Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Влияние бета-адренергических средств на лизосомы миокарда

о г 5.2

академия медицинских наук

научно-исследовательский институт фармакологии

На правах рукописи УДК 612.172 + 612.015 + 615.217.22 + 615.217.24

СЫСОЛЯТИНА Наталия Анатольевна

ВЛИЯНИЕ БЕТА-АДРЕНЕРГИЧЕСКИХ СРЕДСТВ НА ЛИЗОСОМЫ МИОКАРДА

14.00.25 — фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Мл

москва 1991

Работа выполнена на кафедре фармакологии Кемеровского медицинского института и на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии медико-биологического факультета Российского медицинского университета.

Научный консультант:

— академик АМН, профессор П. В. Сергеев

Официальные оппоненты:

— доктор медицинских наук, профессор Н. В. Каверина,

— доктор медицинских наук, профессор В. В. Гацура,

— доктор медицинских наук Г. Я. Шварц

Ведущее учреждение — Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова.

#

Защита состоится «_

7я,

в часов на заседании 'специализированного совета

Д 001.25.01 при Научно-исследовательском институте фармакологии АМН (Москва, ул. Балтийская, 8). С диссертацией можно ознакомиться в научной части института.

Автореферат разослан «_^>> 19

Ученый секретарь специализированного совета, доктор медицинских |наук

А. Н. ЯВОРСКИЙ

jafití&rwrf'

f этш I

ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

i i-, ¡i**« тдчя -

Актуальность исследования. В терапии сердечно-сосудистых заболеваний широко используются бета--адрёкергичеокие средства, особенно бета-адреноблокатори. Фарма-кодинамическпо проявления их использования разнообразии, в том число источает изменения метаболизма и внешней paöo-гн миокарда. Их общий' клинический эффект основан,, преаде всего, на широк® представительстве в организме бета-адренорецепторов - как в периферических тканях.,, так и в ЦНС. ■ '

Влияние бета-аиренергическйх агентов на кардиомиоцигы в целом известно. Менее., ейвещепы'вопросы, влияния бета-адренергичес-кюс средств на лизосоад, особенно на лизосош миокарда. Известно . стабилизирующее' влияние отдельных представителей данной йармако-' логической 'груипн, прежде всего - пропранолола, на лмзосомальнне

мембршга миокарда £в.К«' Ярусачонко, 1981; е. Wolman, 1979;, 'Vri. 'Hieda st al,t I9ööj ¡ Известна также регуляция бета-адреноре-целторрв бета-адренергичеекдащ средствами - изменение рецепторной плотности, аффинности, сопряжения рецепторов с аденклатциклазой, - что приводит к изменениям.чувствительности как вдтактного, так . .и пораденпого сердца к-терапии бета-«,црёнергическю.1и средствами |а.А. Ткачук, 1939; Р. Bominiéls:, D- Ttírck, • 1986; A.S. Maisei et al,, 193?; ' 5,Б. Hurphre?, - J.E, Saffitz, 1989, к Xp.J.

' Представление' о широком участии .лизоошальной системы в кле точном.катаболизме [з,А. Тутельян, A.B. Васильев, 1990J, а следовательно, в развитии очень многих, .если нэ всех, физиологических и патологических процессов в клетке, в том числе, возможно, в обмене (яизненном цикле) бета-здреиорецепторов К. Harden, 1 1983; C.J. ¿inas, 0. Túaas, ISSíj, побуздает к изучению молеку-

лярнц.с основ регуляции, в том числе рецепгорной, функциональной активности лизосш,

•Цель работы. Изучение действия бета-адренорги-ческих средств (бета-адреностиыулятора нонахлазнка и ^ега-едре-ноблокатсрсв - неселективного пропранолола и кардиоселективних флузокоолола, практолола и атенолола) на лазосомы миокарда (активность лязосомальных ферментов и стабильность лизосомадьншс мембран); поиск связи мезду функциональной активностью лизосом и бетй-адгснорсцепюрами в миокарда ылекоштаицих.

Задачи исследования. I. Выяснение воэ*' можности омонимического связывания антагониста бета-адренорецей-торов дпгпдроалпренолола с лиэосшами миокарда.

2. Исследование влияния бега-адреноблокаторов (неселективного пропранолола и кардиоселективних (Тлузоксолола, практолола

и атенслода) in vitro на активность лизосомальцых. ферментов и устойчивость лиэосомальных мембран к.ловревдавдему длительному температурному воздействию. •

3. Исследование 'влияния бета-адреноатшулятора (нонахлази-на) in vitro ц in vivo , ya активность лизосшальных ферментов и стабильность лвзосомальних мембран в интактном и новрея денном (шшгазирбвашом) миокарде. -

4. Проведение фармакадогического аногаза механизма влияния бета'-йдрзпосшлуляции 'на 'функциональную активность лизосш миокарда с использованием «армакологического "вшшяения" бега~ад~ ренорсцопторов, моделирования псстсиналтичэской гшзерчувсгви-тельноати бета-адренорецелторов и досенаитизации'бета-адреноре-цепа'оров. ..'.,' . "

. О с ,п о в н ы..е п о л о к е и и я в й н о с и м ы е н а и -щ и ту. . I. На «локарда желудочков су-

ществуиг места специфического овязьшашмг ^Н-дигидроаляренололз.

2. Воздействия бета-адраностимуляторш нонвхлазшш и бета--адреноблокатораш пропранололом, флузоксолодш, практололом и

атенатолом отражаются на активности дизосомальннх, фармонтов и устойчивости лпзосомальных мембран миокарда к павреядошга.

3. В олосредовашш влияния бета-адренергических агентов на функциональную активность лизоссм в интактнсм и ноБрезденном миокарде (на активность лизосомальншс ферментов и стабильность лизо-обмадьнцх мембран) участвуют бета-здренорецепторн, в том числе локализованные на лизосомах. ■

■ Научная новизна. На|и1эосомах миокарда желу-дочкон найдены места специфического связнвания 3Н-дигидроадлрено-дола, Определены'параметры специфического связывания днгвдроаллре-нолола о.дизосшаш миокарда. Используя приемы фармакологического анализа, в частности, бета-едаеностимуляция на фонп лостсинапти-ческойгилерчувствитальноети бетд-ацреяорецелторов или десеноити-зацим йеганадренсфецевтрроз,. "вшшленив" бета-адрепорвцелторов яредварителыгш, дрижиздатш введением бета-адреиоблокатора в комбинации с последующим действием Ьегд-адреностимулятора на го-иогенатн миокарда, удалось- показать зависимость функциональной активности лизосом миокарда оу футцт бета-адрвкорецвпторов, что позволяет говорить о бета-адренорецепторнои контроле (регуляции) лизоссм миокарда. Цалучеаше результаты свидетельствуют, что , участие бета-адренсрецепторов, локализованных на.лизосомах, в . опосредовании влияния бета-адренергических агентов на функциональную активность лизосом миокарда» в частности, на активность .лизосомальинх ферментов и стабильность лизосоыальных мембран, является основным, если не единственным^ механизмом

действия бета-здренергических. средств- на лизосомы. миокарда in vitro t 51 одним из нескольких механизмов - в целостном. организме. Показана временная динамика активности лизосоыальных ферментов и стабильности лизосомальных мембран интактнох'о и поврезденного (тотальной ишсмиеи, длительным температурным воздействием) миокарда' н влиянии на эту динамику бета-адреноотиыуля'тора нонахлазина и бета-адиеноолокаторов - неселектиыюто пропранолола и кардио-селективних алузоксолола, практолола и атенолола.- ■

Практическая ц о н н о о т ь и р е к о -м е и д а цлн по использованию научных выводов. Полученные в работе результаты формируют новые знания о молекулярных механизмах 'действия бета-адре-нерх'ических средств на миокард в делил а на лизосомы миокарда,' .л частное га« Представление о весомой ролл с;ата~адренорецепторов( в том числе бета-адренорецепторов, локализованных"непосредственно на лизоссмдх, в регуляции функционально!! активности ли'зосш в миокарде, будет способствовать более осмысленному использованию бета-адреаергическюс агентов для рехулядиц митаболизиа и функции :' кардим.шоц'.гтоь при. сердечно-сосудистой патологии. Факт'обнаружения бета-адренорецептороа на лизосомах и представление о беха-ад-ранорецепторпои,контроле дяаоссм в.миокарде может стать стлнулш поиска воыюгших связей мезду функцией рецепторов других типов и функционально!! активность» лизосои.

А п роба ц й я . д и с с е р т а и п о. н н о I- о . м а -

■ ' ' - 1

. 'г е р и а л а . Материалы диссертации были дсло:лзны на Первш Всесоюзна »• симпозиуме "Фармакологическая коррекция кислоредзави-CMMiiX патологических состояний" (Москва,• 1984), Шестом Всесоюзном иъеаде (^-ркиолсячш'(Ташкент; 1988), на Третьей и Четвертой кон-ц.ороццкях молодых ученых• Ленинского p-ii'oita v.. iteuepoEa '(1334,

1985), на заседаниях Кемеровского отделения Всссотожду отчества фармакологов (1985 - 1990 г.г.), кроне' того, представлялись на Третьем Всесоюзном симпозиуме "Структура и гёушсцил лизс.-асч" (Тбилиси, 1986) и Одиннадцатом съезде врачей Кузбасса (Ксг-'орово,

1986). .

II у б л и к а щш . По материалам диссертации оптоллкозано 25 работ.

Структура работы. Диссертация пзлслеиа на 234. страницах машинописного текста, содержит 6 рисунков, i?. таблиц«, состоит из- введения, обзора лптератури, omicamyi илтехлшоа и методов исследования,' пяти разделов ¡экспериментальна!: час?», обсуждения результатов, заклнчения, выводов и указателя литературы, вклгачащего 200 работ.

МАТЕРИАЛЫ И ШТОЛУ ИС&ЩОВАШГ

Б работе попользован гоюкедд .желудочков 1312 -.(.рис и 40 ¡.юрских свинок (оащов). Все .жнотше. били- молодые, гадослэрелю, средняя масса' тела крыс составляла около 200 г, морских езинок -7U0 - 600 г. • ' '

одели л о в р е я д е к и я м п о а р а .

1. Модель определит^ устойчивости лтзосомалыох мембран к . ловрездаздему температурному воздействию (ояределсш.е температурной чувствительности л&осоиальннх мембран). Текпоргуодагу» чувстзительиость лизосо1шл=ннх мембран определят в соэтзеачямв о рекомендациями дз монограТли; к.Л. Покровского п Е.А. Тутельяиа

Н-

2. \!одель.-':.'о.'й.")ьноГ! шле-г'.ии пискарда» За осиогу т.;' иодедп-рошгеп ?сташю1. лшлш щсасардэ крце в лаязис кзодздсьасш

ВЗЯТЫ MOTO.THKil из Публикаций B.F. Xrurnp et al. j I36Ô| , R.B.

L. jj98ï]>

K.A. Reimer et al. 1198'if, В которых

Jennings et al. |^I981

модель использовалась для работы с печенью мышей и миокарддм собак. Моделируя тотальную вшешаэ в наших исследованиях, поступали . так (ран. предложение Si 1270, принятое КемШ,! "Пиемия миокарда крыс in vitro "); отмытый от крови мискард желудочков двух -- трех крис быстро рассекали на мелкие частц (0 - 4° С ). Седь4 моя часть перемешанных кусочков немедленно гомогенизировалась в -холодил.! (1-4° С)' 0,25 M растворе сахарозы с ЭДТА ( рН 7,2 ) -гщ; получали исходный гомогенат. Оставшиеся шесть часта!! помещала в нагретые до 37° С двадцатишшшштровые бюксы, внутри выложенные смочашои в изотоническом растворе хлорида натрия фильтро-Bit,и,нои бумагой. Еюксы плотно закрывали и помещали в водяной термостат при 37° С. Через пятнадцатиминутные промежутки времени один из б.сксов по очереди вскрывали и немедленно готовили гомоге-нат.

1Лц избрали эту модель ишомического повреждения миокарда, предпочтя ее модели острой коронароокклюзпонной ишемии у бодрствующих животных, воспроизводимой ло методу ь Ьергап et al. jisBoj, предварительно изучив актглнооть лизосомальных ферментов и стабильность лазосомальньк мембран миокарда в .обеих моделях. К . основным достоинствам модели тотатьной ишемии можно отнести от-, сутстЕие вариабельности степени вдемизацид ткани, неизбежной при регионарно;-! коронарогонной кремни, а также возможность изучать эависшость ^ерментатшшой активности от длительности 'шемии в одном и зон zo образце ткшт. ' '

, Л о ка-рственн не препараты,

Попользовали нонахлазвд. (Ядстатут -фармакологии АШ СССР.), . >]лузо;с5сллч ( 'г. Iiofiman - ba Roijche .) , пракголол ( ici ), ате-' ;:о.\ол С.ПИ'мО, a «акке пропраиодоя в .виде-сролрасголола гкдррхлр- '

{зВДа ( Sigma ) в экспериментах in vitro и в виде обзидана д.тш инъекций яиЕот-нм.1.

При моделировании дееекситпззцпи бета-адренорецепторов к действию агониста нерерпзи глгседу инъекциями составллли 24 ч. Ностси-налтическув гкперчувствительность бета-здренорецептсрон шгшяалл введением резерпина (рауседила) в дозе 5 мг/кг маосн ltyaiCH тшутри-брюишнно за 24 ч да забора миокарда,, что обеспечшпдо истощенно . тканевих дегю катехолаипноз Гв.Б. Гацура, A.C. Сарптяг.ол, 1Э?т|.

Приготовление г о м о г е н а т о и .

Немедленно после забор?, миокард отневали от в ледшшх

растворах хлорида натрия (в сериях с тотальной доше'»'.) идя хлорг-да кадия (в других сериях экспериментов) и отсека.-:!; ирс-дссрщш.

'Миокард ;келудочков еще раз промазали в среде гомогениз.'.ири, продавливала через охлавдешши металлический пресс и готовили десяти-ели (раке) аяттроцвтте гоисгенаты. Среда горогишккедт всегда била холодной (С0-- (+4)° С) а с pH 7,2 - 7,4, но соогав ее в раз-дах сериях несколько варпнрсвал. Использовал« следугр.ле прописи приготовления среды гомогенизации: а) 0,25 М раствор сахарозн, содвр:вдшЗ 0,001 М ЭДГА; б) -'0,25 М раствор сахарозы, содерэдий 0,01 М трио-Но1 к 0,002 Ii ЭДТА. Энспершенташю определили, что .iyi.fi работы с миокардом морских свинок более подходила первая про« писл, а для работы с шокпрдои крнс ошшокспо по,<гсодплк сбе прописи.

Активность 4 к а о о. о и а л ь н Ii х >5 е р -м с в I о з ' наследовали' в безъядерном гскоганате, п суспензии шлоховдриально^пшоесиалъной фракции, в надосадсчноН жадности после ввдслеетя айтохотфивль-но-лгзосшаньной фракции. Бсзъядер-нпй гомогеьат представлял из себя надосадок поело центрийпгсро-вшш OBeaeitpuroToiweaHcsro гомогоната миокарда при малой усхоре-

uuu ( IIUÜB ) ъ течение 10 мин яри 4° С. 1Литоховд>иально-лизосо~ i.uütbiiyu ¿р акций- получала центрифугироиашем безъядерного гомоге-пата в течение 30 мин при 200С0 Б (0 - 4° С) [¡Л.Й. Калинский, ICiÖ'l; М.А. JUciutti, 1372; Е. Welaan, X.J, Peters, ISVij, При необходимости, например; в экспериментах по определению параметров сцецгаплческого связывания ^гад^йалпр^нолала с лизойишш, дий^ренш'л./д.пш,] центрифугированием в гомогенной среде вцделдаш последогатедтпо .Ьракциа "тяжелше"•натей.оадрай, "легких" митохондрий,' лизоеои (uty Хракцшо получат центрифугированием надосадОчной падкости над "дегкшми" митохоцдрияш при UjüÜ CS в течение 10 мин), Фралцга "лпгхих" лизосш и "тякелих," .н_рокеиоом, Ыитсхоадриалышз и лшзоссм.'инлше фракции обычно ресусншдарсвгли в жидкой среде, (в зависимости от цели - в среде-выделения (.гомогенизации) иди ь ере* де инкубации (0,25 И сахароза, 5 мГЛ трис-11°1 , I vlü HgCl2i pH 7,4) ) в соотношении I : 2 (масса миокарда, из которого готовили гсыстепат, : обтаем среды).

Все определения ферментативной актяььостп проводили в нарал-» лелях (двух - трех). БиодоЗгаческий материал разводили раствором оичьего альбумина -(10 ыг/мд). Кратность разведения, оптимальная для определения активности какого фермента, как и концентрация раствора альбумина, подобрано окснершо.,'л«ш> (рац. ирадяозешш Ш 1247, 1;.!4й, 1277, принятые Ьдодеяяш обдую, свободную,

коосажиаесуи активность лкзосШалыигс -икк.этов. Свободную активность оираделдли в соответствии с ре/лоиидошя, приводомшк в монографии А.А". Покровского и В.А. Тутълы на £ 197б|, неосаадас-i.ipj акг-дкноотд - в прсгиагсасондрйаяьноч'йаосадальншс цадооадках, tij.sy.а «яя-ялоть — или преле экспозиции йашкшдаского материала с тркуонг»! л-iGü в конечной коицеятредв» L','1 дпбо после повтор-» шг; r-;,.'..:;u:i л;.:Л и знюражиганий, OiKEwr-si.-jt кратность процедура - • cmumaim - зшкр^дгьйп.тд нспециально

для каждого раздела исследования, и вариаровала для разных фер-• ментов от трех до десяти.

В гомсганатах и в'суспензиях субклеточных фракций определяли активность следующих лнзоесмалъ'ных ферментов: кислой фоофатаян (КФ 3.1.3.2, субстрат - гл1щерол-2-хосф1т, "Merck _•'), кислой де-зоксиркбонуклеазы'(КФ 3.1.4.6, субстрат - ДК из эритроцитов цыплят, "Rearmi "), катепсина V (КО 3.4.23.5, субстрат - бычий гемоглобин), бета-глюксзидазы (Кй 3.2.1.21, субстрат - 4-ннтрофе- "• нил-бета-и -г.такопиранозкд, " Serva "), бета-галактсзздаэы (К'З 3.2,1.23, субстрат - 4-нитроФеяил~б'зта- D-галактопирачозид, " Serva ") - спектрсфотометрически, по' нрописга-г, речог.юнцоваяг ним А.Да, Баррет и Ы.Ф. Хит ^ISBüj, но самостоятельно подбирая ■ оптимальние сроки инкубация биологического материала с субстратами. Кроме того, оиредаччли'активность нслезосошлышх ферментов. Так, с цель?) гтерментативлого контроля-зццелсчних д»'Т«увренцкалыш центрифугированием субклеточных. Трагедий определяли активность- маркорйо-го фермента внутренних мембран.мктоховдрнй оукцштатдегидрогоназы (Кг1.3.99.1, субстрат - сукдана? натрия)|т.Е. King, I.037J, маркерного фермента плазматических, мамбран щелочной фоефатдзн . (КФ 3.1.3Л, субстрат - г.тацерсл-2-^0(л>т) j^A.A. j'orpoECKnn, С.Г. Аптекарь, I9S3~j, маркерного '¿ермента пероксисом ка^ачаак (К&-1.11,1.6). Определение активности глталази отличалось от известной методики, применимой :< работе с кровью, временя., и температурой инкубации (рад. предложение I; 1645, принятое демГЛП). В несг.ольких сериях экспериментов в миокарде определяли активность ■ г.чикогенфосфлрмаз "а" и "в" (КЗ .2.4.1.1, субстрат - гликоген из печени морской, свинга) РаменсхиЙ, 1.977 J и креатинфосфохи-

назы (к5,2.7.3.2, субстрат -:креа?кн) j^ h.g. liüiier et al., IfGsJ, Рассчзкшалл удельную активность ферментов (на. 1 ыг белка . гомогепк-та иле с'оаткетсггдаай $ракцвн)аеи (реяе) активность в

i г вламного материала. •

0 п р с д е л е. н n е параметров с л о ц и -(I и ч е и к от о связывания дигидроалпренолола с ли-зосомаиц шотарда ;лелудочков при с проводили с использованием ции лизоссм, получоши« центрифугированием кадосадочной жидкости. над"легкшлл" иитохондритш при Í56CO g в течение 10 мин, Г-де.нти-* imaipw лнзоссм в ввделешшх .¿ршацик проводили с пшощы) люминесцентной микроскопии ("Лгаш l-'i-I", х 720) скр&зеншк акридино- ■ вш оралаевш образцов §ракциЛ- -£p.G. Cinonico, j,w. Bird, 1969J, Лизоеоьш эдюодшш средой инкубации, (0,25 -tí раствор 'сахарозы, содержащий 0,005 Í.I трис-НСГ .д- (]f00I. М Mgai¿;,,'pH 7>4), центрифугировала повторно при 15800 б 10 м(ш, полученный-осадок ре- ' • суспендировали в- среде ивдбащш» L . кропил -2,3 - %J дагид-роалпренолол- ( "Amersham ") я суспензию лизосш Днжубйр.овали - . в течение I ч при Io С; в одну часть пробирок-добавляли избитой 1 •' немеченого лигалда -г проаранша-ш-нщрох^орвда.- на среде инкубации,', в другую .часть - равное.количество.сред* инкубации. Объем- инкуба- ! хцюшюй смеси - 0,5 мл. Конечное .концентрации печеного дагвдро-' алпренодолаИзменяли'от .10 до IG5Q нЫ, 'Реакцию, останавливали добавлением 5 мл среда-, шшубашш, Дентрмфу^ировади 10 шш 'при 15800 s , осадок- вновь пронизали щуть«э. ыл- среди i-щкубацик- и ■ . -осаздали при тех йе условиях. К. подучеванм таким, образа-,i орракзм доо'авлили по I ил этанола; Jípotínpraí. с добавленные,'к осгуцсдм-этанолом оставляй: на нЛЧь-.при>1с. О«- Редиоакт'ид!шс.ть.:еодер?амого про-, бирок регистрировали • на ¿ледащий. доШ з. сфиЫфЯцкоаюй. авдкоеш 1Ю-8 на установке "Еета-Г'-- Досле статистической/обработки реаудь-. татов иар:илегри*;сп0д}^ш^скогр..с^1ШйЩ1Я. раредедалк. адн$и«ес1т.

. : •■ : ri ■ •

При. с т а г и с' т л' ч е с к о й обработке результатов-исследования- использовали параметрический метод оценки достоверности (критерии t Стыздента); при необходимости рассчитывали ког:р(Т)ициенгц корреляции [л..';1. Церков, Л.К. Поляков, IS74; Е.В. Гублер, A.A. Ге'шшя, I973j ü.ii. Гублер, 1Э7У; Р.5. Стрелков, 1Э8б|. Рггсчетн выполняли ira ыпкрокатькуляторе с яро-1рш:мным управлением ЦК 56. ...

Р23УШАТН ИССЛЗДОВАНШ. И- ИХ ОЕСУ.^ДОИ

I.^Специфическое связдаанно ' дигидроалпренолола. с лнзосомами миокарда ; .Бета-адренорздепторы, лкзосоц .-

'. Одной, из- глазных'-'задач- исследов£гния-бмо выяснение возмож- . ности- специфического .связывания антагониста бета-аарекорецепто-ров. 'дниодс&тшренолЬла a. лизоссмамк, .. -. -..''" Активность; лкзоеоматышх гадролаз во фракции , кспсльзуемол-в эксле^зниентах по/связыванию' дт'вдоалпренолола, составляла около .33. % от активности Ь безъядерном'гомогензте, что для ислоль- .-зовашоЗ схеМн. фракционирования' соотпотстдуег • литерагурдал сведение. Степень-оч^ск-ш лизосоы•'• (расочвдакная па отношений удель-нЬЭ -активности кисла «цфол&з • во;^ршодт лкзо'сом к удельной'ак- . изноет ь безъядерном-гоиогенате) составила 3,45 - 0,34 < -п = 48). Кнтачтнооть' лизосом и степень "загрязнения" лизосс..;адъной' фракции- лгёмецтама длазматячесгаис мембран контролировав лишь" несцентной микрофсспмеЁ1 при .окраске шсрадшовшл "оранжевым: набли-' дала- ярко^оршиквум ^луореоценцип, хаг-.-:терну» для нспоБрездец-н.ых-лизосом; отсутствие'каленой-(характерной для митсхищркй и,-Йрагмевтов мембран) (¡йуореспендии. 'Таким. .образе,;, использовашвд-оя в -бясперймептзх по.'об&дру.-хенаю спёцкфстеокого связывания лизо-. стольная фракцзд.чприюшш средой цш:убац?н и реоуспендирован-

лая в ней, содержит интактниз ллзосоыц и ее "загрязнение" фраг-. ментами других: фракций не било значительным.

Добавление IûO-кратного избытка немеченого лигакда в инкубационную сиесь, содералцую суспензию лизосш и меченый лигавд, уменьшало регистрируемую радиоактивность, что указывает на существование в лкзосомах участков специфического связывания дигид-роалпренолола. Анализ кривой специфического связывания дигвдро-. ■ алпренолола в координатах Скатчарда позволил предположить наличие.' более одного типа центров сгязивания, т.к. ъ утих координатах характер зависимости бил представлен вогнутой кривой, 'Экстраполировав кривую к осям координат и предположив наличие двух типов центров связывания, решением-уравнений, включающих великим отрезков, отсекаемых, на осях при экстраполяции-, нашли равновесные константы ассоциации'и обчие концентрации мест-специфического связывания [с.Д, Варфоломеев, C.B. Зайцев, 1982J.

Итак, в наадос экспериментах константы ассоциации дигидроал-пренолола слизосомаш миокарда .оказались равными следуащш величинам: 1,05 • I07 Г1 (число мест связывания равно 107 • IQ-1^'

AT

моль на I иг бежа) ■ и 0,26 • 10°. M х (число мест связывания равно 343 • 10"^ моль иа.1 мг-белка). Можно полагать, что найденные центры специфического связывания дигидроалпренодола представляют собой связцващие сайты бета-адренерецепторов, 'локализованных, непосредственно на -лязосомазс. Следует отметить, что известные.из литературы параметры комплексосбразавакия дигидроалпренодола со связывающими сайтами бета-адренорецепторов, локализованных на сарколвшельных мембранах- ми?1-.арда млекопитащкх, в том числе и крыс, значительно огличаюаоя от найденных в .наз)их акспержеитахAlw-aitfer/et al., 1975; H.J, Schumann, O.-E. 3rod.de, 1979; в. Ьвшкег. Р.Н'. bang, ISÛ4; ' ' и.il Sebinerlik' et . 'al., 15561.' Шшршер,-? шгактвдх' крас в yvpeiame часы .констац-

та диссоциации дитадроалирекопола дяя мембран миокарда аюлудот-ков составила 0,41 ± 0,13 нМ ( KD hif;h ). и 5,14 ± 2,14 ii/I ^ % low 5 Ь' bemmei, Р.н. Ьяп£, 1Э01J ■ (константа ассоциации соответственно составили 2,44 • I09 11Г1 и 0,194 • I09 Поэтому cneiovi'OTCCKOe связивангае днгидроалнренолола в наших экспериментах бчло обусловлено наличием связиваэдгл сайтов бети-ад-ренорецепторов ка лизосоиах,• а ке на сарполешалышх. мембранах.

■Участвуют ли /¿еза—эдренорецепторы лпзоссяд в опосредовании эффектов бета-алренёргкческих средств па функциональную активность самих лизосоу, а именно на активность лз'.зоосмадъныи '»ер-ментов и cfafiiuaHOcTb- лизоошальшк' мембран.-? С «чет на этот вопрос вытекает из результатов следующих эксчерпментадьних серий.

2. Влияние бета-адренс'блокадь! да активность лизосоцалынк Лертеитов и стабильность ллзооомалышх мембран интакт-кого и повременного ¿а- vitro ' миокарда

' Исследование характера .действия .бета-адренсблокаторов -. иеоелехтишгого яропрацолола р. бета-I- Оардио) селективных фзу-аоксояога, йрактояалэ й атенаяала"- на дизоссш миокарда показало, -что, добаалентё П .гемогвнатам в конечних концентрациях от ; I • 1СГ9.до' I *. .10"® '•.!, зтп лскарсгвежые средства-способны за. ивтао влиял ¡:а активное т*. кислой &ос?агазн, гшсдоЛ дезоковр;'бо-нузс-тзази, кагспсана .в <5ега~г.дюкозидазы а 'Ьегз-шлактозцсззы я на динамику ооооджюняя iwe-W свободной и ¿вязанной с лпзосо-даиа активность» этих ферментов.в условиях дабклпзирушего лпзо-оогадьнйе .¡деыбрглпл длительного температурного воздействия на го-могенатк.' 1к?г1-йлрёнойлокаотры. оказывали ка активность пяти ис-- следованных лкяоегоал&ннх. а-ерментоз воздействие как немедленное '(йкг?.вность, .опрег;ел-;нп">л немедленно после добавления препарата

к гомсгеиа'гаы, далее в тексте называется «сходной), так и в процес- • се. преинкубоции гсшгенатов с препаратами. В .таблице I представле- .' ны результата определения исходной общей активности ферментов » при-» оутстыш бета-адреноблокатсров.

■ Та!;;:;;л I

Влияние бета-адренсблокаторов на исход..;.) общую активность .

/

лязосшашшх ферментов шоюща ( X

5 - 8 )

Х^гриепт: 1 Кислая '! 1 Кислая I Катеиспн ! 1 Бета- . 1 ! Бета-га-'

фосфата-1 1 . . I ,Щ1л-аза | и л ] -ГЛ1СК03И-| лактоз и--

Препарат/4^ ! за ! 1 ' 1 1 • 1 дава . | даза

кониентри- ! ; 1 1 . ( 1 ! 1

ция (Мель):! ) ! 1

■ I ! '""..............1 2 I з ' ! 4 ! 5 : ! 6

Контроль а,за ■ 6.43 ' . .0,058 19, '¿0 29,71

± 0,90 ' - 'С ,92 0,006 ' t 2,05 ' ± 4,63 ...

Пропранслол'

I • Ю"9 12,50 ' 111,26 • ■ -0,051 ' '6,34 7,55

±. 1.21^ 1 1,04 % * 0,014. . * 0,95 ^ ■ * 0,98

I - 1С'~а 37,50 , 36,13 •' 0,036 .- 14,70 .10,76

1 4-, 96 ^ _.± 3,16 Г * 0,005 & ± 2,?Г * . 2,02|.

I - 10~7 4,18. 101,75 ■ ' 3,166 8Г61 ■

1>25 ' '¿10,871 4. 0,052 ' ' - 0,46 % ± 0 , 23 )(г

1 » .ТО"6 3,52 • • 21, ее ■■ '. 0,056 '. ' .'■'23,83'. 12,13

* '0,46' 2'0,004 . — '»,»9 . 1.56$

то"0 . : з.ев .збдо'.;.' б д2б ' -2,43 ?,2?

'¿4,'¡2^' '*'о,1о;| г 0,30

ш

а

Таблица I (¡гр^долязшю)

I 1 ! 1 2. ■ ! Г 1 3 ! 4 ! 1 5 ] 6

Флузоксолол

.1 • Ю-9 1,61 ' .' 44,71 0,026 3,56 12,26

+ + 3,63;}(г ± .0,005^ ± 0,93 ^ + ОМф

I • ю-0 Г ,21 2,32 0,046 10,Р2 12,89

■ ± + 0,35^- ¿0,009 ' ± ¿,05 £ + 2,02^

I • 10~7'. Г,31 . 0,74 0,048 ' 1,62 3,95

± 0,25 0,14^г - 0,013 ± 0,04 + 0,06

I • 10~6 1,34 ■ 0,98. 0,070 . 19,93 11,04 .

■± 0,20 % + 0,20$- ± 0,013 • ± •1,13 . + 1,66$

I -ю-5 3,61. 2,14 0,037 7,80 12,31 '

0,47.*. 0;53-| * 0,005 ± 1.90 % ± 1-14 ^

Праг.толоя

I • ГО"3 4,16. Э.,11 0,015' ' 5,13 10,53

0,62 ; ± .1,35 0,004$. + 0,27 & ± 1,62

I . 10-« • 5,В8' . 12,15 0,021. 9,24 ' 5,45

± 0,87' •2,22&± 0,005 ^ ± 1.50 £ 0,62 £

1 • 10"'. 0,13 • 12,14 . 0,028 5,23 2,79

+ 1,02 . . + • I0,001 $ ± 0 ,40 ^г - 0,24 |

I • ю-6. '1,36' • '41,СО . ■ 0,022 2,16 3,75

■0,20%;. • 6,20$, ¿' 0,001 Ж ± 0,44^ + 0,37 ^

I • .10"5 . 0,94;'- 26,20 0,012 • 2,?5 ' •3,43

± 0,22% + 4,01$ ^ 0,002 + 0,21 + 0,34 ^

Атсколол■

I . Ю"э ■ 2,04, 6,78' 0,018' 12,ОТ 12,01

+ 0,30 $ ' / 1,02 ± 0,.СУ4 ± 2,55* + X, 44 '$5

16 , Тайшздг I (продалжшня)

I ! а ! | . з ! 4 ! 5 ! 6

I • ю-8 -0,43 6,54 0,024 38,76 '' еда

± и,С? % г 0,72 ±0,006 ± 1,63 ± 0,44

I • ю-7 4,51 5,04 ' 0,016 21,23 " 26,75

± 0,82 ' ± 0,90 ±0,007$- ± 3 ,02 ± 3,66

1 I •'КГ6 2,22 3,87 0,012 8,80 ■ 7,06

± 0,71 % ± 0,58 ± 0,65$-

I • 1ГГ5 1,2 0 8,62 0,013 - 8,98 2,92'

± 0,15 ± 1,00 ' ±0,004 # ± 1,02 -^С - ± 0,44 ^

II р и и е ч а н п е : ^ - Р^0,05.

Активность. кислой фосфат аза выражена. в ■ паномоль -но&рганлческого д;ое|ата в I мин на I мг- белка при-37° С, ■ кисло!! дезоксирибону1угеаан - в ншюЬохь -квслоторастворшшс ыоно- • нукле ссадив в I мин на I мг белка при 37° С, катают ¡а в - в

А %80 Б 1 МШ1 ,1а 1 ыг йел'л при .45° "С, бета-глшозидази' и бета--Х'алактоиг.даси ~ в нансмсль пара-нитрофенола в I мин на I мг белка при з?° с. _. . ;•■■■■■

Ире инкубация гшогеиатс® -с препаратами приводила 'к эоиогаш изменениям харщстерной для контрольной серий динамики -ферментативной активности,- хзпределяшо^--тешъратур1аш к времсянш воздейст-вдем на гшо1«яата;.'Напрт1ар, .в.к'онтройе .ога^ак актквность бета- . -глвкозидазн значительно увеличивалась в. интервале ст 15-й до 30—Д ыи,ч гфешкубацйи-,' й. свободная активность возрастала к 15-й шш," к прододжяше•превдс^6а;сйн гомогенатов'-пр-й 37й.С на свободной лктв'ьнорта ¡тле. не ■отра-яцЬсь Сем.-'таблицу 2). .--Есл:; до гоио-»■онатк гфыщкубнрогалп Еиесте с ф^-^адюиодлокатррсм (лкАм из чзтцрох- г.спо;гьзо1'.;л1!ак работе), сто гфиводаяо к ^ажу с>ш;.м-

Таблица 2

Активность бета-глюкозкдазч в контрольно" сорги ( X - га , п = 6; каномоль иара-ншрсчеиола в I шм на I иг белка)

Длительность \ Общая . | Свободная -

лренш:убацня | активность . ( активность

0 нин (исхог.-

ная активность) . 19,90 2,05 , . 7,80 ± 0,19 .

15 игл 26,30 * 3,24 21,05 ± 1,73 .

30 мин 44,35 ± 2,49 ■ 20,66' ± 2,75

45-МЯН 36,96'* 8,57 22,22 ± 2,04 '

нпю как обцей, так и свободной активности оерпента, сопровождавшемуся нарушении« характерной для- контрольной серии временной ди-' намики» В свои- очередь, наруыевио характерной для контрольной ' серии врекенной динжии-рвободноИ и' общей активности ферментов

■ ограаалооь- на временной динамике велйтшш-' отноастш свободной ак-

■ .тиености к общей (т.е. на-дшшмвдо степени устойчивости лиэосо-мальньос мембран к длительному температурному возде.'йтзны).

Б. контроле.'мшяигмалькш величины отношенгл свободной активности ферментов':: оощзй.¿фгардШгюь на период от 15 до 30-й шн температурного воздействия па гшогенаты '(тксиналънач величина отношения, высчитанного по активности кислой дезокенрибонухдеазы, в контроле' отмочена через 30' мяк г засчитанная по -активности других . черь:еитов,- величина отношения была максимальной через 15 мин), В- присутствии бета-адредс-блокагоров после 15 - 30 шп лреинкуба-. дик валшшш отновгейчя. свободной активности к обце;:, как правило, балл' шив- коктро/.г пого уррвкя. В" таб.шт,0:3 для примера приведены.

Таблица 3

Слияние .15-мину-гкой про инкубации гшогенатов с бета-адреио-

йчокагорачк на величину отношения свободной активности йерментоа к об.ца.-: (ь црс«иигах) ( X ~ и , n = ô ).

Серии ! лпелая фос^атаза j ' Бота-галактозидаэа

Контроль j 61,Б - 4,7 i 7S,4 ±8,5

Пропраполол

(Моль):

I- • ICT5 79,6 - 8,5 28,3 ± 0,8-j(

I . ю-0 • . 37,7 ± . 59,2 - ,7,2

I • IG-7 70,0 - 5,2 47,3 ±'ID,'

I . IG-Ü • 61,3 i 3,ü . -14,1 ± 1,7

I • ID"5. . * 3,4 . 60,5 ± 12,8

А.те полол '

(Моль):

I • дг3' . , 17,7. ± 0,04 31,2 ~ 4,4

I • ИГ8 . 56,2 ± 5,6.- ..'.-. :í3,B ¿ 2,4 f:

I • пг7 13,В ¿ 0,5 ' ' -'.. 29,1 j 2,3 jfc

-I • IQ~b '■ '. 12,4 ¿ ïr5 ■%- '• .. ' -, : 7Ê.2 -.4,2 '.'■•

.1 • 1С~5 35,0 ¿,4-.S. %... ' ... ¿¿,9 ï iy.B^r

П р г. i.: с ч а н.и е.:. . rjfc '; - P-^O.Gô-,

ьоличппи .данного -от í ; с. uè jií j-.г ¿. ; te jf iuöy о по fc^fjrauoctn .хвелек* •• ХссГ-лгДил л. бйть-гайша-оздаэн» в присутствии иропеднолода. к. атй-нслада.. TScoro ъ- двух' слушрс, •й\Ш1енц0.>.в серии .с':пр0пргшСш;л«1-. .

в ¡:он.чп.1!тр:.иа;п/1\-. -1д>;ата1ш''стйршеш'Л, вксч^аш.'СТ'О но" ;

.•uvtMUioofit 'Cd. таблицу. л) а'.до ■атл1-№н.с[ЛЧ1 бета--

■ -гл?а;озэдаэы '88,3 - Sf7 % npv, контроле- 77,4 ± 1,2 ?<Co,C5) достоверно през?шалм контролышК- уро*>окь. Во всех ост.ьпып:л ссри-' ях, в присутствии любого из/четырех препаратов, lumranciaio от-того, до активноетк какого из пяти ферментов зычасязш: огяодсние, волкчшт по'оледного: через 15 - Зс мин прггинг.убгхпи: била д::бо да.-' ;se колгритяг, либо соответствовала ему. Следовательно, догКзлеязе к гомогенатам .бета-адреноблокаторов, по крайней ».¡¿ре, по фистаби-: лизкрсьало лизоерм-гий'.шё ыембранн, а во многих сл^ояя .гг.мнг.уба-. цея' с" лрегг-ipaioti сдосодавов&ш. пааююияа устрпт.плст;. лизосомаль-

• нкх МепЗран гомоге.чатов жокардй':-т£лудсчкоя,.шт:иач.;>: r..m к ло-...вроцгщ!ядему воздействия .(в дань'«! .случае - 'к порре;.--да.-э:;с;:.г.- воздев- ■ . схваа.дл2телькЬ:;.-ярчкнкуба(1й'и pj>u'S?V СК ' •

.. Под илдяшЬй.Рсех.'штырех бета-адронобдокаторсп кяглиость

• бе.та-глг'Г'.озадазн и- Йе^а-гаакгсзкдазы ¡гоиейре'тата тоцлснцкз к -

■ снг-йсснуч, a«ii's:/ocii. жолоЯ дозс'кс;фйбр1гуклеаэы. - :: увеличению, •a-'airauiocib' ;:нт;еясхка D' и кислой .^бегатазн изиенагась «с- едко-направленно.' Ьляякиз каждого бета-адр.еноблокатора- на ;;у.:ентатг_з-,пув.ггккшиос?ь ':шлр'¡цщгйедуалыше ссоСешостк. Определенное

.• сходство ¿долгая* за активность- иездедовгяшж ¡£е]л тентов проявляй - прссчтолсл.'и. ателолрл. •Пслодкак.чиштссс'гь форка-тгоФ в присутствии ' лргзделоя'а и атсполоДа имела кекрторке. различая;- но спи, как irpa-

уотгаигяисъ;. удлинением: этокооадш: гепогеиагоь с препаратами.'-

■ По наюеи^. рйллденив, '-йрактолол бил- способен вкзиватъ з-'дметшо сдвига, (в сргзиеш:и .с г.сйтрсяем) в активности ферментов сразу

. после' доСаадензит л гагло?скатам; а чтобы лсиучи'гь пс.хо;.:м: едгнгл. йермёттг.вкей актигкост :-г. присутствии 'атенслола, «рсбскаяарь ;;ре::::,;убы(ил гомогедатбз-' с-' атепололом. Вероятно, разлития во'ьлпя-' нии. препаратов на. ш:т?,вяость'лизоео?ла;а.ннх. фермеров едязаны с • • индквпдуатьниж особенностями' сега-адренс&юкаи'сров, в чаотиоста, » ' «-.rt<ywi-ypF.t№. Легки 'различая- струхгурн'отрадаотой на ¿унтши

Кааъшер, .•здрор-ютаорг.иастъ агецолола и проктолола различна, а поэтому различно к время, требуемое для проявления их одаекта при коиуактй с отологическими структурами»

Так.'м образец, бета-адренобдокаторн - неселахтив:шп проорано-лил и кардносолективние ¿лузоксолол, лракголол и иченолол - кроя-вили способность оказывать определенное влияние на активность ли-зоосодаьвис ([ерментов при добавлении к гшогенатам миокарда. Б этих условиях устранена всз!.;с;;:нссть вторичных, косвенных измене- ■ . HHii liiyiirmui лизосал вследствие бета-адоенорецетсрно-огюсредоЕбд-1Шх изменена!'. кровоснабжения, внешней работн,. метаболизма сердца,, что ыо:.;ет ¡меть место в условиям действия бета-адрекерютеоких агентов на целостный организм или дате изолированный орган/ Кроме тоге, устранена возможность изменения активности ферментов, после не опссредовашого бета-адреноределторами .яаконлешш препаратов в лпзооог.!ах (по механизму- "лрстскиой ловушки, т.е. вследствие лнзосомо'тропиэча,. вообде-то характерного для бета-эдренер-- гических ведоств); ток как для подобного .накопления требуется структурная целостности клеток С.талф , IS86} Л..С. Maelntyre; D.j. Cutler, ISOej. Ыб::аю полагать, что при добавлении бета--адреноблокаторов к гомогсдатам их влияние на активность лкзосо-ыадьшк ¿ерменгов ц процессы перераспределения активности меха/ связанным с оргаНеллаш и свободным состоянием реалжзоя'ывалось через ког.'плекособразованПо с бета-адренорецестораш,- локализовавши на лкэоссмзх. " - '.'-'', .1 .'.'.-,■•'■

3. Влияние бета-ацренос^амулшда-на активность лизоссмаль^ .шзд ферментов. ;н стабильность. лп1зос01.1ал1,111;К. мембран вн- ■ гактцогс к поврежденного. ih, vitro • , .каокарда . -

го.мтсц.'^кокарда-как' ¿зрас;."гак'' и' морских'

cüíiuck o бета-одреносачилулгфукг'лм are;¡тек ве.та к значительншл изменениям дниаышся актпвисстл лязооовглывк ферио№еов и стабильности лизог'-.мзлышх мембран в условиях лов^ с:.цоодего. лйзсссш длительного температурного воздейстапя, Ь. качестве' бета-адреностш.:улято-ра бил избоин- нонахлг.зш. В действии этого препарата ярко вира-.•¿ешгая «аза оЧла-адренос'гкаудяцна сменяется затем'фазой некоторого "ограничения" <5ста-а^фвност1ул1{рч,здие свойств i л.в.'Кавери-на и созвт,, IS3Q1. По ншш.: данным, наидоаэдн в' конечиих концентрациях I " 10 - I • líT5 í.í повшгал стабильность лйзосшаль- . них мембран (уменьшал величину отнесения свободной активности ферментов - кислой ¿¿осхатаза, ка?спсша D - к общей) в. точение 30 - 130 шш тсшерйтуркого воздействия ¡¡а галогеном. Бвло показано, что способность ношислазипа влиять на активность лизосо-. адлыдос ферментов и стабильность лигссомальнкх мембран зависит от бета-адреностай'лирупаих сз сроет препарата.' в условиях предвариТе.чь^ ной, выполненной прияязиешгс, Сета-адреиоблокадн (¡зивотнкм вводили проггранслол) влияние нон&хлазнна на ^умщкональнуи активность лизосоы при добавлении г. гомогепатш миокарда не проявляется. Частично результаты дашго;; серии экаларименгоа представлены в табл1ще 4: добавление нонахлазина в конечных концентрациях I • Ю-3 л I - Ю-3 1.1 к гомогенатам м-юкарда ..желудочков морских свинок- приводило к нарасшшэ'общей ыспшнооги.катепсина » в свежеприготовленных гомогенатах; однако в гсмогекатах, приготовленных из миокарда йквотанх, которш» предварительно вводТии бота-ад-реноблокатор, нарастания штсшое» катёасдна. в vi-tro. не произс.дло.

лромо-того,- било заказано, ч':о от предшествувдей фушсцио-яальной активности'бета-:и-(ре1юредз!-1торов живого целостного о^га-н"звд 'згшлоола -сноеойдосгь аоя.чхлазкгл не просто- влиять на шсгнв-

22 ' ' ' '•■.._ i • . ' . • ■ Таблица 4

' 'Влияние ••чонахлазина', in vitro .'на общую активность яагелск-на ® на фоне . и без пр'едв&рэтежькоН -'(ьшшнеин'ой приязненно) бега-^адренобл^ада. '. ( X ± .m , п « 6; Д s,¿qo /.мин на I г хдаяной ткани цри 45° С) .

Се о».

Активность - -

.Консоль . . ,'• - ,ч-'

Лр^тлзненкая ;. - . : ' бета-апреноблокада

■Нонахлазкн 1 •' 10"^ M .

Ноиахласшн'-1 I0~°. M ,

, Бетс-'-адреноблокада .• нонамйзгн I • ' ID~Ü ¡¿

■ Бета-здреноблокада ; . , +'. нонахлазил !-■" '1С -M

0, .32 í 0,011 ;

0,037 i O.COS 0,063 í 0,007 % ' 0.C6Û ~ C,C0£ -jfc ■ "

0,035 - 0,011 .

0,028 -, 0,007 .

..П p и м' é ч а. н.-'и.е "jf, - достоверность различия с : ',"'■•;."-.• контролем.'(. Pf^G.Ot; '

; . • носгь лизбсоиалшл.' фср.юк?0в, но'одеравать .темпы лабклк-'. •.

•зшв1И 'лцзЬсш&лв1Ш■ жмбрад в' условия;', ' температурного воздействия. На .Joh.c'11редаеству5£1ей б.6та-а;^ренсг;лрка,г^:дсбаьление «онахлазика . к тсщгьиаыл '-Мбктъогало лязооашьнке мембраны яри темпера- •. турном врзде?мдад.',./ ■•:.■• у-.,-';. •■"' "-.,".'./*',.-. ' ■ ':'..'' i ...' .' ■- ■■'. В 'целом"анализ рбзуль^а?овч'э.чспбримеи®as'ка крысах-й морс-K1U -сзущках,':Ь которых дкн^кка айтивноста ' касдах. гшфолаз изу-

чал'.чсь в гесте температурной чуьстрктчлько'сти, дал .основание полагать', что регуляция .нонЛхлазлном акдансста некоторых. ферментов лкзоч и способность .препарата сго&хлзпрояать* лазосалальные - ■ иеийршга опосредованы •беф^йфено^щй-.яорпш*■ Более того,. -хот фьле, что фар!лахокоглческЬе. ".р&штвгте". бета-адренорецепторов,' выполненное in vivo , явлке?ся. препятствием к.' проявления харак-tephcrç дли бета-здреио^?:'>.-1уля15;а 'елиЯния на .таз ос омы. при' лоследукь иш добагдевди бетн-адреноа1-о1й'.отц кто.".ВД1'бгатам ' миокарда,' указывает на участие, в' эта?, влЕЛггй'.ботагадренореце.птйровлок&-. лизопанных на- самих лизосдаах.;• ..''-'■■"• ;-.''.-•'.

•Воойце для слтуадй2,--в .kotocîSî 'бета-алрёнер?г-|еское вещество • влияет на. акглв кость лкзосс^.гщгьна-с-ферментов- и' стабильность ли-зосомалый;: мембран- (на Здотфопздьруй хдоявисють-лизоосм} миокарда in vitro. , в-частности, -в. гомогенатах, в сусяеузияк Лг.зо-соиалшо!!' фршарш., тдуАно вх^дсгавирь.'зной, механизмt чем 'комплексо-образованпе лекарственного агента,-со специфическими Mecí шли связывания непсередствекно па лльооомйрямое ¿мешате-гьство бега- --здренергпческих агентов г. процзаси |счЦюрЕЛЕ?овашя- япэобомошшх цемо'ран яекшестко,- дМоеосжИДОмоб до1-1стзке' исключается вслед—1-' ствие" нарудания структурной й^тостнсата вдвгок.' -' -.-- -'. '

4. Активность лгсоссигзшЬ: '1ер..Ь'Лтов и стазидьность лизо-cosus&mnr )."ембря!С-;з ^«t-r.-vípr?-ir.jct¡. илок&рде и у.х ш.«онянкя jipi:. Cîùsa—.-ш-д:-; .'■'.' ''.-•''

Urn. :.ioTiU!bHC:-i ; п/': 'víkc;:••!>.'а.ЯглуХсчнса- kííw 'стаби.я.ь- -нозтъ лкасссгздшк ч-в'.-1$ч*ние' hep«!.« мин

. "л-сшш.'.Ь Tac'jiiL'V? -5 ¡n.яср^сдсЬзд:*.л'двьй-'

-у/дыь::;;!-.'j^oca-saoficl' .•».хплйос*»««слагая* и чй'ллог. , .окуpiúaSKî ij^WA'ífíci'trr-^r.wjtocTb' jwjul "^рмеауои 'но-

.•'..'.■■'. - , Таблица 5

Вжяние тотально" ихм.гкп на цсосахдаему»-активность кислой а-осфагазы и кислой дезокс^фпйонуклеази киакарда -¡елудочков кркс •;•.. ■ (X ±т.)

'• .........! Дтатеявность ! тотальной ! плапш - ' ! кислое А у. ОО&штийЫ • т ЛЕНОСТЬ | кпелеш дезоконрпсю.чук-\ леази

0 мин Сне- ' ходцая ак-' тпвность) .(4) 1а, 0 ± 3,6 (4) 0,45 ± 0,13

15 мин,. Со) 60,1 \ 13,1-Г^О.Сб ' . ■ (4). ' 2,24 ± 0,22 . ?.<(з,00! '

30. мин' ■45) £Г/.с * 2,6- 45) ".С,70 ± 0,11- .

45 мин • • , . (5) ' 2о,3± 1,6 '.(5) . С,70 ± 0,05

60 мин "• ' (4) - 7,6 ' . ' С 4) -.0,24 0,03 '-

75 млн (4>. '1М- ± 5,0 ' (¿5 0,21 ± 0,С5 ■

90 !УЬ;Ь • • (5) -20,7'- 3,3 (4)' 0,22 ■!■ 0,05 --

'. й-р и.ы е'ч'а л я-еакгк^нос.тъ кислок ¡Т,ос.>а?азц выргд:е-' на в нщоколь' 'неорганического госМта- на 1 ь'г белки супбрнатанга

в I тш шкуЗацик.'пра 3.7° С, йцглгкоста кисло!: деаолскрибо'1сукло-аьи г в мжромоль- абразог;ав;щ'ася за Х.иич инкубации гдслоюраст-* воршкх нуктесидиых' фрагментов на I кг бежа супернатанта при 37° с. : .. ■;' . " . -.

... 3 скобках'-"КОЛЦЧЗСТ'БР о^аделаний. . .,;.';

' '.. Вероятность-.шШбки 'Р.вычислена да сравнении с исходной ■актпвнейтьа. .•'•■■■''.■'

шшшась через'15 ют'-ашша в 4'- 5. раз,- ':.

При этом 'пслшш переход активности кислой фосфатази и кислой . дезо. окраСонуклеазы в неосагдата^л йкиэдю щюисходил в интервале -от I5r-í: до 30-3 шн пшшш, а шояио: исходное отношение нёосаж-даег.юи шгшшсста кислой í'ucV-Дтазн к odi»;eíf (по средним тенденциям • выборок не удельной активности) составило около 24 Í, через 15 Ша — около 63 í, через 30 игл п далее.- около 100 - длх кислой дезоксирибоиуклеазц аналогичные вилачиш'отнш'таия бшш'36, 73 •. п 100 %,. ■ . - .' -

Предварительное, введений ;.п:вотигл бета-агфеноотш.тулятора но-никлазипа привело к зшеиоп m^mmaust дшшики. активности •кислой .;',ос.|,атази и кислон дезстгркбо^удаази, а такие'стабильности лпзосомтлъних ¿¡eaípaji, определяемой fie'соотнесению .мазду неседн-ментируемон и общей'активностью Jopi.ienTOB, 'в точение ОО-шнгутноИ тотальной шешш. Несмотря па разделив в ответа-; активности кисло:: а'осфатаза'и кисло:'; дешанрибофмеаэи на введение пазлнчних доз препарата (ноиахлазан вводил! в дозах 0,25 мг/кг, 0,5 мг/кг, I ыг/кг, 2 иг/кг и-2,5 д!г/кг)', вплвлыш общие тенденции, а имен-' но: дозозар.исш.юст.ь-»'ермептат^влон • активности (общая активность v обоих ферментов при' болших дозах понахлаэина - I, 2 ц 2,5 ыг/кг •<• била вша, чей при дозах, котики* I мг/кг).• и дело-пгелъкае ил» пае предварительной- бпта-адаоностглултции- на стабильность лизосо-маяышх цепбран (отсрочка ксодгкг полного перехода активности фериеагоь в нвосаг4&«едд '$ра.*циу). •■

3 TQOjaki В нр-:-;лод:л;:,: овс-дения -о влиянии нрелиркгельной бе-га-адреностш^сяцгщ цц пмхш&лемум уделвнуя ох'Шпюмь ¡:,;слсд ' дозс.{смрк&>!стйеазп в 15 zai 'тотагыюн к кадки: 'через 15 -

шн. гасшш неосаздаюшя активность ujai -всех дозах-нонахлазин^ '. бг ха пи;:« контрольны величин,' т.о..иредвергтейья'а'бажа^дрс-но--.стимуляция у:П!что;а1Ла ь контрол*, ■илт^краткое уза^пс-

' нке'кеоиаслаоиол aKTíKÍuoc'Ti: :.1лг.\ч'-ь 'иергне It- шн тотальной .

; ' Таблица 6

Влияние предварительно введенного нонахлазина на коссая-дае-муто активность кислой дезокешшбонуклеазы в тотально ишешш'ро-вашюм миокарде, келудочков ( X ± т 1 п =4-6; микромоль кислоторастворимнх' нуклеоздных (¡'рахмеитов на I мг белка сунер-наталта б I мин при 37° С)

Серии • ! Активность

j и^щщ,,. ( через 15 мин.

I •

у (0 мин шемаи) | ишемии

Контроль • 0,45 ± 0,13 . 2,24 ± 0,22

Нонахлазин: ;■ ' '.}''.'

0,2*5 мг/кг ' 0,19 ±0,01' -0,0э±0,01"

■ р<о,оог ..

0,5 иг/кг Л .'■•,' .0,28 ± 0,02 ' - 0,20 ± 0,05

■ '' '.-..:'' ' .. .'■'.'. Р.<С0,001

' Г мг/кг , 0,12 * и,03 0,17 ±. 0,01-

'-''••.'■ Т<^0,05 "'...;'.•. Р<0,Ш1. '

• 2 кг/кг 0,21 ± 0,01. . ' 0,50 0,01.

'•■'.■■ ' ? <0,001 .

Мр/::г .:'' . 1,03;± 0,3г С,96 ± 0,30

;■•'. .'''.- - д.- , .

П.р'-д'м с -Ч к.ял, е ¡". 'вероятность шибки Е вычислена', при;сравнении с-'контролем.' '■ • Г.-

. 'каемки, ";•..'.'. .• ." 1 '

При. ориентировке .на -ейткеность двух различных ^ермейтов

сптимзлыше долы, визнваэдие ослое заметную отсрочку перехода активности в -неоса^цаемую фракции, колебались от 0,5 до 2мх/кг. При сраеягировке на акткшгосп кислой 'фссфатазн заметна Стабшш-aaipiH лизссомалыпн мембран при дозе 0,5 мг/кг - в течение-S0 мин тотальной ииемии величина отношений -нессаздаемой активности к общей не достигла 100 fí. При других дозах' препарата полный переход активности кислой фосфат-азы в неосазд&емую фракции ©годен-. гался в сравнении с контроле»: при дозе-2,5 мг/кг до пёриода от 45-й до 60 мин, при доз»: 0,25 мг/кг, I мг/кг и 2 мг/кг - до периода от 60-й до-?5гй мин. При ориентировке на активность кислой дезоксирибонуклеазц доза 0,5 гд/кг -оказалась неэффективной, но зачетна стабилизация лизЬсшааьшх' ыембрац; при дозах 2 мг/кг и, особенно,, I мг/кг: при обеих' этих дозах в течение-90 мин ишемии величина оотошеикя' нсос&здябмоЯ активности к облей не достигала IDO при дозах,0,25 мг/кг-и'2,5 мг/кг момент долного'" перехода активности фермента в неосадаеиую фракцию несколько отодвигался, в сравнении'с контролен, во времени г происходил в период

от 30-й до' 45-й мин маеши. ' - - '

i . •■ ■ Таким образам, бета-адреностшлулящия,■ яшолнениай предвари-'

телыш ( ia vivo ) нонамаонпем* при- лоодедушей ОО-минутной '

тотальной пиемия миокарда сдержгаелд процесс« дестабилизации лн~

зосомалышх мембран д предотвращала- ТчЭрсировшшов' увеличение

неосаздаемой активности лаэозашьшя фер?.1е},тов'в первые 1С - 30

ийн-ш;е?,шзс'адш. ' .-.'•' '

5. Влияние бета-адрепоста ly.MitJüi ыа .активность -.лизоссадисе-1шх ферментов и стаби.ньность лизосомальшх шембран мко-. карда т фоне xvhíü- и хулерч^вствительно-гти бета-аде-.иорецепторОЕ

шменеым олстеий'''беза-дцрецорсцептор.-

-аденилатциклаза" моделировала псвториши введениями кавоткнм агонкста (десеиситизация) - к -резерпинизавдвй жвотных перед действием агснистом (сенсибилизация).. .

' Морским свинкам'вводили ионахЛаэии в дозе 2 мг/кг одно-или трехкратно (последовательно в точение трех дней). .Бали обнаружена значительные различил' штишоетк кислом фоа&агазн и кислой дезок",ирнбонуклеазы, .определенной в гомогенатах, митохондркаль- '. ио-лизоссналькых фракциях и в постммохо1щраа!шкснлизосокальной надосадочной жидкости (после центрифугирования при 2000 0g ),_ .после одного и,трех введен;:;;.нонахлаз:ша.: Так, в гомогенатах общая' активность кислой дейоксирнбопуклсазп достоверно снижалась по отношения к контролю после 'одного введении,'но не после трех (см, -таблицу 7). Различие мозку 'активностью кислой дезоксирйбонуклеазн после одного и трех введений иреяярага в гшогенатах впеокодосто-корно (t» 6,14, P<^ü.,0ö'l). В ы-Л.т0кс!УфНаЛЬЦ0-;л11300<»«0ль1101'1 .

цки мелщу ахг'пвкостью ijcptmtoa после одного и трех введений но-, нахлазкнц тшй©. зарегиетрдровайк различия, ,-.а именно:'-в случае , кислой ¿.ос^.атазц t. = 3, ?<^Q,C5; в случае кислой дезококрибо- ■ нукдеази ',. t = 2,,о65', Р в и,05. Вшо била активность .лвэосс&алыш*-¿■ерментов после трехкратного -воздействия препаратом (см." таблицу -7). Щжчалой ■ неравнозначности' йярмен'тгдканой ективцеетн после единичного к пойторкых'-действий' бе£а-2дес-ноаттптш,..в6змйлшо; ■-являйтся 'ацаптивкнэ изменения на уровне систсш "бета-адоеноре- ' цеятср'- аценматщ:-улаза". .Косвенно ято предположение подтверди.', сТся"-результатов' 'определения жтшпгастй' глисоган^осф.орплазч "а" в йдцосадочно^.-хйдкоота,- £сгулгащд которой через бега-одреаореце'п-тора известна: паралюл^ио. спредеЛлемал .активность. этб1'0.; фермента б1;ла вше - после трех введений бета-адреноагониста', как и 'актив- " ■и0сть.дв1^''кйсл1к:ги520лга. ■'.;''"■ ' ' . :■•.'■.• ■,

'• 'Сьрил' экснври.й'нт0в, в к'отбрйх iijедвар)"гсльно" резершшиза-

<

Таблица V

влияние нонахлазина на обцую активность кислой ^.ос.сатазы и кисло;! дезоксиркбояуклеази миокарда яелудочков морских свинок поело однократного к повторил* введений ( X í я , п = 4 - о)

__-,--,---!-----;-

^^ Серии \ активность : ! Контроль i "vi 1 i i i Нонахла:яш однократно - Поца^слагнщ ' трккди

Г о м 0 г е н а т

кислоп 1 .

ь.ю&Хатааи 3,2 ± 0,9 5,3 ± 2,2 • 3,5 ¿ 1,4

кислой

ДИКааи .12,8 ¿ 3,4 3,4 ± 1,1 . .12,0 i 0,6

Pj/0.05 ' Рр'-зС0'™

H и т о хонд р и а л ь. H 0 - л h 3 0 с о м а л ь н а я

фра к Ц и я

кислей

фойратазн ■ 1,2 ± 0,2 2,6 ~ 0,4 4,1 - 0,3

Л <0,05 . . Рк <0,001

Fj _3<0,CS

кислой

ДКази "2.1,8 ± 3,8 1,0 ± 0,2. 6,9 t 2,3

• Рх _з 0,05

II р и м е ч а и ire : педтвссть кислой {ос^атазк ^ссата-: а г/ паномолъ неорганично:;",го Гмин яа I. мг бсллЬ шло-'

гсаата или. ин'гохсндрг.а/а.иг—.'iíksОос.л-'^.¡.biioi-L «долзш ври о?0 Ci,

.; • .;. -зо. ' ■.

- li p'и и u ч и н л е-' (нродоллёние) к таблице 7;-■ активность кислой дезонсирлбонуклеазы - в микрограша* ДК в Г mat на Х_мг бежа гомогената ад г.штохоадфиш&.ио-лй3оаа|ашгой '¿раяц>;и. Рй - вероятность ошибки, вычисленная по, отношении к контролю.^ P¿ .вероятность ош'.бкк, внчисленкая для различий моэду значениями' активности послр. одного и трех значений нонахлазина. .

цией яшютннх моделировали ишерчувствит?йьиорть' б&та-адреиорецеп-торов к действию'агоШшта,. зшдалкена на крысах., Миокард :келудоч- , ков подвергши' тотальной шёш!. В качестве бета-адреноагоииста • использован -нонахлазпк.', .■■'.. .

. . Предварительная рез'ерпшшзацшг"не оказывала влияния ira обдую активность .кислоЛ .$ос;;';атази и 'кислой дезокскрибону^леази и не' тор-козила пароход -активности; эгш: ¿ е-рментов из. связанного с органел-ламк состояния в-носоаждасиу» ФраХцим, т.е.' сТабилизируйцего' ли- ■ . аосо'лздыше- мембраны действия у peaçpiœuà- обиаруке'но нб' было, Нонахлазкн .в дозе 0,25. мг/кг, кик :издод:ен0 выше, в условиях/ то- • 'талькой ишемии, несколько сдергашал процесс.перехода активности; • исследуеэдк .лизео'й^тенщ.м'е^ентоь :из- связанной в- неосш:дае;.:уи фракции'; '.отодвигая ысиоюг дойного выхода из связанного состояния активности шблей.лбрКюд от'tíO-i: до 75~к мм:., а кио-, лей двзскепрпб0нукле£1зц. -..на период от 3D—ïi 90 45-8'.шш (в конт-

■ роле в сбоих-случаах-момо-нт цоднога перехода активности в неосда-дармуя-на''период от -15-й.до 30т4 мин).'В дозе

' .0,25 иг/кг -npyru p'áí доояшвд. невисокуо способность ■ стабилизиро-

■ вэдь. лазоаоштшв исрб.ргйц' таШ1Уро'гтаюгоштаарда, уступая. • дозам,!' и 24ir/.Kîv, ."' ';■'■' . •-... .-

,'■.'■'. ' .'•0^шзд;с'рчетаяйе-.йредва.ри?пльной -резерлдгйзаций spue с ьведе-' ни'ум.ц^шахдазица' -в дозе'.0/-25 мг/кг 'привело'к 'сдвигам.в активн-оета . "лизосомальных '-ферч^енхов.,. ■.качестр!енЦо''отжч£ио11ГД>!сЛ 'от'-г^девдуаль-

них" елйяниЯ . резерпина а нонахлазша. в дозе .0,25 мг/кг. Сочетание • резерпшшзации о действием нснахлаэиа* (0,25 иг/кг) снизило в " ша-уде в условиях тотальной иаемпа не только^ неосаздаемую,- по ' 'и общую удельную активность кислой фссфатазы и кислой 'дезвксири-бонуклааэы. При отом й течение 20 мин пшомии. полного перехода в не-осод»ёау» фраяцн» активности кисло;; фо'сфатайц и ..кислой дезокси--" рибон&слеази не произошло-,.' Да':'.е через 90 мин-, шшыии величина от- ■ ношения неосаддаемой активности кисло!: фосфатаан к общей составила (по сродним тенденциям выборок) около 67 %, а для кислой дезхжсири-бс'иуадаазк аналогичная велпчйа бкла а« 77 %. ■ -,'•• . -

Такил -образ ом., на..фоне 1гредварптельн6й--р.езер]гийпзац>1и'"н01:а- .. хлазин в-дозе 0,25 мг/кг -оказал -действие,- апалогачное -получаемому у норездрш1низирован]и!х :глеотцых от. кг/падьзовакпя бе'та-афености-мулятора в. 'дозе I - 2 мг/кг, .Зто уг.азнвает -на корреляцию.'-мезду {.ушщаонольнш' состоящий' бет.а-адоегногафятороз. и 'стабилы.юстьа ■ лиэосокалышх мембран, в миокарде: 1{а фоне -тперчувствительностя бета-здреиорецепторов к действию-агонпста.доза' последнего, требуемая для стабклизируидбго Дизосомальшо ыембраяи. действия, ■ оказалась значительно уменьшенной.'" .-'•'" ' •.: ••'-..' ;«?

В целом. эя'сперимёитшшше свед'еыияуб действии бета-адрености-муляцип, полученние .на резершшнзирсгаашшх зиьртгаа, на активность ■ иекощжс лизосош.шшх ферментов-и, сгабгш>кссть лиэсссиаяъних мембран з миокарде,' как и ашаосачинб сведения, получгшные в. экспериментах на здвотнкх с -фар/.г.'лмлогически смоделированной толерантностью к. действтш-бета-ацреноагсшхтоз,, '-спвдателвств'уит. об : участии бета-адренерецепт>,трон -в .рзгулящш' фун^оиальн.ой -активное- -.ти лизоссы'миокарда. ^ '...'.'

^Бота-адррнореивпторы .существуют на лизосомах миокарда. Поэтому механизм влияния бета-адренергическнх средств на активность лизооомалшгх и-ернентов и стабильность лизосомальних мембран в миокарде включает, кроме прочего, этап комллексосбраэовазтя бета--адренергических агентов со специфическими местами связывания непосредственно на лизосомах, Вероятно содружественное изменение \ Футпа, .ональноЦ активности бета-адренорецепторов на поверхности кардиомиоцмов и на лизосомах, Савокушость лизосом в метке, особенно к такой метке как кардиомиоцит, занимает весьма .малый объем', .л наличие бета-адренорецеятороэ на лизосомах может обеспечивать "прицельность" действия 'бета-адренаргаческих средств на эти органеллы. Воэмо.-щс такт», что обеспечение лизосом одесюкпшм количеством ггункционирушпх -бега-адренорецепторов происходит в процессе -перераспределения бета-адрснорецепторов мезду сарколеммой и знутр::клеточнкм редепгорнш -депо дод влияние!.! регулирующих его? процесс воздействии, в том числе при бета-адренергическоП регуляции (известкой регуляции -спрколешилыюй плотности бета-ад-•ренорецепторов воздействиями бота-апренергических средств).

.-В целостном организме.6ета-ацронерг«чеокие средства де^стау-и-т на лизосоци миокарда через нескодько механизмов, так:« как лкзосшотроризм, вторичние -реакции лкзооса на беть-адрепорецеп- • . торно-саосрадоьаюше изменения крсвоскаЗаеняя, метаболизма, хуш сердца, а такхе через.спещфаческсо.хошлексообраэсванис.с' бета-адрецорецспторами, лскадазозбншОД на- сиш: лизосомах; 'в ' ■ условиях in vitro последних механизм,, по-видимому, основной, если не единственный,

• ' бьвож .

I. Бета-адренери: ческие лскарстленнке средства хшшюгна

г

функциональную акгиыюзть ллзосо\г ли-листногр и позрс-.дцешюго миокарда желудочков крис и морских свинок. Направленность и выражен-■ ность' действия бета-адреиергичесних препар'аюв на активность лизсг,о-ыалышх ¿ерментов к стабильность дпдссошлышх. мембран индивидуальны для каздсго лекарственного агента, зависят от его доза (концентрации), от походного состояния т;юааналиюй скетеш кардио-миоцитов (ввдовие, сезонные и т.д. колебания, наличие и характер повреждения миокарда)',' чувствительности бета-адронорецептороз (гипо-, штрсенсибилизация),

2. На лизосомах миокарда телудочков 'обкару.-.-.еип центр» слевд:-хпчсоиото связюшия ддащюалпринслгиа; констак?и ассошкщзза ди-

7 Г

гндроалпренодола; 1,85 • 10 X (число мест связывания равно IC7 • КГ-® мель на I иг белка) и 0,23 - IJ6 1П* (число мест сгя-

тс

эшзшшя - 343 чдаяь на I иг 1',елка),

3. Щ.'епнкуошущ га.югенатсв :.!]|(.;;арда г.елудочков с бвтв-щро~ ноблокатораып- - неселгктивни-! пропраколсли.) п хардиос«ле.:тивмшц флузодсояолом, ирактслолои и атенсллпал - в конечных гащоитрад»-ju от I ' ХОТ® до I • 10~° U нз сшдола устойчивость лгзссомолъ-Ы1Х ыеыбран к иовреадавдеыу воздеСсгь.:«. Наибольший! ацщшадуаль.Б;-m свсовниостяиц отличаюсь и.тшшкь щягпарзтсь на тшйзассть кксдод (¿.осйатази и катеиеина в . Емосте с; тем, активность бета--га^актсзидазн и о'ети-глакошадазн пр.хбркгала тсндетта к «¡шх-ц/-о, а активность кислой дезокаприбоауклеазп - к укделгеошю в пг;:сулгш1 всех четырех бета-лдоочобдокаторов,,

4. Крззысубйгоя го:.;огьнатоз мл.х-арда яедудочг.ов о бс-т-здзв «оатимудятором поьошзшы ( 2,о : 10 - I • 13 U ) плкшла усгг.дщгоость лизосжгилисх помброн девре^аэдеиу Способность но.чахлазииа in vitro ' iTi, „и:

uniля да гелхчшгу отлсл.хнля. свободной riiiM'-o-'i: •

лизосошльшлс ц«рлю:« к оЗи.еЯ, не проявлялась после предвиретгель ной, выполненной in vivo , бига-циреноблокади.

5, Предварительно введенный :::нвотш.ги иоюхлазм в дозах, 'от 0,25 до 2,5 |.:г/кг повшал устойчивость ллзосогалышх ысибран"• аиеиаоарошшого шокарда; наиболее о*$жтит№ ишзхлазин оказался в дозе I мг/кг, при г.оторол момент-форсированного перехода активности шерцентов из сея; анного с лизосоками в свободное со- -стояние сдвигался с интервала 15 - 30 мин пиемии до 75 - 90 глин. На ¿ше шстспналгпческол пщерчуЕотвителвкости бета-адренорецепто-ров для получения аналогичного го внра'.'.енности э-гаекта стабилизации лкзосоыайшк мембран тотально нсе.мизвровшшого миокарда требовалась вчетверо меньшая доза ноиахлазнна.• *

5. Прп|;свторном трехкратном введении зявотяда бета-адрено-ст:а<улятора нонахлазкна в дозе Z мг/кг (моделирование десенсигиза цк:: бета-адренорецапторон) отмечены значимие различил активности •• лнзосо:,дальних терлентов после первого и третьего введения: на :„окс развития д^соксютзадк бота-адреноредеиторов действие бета--адренссткмуляцки на активность лпзосоглалышх ферм и нт о;-; нивелировалось. ■

7. В миокарде ;кел}доч:ав крыс и морских свинок завксшосгь' активности днзосомальныл' г;:;ролаз и еса&УЯшзэтп лазссокальшас мслбран от <г у uí а; л oí: bu'O. и ci' о состояния бота-адренореценторсв обусловлена бага-а^рснородо¿ттср'Л\г. контролем лкзоссм.. действие бета-. -а~1)зноотглу.здгора нолахдагклгг. и бета~афепо5локато1.,ов дролрано-лола, ;1лузоксолола, щдотслояа и атепэлсла на лпзоос;л:.1 -миокарда опосредовано бета-адроно! ецоцторщлг., в том числе - локашзован-н.'л'и на лизссомох. - In vitro ' коьшаекоообразоваяие rfei'a-i-дренор гпчесхих средств с бзтц-адх'.:норецеп.трр»4в ,'лнзооом является основ-' ним механизмом •, влияния от 'лекарстввшшх средств на лг.зоссш, в целостном орган, зме' - одним из нескольких .

список опюашшш по та^ ,;.'Ззвртации работ

1. Влияние ношшшзнна на активность ллзосомшк Торыентсв и KpeawwJoc-JOKiumH в ткани сердечной }<шчцц кркс ври иъемни in vitro // ¿ор^олугаческая. коррелею кпслородиазис.етхх патологических состояний. Тез. докл. Иервох'о исесспз. сими. Москва, 9 -10 опт. 1984 г. — Î.I., 1064. - 0. 150 - 154.

2. Динамика активности лпзосспшс ферментов и креатш«осй:о~ киназы в ткани сердечной тэди крис. ирп ишемии "ин витро" // йвешшокие и яостгашичвски» раост.гойбгяа циркуляции: Патогенез, зкспершентачьпая фармакотерапия. - Кемерово, 1004 - С. 81 -85.

3. изменения стабильности лпзсоолапышх мембран в гомогена-тах ткани iкокарда крыс в присутствии нонахлазила // Материалы Третьей науч. копЬ. молодых учет:* ленинского р - на г. Кемерово» Октябрь 1Э84. Тез. докл. - Кемерово, IS54. - С. 73 - 74.

4. Возможности влеише:; рсгуллфш структуры и функций лпзо-ссы: Фармакологические влияния на г^ онпцае^ссть лизосомалышх мембран шемизкроваиного миокарда // Саркакол. • и токсикол. -1985, - 46, J« 2. - С. 121 - 125 (в соавт. с A.B. Саиояховш). к

5. Влияние нснахлазпна на температурную чувстз'ительноеть лизосо-малвнкх мембран сердечной микцм крас in vitro // Зормакод. и тсксикол. - 1965. - Т. 46, ;f 3. - С. 41 - 45.

6. Активность лсэосонзли&к -Хсдг.оптов сердечной шшцц при симуляции и блокада Оетхчифекорепыясроз // Материал; Четвертой науч. коне. ислодтс jw-tœc "енмгского р - на г, Кемерова. Сентябрь IS85 г. Тез.; дс;;д. - Кеки^ово, 1Э5Ь. - С. 85 - 87.

7. Влиякке разлвчяк.: доз взоумшото нонахла-зина на прозицд«.кчш> лазеошальшк мембран и креатинаосрокипаз'-' иуэ активность ъжокгрда ггркс в уолс.-иях ипеши in vitro *

// Da«, Сибирского-отд - iùn Ш ;СГ. - £986 . - 'Л 6. - С.' 71 -75. ■

а..

• 8. Влияние кратности воздействия новодршгом на метаболизм" Миокарда у крас. П., I96S. -8 с. - Депонир, в БШШТИ 04,09.86, 6477 - В (в соавт. с -A.B. СацовковюО. ■ .

9. Действие иояахлазлна на активность креатияфосфшсшшзн, • * кислой фосфатази- и стабильность ллзосомних мембран ишемпзкрован-пого миокарда крыс после предварительной -резертшизации // Фар-макои токсглсол. - 1366. - Т. 49, Л 4. - 0. 77 - 81. '

10. Активность лизоссьплышх ферментов миокарда при бета--алрсиостпмуляцйм // Структура и функции лю ос ом. Тез. докл. Третьего Воесоюз. спмп. Тбилиси, 17 - 21 ноября 1986 г. - М.,-1985. - С. IS4 - IS5.

11. Ферментативная акт.чглюсть миокарда .под влиянием ацронер-гичоских свозаейотвий'// Научно-технический прогоесс и здрпвоохра» некие Кузбасса.раГ2, часть I. - демерово, ХУие, - О'. öi! -. 8о.

.12.' Влияние нонахлазпна" на ферментативную активность миокард: в. р'шличних 'экспериме1каг.ът:х условиях //Научно-технический ггсог-рвсс к здравоохранение Кузбасса. Тез,-докл. к Одиннадцатому съезду врачей Кузбасса, Том 2, '¡леть I. - Кемерсьо, I9B6, - С. 277 -280. '

13'. Действие нонахлазпна на активность катеасина В и стабиль' кость лизосшальных мембран иибкарда жед}дочков морских свинок на фоне -предварительной блокада бета-адреяорецеяторов // Еш. Сибирского отд.- ния Ш СССР. - 1287. - й 3. - С. 78 - 01.

14. -Действие нонахлазлка на активность кислой двзоксирибо-нуклеаэы и стабильность лизсеомниг мембран илемизирозанного дао-карда крыс, после предварительной резерпинизации // Кровообраде-' ние. - IS87. - Т. 20, й 5 - 8.

•' 15. Экспериментальная '-армакологическая регуляции адреноре-келгоров тюк^д-х атототж. -и -солутстауэдие катехолампноэые по-' .-ре.тлениа сердечной пншци /,"' ¿»ричкод. и гокоздоя. - 1937. - •'• ■ v. 50, 4. .- С.'. 1ЭЗ '-' III.

16. Влияние адренергических средств на ферментативную активность миокарда морских сванок. М., 1067. -10 с. -Депонир, в ВШГЛ 12.01.87,, В 241 - В67. . "' . ' "

17. О-действии бета-адреномаметпков на степень повреждения Ллзосомалшк мембран и глнкогенросфорилазнуи активность в миокарда желудочков'морских увипон // ¿-армакол.. и токсикол. - 1988, - Т. 51, Я 2. - С, 59-61.

18. Зависимость .активности кислоД фос^атазы и гликогенфосфо-рилазы миокарда морских свинок от величины дозы бета-адреноблока-тора // Кровообращение.'.- 1968, - Т. 21, й 2. - С. 22 - 23. .

19. Экспериментальная рефляция активности лйзосдаалышх ферментов и проницаемости лизосомальних мембрац миокарда бета--адренергическими веществами // Фармакология и научно-технический прогресс. Тез. докл. Шестого ¡¡сесонз. съезда фармакологов. 25-27 октября. - Таии;еит, 19Б0. - С. 363 - 364.

20. Влияние экзогенной аценозкнтрифосфорной кислоты на содержание макроэргоь, активность лизосопальных ферментов' и проницаемость лизосомальнцх .мембран в-повреждением миокарде крыс (реферат депонир. статьи; полный текст статьи депонир. во ВНИШИ) 0 // Кровообращение, - 1980. - Т. 21, 5. - 0. 55 - 56.

'21. Специфическое 'связывание дагндроаяиреиояола и хинуклвди-нила бензилата с- лизосшалн миокарда // Фарыакол. и-токсикол. -1989. - Т. 52, .'(■ 5. - С. 23 - 31 (в соавт. с В,И. Томилонко),

- 22.' Действие впе.сеиа на активность кислой ¡¡ос^атазн и содер-'валив калия в мнокардо крыс // Ишемия;', датофизиолохические и фармакологические аспекти.Кемерово, 19Й9. - С. 66 - 63.

23. Действие .здринерА'пчзских. всдеств на- характер корреляционных связей тту уроошеш актаяиссти лизосоодлышк, и не-|п-зосо-лалышх ферментов в миокарде морских свинок // Ишемия: нато- -физиологические и йаркда-Логическис аспекты.Кемерово, 1939» -' С. 63 - а;. ■

' 24. Активность лизосонплышх ферментов миокарда бодрствую- ■ щкх крыс с коронароокклнзкошюй ишемией миокарда // Ишемия: патофизиологические я фармакологические аспекты, - Кемерово, 198$.. ■ , - С. 69 - 74 (в соавт. с В.Л. Томиленко, Й.Г, Хадиулиным). •

25. Влияние адренергичоских средств на уровень внеклеточного калия в норме и при ишемии (инфаркте) миокарда // Фармакол.'и ■ токе"чкол. 1990. - Т. '53, 2. - О. 75 - 80. •'