Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние экстрактов ольхи клейкой на развитие перевиваемых опухолей в условиях цитостатической терапии

На правах рукописи

ШИЛОВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТОВ ОЛЬХИ КЛЕЙКОЙ НА РАЗВИТИЕ ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЕЙ В УСЛОВИЯХ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 14.00.14 - онкология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Томск - 2005

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН,

заслуженный деятель науки РФ Гольдберг Евгений Данилович

доктор биологических наук,

профессор Зуева Елена Петровна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Пашинский Виталий Глебович

доктор биологических наук Уразова Людмила Николаевна

Ведущая организация

ГОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия

Защита состоится _"_ 2005 года в_часов на

заседании диссертационного Совета Д 001.031.01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, г.Томск, пр.Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Автореферат разослан 20 мая 2005 года

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

4<оо8Э>

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Растения и извлечения из них были и остаются ценными источниками лекарственных средств, а эффективность терапии растительными экстрактами зачастую подтверждается данными научной медицины. Полученные эмпирическим путем фармакологические эффекты в традиционной медицине сформировались в комплексные схемы лечения многих заболеваний, в том числе, онкологических. Известно, что ряд растительных экстрактов обладает способностью тормозить опухолевый рост, и в некоторых случаях это свойство обусловило создание противораковых лекарственных средств растительного происхождения. Так, на основе извлечений из барвинка розового (Vinca rosea L.), безвременника великолепного (Colchicum speciosiim Stev.), подофилла щитовидного (Podophyllum pellatum L.), тиса тихоокеанского (Taxus brevifolia), и китайского дерева Camptotheca acuminata созданы эффективные химиопре-параты [Wall М.Е. et al., 1966; Wani М.С. et al., 1971; Williams S.D. et al., 1987; Greemers G.J. et al., 1997]. Они обладают прямым цитостатическим действием и многие применяются в современных схемах химиотерапии, которая на сегодняшний день остается одним из ведущих методов воздействия на опухоль. Однако несмотря на значительные достижения, связанные с появлением высокоэффективных цитостатиков, полной гарантии выздоровления этот метод не обеспечивает. Применение химиотерапии сопровождается высокой токсичностью в отношении активно пролифери-рующих клеточных популяций организма. Часто причиной прекращения лечения становятся развивающиеся осложнения в виде гранулоцитопе-нии, анемии, иммунодепрессии. Иногда регистрируются дегенеративные изменения в печени, эпителии [Гершанович M.JL, 1982; Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В., 1986; Гольдберг Е.Д. и др., 1991]. Поэтому наряду с поиском новых противоопухолевых препаратов актуальным является изыскание средств, повышающих антибластомную эффективность уже известных цитостатиков с одновременным снижением их токсичности. В последние годы накоплены данные о подобном действии модификаторов биологических реакций организма - гетерогенной группы веществ, в том числе, растительного происхождения, основным эффектом которых является повышение противоопухолевой резистентности организма через воздействие на его регуляторные гомеостатические структуры [Herberman R.B., 1985; Навашин С.М., 1991; Harvey A.L., 1998, 1999].

Растения рода Ольха применялись в традиционной медицине народов Европы, Азии и Северной Америки для лечения воспалительных заболеваний полости рта, органов пищеварения, для остановки полостных и маточных кровотечений, для лечения гнойных ран [Губергриц А.Я., Со-ломченко Н.И., 1990; Соколов С.Я., Замотаев И.П., 1990]. Наличие у растений этого рода обширного спектра фармакологической активности позволяет предположить некоторые особенности действия, характерные для модификаторной и регуляторной функций в отношении гомеостаза. Это подкрепляется данными о многое

веществ, выделенных из различных видов Ольхи, среди которых гликози-ды, флавоноиды, дубильные вещества, полисахариды, растительные стероиды. В народной медицине Центральной Европы и Канады отвары и настои из коры и листьев ольхи клейкой (AInus glutinosa) и ольхи красной (Alnus rubra) применялись для лечения раковых заболеваний [Hartwell J.L., 1982; Sheth К. et al, 1973; Farnsworth N.R., 1994; Tunon П., Bruhn J.G., 1995; Ritch-Krc E.M., Thomas S. et al., 1996]. Экспериментально доказаны свойства лупенола и бетулина из ольхи орегонской тормозить рост каци-носаркомы Уокер-256 у крыс [Sheth К. et al., 1973]. Учитывая биологическое и химическое сходство растений одного рода и данные народной медицины о наличии противораковых свойств у ольхи клейкой, представлялось актуальным исследовать действие извлечений из ольхи клейкой на развитие опухоли и метастазов при их изолированном введении и в сочетании с цитостатиком.

Цель исследования. Целью исследования явилось изучение действия экстрактов и биологически активных веществ из различных частей ольхи клейкой на рост и метастазирование перевиваемых опухолей и эффективность цитостатической терапии.

Основные задачи исследования.

1. Изучение влияния экс фактов и БАВ из ольхи клейкой на развитие аденокарциномы Эрлиха и карциномы легких Льюис у мышей.

2. Изучение влияния экстрактов и БАВ из ольхи клейкой на эффективность цитостатической терапии на моделях перевиваемых опухолей.

3. Исследование влияния экстрактов и БАВ из ольхи клейкой, обладающих свойствами ингибировать или стимулировать развитие перевиваемых опухолей в условиях цитостатической терапии или изолированного введения, на некоторые показатели противоопухолевой резистентности организма в эксперименте.

Научная новизна. Впервые изучено влияние 12 нативных и химически однородных оригинальных экстрактов из различных частей ольхи клейкой (фракций водорастворимых полисахаридов, гемицеллюлоз, пектиновых веществ из коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий, а также у комплексных водных экстрактов из коры и листьев) на развитие опухолевого процесса. Показана способность водорастворимых полисахаридов коры и водных экстрактов коры и листьев ольхи клейкой тормозить рост опухоли и повышать эффективность цитостатической терапии наряду с уменьшением ее токсичности на клетки крови. Выявлен эффект стимуляции развития опухоли некоторых химически однородных фракций (водорастворимых полисахаридов листьев и зеленых соплодий, гемицеллюлоз коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий, пектиновых веществ листьев и зрелых соплодий) при их изолированном и/или в сочетании с цикло-фосфаном введении. Обнаружен иммуномодулирующий эффект у водорастворимых полисахаридов и водного экстракта листьев ольхи клейкой.

Практическая ценность работы. На основании проведенных экспериментов выявлен водный экстракт листьев ольхи клейкой, способный

тормозить рост аденокарциномы Эрлиха и карциномы легких Льюис, повышать антиметастатический эффект циклофосфана и снижать степень его токсического воздействия на кровь. Показано повышение функциональной активности клеток лимфоузлов и спленоцитов на фоне курсового введения водного экстракта листьев ольхи клейкой и уменьшение под его влиянием иммунодепрессии, вызванной применением цитостатика. Представленные данные могут служить основой для углубленного исследования водного экстракта листьев с пелыо создания нового препарата растительного происхождения для применения в комплексной терапии злокачественных новообразований.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались па конференции молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2000); Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000, 2001); на конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2001); на научно-практической конференции «Лекарства -человеку» (Харьков, 2001); на Всероссийской научно-пракшческой конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 1 в журнале, рекомендованном перечнем ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 228 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 26 таблицами. Библиографический указатель включает 324 источника, из них 147 отечес! венных, 177 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 376 беспородных мышах и 585 мышах линии С57В1/6 обоего пола. Животные поступали из лаборатории экспериментального биомоделирования НИИ фармакологии ТН! J СО РАМН (сертификат имеется). Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986).

Карциному легких Льюис мышам линии С57В1/6 перевивали внутримышечно 1х10б клеток в 0,1 мл физиологического раствора, аденокар-циному Эрлиха внутрибрюшинно беспородным мышам в количестве 7,5x10 клеток в 0,2 мл физраствора.

При проведении цитостатической терапии циклофосфан вводили мышам внутримышечно, однократно в дозе 150 mi/кг на 3 сут после перевивки аденокарциномы Орлиха и внутрибрюшинно, однократно в дозе 100 мг/кг на 15 сут после трансплантации карциномы легких Льюис.

Изучалось влияние на развитие перевиваемых опухолей и эффективность цитостатической терапии фракций водорастворимых полисаха-

ридов (ВРПС), гемицеллюлоз (ГЦ), пектиновых веществ (ПВ) из коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий, а также у комплексных водных экстрактов (ВЭ) из коры и листьев о. клейкой. Экстракты и БАВ предоставлены для исследования кафедрой фармакотерапии и фармакокинетики Украинской фармацевтической академии (г. Харьков). Полисахариды извлекались из растительного сырья методом фракционного выделения. Экстракты получали методом мацерации. Всс извлечения подвергались лиофильному высушиванию.

Качественный состав исследованных однородных биологически активных веществ и содержание полисахаридов в % на 100 г сухого остатка представлены в таблице 1. В состав водного экстракта коры ольхи помимо полисахаридных комплексов входит до 21,4 % дубильных веществ, флавоноиды, (З-ситостерин. Водный экстракт листьев содержит полисахариды, сумму флавоноидов, (3-ситостерин, отмечается высокое содержание меди [Радько Е.В. и др, 2000; Сербии А.Г. и др., 2000].

Таблица 1

Характеристика состава биологически активных веществ из различных частей ольхи

клейкой

Фракция полисахаридов Содержание 11С в каждой фракции,% Моносахаридный coeiaii

ВРПС коры 80,85 Gal, Gle, Ara, Xvl, Fuk, Rha, Gal IJA

ВРПС листьев 59,62 Gal. Glc, Ara, Xyl. Sbi Gal UA

ВРПС ¡слепых соплодий 34,38 Gal. Gle. Ara. Xvl. Rha

ВРПС ¡релых соплодий 33,56 Gal, Glc, Ara, Xyl, Rha, Gal UA

ГЦ коры 34,34 Gal, Glc. Ara. Xvl. Rha. Gal DA J

ГЦ челеныч соплодий 58,34 Xyl, Ara, Glc

ГЦ (релых соплодий 42,21 Xyl, Ara, Gal, Glc

ПВ листьев ПВ зеленых соплодий _________52,59 ______ 25 15 ____Gal, Ara. Rha, Glc, Xyl____ Gal, Ara, Rha, Gal UA

ПВ зрелых соплодий 42,80 Gal, Ara, Gal UA

Примечание представленные и таблице данные получены на кафелре фармакшерапии и фармакокинетики Украинской фармацевшческой академии (г Харьков) [Радько F Н и др, 2000, Сербии А Г и др 2000, Радько F В , Самура Ь А , 1'аран А В , 20011

Сухие экстракты и БАВ растворяли в дистиллированной воде и вводили зондом в желудок в дозах 100 и 200 мг/кг: мышам с АКЭ - через 24 ч после перевивки и продолжали в течение 7 сут, а животным с LLC - с момента появления опухолевых узелков в течение 10-12 сут. По окончании экспериментов животных умерщвляли, соблюдая "Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных", проводили вскрытие, ревизию внутренних органов, выделение опухоли и ме!астазов.

Эффективность проведенных курсов лечения оценивали по противоопухолевому и противометастатическому действию препаратов у мышей с АКЭ - на 9-10 сут, у животных LLC - на 21-22 сут. Вычисляли процент торможения роста опухоли ТРО (по массе опухолевого узла или

объему опухолевых клеток в асцитном варианте) [Софьина З.П. и др., 1980].

При оценке интенсивности процесса мстастазирования использовали несколько критериев:

1) частоту метастазирования (ЧМ) опухолей вычисляли в процентах (по отношению числа животных с метастазами к общему количеству животных в группе);

2) подсчитывали среднее количество метастазов у одного животного в группе. Среднюю площадь метастатического поражения высчитывали по формуле 7ГГ2, определяя при этом диаметр метастазов. Учитывалось, что при использовании LLC метастазы располагались преимущественно суб-плеврально [Dingemane К.P. et al., 1985];

3) величину различия в метастазировании опухоли между контролем и опытом оценивали по индексу ингибирования метастазирования (НИМ) [Архипов С.А., Юнкер В.М., Грунтенко Е.В., 1984].

Состояние иммунологической реактивности мышей с опухолями оценивали, используя следующие показатели:

1. Определение функциональной активности клеток лимфоузлов в тесте нейтрализации опухолевых клеток Винна [Winn H.J., 1961];

2. Оценка функциональной активности нейтрофилов в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) [Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П., 1992];

3. Определение естественной цитотоксичности спленоцитов спектрофо-тометрическим методом [Гордиенко С.М., 1984];

4. Использование стандартных гематологических методов для подсчета лейкоцитов периферической крови на 3 сут после инъекции ЦФ (17 сут развития опухоли) и в терминальную фазу (23 сут развития опухоли) [Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П., 1992], подсчета больших гранулярных лимфоцитов (БГЛ) на мазках периферической крови, взятой из хвоста мышей и окрашенных по Романовскому-Гимза [Киндзельский Л.П., 1989].

Обработку полученных результатов проводили с использованием непараметрических критериев: U - Вилкоксона-Манна-Уитни и точного теста Фишера. Различия считали достоверными при р<0,05 [Лакин Г.Ф., 1980].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенных исследований на модели АКЭ показано отсутствие влияния ВРПС зеленых и зрелых соплодий на развитие опухоли при самостоятельном введении, а применение BP1IC листьев позволило отметить тенденцию к усилению опухолевого роста: при использовании ВРПС листьев объем опухолевых клеток в асците мышей составлял 1,6+0,4 мл против 1,1+0,6 мл в контрольной группе. Курсовое введение животным ВРПС зеленых соплодий в дозе 100 мг/кг на фоне цитостати-ческой терапии вызывало увеличение объема клеток АКЭ в 1,3 раза по сравнению с таковым у леченных только циклофосфаном мышей.

Достоверная стимуляция развития опухоли (36 % по сравнению с контролем) отмечена при совместном введении ВРПС зеленых соплодий (100 мг/кг) и цитостатика, тогда как изолированное лечение циклофосфа-ном не приводило к изменению объема опухолевых клеток.

Курсовое введение ВРПС листьев и зрелых соплодий в дозе 200 мг/кг на фоне терапии циклофосфаном позволило достичь обратного эффекта: объем опухолевых клеток в асците оказался в 1,9 и в 1,4 раза ниже такового у животных, получавших изолированную химиотерапию.

Рост LLC не изменялся под влиянием вводимых изолированно ВРПС листьев, однако усиливался при использовании ВРПС зеленых соплодий. Отмечено многократное увеличение метастатических колоний в легких животных, получавших этот экстракт Среднее количество метастазов в результате курсового введения ВРПС зеленых соплодий о. клейкой возрастало в 2,6 (100 мг/кг) и 3,8 (200 мг/кг) раза по сравнению с контролем. Дозозависимо изменялась площадь метастатического поражения легких под влиянием ВРПС зеленых соплодий, увеличиваясь в 1,9 (100 мг/кг) и 3,8 (200 мг/кг) раза по сравнению со средней площадью метастазов у мышей нелеченой группы. Использование ВРПС зеленых соплодий также приводило к снижению антиметастатической активности химиопренара-та, что выражалось в увеличении количества метастазов на 1 мышь в 7,5 (100 мг/кг) и 3,0 (200 мг/кг) раза по сравнению со средним количеством метастазов в легких мышей, получавших только цитостатик. Эта же модель опухолевого роста позволила выявить наличие противоопухолевого эффекта у ВРПС коры и зрелых соплодий. Самостоятельное введение ВРПС коры в дозе 100 мг/кг мышам с LLC в 1,3 раза снижало массу первичной опухоли, а в дозе 200 мг/кг в 1,2 раза по сравнению с контролем. Кроме того, введение этого экстракта в дозе 200 мг/кг достоверно инги-бировало процесс диссеминации опухоли: количество метастазов на 1 мышь снижалось в 1,7 раза, а их средняя площадь - в 2,1 раза по сравнению с контролем. Эффективность цитостатической терапии под влиянием ВРПС коры не изменялась.

Курсовое введение ВРПС зрелых соплодий в дозе 200 мг/кг в 1,2 раза уменьшало массу опухоли по сравнению с контрольным значением, в дозе 100 мг/кг экстракт оказал стимулирующее влияние на метастазы, средняя площадь которых возросла в 3,3 раза по сравнению с контролем. Использование ВРПС зрелых соплодий в комбинации с циклофосфаном не изменяло эффективность химиотерапии.

Самостоятельное введение ВРПС листьев не изменяло развития LLC, но во всех сериях экспериментов способствовало снижению эффективности цитостагической терапии. Возрастало среднее количество метастазов и их площадь у животных, получавших циклофосфан в комбинации с ВРПС листьев. В первой серии экспериментов курсовое введение ВРПС в сочетании с цитостатической терапией приводило к увеличению среднего количества метастазов в 4,4 раза, а их средней площади - в 5,6 раза по сравнению с таковыми у леченных циклофосфаном мышей. Вторая серия

опытов продемонстрировала снижение ипгибирующего эффекта ци! оста-тика в отношении первичного опухолевого узла на фоне курсового введения ВРПС листьев. Масса опухоли у мышей, получавших комбинированную терапию, была в 1,2 2,0 раза выше 1аковой у леченных химиопре-паратом животных.

Несмотря на то, что ПС одного растения являются биополимерами, состоящими преимущественно из мономерных звеньев одних и тех же моносахаридов, возможны различия в степени разветвленное!и, молекулярном весе, относительном количестве тех или иных остатков моносахаров. Отсутствие зависимости между первичной структурой утлеводных полимеров объясняют тем, что для биоло! ической активности имеют значение структуры высших порядков или даже строение мицелл [Maeda Y.Y., Takahama S., Yonekawa П., 1998]. Таким образом, возможно, cipyic-тура мицелл ПС или скорость их образования связаны со степенью содержания растительных восков в исследуемой ткани, которое различно в ПС из зеленых и опрбковевших частей растения.

Иногда действующие вещества из растительного сырья, у которого по данным различных источников, ожидаются противоопухолевые свойства, проявляют обратную активность в отношении развития опухолевого процесса. Есть данные, свидетельствующие о меньшем противоопухолевом эффекте у извлечения по сравнению с нативным экстрактом. Так, показано наличие противоопухолевой, антимешсташчсской активности у экстракта шлемника байкальского, но противоопухолевая активность флавоноида шлемника байкалина описана как более низкая [Разина Т.Г. и др., 1988, 1991].

И стимуляция опухолевою pocia, и ингибирование его не противоречит основному взгляду ученых на механизм действия ПС из растений. Считается, чю антинеопласгичсское действие полисахаридов объясняется не прямым влиянием на опухоль, а опосредованным действием через систему иммуншета опухоленосителя [Wong C.K. et al., 1994]. Известно, что иммунная система организма в условиях опухолевого роста может не только препятствовать, но и содействовать процессу неоплазии [Громов С.А. и др., 1988J. Ошечалосъ переключение активированных ростом опухоли макрофагов на синтез ростовых факюров, поддерживающих пролиферацию опухолевых клеток. Макрофаги способны обеспечшь вновь формирующийся опухолевый узел различными факюрами ангиогенеза, что может содействовать процессу метастазирования опухоли [Bickwell R., Vallcc В.1., 1989]. Неоднозначность взаимоотношений ПС и системы иммунитета демонстрируется рядом авторов. Отмечено, что онколитиче-ский эффект полисахаров предотвращался антилимфоцитарной сывороткой или удалением тимуса [Maeda Y.Y., Chihara Ci., 1971, 1973]. В других исследованиях выраженное ингибирующее действие в отношении ряда трансплантатов опухоли человека получено при использовании растительного полисахарида палюстрана именно на бесгимусных мышах [Бу-харова И.К., Осокина Л.И., 1990]. Таким образом, возможно, в реализа-

ции действия ПС на опухолевый процесс участвуют как система неспецифической резистентности организма, так и система специфического противоопухолевого иммунитета. Поскольку чти системы имеют значение рсгуляторных и не только осуществляют угнетение опухолевого рос-ia, но и могут служить его промоторами, то активизация их может приводить к нежелательному всплеску активности трансформационных процессов.

Исходя из полученных данных, можно сделать заключение, что ВРГ1С из разных частей растения, по-видимому, реализуют свое влияние на опухоль через разные звенья систем специфической и неспецифической защиты в организме животных. Однако это заключение носит гипотетический характер и нуждается в экспериментальной проверке.

Иногда уменьшение молекулярного веса в ряду гомологов сопровождается потерей биологической активности или ее инверсией [Yoshioka Y., Emori М, et al., 19751. В нашем исследовании гидролиз полисахаридов коры о. клейкой до более мелких фрагментов - гемицеллюлоз - приводил к стимуляции развития злокачественных опухолей на двух моделях. Так, курсовое введение ГЦ коры в дозе 100 мг/кг мышам с АКЭ увеличивало объем опухолевых клеток в асците в 1,6 раза по сравнению с контролем, при этом стимуляция роста опухоли составила 58 %. Изолированное введение ГЦ коры в той же дозе мышам с LLC вызывало увеличение массы опухоли в 1,2 (р<0,05) против контрольного показателя. Эффективность терапии циклофосфаном АКЭ не изменяласьпод влиянием ГЦ зрелых соплодий, тогда как BPITC этой части о. клейкой увеличивали противоопухолевую активность цитосгатика на этой же модели опухолевого роста.

Развитие LLC продемонстрировало, что фрагменты растительных ПС могут взаимодействовать с опухолью иначе, чем ВРПС этой же части растения. Так, ГЦ зрелых соплодий на этой модели не только не обладали собственной противоопухолевой активностью, но и, напротив, способствовали усилению процесса диссеминации, увеличивая количество метастатических узлов в легких в 1,6 раза (р<0,05) по сравнению с контрольным значением. Вместе с тем, ГЦ зеленых соплодий действовали в отношении метастатических колоний так же, как и ВРГ1С этой части растения - курсовое введение этих биологически активных веществ сопровождалось ростом количества метастазов и/или их средней площади. Следует отметить достоверное снижение антиметастатического действия цитоста-тика при использовании в комбинированной терапии ГЦ зеленых и зрелых соплодий о. клейкой, выражавшееся в статистически значимом увеличении метастатических колоний в легочной ткани (в 1,6 - 2,1 раза) и их площади (в 2,9 - 2,2 раза).

Таким образом, фрагменты растительных ПС могут проявлять меньшую или инвертированную противоопухолевую активность по сравнению с негидролизованным полисахаридом, но могут и не отличаться от более крупных полимеров по характеру взаимодействия с опухолью. Возможно, химическая ультраструктура ВРПС и ГЦ, извлеченных из оп-

ределенной части растения, определяет направление влияния экстракта на развитие опухоли.

Пектиновые вещества обладают высокими сорбционными свойствами, а также гиполипидемическим действием [Виноградова ТА. и др., 2001]. Известно, что гинерлипидемия сопровождается подавлением иммунологической реактивности, повышение уровня триглицеридов благоприятно влияет на процесс неоаш иогенеза, а за счет снижения концентрации липидов крови ухудшаются условия для последнего [Дильман В.М., 1983; Wiley Е., Meclain Р., 1988]. Возможно, гиполипидемическим действием объясняется свойство ПВ тормозить рост опухоли, которое выявлено в эксперименте у ПВ зеленых и зрелых соплодий, снижающих при изолированном введении в дозе 100 мг/кг объем опухолевых клеток в асците мышей с АКЭ в 1,8 и 1,4 раза по сравнению с контролем. Параметры развития АКЭ после введения ЦФ и цитосгагика в сочетании с Г1В зеленых или зрелых соплодий не имели значимых различий.

Косвенное подтверждение сопряженности действия ПВ на опухоль с ухудшением неоангиогенеза дает факт замедления процесса формирования метастазов в легких мышей с LLC при самостоятельном курсовом введении ПВ листьев и зрелых соплодий о. клейкой. Так, терапия опухоли ПВ листьев приводила к уменьшению как среднего количества метастазов (в 1,4 раза), так и их средней площади (в 1,6 раза). Введение животным ПВ зрелых соплодий вызывало снижение площади метастатического поражения в 2,6 раза. При этом сочетание химиотерапии цикло-фосфаном и лечения ПВ приводило к обратному эффекту: при использовании ПВ листьев увеличивалось количество ме1астазов на I мышь, а ПВ зрелых соплодий - их средняя площадь, что, однако, не может служить основанием для категоричного отрицания использования ПВ из этих частей ольхи клейкой в качестве средства дополнительной терапии опухоли. Выявленные антиметастагические свойства ПВ при их изолированном введении после подтверждения на других метастазирующих опухолях мышей и крыс могут оказаться полезными в реабилитационном периоде после окончания курсов цитостатической терапии или хирургического вмешательства. Кроме того, Г1В могли бы сорбировать токсины и вредные метаболиты, нормализуя гомеостаз и состояние регуляторных систем организма.

В заключении скриниговой части исследования изучена возможность использования в терапии перевиваемых опухолей комплексных водных экстрактов коры и листьев о. клейкой, представляющих интерес в качестве источника целого набора биологически активных веществ, таких как флавоноиды, растительные стероиды, полисахариды, дубильные вещества, витамины и аминокислоты, определяющих фармакологическое действие.

На модели АКЭ введение ВЭ коры в дозе 200 мг/кг и ВЭ листьев в 100 мг/кг приводило к достоверному уменьшению объема опухолевых клеток, при этом ТРО составило 29 %. Использование ВЭ листьев новы-

шало эффективность химиотерапии: ТРО составило 50 % при совместном использовании цитостатика и ВО листьев (100 мг/кг) против 14 % (р>0,05 по сравнению с контролем) при использовании только ЦФ.

На модели LLC ВЭ листьев в дозе 100 мг/кг ингибировал рост первичного узла на всех стадиях развития опухолевого процесса. 11а 17 сут развития LLC у мышей линии С57В1/6 масса опухоли в группе получавших ВЭ листьев животных была в 1,6 раза меньше, чем в контроле. Достоверное ингибирующее влияние экстракта сохранялось в этом эксперименте и на 23 сут роста опухоли: ТРО составило 34 %.

Выявлено свойство комплексных водных экстрактов коры и листьев повышать эффективность цитостатической терапии. Так, ВЭ коры при введении животным в дозах 100 и 200 мг/кг на фоне цитостатика вызывал уменьшение числа метастатических колоний в легких в 1,7 и 1,6 раза по сравнению с группой леченных только цитостатиком мышей. Среднее количество метастазов в легких достоверно снижалось при включении в схему лечения ВЭ листьев в дозе 100 мг/кг: 12,7±1,5 метастазов выявлено в группе получавших циклофосфан и 6,5±1,1 - у животных после введения цитостатика и ВЭ листьев. При увеличении дозы ВЭ листьев до 200 мг/кг отмечалось не только повышение антиметастатических свойств цитостатика, но и увеличение его ингибирующего действия по отношению к первичному опухолевому узлу.

Во второй серии экспериментов на 17 сут после трансплантации LLC антиметастатический эффект ВЭ листьев проявлялся в снижении 4M до 33% против 50% у получавших цитостатик мышей. Снижение интенсивности диссеминации опухоли в группе комбинированной терапии отмечалось и на 23 сут развития злокачественного новообразования: количество метастазов отличалось от такового в группе получавших химиотерапию мышей в 2,7 раза.

Есть основания связывать противоопухолевую активность ВЭ коры и листьев с наличием в их составе лупенона и глютинола. У первого в 1972 году было открыто противоопухолевое действие. В экспериментах in vivo этот растительный стероид тормозил рост карциносаркомы Уокер 256 [Sheth К. et al., 1973]. Способность второю растительного извлечения ингибировать злокачественный рост подтверждена экспериментальным исследованием, в котором глютинол тормозил in vitro развитие трех клеточных линий рака человека: MCF-7 (рак груди), NCI-H460 (немелкокле-точный рак легкого) и SF-268 (рак ЦНС) [Ritch-Krc Е.М., Thomas S. et al. 1996; Madureiraa A.M., Duarteb M.T. et al., 2004|. Сходство химического состава растений одного рода и высокий процент дубильных веществ в коре о. клейкой позволяет предположить, что в их число может входить орегонин, выделенный из листьев о. пушистой. Это соединение повышает цитотоксичность NK-клеток и тормозит рост меланомы B16-F10. При терапии орегонином продолжительность жизни этих животных возрастала на 51% [Joo S.S., Kim H.J., et al., 2002].

У многих извлечений из ольхи клейкой обнаружена способность

снижать токсическое действие циклофосфана на кровь на 3 сут после введения цитостатика. У мышей с АКО иа пике лейкопении наблюдалось повышение числа клеток белой крови в результате использования ВРПС листьев (в 1,9 2,0 раза), ВРПС зрелых соплодий (в 1,6 раза), ВРПС зеленых соплодий (в 2,2 раза). Если в группе получавших циклофосфан животных количество лейкоцитов в периферической крови на 3 сут снижалось до 1,9+0,1 Г /л, то включение в схему лечения ГЦ зрелых или зеленых соплодий о. клейкой в дозе 100 мг/кг увеличивало этот показатель до 3,9+0,1 и ! 5,0+0,4 Г/л соответственно. Менее выраженный, но достоверный анти-

лейкопенический эффект отмечен у ПВ из зеленых соплодий. Количество лейкоцитов повышалось в результате использования на фоне цитостати-ь ческой терапии ВЭ коры (в 1,4 1,7 раза) и ВЭ листьев (в 1,5 - 1,7 раза)

по сравнению с группой получавших циклофосфан животных. При этом следует отметить, чго только в случае ведения мышам с АКЭ комплексных водных экстрактов коры и листьев о. клейкой свойство снижать токсический эффект цитостатика сочеталось с повышением его противоопухолевого действия.

Химический состав различных частей о. клейкой объясняет свойство ее извлечений уменьшать токсичность химиотерапии. Из группы дубильных веществ в коре о. клейкой обнаружены эллаготанины альникортин и альникортол, которые проявили себя как гепатопротекторы. Им свойственно восстанавливать процессы репарации в гепатоцитах, улучшать работу антиоксидантных систем печени, проявлять мембраностабиличи-руюшнй эффект [Бунятян Н.Д., Чикиткина В.В., Яковлева Л.В., 1988]. Возможно, что цитопротекторный эффект этих действующих начал распространяется не только на клетки печени.

В коре, листьях и соплодиях о. клейкой отмечается высокое содержание полисахаридов, которые, с одной стороны, связывают токсины и вредные метаболиты, с другой - оказывают митогенное действие на клетки неспецифической резистентности, нормализуя гомеостатические показатели [Cragg G.M., Newman D.J. et al., 1997; Виноградова T.A. и др., 2001]. Для кислых ПС характерно прямое гемостимулирующее действие [Noordegraf Е.М., Ploemacher R.E., 1980]. Убедительно показано, что D-глюкуроновая кислота является стимулятором грануломоноцитопоэза в условиях цитостатической гемодспрессии [Симанина Е.В., 1990]. Поскольку в состав экстрактов, проявивших антилейкопенический эффект в условиях цитостатической терапии, входит галактуроновая кислота, имеющая сходство с глкжуроновой в химическом составе и являющаяся ее эпимером, резонно предположить, что именно она реализует антитоксическое действие извлечений из о. клейкой.

В побегах, почках и соплодиях о. клейкой содержатся кверцетин-3-софорозид, гиперозид, глюкопиранозид, которые в силу принадлежности к флавоноидам обладают цитопротективным эффектом. Содержащиеся в растения три- и сесквитерпеновые соединения потенцируют эффекты флавоноидов [Виноградова Т.А. и др., 2001], и не исключено, что найден-

ные в коре, листьях о.клейкой терпеноиды глютинол, лупенон, тараксе-рол, р- ситостерин могут выполнять такую функцию.

Является неоспоримым значение системы иммунитета в осуществлении противоопухолевой защиты организма. Вместе с тем, остается открытым вопрос о действительном вкладе тех или иных показателей в повышение противоопухолевого и антиметастатического действия специфической терапии опухолей. В наших экспериментах на моделях перевиваемых АКЭ и LLC выявлено стимулирующее действие на развитие опухоли у ВРГТС листьев о клейкой и ингибирующее - у комплексного ВЭ листьев, при этом сочетанное использование исследуемых средств на фоне терапии ЦФ вызывало соответственно снижение или повышение противоопухолевого эффекта цитостатика. С целью изучения механизмов реализации наблюдаемых эффектов были выполнены серии экспериментов, в коюрых после лечебных воздействий оценивалась функциональная активность клеток лимфоузлов, суспензии спленоцитов и нейтрофильных гранулоцитов, а также определялось количество больших гранулярных лимфоцитов.

Показано, что развитие LLC у мышей вызывало снижение функциональной активности лимфоидных клеток. Клетки лимфатических узлов получавших ВРПС листьев о. клейкой мышей не изменяли своей функциональной активности, она оставалась на таком же низком уровне, как и у нелеченых животных. Выраженное иммунотропное действие в тесте нейтрализации опухолевых клеток Винна обнаружено у ВЭ листьев: масса опухоли у мышей, которым вместе со взвесью опухолевых клеток были перевиты клетки лимфоузлов леченных ВЭ листьев мышей, была достоверно ниже, чем таковая в группе животных, которым опухоль была перевита совместно с лимфоидными клетками нелеченых животных. Клетки лимфоузлов мышей с LLC, леченных ЦФ, введенные вместе с опухолевыми, также обнаруживали высокую функциональную акшв-ность, что регисгрировалось в виде достоверного торможения первичного опухолевого узла, уменьшения количества и площади метастазов по сравнению с этими показателями соответствующего контроля. Полученные результаты согласуются с данными литературы: ЦФ, вводимый в до-sax 100, 125 и 250 мг/кг стимулировал противоопухолевую активность клеток регионарных лимфоузлов леченых ЦФ мышей, что было зарегистрировано при введении мышам взвеси опухолевых и иммунекомпетентных клеток, полученных из лимфатических узлов мышей с опухолью на 12, 24 и 45 сутки после введения химиопрепарата |Агеенко А.И. и др., 1982].

В эксперименте по изучению функциональной активности клеток лимфоузлов выявлено иммуносупрессивное действие ВРПС листьев о. клейкой при их введении совместно с ЦФ. Так, масса опухоли и показатели ее диссеминации у животных, которым вместе со взвесью клеток LLC были перевиты клетки лимфатических узлов мышей, леченных комбинацией ЦФ и ВРПС листьев, не отличались от таковых у животных, ко-

торым клетки LLC были перевиты совместно с клетками лимфоузлов нелеченых животных. Вероятно, опухолестимулирующая активность этого экстракта так или иначе связана с инактивацией им клеточного звена специфического противоопухолевого иммунитета. Напротив, клетки лимфоузлов мышей, леченных ЦФ в сочетании с комплексным ВЭ листьев о. клейкой, сохраняли высокую активность по отношению к опухолевым клеткам: масса перевитой с ними опухоли, количество и площадь метастазов оставались на уровне животных, которым опухоль перевивали вместе с лимфоидными клетками леченных ЦФ мышей, при этом частота метастазирования имела тенденцию к уменьшению.

Одно из ведущих мест в противоопухолевом иммунитете отведено натуральным киллерам, осуществляющим деструкцию клеток опухоли в циркулягорном русле [Mooze М., 1985]. Клеточная суспензия спленоци-гов - наиболее распространенный объект исследования функциональной активности ЕК, поскольку в селезенке определяется максимальный уровень их цитотоксичности.

Введение ВРПС листьев о. клейкой не изменяло цитотоксичность суспензии спленоцитов мышей с LLC, судя по ИЦТ органа и его клеточ-ности на 17 сут развития опухоли. Использование ВЭ листьев ольхи, напротив, повышало ИЦТ клеток селезенки: цитотоксичность суспензии спленоцитов мышей, леченных этим экстрактом, на 17 сут развития необ-ластомы была в 1,9 раза выше, чем у мышей контроля и находилась на уровне показателей интактных животных. Возможно, снижение массы опухоли под влиянием этого извлечения из ольхи на 17 сут развития LLC связано с более высокой активностью ЕК-клеток.

Однократное введение ЦФ мышам с LLC вызывало иммуносупрес-сию, выражавшуюся в снижении клеточности селезенки и уменьшении цитотоксичности суспензии спленоцитов. Сочетание химиотерапии и ВРПС листьев усугубляло снижение функциональной активности клеток селезенки, достоверно снижая ИЦТ в 2,8 раза против такового в группе леченных только цитостатиком мышей. Возможно, увеличение массы первичной опухоли в группе мышей, получавших циклофосфан и ВРПС листьев по сравнению с таковой у леченных цитостатиком мышей, объясняется функциональной несостоятельностью ЕКК, вызванной использованием ВРПС листьев. Комбинированная терапия ВЭ листьев и ЦФ выявила тенденцию к увеличению ИЦТ селезенки и уменьшала токсическое влияние цитостатика на клеточность органа: количество спленоцитов в группе сочетанной терапии было в 1,4 раза выше такового у леченных циклофосфаном мышей.

В терминальную стадию развития опухоль ингибировала цитотоксичность суспензии спленоцитов контрольных животных, что сделало невозможным определить JTE 10х106 спленоцитов и активность селезенки, выраженную в J1E, у мышей этой группы. Применение ВРПС листьев для терапии LLC к 23 сут развития опухоли оказало стимулирующее влияние на перечисленные показатели цитотоксичности спленоцитов в сочетании

с тенденцией к увеличению ИЦТ селезенки. По-видимому, на этом этапе развития опухоли стимуляция функциональной активности клеточных эффекторов неспецифической резистентности является неэффективной, что подтверждается показателями роста опухоли у леченных ВРПС листьев животных. Использование ВО листьев для терапии LLC даже в терминальную фазу развития опухоли сопровождалось достоверным повышением ИЦТ селезенки (в 2,5 раза) и сочеталось с ингибицией роста опухоли у леченных этим ВЭ мышей: ее масса оказалась в 1,5 раза ниже по сравнению с контролем.

Восстановление функциональной активности ЕКК после введения цитостатика происходит на 7 - 10 сут [Банько J1.B., Сухих Г.Т., 1983], что подтвердилось в нашем исследовании: в группе получавших химиотерапию мышей на 9 сут после инъекции ЦФ произошло увеличение J1E спленоцитов и активности селезенки, выраженной в JIE в сочетании с тенденцией к увеличению ИЦТ селезенки. Совместное применение ВРПС листьев и цитостатика не изменяло цитотоксмчности спленоцитов, однако ИЦТ селезенки имел тенденцию к снижению. Косвенно подтверждает неполноценное функционирование клеточных эффекторов неспецифической резистентности масса опухоли в группе получавших комбинированную терапию животных, которая оказалась в 1,2 раза больше таковой у леченных ЦФ мышей. Сочетанное использование ВЭ листьев и цикло-фосфана существенно не изменяло показателей функциональной активности спленоцитов, но при этом отменяло спленомегалию, которая является серьезным осложнением терминальной стадии развития опухоли

Поскольку цитотоксичность NK-клеток является максимальной на периферии, нами оценивалось количество БГЛ и их доля в пуле лимфо-идных клеток периферической крови мышей с LLC, получавших лечение ВРПС и ВЭ листьев о. клейкой изолированно и в сочетании с ЦФ. Гемо- и иммунодепрессия, вызванная введением последнего, проявилась в снижении абсолютного и относительного количества БГЛ в циркулирующей крови. ВРПС листьев не изменяли количество БГЛ крови в абсолютном и относительном выражении и не отменяли супрессивного влияния ЦФ. ВЭ листьев о. клейкой, используемый изолированно, достоверно снижал относительное количество БГЛ в крови по сравнению с контролем. Сочетанное применение этого экстракта и ЦФ отменяло снижение доли БГЛ среди прочих лимфоцитов, вызванное введением цитостатика. Стимулирующий эффект ВЭ листьев подтверждался и увеличением абсолютного числа БГЛ в 3,6 раза по сравнению с этим показателем у леченных только циклофосфаном мышей.

В терминальную стадию развития опухоли оба растительных экстракта проявили свойство повышать абсолютное и относительное количество БГЛ в циркулирующей крови, однако в случае введения ВРГ1С периферические ЕКК не смогли противостоять процессу диссеминации опухоли: средняя площадь метастатического поражения у леченных ВРПС мышей оказалась в 4,1 раза выше контрольной.

Восстановление клеточного состава после введения цитостатика к 23 сут развития опухоли проявилось в тенденции к увеличению относительною количества БГЛ. Сочетанное применение ВРПС и ЦФ не изменяло абсолютного числа БГЛ и их доли в пуле лимфоцитов периферической крови, а комбинированная терапия, включавшая ВЭ листьев и в терминальную фазу развития неоплазмы сопровождалась повышением абсолютного и относи[ельного количества Б1 Л. Возможно, усиление антиме-тас1агического эффекта ЦФ при его комбинации с ВЭ листьев связано с повышением числа периферических ЕК-клеток, которые морфологически определяются как БГЛ.

Таким образом, ВРПС листьев при самостоятельном использовании не обладали стимулирующим действием в отношении функциональной активности спленоцитов и числа БГЛ на периферии, хотя длительное курсовое введение незначительно повышало показатели амивности этих эффекторов неспецифической резистентности. ВЭ листьев, напротив, продемонстрировал выраженный стимулирующий эффект в отношении циютоксичности суспензии спленоцитов и показателей периферической активности ЕКК.

По-видимому, в реализации противоопухолевого действия ЕК-клеток имеет значение временной интервал их активации на фоне развития опухоли. Скорее всего, именно высокая скорость ответа системы неспецифической резистентности на введение ВЭ листьев обусловила своевременное повышение показателей противоопухолевой активности ее эффекторов, которое, в свою очередь, привело к проявлению противоопухолевого эффекта этого извлечения из о. клейкой. Это возможно, если в состав комплексного водного экстракта входиi субстанция, подобная ореюнину, выделенному из о. пушистой, который является иммуномоду-лятором. Он повышает цитотоксичность N К.-клеток, тормозит рост мела-номы B16-F10, активирует продукцию интерферона макрофагами, нормализует показатели клеточного гомеостаза.

Определенную роль в системе противоопухолевой резистентности играют фагоцитирующие клетки [Фримель Г., 1987]. В настоящем исследовании получены данные, свидетельствующие об о)сугствии влияния ВРПС листьев о. клейкой на показатели HCT-теста после 9 введений. 11а 23 сут развития LLC введение ВРПС вызывало повышение спонтанной фаюцитарной активности нейтрофилов как в относительных, так и в абсолютных единицах.

Иная динамика фагоцитарной активности Г1МЯН отмечалась при изолированном использовании комплексного ВЭ листьев: поглотительная способность клеюк в спонтанном варианте НСТ-теста достоверно снижалась на 17 сут, тогда как в терминальную фазу развития LLC уменьшалось абсолютное количество фагоцитирующих клеток, но повышался их относительный фаюцитарный резерв по сравнению со значениями в группе нелеченых животных.

На пике лейкопении в группе получавших химиотерапию мышей выявлено значительное снижение спонтанной ФА тестируемых клеток при сохранении их способности реагировать на дополнительный стимул зимозан. Использование ВРГ1С листьев о. клейкой на фоне цитостатика приводило к дальнейшему усугублению иммунодепрессии: снижалась как спонтанная, так и стимулированная зимозаном ФА нейтрофилов. В эти сроки наблюдения ВЭ листьев приводил к достоверному увеличению абсолютного количества фагоцитирующих клеток.

В терминальную стадию развития LLC совместное введение ЦФ и ВРПС листьев не вызывало изменений спонтанной поглотительной способности нейтрофилов и фагоцитарного ре ¡ерва, но приводило к повышению абсолютного количества фагоцитирующих клеток в периферической крови мышей. На 23 сут роста опухоли отмечалось снижение резерва поглотительной способности в сочетании с увеличением спонтанной ФА нейтрофилов в ее относительном выражении у мышей, леченных комбинацией циклофосфана и ВЭ листьев ольхи клейкой.

Известно, что значение Г1МЯН в реализации противоопухолевого ответа организма уступает по величине таковому макрофагов и естественных киллеров [Ройт А., 1991]. Возможно, что влияние на нейтрофиль-ное звено резистентности не служит основной линией взаимодействия исследованных экстрактов о. клейкой и системы противоопухолевой защиты. Более того, для определенных видов воспалительного и других патологических процессов доказана противоположная роль макрофагов и нейтрофилов в формировании ответа организма [Букреева Е.Б., 2004]. По-видимому, основное воздействие ВРПС и составных частей ВЭ направлено на главные эффекторные клетки неспецифической резистентности, а снижение либо отсутствие значимых изменений в активности ПМЯН является компенсаторным и возникает из-за гиперактивации прочих механизмов борьбы с опухолевой прогрессией.

Поскольку оценка противоопухолевых свойств и способности изменять эффективность цитостатической терапии биологически активных веществ и комплексных экстрактов о. клейкой проводилась на одних и тех же моделях перевиваемых опухолей в аналогичных экспериментальных условиях, мы имеем все основания провести сравнительный анализ эффективности исследуемых средств.

Изолированное введение мышам с АКЭ водорастворимых полисахаридов и гемицеллюлоз зеленых и зрелых соплодий продемонстрировало отсутствие влияния этих средств на развитие опухоли, а использование ВРПС листьев и ГЦ коры вызывало достоверную стимуляцию роста бла-стомы (на 45 - 58 % по сравнению с соответствующим контролем). ПВ зеленых и зрелых соплодий и комплексные ВЭ проявили себя в качестве ингибиторов опухолевого роста при их изолированном использовании и вызывали торможение рос та АКЭ на 29 - 43 % по сравнению с контролем. На модели LLC показано отсутствие изменений ее развития под влиянием изолированно вводимых BPIIC листьев и ВЭ коры.

Таблица 2

Сравнительная характеристика фармакологических эффектов биологически активных веществ ___и комплексных экстрактов ольхи клейкой__________

Биологические активные вещества и экстракты ольхи клейкой Аденокарцинома Эрлиха Карцинома легких Льюис

Изолированное введение Комбинация с цикло-фосфаном Изолированное введение Комбинация с циклсфосфаном

ВРПС коры Не изучался Не изучался Торможение роста опухоли, ингибиция метастазирования Нет эффекта

ВРПС листьев Стимуляция роста опухоли Т эффективности химиотерапии Нет эффекта 1 эффективности химиотерапии. _стимуляция метастазирования

ВРПС зеленых соплодий Нет эффекта ... Нет эффекта Стимуляция роста опухоли, стим\ляция метастазирования Стимуляция метастазирования

ВРПС зрелых соплодий Нет эффекта Т эффективности химиотерапии Стимуляция роста опухоли, стимуляция метастазирования Нет эффекта

ГЦ коры Стимуляция роста опухоли Нет эффекта Стимуляция роста опухоли Нет эффекта

ГЦ зеленых соплодий Нет эффекта Не1 эффекта Стимуляция метастазирования Стимуляция метастазирования

ГЦ зрелых соплодий Нет эффекта Нет эффекта Стимуляция метастазирования Стимуляция метастазирования

ПВ листьев Не изучался Не изучался Ингибиция метастазирования Стимуляция метастазирования

ПВ зеленых соплодий Торможение роста опухоли Нет эффекта Не изучался Не изучался

ПВ зрелых соплодий Торможение роста опухоли Нет эффекта Ингибиция метастазирования Стимуляция метастазирования

ВЭ коры Торможение роста опухоли Нет эффекта Нет эффекта Ингибиция метастазирования

ВЭ листьев Торможение роста опухоли Т эффективности химиотерапии Торможение роста опу холи Т эффективности химиотерапии, ингибиция метастазирования

Примечание Т- повышение, 4. - снижение эффективности химиотерапии

Применение ВРПС зеленых и зрелых соплодий вызывало стимуляцию роста опухоли и увеличение интенсивности ее диссеминации. Стимуляторами развития LLC зарекомендовали себя ГЦ коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий. Вместе с тем ВРПС коры и ВЭ листьев ингиби-ровали развитие этой опухоли (табл. 2).

Вводимые на фоне химиотерапии мышам с АКЭ биологически активные вещества и экстракты о. клейкой, в основном, не изменяли эффективность цитостатической терапии. Исключение составили ВРПС листьев и зрелых соплодий, а также ВЭ листьев, применение которых в сочетании с ЦФ приводило к повышению его противоопухолевого эффекта. Не выявлено влияния на эффективность цитостатической терапии мышей с LLC у ВРГ1С коры и зрелых соплодий, а также ГЦ коры. Сочетанное использование на этой модели опухолевого роста циклофосфана и ВРПС листьев и зеленых соплодий, Г'Ц зеленых и зрелых соплодий, ПВ листьев и зрелых соплодий существенно снижало эффективность химиотерапии, уменьшая антиметастатическое действие химиопрепарата. Применение ВЭ коры и листьев на фоне цитостатической терапии карциномы легких Льюис, напротив, вызывало повышение антиметастатического эффекта циклофосфана (табл. 2).

Таким образом, не всегда рекомендации народной медицины по применению фитопрепаратов в лечении той или иной патологии соответствуют действительному влиянию средств растительного происхождения на развитие заболевания.

Многолетний опыт использования - это еще не доказательство истинной фармакологической активности. Необходимым условием достоверного заключения о способности растительного экстракта тормозить рост опухоли является экспериментальная проверка сведений о терапии им раковых заболеваний. Кроме того, в настоящем исследовании показано, что фракционирование нативного экстракта подчас отменяет либо противоположно изменяет его активность в условиях развития патологического процесса.

Данные народной медицины об ингибирующем влиянии извлечений из листьев о. клейкой на процесс неоплазии в случае комплексного ВЭ нашли экспериментальное подтверждение. Более того, это извлечение показало свойство повышать эффективность химиотерапии с одновременным снижением токсического влияния ЦФ на организм. Показано, что ВЭ коры является иммунотропным агентом, и активация системы неспецифической резистентности, а также повышение функциональной активности клеток лимфоузлов один из путей реализации антинеопластиче-ского эффекта этого экстракта (табл. 3).

Следовательно, ВЭ листьев коры проявил свойство модификатора биологических реакций, нормализуя показатели клеточного гомеостаза и активируя те звенья системы естественной резистентности, которые выполняют ведущую роль в реализации ответа организма на опухолевую инвазию. Действительно, по данным литературы именно гетерогенная

клеточная популяция лимфатических узлов и селезенки является наиболее важным компонентом противоопухолевой резистентности [Сспиа-швили Р.И. и др., 2000]. Отсутствие прямого активирующего действия па ФА нейтрофилов не отражалось на подавлении опухолевого роста Вг) листьев о. клейкой, что подтвердило мнение о меньшей роли нейгрофилон в противоопухолевой сопротивляемости организма, чем лммфоидных клеток и спленоцитов (табл. 3).

Таблица 3

Влияние курсового введения ВРГ10 и ВО листьев на функциональную активность клеточных факторов системы нсспецифической резистентности _

Исследуемые извлечения И) о. клейкой

ВРПС'

В)

Лим<

1§ п я о л ет М

Л.

юузлы

к о ^ к ~ £ £ © о ЯД

^ са ае

03

Сплсноциш Г ГГейтрофилы

.1

я и да к

" х: . _]__

н

1 5©

§

« я

БГЛ

й 1 я и и =

£

п х о ^ л и

-т.

г

Примечание | - снижение функциональной активности, | - повышение функциональной активности. - - шсугсшие влияния на функциональную .нпмшюсть, в скобках указаны данные н терминальную ф.»у ратития опухоли

Иммунотропность и некоторые свойства модификатора биологических реакций обнаружена и у ВРИС листьев о. клейкой (табл. 3). И литературе описаны случаи, когда применение природных или синтетических иммуномодуляторов сопровождалось побочными и токсическими эффектами, отсутствием антиканцерогенного действия, а иногда и усилением опухолевого роста [Купин В.И. и др., 1986; Cragg О.М. ег а1., 1988, 1997]. Вопреки мнению о позитивной иммуностимулирующей активности поли-сахаридных комплексов в повышении противоопухолевой сопротивляемости организма под влиянием ПС, применение ВРПС листьев о. клейкой не только не иигибировало опухолевый рост, но и стимулировало его, а также снижало эффективность цитосгатической терапии.

В состав цельного ВО листьев о. Клейкой, наряду с другими биологически активными веществами, входят полисахаридные комплексы, однако, возможно, многокомпонентный состав экстракт нивелирует их способность стимулировать рост опухоли. По-видимому, только комплексное взаимодействие всех составляющих ВО листьев о.клейкой, в том числе, и микро)лементного спектра, обеспечивают корригирующее влияние этого извлечения на органиш с опухолью, проявляющееся в эффективном сопротивлении опухолевой прогрессии. Листья о. клейкой являются природным концентратором меди, и в ВО отмечается ее высокое содержание [Сербии А.Г. и др., 2000]. Медь входит в состав цитохромок-сидазы, фермента, непосредственно регулирующего транспорт электрона в клетке, а значит, влияющего на активность вторичных мессипджеров и

формирование клеточного ответа. Следовательно, еще одно возможное объяснение противоопухолевого эффекта ВЭ о. клейкой состоит в нормализации клеточного метаболизма и более быстрой реализации реакции на присутствие опухоли.

В результате проведенных исследований доказана способность ВЭ листьев о. клейкой тормозить рост опухоли, повышать эффективность химиотерапии с одновременным снижением ее токсичности. Показано, что выделение отдельных компонентов из растительного сырья снижает противоопухолевую активность последнею или меняет ее на опухоле-стимулируюшую. В ходе изучения механизма реализации действия на опухоль ВРГ1С и ВЭ листьев о. клейкой подтверждена ведущая роль клеточных факторов системы естественной резистентности (клеток лимфоузлов, спленоцитов) в формировании ответа организма на опухолевую инвазию и второстепенная - нейтрофилов.

Учитывая повышение эффективности химиотерапии перевиваемых опухолей и снижение токсичности последней, представляется возможным рассмотрение ВЭ о. клейкой для применения в онкологической практике. Данные настоящего исследования могут служить основой для углубленного изучения этого извлечения из о. клейкой, а богатая сырьевая база -мотивацией для создания нового препарата растительного происхождения, пригодного для использования в качестве средства дополнительной терапии злокачественных новообразований.

ВЫВОДЫ

1. В результате скрининговых исследований противоопухолевых свойств 10 биолог ически активных веществ и экстрактов ольхи клейкой на модели аденокарциномы Эрлиха обнаружен выраженный ингибирую-щий эффект у пектиновых веществ зеленых и зрелых соплодий, а также у комплексных водных экстрактов коры и листьев (судя по уменьшению объема опухолевых клеток).

2. На модели карциномы легких Льюис водорастворимые полисахариды коры способствовали торможению роста опухоли и снижали ее диссе-минацию, пектиновые вещества листьев и зрелых соплодий ингибировали процесс метастазирования, а комплексный водный экстракт листьев продемонстрировал выраженное противоопухолевое действие.

3. Сочетанное применение биологически активных веществ или экстрактов ольхи клейкой и циклофосфана для терапии аденокарциномы Эрлиха позволило выявить повышение эффективности химиотерапии в случае включения в схему лечения водорастворимых полисахаридов листьев, зрелых соплодий и комплексного водного экстракта листьев.

4. Введение мышам с карциномой легких Льюис комбинации циклофосфана и комплексных водных экстрактов коры и листьев ольхи клейкой увеличивало антиметастатическое действие цитостагика, а комплекс-

ный водный экстракт листьев способствовал увеличению ингибирующею действия циклофосфана в 01 ношении первичного опухолевого узла.

5. Использование в скрининге двух моделей опухолевого роста позволило выявить стимуляцию развития аденокарциномы Эрлиха на фоне ведения водорастворимых полисахаридов листьев и гемицеллюлоз коры, а также активацию развития карциномы легких Льюис при терапии водорастворимыми полисахаридами зеленых и зрелых соплодий, гемицеллю-лозами коры, зеленых и зрелых соплодий. Опухолевый рост не изменялся под влиянием водорастворимых полисахаридов и гемицеллюлоз зеленых и зрелых соплодий, водорастворимых полисахаридов листьев и комплексного водного экстракта коры. Сочегапнос применение циклофосфана и водорастворимых полисахаридов или пектиновых вещес!в листьев, гемицеллюлоз зеленых и зрелых соплодий, пектиновых вещес!в зрелых соплодий вызывало снижение антиметастатического действия цитостати-ка.

6. Изучение механизмов стимулирующего и ингибирующего действия водорастворимых полисахаридов и водного экстракта лисчьев ольхи на развитие карциномы легких Льюис показало, что водорастворимые полисахариды листьев снижают противоопухолевую активность клеток лимфоузлов в тесте нейтрализации опухолевых клеток Винна как при изолированном введении, так и в комбинации с циклофосфаном. Курсовое введение водного экстракта листьев стимулировало нейтрализацию клеток карциномы легких Льюис лимфоидными клетками и приводило к снижению массы опухоли у мышей-реципиентов.

7. Водный экстракт листьев ольхи клейкой повышал цитогоксичностъ суспензии спленоцитов и количество больших гранулярных лимфоциюв в периферической крови у мышей с карциномой легких Льюис как на пике лейкопении, так и в терминальную стадию развития опухоли. Водорастворимые полисахариды листьев проявляли иммуностимулирующее действие только в терминальную стадию развития злокачественного новообразования. Комплексному водному экстракту присуще свойство снижать иммуносупрессию, вызванную введением цитостатика.

8. Влияние водорастворимых полисахаридов и водного экстракта листьев на функциональное сосюяние нейтрофилов, выражающееся в повышении их фагоцитарной актвности в различные сроки роста опухоли, не является определяющим фактором в изменении развития карциномы легких Льюис и эффективности цитостатической терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние экстрактов и листьев ольхи клейкой на рост и метастаэированне карциномы лег ких Льюис // Современные проблемы фундаментальной и клинической медицины. - Томск, 1999. - С.59.

2. Антиметастатические эффекты фитопрепаратов // Материалы 7 Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2000.- С.487-488 (соавт. Г'ольдберг Е.Д., Амосова E.H., Зуева E.H., Разина Т.Г., Крылова С.Г.).

3.Скрининговое исследование противоопухолевой и антимегастатиче-ской активности экстрактов из ольхи клейкой // Науки о человеке. -Томск, 2000. - С. 144-145 (соавт. Кузякова С.А.).

4.Скрининговая оценка влияния фракций из ольхи клейкой на развитие аденокарциномы Эрлиха // Лекарства - человеку. - Харьков, 2001. - Т. 15,-№ 1-2.- С.527-531 (соавт. Зуева Е.П., Разина Т.Г., Крылова С.Г., Амосова E.H., Самура Б.А., Радько Е.В., Таран A.B., Сербии А.Г.).

5. Влияние водорастворимых полисахаридов из ольхи клейкой на развитие метастазирующей опухоли мышей в условиях химиотерапии. Сообщение 1 // Лекарства - человеку. - Харьков, 2001.- Т. 15.- № 1-2.- С.517-521 (соавт. Зуева Е.П., Разина Т.Г., Крылова С.Г., Амосова E.H., Самура Б.А., Радько Е.В., Таран A.B., Сербии А.Г.).

6. Влияние водорастворимых полисахаридов из ольхи клейкой на развитие метастазирующей опухоли мышей в условиях химиотерапии. Сообщение 2 // Лекарства - человеку. - Харьков, 2001.- Т. 15,- № 1 -2,- С.522-527 (соавт. Зуева Е.П., Разина Т.Г., Крылова С.Г., Амосова E.H., Самура Б.А., Радько Е.В., Таран A.B., Сербии А.Г.).

7. Коррекция нарушений гемопоэза препаратами природного происхождения при терапии цитостатиками // Материалы 8 Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - М., 2001.- С.301-302 (соавт. Зуева Е.П., Амосова E.H., Разина Т.Г., Крылова С.Г.).

8.Семейство березовых. Перспективы использования в онкологии // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии. -Томск, 2001,- С. 180-182 (соавт. РейхартД.В., Самура Б.А.).

9. Экстракты ольхи клейкой и се биологически активные вещества в онкологическом эксперименте // Российский биотерапевтический журнал (Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты».- М., 2004. - С.30 (соавт. Разина Т.Г., Зуева Е.П., Самура Б.А.).

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АКЭ - аденокарцииома Эрлиха

БАВ - биологически активное вещеегво

БГЛ - большой гранулярный лимфоцит

ВРПС - водорастворимые полисахариды

ВЭ - водный экстракт

ГЦ - геми целлюлозы

ЕК - естественный киллер

ЕКК - естественная киллерная клетка

ИИМ - индекс ингибирования метастазирования

ИЦТ - индекс цитотоксичности

ЛЕ - литическая единица

нет - нитросиний тегразолий

ПВ - пектиновые вещества

пмян - полиморфноядерный нейтрофил

ТРО - торможение роста опухоли

ФА - фагоцитарная активность

ЦФ - циклофосфан

ЧМ - частота метастазирования

LLC - Lewis lung carcinoma

NK - natural killer

Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СГМУ Заказ № 2.6 Тираж 100 экз.

V

■s,

р 12 4 2 @

РНБ Русский фонд

2006-4 10083

Актуальность проблемы. Из истории медицины многих народов известно, что растения и извлечения из них были и остаются денными источниками лекарственных средств, а эффективность терапии растительными экстрактами зачастую подтверждается данными научной медицины. Полученные эмпирическим путем фармакологические эффекты в традиционной медицине сформировались в комплексные схемы лечения многих заболеваний, в том числе, онкологических. Известно, что ряд растительных экстрактов обладает способностью тормозить опухолевый рост, и в некоторых случаях это свойство обусловило создание противораковых лекарственных препаратов растительного происхождения. Так, на основе извлечений из барвинка розового (Vinca rosea L.), безвременника великолепного (Colchicum speciosum Stev.), подофилла щитовидного (Podophyllum pellatum L.), тиса тихоокеанского (Taxus brevifolia), и китайского дерева Camptotheca acuminata созданы эффективные химиопрепараты [Wall М.Е. et al., 19 66; Wani M.С. et al., 1971; Williams S.D. et al., 1987; Greemers G.J. et al., 1997]. Эти препараты обладают прямым цито-статическим действием и многие из них широко применяются в современных схемах цитостатической терапии злокачественных новообразований, которая на сегодняшний день остается одним из ведущих методов воздействия на опухоль., Однако, несмотря на значительные достижения, связанные с появлением высокоэффективных цитостатических препаратов, полной гарантии выздоровления этот метод не обеспечивает: остается опасность гибели больного от последующего метастазирования и рецидивирования, встречаются резистентные к химиотерапевтическому лечению формы рака. Применение химиотерапии сопровождается высокой токсичностью препаратов в отношении активно пролифери-рующих клеточных популяций организма. Часто причиной прекращения лечения становятся развивающиеся осложнения в виде гранулоцитопении, анемии, иммунодепрессии. Иногда регистрируются дегенеративные изменения в печени, эпителии [Гершанович M.JI., 1982; Гольдберг Е.Д., Новицкий В.В., 1986; Гольдберг Е.Д.и др., 1991]. Поэтому наряду с поиском новых противоопухолевых препаратов актуальным является изыскание средств, повышающих антибла-стомную эффективность уже известных цитостатиков с одновременным снижением их токсичности. В последние годы накоплены данные о подобном действии модификаторов биологических реакций организма - гетерогенной группы веществ, в том числе, растительного происхождения, основным эффектом которых является повышение противоопухолевой резистентности организма через воздействие на его-регуляторные гомеостатические структуры [Herberman R.B., 1985; Навашин С.М., 1991; Стахеева М.Н., 1993; Удинцев С.Н., 1988; Зуева Е.П., 1999; Peng S.Y., Norman J., Curtin G. et al., 1991; Harvey A.L., 1998, 1999;.].

Растения рода Ольха применялись в традиционной медицине народов Европы, Азии и коренного населения Северной Америки для лечения воспалительных заболеваний полости рта, органов пищеварения, для остановки полостных и маточных кровотечений, для лечения гнойных ран [Чопик В.И., Дудченко Л.Г., Некрасова А.И., 1983; Гу-бергриц А.Я., Соломченко Н.И., 1990; Соколов С.Я., За-мотаев И.П., 1990; Ступарь О.С., 1990;, Машковский М.Д.,

1993] . Наличие у растений этого рода такого обширного спектра фармакологической активности позволяет предположить некоторые особенности действия, характерные для модификаторной и регуляторной функций в отношении го-меостаза. Это подкрепляется данными о многообразии групп биологически активных веществ, выделенных из различных видов Ольхи, среди которых гликозиды, флавонои-ды, дубильные вещества, полисахариды, растительные стероиды. В народной медицине Центральной Европы и Канады отвары и настои из коры и листьев ольхи клейкой (Alnus glutinosa) и ольхи красной (Alnus rubra) применялись для лечения раковых заболеваний [Hartwell J.L., 19 67, 1976, 1982; Sheth К. et al, 1973; Farnsworth N.R., 1984, 1994; Tunon H., Bruhn J.G., 1995; Ritch-Krc E.M., Thomas S. et al., 1996]. Экспериментально доказаны свойства лупенола и бетулина, выделенных из ольхи орегонской, тормозить рост кациносаркомы Уокер-25 6 у крыс [Sheth К. et al., 1973] . Учитывая биологическое и химическое сходство растений одного рода и богатые данные народной медицины разных стран о наличии противораковых свойств у ольхи клейкой, представлялось актуальным исследовать действие извлечений из ольхи клейкой на развитие опухоли и метастазов при их изолированном введении и в сочетании с цитостатиком.

Цель исследования. Целью исследования явилось изучение действия экстрактов и биологически активных веществ из различных частей ольхи клейкой на рост и мета-стазирование перевиваемых опухолей и эффективность ци-тостатической терапии.

Основные задачи исследования.

1. Изучение влияния экстрактов и биологически активных веществ из ольхи клейкой на развитие аденокарци-номы Эрлиха и карциномы легких Льюис у мышей.

2. Изучение влияния экстрактов и биологически активных веществ из ольхи клейкой на эффективность цито-статической терапии на моделях перевиваемых опухолей.

3. Исследование влияния экстрактов и биологически активных веществ из ольхи клейкой, обладающих свойствами ингибировать или стимулировать развитие перевиваемых опухолей в условиях цитостатической терапии или изолированного введения, на некоторые показатели противоопухолевой резистентности организма в эксперименте.

Научная новизна. Впервые изучено влияние 12 натив-ных и химически однородных оригинальных экстрактов из различных частей ольхи клейкой (фракций водорастворимых полисахаридов, гемицеллюлоз, пектиновых веществ из различных частей ольхи клейкой (коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий), а также у комплексных водных экстрактов из коры и листьев этого растения), полученных на кафедре фармакотерапии и фармакокинетики Украинской фармацевтической академии (г. Харьков), на развитие опухолевого процесса. Проведена оценка возможности изменения при помощи этих экстрактов эффективности химиотерапии. Показана способность водорастворимых полисахаридов коры и водных экстрактов коры и листьев ольхи клейкой тормозить рост опухоли и повышать эффективность цитостатической терапии наряду с уменьшением ее токсичности на клетки крови. Выявлен эффект стимуляции развития опухоли некоторых химически однородных фракций (водорастворимых полисахаридов листьев и зеленых соплодий, гемицеллюлоз коры, листьев, зеленых и зрелых соплодий, пектиновых веществ листьев и зрелых соплодий) при их изолированном и/или в сочетании с циклофосфаном введении. Обнаружен иммуномодулирующий эффект у водорастворимых полисахаридов и водного экстракта листьев ольхи клейкой.

Практическая ценность работы. На основании проведенных экспериментов выявлен водный экстракт листьев ольхи клейкой, способный тормозить рост аденокарциномы Эрлиха и карциномы легких Льюис, повышать антиметастатический эффект циклофосфана и снижать степень его токсического воздействия на кровь. Показано повышение функциональной активности клеток лимфоузлов и спленоци-тов на фоне курсового введения водного экстракта листьев ольхи клейкой и уменьшение под его влиянием иммуно-депрессии, вызванной применением цитостатика. Представленные данные могут служить основой для углубленного исследования водного экстракта листьев ольхи клейкой с цль создания нового препарата растительного происхождения для применения в комплексной терапии злокачественных новообразований.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались на конференции молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2000); Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000, 2001); на конференции «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2001); на научно-практической конференции «Лекарства - человеку» • (Харьков, 2001); на

Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 1 - в журнале, рекомендованном перечнем ВАК РФ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 228 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 10 рисунками и 2 6 таблицами. Библиографический указатель включает 324 источника, из них 147 отечественных, 177 иностранных.

186 ВЫВОДЫ

1. В результате скрининговых исследований противоопухолевых свойств 10 биологически активных веществ и экстрактов ольхи клейкой на модели аденокарциномы Эрлиха обнаружен выраженный ингибирующий эффект у пектиновых веществ зеленых и зрелых соплодий, а также у комплексных водных экстрактов коры и листьев (судя по уменьшению объема опухолевых клеток).

2. На модели карциномы легких Льюис водорастворимые полисахариды коры способствовали торможению роста опухоли и снижали ее диссеминацию, пектиновые вещества листьев и зрелых соплодий ингибировали процесс метастазирования, а комплексный водный экстракт листьев продемонстрировал выраженное противоопухолевое действие.

3. Сочетанное применение биологически активных веществ или экстрактов ольхи клейкой и циклофосфана для терапии аденокарциномы Эрлиха позволило выявить повышение эффективности химиотерапии в случае включения в схему лечения водорастворимых полисахаридов листьев, зрелых соплодий и комплексного водного экстракта листьев.

4. Введение мышам с карциномой легких Льюис комбинации циклофосфана и комплексных водных экстрактов коры и листьев ольхи клейкой увеличивало антиметастатическое действие цитостатика, а комплексный водный экстракт листьев способствовал увеличению ингибирующего действия циклофосфана в отношении первичного опухолевого узла.

5. Использование в скрининге двух моделей опухолевого роста позволило выявить стимуляцию развития аденокарциномы Эрлиха на фоне ведения водорастворимых полисахаридов листьев и гемицеллюлоз коры, а также активацию развития карциномы легких Льюис при терапии водорастворимыми полисахаридами зеленых и зрелых соплодий, гемицеллюлозами коры, зеленых и зрелых соплодий. Опухолевый рост не изменялся под влиянием водорастворимых полисахаридов и гемицеллюлоз зеленых и зрелых соплодий, водорастворимых полисахаридов листьев и комплексного водного экстракта коры. Сочетанное применение циклофосфана и водорастворимых полисахаридов или пектиновых веществ листьев, гемицеллюлоз зеленых и зрелых соплодий, пектиновых веществ зрелых соплодий вызывало снижение антиметастатического действия цитостатика.

6. Изучение механизмов стимулирующего и ингибирующего действия водорастворимых полисахаридов и водного экстракта листьев ольхи на развитие карциномы легких Льюис показало, что водорастворимые полисахариды листьев снижают противоопухолевую активность клеток лимфоузлов в тесте нейтрализации опухолевых клеток Винна как при изолированном введении, так и в комбинации с циклофосфаном. Курсовое введение водного экстракта листьев стимулировало нейтрализацию клеток карциномы легких Льюис лимфоидными клетками и приводило к снижению массы опухоли у мышей-реципиентов.

7. Водный экстракт листьев ольхи клейкой повышал цито-токсичность суспензии спленоцитов и количество больших гранулярных лимфоцитов в периферической крови у мышей с карциномой легких Льюис как на пике лейкопении, так и в терминальную стадию развития опухоли. Водорастворимые полисахариды листьев проявляли иммуностимулирующее действие только в терминальную стадию развития злокачественного новообразования. Комплексному водному экстракту присуще свойство снижать иммуносупрессию, вызванную введением цитостатика .

8. Влияние водорастворимых полисахаридов и водного экстракта листьев на функциональное состояние нейтрофилов, выражающееся в повышении их фагоцитарной активности в различные сроки роста опухоли, не является определяющим фактором в изменении развития карциномы легких Льюис и эффективности цитостатической терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, в результате скринингового исследования 14 экстрактов из ольхи клейкой 3 могут рассматриваться в качестве возможных средств дополнительной терапии злокачественных новообразов-аний: водорастворимые полисахариды коры и водные экстракты коры и листьев. Наличие самостоятельной противоопухолевой активности у ВРПС коры делает этот экстракт интересным для дальнейшего исследования в свете необходимости поиска новых противоопухолевых препаратов.

Проведенное изучение развития двух опухолевых моделей (аденокарциномы Эрлиха и карциномы легких Льюис) на фоне курсового введения водных экстрактов коры и листьев о. клейкой показало перспективность дальнейшего изучения действия этих извлечений на опухоль. В пользу этого свидетельствует наличие антибластомных свойств при изолированном введении этих экстрактов мышам с аде-нокарциномой Эрлиха: у ВЭ коры - в дозе 200 мг/кг, у ВЭ листьев в дозе 100 мг/кг. Показана возможность ВЭ коры и листьев о.клейкой снижать интенсивность процесса дис-семинации опухоли на фоне химиотерапии. Кроме того, обнаружено свойство водных экстрактов снижать токсическое действие циклофосфана на кровь, что в сочетании с вышеперечисленными позитивными эффектами этих извлечений увеличивает их ценность в качестве материала для создания новых препаратов, пригодных для применения в онкологической практике.

3.3. Изучение механизмов влияния водорастворимых полисахаридов листьев и водных экстрактов листьев ольхи клейкой на развитие карциномы легких Льюис у мышей в условиях химиотерапии циклофосфаном

В экспериментах на мышах линии С57В1/6 с карциномой легких Льюис у водорастворимых полисахаридов (ВРПС) листьев о. клейкой и комплексного водного экстракта (ВЭ) из этой же части растения обнаружено разнонаправленное действие на развитие опухолевого процесса. ВРПС листьев в качестве самостоятельного средства терапии опухоли не оказывали влияния на рост опухоли и метастазов, а в сочетании с циклофосфаном приводили к снижению эффективности цитостатической терапии, вызывая при курсовом введении в дозе 100 мг/кг увеличение массы первичного узла, а в дозе 200 мг/кг - среднего количества метастазов и их средней площади (табл. 9) . Использование ВЭ листьев в дозах 100 мг/кг и 200 мг/кг в комбинации с циклофосфаном для терапии LLC, напротив, вызывало увеличение антиметастатической активности химиопрепарата, а в дозе 2 00 мг/кг - усиление ингибирующего влияния ци-тостатика на первичный опухолевый узел (табл. 16) . С целью изучения механизмов реализации наблюдаемых эффектов была проведена дополнительная серия опытов на мышах-самках с LLC, у которых после введения ВРПС и ВЭ листьев о. клейкой на фоне химиотерапии циклофосфаном исследовали функциональную активность клеток лимфоузлов, суспензии спленоцитов и нейтрофильных гранулоци-тов. Оценка указанных показателей и параметров развития опухоли производилась на 17 сут (3 сут после введения ЦФ, после 9 введений экстрактов ольхи клейкой) и на 23 сут (10 сут после введения ЦФ, после 16 введений экстрактов ольхи клейкой) развития опухоли.