Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Влияние большого ядра шва мозга на обмен коллагена при иммобилизационном стрессе и центральных нейрохимических воздействиях

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РФ

КАЗАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

Р Г О 0/1 имени С.В.Курашова

| На правах рукописи

ЕЛИСЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ВЛИЯНИЕ БОЛЬШОГО ЯДРА ШВА МОЗГА НА ОБМЕН КОЛЛАГЕНА ПРИ ИММОБИЛИЗАЦИОННОМ СТРЕССЕ И ЦЕНТРАЛЬНЫХ НЕЙРОХИМИЧЕСКИХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ

14.00.17 - нормальная физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Казань, 1995

Работа выполнена в Ижевском ордена Дружбы народов госуда{ ственном медицинском институте.

Научный руководитель - заслуженный деятель науки РФ и УР,

член-корр. АТН РФ, доктор медицински; наук, профессор Г. Е. Данилов.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Е. М. Волков

доктор медицинских наук, профессор Е. Г. Бутолин

Ведущее учреждение - Научно-исследовательский институт

нормальной физиологии им. П. К. Анохина РАМН г. Москва

¿ег?

Защита состоится . .... 1995 года в . ." час

на заседании диссертационного Совета Д 084.29.03 Казанского госудг ственного медицинского университета им. С. В. Курашова (420012, Казань, ул. Бутлерова, д. 49).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке инс-гута (ул. Бутлерова, д. 496).

Автореферат разослан .. .....гт.1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук,

профессор Р. X. Хафизьян

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Экспериментальные исследования механизмов формирования эмоций и эмоционального стресса показывают, что в инициации этих состояний существенная роль принадлежит лимбико-ретикулярньгм структурам мозга. Кратковременный эмоциональный стресс, как правило, сопровождается мобилизацией энергетических ресурсов организма и имеет системный характер, направленный на обеспечение адаптационно-приспособительных функций организма. При длительном эмоциональном стрессе возникает целый комплекс сомато-вегетативных нарушений, с последующим развитием многих патологических процессов, что является свидетельством "истощения" адаптивных возможностей организма (П. К. Анохин, 1S65; К. В. Судаков, 1981; Ф. 3. Меерсон, М. Г. Пшенникова, 1989).

Для экспериментального моделирования нейрогенного (эмоционального) стресса используются разные приемы, в том числе иммобилизация, воздействия на негативные эмоциогенные структуры мозга (А. В. Вальдман и др., 1976; К. В. Судаков, 1976; Ф. П. Ведяев, Т. М. Воробьева, 1903 и др.). Введение веществ нейромедиаторной, гормональной и нейропептидной природы в желудочки или негативные эмоциогенные структуры мозга (В. И. Бадиков, 1983; Л. С. Исакова, 1991) сопровождается либо такими же изменениями как и стрессовая реакция, либо способно ослаблять проявление последней.

Одним из адаптивных механизмов, повышающих устойчивость организма к стрессогенным воздействиям, является активация стресс-лимитирующих структур мозга, усиление синтеза и освобождения веществ нейромедиаторной и нейропептидной природы, обладающих стресс-протекторным действием.

Коллаген, в отличие от эндокринного и сердечно-сосудистого компонентов системной стрессовой реакции, относится к стабильным константам организма. Однако, длительный нейрогенный стресс сопровождается существенными изменениями скорости метаболизма биополимеров соединительной ткани (Е. Г. Буголин, 1983, 1993; А. Д. Ибатов, 1987; Л. А. Сорокина, 1988). Ядра шва мозга, наряду с онтиноцицептивным (Л. В. Калюжный, Е. В. Голанов, 1980), по-видимому, способны оказывать и стресс-лимитирующее влияние, но роль этой структуры мозга на уровень метаболизма коллагена при стрессе не изучена.

Цели и задачи исследования. Целью исследований явилось изучение роли большого ядра шва мозга в изменении уровня обмена некоторых фракций коллагена, обусловленных иммобилизационным

стрессом и центральными нейрохимическими воздействиями. Исходя из цели исследования были поставлены следующие оснооные задачи:

1. Изучить обмен коллагена в крови, аорте, миокарде, скелетной мышце и печени при иммобилизационном стрессе, продолжительной многократной элетростимуляции большого ядра шва мозга и их сочетании.

2. Изучить роль церебральных нейрохимических стресс-активирую-щих и стресс-лимитирующих влияний на обмен коллагена в крови и тканях.

3. Выяснить влияние электропунктурных воздействий на обмен коллагена при стрессе и внутрижелудочковом введении веществ медиаторной и пептидной природы.

Научная новизна. В работе впервые показано, что многократная электростимуляция большого ядра шва существенно ослабляет или полностью блокирует изменения обмена коллагена, обусловленные иммобилизационным стрессом, внутрижелудочковым введением моноаминов, ацетилхолина и ангиотензина-И.

Впервые получены данные об однонаправленном (нормализующем или ослабляющем) влиянии многократной электростимуляции большого ядра шва и нейропептидов - субстанции Р и лей-энкефалина на уровень обмена коллагена, измененный под влиянием стресса и нейрохимических веществ.

Впервые установлено (по отношению к соединительной ткани) нормализующее (стресс-лимитирующее) влияние электропунктурных воздействий.

Высказано предположение, что стресс-лимитирующее влияние электростимуляции большого ядра шва и электрспунктуры может быть обусловлено за счет активации эндогенных иейропептидных (в частности, субстанции Р и опиоидных пептидов) факторов. Об этом свидетельствует однонаправленное (ослабляющее или блокирующее) влияние этих воздействий на обмен фракций коллагена.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты проведенных экспериментальных исследований представляют прежде всего теоретический интерес, так как они свидетельствуют об единых (или общих) механизмах электростимуляции большого ядра шва и элекгропунктуры, которые обладают способностью существенно уменьшить эффект стрессо-вого воздействия на обмен коллагена в крови и тканях. В связи с тем, что исследованные нейропептиды (субстанция Р и лей-энкефалин) также оказывают нормализующее (или ослабляющее) влияние на стресс-реакцию, т. е. эффекты этих воздействий имеют однонаправленный характер, то можно предположить, что стимуляция большого ядра шва и электропунктура запускают стресс-лимитирующие, з частности нейропептидные механизмы.

С учетом того, что пунктурные воздействия существенно ослабляют стрессовые изменения уровня обмена коллагена - достаточно стабильного гсшеостатического показателя, то эти данные могут быть использованы 2> клинике с целью уменьшения метаболических нарушений при стрессовых м/«и невротических состояниях.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Иммобилизационный стресс сопровождается изменением уровня метаболизма коллагена в крови, аорте, миокарде, скелетной мышце и печени.

2. Многократная электростимуляция большого ядра шва мозга не оказывает существенного влияния на уровень обмена коллагена. Сочетание электростимуляции большого ядра шва, внутрижелудочкового введения субстанции - Р, лей-энкефалина и электроакупунктуры с им\юбилизационным стрессом и центральными нейрохимическими воздействиями ослабляет или полностью блокирует эффект последних.

Апробация работы. Результаты работы доложены на: научной конференции молодых ученых и студентов (1991), научно-технической конф. «Ученые Ижевского механического института - производству (1992), научно-практ. конф., посвященной 60-летию Ижевского мединститута (1993), заседании Удмуртского отделения физиологического общества (1995), межкафедральном заседании физиологов, патофизиологов, фармакологов, биохимиков Ижевского медицинского института (1995).

Реализации результатов исследования. По материалам диссертации опубликовано 7 работ. Данные об обмене коллагена при иммобилизационном стрессе и стресс-протекторном действии ядер шва ■мозга и нейропептидов включены в лекционные курсы для студентов на кафедрах нормальной физиологии и биохимии Ижевского медицинского института.

Структура и объем диссертации. Диссертация объемом 126 страниц машинописи состоит из введения, обзора литературы, главы -материал и методы исследования, 5 глав собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 12 таблицами и 25 рисунками. Список литературы содержит 251 источник (147 отечественных и 104 зарубежных авторов).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Хронические опыты проведены на 204 взрослых белых крысах массой 200 гр. Иммобилизационный стресс у крыс вызывали путем помещения ■их в тесные "пеналы" по 8 часов в сутки в течение 10 дней. По стереотаксическим координатам атласа мозга (Я. Буреш и др., 1962) под местной новокаинсвой анестезией и общим комбинированным наркозом (зфир+гексенал) крысам через точечные трепанационные отверстия в большое ядро шва (АР=+8,5; \/=9,3; 5=0) имплантировали биполярные нихромовые электроды с поперечным сечением 0,2 мм, межэлектродным расстоянием 0,4-0,5 мм и канюли, изготовленные из инъекционных игл, в боковой желудочек мозга (АР=+1; \/=3,2; 3=1,5), фиксировали их на костях черепа норакрилом. В опыт животных брали на третий день после операции.

Электрическую стимуляцию большого ядра шва (БЯШ) проводили импульсным током прямоугольной формы (1,5-2 В, 70 Гц, 0,5 мсек) продолжительностью 1 час через день в течение 10 дней от лабораторного стимулятора ЭСЛ-2.

Для изучения роли хемореактивных структур мозга в изменении обмена коллагена проведены опыты с введением в боковой желудочек мозга адреналина (20 мкг), серотонина (10 мкг), ацетилхолина (20 мкг), лей-энкефалина (150 нг), ангиотензина-П (150 нг), субстанции Р (100 нг), растворенных в 5 мкл изотонического раствора NaCI. Эти вещества вводили через канюли с помощью микроинъектора-хемитрода через день в течение 10 дней. Субстанцию Р в дозе 25 мкг в 1 мл вводили также внутрибрюшинно.

Исследовано изменение обмена коллагена при сочетании иммоби-лизационного стресса со стимуляцией БЯШ и с введением в боковой желудочек мозга веществ медиаторной и пептидной природы и с злектропунктурными воздействиями. Электростимуляция БЯШ или электроакупунктура также сочетались с внутрижелудочковым введением некоторых из вышеперечисленных веществ. Эти серии опытов были проведены с целью выяснения взаимного (или потенциирующего или угнетающего) влияния на уровень обмена коллагена.

Аурикулярную элекгроакупунктуру проводили с помощью прибора для электролазеропунктуры по 15 мин. через день в течение 10 дней.

Состояние обмена коллагена изучали по следующим показателям:

1) содержание свободного и пептидносвязанного гидроксипролина в сыворотке крови;

2) содержание свободного гидроксипролина и суммарного коллагена в аорте, миокарде, скелетной мышце и печени.

Кровь для биохимического анализа брали на 10-й день эксперимента из сонной артерии.

В сыворотке крови определяли свободный и пептидносвязанный г идроксипролин по метсду П. Н. Шараева (1981) и выражали в мкмолях на 1 л сыворотки крови. В тканях аорты, миокарда, скелетной мышцы и печени исследовали содержание коллагена путем предварительного экстрагирования его из гомогенатов тканей и последующим определением в экстрактах суммарного коллагена и свободного гидроксипролинапо методу П. Н. Шараева и соавт. (1976) и Т. В. Замараевой (1977). Содержание коллагена выражали в ммоль оксилролина на 1 кг сухой обезжиренной ткани (ммоль/кг ткани).

В ходе продолжительных многократных воздействий на большие ядра шва визуально наблюдали за вегетативными, соматическими и поведенческими реакциями экспериментальных животных.

Полученные в опытах результаты биохимического исследования сравнивали с контролем. В качестве контроля были использованы результаты исследований, проведенных на интактных животных, животных с введением физиологического раствора и имплантированными электродами в большое ядро шва.

Для определения точности локализации электродов и канюль применяли гистологический контроль.

Результаты исследований обрабатывали статистически с использованием персонального ЭВМ - ДВК-2. Достоверность различий оценивали по критерию (t) Стъюдента Р<0,05 (Л. С. Каминский, 1967; А. И. Венчиков, В. А. Венчиков, 1974).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Иммобилизационный стресс приводил к уменьшению содержания свободного гидроксипролина в крови с 7,481 ±1,376 до 3,932±0,524 мкмоль/л (Р<0,05), к увеличению его в аорте с 1,4352:0,391 до 4,191 ±0,876 ммоль/кг (Р<0,02), в печени с 1,407+0,351 до 4,307±0,804 (Р<0,01) ммоль/ кг ткани и пептидносвязанного гидроксипролина в крови с 6,494±0,772 до 10,1±0,284 мкмоль/л (Р<0,001). Содержание свободного гидроксипролина в скелетной мышце и миокарде не изменялось. Уровень суммарного коллагена не изменялся в аорте, но уменьшался в скелетной мышце со 116,402±28,389 до 41,325 ±4,8С6 (Р<0,02), Миокарде - со 137,962±21,525 до 57,126+5,024 (Р<0,01) и печени - со 116,023+39,786 до 30,582+4,109 (Р<0,05) ммоль/кг ткани.

Электростимуляция БЯШ приводила к изменению уровня обмена коллагена только в миокарде, где количество свободного гидроксипролина возрастало на 159% (Р<0,05). Наблюдался также прирост пептидносвязанного гидроксипролина на 73,5%.

При сочетании электростимуляции БЯШ с иммобилизационным стрессом не наблюдались изменения, характерные для стресса. Содержание же свободного гидроксипролина в миокарде становилось даже ниже, чем в контроле (Р<0,05), а суммарный коллаген в аорте увеличивался как по сравнению с фоном, так и стрессом.

-Внутрижелудочковое введение адреналина сопровождалось уменьшением содержания свободного гидроксипролина в крови на 83,4% (с 7,481 ±1,376 до 1,242±0,245 мкмоль/л, Р<0,01) и резким увеличением его в аорте (на 581% с 1,435+0,391 до 9,777±2,644, Р<0,02) и скелетной мышце - ка 32,8%. Достоверных изменений уровня свободного гидроксипролина в миокарде и печени, а также пептидносвязанного гидроксипролина в крови при этом не наблюдалось.

Содержание суммарного коллагена при введении адреналина возрастало в гомогенате грудного отдела аорты (на 148%), уменьшалось в миокарде - на 54%, в мышце - на 52% и печени - на 58%.

При сочетании иммобилизационного стресса и введения адреналина в боковой желудочек мозга имело место уменьшение свободного гидроксипролина в крови по сравнению с контролем на 73% (с 7,481 ±1,376 до 2,037±0,176 мкмоль/л, Р<0,01) и на 64% по отношению к стрессу, т. е. эффект сочетанного воздействия проявлялся в большей степени не только в сравнении с фоном, но и с изолированным применением стресса.

Несколько иные изменения содержания свободного гидроксипролина наблюдались в печени. Ни введение адреналина, ни сочетание его со стрессом не приводили к достоверным изменениям, в то время как стресс сопровождался увеличением свободного гидроксипролина в 4 с лишним . раза по сравнению с сочетанным воздействием. Такая же направленность была в изменении количества пептидносвязанного гидроксипролина, который не изменялся при введении адреналина и сочетании его со стрессом, но увеличивался при стрессе (до 10,1 ±0,248 мкмоль/л) по сравнению с введением адреналина на 56% и на 112% - с сочетанными воздействиями.

Содержание суммарного коллагена при сочетании введения адреналина со стрессом изменялось в основном также,как и при изолированном применении стресса. При этом имело место уменьшение его в мышце на 62%, миокарде - на 68% в сравнении с контролем, по сравнению с введением адреналина и со стрессом достоверных изменений не наблюдалось. Изменения количества суммарного коллагена в печени были в тех же пределах, как и при введении адреналина , но больше чем при изолированном применении стресса на 159% (с 30,582±4,109 до 79,265±18,706 ммоль/кг ткани, Р<0,05).

В серии экспериментов с сочетанием внутрижелудочкового введения адреналина и многократной электростимуляции БЯШ было установлено значительное ослабление эффекта адреналина. Если введение адреналина приводило к достоверным изменениям (по сравнению с фоном) содержания свободного гидроксипролина в крови, аорте и мышце и суммарного коллагена в аорте и миокарде, то при сочетанных воздейс*! аиях эти изменения не проявлялись. Лишь содержание суммарного коллагена в миокарде было меньше по сравнению с контролем и уменьшался уровень пептидносвязанного гидроксипролина в крови.

Внутрижелудочковое введение серотонина приводило к увеличении содержания в крови свободного гидроксипролина с 7,481±1,376 до 12,560±1,159 мкмоль/л (Р<0,02) и пептидносвязанного гидроксипролина с 6,494+0,772 до 11,156±1,076 мкмоль/л (Р<0,01), Наблюдался также прирост свободного гидроксипролина в аорте (с 1,435±0,391 до 3,245±0,422 ммоль/кг, Р<0,01), миокарде (с 0,974+0,072 до 1,879±0,063 ммоль/кг, Р<0,001). печени (с 1,407±0,351 до 4,227+0,612 ммоль/кг, Р<0,01), а в скелетной мышце его уровень не изменялся. Содержание суммарного коллагена при введении серотонина в гомогенатах тканей аорты и печени не изменялось, уменьшалось в скелетной мышце на 56%, в миокарде - на 51%.

При сочетании электростимуляции БЯШ с введением серотонина происходило восстановление этих показателей до уровня контроля, лишь в печени количество свободного гидроксипролина оставалось выше фона на 146% и суммарного коллагена в аорте - на 54%.

Внутрижелудочковое введение ацетилхолина вызывало увеличение содержания свободного гидроксипролина в крови с 7,481 ±1,376 до 15,323±0,960, Р<0,001 (на 105%), в скелетной мышце - на 134%, в миокарде - на 91% ив печени - на 136%, в гомогенате ткани аорты достоверных изменений не наблюдалось. При этом имело место снижение количества пептидносвязанного гидроксипролина на 35% (с 6,494±0,772 до 4,241+0,641 мкмоль/л, Р<0,05).

Уровень суммарного коллагена при введении ацетилхолина не претерпевал достоверных изменений в гомогенатах тканей аорты, скелетной мышцы и печени, а в миокарде наблюдалось снижение на 51%.

При сочетании электростимуляции БЯШ с введением ацетилхолина эффект был существенно снижен по сравнению с введением ацетилхолина, но восстановления до исходного уровня не происходило. Так, сочетанное аоздействие сопровождалось меньшим изменением (по сравнению с ацетилхолином) содержания свободного б

гидроксипролина в крови на 26%, в скелетной мышце - на 28%, в миокарде - на 33%, в печени - достоверного снижения не наступало. Содержание пептидносвязанного гидроксипролина при сочетанных воздействиях достоверно повышалось с 4,241 ±0,641 при введении ацетилхолина до 8,213+0,574 мкмоль/л (Р<0,001) - при сочетанном воздействии, т. е. на 94%. По сравнению с контролем увеличивался суммарный коллаген в аорте на 51%.

Внутрибрюшинное введение субстанции Р сопровождалось уменьшением содержания свободного гидроксипролина в крови с 7,481 ±1,376 ДО 3,056±0,846 мкмоль/л (Р<0,05), увеличением его уровня в аорте и печени соответственно на 149% и 123%. Суммарный коллаген уменьшался лишь в миокарде со 137,962±21,5 до 66,086±20,155 ммоль/ кг ткани (Р<0,05), а в остальных тканях достоверного изменения его количества не наблюдалось.

Сочетание внутрибрюшинного введения субстанции Р с иммобили-зационным стрессом приводило к увеличению уровня свободного гидроксипролина с 7,481±1,376 до 10,887±0,135 мкмоль/л (Р<0,0§). Хотя как введение субстанции Р, так и стресс при раздельном их применении уменьшали уровень свободного гидроксипролина в крови. .Этот прирост сочетанного воздействия был больше исходного уровня на 46 и на 177% по сравнению с изолированным действием стресса. Подобные же изменения имели место в печени, а в аорте происходила нормализация уровня свободного гидроксипролина.

Содержание суммарного коллагена в аорте при сочетанных воздействиях уменьшалось как по сравнению с контролем (на 42%), так и со стрессом (на 52%), происходила нормализация его в скелетной мышце И возрастание в печени по сравнению со стрессом на 139%, т. е. в печени также имело место восстановление этого показателя до нормы.

Введение субстанции Р в боковой желудочек мозга приводило к увеличению содержания свободного гидроксипролина в аорте более чем в 7 раз (с 1,435±0,391 до 12,33*1,205. Р<0,001) и в печени - на 210%. Происходило также увеличение уровня пептидносвязанного гидроксипролина с 6,494±0,772 до 11,422±0,913 мкмоль/л (Р<0,01). В крови, скелетной мышце и миокарде изменения не наблюдались. Уровень суммарного коллагена при введении субстанции Р возрастал в аорте на 273%, а в остальных тканях достоверных изменений не было.

Следует отметить, что как стресс, так и введение субстанции Р, применяемые раздельно, сопровождались однонаправленными изменениями. В то же время сочетанное их применение вызывало совершенно иные изменения. Так, свободный гмдроксипролин возрастал в крови по сравнению со стрессом и введением субстанции Р соответственно на 111 и 80%, а в печени достигал до контрольных величин и был меньше по сравнению со стрессом и с введением субстанции Р на 69%; в аорте - достигал до уровня фона; происходила также нормализация содержания пептидносвязанного гидроксипролина.

Содержание суммарного коллагена в аорте становилось ниже чем при введении субстанции Р (на 45%), но выше по сравнению со стрессом (на 68%). Достоверных изменений количества суммарного коллагена в скелетной мышце и печени по сравнению с фоном не

Наблюдалось. Однако происходило повышение его по сравнению со стрессом на 46% в печени и на 24% - в скелетной мышце.

Таким образом, сочетанное применение стресса и введения Субстанции Р либо нивелирует стрессовый эффект, либо изменения Приобретают противоположный характер по сравнению с изолированным применением этих воздействий, которые сопровождались при раздельном применении однонаправленными изменениями.

Внутрижелудочковое введение ангиотензина-Н сопровождалось увеличением содержания свободного гидроксипролина в крови и тканях аорты, миокарда и печени. Так, содержание его возрастало в крови на 68% (с 7,481 ±1,376 до 12,561±1,425 мкмоль/л, Р<0,05), в аорте - на 127% (с 1,435±0,391 до 3,256±0,349, Р<0,01), в миокарде - на 99% (с 0,974+0,072 до 1,934±0,068, Р<0,001), в печени - на 162% (с 1,407+0,351 до 3,691 ±0,256, Р<0,001), в скелетной мышце изменений не было. Увеличивалось при введении ангиотензина-М также количество пептидносвязанного гидроксипролина на 49%.

Уровень суммарного коллагена возрастал в аорте на 51% и уменьшался в миокарде на 61%, достоверных изменений в скелетной мышце и печени не происходило.

В опытах с сочетанным воздействием (введение ангиотензина-П и стресс) имело место дальнейшее нарастание количества свободного гидроксипролина по сравнению с изолированным применением ангиотензина. Так, уровень его стал выше в аорте на 52%, в миокарде

- на 47%, в скелетной мышце - на 30%, в крови и печени не наблюдалось достоверных изменений.

В опытах с сочетанием введения ангиотензина-И и электростимуляции БЯШ было обнаружено значительное ослабление эффекта ангиотензина-П. Так, содержание свободного гидроксипролина по сравнению с отдельным - применением ангиотензина снизилось в крови на 19%, в миокарде - на 56%, в печени - на 56%, в скелетной мышце

- на 37%; лишь в аорте не было достоверных изменений. Имело место также снижение пептидносвязанного гидроксипролина и увеличение суммарного коллагена в скелетной мышце с 58,146±5,124 до 78,943±6,324 (Р<0,05), в миокарде с 54,348±4,481 до 114,781 ±6,564 (Р<0,001) и в печени с 38,258±5,901 до 74,689+9,423 (Р<0,01) ммоль/кг ткани. В гомогенате ткани аорты не наблюдалось достоверных изменений.

Внутрижелудочковое введение лей-энкефалина не приводило к достоверным изменениям содержания коллагена как в крови, так и в исследованных тканях. Однако при сочетании иммобилизационного стресса с введением лей-энкефалина наблюдалось существенное ослабление стрессового воздействия, либо эффект последнего не проявлялся. Так, эффект стрессового воздействия был слабее выражен в изменении содержания свободного гидроксипролина в крови на 92%, в аорте - на 53%, в печени - на 62%. В скелетной мышце и миокарде стресс не вызывал достоверных изменений по сравнению с контролем и сочетание его с введением лей-энкефалина также не сопровождалось достоверными изменениями. Повышенный уровень пептидносвязанного гидроксипролина, обусловленный стрессом, при сочетании последнего с введением лей-энкефалина нормализовался.

о

Таким образом, внутрижелудочковое введение лей-энкефал.ина не изменяет уровень обмена коллагена, но существенно ослаблйэт или полностью блокирует эффект стрессового воздействия.

Электропунктурные воздействия (ЭАП) не изменяли содержание фракций коллагена как в крови, так и в тканях. Сочетание ЭАП с иммобилизационным стрессом сопровождалось полной блокадой стрессовой реакции. Так, содержание свободного гидроксипролина в крови при сочетанных воздействиях возрастало с 3,932±0,524 до 11,154+1,019 мкмоль/л (РС0.001). Происходило уменьшение его до уровня нормы в аорте (с 4,191 ±0,876 до 1,579±0,291 ммоль/кг, Р<0,02) и в печени (с 4,307±0,804 до 1,282±0,208 ммоль/кг, Р<0,01), т. е. имело место уменьшение свободного гидроксипролина в этих органах по сравнению со стрессом соответственно на 62 и 70%. Количество пептидносвязанного гидроксипролина увеличивалось как при изолированном иммобилизационном стрессе (на 56 % от контроля), так и при сочетанном воздействии (на 110% - к фону и на 35% - к стрессу).

Содержание суммарного коллагена при сочетании стресса с ЭАП восстанавливалось до уровня контроля.

Эти опыты свидетельствуют, что электропунктурные воздействия при многократном их применении на фоне иммобилизационного стресса способны оказывать нормализующее влияние, в то же время сами электропунктурные воздействия (без стресса) не изменяют уровень метаболизма коллагена.

Электропунктурные воздействия на фоне введения адреналина приводили к существенному ослаблению изменений обмена коллагена, наблюдавшихся при изолированном применении адреналина. Так, введение адреналина уменьшало содержание свободного гидроксипролина в крови на 83%, а присоединение ЭАП вызывало увеличение его количества с 1,242+0,245 до 4,326±0,871 мкмоль/л (Р<0,01). Уровень свободного гидроксипролина при сочетанных воздействиях уменьшался в аорте с 9,777±2,644 до 4,234±0,324, в скелетной мышце - с 1,286+0,023 до 0,848±0,087 ммоль/кг (Р<0,001). В миокарде и печени как введение адреналина, так и его сочетание с ЭАП не сопровождалось достоверными измене,-нинми. При этих воздействиях не изменялось также содержание пептидносвязанного гидроксипролина.

Суммарный коллаген в аорте при введении адреналина возрастал по сравнению с контролем на 148%, но его уровень восстанавливался до исходного при присоединении ЭАП.

Введение адреналина приводило к снижению суммарного коллагена в миокарде (на 54%). Присоединение электропунктурных воздействий сопровождалось нормализацией уровня суммарного коллагена в гомогенатах этих тканей.

Результаты этой серии опытов свидетельствуют о том, что длительные электропунктурные воздействия ослабляют эффект адреналина.

Направленность изменений обмена коллагена при внутрижелудочко-вом введении ангиотензина-П во многом совпадала с действием иммобилизационного стресса. Присоединение электропунктурных воздействий к введению ангиотензина-И существенно ослабляло эффект последнего. Так, количество свободного гидроксипролина при этом

ч

уменьшалось в крови с 12,561±1,425 до 9,243±1,374 мкмоль/л, в аорте - с 3,256±0,349 до 2,351±0,326, в миокарде - с 1,934±0,069 до 0,394^0,069, в печени - с 3,691 ±0,256 до 2,575±0,342 ммоль/кг ткани, т. е. имела место нормализация его до уровня фона (Р<0,05). Лишь содержание свободного гидроксипролина в печени оставалось выше по сравнению с фоном (2,575±0,342 против 1,407±0,351 ммоль/кг, Р<0,05).

При сочетании ЭАП с введением ангиотензина-ll происходила также нормализация количества пептидносвязакного гидроксипролина (с 9,648+0,589 до 7,912+0,612 мкмоль/л; в контроле - 6,494±0,772 мкмоль/л).

При этом уровень суммарного коллагена в аорте уменьшался (с 296,325+18,241 до 243,421±17,542 ммоль/кг, Р<0,05), увеличивался в миокарде (на 78%) и печени (на 82%), т. е. они приближались к показателям, полученным в контролен были достоверно снижены по сравнению с эффектом ангиотензина-П.

Таким образом, длительные электропунктурные воздействия ослабляют эффект стрессового воздействия, адреналина и ангиотензина-Н.

Сопоставление результатов опытов, полученных при сочетании иммобилизационного стресса с электростимуляцией БЯШ, а также с внутрижелудочковым введением субстанции Р и лей-энкефалина, свидетельствует, что эти воздействия сказывают стресс-лимитирующий эффект. Не исключена возможность, что электростимуляция БЯШ приводит к активации опиоидергических механизмов мозга. Литературные данные свидетельствуют о том, что ядра шва мозга принимаютучастие в реализации антиноцицептивных влияний (J. M. Besson et al., 1981). Характерным признаком действия опиоидных пептидов является обезболивание, которое наблюдается при внутривенном, внутрижелудочковом введении или инъекциях в некоторые структуры мозга (A. Pert et al., 1976; T. Oyama et al., 1982). Одновременно с этим отмечается изменение температуры, содержания гормонов (A. Dupont et al., 1972). Опиоидные пептиды (бета-эндорфин и лей-энкефалин) и субстанция Р почти полностью блокируют проявление эндокринного компонента эмоционального стресса ( Г. Е. Данилов и соавт., 1990; Л. С. Исакова. 1986).

Присоединение элекггропунктурных воздействий к стрессу или к внутрижелудочховому введению адреналина и ангиотензина-ll также приводило к ослаблению эффекта последних.

Известно, что реализация акупунктурных антиноцицептивных воздействий обеспечивается за счет изменения центральных нейрохимических процессов, в том числе с вовлечением опиоидергических механизмов. Об этом свидетельствуют работы, проведенные с введением опиоидных пептидов (A. Pert et al., 1976; J. W. Grau et al., 1981; T. Oyams el al., 1982). Установлено также, что налоксон уменьшает или полностью блокирует анальгетический эффект акупунктуры (Л.В.Калюжный, 1984] и не проявляется этот эффект у животных, толерантных к морфину (В.В.Яснецов, 1982). Конечно, опиоидный механизм не является единственным, а в формировании антиноцицегтгивного влияния принимают участие и другие нейрохимические процессы.

Наряду с антиноцицептивным влиянием опиоидные пептиды при и) внутримоэговом введении почти полностью блокируют эндокринный, i том числе гипофизарно-адренокортикальный компонент змоциональногс ю

стресса (Г. Е. Данилов, Л. С. Исакова, 1983; Л. С. Исакова, 199^ нормализуют, измененный от нейрогенного стресса, офтальмотонус.

В наших опытах также было получено нормализующее влияние этих пептидов на обмен коллагена, который предварительно был изменен иммобилизационным стрессом.

Анализ результатов опытов с сочетанными воздействиями электростимуляция БЯШ, внутрижелудочковое введение лей-энкефали-на, субстанции Р, электроакупунктуры со стрессом показывает, что все эти воздействия либо существенно ослабляют, либо полностью блокируют стрессовые проявления в обмене коллагена. Поэтому вполне можно допустить, что в обеспечении антистрессового эффекта принимают участие нейропептидные механизмы, в том числе и при электропунктурных воздействиях. Безусловно, этот механизм не является единственным в реализации стресс-лимитирующего влияния, но ему принадлежит доминирующая роль.

ВЫВОДЫ

1. Иммобилизационный стресс приводит к увеличению содержания свободного гидроксипролина в аорте, печени, пептидносвязанного гидроксипролина в крови и к снижению суммарного коллагена в эти* тканях и в скелетной мышце, т. е. к доминированию катаболических процессов.

2 Многократная электростимуляция большего ядра шва мозга не оказывает существенного влияния на уровень обмена коллагена происходит увеличение лишь свободного гидроксипролина в миокарде и пептидносвязанного гидроксипролина в крови.

3. Многократное внутрижелудочковое введение адреналина серотонина, ацетилхолина и ангиотензина-И вызывает в основном такие же по направленности изменения обмена коллагена как и иммобилизационный стресс.

4. Сочетание электростимуляции большого ядра шва с иммобилизационным стрессом, с внутрижелудочковым введением адреналина, ацетилхолина, серотонина и ангиотензина-Н сопровождается ослаблением или полным угнетением эффекта этох воздействий на обмен коллагена.

5. Внутрижелудочковое и внутрибрюшинное введение субстанции Р сопровождается увеличением в аорте и печени свободного гидроксипролина. Происходит также уменьшение суммарного коллагена в миокарде при внутрибрюшинном и увеличение пептидносвязанного гидроксипролина при внутрижелудочковом введении этого пептида.

6. Сочетание введения субстанции Р с иммобилизационным стрессом вызывает ослабление эффекта последнего на обмен коллагена.

7. Внутрижелудочковое введение лей-энкефапина не приводит к' изменению уровня метаболизма коллагена. Сочетание введения этого пептида со стрессом блокирует эффект последнего,

8. Электроакупунктурные воздействия не изменяют метаболизм коллагена, а сочетание их со стрессом сопровождается угнетением стрессовых проявлений обмема коллагена.

И

9. Электростимуляция большого ядра шва мозга, лей-энкефапин и электропунктурные воздействия обладают стресс-лимитирующим 13У1иянием на обмен коллагена.

СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Прошуткнг Н. Э., Одиянко'ва Е. П., Елисеева Е. В. Изменение офтальмотонуса и содержания катехоламинов в крови при воздействиях на серотонинергические структуры мозга. Тез. докл. II съезда физиологов Урал, рег иона (сентябрь, 1990). Свердловск, 1990, с. 29,

2. Елисеева Е. В. Роль серотонинергических структур мозга в йзменении обмена коллагена. Тез. докл. ХУ науч. конф. молодых ученых и студентов (5 мая 1991 г.) под ред. акад. АМН СССР, проф. К. В. Судакова. М., 1991, с. 53-54.

3. Елисеева Е. В., Прошутина Н. Э. Влияние серотонина и ацетилхолина на офтальмотонус и обмен коллагена. Тез. докл. научно-техн. конф. "Ученые Ижевского механического института - производству". Ижевск, 1992, с. 153.

4. Елисеева Е. В. Роль субстанции Р в изменении обмена коллагена при иммобилизационном стрессе. Тез. докл. научно-техн. конф. ''Ученые Ижевского механического института - производству". Ижевск, 1992, с. 154.

5. Елисеева Е. В. Изменение обмена коллагена при хронических нейрохимических воздействиях на ядра шва ствола мозга. Морф, сборник мед. вузов России "Актуальные вопросы медицинской морфологии". Ижевск, 1992, с. 84-86.

6. Елисеева Е. В., Брыидмна И. Г., Даштоа Г. В. Обмен коллагена и поверхностно-активные свойства легких при стресс-лимити-рующих воздействиях. ХУ1 Междунар. науч. конф. молодых ученых и студентов "Современные вопросы экспериментальной и прикладной физиологии". М., 1993, с. 33-34.

7. Стерхов В. И., Елисеева Е. В. Изменение обмена соединительной ткани при сочетании эмоционального стресса с воздействиями на биологически активные точки. Мат. научно-практ. конф., посвящ. 60-летию ИГМИ. Ижевск, 1993, с. 22-24.

Заказ 6535-95. Тираж 100. Типография ГП 'Ижевский механический завод".