Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние деманола, глицина и глютаминовой кислоты на параметры гомеостаза при смене двигательных режимов

^ На правах рукописи

#

Ч

Госткина Ир1ша Павловна

Влияние деманола, глицина и глготамнновон кислоты на параметры гомеостаза при смене ■двигательных режимов

14.00.25 - Фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Саранск - 1998

Работа выполнена в Мордовском ордена Дружбы народов государственном университете им. Н.П. Огарева.

Научный руководитель доктор медицинских наук

седании диссертационного совета К 063.72.11 при Мордовском государственном университете им. Н.П. Огарева (430000, г. Саранск, ул. Ульянова, 26А).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Мордовского университета (ул. Большевистская, 68).

А.В. Зорькина.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

профессор Г.А. Базанов;

кандидат медицинских наук доцент В.А. Кузнецова.

Ведущая организация - Институт фармакологии

РАМН, г.Москва.

Автореферат разослан " ¿ас^ууы^/Сс.? ] 998

г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук

ОБЩАЛ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Процесс эволюции, жизнь человека в период :хнократического расцвета к концу XX века коренным образом изменили окружающую )еду: физический, химический, психический "климат" жизни. К значительным причинам зрушения экологии организма относятся не только токсические экзогенные воздействия, э и нарушающие метаболизм и ломающие гомеостаз, так называемые шраэкологические" патогенные факторы: неблагоприятные условия жизни, урбанизация, ¡стематический стресс и т.д. (Левин Ю.М., 1997; Оганов Р.Г., 1996; Жуковский Г.С. с >авт., 1996).

Кумулятивные эффекты ряда неблагоприятных факторов среды и деятельности :ловека в значительной степени совпадают с проявлениями так называемого ножественного метаболического синдрома, который лежит в основе развития основных ¡инфекционных заболеваний (Бобровницкий И.П., Ушаков И.Б., 1998). Усиление :йствия эндогенных повреждающих факторов, связанных с аутоинтоксикацией, фактерио для перехода заболеваний в хроническую форму (Фролов В.И., Новочадов В., 1996).

Целостный организм в каждый данный момент времени представляет собой 1аженное взаимодействие - интеграцию различных функциональных систем, что тределяет нормальное течение метаболических и поведенческих процессов. Нарушение ой интеграции, если оно не компенсируется специальными механизмами, означает болевание и может привести к гибели (Судаков К.В., 1984).

Ограничение подвижности является одним из таких факторов и вызывает развитие :лого ряда патологических процессов, нарушение всех видов обмена, приводящих к мшорганной патологии (OhakawaTomi et al., 1991;Nishimuza V. et al., 1994; Инчина В.И., >94; Kondo H. et al., 1991 ; Иванова C.M. с соавт., 1992; Грицюк А.И., 1993).

Кроме того, в условиях длительного ограничения подвижности нарушается обратная Оферентация, являющаяся основой, которая определяет целенаправленную деятельность 1Ждой функциональной системы и обеспечивает возможность регулирования жспособительных реакций целого организма в соответствии с условиями окружающей гешней и внутренней среды.

Процесс адаптации к смене двигательных режимов, протекающий на фоне исходного :таболического дисгомеостаза может сыграть роль дополнительного стрессорного 1здействия и привести к серьезным повреждениям в организме (Меерсои Ф.З., шенникова М.Г., 1988; Сухарев А.Г., 1991; Diplock А.Т., 1993; Minisini М.Р., Richard M.J., •94).

При неадекватной физической нагрузке нарушается функция сердечно-сосудистой, щокринной систем, энергетический и другие виды обмена (Косицкий Г.И. с соавт., 1987; inder et al., 1979).

Задачей фармакологической коррекции при смене двигательных режимов является [ижение цены адаптации и профилактика полиорганных повреждений. Проблема аптационной защиты миокарда является одной из важнейших в современной гтофизиологни сердца и фармакологии, так как методы современной традиционной :дикаментозной терапии и профилактики остаются далеко не всегда эффективными radra A. et al., 1980; Руда М.Я., Зыско А.П., 1981; Мазур Н.А., 1985; Лишманов Ю.Б., аслов Л.Н., 1994).

Меерсоном Ф.З. были сформулированы представления о так называемых стресс-;митирутощих системах, которые активируются при любой стрессорной реакции и раничивают ее интенснвность и длительность. В ЦНС эта системы представлены VMK- и пептидергическими механизмами,, а на уровне рабочих органов -

антиоксидантами и простаноидами. Активация стресс-лимитирующих систем оказывает фактором, защищающим сердце н другие органы, причем аналогичного эффекта мож! добиться введением гуморальных компонентов вышеперечисленных систем (Лишмаш Ю.Б., Маслов Л.Н., 1994). В связи с этим нам представляется важным малоизученнь вопрос об использовании аминокислот глицина и глютаминовой кислоты и ново препарата с ноотропным типом действия деманола для оптимизации адаптационнь процессов при смене двигательного режима.

Работа является разделом комплексной темы Мордовского государственно: университета им. Н.П. Огарева "Влияние гиподинамии, гипоксемии и профессиональнь вредностей на развитие и течение паталогии внутренних органов". Номер государственнс регистрации 01870009146.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы - оценка влияния глицин деманола и глютаминовой кислоты на метаболические нарушения, вызванные сменс двигательных режимов. В ходе исследования решались следующие задачи:

1. Изучить влияние деманола, глицина и глютаминовой кислоты на содержат конечного продукта пгрекисного окисления липидов (ПОЛ) малонового диальдеги; (МДА) и на активность антиоксидантного фермента - каталазы в плазме крови эритроцитах при 30 суточном ограничении подвижности.

2. Определить влияние деманола, глицина и глютаминоБой кислоты на динами] некоторых метаболических показателей при гиподинамии.

3. Оценить возможности коррекции процессов долговременной адаптации к физическс нагрузке после длительного ограничения подвижности под влиянием деманол глицина и глютаминовой кислоты.

Научная новизна. В представленной работе впервые изучено влияние аминокнсл! глицина и глютаминовой кислоты, а также ноотропного препарата деманола на динами: комплекса метаболических показателей при адаптации к длительному ограничен!) подвижности. При этом продемонстрирована возможность коррекции нарушеш липидного, белкового обмена и перекисного окисления липидов.

Впервые исследованы процессы адаптации при смене двигательного режима пос. курсового применения глицина, глютаминовой кислоты, деманола. /

Установлено влияние перечисленных препаратов на формирование адаптационш стабилизации структур при расширении двигательной активности, проявляющейся в рос холестерина липопротеидов высокой плотности, ограничении степени роста обще: холестерина, индекса атерогенности, предупреждении явлений липопероксидаци Показано, что глютаминовая кислота показывает наиболее выраженный оптимизируют! эффект на динамику метаболических показателей при долговременной реадаптации физическим нагрузкам.

Проведена сравнительная оценка эффективности деманола, глицина, глютаминов< кислоты и препарата вамин при смене двигательных режимов.

Научно-практическая ценность работы. Результаты проведенных исспедоваш являются экспериментальным обоснованием эффективности применения глютаминов« кислоты, глицина и деманола при_адаптации к смене двигательного режима.

Полученные данные позволяют разработать клинические методы фармакологическ< коррекции адаптационных процессов при расширении двигательного режима у больных условиях метаболического дисгомеостаза и снижения компенсаторно-приспособительнь возможностей организма.

Особую актуальность представляет проблема адаптации поврежденного организма обеспечения фармакологической протекции этого процесса.

Основные положения, выносимые на защиту: Использование в качестве корригирующих препаратов глицина, деманола и глютаминовой кислоты при 30 суточной гиподинамии предупреждает нарушение липидного и углеводного обмена, рост вторичного продукта перекисного окисления липидов - малонового диалъдегида - в плазме крови и эритроцитах. Изученные препараты предупреждают развитие цитолитического синдрома, гипокалнемии, гипонатриемии, гнперкальциемии при ограничении подвижности. При длительной адаптации к физической нагрузке глютаминовая кислота, глицин и деманол в отличие от препарата сравнения вамина предупреждают рост в плазме крови и эритроцитах содержание малонового диальдегида и снижение активности каталазы. Применение деманола, глицина и глютаминовой кислоты позволяет в значительной степени предотвратить зтерогенные сдвиги липидного спектра сыворотки крови при расширении двигательного режима.

Глютаминовая кислота, глицин и деманол оказывают более выраженное влияние на метаболические показатели при смене двигательных режимов, чем препарат сравнения вамин.

А пробация работы. Результаты работы и основные положения диссертации гожены и обсуждены на III и IV Российском национальном конгрессе "Человек и гарство" (Москва, 1996, 1997), на I, II и III конференции молодых ученных Мордовского яверситета им. Н.П. Огарева (Саранск, 1996, 1997, 1998) и на Всероссийской .тональной ассамблее кардиологов (Саратов, 1998).

Структура и обьем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, [ВЫ "Материалы и методы", 3 главы собственых наблюдений, обсуждения результатов :ледования, выводов и указателя литературы.

Текст расположен на 133 страницах машинописи, иллюстрирован 19 рисунками и 14 ¡лицами. Список использованной литературы включает 281 источник, из них '225 чественных и 56 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Возможности фармакологической коррекции повреждений, возникающих при ггельном стрессе были изучены нз модели 30-суточиой иммобилизации при помещении вотных в клетки малого объема, ограничивающие их перемещение, но не затрудняющие тупа к воде и пише (Тявокин В.В., 1975).

Исследование проведено на 67 половозрелых кроликах-самцах породы шиншилла, сой 2-3 килограмма. Эксперименты состояли из 5 серий, в которых было изучено лние вводимых ежедневно фармакологических препаратов на динамику химических показателей, содержание малоно'вого диальдегида, активности каталазы в зме и эритроцитах, а также процессы срочной адаптации к физической нагрузке после :уток ограничения подвижности.

Для профилактики патологического процесса при длительном ограничении вижности нами были выбраны деманол, глютаминовая кислота, глицин.

В эксперименте использовался деманол, полученный биотехнологическим путем, а была рассчитана исходя из рекомендуемой для однократного внутривенного тения минимальной терапевтической дозы 30 мг/кг. массы тела животного (Ермакова .ссоав., 1997).

Действующим веществом деманола является >1-ацетил Ь-глутамат 2-(Днметиламино) юла. Применяется в виде 20% раствора, представляющая собой жидкость с розоватым

или желтоватым оттенком. Деманол - ноотропный препарат, обладак>Щ1 церебропротективными свойствами, психостимулирующим и психогормонизирукнш действием.

N - ацетил L - глутамат 2 - (диметиламино) этанола НООС-(СН2)

CH-NHCOCHj

I

соон

4ch3)2n-(ch2)20h

Деманол имеет по химической структуре сходство с у-аминомаслянной кислот* (ГАМК). Спектр действия деманола в организме довольно широкий и полностью изучен, а сведения о влиянии его на течение хронического процесса отсутствуют. Поэто! он был выбран для исследования в условиях длительного ограничения подвижности.

Учитывая стрессорный тип реагирования животных на лишение свобо; перемещения, для исследования также были выбраны: глютаминовая кислота и глищ Эти нейромедиаторные аминокислоты оказывают метаболическое и регуляторн воздействие на ЦНС и являются близкими по химической структуре естественны! метаболитами головного мозга.

Глютаминовая 2-аминоглютаровая кислота, представляет собой бел! кристаллический порошок, относится к заменимым аминокислотам. Ее хнмическ формула:

^С - сн2 - сн2 - сн - er н<У | ^он

nh2

В эксперименте глютаминовая кислота применялась в дозе, соответствуют содержанию в вамине, 45 мг/кг внутривенно ежедневно со 2-10 дня иммобилизации окончания эксперимента.

Глютаминовая кислота является основным компонентом большинства белю Высокая потребность организма в этой аминокислоте обусловлена широким участием во многих метаболических процессах (Неклюдов А.Д., 1990г.).

Исследованиями последнего времени показано, что переспективным пут предупреждения альтернативных изменений при стрессе является воздействие собственные стресс-лимитирующие системы организма с помощью их метаболитов медиаторов (Малышева В.В., 1996г.). Малоизученной в этом отношении являеп аминокислота глицин, играющая роль тормозного медиатора. Однако, вследствии край низкой способности глицина проходить через гематоэнцефалический барьер, < антистрессорный эффект не привлекал внимание исследователей.

Глицин - заменимая аминокислота, представленная в виде кристаллическс порошка белого цвета. Его химическая формула (аминоуксусная кислота) (Машковск М.Д. 1997г.):

H2N - СН2 - С

^он

В эксперименте глицин вводился в дозе 10,5 мг/хг массы тела животного, доза ассчитаиа в соответствии с вводимой дозой аминокислоты в составе ваминз N нутривенно ежедневно со 2-го дня иммобилизации до окончания эксперимента.

Глицин - одна из первых аминокислот выделенных из природных источников. Он аляется предшественником креатина порфинов, пуриноз, Сахаров, серина, глутатиона и екоторых гормонов (Неклюдов А.Д. 1990г.).

Препаратом сравнения явился вамин, представляющий из себя сбалансированный аствор аминокислот вамин N (Швеция, фирма "Pharmacia"). В состав вамииа N входят евовращающие изомеры аминокислот (аланин 3,0 г.; аргинин 3,3г.; аспарапшовая ислота 4,1г.; валин 4,3г.; гистидин 2,4 г.; глицин 2,1г.; глютаминовая кислота 9,0 г.; золейцин 3,9 г.; лейцин 5,3г.; лизин 3,9 г.; метионин 1,9 г.; пролин 8,9 г.; серии 7,5 г.; эеонин 3,0 г.; триптофан 1,0 г.; фенилаланин 5,5 г.; тирозин 0,5 г.; цистеин 1,4 г.; гсектролиты: натрий 50ммоль/л, калий 20 ммоль/л, кальций 2,5 ммоль/л, магний 1,5 моль/л, хлориды 55 ммоль/л). Содержание аминокислот составляет 86,2 г/л, из которых оза незаменимых 37,6 г/л (43%), общий азот раствора равен 12,0 г/л, из которых на а-иинных азот приходится 9,7 г/л (81,7%). Белковый эквивалент около 75 г/л.

В зависимости от препарата, выбранного с целью коррекции, серии распределялись педующим образом:

Таблица 1.

№ Условия проведения эксперимента Исходное количество животных (кроликов) Через 30 суток ограничения подвижности (количество животных) После 3-недельной физической нагрузки (количество животных)

1 Контроль (ограничение подвижности без коррекции) 23 18 15

2 Взедение деманола в дозе 30 мг/кг в/в , 12 8 8

3 Введение глютаминовой кислоты в дозе 45 мг/кг в/в 12 9 9

4 Введение глицина в дозе 10,5 мг/кг в/в 10 10 10

5 Введение вамииа в дозе 10 мл/кг в/в 10 8 8

Следующей задачей экспериментов было изучение влияния препаратов на иохимические показатели и гемостаз при длительном иммобилизационном стрессе, а зкже на последующее течение процессов долговременной адаптации к физической агрузке. Расширение двигательного режима подопытных животных после ограничения одвижности проводили постепенно: 1-ю неделю животное помещалось в обычных словиях содержания вивария, в клетках 50x50x40 см; 2-ю неделю - проводились днократные ежедневные тренировки в третбане в течение 1-й минуты; 3-ю неделю -днократный ежедневный бег в третбане в течение 2-х минут; 4-ю неделю - однократный жедневный бег в третбане в течение 3-х минут. Скорость вращения колеса в аектрическом третбане 12,5 об/мин. (Длина беговой дорожки составила 4,75м., скорость робега 50м/мин.). При расширении двигательного режима подопытным животным репараты не вводились. **

Для оценки изменений в метаболическом звене гомеостаза проводили исследовани общего холестерина сыворотки по методу Илька, ß-липопротеинов по методу Бурштейн; холестерина липопротеинов высокой плотности (ХсЛПВП) по методу Абеля поел гепарин-марганцевой преципитации и осаждения из сыворотки ß-липопротеино! триглицеридов при помощи диагностических наборов фирмы "Лахема" (Чехия). Расче индекса атерогенности проводили по формуле: (общий холестерин - холестерин ЛПВГГ холестерин ЛПВП (Климов А.Н., Никулкина Н.Г., 1984). Общий белок сыворотки кров определяли биуретовой реакцией, белковые фракции - методом электрофореза на arapi глюкозы крови — глюкооксидазным методом по окислению О-толуидина (Меньшиков В.Е 1987г.).

На 14 и 30 сутки и после трехнедельной реабилитации к физической нагрузк исследовали содержание в плазме и эритроцитах конечного продукта перекисног окисления липидов — малонового диальдегида (МДА) по реакции с таобарбитурово кислотой (Конюхова С.Г. с соавт. 1989г.), каталазы плазмы и эртроцитов (Кролюк М.А. соавт. 1985г.).

Для биохимических исследований использовали спектрофотометр "СФ-46" фотоэлектрокалориметр "КФК-2МП".

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью критерия Стьюдента (Беленький M.JL, 1963) при 5% уровне значимости на персонально! компьютере IBM PC 486.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Живой организм представляет собой сложнейший механизм, состоящий из тесн "пригнанных" в своей работе различных функциональных систем, имеющих общие точк соприкосновения. Работу многих функциональных систем организма объединяют кров! лимфа и межгканевая жидкость, где сосредотачиваются предконечные приспособительны результаты многих функциональных систем. Процессы взаимодействия различны функциональных систем определяют устойчивость внутренней среды, оптимальную дл метаболизма отдельных клеток организма - гомеостаз в широком смысле слова (Судако К.В., 1984).

'Изучение процессов адаптации к физическим нагрузкам играет важную роль оценке состояния организма и его устойчивости к неблагоприятным факторам. Резко ограничение двигательной активности часто бывает временным и вынужденным. 1 дальнейшем необходим возврат к обычной двигательной нагрузке (после травм, лечебног постельного режима при инфаркте миокарда и т.д.).

Метаболический фон, на который накладываются изменения, вызванные нагрузко! уже нарушен при гиподинамии, что может вести к усилению повреждающих эффектов.

Суть рабочей гипотезы проведенного исследования состоит в следующеи моделирование длительного ограничения подвижности, имея в своей основе сочетание воздействие гиподинамии, стрессорного фактора (ограничение свободы передвижений определенную проприоцептивную депривацию организма, позволяет воспроизвест картину метаболического дисгомеостаза. Клиническим аналогом которой может быт множественный метаболический синдром, возникающий при длительном воздействии н организм ряда неблагоприятных факторов окружающей среды и профессионально деятельности, и сопровождающий развитие основных важнейших неинфекционны заболеваний человека.

Недостаточно изучены процессы адаптации организма и по сути дела сам возможность адаптации, как таковой, в условиях срыва компенсаторнс

риспособительных процессов и стабилизации обменных цепочек на ином, значительно тличающемся от нормальных показателен уровне.

Следует также отметить, что вопросы фармакологической коррекции периода азличных стрессорных воздействий привлекают внимание большого количества сследователей.

Однако, мало изученными остаются аспекты влияния фармакологических препаратов а развитие феномена адаптационной стабилизации структур. Поэтому нас интересовало е столько непосредственное коррегирующее влияние изученных препаратов и динамика етаболических показателей на фоне их введения, сколько исследование их "следового отенциала", позволяющего уже после отмены препарата в течение длительного срока оддерживать процессы адаптации при смене двигательного режима.

Полученные нами экспериментальные данные позволяют говорить о фазных зменениях содержания МДА в эритроцитах и плазмы крови в зависимости от срока «мобилизации. К 14 суткам ограничения подвижности отмечается максимальный рост эовня вторичного продукта ПОЛ в изученных средах. К 30 суткам эксперимента >держание МДА в эритроцитах несколько снижается с 152,2±0,9% до 130,8±8,96% '<0,001), а в плазме сохраняется на высоких цифрах. При последующей адаптации к изическим нагрузкам содержание МДА в эритроцитах снижается до исходного уропня, а плазме по-прежнему сохраняется на высоких цифрах. Изменение динамики накопления [ДА в плазме и эритроцитах позволяет говорить о намечающейся тендспа.ш к ■абилизации процессов ПОЛ в организме и развитии приспособительных реакций, что здтверждается сохранением активности ферментов антиоксидантной защиты (табл. 2.).

Полученные результаты согласуются с данными Коваленко Е.Е. (1976), о том, что эи длительной гипокинезии развивается 2-я стадия своеобразного "хронического ресса", характеризующаяся возникновением определенной адаптации. Однако, по нению Федорова И.В. (1970) и Кротова В.П. (1972) нельзя рассчитывать на адаптацию ивотных к состоянию гипокинезии и нормализацию обменных процессов. Мы также задерживаемся этого мнения, т.к. отсутствие дальнейшего прогрессивного нарастания -оричного продукта липопероксидации, может быть объяснено достаточно высокой ггальностью наименее устойчивых животных (20-25%) при ограничении подвижности, нелогичная динамика показателя при длительном ограничении подвижности была ■мечена Гераськиной М.А. (1997) и Кудашкиным С.С. (1997).

Невозможно оценить процессы перекисного окисления липидов без изучения ггивности ферментов АОЗ. В работах Зорькиной A.B. (1997), Ширшиковой О.В. (1997), ¡дькиной Ю.Г. (1997) показано снижение активности каталазы, глутатионпероксидазы, в газме и эритроцитах, супероксиддисмутазы эритроцитов, несмотря на рост продуктов топероксидации. Более выраженно подавлялась активность каталазы, поэтому, мы для (енки коррегирующего эффекта изучаемых препаратов посчитали наиболее наглядными ¡блюдение за динамикой активности каталазы в плазме и эритроцитах.

Уже к 14 суткам ограничения подвижности, несмотря на высокий уровень оричного продукта ПОЛ, снижается активность каталазы в плазме и в эритроцитах, что >жет быть расценено как переход в фазу декомпенсации (Микаэлян Э.М. с соавт., 1983), [ижение активности фермента нарастает с увеличением сроков эксперимента.

При последующей долговременной адаптации к физическим нагрузкам активации талазы в плазме крови не происходит, в эритроцитах показатель продолжает югрессивно снижаться.

При использовании деманола, глицина, глютаминовой кислоты нз фоне ограничения «вижности также, как в серии сравнения отсутствует рост уровня МДА в эритроцитах. В рнях с введением деманола и глютаминовой кислоты показатель даже достоверно ижается по отношению к исходному уровню. Содержание МДА в плазме крови на фоне

Таблица 2.

Влияние деманола, глицина, глютаминовой кислоты и вамина на динамику МДА и активность катал азы в плазме крови и эритроцитах • при длительном ограничении подвижности и последующей реадаптации к физической нагрузке (М±т, %).

Серия МДА Активность каталазы

плазмы ЭРИТ1 эоцитов плазмы эритроцитов

30 cjfroK 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки

Контроль 217,0±27,9 Р<0,001 175,0±14,63 Р<0,001 130,8±8,9 Р<0,001 85,8*9,29 Р<0,001 52,1*15,7 Р<0,05 59,0±5,02 Р<0,05 31,6±8,4 Р<0,001 22,46*2,64 Р<0,001

Вамин 17б,3±9,7 Pi<0,05 222,5*10,8 Pi>0,05 129,2*9,7 Р.<0,05 145,5±5,0 Р,<0,05 70,4*9,7 Pi<0,001 85,0*7,0 Pi>0,05 13б,3±15,4 Р,<0,001 110,0*1,3 Pi<0,001

Деманол 110,4±35,0 Р|>0,05 П0,88±8,58 Pi>0,05 86,6*8,6 Pi<0,001 66,37*8,22 Р,<0,001 116,9*1,0 Р,<0,001 125,51*8,56 Pi<0,001 127,0*2,4 Pi<0,001 127,63*1,99 Р,<0,001

Глицин 92,4±6,1 Р, <0,001 96,08*5,20 Р,<0,001 77,2*10,7 Р,<0,001 79,28*10,53 Р,<0,001 106,0*14,1 Pi<0,001 104,33*8,65 Р,<0,05 125,9*4,9 Pi<0,001 120,36*2,55 Pj<0,001

Глютаминовая кислота 108,3±5,3 Р,<0,001 118,76*11,76 Pi>0,05 99,2*5,9 Pi<0,001 89,78*11,52 Р,<0,001 111,8*7,4 Pi<0,001 102,01*4,34 Pi>0,05 111,7*1,95 Р,<0,001 108,05±6,57 Р,<0,001

Примечание: достоверность Р - рассчитана к исходным данным, Р| - к данным контроля

введения деманола к 14 суткам достоверно ниже контрольной серии. В плазме на фоне введения глютаминовой кислоты и глицина сохраняется тенденция к повышению МДА к 14 суткам. Далее, к 30 суткам, глицин ограничивает рост МДА в плазме, сохраняя его уровень на достоверно более низких цифрах, чем при гиподинамии без коррекции, тогда как на фоне введения деманола и глютаминовой кислоты к 30 суткам наблюдалась тенденция к повышению МДА в плазме. В серии сравнения показатель достоверно возрастал. Таким образом, проведение фармакологической коррекции позволило обеспечить определенную адаптацию к длительному воздействию ограничения подвижности.

В опытных сериях отсутствует падение активности каталазы эритроцитов при ограничении подвижности до 14 суток. К 30 суткам отмечен достоверный рост показателя по сравнению с предыдущим сроком. Наиболее выраженная динамика отмечается в сериях с введением деманола и глицина. Аналогичную динамику деманол, глицин и глютаминовая кислота оказывают на активность каталазы в плазме к 14 суткам. К моменту окончания ограничения подвижности активность фермента не отличается от исходного уровня в сериях с глютаминовой кислотой и глицином. И достоверно повышается на фоне введения деманола в отличии от серии с введением вамина.

Повышение активности каталазы мы рассматриваем как благоприятный признак, свидетельствующий о новом этапе адаптации организма к гипоксии, и предотвращении истощения АОС.

Таким образом, в течение 30 суточной гиподинамии у кроликов, изменение активности ферментов АОС в плазме и в эритроцитах носят циклический характер. Изменения активности ферментов, согласуются с литературными данными (Бородин Е.А. с соавт., 1992). Принципиальной разницы динамики показателя в опытных сериях с коррекцией не выявлено.

При расширении двигательного режима во всех опытных сериях удалось предотвратить рост уровня вторичного продукта перекисного окисления лнпидов в плазме и эритроцитах, в отличии от препарата сравнения, где показатель на фоне тренировок достоверно возрастал. Рост МДА в эритроцитах при физической нагрузке в серии сравнения мог быть расценен как положительное явление, если бы сопровождался ростом активности каталазы. Однако, напртив, активность каталазы в этой группе снижается при расширении двигательного режима, как в эритроцитах, так и в плазме. Применение глицина, глютаминовой кислоты и деманола позволило предотвратить такую динамику показателя.

Динамика показателей липидкого обмена при длительном ограничении подвижности в эксперименте отражает энергетическую перестройку метаболических процессов, в связи с переключением субстратного энергообеспечения с углеводов на липиды (Потапов П.П., Тихомирова H.A., 1984, 1986; Потапов П.П., Федоров Н.В., 1988; Федоров Н.В., 1982; Рыльников Ю.П., 1984; Ганин Ю.Л., 1983; Смирнов К.В. и др., 1986). Это проявляется в достоверном росте содержания триглицеридов сыворотки крови до 159% (Р<0,001) к 30 суткам эксперимента.

Однако, на фоне метаболических изменений адаптационного характера прослеживается четкая тенденция к негативной динамике липидного обмена, проявляющаяся в виде достоверного снижения Хс ЛПВП до 58,4%, нарастания ß-ЛП, общего холестерина и, особенно значительно, ИА до 1241,00% (табл. 3., рис. 1.).

Сходные метаболические сдвиги характерны для ряда патологических состояний. Они наблюдаются при развитии сердечно-сосудистых заболеваний (Климов А.Н., 1997), в том числе ншемической болезни сердца (Плгвинсхая C.B. и др., 1997), внезапной коронарной смерти (Калннкин М.Н., 1996-1997; Бельчеико Д.И., 1996). В эксперименте они достаточно полно воспроизводятся не только при длительном ограничении

Таблица 3.

Влияние деманола, глицина, ппотаминовой кислоты и вамина на некоторые показатели липидного спектра плазмы крови при 30 суточной гиподинамии и последующем расширении двигательных режимов (М±ш, %).

Серии Общий холестерин ммоль/л а-холестерин ммоль/л Триглицериды ммоль/л Глюкоза ммоль/л

30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки

Контроль 3,64±0,12 Р<0,001 5,36±0,36 Р<0,001 0,6б±0,19 Р<0,05 1,45±0,2 Р>0,05 2,04±0,1 Р<0,001 3,14±0,4 Р<0,001 4,53±0,08 Р>0,05 5,28±1,1 Р<0,001

Вамии 2,3±0,07 Р,>0,001 3,4±0,34 Pi<0,05 1,3±0,14 Pi<0,05 1,1±0,1 Pi>0,05 3,0±0,09 Pi>0,001 3,7±0,5 Pi>0,0S 3,92±0,05 Pi<0,05 ■ 4,06±0,09 Р,>0,05

Деманол 0,93±0,101 Р,<0,001 2,99±0,11 Pi<0,001 0,805±0,086 Pi>0,05 2,37±0,115 Pi>0,05 2,68±0,379 Pi>0,05 1,662±0,1445 Р,<0,001 6.805±0,13 Р,<0,001 6,65±0,18 Pi <0,001

Глицин 2,11±0,11 Р,<0,001 2,0Е±0,14 Р,<0,001 1,59±0,45 Pi>0,05 1,56±0,087 Р|>0,05 1,29±0,136 Р,<0,001 0,96±0,139 Р,<0,001 5,44*0,179 Pi<0,001 6,18±0,30 Р,<0,001

Глютаминовая. кислота 1,19*0,15 Р,<0,001 2,27±0,21 Р,<0,001 0,93±0,135 Pi>0,05 1,62±0,212 Pi<0,05 2,148±0,53 Pi>0,05 1,238±0,025 Р,<0,001 6,31 ±0,18 Р, <0,001 6,28*0,24 Р,<0,001

Примечание: достоверность Р-рассчитана к исходным данным, Р] — к данным контроля

подвижности (Тявокин В.В., 1966-1992; Мосина Л.М., 1993; Инчина В.И., 1994; Зорькина A.B., 1994), а также на моделях: эмоционально-болевого стресса (Горнзонтова М.П., Миронова И.В., 1993; Козловский И.И. и др., 1996; Либе МЛ. и др., 1994), психосоциального стресса (Окунева Г.Н. и др., 1995).

Атерогенная направленность липидного спектра сыворотки крови является одним из ведущих факторов повреждения эндотелия сосудов (Diplock А.Т., 1993; Frei В., 1994; Ивлиева А.Я., 1997).

Изученные препараты позволили в определенной степени предотвратить негативную динамику липидного спектра сыворотки крови. В опытных группах, в отличии от контроля и серии сравнения отмечено снижение уровня общего холестерина, особенно выраженное на фоне введения деманола. Однако полностью предотвратить падение содержания ХсЛПВП, как это отмечалось на фоне вамина, удалось только в серии с ппотаминовой кислотой. При введении же деманола и глицина ХсЛПВП снижался на фоне опыта, хотя и менее значительно, чем в контроле.

Применение ппотаминовой кислоты позволило в наибольшей степени предотвратить рост и ß-ЛП. Таким образом, на состояние липидного обмена при длительном ограничении подвижности оказала большее влияние глютаминовая кислота {рис. 2.).

При физических нагрузках в контрольной серии содержание общего холестерина и ß-гшпопротеидов имеет тенденцию к дальнейшему повышению. Достоверно возрастает удержание триглицеридов и холестерина липопротеидов высокой плотности.

На фоне введения деманола и ппотаминовой кислоты содержание общего холестерина при тренировках увеличивается, однако, в достоверно меньшей степени, чем в контроле. Положительным моментом является достоверный рост абсолютного удержания холестерина липопротеидов высокой плотности по отношению к контролю в :ерии с ппотаминовой кислотой.

На фоне введения глицина не отмечено какой-либо динамики этих показателей, а гакже ß-липопротеидов при расширении двигательного режима. Уровень ß-липопротеияов j сериях с введением деманола и ппотаминовой кислоты не превышал исходных цифр: Содержание триглицеридов при смене двигательного режима снижалось во всех опытных :ериях.

Значительные нарушения при моделировании длительного ограничения юдвижности развиваются и в состоянии белкового обмена. Переключение 1нергетического обмена клеток на липолиз и глюконеогенез ведет к повреждению [легочных белковых структур, распаду высокоорганизованных белковых молекул, юрастают процессы катаболизма и снижается синтез белка (Hayass Kazutoshi et al., 1991; "рицюк А.И., 1993; Буголин Е.Г., Исакова Л.С., 1991;Grigoriev A.J., 1992; Khoury S., Chaled J, Sowers J., 1994). Это отмечено также Тявокиным B.B. (1975), Хасеновой Г.Л., 'ысбековой H.H. (1982). Катаболическая направленность процессов при длительном 1грзничении подвижности и связанное с ним падение содержание альбуминов и общего ¡елка препятствует адекватной адаптации к расширению двигательного режима (таб. 4.).

На фоне применения глютаминовой кислоты содержание альбуминов крови охранялось на исходном уровне, при введении деманола имело тенденцию к снижению. В ерии с глицином отмечалось достоверное снижение показателя, аналогично контрольной ерии, хотя содержание общего белка плазмы даже нарастало.

При последующей адаптации к физической нагрузке содержание общего белка крови ювышается, достигая исходного уровня на фоне глютаминовой кислоты. При введении лицина содержание общего белка на фоне тренировок достоверно выше контрольного ровня, как в серии сравнения. На фоне введения деманола при смене двигательных ежимов сохраняется тенденция к снижению показателя.

Индекс атерогенности

1400Ч-]

Контроль Вамии Деманол Глицин Глютаминовая

хислота

■ исходные данные

□ после 30 суток ограничения подвижности ц после реадаптации к физическим нагрузкам

Рис. 1. Динамика индекса атерогенности при смене двигательного режима (в % I исходному уровню).

* - достоверность различия рассчитана по отношению к данным контроля

р-лп

Контроль Ванин Дамачоп Гмпам Глотаимиом*

юклот*

Рис. 2 Динамика р-липопротеидов плазмы крови при длительном ограничени подвижности и последующей реадаптации к физическим нагрузкам (в % к исходном уровню).

Таблица 4.

Влияние деманола, глицина, глютаминовой кислоты и вамина на содержание общего белка, альбуминов, электролитов плазмы крови при смене двигательных режимов (М±ш, %).

Серии Общий белок, г/л Альбумины, г/л Калий плазмы ммоль/л Натрий плазмы ммоль/л

30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки 30 суток 3 недели тренировки

Контроль 69,37±1,3 Р>0,05 69,б±0,8 Р>0,05 33,2±1,4 Р<0,05 38,7±2,01 Р>0,05 3,44±0,12 Р<0,001 4,21±0,19 Р<0,001 102,9±1,12 Р<0,001 126,7±3,59 Р<0,05

Вамин 69,0±1,2 Pi<0,05 70,0±0,9 Р,<0,001 37,26±1,1 Pi<0,05 38,89*1,2 Pi>0,05 4,7±0,2 Pi<0,05 4,7±0,2 Р,<0,05 138,2±1,6 Р,>0,05 138,2±1,6 ■ Pi>0,05

Деманол 49,5±0,28 Р,<0,001 57±0,707 Р,<0,001 37,21±1,05 Р,>0,05 36,25±1,030 Pi>0,05 4,26±0,14 Pi<0,05 4,55±0,14 Р|>0,05 140,75±0,85 Р,<0,001 137,5±2,5 Pi<0,05

Глицин 65,0±2,44 Р,>0,05 59,5± 1,69 Р,<0,001 29,62±1,16 Pi>0,05 32,5±0,92 Pi>0,05 4,33±0,1 Р|<0,001 5,45±0,22 Р,<0,001 146,5±1,5 Р,Ф,001 141,33±1,22 Pi<0,05

Глютаминовая кислота 48,2±2,87 Р, <0,001 58,6± 1,28 Р, <0,001 35,54±0,76 Pi>0,05 34,54±1,02 Pi>0,05 4,2±0,1 Р,<0,001 3,68±0,23 Pi>0,05 142,5±2,5 Pi<0,001 138,4±0, 4 Pi<0,05

Примечание: достоверность Р - рассчитана к исходным данным, Р| - к данным контроля

Oki J .С. et al. (1989) также отмечено защитное действие аминокислот с разветвленной цепью у больных с хирургическим стрессом и сепсисом.Огмечено усиление синтеза белков под их влиянием в мышцах и печени, уменьшение интенсивности распада белков.

Гиподинамия ведет к существенному увеличению уровня глюкозы в крови экспериментальных животных к 30 суткам, по сравнению с исходными данными. Повышение содержания глюкозы при различных сроках ограничения подвижности в эксперименте были выявлены Лобановым С.П. (1984), Рыльниховым Ю.П. (1984), Ивановой С.М. с соавт. (1982),

Аналогичный рост уровня глюкозы в крови экспериментальных животных и повышение резистентности тканей к инсулину, возможно вследствие изменения количества и качества инсулиновых рецепторов, обнаружено при космических полетах (Смирнов К.В. с соавт., 1991; Загорская Е.А. с соавт., 1992). Cohen A.M., Maron L. (1993) и Зайнамов А.Ф. (1997) видят причину изменения толерантности к глюкозе в развивающейся гипертриглицеридемии и гипо а-холестеринемии.

Введение коррегирующих препаратов деманола, глицина, глютаминовой кислоты, в отличии от серии сравнения, полностью предотвращало рост глюкозы при смене двигательных режимов.

Печень занимает центральное место в обмене аминокислот в связи с тем, что здесь интенсивно протекают проце&Ы трансаминирования, дезаминирования и непрямого дезаминирования при участии системы а-кетоглутаровой - глютаминовой кислоты.

Одним из звеньев патогенеза метаболического дисгомеостаза, воспроизводимого на данной модели, является развитие цитолитического синдрома, что подтверждается достоверным ростом активности аланиновой (с 0,65±0,03 до 1,11±0,1 ммоль/л, Р<0,001) и аспарагиновой (с 0,18±0,003 до 0,82±0,05 ммоль/л, Р<0,001) трансаминаз при расширении двигательного режима.

На фоне деманола и глицина активность АЛТ оставалась на исходных цифрах, на фоне глютаминовой кислоты степень роста показателя была ниже контроля.

Уровень ACT не возрастает, в отличии от серии сравнения, где наблюдался достоверный рост данного показателя при ограничении подвижности.

Соцким О.П. с соавт. (1998) также выявлено, что применение ГАМК-миметиков (ГАМК, пирацетам) в условиях гипокинезии позволяет снижать активность трансаминаз во все сроки эксперимента за счет улучшения кровообращения и стабилизации фосфолипидного состава мембран гепатоцитов, а также нормализации энергообмена на фоне стимулируемой активности Mg+ и 2,4 ДНФ - АТФаз митохондрий.

Ограничение подвижности в течение 30 суток сопровождается электролитным дисбалансом, проявляющимся гипокалиемией (снижение с 4,41±0,14 до 3,44±0,12 ммоль/л, Р<0,001), гипонатриемией (со 137,8±1,6 до 102,9±1,1 ммоль/л, Р<0,001), гиперкальциемией (с 3,54±0,08 до 4,72±0,52 ммоль/л, Р<0,05), что соответсвует данным (Grigoriev A J., 1992). Подобные сдвиги содержания электролитов могут способствовать развитию деструктивных изменений кардиомиоцитов (Швалев В.Н. с соавт., 1992), которые могут приводить к нарушению биоэлектрической стабильности миокарда, нарушениям ритма и т.п. (Швец с соавт., 1994).

Концентрация калия в плазме зависит от общего содержания калия в организме, внутреннего калиевого гомеостаза, функции почек и в определенной степени от функции кишечника. Клетки теряют калий при недостаточности минералкортикоидов, а также при отсутствии глюкозы в клетке, что может наблюдаться в данном случае из-за повышения резистентности тканей к инсулину.

Введение деманола, глютаминовой кислоты полностью предупреждает развитие гипокалиемии, гипонатриемии, гиперкалышемии. Однако, в серии с

калий

Змвдипи тржрта*

Рис. 3. Содержание ионов калия плазмы при дл!гтельном ограничении подвижности и последующей реадаптации к физической нагрузке (в % к исходному уровню).

глицином содержание ионов кал!и на фоне физических нагрузок достоверно возрастало (с 4,33±0,1 ммоль/л на фоне ограничения подвижности до 5,45±0,22 ммоль/л при физической реадаптации, Р<0,05) (рис. 3.).

Такая динамика показателя при расширении двигательного режима может бьггь связана со снижением содержания АТФ на фоне метаболического ацидоза (Бышевский А..Ш., Терсенов O.A., 1994).

Фармакологическая коррекция процессов адаптации к физической нагрузке является эдним из методов профилактики повреждающего действия этой нагрузки на организм тосле длительного ограничения подвижности.

После длительной гиподинамии значительно затрудняется течение адаптационных 1роцессов при последующей смене двигательного режима. Сама гиподинамия ведет к физическим и эмоциональным нагрузкам, тем самьм ухудшая приспособительные )еакции организма и сердце не сможет справиться с высокими потребностями. Тронсходит мобилизация функциональной системы, ответственной за адаптацию (Меерсо Р.З., Пшенникова М.Г., 1988).

Даже длительная постепенная адаптация к физической нагрузке оказывает ювреждающее действие на организм. Это проявляется в дальнейшей негативной динамике ¡иоэлектрнческой активности миокарда (Зорькина A.B., 1997).

Переход от гиподинамии к интенсивным мышечным нагрузкам ведет к нарушению )ункцин эндокринной системы (Winden W. et al., 1979); а также функции сердечно-осудистон системы (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г., 1988). Следовательно, снижается олерантность к физической нагрузке и возникает рассогласование действия сердца и осудов (Рыжеиков В.Н. н др., 1995).

При интенсивных нагрузках происходи активация адренергнческой системы, и положительные эффекты катехоламинов превращаются в повреждающие, отрицательные (Меерсон Ф.З. с соавт., !983; Jenkins R. et ab, 1983).

На модели длительного ограничения подвижности нами получены экспериментальные данные, подтверждающие то, что переход от гиподинамии к мышечным тренировкам ведет к деструктивным изменениям в организме, что проявляется в повышении холестерин», ЛПНП, триглицеридов, глюкозы крови и в снижении активности антиоксидантной системы. Данные результаты подтверждены ранними исследованиями (Тявокиным В.В., 1966-1992; Тиграняном P.A., 1981; Моргуновым Б.В., Ушаковым A.C., 1989; Найдиной В.П. с соавт.,1991; Мосиной Л.М., 1993; Инчиной В.И., 1994; Rosenman Ray Н., 1992; Haller Н., 1993; Sundell J. et al„ 1989). Все это говорит о том, что расширение двигательного режима охазывает не тренирующее, а повреждающее действие. Об отсутствии адаптации к физической нагрузке у людей, перенесших длительное ограничение подвижности описывается многими авторами (Крупинина Т.Н. с соавт., 1981; Безулина В.П., 1984; Скардс ЯЗ., 1985; Цирульников A.A., 1988; Зубарев М.А., 1990). И, поэтому, в условиях гиподинамии необходимо предупредить возникновение паталогических нарушений. Переход к активному двигательному режиму должен проходить через внедрение превентивной терапии доя получения оптимальных эффектов.

Таким образом, использование глютаминовой кислоты, глицина и деманола -препаратов, оптимизирующих регуляторкую функцию ЦНС, может быть одним из реальных путей повышения адаптационных способностей организма при смене двигательных режимов.

ВЫВОДЫ.

1. Деманол, глицин и глютаминовая кислота оказывают оптимизирующее влияние на процессы адаптации при смене двигательных режимов, проявляющееся в снижении степени метаболического дисгомеостаза.

2. Деманол, глицин и глютаминовая кйслота в отличие от препарата сравнения ваыина предупреждают развитие гипокалиемии, гипонатриемии, гиперкальциемии, рост общего холестерина, ß- липопротеидов в плазме крови и индекса атерогенности при 30 суточном отраничении подвижности.

3. Под влиянием деманола и глютаминовой кислоты не предотвращается снижение содержания общего белка в плазме крови при гиподинамии. В серии с использованием глютаминовой кислоты не снижается содержание альбуминов, а глицин не влияет на динамику данного показателя

4. На фоне введения деманола и глютаминовой кислоты не увеличивается содержание глюкозы и ß- липопротеидов, ограничивается рост общего холестерина, обеспечивается увеличение содержания холестерина липопротеидов высокой плотности и снижение триглицеридов при долговременной адаптации к физическим нагрузкам. Б серии с введением глицина при расширении двигательного режима содержание общегс холестерина, холестерина липопротеидов высокой плотности и ß- липопротеидов не меняется.

5. Деманол и глицин препятствуют развитию цитолитического синдрома глютаминовая кислота ограничивает рост активности АЛТ и предупреждает повышени« ACT при физической реадаптации.

6. При расширении двигательного режима деманол, глицин и глютаминова! кислота, в отличие от препарата сравнения вамина предотвращают рост содержани; малокового диальдегида и снижение активности каталазы в плазме крови и эритроцитах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Целесообразно изучение глютаминовой кислоты, глицина и деманола в зофнлактике метаболических нарушений пр смене двигательных режимов в клинике.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Зорькина A.B., Кудашкин С.С., Гераськина М.А., Дубовская Т.Н., одсеваткин В.Г., Госткина И.П. Фармакологическое действие димефосфона при )олонгированном иммобилизационном стрессе. II П1 Российский национальный конгресс кловек и лекарство": Тез. докл. нац. конгр. 16-20 апреля 1996. - г. Москва, 1996. - С. ;б.

2. Сернов Л.Н., Родькина Ю.Г., Ширшикова О.В., Ведяшкина И.А., Госткина П., Скоробогатова Л.Н., Напалкова С.М. Коррекция процессов перекисного окисления шндов при длительном ограничении подвижности. И IV Российский национальный нгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. нац. конгр. 8-12 апреля 1997. - г. Москва, 1997. Z 292.

3. Зорькина A.B., Сернов Л.Н., Гараев P.C., Родькииа Ю.Г., Ширшикова О.В., •дяшкина И.А., Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П. Профилактика нарушений липидного мена при длительном иммобилизационном стрессе. // IV Российский национальный нгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. нац. конгр. 8-12 апреля 1997. - г. Москва, 1997.

50.

4. Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П., Балясова Н.М. Исследование тиаритмической активности глицина и глютаминовой кислоты. // Тез. докладов первой нференции молодых ученых Мордовского университета 19-23 апреля 1996. - Саранск: эрдовский университет. -1996. - С. 101.

5. Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П., Напалкова С.М. Влияние глютаминовой слоты на некоторые метаболические изменения при иммобилизационном стрессе. // Тез. кладов первой конференции молодых ученых Мордовского университета 19-23 апреля 96. - Саранск: Мордовский университет,- 1996. - С. 144.

6. Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П. Влияние деманола на липидный обмен и гиподинамии. // Тез. докладов второй конференции молодых ученых Мордовского иверситета. - апрель 1997. - Саранск: Мордовский университет. - 1997. - С. 103.

7. Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П. Динамика биоэлектрической активности окарда в условиях длительного ограничен!« подвижности. // Тез. докладов III зференции молодых ученых Мордовского университета 22-24 апреля 1998. - Саранск: >рдовский университет. - 1998. - С. 195.

8. Скоробогатова Л.Н., Госткина И.П. Влияние деманола, глицина н отаминовой кислоты на динамику биоэлектрической нестабильности миокарда в :перименте. // Тез. докладов 1-ой Всероссийской национальной ассамблеи кардиологов, рель. - 1998. - Саратов, Россия. - С. 88.

Подписано в печать 15.10.98 г. Объем 1,0 п. л.

Тираж 100 экз. Заказ № 630.

Типография Издательства Мордовского университета 430000, Саранск, ул. Советская, 24.