Исследование клеточных механизмов противоопухолевой активности химиопрепаратов при их применении раздельно, в комбинации и с природным биогенным регулятором "Чакус"

Баймак, Татьяна Юрьевна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Исследование клеточных механизмов противоопухолевой активности химиопрепаратов при их применении раздельно, в комбинации и с природным биогенным регулятором "Чакус"

ДИССЕРТАЦИЯ

Исследование клеточных механизмов противоопухолевой активности химиопрепаратов при их применении раздельно, в комбинации и с природным биогенным регулятором "Чакус" - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Баймак, Татьяна Юрьевна Новосибирск 2003 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Исследование клеточных механизмов противоопухолевой активности химиопрепаратов при их применении раздельно, в комбинации и с природным биогенным регулятором "Чакус"

На правах рукописи

БАЙМАК Татьяна Юрьевна

ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНЫХ МЕХАНИЗМОВ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ХИМИОПРЕПАРАТОВ ПРИ ИХ ПРИМЕНЕНИИ РАЗДЕЛЬНО, В КОМБИНАЦИИ И С ПРИРОДНЫМ БИОГЕННЫМ РЕГУЛЯТОРОМ «ЧАКУС».

14.00.16 - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

НОВОСИБИРСК 2003

Работа выполнена и Институте цитологии и генетики Сибирского отделения Российской Академии наук (г. Новосибирск)

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент

Попова Нелли Александровна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук

Архипов Сергей Алексеевич

доктор биологических наук

Колосова Наталья Гориславовна

Ведущая организация:

Институт молекулярной патологии и экологической биохимии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г. Новосибирск)

Защита состоится «33 » 2003 года в /о часов на

заседании диссертационного совета Д 001.048.01 в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: ул. Академика Тимакова, 2, г. Новосибирск, 630117 Тел/факс 8(3832)33-64-56.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН.

Автореферат разослан « £ ^ »_ _2003 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, д.б.н.

рз- А

2Г5Т7Р

ОБШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. Современная противоопухолевая химиотерапия насчитывает в своем арсенале около 100 противоопухолевых препаратов различного механизма действия. Практически для каждого онкологического больного на определенном этапе его заболевания обсуждается вопрос о возможности использования химиотерапии (Переводчикова Н.И., 2000). Однако, лекарственные методы лечения больных не дали пока таких результатов, которые смогли бы существенно повлиять на статистику смертности от злокачественных опухолей.

Одной из причин низкой эффективности химиотерапии является то, что практически все лекарственные средства, применяемые при лечении опухолей, до недавнего времени отбирались по принципу их цитостатического и цитотоксического действия на делящиеся клетки. В результате они повреждают не только клетки опухоли, но и другие пролиферирующие клетки организма.

Новым шагом в химиотерапии было открытие способности многих химиотерапевтических средств включать в клетках т.н. "программу самоубийства" - апоптоз (Kerr J.F.R., Wyllie А.Н., 1972; Фильченков A.A., 1996). В настоящее время апоптоз считается наиболее оптимальным путем гибели опухолевых клеток, а возможность его индукции напрямую связывают с прогнозом заболевания (Fisher D., 1994; DiSaia P.J., 2003). Чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии может зависеть от их способности входить в апоптоз.

Оценка вклада цитостатического действия, апоптоза и некроза в терапевтический эффект на опухоли, различающиеся по чувствительности к химиотерапии, представляет большой как теоретический, так и практический интерес. Существование опухолей, чувствительных к индукции апоптоза одним препаратом, ставит вопрос о применимости к ним принятой в настоящее время стратегии лечения, в основу которой положена полихимиотерапия. Как сказывается совместное применение препаратов на их способности индуцировать апоптоз и какое влияние оказывают остальные члены комбинации на активность препарата, способного самостоятельно вызвать тотальный апоптоз клеток опухоли, неизвестно.

В настоящее время наряду с традиционным лечением онкологических заболеваний (хирургическое лечение, химио- и лучевая терапия) формируется новое направление, основанное на повышении резервных возможностей организма с помощью нетоксичных природных биорегуляторов (Вершинина С.Ф., Потявина Е.В., 2003), которые успешно используют В «чптаду уяу ттлп/мтцацд» к

комплексному лечению онкологических болы 5;

С Петербург f

Вершинина С.Ф.,1967; Зуева Е.П., 1987; Иванов В.М., 2001). Фармакологические свойства фитопрепаратов в основном известны благодаря традициям народной медицины. Клеточные механизмы реализации противоопухолевого эффекта биорегуляторов практически не исследованы.

В Институте Цитологии и Генетики СО РАН проводится комплексное исследование противоопухолевого действия микорастительной комбинации «Чакус» (смесь лиофилизированных экстрактов чаги (60%), курильского чая (15%) и солянки (25%)). Терапевтическая ценность всех входящих в него компонентов, широко применемых в народной медицине, подтверждена современными исследованиями. Для трутового гриба чаги (Inonotus obliquus) показана противоопухолевая активность и цитостатическое действие на опухолевые клетки in vitro (Rzymowska J., 1998; Burczyk J. et al., 2000; Копаренов C.B., 2001). Солянка (Salsola collina) обладает гепатопротекторным действием (Beloborodova E.I., 1993), а широкий спектр показаний к применению в народной медицине курильского чая (Pentaphylloides fruticosa) объясняется его иммуномодулирующим действием (Телянтьев В.В., 1987). Исследования клеточных механизмов действия «Чакуса» и его взаимодействия с химиопрепаратами представлены в данной работе.

Цель работы: исследование динамики противоопухолевой активности и клеточных механизмов реализации противоопухолевого эффекта химиопрепаратов при их применении раздельно, в комбинации и в сочетании с природным биогенным регулятором "Чакус".

Были поставлены следующие задачи.

1. Исследовать влияние циклофосфана на рост ряда перевиваемых опухолей мышей, различающихся по гистогенезу, скорости роста, злокачественности и другим параметрам. Оценить соотношение апоптозного и митотического индексов в экспериментальных опухолях мышей и проанализировать вклад клеточных механизмов действия циклофосфана (апоптоза, некроза, цитостатического действия) в его противоопухолевый эффект.

2. Изучить клеточный механизм высокой чувствительности лимфосаркомы LS к противоопухолевому действию циклофосфана. Оценить адекватность морфологического метода определения апоптоза по фрагментации ядра при окраске клеток Кармином.

3. Исследовать влияние платина, адриамицина и облучения на рост мышиной лимфосаркомы LS. Изучить возможность индукции апоптоза опухолевых клеток мышиной лимфосаркомы LS, высокочувствительной к апоптогенному действию циклофосфана сарколизином, облучением и полихимиотерапией.

4. Исследовать общетоксические свойства и противоопухолевое действие природного биогенного регулятора "Чакус" при его применении отдельно и в комбинации с химиопрепаратами. Изучить клеточные механизмы действия "Чакуса" и его взаимодействия с циклофосфаном.

Научная новизна результатов исследования. Впервые показано, что при полихимиотерапии опухоли, высокочувствительной к терапии одним из компонентов комбинации, противоопухолевое действие препаратов не суммируется, а результат лечения оказывается не выше, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. Полное излечение возможно только при применении того препарата, к которому опухоль проявляет высокую чувствительность.

На ряде экспериментальных моделей показано, что чувствительность опухоли к препарату коррелирует с его способностью вызывать апоптоз опухолевых клеток.

Впервые исследовано апоптозиндуцирующее действие химиопрепаратов при применении их раздельно и в комбинации для терапии экспериментальной опухоли, высокочувствительной к индукции апотоза одним из них. Показано, что апоптогенный эффект от совместного применения химиопрепаратов для терапии опухоли, высокочувствительной к индукции апоптоза одним из компонентов комбинации, оказывается ниже, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. При этом некрогенный и цитостатический эффекты усиливаются.

Впервые показана способность микорастительной комбинации «Чакус» вызывать апоптоз опухолевых клеток и усиливать апоптогенный эффект химиопрепаратов.

Практическое значение работы. Цитоморфологический метод оценки уровня апоптоза опухолевых клеток по фрагментации ядра при окраске кармином, позволяющий параллельно определять митотический индекс и количество клеток, находящихся в разных фазах митоза, может применяться для экспериментальных и клинических целей.

Апоптозный и митотический индексы, а также чувствительность опухолей к терапии циклофосфаном и клеточные механизмы противоопухолевого действия препарата являются дополнительной характеристикой экспериментальных опухолей мышей и могут быть полезны исследователям при выборе модели для эксперимента.

Выявленные апоптогенные и онкопрофилактические свойства микорастительной комбинации «Чакус» могут послужить основой для создания пищевой добавки, применяемой в комплексе мер для лечения и профилактики онкологических заболеваний.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Высокая чувствительность лимфосаркомы LS к терапевтическому действию циклофосфана определяется способностью препарата вызывать тотальный апоптоз ее клеток.

2. При полихимиотерапии опухоли, высокочувствительной к терапии одним из компонентов комбинации, противоопухолевое действие препаратов не суммируется, а результат лечения оказывается не выше, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. Полное излечение возможно только при применении того препарата, к которому опухоль проявляет высокую чувствительность.

3. Апоптогенный эффект от совместного применения химиопрепаратов для терапии опухоли, высокочувствительной к индукции апоптоза одним из компонентов комбинации, оказывается ниже, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. При этом некрогенный и цитостатический эффекты усиливаются.

4. Микорастительная комбинация «Чакус» способна вызывать апоптоз опухолевых клеток и усиливать противоопухолевое действие химиопрепаратов.

Апробация работы. Основные положения работы были представлены на международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс», посвященной 100-летию со дня рождения основателя Сибирского отделения РАН академика М.А.Лаврентьева (Новосибирск 2000 г); XVIII съезде Физиологического общества имени И.П.Павлова (Казань, 2001г.); отчетной сессии Института цитологии и генетики СО РАН (Новосибирск 2002 г.); Второй интеграционной междисциплинарной конференции молодых ученых СО РАН и высшей школы «Научные школы Сибири: взгляд в будущее» (Иркутск, 2003 г.).

Публикации. По теме исследования опубликовано 8 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста и содержит - введение, обзор литературы, описание использованных в работе материалов и методов, результаты проведенных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, список литературы, включающий 189 работ. Работа иллюстрирована 36 рисунками и 8 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Животные. В опытах использованы 3-5- месячные линейные мыши обоих полов, полученные из лаборатории разведения

экспериментальных животных Института цитологии и генетики СО РАН.

Перевиваемые опухоли мышей. В работе использованы перевиваемая лимфосаркома LS, индуцированная В.И. Калединым у самца линии СВА нитрозометилмочевиной; субштамм ГА-1 перевиваемой опухоли Гепатомы А, индуцированной В.И. Калединым у 1 самца линии А/Не орто-аминоазотолуолом; а также субштамм L1210/1

, перевиваемого лейкоза мышей линии DBA/2, карцинома Льюиса мышей

линии С57В1, лейкоз мышей DBA/2 Р388, линейно-неспецифическая аденокарцинома мышей Кребс-2, полученные из банка Всероссийского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН, г. Москва.

Все линейноспецифические опухоли поддерживаются в асцитиой форме серийными пассажами на сингенных животных, аденокарцинома Кребс-2 на мышах линии С57В1.

В экспериментах опухолевые клетки перевивали в мышцы бедра по 106 клеток в 0,1 мл физиологического раствора на мышь.

Препараты. Для химиотерапии использовали: платан (цис-дигидроксиламиндихлороплатина II), любезно предоставлений Е.С.Дмшриевой (Химикофармацевтическая Академия, Санкт-Петербург); адриамицин ("Farmacea", Италия); циклофосфан («Биохимик», Саранск, Россия).

В качестве природного биогенного регулятора применяли «Чакус» (смесь лиофилизированных экстрактов чаги (60%), курильского чая (15%) и солянки (25%)), предоставленный Н.М. Шкелем.

Препараты растворяли в физиологическом растворе и вводили внутривенно или внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл на 25 г массы тела животных. При использовании в смеси необходимые объемы растворов смешивали непосредственно перед введением. При введении в желудок через зонд необходимое количество препарата растворяли в дистиллированной воде. При хроническом применении per os (в поилках) препарат растворяли в воде, меняя раствор на свежий через сутки.

Облучение. Облучение опухолей проводили на гамма-установке ИГУР-1 с источником излучения 137Cs дозами 5 и 12 Гр при мощности дозы 1,45 Гр/мин с экранированием передней части тела животных свинцовыми пластинами.

Морфометрическое исследование опухолей и интегральная оценка противоопухолевого эффекта. За животными наблюдали до момента их гибели, периодически измеряя опухоли с помощью штангенциркуля. Объем опухоли определяли перемножением трех ее размеров. Учитывали частоту и продолжительность полной ремиссии опухолей; при этом началом и концом ремиссии считали моменты

исчезновения и повторного появления опухолевого узла, определяемого пальпированием. Павших в ходе эксперимента животных вскрывали и по разности масс конечности с опухолью и контралатеральной конечности определяли массу опухоли.

Выделение и электрофоретический анализ ДНК. Геномную ДНК выделяли фенольным методом из свежевыделенных опухолей контрольных и леченых мышей (Aljanabi S.M., 1997). 2-3 мкг каждого образца ДНК подвергали электрофорезу в 1,5% геле агарозы при 2V/cm в ТАЕ-буфере, содержащем 0.5 ng/ml EtBr (Rasa et al, 1995). Препараты фотографировали в ультрафиолетовом свете.

Определение апоптоза методом TUNEL. В работе был использован набор для определения апоптоза Apoptpsis detektion kits apoTACS ( R&D Systems, США). Исследования проводились согласно рекомендациям фирмы-производителя. Цитологические препараты анализировали под микроскопом при 600-кратном увеличении.

Морфологическое определение апоптоза. Опухоль измельчали ножницами в 2-4 объемах физиологического раствора на холоду. Полученную массу фильтровали через сито. Клеточную суспензию дважды отмывали физиологическим раствором, центрифугируя 5 минут при 900g. Осадок ресуспендировали в фиксаторе Карнуа и окрашивали хлорно-спиртовым кармином в течение суток. Под микроскопом при 600-кратном увеличении учитывали долю клеток с фрагментированными ядрами (находящихся в апоптозе) и клеток, находящихся в митозе, на 1000 клеток.

Гистологическое определение некроза. Образцы фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, обезвоживали в серии спиртов возрастающей концентрации и заключали в парафин. На санном микротоме готовили срезы толщиной 5-6 мкм, окрашивали гематоксилином Майера и эозином и заключали в канадский бальзам (Меркулов Г.А., 1969). Из каждого препарата получали по 4-5 срезов. Препараты опухоли подвергали морфометрическому изучению при 1000-кратном увеличении, с использованием окулярной сетки из 25 точек (Автандилов Г.Г., 1990).

Определение активности капазы 3. Для определения уровня каспазы 3 использовали Caspase-3 Assay colorimetric kits, производства фирмы Sigma, США. Исследования производили согласно рекомендациям фирмы-производителя.

Достоверность различий сравниваемых средних величин определяли на основании t - критерия Стьюдента, достоверными считались различия с Р<0,05 (Плохинский H.H., 1970).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОКГУЖЛЕШТЕ.

Исследование динамики роста ряда перевиваемых опухолей мышей при воздействии циклофосфана (ЦФ) показало, что они значительно различаются по чувствительности к терапии этим противоопухолевым агентом в дозе 100 мг/кг. Опухоли ГА1, Кребс 2 и Р388 отвечали на терапию ЦФ лишь временным торможением роста. L1210/1 полностью регресировала под действием ЦФ к 9-10 дню после введения препарата, однако затем животные погибали от рецедивов или метастазов. Из всех исследованных опухолей наиболее чувствительной к действию циклофосфана оказалась опухоль LS. Она полностью регрессировала под действием ЦФ на 6-8 день, у всех опухоленосителей наблюдалась полная ремиссия в течение 3-5 дней, затем у 20% животных появлялись рецидивы. Снижение дозы препарата в 10 раз (до 10 мг/кг) вызывало торможение роста этой опухоли на 87,9%, с последующим рецидивированием. Применение ЦФ в дозе 150 мг/кг приводило к полному излечению всех мышей с опухолью LS, при этом рецидивы отсутствовали в течение более чем 3,5 месяцев наблюдения.

Основываясь на литературных данных (Fisher D., 1994; DiSaia P.J., 2003; Фильченков A.A., 1996), мы предположили, что противоопухолевое действие ЦФ на лимфосаркому LS может реализоваться через апоптоз опухолевых клеток. Электрофорез ДНК, выделенной из клеток опухоли LS после воздействия препарата, показал наличие регулярных полос («апоптозной лесенки»), что указывало на межнуклеосомную фрагментацию ДНК, характерную для апоптоза (Rasa et al, 1995). Использование метода TUNEL позволило количественно охарактеризовать апоптозиндуцирующее действие ЦФ на данную опухоль. Эксперимент показал, что под действием ЦФ, в дозе 10 мг/кг, 25,4% опухолевых клеток подвергаются апопгозу уже через 24 часа.

Рис. 1. Динамика спонтанного апоптоза клеток мышиной пимфосаркомы LS, выявленная с использованием метода TUNEL и цитоморфологинеского метода. ? 100-1

Принимая во внимание высокую стоимость и трудоемкость исследований методом TUNEL, мы применили окраску клеток кармином для оценки уровня апоптоза. Данный метод позволяет выявлять не

8 ^ I 0

7 день 9 день

□ TUNEL ВЦМВА

10 день

11 день

только фрагментацию ядра, являющуюся одним из основных признаков апоптоза (Kerr J.F.R., Wyllie А.Н., 1972), но и определять митотический индекс (МИ) клеток в суспензии. Сравнительный анализ метода TUNEL и цитоморфологического метода (ЦМВА), основанного на окраске клеток кармином, показали адекватность последнего (рис. 1). Изучение динамики роста, уровня каспазы 3 (выполнено совместно с д.б.н. В.К. Спиридоновым) и цитоморфологическое исследование опухоли LS и ее резистентного субштамма RLS продемонстрировало применимость метода окраски кармином для экспериментальных исследований уровня апоптоза и МИ.

Мы исследовали зависимость между апоптогенным, некрогенным и цитостатическим действием ЦФ на экспериментальные опухоли мышей и противоопухолевым эффектом препарата. Параллельно мы определяли уровень спонтанного апоптоза и исходный МИ опухолевых клеток. Результаты экспериментов показали, что уровень спонтанного апоптоза и МИ является индивидуальным для каждого штамма опухоли. Противоопухолевый эффект ЦФ реализуется посредством взаимодействия апоптогенного, некрогенного и цитостатического действия препарата на опухолевые клетки. Для каждой опухоли характерно преобладание одного из клеточных механизмов. Другие механизмы активизируются в меньшей степени. Терапевтический эффект коррелирует только с апоптозиндуцирующим действием ЦФ. Так, в опухолях ГА-1, Кребс-2 и L1210/1 ЦФ практически не индуцировал апоптоз. На этих моделях не наблюдалось корреляции между некрогенным действием ЦФ и его противоопухолевой активностью: ГА-1 и Кребс-2 некротизировались значительно сильнее, чем L1210/1, но демонстрировали лишь временную задержку роста, а L1210/1 полностью регрессировала. Основным механизмом противоопухолевого действия ЦФ на опухоль L 1210/1 и лейкоз Р388 очевидно является цитостатическое действие препарата. При этом Р388 не подвергается полной регрессии, однако ЦФ вызывает значительное увеличение продолжительности жизни опухоленосителей. В высокочувствительной к терапевтическому действию ЦФ лимфосаркоме LS апоптозу подвергалась 56,2±0,70% клеток через 48 часов после воздействия препарата в дозе 10 мг/кг (10% от терапевтической); при этом она менее всего подвергалась некрозу даже от дозы 100 мг/кг.

Исследование противоопухолевого эффекта и клеточных механизмов действия на лимфосаркому LS сарколизина, химиопрепаратов других классов и облучения также показало зависимость между апоптозиндуцитуюгцим действием и эффективностью терапии. Выраженный терапевтический эффект другого представителя класса алкилирующих противоопухолевых

соединений, - сарколизина, объясняется его алоптогенным действием на клетки опухоли ЬБ. Очевидно не только ЦФ, но и другие алкилирующие соединения способны запускать апоптоз опухолевых клеток лимфосаркомы ЬЭ, но ЦФ является препаратом выбора т.к. обладает лучшим апоптозиндуцирующим действие по отношению к мышиной лимфосаркоме ЬБ. Облучение в дозе 1200 рен. вызывало торможение роста опухоли в течение 4 первых дней после воздействия, однако затем рост возобновлялся. На клеточном уровне воздействие радиации тормозит пролиферацию и лишь незначительно индуцирует апоптоз опухолевых клеток.

Максимальный эффект действия платина (ПТ) и адриамицина (АМ) также отмечался на 4 день. В дозе 16 мг/кг ПТ вызвал торможение роста опухолей в среднем на 94%, а в дозе 8 мг/кг на 78%. АМ обладал менее выраженным действием. В дозе 16 мг/кг он вызывал торможение роста опухоли на 82,8%. В дозе 8 мг/кг достоверного уменьшения объема опухолей не отмечалось. Исследование клеточных механизмов действия препаратов показало, что через 48 часов после введения АМ и ПТ в дозах 16 мг/кг количество апоптозных клеток в опухоли составляло 27±0,4% для АМ и 39±0,5% для ПТ. При этом цитотоксический и цитостатический эффекты АМ и ПТ достоверно не различаются. Т.о. повышение противоопухолевого эффекта в отношении лимфосаркомы ЬБ с увеличением дозы осуществляется главным образом за счет усиления апоптогенного действия и лишь в некоторой степени -некрогенного и цитостатического.

Одним из популярных подходов к усилению эффективности лекарственного лечения опухолей является полихимиотерапия. Чаще всего в комбинацию включают препараты, которые при монотерапии активны в отношении данной опухоли, но обладают разными механизмами действия и побочными влияниями (разной токсичностью) (Переводчикова Н.И., 1986; Чиссов В.И., 1989). Комплексное исследование противоопухолевой активности двух- (111+АМ; ПТ+ЦФ) и трехкомпанентной (ПТ+АМ+ЦФ) комбинации не показало увеличения терапевтического эффекта по отношению к мышиной лимфосаркоме ЬБ, высокочувствительной к апоптозиндуцирующему действию ЦФ. При совместном введении ПТ и АМ (по 8 мг/кг) противоопухолевый эффект был достоверно выше эффекта каждого из них, взятого в той же дозе, но не превышал эффекта одного ПТ в дозе 16 мг/кг (таблица 1). Более того, если процент животных с полной ремиссией после лечения одним ПТ составил 66,7%, то после лечения ПТ в комбинации с АМ - только 38,5%. ЦФ в дозе 10 мг/кг не проявлял выраженной токсичности, но, судя по увеличению средней продолжительности жизни опухоленосителей (УПЖ) и проценту животных с полной регрессией

опухоли, оказывал примерно такое же влияние на рост опухоли, как и комбинация ПТ с АМ. Добавление к этой комбинации ЦФ в дозе 10 мг/кг привело к некоторому повышению общей токсичности (летальность 16,7%) и значительному повышению противоопухолевого эффекта, выражавшегося в регрессии опухоли у 100% животных и почти в двукратном по сравнению с 2-компонентной комбинацией увеличении средней продолжительности жизни мышей, павших от рецидива (полного излечения не наблюдалось). Полное излечение 100% мышей было достигнуто, только при лечении одним ЦФ в дозе 150 мг/кг.

Таблица 1. Противоопухолевая активность ЦФ, ПТ и AM при их

* Увеличение средней продолжительности жизни животных по сравнению с контролем, считая со дня введения химиопрепаратов. В 7-й группе при вскрытии мышей, через 105 дней после введения ЦФ, -

макроскопически опухолевых узлов и метастазов не обнаружено. Достоверность различий с контролем: ** р< 0,05; *»* р< 0,001.

раздельном применении и в комбинациях в отношении опухоли LS.

Группа и воздействие (препарат, доза) Количество мышей Средняя продолжительность жизни мышей, павших от опухоли (сут) УПЖ* (%) Длительность полной ремиссии (сут)

Всего Павших от токсичности

1. Контроль (без воздействия) 10 - 9,9 ± 0,94 - -

2. Адриамицин 8 мг/кг 10 0 12,6 ±0,87** 27,3 -

3. Адриамицин 16 мг/кг 14 2 (14,3%) 15,3 ± 1,86** 54,5 -

4. Платан 8 мг/кг 10 0 17,0 ±1,12*** 71,7 -

5. Платан 16 мг/кг 17 2(11,8%) 24,5 ± 1,37*** 147,5 10,1 ± 1,29

6. ЦФ 10 мг/кг 9 0 28,7±2,50*** 189,9 11,8 ±4,04

7. ЦФ 150 мг/кг 10 0 Все без опухоли >1000 >105 дней

8. Адриамицин -!платин 14 1 (7,1%) 23,2 ± 1,72*** 134,3 10,2 ± 1,80

9. Адриамицин +платин +ЦФ 24 4 (16,7%) 39,9 ±2,94*** 303,0 32,2 ± 3,35****

*♦** - достоверное различие с группами 5,6 и 8 (р < 0,001).

Рис. 2. Клеточные механизмы действия АМ, ПТ и ЦФ на опухоль Ь8.

50 -\

□Апоптоз Ш Некроз В Митоз

Рис. 3. Динимика регрессии и рецидивирования опухоли ив при совместном и раздельном применении химиопрепаратов. 120

2 100

-ПТ+АМ -ЦФ+ПТ+АМ -ЦФ 10 мг/кг -АМ 16 мг/кг -ЦФ 150 мг/кг -ПТ 16 мг/кг

0 10 20 30 40 50 60 время (сут)

Исследования клеточных механизмов действия препаратов показывают, что количество опухолевых клеток в апоптозе при полихимиотерапии не только не увеличилось по сравнению с тем, которое наблюдалось при действии одного из компонентов комбинации, но и существенно уменьшалось, причем в значительно большей степени при 3-компонентной комбинации. Напротив, некрогенный и цитостатический эффекты усиливались с увеличением числа компонентов комбинации за счет повышения токсичности (рис. 2). При

этом достигаемый терапевтический эффект оказался не выше, чем при воздействии одним, наиболее активным, компонентом комбинации, взятым в эквитоксичной дозе (рис. 3, табл. 1).

Полихимиотерапия опухоли ЬБ высокочувствительной к индукции апоптоза одним ЦФ не позволяет повысить апоптозиндуцирующее действие этого препарата. Мы исследовали противоопухолевое и апоптозиндуцирующее действие на данную опухоль низкотоксичного природного биогенного регулятора «Чакус» при его применении отдельно и в комбинации с ЦФ.

На фоне длительного потребления мышами «Чакуса» (начало применения за 20 дней до перевивки опухоли) у них наблюдалось существенное замедление роста перевиваемой лимфосаркомы что в конечном итоге может быть причиной более выраженного терапевтического эффекта при последующем введении ЦФ. Применение «Чакуса» в виде 0,4% раствора за день до введения ЦФ в дозе 50 мг/кг также усиливало противоопухолевый эффект препарата. Исследование клеточных механизмов действия «Чакуса» и его взаимодействия с ЦФ показало, что у опухоленосителей, длительно потреблявших «Чакус», количество апоптозных клеток увеличилось в два раза по сравнению с контролем, что свидетельствует о наличии апоптогенного эффекта «Чакуса». Небольшое, но достоверное повышение апоптоза под влиянием «Чакуса» через 72 ч после введения ЦФ дает основание предположить, что повышение противоопухолевого действия ЦФ может быть связано с суммированием апоптогенного эффекта «Чакуса» и ЦФ.

Рис. 4. Влияние "Чакуса" в концентрации 0,4 % на индукцию апоптоза клеток опухоли ив циклофосфаном в дозе 50 мг/кг.

-1 , ■

0 24 48 72

□ ЦФ

■ Цф+"Чакус"

ВЫВОДЫ.

изученные экспериментальные опухоли реализуется посредством взаимодействия апоптогенного, некрогенного и цитостатического действия препарата. Для каждой опухоли характерно преобладание одного из клеточных механизмов. Исходное соотношение апоптозного и митотического индексов является индивидуальным для каждого штамма опухоли и может служить дополнительной характеристикой моделей.

2. Противоопухолевое действие циклофосфана на мышиную лимфосаркому LS реализуется через апоптоз опухолевых клеток, что объясняет ее высокую чувствительность даже к малым дозам препарата.

3. Цитоморфологический метод оценки апоптоза, основанный на окраске клеток Кармином, позволяет адекватно оценить уровень апоптоза опухолевых клеток.

4. Радиация, платан и адриамицин обладают слабым противоопухолевым действием по отношению к мышиной лимфосаркоме LS. При использовании комбинации платина и адриамицина между собой и с циклофосфаном их противоопухолевое действие не суммируется.

5. Алкилирующие соединения способны запускать апоптоз опухолевых клеток лимфосаркомы LS. Противоопухолевый эффект радиации и химиопрепаратов других классов на эти клетки в основой реализуется посредством цитостатического действия и некроза. При воздействии на опухоль LS комбинацией двух (платин - адриамицин, платин-циклофосфан) или трех (циклофосфан - платин -адриамицин) препаратов апоптозиндуцирующая активность наиболее активного из них не увеличивается, а значительно снижается, в то время как некрогенная и цитостатическая активности суммируется.

6. Природный биогенный регулятор "Чакус" при длительном применении замедляет рост опухоли LS за счет увеличения уровня апоптоза опухолевых клеток. "Чакус" усиливает противоопухолевый эффект циклофосфана при совместном применении. На фоне длительного применения «Чакуса» апоптогенный эффект циклофосфана более выражен.

СПИСОК РАБОТ.

ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Каледин В.И., Николин В.П., Агеева Т.А., Попова Н.А., Баймак Т.Ю. и др. Циклофосфан-индуцированный апоптоз клеток мышиной лимфосаркомы в условиях in vivo // Вопросы онкологии. - 2000. Т. 46, № 5. - С. 588-593.

2. Баймак Т.Ю. Апоптоз и некроз при регрессии опухолей у мышей под влиянием циклофосфана: Материалы ХХХУП международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс», посвященной 100-летию со дня рождения основателя Сибирского отделения РАН академика М.А.Лаврентьева-Новосибирск.: изд-во НГУ, 2000,- С 3.

3. Баймак Т.Ю.. Галямова М.Р, Николин В.П., Каледин В.И., Попова Н.А, Войцицкий В.Е. Апоптоз-индуциругощая и противоопухолевая эффективность циклофосфана, платина и адриамицина при их раздельном применении и в комбинации у мышей с лимфосаркомой LS: Тез. Докл. XVIII съезда физиологического общества имени И.П.Павлова. - Казань.: «Арт-кафе», 2001.- С. 305.

4. Kaledin V.I., Nikolin V.P., Timofeeva О.А., Filipenko M.L., Bavmak T.Yu.. Galyamova M.R., Popova N.A. Apoptosis-mediated regression of transplantable LS lymphosarcoma in CBA mice treated with ACVP (adriamycin, cyclophosphamide, vincristine, prednisolone) or cyclophosphamide alone //Experimental Oncology.- 2002. - Vol. 24,- P. 55-58.

5. Николин В.П., Каледин В.И., Баймак Т.Ю.. Галямова М.Р., Попова Н.А.,. Войцицкий В.Е. Апоптоз-индуцирующая и противоопухолевая эффективность циклофосфана, платина, и адриамицина при их раздельном применении и в комбинации у мышей с лимфосаркомой LS //Вопросы онкологии,- 2002. т. 48. № 2. - С. 211-215.

6. Каледин В.И., Николин В.П., Галямова М.Р., Васильева Е.Д., Баймак Т.Ю.. Попова Н.А. Высокая апоптогенная и противоопухолевая активности продуктов биологической но не химической активации циклофосфана //Доклады академии наук.- 2002. том 386, №5. - С. 705708.

7. Каледин В.И, Николин В.П., Баймак Т.Ю.. Галямова М.Р., Попова Н.А., Андреева Е.М. Влияние фенобарбитала на противоопухолевый эффект циклофосфана в зависимости от типа вызываемой им гибели опухолевых клеток //БЭБМ,- 2003.т. 135.№ 3. - С. 334-338

8. Баймак Т.Ю. Повышение апоптоз - индуцирующего действия химиотерапии посредством природных биогенных регуляторов: Труды Второй интеграционной конференции молодых ученых СО РАН и высшей школы. - Иркутск.: изд-во Института географии СО РАН, 2003,- С. 19-26.

Подписано к печати 17.11.2003г.

Формат бумаги 60 х 90. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7

Тираж 100 экз. Заказ 120.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр.ак. Лаврентьева, 10.

Zoi41

№20 14 1

Оглавление диссертации Баймак, Татьяна Юрьевна :: 2003 :: Новосибирск

fc 1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Проблема злокачественного роста.

2.2. Подходы к лечению онкологических заболеваний.

2.2.1. Современные методы лечения онкозаболеваний.

2.2.2. Основные противоопухолевые препараты.

2.2.3. Клеточные механизмы действия химиопрепаратов.

2.2.4. Полихимиотерапия.

2.2.5. Современные представления о кинетике клеточного роста.

2.3. Апоптоз и некроз.

2.3.1. Некроз. fi 2.3.2. Апоптоз.

2.3.3. Роль индукции апоптоза и некроза в современной химиотерапии опухолей.

2.4. Природные биогенные регуляторы.

3. Материалы и методы.

3.1. Животные.

3.2. Перевиваемые опухоли мышей.

3.3. Препараты.

3.4. Методы введения препаратов.

3.5. Реактивы.

3.6. Облучение.

3.7. Морфометрическое исследование опухолей и интегральная оценка противоопухолевого эффекта.

3.8. Выделение и электрофоретический анализ ДНК.

3.9. Определение апоптоза методом TUNEL.

ЗЛО. Морфологическое определение апоптоза.

3.11. Гистологическое определение некроза.

3.12. Определение активности кашзы 3.

Глава 4. Результаты и их обсуждение.

4.1. Взаимосвязь клеточных механизмов действия циклофосфана и его влияния на опухолевый рост.

4.1.1. Влияние циклофосфана па рост ряда перевиваемых опухолей мышей.

4.1.2. Клеточный механизм высокой чувствительности лимфосаркомы LS к противоопухолевому действию циклофосфана.

4.1.3.Цитоморфологический метод оценки апоптоза.

4.1.4. Клеточные механизмы противоопухолевого действия циклофосфана на ряд перевиваемых опухолей мышей.

4.2. Возможность усиления апоптозиндуцирующенго действия циклофосфана на мышиную лимфосаркому LS.

4.2.1. Возможность индукции апоптоза опухолевых клеток мышиной лимфосаркомы LS, высокочувствительной к апоптогенному действию циклофосфана, сарколизином и облучением.

4.2.2. Влияние платина, адриамицина и циклофосфана на рост мышиной лимфосаркомы LS, при их применении раздельно и в комбинации.

4.2.3. Клеточные механизмы фармакокинетического взаилюдействия препаратов при полихимиотерапии.

4.3. Противоопухолевые свойства микорастительной комбинации "Чакус"

4.3.1. Оценка токсичности препарата.

4.3.2. Влияние «Чакуса» на рост лимфосаркомы LS.

4.3.3. Влияние "Чакуса" на противоопухолевый эффект циклофосфана.

4.3.4. Клеточные механизмы действия «Чакуса» и его фармакокинетического взаилюдействия с циююфосфаном.

4.3.5. Исследование влияния «Чакуса» на противоопухолевый эффект платина и сарколизина.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Баймак, Татьяна Юрьевна, автореферат

Актуальность проблемы. Современная противоопухолевая химиотерапия насчитывает в своем арсенале около 100 противоопухолевых препаратов различного механизма действия. Практически для каждого онкологического больного на определенном этапе его заболевания обсуждается вопрос о возможности использования химиотерапии (Переводчикова Н.И., 2000). Однако лекарственные методы лечения больных не дали пока таких результатов, которые смогли бы существенно повлиять на статистику смертности от злокачественных опухолей.

Одной из причин низкой эффективности химиотерапии является то, что практически все лекарственные средства, применяемые при лечении опухолей до недавнего времени отбирались по принципу их цитостатического и цитотоксического действия на делящиеся клетки. В результате они повреждают не только клетки опухоли, но и другие пролиферирующие клетки организма.

Новым шагом в химиотерапии было открытие способности многих химиотерапевтических средств включать в клетках т.н. "программу самоубийства" - апоптоз (Kerr J.F.R., Wyllie А.Н., 1972; Фильченков А.А., 1996). В настоящее время апоптоз считается наиболее оптимальным путем гибели опухолевых клеток, а возможность его индукции напрямую связывают с прогнозом заболевания (Fisher D., 1994; DiSaia P.J., 2003). Чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии может зависеть от их способности входить в апоптоз (Murphy F.J., 2003).

Оценка вклада цитостатического действия, апоптоза и некроза в терапевтический эффект на опухоли, различающиеся по чувствительности к химиотерапии представляет большой как теоретический, так и практический интерес. Существование опухолей, чувствительных к индукции апоптоза одним препаратом, ставит вопрос о применимости к ним принятой в настоящее время стратегии лечения, в основу которой положена полихимиотерапия. Как сказывается совместное применение препаратов на их способности индуцировать апоптоз и какое влияние оказывают остальные компоненты комбинации на активность препарата, способного самостоятельно вызвать тотальный апоптоз клеток опухоли неизвестно.

В настоящее время наряду с традиционным лечением онкологических заболеваний формируется новое направление, основанное на повышении резервных возможностей организма с помощью нетоксичных природных биорегуляторов (Вершинина С.Ф., Потявина Е.В., 2003), которые успешно используют в клинике, как дополнение к комплексному лечению онкологических заболеваний. (Лазарев Н.В., 1965; Вершинина С.Ф.,1967; Зуева Е.П., 1987; Иванов В.М., 2001). Фармакологические свойства фитопрепаратов в основном известны благодаря традициям народной медицины. Клеточные механизмы реализации противоопухолевого эффекта биорегуляторов практически не исследованы.

В Институте цитологии и генетики СО РАН проводится комплексное исследование противоопухолевого действия микорастительной комбинации «Чакус» (смесь лиофилизированных экстрактов чаги (60%), курильского чая (15%) и солянки (25%)). Терапевтическая ценность всех входящих в него компонентов, широко применемых в народной медицине, подтверждена современными исследованиями. Для трутового гриба чаги (Inonotus obliquus) показана противоопухолевая активность и цитостатическое действие на опухолевые клетки in vitro (Rzymowska J., 1998; Burczyk J. et al., 2000; Копаренов C.B., 2001). Солянка (Salsola collina) обладает гепатопротекторным действием (Beloborodova E.I., 1993), а широкий спектр показаний к применению в народной медицине курильского чая (Pentaphylloides fruticosa) объясняется его иммуномодулирующим действием (см. обзор Телянтьев В.В., 1987). Исследования клеточных механизмов действия «Чакуса» и его взаимодействия с химиопрепаратами представлены в данной работе.

Были поставлены следующие задачи.

1. Исследовать влияние циклофосфана на рост ряда перевиваемых опухолей мышей, различающихся по гистогенезу, скорости роста, злокачественности и другим параметрам. Оценить соотношение апоптозного и митотического индексов у экспериментальных опухолей мышей и проанализировать вклад клеточных механизмов действия циклофосфана (апоптоза, некроза, цитостатического действия) в его противоопухолевый эффект.

3. Исследовать влияние платина, адриамицина, сарколизина и облучения на рост мышиной лимфосаркомы LS. Изучить возможность индукции апоптоза опухолевых клеток мышиной лимфосаркомы LS, высокочувствительой к апоптогенному действию циклофосфана сарколизином, облучением и полихимитерапией.

Впервые исследовано апоптозиндуцирующее действие химиопрепаратов, при применении их раздельно и в комбинации для терапии экспериментальной опухоли, высокочувствительной к индукции апотоза одним из них. Показано, что апоптогенный эффект от совместного применения химиопрепаратов для терапии опухоли, высокочувствительной к индукции апоптоза одним из членов комбинации оказывается ниже, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. При этом некрогенный и цитостатический эффекты усиливаются.

Исследования апоптозного и митотического индексов, а также чувствительности опухолей к терапии циклофосфаном и клеточных механизмов его противоопухолевого действия, могут служить дополнительной характеристикой экспериментальных опухолей мышей и могут быть полезны исследователям при выборе модели для эксперимента.

Основные положения, выносимые на защиту.

2. При полихимиотерапии опухоли, высокочувствительной к терапии одним из членов комбинации, противоопухолевое действие препаратов не суммируется, а результат лечения оказывается не выше, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. Полное излечение возможно только при применении того препарата, к которому опухоль проявляет высокую чувствительность.

3. Апоптогенный эффект от совместного применения химиопрепаратов для терапии опухоли, высокочувствительной к индукции апоптоза одним из членов комбинации оказывается ниже, чем при терапии этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе. При этом некрогенный и цитостатический эффекты усиливаются.

Казань, 2001г.), отчетной сессии Института цитологии и генетики СО РАН

Новосибирск 2002г.), Второй интеграционной междисциплинарной конференции молодых ученых СО РАН и высшей школы «Научные школы

Сибири: взгляд в будущее» (Иркутск, 2003 г.).

Публикации. По теме исследования опубликовано 8 печатных работ.

2. Баймак Т.Ю. Апоптоз и некроз при регрессии опухолей у мышей под влиянием циклофосфана: Материалы XXXVII международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс», посвященной 100-летию со дня рождения основателя Сибирского отделения РАН академика М.А.Лаврентьева.- Новосибирск.: изд-во НГУ, 2000.- С 3,

3. Баймак Т.Ю. Галямова М.Р, Николин В.П., Каледин В.И., Попова Н.А, Войцицкий В.Е. Апоптоз-индуцирующая и противоопухолевая эффективность циклофосфана, платина и адриамицина при их раздельном применении и в комбинации у мышей с лимфосаркомой LS: Тез. Докл. XVIII съезда физиологического общества имени И.П.Павлова. - Казань.: «Арт-кафе», 2001.- С. 305.

4. Kaledin V.I., Nikolin V.P., Timofeeva О.A., Filipenko M.L., Bavmak T.Yu. Galyamova M.R., Popova N.A. Apoptosis-mediated regression of transplantable LS lymphosarcoma in CBA mice treated with ACVP (adriamycin, cyclophosphamide, vincristine, prednisolone) or cyclophosphamide alone //Experimental Oncology.- 2002. - Vol. 24.- P. 55-58.

5. Николин В.П., Каледин В.И., Баймак Т.Ю. Галямова М.Р., Попова Н.А.,. Войцицкий В.Е. Апоптоз-индуцирующая и противоопухолевая эффективность циклофосфана, платина, и адриамицина при их раздельном применении и в комбинации у мышей с лимфосаркомой LS //Вопросы онкологии.- 2002. т. 48. № 2. - С. 211-215.

6. Каледин В.И., Николин В.П., Галямова М.Р., Васильева Е.Д., Баймак Т.Ю. Попова Н.А. Высокая апоптогенная и противоопухолевая активности продуктов биологической но не химической активации циклофосфана //Доклады академии наук.- 2002. том 386, №5. - С. 705-708.

7. Каледин В.И, Николин В.П., Баймак Т.Ю. Галямова М.Р., Попова Н.А., Андреева Е.М. Влияние фенобарбитала на противоопухолевый эффект циклофосфана в зависимости от типа вызываемой им гибели опухолевых клеток//БЭБМ.- 2003.т.135.№ 3. - С. 334-338

8. Баймак Т.Ю. Повышение апоптоз - индуцирующего действия химиотерапии посредством природных биогенных регуляторов: Труды Второй интеграционной конференции молодых ученых СО РАН и высшей школы (Иркутск, 6-10 октября 2003г.). - Иркутск.: изд-во Института географии СО РАН, 2003.- С. 19-26.

Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование клеточных механизмов противоопухолевой активности химиопрепаратов при их применении раздельно, в комбинации и с природным биогенным регулятором "Чакус""

6. Выводы.

1. Перевиваемые экспериментальные опухоли мышей различного гистогенеза различаются по чувствительности к терапии циклофосфаном. Противоопухолевое действие циклофосфана на изученные экспериментальные опухоли реализуется посредством взаимодействия апоптогенного, некрогенного и цитостатического действия препарата. Для каждой опухоли характерно преобладание одного из клеточных механизмов. Исходное соотношение апоптозного и митотического • индексов' является индивидуальным для каждого штамма опухоли и может служить дополнительной характеристикой моделей.

4. Радиация, платин и адриамицин обладают слабым противоопухолевым действием по отношению к мышиной лимфосаркоме LS. При использовании комбинации платина и адриамицина между собой и с циклофосфаном их противоопухолевое действие не суммируется. г 5. Алкилирующие соединения способны запускать апоптоз опухолевых клеток лимфосаркомы LS. Противоопухолевый эффект радиации и химиопрепаратов других классов на эти клетки в основом реализуется посредством цитостатического действия и некроза. При воздействии на опухоль LS комбинацией двух (платин - адриамицин, платин-циклофосфан) или трех (циклофосфан - платин - адриамицин) препаратов апоптозиндуцирующая активность наиболее активного из них

• • 118 не увеличивается, а значительно снижается, в то время как некрогенная и цитостатическая активности суммируется.

6. Природный биогенный регулятор "Чакус"при длительном применении незначительно замедляет рост опухоли LS за счет увеличения уровня апоптоза опухолевых клеток. "Чакус" усиливает противоопухолевый эффект циклофосфана при совместном применении.На фоне длительного применения «Чакуса» апоптогенный эффект циклофосфана более выражен.

5. Заключение.

Перевиваемые экспериментальные опухоли мышей различного гистогенеза значительно различаются по чувствительности к терапии циклофосфаном в дозе 100 мг/кг, что объективно отражает ситуацию наблюдаемую в клинике. Гепатома ГА1, аденокарцинома Кребс-2 и лейкоз Р388 отвечали на воздействие лишь временной задержкой роста. Однако препарат значительно продлевал продолжительность жизни мышей с опухолью Р388. Опухоль L1210/1 полностью регрессировала под действием циклофосфана к 9-10 дню после введения препарата, но затем животные погибали от рецедивов или метастазов. Лимфосаркома LS продемонстрировала высокую чувствительносит к терапии циклофосфаном. У 100% опухоленосителей наблюдалась полная регрессия опухоли к 6-8-дню и ремиссия в течение 3-5 дней после однократного воздействия циклофосфана в дозе 100 мг/кг. Снижение дозы препарата в 10 раз (до 10 мг/кг) вызывало торможение роста этой опухоли, с последующим рецидивированием. Применение циклофосфана в дозе 150 мг/кг приводило к полному излечению всех мышей с опухолью LS, при этом рецидивы отсутствовали в течение более чем 3,5 месяцев наблюдения.

Эксперименты по изучению жизненного цикла клеток опухолей мышей различного гистогенеза показали, что апоптозный и митотический индексы зависят от типа опухоли и являются индивидуальной характеристикой экспериментальной модели. В ходе данных исследований проведен сравнительный анализ чувствительности разработанного нами цитоморфологического метода оценки уровня апоптоза опухолевых клеток по фрагментации ядра при окраске клеток кармином и метода TUNEL, основанного на определении разрывов ДНК. Результаты этого эксперимента, а также тестирование цитоморфологического метода с применением оценки уровня каспазы 3 на чувствительном (LS) и резистентном (RLS) к апоптозиндуцирующему действию циклофосфана субштаммах, показали его применимость для экспериментальных целей. Данный метод имеет ряд преимуществ, к числу которых относится доступность, простота в использовании, возможность параллельного исследования уровня апоптоза и митотической активности.

Исследование клеточных механизмов противоопухолевого действия циклофосфана, проведенное с использованием цитоморфологического метода, показало, что терапевтический эффект препарата на изученные экспериментальные опухоли реализуется посредством взаимодействия апоптогенного, некрогенного и цитостатического действия. Для каждой опухоли характерно преобладание одного из клеточных механизмов, при этом цитотоксическое и цитостатическое действие препарата не коррелирует с его противоопухолевым эффектом. Так, в опухолях ГА-1 и Кребс-2 численная плотность некрозов была значительно больше, чем у L1210/1, но L1210/1 полностью регрессировала под действием циклофосфана, а ГА-1 и Кребс-2 демонстрировали лишь временную задержку опухолевого роста. Апоптозиндуцирующее действиее коррелирует с терапевтическим эффектом циклофосфана. В опухолях ГА-1, Кребс-2 и L1210/1 циклофосфан практически не индуцировал апоптоз и оказывал слабый противоопухолевый эффект. Противоопухолевое действие циклофосфана на мышиную лимфосаркому LS реализуется через апоптоз опухолевых клеток, что объясняет ее высокую чувствительность даже к малым дозам препарата. Через 24 часа после воздействия препарата в дозе 10 мг/кг (10% от терапевтической) 25,4% клеток опухоли LS подвергаются апоптозу (определено методом TUNEL). Циклофосфан в дозе 100 мг/кг индуцировал апоптоз более 90% опухолевых клеток через 48 часов (определено цитоморфологическим методом).

Корреляция между апоптозиндуцируующим и противоопухолевым действием наблюдалась и при исследовании терапевтического действия радиации, платин, адриамицин и сарколизина на лимфосаркому LS. Облучение и адриамицин обладают слабым противоопухолевым действием по отношению к данной опухоли и индуцируют апоптоз менее 20% опухолевых клеток. Платин имеет более выраженный противоопухолевый и апоптогенный эффект, однако его некрогенная активность также высока (более 35% клеток через 60 часов от дозы 16 мг/кг). Противоопухолевое действие алкилирующего цитостатика сарколизина реализуется главным образом через апоптоз, что обуславлевает его способность вызывать полную регрессию опухолии LS, однако излечение было достигнуто только с применением циклофосфана.

В основу современной противоопухолевой терапии положена полихимиотерапия. Исследование противоопухолевого действия комбинации платина и адриамицина между собой и с циклофосфаном показало, что их их противоопухолевый эффект не суммируется. При совместном введении платина и адриамицмна (по 8 мг/кг) противоопухолевый эффект был достоверно выше эффекта каждого из них, взятого в той же дозе, но не превышал эффекта одного платина в дозе 16 мг/кг. Более того, процент животных с полной ремиссией после лечения одним платаном был почти в два раза выше чем после лечения платаном в комбинации с адриамицином. Добавление к этой комбинации циклофосфана в дозе 10 мг/кг привело к значительному повышению противоопухолевого эффекта, выражавшегося в регрессии опухоли у 100% животных и почти в двукратном по сравнению с 2-компонентной комбинацией увеличении средней продолжительности жизни мышей, павших от рецидива (полного излечения не наблюдалось).

Полное излечение 100% мышей было достигнуто, только при лечении одним

ЦФ в дозе 150 мг/кг.

Исследования клеточных механизмов действия препаратов при полихимиотерапии показало, что апоптогенный эффект наилучшего из них не только не увеличивается, но и существенно снижается, причем в 116 значительно большей степени при 3-компонентной комбинации. Напротив, некрогенный и цитостатический эффекты усиливались с увеличением числа компонентов комбинации за счет повышения токсичности. Таким образом, полихимиотерапия опухолей, высокочувствительных к апоптозиндуцирующему действию одного из компонентов комбинации не оказывает лучшего противоопухолевого действия по сравнению с этим препаратом, взятым в эквитоксичной дозе и смещает клеточный механизм с апоптогенного действия препарата на цитотоксическое и цитостатическое.

Изучение противоопухолевого действия низкотоксичных природных биогенных регуляторов приобретает все большее значение в экспериментальной онкологии. Исследование противоопухолевого и апоптозиндуцирующего действие на лимфосаркому LS природного биогенного регулятора «Чакус» при его применении отдельно и в комбинации с ЦФ показало, что на фоне длительного потребления мышами «Чакуса» (начало применения за 20 дней до перевивки опухоли) у них наблюдалось существенное замедление роста перевиваемой лимфосаркомы LS, что в конечном итоге может быть причиной более выраженного терапевтического эффекта при последующем введении ЦФ. Применение «Чакуса» в виде 0,4% раствора за день до введения ЦФ в дозе 50 мг/кг также усиливало противоопухолевый эффект препарата. Анализ клеточных механизмов действия «Чакуса» и его взаимодействия с ЦФ показал, что у опухоленосителей, длительно потреблявших «Чакус», количество клеток в апоптозе увеличилось в два раза по сравнению с контролем, что свидетельствует о наличии апоптогенного эффекта «Чакуса». Небольшое, но достоверное повышение апоптоза под влиянием «Чакуса» через 72 ч после введения ЦФ дает основание предположить, что повышение противоопухолевого действия ЦФ может быть связано с суммированием апоптогенного эффекта «Чакуса» и ЦФ.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Баймак, Татьяна Юрьевна

1. Абелев Г.И. Что такое опухоль?// Соросовский Образовательный Журнал.- 1997. № 10.- С. 85-90.

2. Абросимов А.Ю. Некроз и апоптоз клеток саркомы М-1 до и после облучения опухоли:Дисс. . канд.мед.наук.Обнинск. 1999.-146 с.

3. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. - 384 с.

4. Аруин Л.И., Капуллер JI.JI, Исакова В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника.- М.: Триада-Х,1998. 490 с.

5. Арунин Л.И. Апоптоз в патологических процессах органов пищеварения//Клин.мед.-2000.Т.78.№1.-С.5-10.I

6. Баймак Т.Ю. Апоптоз и некроз при регрессии опухолей у мышей под влиянием циклофосфана. Материалы XXXVII междунар. науч. студ. конф. «Студент и научно-технический прогресс». -Новосибирск.:изд-во НГУ, 2000 г.-С.З

7. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Программированная клеточная смерть (апоптоз)//Росс.онк.журн.-1996.№1.-С.58-61.

8. Барышников А. Ю., Шишкин Ю. В. Иммунологические проблемы апоптоза М.:Эдиториал УРСС, 2002.-320с.

9. Ю.Берман А.Е., Козлова Н.И. Структурные и функциональные свойстваинтегринов и их роль в проведении внутриклеточных сигналов, злокачественном росте и апоптозе // Биол Мембр.- 1999.Т.16.- С. 169-198.

10. П.Беспалов'В.Г. Индивидуальная профилактика рака.-СПб.: Питер,2001.-192с.

11. Блохин Н.Н., Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний.- М.:Медицина,1984.- 213 с.

12. Бройс Р.А. Рак, лейкемия и другие, считающиеся неизлечимыми заболевания, которые лечатся естественными средствами.• I1. СПб. Логос,1992 .-112 с.

13. Брэтмен С. Нетрадиционная медицина. (Перевод с английского).-СПб.:Питер Паблишинг,1997.-228 с.

14. Васильев Ю.М. Социальное поведение нормальных клеток и антисоциальное поведение опухолевых клеток: Сигнальные молекулы, вызывающие размножение и гибель клеток // Соросовский Образовательный Журнал.-1997.№4.-С.17-22.

15. П.Вершинина С.Ф. О влиянии экстракта левзеи сафлоровидной и сарколизина на течение лимфолейкоза NK-Ly у мышей//Вопр.онк.-1967.№5.-С.99-101.

16. Вершинина С.Ф., Потявина Е.В. Онкологические заболевания.-СПб. :Питер,2001.-128с.

17. Зуева Е.П. Регуляция метастазирования опухолей в эксперименте с использованием хирургических и химиотерапевтических методов,-Томск:Изд-во Томского университета, 1987.-51 с.

18. Иванов В.М., Шабаева М.М., Иванов О.В. Профилактика и лечение муковита у больных с ракос ортофарингиальной области/УПаллиат.мед. и реабилит.-2001 .№2-3.-С.22.

19. Исаева Т.М., Белявская В.А., Ромащенко А.Г. Соматические мутации гена р53 и течение заболеваний при злокачественных новообразованиях разных локализаций. //БЭБМ.- 1999.Т. 127.Приложение 1.- С. 92-95.г

20. Каледин В.И., Николин В.П., Агеева Т.А., Попова Н.А., Баймак Т.Ю. и др. Циклофосфан-индуцированный апоптоз клеток мышиной лимфосаркомы в условиях in vivo II Вопр. онкол. 2000. Т. 46, № 5 - С. 588-593.

21. Каледин В.И., Николин В.П., Баймак Т.Ю., Галямова М.Р., Попова Н.А., Андреева Е.М. Влияние фенобарбитала на противоопухолевый эффектциклофосфана в зависимости от типа вызываемой им гибели опухолевых клеток.//БЭБМ. -2003.Т.135.№ 3.- С. 334-338

22. Карпова Г.В., Тимина Е.А., Карпова М.Р. Способ морфологической оценки апоптоза для доклинического изучения новых лекарственных средств.// Экспериментальная и клиническая фармакология,- 2000. Т. 63. № 6.- С. 62-63.

23. Киселева Е.Г., Солякова Т.И., Коновалова Н.П. Клеточный цикл и чувствительность к химитерапии рецидивирующей карциносаркомы Уокер.: Актуальные проблемы химиотерапии опухолей.-ЧерноголОвка., 1982,- С.62-64.

24. Клиническая онкология./ Под. ред. Блохин Н.Н., Цетерсон Б.Е.- М.:1. Медицина, 1979.- 696с.

25. Коган Е.А. Межклеточные взаимодействия при опухолевом росте // М.А. Пальцев, А.И. Иванов. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995.-С. 127-189.

26. Коган Е.А.,Угрюмов Д.А.,Жак Г. Морфологические и молекулярно-биологические особенности процессов кератенизации и апоптоза в плоскоклеточном раке легкого//Арх.пат.-2000.Т.62.№3.-С16-20.

27. Коган Е.А. Морфологическая характеристика, морфогенез и гистогенез опухолей. Патологическая анатомия: Курс лекций / Под ред. В.В. Серова, М.А. Пальцева. М.: Медицина, 1998, - С. 247-262.

28. Коган Е.А. Опухолевый рост. Патологическая анатомия: Курс лекций / Под ред. В.В. Серова, М.А. Пальцева. М.: Медицина, 1998. - С. 224-247.

29. Константинова М.М. Новые поддерживающие средства (противорвотные, ; бисфосфонаты, колониестимулирующие факторы)//Практическаяонкология.-2002.№12.-С.309-319.г ;

30. Константинова М.М. Современное состояние и перспективы химиотерапии злокачественных опухолей головного мозгаинтракраниальных опухолей)//Современная онкология.-2002.т.4.№3.-С.129-141.

31. Корепанов С.В. Реабелитационное средство на основе растительного сырья.//Бюлл. изоб.-2001.№8.- Патент № 2164146.

32. Купин В.И., Полевая Е.Б., Сорокин A.M. Повышение иммунологической реактивности онкологических больных с помощью экстракта элеутерококка//Вопр. онкол.- 1986.№7.-С. 21-26.

33. Лазарев В.Н. Адаптогены и рак/: Мат.конф. по опосредованному воздействию на опухолевый процесс.-Л, 1963.-С.52-55.

34. Лазарев В.Н. О некоторых новых проблемах онкологической фармакологии// Современные проблемы онкологии.-Л.:Медицина, 1955,-С.54-61.

35. Лазарев В.Н., Назаренко В.П. Применение элеутерококка в онкологии// Лекарства Дальнего Востока.-Хабаровск,1970.Вып.10.-С.42-45.

36. Ларионов Л.Ф. Химиотерапия злокачественных опухолей.- М.: Медгиз.-1962.- 464с.

37. Ларионов Л.Ф., Хохлов А.С., Шкодинская Е.Н., Васина О.С. О противоопухолевой активности п-ди (2хлорэтил) аминофенилаланина (сарколизина)//Бюлл. Экспер. Биол.- 1955.№1. С. 48-52.

38. Лесиовская Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии.-М.:Гэотар медицина,2003 .-592с.

39. Лукьянова Н. Ю., Кулик Г.И., Чехун В.Ф. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей // Вопр Онкол.- 2000. Т. 46.- С.121-128.

40. Лушников Е.Ф. Апоптоз клетки при лучевом патоморфозе опухолей//Арх. пат.-1986.т. 5 8 .№3 .-С .60-67.

41. Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток:морфология, биологическая роль, механизмы развития// Арх.пат.-1987.Т.49.вып.2.-С.89-94. !

42. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз).-М. Медицина,2001189с.

43. Манзюк JI.B. Гемцитабин в химиотерапии некоторых солидных опухолей (по материалам конгресса ASCO 2002, Орландо, США)// РМЖ. Т.П. №11.2003.- С. 11-18.

44. Машковский М.Д. Лекарственные средства (в 2-ух томах).-М.:Новая волна, 2002-608с.

45. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники.- Л.: Медгиз,1969.-460с.

46. Моисеенко В.М., Семиглазов В.Ф. Кинетические особенности роста рака молочной железы и их значениедля раннего выявления опухоли// Маммология.- 1997 №3,- С. 3-11.

47. Моисеенко В.М. Возможности моноклональных антител в лечении злокачественных опухолей/ЛТрактическая онкология.-2002.Т.З.№4.-С. 253-261.

48. Моисеенко В.М. Лекарственное лечение диссеминированных гормонозависимых опухолей //Вопросы онкологии. -2002. №4-5. -С.601-614.

49. Назаренко В.П., Мягкий М.А. Ближайшие результаты применения жидкого экстракта элеутерококка при комплексном лечении больных раком желудка:Вопросы онкологии.Мат. научной конференции института рака.-Запорожье,1969.-С. 78-81.

50. Николаев В. Растения помощники онколога//Фармацевт. вестн.-1997.№10.-с.З-8.

51. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Фармакопея с основами фитотерапии.-Спб.:ЭРВИ, 1994-1995.ч. 1 -2632с.

52. Певцев д.И. Яременко К.В., Ушаков B.C. Клиннико-иммунологические параллели при лечении больных с опухолями гортани и нижнего отдела глотки:Мат.Всеросс.симп. «Проблемы иммунологии в отоларингологии».-СПб., 1994.- С.69.

53. Переводчикова Н.И. Место ингибиторов ароматазы в современной гормонотерапии рака молочной железы Фемара (летрозол)//Современная онкология.-2000.т.2.№4.-С. 118-124.

54. Переводчикова Н.И., Маренич А.Ф. Изменение возможностей химиотерапии немелкоклеточного рака легкого с введением в практику новых противоопухолевых препаратов состояние проблемы в 2002 году// Практическая онкология.- 2002.№12. - С.282-294

55. Переводчикова Н.И. Место химиотерапии в системе лечения онкологических больных и выбор терапевтической тактики)//Современная онкология.-2002.т.4.№3.-С.12-23.

56. Петерсон Б.Е. Онкология.- М.: Медицина.- 1980.-448с.

57. Плохинский Н.А. Биометрия. Новосибирск.: Со АН.- 1961.- 364с.

58. Поддубная И.В. Реальность и перспективы лекарственной терапии неходжкинских лимфом)//Современная онкология.- 1999. T.1.N1.-C.34-42.I

59. Поддубная И.В. Лекарственная терапия злокачественных опухолей (современное состояние и перспективы)//РМЖ.-1998.Т.З.№10.-С.8-15.

60. Попова Н. А. Иммунология, часть 1, 2.- Новосибирск.: изд-во НГУ. 1999.106 с.

61. Попова Н.А. Экология и иммунитет.- Новосибирск.: издательство НГУ. 2001.- 108 с.

62. Попова Н.А. Введение в биологию. -Новосибирск.: изд-во НГУ, 2003 г.-196 с.

63. Противоопухолевая химиотерапия./под.ред. Переводчиковой Н.И. -М.: Медицина.- 1986.- 208с.

64. Романенко A.M. Апоптоз и рак//Арх.пат. 1996.Т.58.вып.З.-С.18-23.

65. Самуилов В.Д., Олескин А.В., Лагунова Е.М. Программируемая клеточная смерть // Биохимия.- 2000. Т. 65.- С.1029-1046.

66. Сейц И.Ф. Молекулярно-генетические аспекты лекарственной терапии злокачественных опухолей // Экспер Онкол.- 1987. Т.9.- С.3-10.

67. Семиглазов В.Ф., Божок А.А., Иванова О.А. и др. Антрациклин-содержащая адъювантная химиотерапия в сравнении с классической схемой CMF у больных раком молочной железы с высоким риском рецидива7/ Вопр. Онкол. 2000. Т.46.- С. 160-166.

68. Сивашинский М.С., Салганик Р.И. Гетерогенность популяции раковых клеток в отношении их реакции к цисплатину.// Вопр Онкол.- 2001.Т.47.-С.66-68.

69. Справочник по онкологии. / Под редакцией Трапезникова Н.Н., Поддубной И.В.- Москва, КАППА. 1996.-564с.

70. Ставровская А.А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток// Биохимия.- 2000.Т.65.- С. 112-126.

71. Струков А.И. Патологическая анатомия.- М.: Медицина. 1967.- 655с.

72. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. -М.: Медицина. 1985.- 673 с.

73. Тюляндин С.А. Мишени лекарственной терапии будущего:Третья ежегодная Росс.онкол.конф.-СПб.,1999.-С. 43-46.

74. Тюляндин С.А. Системная терапия операбельного рака молочной железы/ЯТрактическая онкология.- 2002.T.3.№l.-C.29-37.

75. Тюляндин С.А. Первые результаты клинического применения ингибиторов внутриклеточных сигналов/ЯТрактическая онкология.-2002.T.3.№4.-C.236-245.

76. Цырлина Е.В. Комбинированное действие экстракта из кроня элеутерококка колючего и алкилирующих соединений на метасттазирование крысиной опухоли ССК:Мат.конф. по опосредованному воздействию на опухолевый процесс.- Л.,1963.-С.89.

77. Уманский С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы.// Мол Биол.- 1996.- Т 30.- С.487-499.

78. Ушбаева Г.Г., Ряховская Т.В.Исследование экстрактов из растений сем. розоцветных на рост перевиваемых опухолей: Материалы междунар.науч.-практ.конф."Перераб. лекарств. сырья и пр-во фитопрепаратов для медицины и сел.хоз-ва".-Алматы,1996.-С.163.

79. Ушбаева Г.Г.,Ряховская Т.В.Влияние фитопрепаратов солодки на рост саркомы 180: Материалы междунар. науч.-практ. конф. "Перераб. лекарств.; сырья и пр-во фитопрепаратов для медицины и сел.хоз-ва".-Алматы,1996.-С.162.

80. Фильченков А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак.- Киев.:Мерион. 1996-385с.

81. Франкфурт О.С. Клеточные механизмы химиотерапии опухолей. М.: Медицина, 1976.- 392с.

82. Хансон К.П.,Комар В.Е. Молекулярные механизмы радиационной гибели клеток.-М.:Энергоатомиздат,1985.-152с.

83. Худолей В.В. Экологически опасные факторы.-Санкт-Петербург,1996. -112с.

84. Чиссов В.И. ред. Комбинированное и комплексное лечение больных со злокачественными опухолями.- М.: Медицина, 1989.-560с.

85. Шумный В.К., Шкель Н.М. Колчанов Н.А., Николин В.П., Попова Н.А., Каледин В.И. Состав, обладающий противоопухолевым, гепатопротекторным и иммуностимулирующим действием. Патент № МПК-7А 6135/RU/ (2002130119/15(031746)) от 3.07.03.

86. Яременко К.В. Природные средства против рака.-СПб.:Фолиант,2001.-160с.

87. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и роль в целостноморганизме//Пат.физ.-1998.№2.-С.38-48.i

88. Ярыгин Н.Е., Серов В.В. Атлас патологической гистологии. М.: Медицина, 1977.-200с.

89. Abbi S., Guan J.L. Focal adhesion kinase: protein interactions and cellular functions.// Histology and Histopathology. -2002.- V. 17.- P. 1163-1171.

90. Adams J.M., Cory S. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell suvival // Sci.- 1998.- V.281.- P.1322-1326.

91. Ahmad N., Gupta S., Husain M.M. et al. Differential antiproliferative and apoptotic response of sanguinarine for cancer cells versus normal cells // Clin Cancer Res.- 2000.- V.4.- P. 1524-1528.

92. Ashkenazi A., Vishva B. Death receptors: signalling and modulation // Sci.-1998.-V.281.-P.1305-1308.

93. Bander NH, Nanus DM, Milowsky MI, Kostakoglu L, Vallabahajosula S, Goldsmith SJ. Targeted systemic therapy of prostate cancer with a monoclonal antibody to prostate-specific membrane antigen// Semin Oncol.- 2003.-№30(5).-P.667-676.

94. Bansal N., Houle A., Melnycovich G. Apoptosis: mode of cell death induced in T-cell leukemia lines by dexametasone and other agents // The Faseb J.-1991.-V.5.-P. 211-216.

95. Barry M.A., Behnke C.A., Eastman A. Activation of programmed cell death (apoptosis) by cisplatin, other anticancer drugs, toxins and hyperthermia // BiochemPharmacol.-1990.-V.40.-P.2353-2362.

96. Beloborodova EI, Saratikov AS, Vengerovskii Al, Shalovai AA. Lochein a novel hepatoprotective drug// Klin Med (Mosk). -2000.-№78(6).-P.56-59.

97. Berger A, Lang R, Moritz K, Santic R, Hermann A, Sperl W, Kofler B. Galanin Receptor Subtype GalR2 Mediates Apoptosis in SH-SY5Y Neuroblastoma Cells// Endocrinology. -2003.-№ 30,- Epub ahead of print.

98. Bose R., Verheij M., Haimovitz-Friedman A. et al. Ceramide synthase mediates daunorubicin-induced apoptosis: an alternative mechanism for generating death signals // Cell.- 1995.- V.82.- P.405-414.

99. Brown R. The Bcl-2 family of proteins // Br. Med. Bull.- 1997.- V.53.-P.466-477.

100. Buja L.M., Eigenbrodt M. L., Eigenbrodt E. H. Apoptosis and necrosis. Basic types of cell death // Arh. Pathol. Lab. Med.- 1993.- V. 117,- P.1208-1214.

101. Burczyk J, Gawron A, Slotwinska M, Smietana B, Terminska K. Antimitotic activity of aqueous extracts of Inonotus obliquus// Boll. Chim. Farm.- 1996.-May;135(5).-P.306-309.

102. Caelles C., Hemberg A., Karin M. P53-dependent apoptosis in the absence of transcriptional activation of p53-target genes // Nature.- 1994.- V. 370.-P.220-223

103. Clifford P., Singh S., Stjernsward S. Long-term survival of patients with Burkitt's lymphoma: an assessment of treatment and other factors which may relate to survival // Cancer Res.- 1967- V.27 P.2578- 2615.

104. Crompton M. Mitochondrial intermembrane junctional complexes and their role in the cell death// J. Physiol.-2000.- V.529.1.- P.ll-21.

105. DiSaia PJ, Bloss JD.Treatment of ovarian cancer: new strategies// Gynecol. Oncol.- 2003.- Aug;90(2 Pt 2).-P.24-32.

106. Eastman A. Apoptosis: a product of programmed and unprogrammed cell death.// Toxico.l Appl. Farmacol.- 1993.- V.121.- P. 160-164.

107. Ekert P.G., Vaux D.L. Apoptosis and the immune system. // Br Med Bull.-1997.- V. 53.- P.591-603.

108. Enari M., Sacahira H., Yokoyama H. A caspase-activated DNase that degrades DNA during apoptosis, and its inhibitor ICAD // Nature.-1998.-V.391.-P.43-50.

109. Fesic S.W. Insights into programmed cell death through structural biology // Cell.- 2000.- V.103.- P.273-282.

110. Fisher D. Apoptosis in cancer therapy: crossing the threshold // Cell.- 1994.-V. 78.-P. 539-542.

111. Fojo T, Bates S. Strategies for reversing drug resistance// Oncogene.- 2003.-№20;22(47).-P.7512-7523.

112. Fong L, Small EJ.Immunotherapy for prostate cancer// Semin Oncol. -2003.-№30(5).-P.649-658.r ■ 131

113. Foumier D., Hoeffken W., Junkermann H., Bauer M., Kuhn W. Growth rate of primary mammary carcinoma and its metastases. Early Breast Cancer. Ed. by J. Zander and J.Baltzer. - Berlin etc.: Springer-Verlag, 1985, p. 73-86.

114. Goldie JH, Coldman AJ. A mathematic model for relating the drug sensitivity of tumors to the sponateous mutation rate// Cancer Treat. Rep.-1979.- V. 63:-P. 1727-33.

115. Goldworthy Т. H., Connoly R. В., Fransson-Steen R. Apoptosis and cancer risk assessment// Mut Res.- 1996.- V.365.- P.71-90.

116. Gomes-Angelants M., Bortner D., Cidiliwski John A. Cell volume reguation ^ in immune cell apoptosis// Cell Tissue Res.- 2000.- V.301.- P.33-42.

117. Green D.R. Reed J.C. Mitochondria and apoptosis// Sci.-1998.-V.281.-P.l 309-1312.

118. Greenwald P., Malone W.F., Cerny M.E., Stern H.R. Cancer prevetion research trials//Adv.Cancer.-l 993. Vol.61 .-P. 1-23.

119. Hacker G. The morphology of apoptosi // Cell. Tiss .Res.- 2000.- V. 301.-P.5-17.

120. Hande K.R. Etoposide: four decades of development of a topoisomerase П inhibitor//Eur. J. Cancer.- 1998.-V.34,- P.1514-1521.

121. Hannun Y.A. Apoptosis and the dilemma of cancer chemotherapy // Blood.-1997.-V. 89.-P.1845-1853.

122. Havrietsky L.J., Elbedary A., Hurteau J.A. et al. Chemotherapy-induced у/ apoptosis in epithelial ovarian cancers// Obstet Gynecol.- 1995.- V.85.-P.10071010.

123. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein В. P53 mutations in human cancers. // Sci.- 1991.- V.253.- P.49-53.

124. Huang T.S., Shu C.H., Lee C.C., Chen L.T. In vitro evaluation of GL331's cancer cell killing and apoptosis-inducing activity in combination with other chemotherapeutic agents// Apoptosis.-2000.- V.5.-P.79-85.

125. Imreh G, Beckman M, Iverfeldt K, Hallberg E. Noninvasive monitoring of apoptosis versus necrosis in a neuroblastoma cell line expressing a nuclear pore protein tagged with the green fluorescent protein// Exp. Cell. Res.- 1998.-V.238.- P.371-376.

126. Jansen- В., Wacheck V., Heere-Ress E. et al. Chemosensitisation of malignant melanoma by Bcl2 antisense therapy// Lancet.- 2000,- V.356.-P.1728-1733.

127. Kauffinan S.H. Cell death induced by topoisomerase-targeted drugs: more questions than answers //Biochem et Biophys Acta. Gene Struct and Express.1998.-V.1400.-P.195-211.

128. Kerr J.F.R., Wyllie A.H., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics // Br. J. Cancer. -1972.-V.18.-P.239-257.

129. Kluck R.M., Bossy-Weltzer E., Green D.R. The release of cytochrome с from mitochondria: a primary site for Bcl-2 regulation of apoptosis // Sci.-1997.-V.275.-P.1132-1136.

130. Kolenko V., Uzzo R.G., Bukowski R. et al. Dead or dying: necrosis versus apoptosis in caspase-deficient human renal cell carcinoma // Cancer Res.1999.- V.59.- P.2838-42.

131. Komatsu N., Nakagawa M., Oda T. Depletion of intracellular NAD+ and ATP levels during ricin-induced apoptosis through the specific ribosomalinactivation resulting in cytolysis of U937 cells // Journ. Biochem.- 2000.-V.128.- P. 463-470.

132. Kroemer G. The proto-oncogene Bcl-2 and its role in regulation apoptosis // Nature Med.- 1997.- V.3.- P.614-620.

133. Kuwako KI, Taniura H, Yoshikawa K. Necdin-related MAGE proteins differentially interact with the E2F1 transcription factor and the p75 neurotrophin receptor//J. Bio.l Chem.- 2003.-№ 29.- Epub ahead of print.

134. Lebwohl.D., Canetta R. Clinical development of platinum complexes in cancer therapy: an historical perspectives and an update // Eur. J. Cancer.-1998.-V.34.-P.1522-1534.

135. Liebertahl W., Triaca V., Levine J. Mechanisms of cell death induced by cisplatin in proximal tubelar epithelial cells: apoptosis vs necrosis // Amer. J. physiol.- 1996.-V.270.-P.F700-708.

136. Luo Y, Kessel D. Initiation of apoptosis versus necrosis by photodynamic therapy with chloroaluminum phthalocyanine// Photochem Photobiol.- 1997.-V.66.-P.479-83.

137. Luria S.E., Delbruck M. Mutations of bacteria from virus sensitivity to virus resistance // Genetics 1943.-V 28.-P 491—511.

138. Makin G., Hickman J. A. Apoptosis and cancer chemotherapy // Cell Tiss Res.-2000.-V.301.-P.143-152.

139. Milligan C.E., Schwartz L.M. Programmed cell death during animal development // Br. Med. Bull.- 1997.- V.52.- P.570-590.

140. Murphy FJ, Seery LT, Hayes I. Programmed Cell Death: Chapter 10 Therapeutic approaches to the modulation of apoptosis// Essays Biochem.-2003 .-№39.- P.131-153.

141. Nagata S., Golstein P. The Fas death factor // Sci.- 1995.- V.267.- P.1449-1456.

142. Ogasawara J., Watanabe-Fukunada R. Lethal effects of anti-Fas antibody in mice // Semin Cell Biol.- 1993.- V.364.- P.806-809.

143. O'Connor P.M. Wassermann K., Sarang M. et al. Relationship between DNA cross-links, cell cycle, and apoptosis in Burkitt's lymphoma cell lines differing in sensivity to nitrogen mustard // Cancer Res.- 1991.- Vol.51.- P. 6550-6557.

144. Reed J.S. Bcl-2 family proteins: regulators of apoptosis and chemoresistens ^ in hematologic// Semin. Hematol.-1997.-Vol.34, Suppl.5.-P.9-19

145. Reiter I, Krammer B, Schwamberger G. Cutting edge: differential effect of apoptotic versus necrotic tumor cells on macrophage antitumor activities. // J.j1.munol.- 1999.-V. 163.-P. 1730-2.

146. Roboz J, Jiang J, Holland JF, Bekesi G. Selective tumor apoptosis by MF13, L-prolyl-L-m-bis(chloroethyl)amino.-phenylalanyl-L-norvaline ethyl ester, a new sarcolysin-containing tripeptide// Cancer Res.- 1997.- V.57.- P. 4795-4802.

147. Rzymowska J.The effect of aqueous extracts from Inonotus obliquus on the mitotic index and enzyme activities//Boll. Chim. Farm.- 1998.- Jan;137(l).1. Щ\ P.13-15.

148. Savill J. Recognition and phagocytosis of cells undergoing apoptosis// Br. Med. Bull.-1997.- V.53.- P.491-508.

149. Ship MA. A Predictive model for agressive non-Hodgkins lymphoma. //The New England Journal of Medicine.-1993.-V.329.-P.987-93.

150. Schwartz L.M. et al. Do all programmed cell deaths occur via apoptosis? // Proc Nat Acad Sci. USA.- 1993.- V.90.- P.980-984.

151. Scott N., Sagar P.,Stewart J., et.al. P-53 in colorectal cancer: clinicopathological correlation and prognostic significance// Br.j.Canc.- 1991.-№ 63.-P.317-319.

152. Siegel M.R., Frederiksen J.K., Zacharias D.R. Fas preassociation required for apoptosis signalling and dominant inhibition by pathogenic mutations // Sci.- 2000.- V.288.- P.2354-2357.

153. Silverberg E. Statistical and epidemiological data on urological cancer// Cancer.- 1987.-№60.-P.692-717.

154. Skulachev V.P. Programmed death in yeast as adaptation?// FEBS Lett.-2002,- V.25.- №528(l-3).-P.23-26.

155. Skipper HE, Schabel FM Jr, Wilcox WS. Experimental evaluation of potential anticancer agents. XXI. Scheduling of arabinosylcytosine to take advantage of its S-phase specificity against leukemia cells// Cancer Chemother. Rep.- 1967.- №51(3).-P.125-165.

156. Skulachev V.P. Programmed death phenomena: from organelle to organism//Ann. N. Y. Acad. Sci.- 2002.- №;959.-P. 214-237.

157. Solowiej E, Kasprzycka-Guttman T, Fiedor P, Rowinski W. Chemoprevention of cancerogenesis~the role of sulforaphane// Acta. Pol. Pharrn.- 2003.- Jan-Feb.№60(l).-P.97-100.V

158. Suzuki M., Yougle R.J., Tjandro N. Structure of Bax: coregulation of dimer formation and intracellular localisation // Cell.- 2000.-V.103.-P.645-654.

159. Swart P, van der Merwe KJ, Swart AC, Todres PC, Hofmeyr JH.Inhibition of cytochrome P-450(ll)beta by some naturally occurring acetophenones and plant extracts from the shrub Salsola tuberculatiformis//Planta Med. -1993 .-№59(2). P.139-143.136

160. Thompson C.B. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease // • ' Sci.- 1995.- V. 267.-P.1456-1462.

161. Thornberry N., Lazebnik Y. Caspases: ensimes within // Sci.- 1998.- V.281.-P.1312-1316.

162. Thornberry N. The caspase family of cysteine proteases // Br Med Bull.-1997.- V.53.- P.478-490.

163. Von Mehren M. New therapeutic strategies for soft tissue sarcomas// Curr.Treat Options. Oncol.- 2003.-№4(6).-P.441-451.

164. Walker P.R., Smith C., Youndale T. Topoisomerase-2 reactive chemotherapeutic drugs induce apoptosis in thymocites // Cancer Res.- 1991.-V.51.- P.1078-1085.

Оглавление диссертации Баймак, Татьяна Юрьевна :: 2003 :: Новосибирск

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Баймак, Татьяна Юрьевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Баймак, Татьяна Юрьевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций