±25,9х I О9, р<0,05). Коли-

+Эмоксипин +Мексидол

чество эритроцитов снижалось на 38% (с 8,69±0,25х1012 до 5,46±0,49х1012, р<0,001), причем анемия носила гипохромный характер (НЬ снизился с 123,8±5,7 г/л до 63,3±3,3 г/л, р<0,001).

Лейкоциты Эритроциты Тромбоциты

Я Контроль в Этопозцц □ Этопозцц+Эмоксипин в Этопозод +Мексидол |

Рис. 5. Влияние комбинированного введения этопозида, эмоксипина и мексидо-ла на некоторые показатели периферической крови мышей линии ВОР1 при росте карциномы Льюиса (в % к данным интактных животных). # - достоверность различия р<0,05 к данным контрольной группы; л - к данным на фоне введения этопозида в виде монотерапии.

Цветной показатель при этом уменьшился на 18% (с 0,997±0,026 до 0,823±0,028, р<0,005), гематокрит - на 30% (с 43,3±2,05 до 30,5±2,6%, р<0,001). При введении этопозида в изученной дозе сохранялась лейкопения (4,35±0,23х109, р>0,05). Количество тромбоцитов снижалось на 12% (515,2±13,6x109,р<0,05). Содержание эритроцитов (4,95±0,32 х1012, р>0,05), уровень гемоглобина (68,3±3,3 г/%, р>0,05) и гематокрит (29,33±1,99%, р>0,05), не менялись, но цветной показатель возрастал на 18% (0,972±0,023, р<0,05) и достигал уровня интактых животных. Комбинированное применение эмоксипина и этопозида на фоне роста меланомы В)(; привело к снижению содержания лейкоцитов на 28% по сравнению с введением этопозида в виде монотерапии 3,12±0,34х109 (р<0,05), росту тромбоцитов на 62% (785,8±36,2х.Ю9, р<0,05), эритроцитов на 68% (8,31 ±0,27x1012, р<0,001), содержания гемоглобина (113,67+6,93г/л, р<0,05) и величины гематокрита на 50% (44,0±2,4%, р<0,001). Комбинированное использование этопозида и мексидола на фоне роста меланомы В16не повлияло на уровень лейкоцитов (4,43±0,25х109, р>0,05) и тромбоцитов (486,33±22,48х109, р>0,05). Содержание эритроцитов и уровень гемоглобина возрастали на 72% (до 8,52±0,24х10'2, р<0,05, и 117,17±1,78 г/%, р<0,00, соответственно) и достигли значений интактных животных. ЦП составил 0,966±0,014 (р>0,05), гематокрит возрастал на 27% (37,33±1,78г/%, р<0,05).

Введение метотрексата на фоне роста карциномы Льюиса привело к росту содержания лейкоцитов на 81% по сравнению с показателями контрольной группы (с 15,9±1,0 до 28,75±2,39х109, р<0,001). Выраженность тромбоцитоза не изменилась (551,0±18,7х109, р>0,05). Наблюдалось сокращение количества эритроцитов на 69% (с 10,24±0,56х10!2 до 3,19±0,38х1012, р<0,001), содержание гемоглобина снизилось на 68% (до 39,5±6,33 г%, р<0,001), уровень гематокрита

- на 57% (с 47,67±1,71% в контрольной группе до 20,33±3,66%, р<0,001). Величина цветного показателя не менялась (0,852±0,030. р>0,05). По сравнению с данными группы с введением метотрексата комбинирование применение ме-тотрексата и эмоксипина количество лейкоцитов не меняло (27,3±6,6хЮ9, р>0,05), тромбоцитов снижало на 27% (р<0,001), эритроцитов - повышало на 74% (с 3,19±0,38х1012 до 5,56 ±0,87х1012, р<0,05). Гемоглобин возрастал на 40% (с 39,50±6,33 до 55,2±4,9 г%, р<0,05), величина ЦП снижалась на 18% (с 0,852±0,030 до 0,703±0,032, р<0,05). Гематокрит не менялся (26,17±4,45, р>0,05). Комбинация метотрексата с мексидолом также, как и с эмоксилином, не повлияла на содержание лейкоцитов (р>0,05), содержание тромбоцитов снизилось на 17% (с 551,0±18,7-10'; до 459,0±30,5-109, р<0,05). По сравнению с группой, получавшей только метотрексат, наблюдался рост содержания эритроцитов на 94% (с 3,19±0,38 до 6,19±0,58, р<0,005), содержание гемоглобина (50,33±5,04 г%, р>0,05) и уровень гематокрита достоверно не менялись^,33±3,71, р>0,05), а ЦП снижался на 33% (0,569±0,009, р<0,001).

■ Контроль

□ Метотрксат

□ Метотрексат+ Эмоксипин

0 Метотрексат

+Мексвдол

Эритроциты Гемоглобин Гематокрит

Рис. 7. Влияние комбинированного введения метотрексата, эмоксипина и мек-сидола на некоторые показатели периферической крови при росте карциномы Льюиса (в % к данным интактных животных): * - достоверность различия р<0,05 к данным интактной группы; # - к показателям контрольной группы; А -к данным на фоне введения метотрексата в виде монотерапии.

Введение метотрексата на фоне роста меланомы Вк, привело к росту содержания лейкоцитов на 96% (с 4,05±0,41 хЮ9 до 21,57±1,21х109, р<0,001). Сохранялся тромбоцитоз (607,5±25,9х109, р>0,05) и гипохромная анемия. Количество эритроцитов (4,7±0,46 хЮ12, р>0,05), уровень гемоглобина (55,17 ±5,71 г /%, р<0,05), ЦП (0,820 ±0,006, р>0,05) и величина гематокрита (26,0±1,83%, р>0,05) не менялись. На фоне комбинированного применения метотрексата и эмоксипина по сравнению с введением метотрексата в виде монотерапии содержание лейкоцитов (18,77±1,89х109) не менялось, снижалось содержание тромбоцитов на 27% (с 607,5±33,9х109 до 444,5±18,0х10<;, р<0,01). По показателям красной крови различий с данными серии сравнения не наблюдалось: количество эритроцитов составило 5,16±0,40х1012 (р>0,05), уровень гемоглобина - 61,83±4,11г% (р>0,05), цветной показатель - 0,842±0,013 (р>0,05), гематокрит - 30,33±1,50% (р>0,05). На фоне комбинации метотрексата и мексидола в условиях роста меланомы В)б по сравнению с введением метотрексата количество лейкоцитов не менялось

(19,35±0,35х109, р>0,05). Содержание тромбоцитов уменьшилось на 20% (607,5±33,9х109, до 483,0 ±17,5x109, р<0,05). По показателям красной крови (количество эритроцитов - 5,48±0,36х1012, р>0,05; уровень гемоглобина -67,83±4,72г%, р>0,05; ЦП - 0,869±0,025, р>0,05) статистических отличий отданных серии сравнения не было зарегистрировано. Величина гематокрита также не менялась (29,83±1,95%, р>0,05). .

га Контроль ■ Метотрексат Ш Метотрексат+Эмоксипин в Метотрексат+Мексидол

Тромбоциты

Лейкоциты

Рис. 8. Влияние метотрексата, эмоксипина и мексидола на некоторые показатели гемограммы на фоне роста меланомы B|<s (в% к данным интактной группы); Примечание: * - достоверность различия р<0,05 с данными интактной группы; #-с показателями контроля; А- с данными группы с введением метотрексата.

Таким образом, дополнительное применение производных 3-оксипиридина на фоне введения этопозида и метотрексата в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16 в эксперименте позволяет оптимизировать противоопухолевое действие цитостатиков и оказывает определенное корригирующее влияние на метаболические показатели и клеточный состав периферической крови.

ВЫВОДЫ

1. Эмоксипин и мексидол в изученных дозах не оказывают достоверного влияния на острую токсичность этопозида и метотрексата.

2. Комбинация эмоксипина или мексидола с этопозидом и метотрексатом при карциноме Льюиса LLC и с этопозидом при меланоме В16 увеличивает продолжительность жизни мышей линии BDF1 в отличие от препаратов сравнения, вводимых в изученных дозах в виде монотерапии.

3. Комбинация этопозида с производными 3-оксипиридина повышает его противоопухолевый эффект на фоне роста карциномы (мексидол) и меланомы (эмоксипин, мексидол), снижает содержание малонового диальдегида, активность супероксидцисмутазы и количество митозов в ткани опухоли. Комбинация метотрексата с эмоксипином и мексидолом повышает противоопухолевый эффект метотрексата в условиях роста карциномы и меланомы, приводит к накоплению вторичных продуктов перекисного окисления липидов в ткани опухоли, уменьшает количество митозов.

4. Комбинация эмоксипина с этопозидом ограничивает лейкопению и повышает количество тромбоцитов при росте карциномы, снижает содержание лейкоцитов, увеличивает количество тромбоцитов, восстанавливает показатели

красной крови при росте меланомы; не оказывает влияния на электролитный обмен, способствует ограничению цитолиза (при росте карциномы), нормализации содержания общего белка, глюкозы, мочевины (меланома) по сравнению с монотерапией этопозидом.

5. Комбинация этопозида и мексидола предотвращает развития лейкопении и увеличивает количество тромбоцитов (при росте карциномы), предотвращает развитие анемии (при росте меланомы), а также способствует восстановлению показателей электролитного обмена, снижает активность транса-миназ, нормализует содержание креатинина, глюкозы и ограничивает рост альбумина по сравнению с монотерапией этопозидом в изученных дозах.

6. Комбинация метотрексата и эмоксипина приводит к снижению количества тромбоцитов (при росте карциномы и меланомы), повышению количества эритроцитов, гемоглобина (при росте карциномы); снижению содержания калия (при росте карциномы) или магния (меланомы), росту маркеров цитолиза, снижению содержания общего белка, глюкозы (карцинома), креатинина, нормализации содержание мочевины.

7. При комбинации метотрексата и мексидола в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16 снижается количество тромбоцитов, предотвращается развитие гипернатриемии, наблюдается активация трансаминаз, снижение содержания общего белка и креатинина, рост мочевины и альбумина. Кроме того, увеличивается количество эритроцитов и снижается содержание калия (карцинома) или магния (меланома).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Целесообразно дальнейшее продолжение исследований возможности использования сочетания традиционных препаратов химиотерапии и производных 3-оксипиридина при комбинированном лечении онкологической патологии в клинике с целью усиления противоопухолевого эффекта.

При комбинации метотрексата с эмоксипином или мексидолом следует учитывать возможность развития тромбоцитопении, гипокалиемии, гипомаг-ниемии и гипогликемии, осуществлять контроль за динамикой показателей цитолитического синдрома.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследование влияния эмоксипина и мексидола на острую токсичность этопозида, доксорубицина и метотрексата / Маланьина Е.С., Скопин П.И. // Тезисы докладов XI науч. конф.молодых ученых, аспирантов и студентов мед.факультета Мордовского госуниверситета . Вып.7. - Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, - 2007. - С.44-45.

2. Исследование токсичности некоторых цитостатиков / Маланьина Е.С.// Материалы научно-практич. конф мед.факультета «Применение цитопро-текторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний».- Саранск: ООО «Референт». - 2008.- С.42-44.

3. Влияние эмоксипина на свободнорадикальное окисление при экспериментальной неоплазии / Скопин П.И., Маланьина.Е.С. // Материалы на-учно-практич. конф мед.факультета «Применение цитопротекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний»,- Саранск: ООО «Референт»,- 2008. С.52-55.

4. Влияние мексидола на острую токсичность доксорубицина и этопозида/ Маланьина Е.С., Маслова О.А., Скопин П.И. // XXXVI Огаревские чтения: материалы науч.конф.: в 3 ч. 4.2. Естественные науки / Саранск: Изд-во Мордов. ун-та, 2008.-С.89.

5. Влияние мексидола на некоторые показатели эндотоксикоза в условиях противоопухолевой химиотерапии в эксперименте / Скопин П.И., Маланьина Е.С., Скопина Ю.А., Зорькина А.В., Маслова О.А., Кулаев М.Т.// Тезисы докладов XV Российского национального Конгресса «Человек и лекарство».- Москва,- 2008.- С.703.

6. Эффективность и токсичность комбинаций эмоксипина с некоторыми ци-тостатиками при экспериментальной химиотерапии / Зорькина А.В., Скопин П.И., Маланьина Е.С., Скопина Ю.А. // Материалы научно-практич. конф мед.факультета «Применение цитопротекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний».- Саранск: ООО «Референт»,- 2008. С.83-86.

7. Исследование влияния препаратов антиоксидантного действия на токсичность противоопухолевой химиотерапии / Скопин П.И., Мельцаева А.Г., Маслова О.А., Маланьина Е.С., Скопина Ю.А. // Здравоохранение Чувашии. - ежеквартальный научно-практический журнал - 2008.- №3. -С.61-62

8. Изучение комбинированногот применения противовопухолевой химиотерапии и препаратов антиоксидантного действия / Зорькина А.В., Скопин П.И., Усанова А.А., Маланьина Е.С.// Уральский медицинский журнал- №8 (62) 2009. - С. 17-19.

Подписано в печать 18.11.09. Объем 1,50 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 1600. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24

Злокачественные новообразования остаются одной из актуальных проблем клинической медицины (Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В., 2004; Greenwald, Р. et al., 1993; Wingo P.A., Tong Т., Bolden S., 1995). Причем, значительное количество пациентов выявляются в поздних стадиях, что обуславливает актуальность вопросов паллиативного лечения как для медицинской общественности, так и для общества в целом. Основным методом лечения в этом случае является химиотерапия (JeenY. Т. et al., 2001).

Известно, что одним из патофизиологических факторов возникновения и развития онкологических заболеваний является активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Залесский В.Н., Великая Н.В., 2003). Однако широкому использованию антиоксидантных препаратов в клинической практике препятствует их недостаточно изученное взаимодействие с элементами современной общепринятой схемы комплексного химиотерапевтического лечения онкологических больных (Бурлакова Е.Б., 1998; Аксель Е.М. с соавт., 2001). И хотя ряд работ отражает возможность повышения противоопухолевой эффективности отдельных цитостатиков при их комбинированном применении с антиоксидантами, полученные результаты не могут быть перенесены на все компоненты комплексного химиотерапевтического лечения и нуждаются в дальнейших подробных исследованиях, касающихся конкретных схем комбинированного применения (Богдашкина О.Н., 2002; Есина О.В., 2003; Абдельгафур Омар А.Ю., 2003; Скопин П.И. с соавт., 2005; Kang S.W., Shae H.Z., Seo M.S. 1998). Интересна в этом отношении разработка применения отечественных производных 3-оксипиридина, оказывающих широкий спектр фармакологического воздействия.

Выполненная работа является разделом комплексной программы исследований Мордовского государственного университета «Фармакологическая коррекция повреждений, возникающих при гипоксических, токсических и радиационных воздействиях». Номер государственной регистрации темы 01200004103.

Целью работы явилось изучение влияния производных 3-оксипиридина — эмоксипина и мексидола на некоторые показатели эндотоксикоза мышей линии BDF1 и противоопухолевую активность этопозида и метотрексата в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16.

В ходе проводимых исследований решались следующие задачи:

1. Исследовать влияние эмоксипина и мексидола на острую токсичность этопозида и метотрексата.

2. Изучить влияние этопозида и метотрексата, а также их комбинации с эмоксипином и мексидолом на продолжительность жизни мышей в условиях роста меланомы В1 б и карциномы Льюиса.

3. Исследовать влияние мексидола и эмоксипина на некоторые показатели противоопухолевой активности этопозида и метотрексата в условиях роста меланомы В16 и карциномы Льюиса.

4. Изучить влияние дополнительного применения мексидола и эмоксипина на некоторые метаболические показатели, данные электролитного и клеточного состава периферической крови мышей линии BDF1 на фоне введения этопозида и метотрексата.

Научная новизна. Показано отсутствие достоверного влияния производных 3-окспиридина в изученных дозах на острую токсичность этопозида и метотрексата. Отмечено увеличение продолжительности жизни мышей линии BDF1 при комбинированном применении эмоксипина или мексидола с это-позидом или метотрексатом на фоне роста карциномы Лыоиса LLC и при комбинации с этопозидом при росте меланомы В16. Показано повышение противоопухолевого эффекта этопозида и метотрексата при комбинации с производными 3-оксипиридина.

При комбинации этопозида с эмоксипином или мексидолом отмечено ограничение или предотвращение развития лейкопении, увеличение количества тромбоцитов в условиях роста карциномы Льюиса, предотвращение развития анемии при росте меланомы, ограничение маркеров цитолиза и нарушений белкового и углеводного обмена. При комбинации метотрексата с эмоксипином или мексидолом в условиях экспериментальной неоплазии выявлено снижение количества тромбоцитов, повышение количества эритроцитов, гемоглобина, снижение содержания калия и магния, рост маркеров цитолиза, снижение содержания общего белка.

Научно-практическая ценность работы. Полученные результаты являются экспериментальным обоснованием целесообразности дальнейших клинических исследований возможности дополнительного применения эмоксипина и мексидола на фоне введения этопозида и метотрексата с целью усиления противоопухолевой активности препаратов химиотерапии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Эмоксипин и мексидол в изученных дозах не оказывают достоверного влияния на острую токсичность этопозида и метотрексата.

2. Комбинированное применение этопозида и метотрекстата с производными 3-оксипиридина способствует усилению противоопухолевого эффекта химиопрепаратов и увеличению продолжительности жизни подопытных животных в условиях экспериментальной неоплазии.

3. Комбинация этопозида и метотрексата с производными 3-оксипиридина оказывает корригирующее влияние на ряд показателей клеточного состава крови, данные белкового, углеводного обмена и электролитного состава плазмы крови в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16 в эксперименте.

Апробация работы.

Результаты работы и основные положения, полученные в результате собственных исследований, доложены на Х1-ХШ науч. конф.молодых ученых, аспирантов и студентов мед.факультета Мордовского госуниверситета «Медицинские проблемы жизнедеятельности в норме, патологии и эксперименте» (Саранск, 2007, 2008); на научно-практич. конф мед.факультета «Применение цитопротекторов метаболического действия в лечении соматических заболеваний» (Саранск, 2008); XIV и XV Российских национальных Конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2007, 2008); на научной конференции Мордовского госуниверситета «XXXVI Огаревские чтения» (Саранск, 2008);

По теме диссертационного исследования опубликовано 8 работ, в том числе одна - в издании, рекомендованном ВАК (Уральский медицинский журнал).

ВЫВОДЫ

1. Эмоксипин и мексидол в изученных дозах не оказывают достоверного влияния на острую токсичность этопозида и метотрексата.

2. Комбинация эмоксипина или мексидола с этопозидом и метотрексатом при карциноме Льюиса LLC и с этопозидом при меланоме В16 увеличивает продолжительность жизни мышей линии BDF1 в отличие от препаратов сравнения, вводимых в изученных дозах в виде монотерапии.

3. Комбинация этопозида с производными 3-оксипиридина повышает его противоопухолевый эффект на фоне роста карциномы (мексидол) и меланомы (эмоксипин, мексидол), снижает содержание малонового диальдегида, активность супероксиддисмутазы и количество митозов в ткани опухоли. Комбинация метотрексата с эмоксипином и мексидолом повышает противоопухолевый эффект метотрексата в условиях роста карциномы и меланомы, приводит к накоплению вторичных продуктов перекисного окисления липидов в ткани опухоли, уменьшает количество митозов.

4. Комбинация эмоксипина с этопозидом ограничивает лейкопению и повышает количество тромбоцитов при росте карциномы, снижает содержание лейкоцитов, увеличивает количество тромбоцитов, восстанавливает показатели красной крови при росте меланомы; не оказывает влияния на электролитный обмен, способствует ограничению цитолиза (при росте карциномы), нормализации содержания общего белка, глюкозы, мочевины (меланома) по сравнению с монотерапией этопозидом.

5. Комбинация этопозида и мексидола предотвращает развития лейкопении и увеличивает количество тромбоцитов (при росте карциномы), предотвращает развитие анемии (при росте меланомы), а также способствует восстановлению показателей электролитного обмена, снижает активность трансаминаз, нормализует содержание креатинина, глюкозы и ограничивает рост альбумина по сравнению с монотерапией этопозидом в изученных дозах.

6. Комбинация метотрексата и эмоксипина приводит к снижению количества тромбоцитов (при росте карциномы и меланомы), повышению количества эритроцитов, гемоглобина (при росте карциномы); снижению содержания калия (при росте карциномы) или магния (меланомы), росту маркеров цитолиза, снижению содержания общего белка, глюкозы (карцинома), креатинина, нормализации содержание мочевины.

7. При комбинации метотрексата и мексидола в условиях роста карциномы Льюиса и меланомы В16 снижается количество тромбоцитов, предотвращается развитие гипернатриемии, наблюдается активация трансаминаз, снижение содержания общего белка и креатинина, рост мочевины и альбумина. Кроме того, увеличивается количество эритроцитов и снижается содержание калия (карцинома) или магния (меланома).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Целесообразно дальнейшее продолжение исследований возможности использования сочетания традиционных препаратов химиотерапии и производных 3-оксипиридина при комбинированном лечении онкологической патологии в клинике с целью усиления противоопухолевого эффекта.

При комбинации метотрексата с эмоксипином или мексидолом следует учитывать возможность развития тромбоцитопении, гипокалиемии, гипомагниемии и гипогликемии, осуществлять контроль за динамикой показателей цитолитического синдрома.