Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Формирование и регуляция сократительного аппарата и фармакологической реактивности миокарда при дифференцировке и в условиях патологии сердца

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ АВШНСКСЙ ССР ИНСТИТУТ КАРДИ0Л01ИИ им. ак. Д.А.ОГАНЕСЯНА Специализированный совет Д.075.01.01

-■КЗ

На правах рукописи

ГЕВОШЯН РУСЛАЙА АСИЛОВНА

УДК 616.12-079.4-092; 612.17:615.21/.22

ФОРМИРОВАНИЕ И РЕГУЛЯЦИЯ СЖРАЖГЕШЮГО АППАРАТА И ФАНШОЛОШЧЕСКСЙ РЕАКТИВНОСТИ МИОКАРДА ,ПШ ДИФФЕЕЕНЦИРСЕКЕ И В УСЛОВИЯХ ПАТ0Л01Ш СЕРДЦА

(клинико-экспериментальнов исследование)

14.00.06 - кардиология 14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

ЕРЕВАН - 1989

Работа выполнена в Институте кардиологии им. акад. Л.А. Оганесяна Минздрава Армянской ССР.

Научный консультант: доктор биологических наук,

профессор ОГАНЕСЯН С.С. Официальные оппоненты:

- член-корр. АН ГССР, доктор медицинских наук, профессор Н.И.ТАТИШВИЛИ

- доктор медицинских наук, профессор Р.Г.ЕОРОЯН

- доктор медицинских наук Р.С.ГАБРИЕЛЯН

Ведущая организация, давшая отзыв о научно-практической ценности диссертации - НИИ кардиологии им.ак. М.Д-.Цинаццзгвришвили МЗ Грузинской ССР.

Защита состоится " "_ 19 г. в 13 часов на

заседании специализированного совета Д.075.01.01 по защите докторских диссертаций при Институте кардиологии им.акад. Л.А. Оганесяна МЗ АрмССР (375044., г.Ереван, ул.П.Севака, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан " "_ 19_г.

Ученый секретарь специализированного совета

к.м.н.,с.н.с. Н.Х.ГРИГОРЯН

ч

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Актуальность теш. Последние годы характеризуются значительными успехами в исследовании патогенеза, фармакотерапии и совершенствовании методов диагностики заболеваний сердечно-сосудистой системы, обусловленными достижениями в области молекулярной кардиологии, клинической медицины и фармакологии (К.Г.Адамян и соавт., 1985; Р.Г.Бороян, 1981; А.П.Голиков и соавт., 1983, 1986; H.AJCa-верина и соавт., 1984; Ф.З.Меерсон, 1985, 1987; Н.М.Мухарлямов, 1978; С.С.Оганесян, 1972, 1975; Е.И.Чазов, 1982, 1985; И.С.Чекман, 1982, 1984; В.Б.Чумбуридзе, 1987; Freilincb et sa , 1982; Hoffman Lefkowifcz , 1982; Swynghendauw ( jg83, 1986).

Особое внимание уделяется изучению клеточно-молекулярных механизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний на основе анализа функции миокарда от состояния сократительного белкового аппарата вплоть до целостного регулирования мышечной клетки. Отсутствие системных данных, скорректированных синхронным изучением биомеханических характеристик сердечной мышцы и изменений в изопро-теиновом составе мисфбриллярных белков и их протеолитической активности затрудняет оценку выявленных сдвигов. Решение этой задачи обусловлено выбором соответствующих уровней исследования с учетом узловых моментов структурно-функциональной организации мышечной клетки.

Несмотря на значительные успехи, проблема лекарственной терапии и профилактики сердечно-сосудистых заболеваний остается одной из наиболее актуальной для современной кардиологии. Для решения последней необходимы не только новые подходы к расшифровке механизма действия известных препаратов, но и теоретическое и практическое обоснование причин резистентности к кардиотропным препаратам при определенных патологических состояниях.

В последние годы появились данные, что вследствие изменения

биомеханического режима работы сердца в результате повышения напряжения как при гемодинамических нагрузках, так и в условиях онтогенетического роста, наблюдается изменение свойств мембран, что в свою очередь может оказать влияние на хемочувствительность и реактивность к кардиотропным препаратам (Ю.ВЛостнов, С.Н.Орлов, 1983; Д.Ж.Загтер, В.Панчина, 1980; Limas et al-, 1981; Pernolef Maria , 1981; Lefkowitz , 1980, 1982; bewitzki , 1986 и др.). В этом случае для клинической кардиологии приобретает важное значение исследование изменений в клеточной мембране в патологических условиях, в том числе, нарушения в рецепторных и других белках мембран ввиду высокой интенсивности их обновления.

Остаются также не выясненными и вопросы взаимосвязи между изменениями фармакологической реактивности и сократимости при патологии сердца. Исследования лаборатории молекулярной кардиологии Института кардиологии МЗ АрмССР на протяжении ряда лет были направлены на изучение этой проблемы. Было установлено, что Са^+-связыва-ющие белки миофибрилл способны рецептировать гормоны (С.С.Оганесян, 1967), а также, что адренергические агонисты и антагонисты при взаимодействии с Са^+-связывающими белками миофибрилл вызывают в них конфорадционные изменения (С.С.Оганесян, С.Б.Баринян, Ж.С. Давтян, 1976). В таком случае определенные нарушения в нормальной структуре и молекулярном составе как клеточных мембран, так и самого сократительного аппарата могут привести к извращению или изменению их реактивности к подобным соединениям.

В настоящее время резко возрос интерес к заболеваниям сердечной "итптти неизвестной этиологии - кардиомиопатиям (КМП), среди которых значительная доля приходится на ее дилатационную форау (ДОИ), характеризующуюся именно резким снижением сократительной функции миокарда и резистентностью к фармакотерапии, неблагоприят-

ным прогнозом. Вместе с тем, эта форма К!Ш представляет наибольшие трудности в диагностике и дифференциации от ряда сходных заболеваний - ИБС, миокардитов, гипертонической болезни, клапанных пороков сердца.

Разумеется, успешное решение различных аспектов этой проблемы связано с изучением механизмов нарушения сократительной функции и фармакологической реактивности. Актуальность разработка доступных

методов дифференциальной диагностики ДОЛИ, а также фармакологичес-

/

кой коррекции очевидна, поскольку патология эта обнаруживает все больше тенденции к росту и распространению почти во всех регионах мира, поражая чаще всего лиц (в основном мужчин) молодого, творчески активного возраста. Поэтому поиск простых неинвазивных, информативных, взаимодополняющих критериев диагностики, пригодных для широкого использования, особенно при скриннинговом отборе больных ЛКМП, наряду с разработкой методов оценки индивидуальной реактивности больных к фармакологическим препаратам, представляет первоочередную задачу практической кардиологии.

Все вышесказанное послужило основанием проведения комплексного клинико-акспериментального исследования.

Цель работы - изучить клеточно-молекулярные механизмы формирования и регулирования сократительного аппарата, адренореактивнос-ти и хемочувсгвительности кардиомиоцитов в зависимости от изменения функциональной нагрузки сердца (в онтогенезе и при экспериментальной гипертрофии и кардиомиопатии); использовать полученные данные для разработки и внедрения в практическую кардиологаи новых методов биодиагностики и оценки индивидуальной фармакологической чувствительности больных с сердечно-сосудистой патологией.

Основные задачи исследования. В соответствии с поставленной целью предусматривалось решение следующих задач.

1. Разработать рад методических приемов и подходов в исследовании клегочно-молекулярных механизмов формирования и регулирования сократительного аппарата и фармакологической реактивности (адрено-реактивности и Са2+-чувствительности) кардиомиоцитов в зависимости от функциональной нагрузки сердца.

2. Изучить изменения параметров сокращения кардиомиоцитов,изо-протеинового состава миофибриллярных белков, АТф-азной и катепси-ческой активности миофибрилл.а также формирование Са^~пеРенося-щей системы в миокарде в зависимости от функциональной нагрузки сердца (онтогенез, гипертрофия и кардиомиопатия).

3. Исследовать механизмы изменения адреночувствйтельности и ее регуляции в зависимости от функциональной нагрузки сердца в Експерименте, и определить роль Са2+-связывающих белков и этих процессах.

4. Разработать и апробировать метод диагностики сердечно-сосудистых заболеваний (в частности ДШ1) с использованием биотестов (культуры сокращающихся фрагментов миокарда, сыворотки крови больных и ее фракций).

5. На основе анализа и систематизации данных об индивидуальной чувствительности к кардаотропным препаратам в тест-объекте (культура сокращающихся фрагментов миокарда и сыворотка больных дан) выявить возможность использования теста для определения реактивности больного к кардиотропным средствам.

Работа является плановой, выполняемой в рамках научной проблемы 07405 17 Н2 "Регуляция адренореактивности мембран миокарда и эритроцитов в условиях сердечно-сосудистой патологии", № гос.регистрации 01.84. 00.23. 230.; 0.69.01. 01.02.02. "Установление действия нейтральных мышечных протеаз на состояние мембран миокарда е эритроцитов", $ гос.регистрации 01.84. 00. 23. 233.; 0.69.01.

05 . 06 . 02 ,Н "Определить диагностическую значимость современных клинико-инструментальных, иммунологических и биохимических методов диагностики кардиомнопатий для учреждений практического здравоохранения", № гос.регистрации 01.87.00.02.316., а также Всесоюзной целевой программы "Фармакология кардиотонических средств", утвержденной Постановлением Президиума АМН СССР № 197 от 06.05.1981 г.

Научная новизна. Разработаны и модифицированы способа культивирования и регистрации параметров сокращения клетск и фрагменте® миокарда в культуре in vitro на основе фотоэлектрического принципа; определены критерии, дающие возможность изучить сердечный автоматизм на клеточном уровне, хемочувствительность и адрэнореак-тивность.

Разработан метод, позволяющий воспроизводить функциональную нагрузку сердца куриных эмбрионов и цыплят, приводящих к развитию гипертрофии шокарда. Определены условия и критерии, значимые для интерпретации данных, полученных в условиях, имитирующих гравитационную перэгрузку.

Впервые проведено исследование клеточно-молекулярннх механизмов формирования сократительного и адренорецепторного аппарата кардиомиоцитов на основе изучения изменений параметров сокращений кардиомиоцитов, изопротеинового состава, катепсической активности миофибрилл, адренореактивности и хемочувствительности а зависимости от степени функциональной нагрузки сердца: при дифферен-цировке, экспериментальной гипертрофии и кардиомиопатии.

Выявлено, что процесс формирования сократительного аппарата при изменении биомеханического режима работы сердца сопровождается сближением белкового состава миокарда и быстросокра¡дающейся скелетной мышцей со значительным ростом протеолитической (катстез-ческой) активности миофибрилл, что особенно выражено при зкеперк-

ментальной кардиомиопатии.

Изменение режима сократительной деятельности миокарда в условиях сердечно-сосудистой патологии отражается на интенсивности синтеза Са^+-связывающих белков (ТН-С и ЛЩ), что указывает на зависимость формирования Са^+-переносящей системы в миокардаальных клетках от режима работы сердпд.

Показано, что в формировании адреночувствительности и в механизма изменения транспорта Са^+ принимают участие Са2+-связываюЕдае белки, локализованные в мембранах миокарда. С этой целью впервые

о I

использовалась Са -активируемая нейтральная мышечная протеаза для разрушения Са^+-связывающих белков мембран клетки; определены условия их применения в качестве ферментного модификатора специ-фачбских структур для анализа реактивности к различным кардиотроп-нш препаратам.

Определена возможность использования метода анализа физиологических параметров сокращения миокардиальной культуры в практической медицине для дифференциальной диагностики ДШ1 в клинике на основе ингибирования сократимости фрагментов миокарда куриных эмбрюнов сывороткой крови больных.

Впервые на основе анализа и систематизации данных об индивидуальной чувствительности к кардиотропным препаратам в культуре ткани миокарда в присутствии сыворотки больных ДОИ выявлена возможность использования теста для определения реактивности больных к карциотропным срздстваы.

На основе комплаконого исследования механизьв действия вазоди-дататоров- в целостном организмо, на клеточном уровне и на молекулярном уровне - показано, что в механизме кардиотропного действия известных вазодилататоров функциональное состояние уЗ -адреноре-цепторов роли не играет.

Практическая ценность работы и реализация результатов исследования. Теоретическое значение совокупности полученных результатов указывает, что изменение режима работы сердца имеет значительное влияние на генетически строго обусловленные процессы формирования сократительного аппарата и хемочувствительность. Практическая ценность работы заключается в разработке новых методов и тестов, которые могут быть использованы в экспериментальной и клинической кардиологии и фармакологии.

Предлагаемый метод диагностики ДКМП с помощью разработанного биотеста позволяет распознать одну из тяжелейших форм кардиоадопа-тий - дилатационную, до настоящего времени трудно диагностируемую. Создавая возможность экспресс-диагностики и оценки тяжести заболевания, метод позволяет провести современную коррегируюцую терапию, а также уточнить пропГоз заболевания, существенно сократить время, необходимое для постановки правильного диагноза, выбрать направление дальнейших инструментальных и лабораторных исследований, не прибегая к помощи труднодоступных, дорогостоящих и опасных инва-зивных методов. Способ целесообразен и при проведении шссовых исследований для выявления ДКШ, с целью ее профилактики. Практическая ценность этого метода отражена в заявке на изобретение "Способ диагностики дилатационной кардиомиопатии", на которую получено положительное решение из ВНИШШЭ от 29.11.1987г., в рационализаторском предложении "Способ экспресс-диагностики ДКШ с помощью сыворотки больных и культуры ткани" от 28.03.1988 г., а также в методических рекомендациях "Метод дифференциальной диагностики дилатационной кардиомиопатии (ДКШ) с использованием культуры ткани эмбрионального миокарда и сыворотки крови больных".

Предлагаемый метод культуры ткани с регистрацией параметров сокращений кардиомиоцитов и фрагментов миокарда, наряду с примене-

ныег.1 Са2+-связываащего белкового комплекса (ТН-1М) - как "модели ргцаптора", позволяет анализировать роль рэцептороз в механизме действия физиологически активных вещзств. Практическая данность ггото катода отражена в изобретении "Способ наблюдения за пульсацией объекта", защищенным авторским сэидэтельством СССР от 1970г., в глгиеднческой рско«ацдацЕа "Эксперамэнтадьноа (фармакологическое) псучоиао новых препаратов, предлагаемых для клинических испытаний е качество кардаотонлче ских средств", утвэрвдекной Фармакологи-чссеш коз-згеток МЗ СССР в качество офктщального документа (1988) „ а гакке в рационализаторском предаокекщ "Модификация способа набдвдшЕя за пульсацией объекта" от 1981г. Кроме того, этот ызтод был попользован в совместных работах о ЕШШХС Мшшэддрощ СССР, что отракзпо в шущо-тежшчаоком отчете лаборатории за 1979 г. по то.'.й "Иешгеаннэ мышчпого белка тропонинз в качестве бета-рэцаптора с цзлыэ разработка метода отбора кардаотонических срадств".

Результаты исследования клэточно-тлакулярных механизмов фор-шровакия сократительного аппарата швд разного фбнотипа, в том число и киокарда, :а такта рецепторпой функции кардиомиоцитов в условиях кратковрэызансй гравлхационной перегрузки вопки в комплексную програи5у по изучению влаянзя факторов космического полета на развятаа органика и отражены в научно-техническом отчете хоздоговора о Институток медико-биологических проблем МЗ СССР(1978), а такео в опубликованной коллективной монографии "Биологические аоогадозанш на орбитальных сташрях "Сам/г" (Москва, 1984).

Птйяоатм. По тема диссертации опубликовано 38 печатных работ, 2 штодячасташ рекомендации; получено 3 удостоверения на ра-цазадаваторское предлоканне, одно авторское свидетельство на гзобрзгезЕЭ е одно положительное равзниз на авторскув заявку на

изобретение.

Апробация работы проведена на заседании ученого совета Института кардиологии им.ак. Л.А.Оганесяна 5 апреля 1989 года.

Материалы по теме диссертации доложены и обсуждены на: П и Ш Всесоюзной конференциях молодых ученых кардиологов (Ереван, 1974; Каунас, 1975); У Всесоюзном симпозиуме "Биохимические и биофизические основы мышечного сокращений" (Киев, 1977); Советско-Американском симпозиуме по метаболизму миокарда (Сочи, 1975); конференции женщин-ученых Советской Армении, посвященной 60-летию Великой Октябрьской социалистической революции (Ереван, 1977); I Всесоюзном симпозиуме "Теоретические и практические проблемы молекулярной кардиологии" (Москва, 1978); Ш Всесоюзной конференции по биохимии мышц (Ленинград, 1978); IX и X Конгрессах Международного общества по изучению сердца (Ныо-Дели, 1978; Москва, 1980); П Всесоюзной конференции "Молекулярные механизмы проницаемости мембранных структур" (Паланга, 1979); I съезде кардиологов Армении (Ереван, 1980); отчетной сессии Института кардиологии МЗ АрмССР "Некоторые актуальные вопросы, разрабатываемые в институте"(Ереван, 1981, 1985); I Всесоюзном биофизическом съезде (Москва,1982); П симпозиуме советской секции по изучению сердца "Метаболизм, структура, функция сердечной клетки" (Ташкент, 1983); У Всесоюзном съезде фармакологов (Ереван, 1982); Всесоюзной конференции "Влияние факторов космического полета на наследственность и развитие организма" (Москва, 1979); УП симпозиуме "Биофизика и биохимия биологической подвижности" (Тбилиси, 1983); конференции по проблемам физико-химической биологаи и биотехнологии в медицине (Ереван, 1984, 1986); республиканской конференции "Макромолекулы и функционирование мышц" (Ереван, 1986); УШ симпозиуме по биохимии и биофизике биологической подвижности (Пущино, 1987); конфе-

ренции "Новейшие достижения биотехнологии в республика и пути их внедрения" (Ереван, 1989).

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 295 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, включая собственные методы исследования, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов , практических рекомендаций. Работа иллюстрирована .25 таблицами, 39 рисунками. Указатель литературы состоит из 530 источников, в том числе 158 отечественных и 372 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Введение - автор аргументирует актуальность, научную новизну, практическую ценность работы, ст-азит цель и задачи исследования.

Первая глава работы - обзор литературы "Современные представления о клеточно-молекулярных механизмам регуляции сократительного аппарата и хемочувствительности в различных условиях функционирования сердца (онтогенез и адаптация к рабочей перегрузке)" состоит из пяти подглав. В первой - "Морфо-фушсциональные аспекты формирования сократительного аппарата" - анализируются данные, касающиеся динамики формирования сократительного аппарата в разные периоды онтогенеза и при адаптации к повышенной нагрузке, приводящей к развитию гипертрофии миокарда. Во второй - "Изменение изопротеино-вого состава миофибрилнярных белков в процессе формирования сократительной функции шокарда в онтогенезе и при повышенной нагрузке"-приводятся данные о зависимости между изменениями физиологического режима сокращения в процессе онтогенетического развития и при адап-

Выражаю искреннюю благодарность дсжтору биологических наук, профессору С.С.Оганесяну за постоянную консультативную помощь при выполнении настоящей работы.

тации к рабочей перегрузке и белкового состава миофибрилл. В третьей — "Протеолитическая активность мышечных белков в условиях онтогенетического формирования сократительного аппарата и при адаптации к рабочей перегрузке" - рассматривается роль протеолитичес-ких ферментов (мышечных Са-активируемых нейтральных протеаз и кислых катепсинов) в регуляции функции сократительного аппарата н хемочувствительности клеток в условиях сердечно-сосудистой патологии, указывается на возможность эпигенетического пути изменения белков миофибрилл после их синтеза в результате активирования Са^+-зависимых нейтральных мышечных протеаз, как одного из механизмов в регуляции изопротеинового состава миофибриллярного аппарата при адаптации сердца к перегрузкам. В четвертой - "Регуляция сократительной и рецепторной функции миокарда в онтогенезе и при адаптации сердца к рабочей перегрузке" - освещаются механизмы регуляции адренореактивности в условиях онтогенетического роста и при нарушении функции сердца во взаимосвязи с изменением сократимости миокарда, определяется роль Са^+-связывакщих белков, как каналоформеров в мембранах при изучении адреночувствительности и Са2+-транспортной функции кардиомиоцитов. В пятой - "Культура клеток и ткани миокарда в исследованиях сократительной функции, адренореактивности и хемочувствительности кардиомиоцитов" - рассматриваются возможности использования метода культуры ткани и клеток миокарда в экспериментальной и практической кардиологии, а также фармакологии сердца.

Вторая глава - "Материал и методы исследования" - посвящена характеристике экспериментального и клинического материала и лабораторным исследованиям, включающим физиологические, морфологические, фармакологические и биохимические методы. В качестве экспериментального материала использованы куриные эмбрионы и цыплята

порода Леггорн в.равные сроки онтогенетического развития - всего 5000 шт. Белковые препараты (тропонин - ТН и тропомнозин-тропони-новый комплекс - ТМ-ТН), а также Са^-актнвируешя нейтральная мышечная протеаза выделялись из миокарда кроликов (50), собак (6) и белых крыс (50) и использовалась в фармакологических исследованиях. В работе приведены 2 экспериментальные модели рабочей перегрузки сердца: I - предложенная соискателем (Геворкян P.A.,1979; Геворкян P.A., Заминян Т.О., 1984), основана на повышении гемоди-намической перегрузки, путем центрифугирования куриных эмбрионов при 1 у- (172 об/мин) в течение 10 дней, начиная с II дня развития и до вылупления цыплят, по 20 мин ежедневно, на специально сконструированной им приставке к центрифуге. Гемодинамическая перегрузка приводила к развитию гипертрофии миокарда. Использовано всего 570 эмбрионов и цыплят; 2 - основана на методике Варбано-ва, Волленборгера (1973), при которой повышение механической нагрузки на сердце куриных эмбрионов достигалось изменением метаболизма при снижении температуры инкубирования куриных эмбрионов с II дня развития до вылупления цыплят в течение 10 дней (с 37,5°С до 34,0°С). В результате развивалась кардиомегалия, появлялись застойные явления в сердце, напоминающие кардиомиопатшо. Всего использовано 389 куриных эмбрионов и цыплят. В контрольных группах обоих моделей использованы 1100 куриных эмбрионов и цыплят. Наличие гипертрофии подтверждалось гистологическими препаратами, скрашенными гештоксилин-эозином. Степень гипертрофии миокарда расчитывали по сердечному индексу; проводилась также микрометрия в культуре по методике Волленбергера и йлле (1968) и фа-зово-контрастное микроскопирование - определение типов клетск. Сократимость в хемочувствательность изучались в опытах на культивируемых кардио:.иоцитах, кластерах и эксплантатах миокарда куриных

эмбрионов как в процессе онтогенетического развития в разные периоды дифференцировки, так и в двух экспериментальных моделях перегрузки сердца. В качестве среды культивирования использовали среду Игла ( Eagl , 1955) или среду 199, рН - 7.2-7.4, с добавлением ex temgre лошадиной или бычьей сыворотки и глютамина. Культивирование осуществляли в специальных камерах из плексиглаза, или предметном стекле с луночкой по методике Геворкян Р.А.(1971). Регистрацию параметров сокращения клеток и фрагментов миокарда проводили фотоэлектрическим методом (Геворкян P.А., 1971) в новой модификации установки (Геворсян P.А., 1981). Исследование участия

Са^+-связывающих белков в механизме модулирующего действия адрэнер-

р,

гических веществ и трансмембранного переноса Са проводили с использованием очищенного тропонина и тропомиозин-тропонинового белкового комплекса. Определялось участие этих белков в формировании адренергической чувствительности мембран кардиомиоцитов при их взаимодействии с клетками в культуре. Са2*-ахтивируемая нейтральная мышечная протеаза выделялась из миокарда кроликов и крыс по методу iodici et al (1972), активность фермента определялась в модификации Dayton et al(1976, 1979). Она использовалась в качестве ферментного модификатора для специфического разрушения Са^+-свя-зывающих белков мембран и миофибрилл с целью выявления их роли в реакциях на различные ритмо-инотропные агенты при оценке адрено-реактивности и Са .-чувствительности в культуре клеток и фраментов миокарда.

С целью характеристики сократительного аппарата миокарда в условиях онтогенетического роста и при адаптации к рабочей перегрузке в обеих экспериментальных моделях патологии, наряду с изучением параметров сокращений проводился электрофоротический анализ белкового состава миофибрилл, определялись АТФ-азная и катеп-

сическая активности и сопоставлялись с таковыми в скелетных мышцах разного фенотипа. Выделение общих миофибриллярных белков осуществлялось согласно Katagiri , Morkin (1974). Актомиозин выделяли согласно Reddy (1972), Ug- -АТФ-азную активность определяли по-тенциометрическим методом и колориметрическим методом ( Хоигу , Lopez , 1946). Активность кагепсинов Д в миофибриллах миокарда и мышц разного фенотипа определяли методом Anson (1977). Миофибрил-лы выделялись методом Perrie (1970). Содержание катехоламинов (норадреналин и адреналин) в миокарде определяли спектрофлюорометри-ческим методом на спектрофлюориметре шрки "Фарранд" (США) согласно Э.Ш.Матлиной и Т.Б.Рахмановой (1969).

Результаты экспериментов обработаны методом вариационной статистики с использованием критерия t ; значения р • меньше чем 0,05 принимались в качестве показателей существенного различия между сравниваемыми величинами.

Клинический материал представлен 148 больными с различной патологией сердца: из них 58 - с ДОН; 20 - с ревматическими пороками сердца, НК П и Ш степени; 20 - с ИБС, стенокардией напряжения, постинфарктным кардиосклерозом; 30 - с острым инфарктом миокарда (ОИМ); 20 - с миокардитом (ревмокардитом). Контрольную группу составили 20 здоровых лиц. Среди обследованных больных преимущественно были мужчины (9С$) в возрасте от 25 до 50 лет.

С целью разработки метода дифференциальной диагностики дила-тационной кардиомиопатии (ДОИ) на основе биотеста использовалась культура стабильно сокращающихся фрагментов миокарда куриных эмбрионов и сыворотка пациентов. Культивирование фрагментов миокарда производили заблаговременно ( за час до воздействия сыворотки больных). На начальном этапе работы первые 10 проб сыворотки исследовали у больных с установленным диагнозом ДОН (по клиническим,

эхокардиографическим, подтв ержденными в дальнейшем и секционннш данными), затем проводили эксперименты с закодированными пробами крови, с последующим сопоставлением с данными клинико-инструмен-тальных методов исследования. Принцип метода заключался в выявлении кардиоактивности сыворотки крови больных по показателям сократимости фрагментов миокарда в культуре. Результаты теста оценивали качественно и количественно: расчитывали изменение амплитуды, частоты сокращения, время появления аритмии, или прекращения сокращений. Наблюдения за изменением сократимости фрагментов миокарда проводили в течение 20 минут. Тест заключается в следующем: 0,1 мл сыворотки больных вводили в культуру со стабильно сокращающимся фрагментом миокарда. Регистрацию параметров сокращений проводили спустя I, 5, 10, 15, 20 минут, после введения сыворотки. Исходная частота сокращений принималась за 100%. Для каждой пробы сыворотки проводили не менее 3-5 экспериментов с целью получения достоверных результатов. Для определения индивидуальной чувствительности к фармакологическим препаратам проводился биотест чувствительности сокращающихся фрагментов миокарда в культуре к препаратам в присутствии сыворотки больных.

В основном биотесты ставились при поступлении больных в клинику. Из обследованных больных с предварительным диагнозом ДКШ на основе клинико-инструментальных данных исследований - у 22 наблюдалась выраженная рефрактерная стадия недостаточности кровообращения (НК - П, Ш, 17 степени) с нарушением ритма и проводимости, гипотонией, выраженной кардиомегалией и дилатацией полостей; у 16 больных наблюдалось стабильное течение ДШП, с дилатацией полостей сердца, наличием НК ПБ стадии, с нарушением ритма сердца; у 20 больных, из которых 10 больных в отделении ревматологии обследовались по вызову амбулаторно, определялась кардиомегалия, НК -

- 16 -

I, П степени, с благоприятным течением заболевания.

Третья глава - собственные исследования - "Динамика формирования сократительного аппарата миокарда в условиях онтогенеза" -посвящена анализу на различных уровнях структурно-функциональной организации клетки в динамике онтогенетического развития на основе изучения и сопоставления параметров сокращений кардиомиоцитов, с количественным соотношением отдельных белков миофибрилл, их М^ -АТФ-азной и катепсической активности, а в ряде случаев и морфологического определения степени дифференцированности клеточных структур в разные возрастные периоды развития, по мере их онтогенетического созревания: 3-4 дневной инкубации, период, когда еще в сердце нет иннервации и сосудистая система пока не развита; 6-7 дн. инкубации, в период массового врастания нервных окончаний; 9-11 да - в момент скончания пика пролиферации клеток и завершения квалитативного развития сердца и усиленного синтеза специфических миофибриллярных белков; наконец, 19-21 да. инкубации -перед вылупленном цыплят или сразу после вылупления.

Анализ параметров автоматических сокращений кардиомиоцитов в динамикэ нормального онтогенеза, начиная с 3-4 дня развития выявил их зависимость от фепотипа мышечных клеток, региональной принадлежности (предсердие и желудочки), а также степени их дифференцированности. Прзводятся гистограммы автоматических сокращений в разные сроки онтогенетического развития сердца. В процессе диффе-рекдировки заметно снижается темп'автоматических сокращений,однако, сохраняется индивидуальный ритм сокращения клеток и фрагментов как предсердгй, так и желудочков во всех возрастных группах, который намного выше в предсердиях, чем в желудочках. Появление ритмических сокращений идет одновременно и несколько предшествует потере организованных структур, которые уже хорошо развиты в же-

лудочках сердца II дневных эмбрионов. Появление в культурах клеток 20 дневных эмбрионов и новорожденных цыплят сократительной активности клеток миокарда желудочков совпадает с потерей миофибрилляр-ных структур в процессе трипсинизации, что дало повод к предположению о логической связи мевду двумя процессами: процессы исчезновения миофибрилл и возобновления автоматических сокращений клеток миокарда желудочков новорожденных цыплят взаимосвязаны. Динамичность белкового состава фенотипа миофибрилл в последние годы приобретает все большее значение для интерпретации результатов сравнительного анализа белкового состава миофибрилл в исследовании механизма адаптации сердца к новым физиологическим требованиям в условиях онтогенетического роста. С II дня развития в яйце.когда скорость пролиферации снижается ( Clark , 1976) и увеличивается гипертрооия клеток, становящаяся главной чертой роста сердца, начинается усиленный синтез специфических миофибриллярных белков. На основании сравнительного электрофоретического исследования в мышцах разного фенотипа выявлены неоднозначные изменения состава миофибриллярных белков в процессе формирования сократительного аппарата (табл. I). Установленные различия согласно современным представлениям, можно интерпретировать как показатель разной интенсивности экспрессии генов, кодирующих синтез тех или других белков.

Обпрми чертами являются: снижение во всех группах шшц инги-биторной субъединицы ТН-И на 21 день развития и почти одинаковое содержание Са-связывающей субъединицы тропонина - ТН-С. Значительное снижение в условиях онтогенеза ингибиторной субъединицы (ТН-И), особенно в миокарде, имеет (^экологическое значение, поскольку, уже в первый день неонатальной жизни, повышается функциональная активность глюкарда и скелетных шшц, что совпадает с повышением

АТФ-азной активности актомиозияа. На основании полученных данных автор приходит к' предположению, что в наибольшей зависимости от возраста эмбрионов и цыплят в процессе формирования сократительного аппарата находится синтез субъединиц тропонина и легких полипептидных цепей миозина во всех исследованных мышцах. Характерно также значительное повышение содержания актина в миокарде. Полученные результаты позволяют характеризовать различие между разными типами мышц в процессе эмбрионального развития и подчеркнуть, что их изменения могут послужить основой для выявления белковой трансфорлации в ходе онтогенетического развития при изменении физиологических потребностей и режима работы.

Необходимо отметить и тот факт, что к II дню развития на электрофореграммах уже отмечается наличие Са2+-связыващих белков' и четко появляются низкомолекулярные компоненты, особенно к 21 дни развития, что по-видимому, может явиться результатом катеп-сического распада миофибриллярных белков в процессе формирования сократительного аппарата. На самом деле, наблюдается значительный рост катепсической активности миофибрилл миокарда и скелетных мышц (быстросокращающейся - грудной и смешанного типа - бедренной), характеризующей скорость обновления белков в этих мышцах (табл.2), причем, наибольшей ферментативной активностью обладали миофибршшы, выделенные из миокарда, затем из грудных мышц, наименьшей активностью обладали миофибриллы бедренных мышц. Бросается в глаза почти одинаковая ферментативная активность миофибрилл миокарда и грудных мышц на II и 21 день развития, значительно превышающая активность катепсинов миофибрилл бедренной мышцы. Большой объем катаболических реакций в миокарде и грудной мышце на 21 день развития по сравнению с бедренной мышцей цыпленка совпадает о количественным изменением миофибриллярных белков

Таблица I

Изменение количественного содержания основных миофибриллярных белков и их субъединиц миокарда и скелетных мышц разного фенотипа куриных эмбрионов и цыплят в процессе развития (с II по 21 день) (среднее на 15 фореграмм, выражено в %)

День развития Б е л к о вые фракции

Мышца Актин Тропонин-Т Тропомио-зин Тропонин-И Тропонин-С + ЛЦМ^ + Щ&2 ЛЦМд

Миокард II 9,6+0,23 5,1±0,75 24,8^1,6 25,5±0,9 7,3^0,4 -

21 22,2±1,45* 14,5±2,3* 3,5±0,25* 14,5±2,2й 5,310,1* -

Грудная II 13,4±1,1 7,2±0,8 6,4±0,4 7,6±0,9 9,3+1,1 12,311,7

(оыстросокра-щающиеоя волокна) 21 14,0^0,6 10,0+0,2* 9,610,7* 3,2±0,25* 5,310,15* 3,610,1

Бедренная (волокна смешанного типа) II 21 15,1±2,1 13,2±2,0 15,1±1,8 7,3±0,8* 16,5^2,3 14,3±2,2 6,25±0,8 10,710,8 5,110,3 б.Оьб,!* -

Примечание: * - достоверные различия средних показателей по сравнению о II днем развития.

в них (табл. I, 2).

Та блат 2

Изменение катепсической активности в миофибриллах миокарда и скелетных шшц разного фенотипа в процессе формирования сократительного аппарата в условиях нормального развития (с II по 21 день развития) (выражено в мкг тирозина на мг белка при 37°С в течение 60 мин)

День раз- Количество _Тип_мышц

вития эмбрионов и цыплят миокард М+м грудная мышца М+м бедренная мышца М+м

II день 250 17,4+1,8 п = 10 15,3+1,0 п = 10 10,5+0,8 п = То

21 день 150 28,3+1,1 п = 10 27,9+0,8 п = 10 18,0+0,7 п = То

Р ¿0,001 ^0,001 -0,001

Таким образом, в механизме становления сократительного аппарата в онтогенезе в условиях приспособления к новому режиму функционирования миокарда и мышц важным звеном является регулирование экспрессии генов, а также посттрансляционная модификация сократительных белков, косвенным подтверждением чего является рост катепсической активности миофибрилл в миокарде.

В четвертой главе - "Адренореактивная функция в динамике формирования и развития сократительного аппарата кардиомиоцитов в онтогенезе" - проанализировано формирование хемочувствительности и адренореактивности кардиомиоцитов в динамике онтогенетического развития в разные сроки дифференцировки сердвд куриных эмбрионов и цыплят, дана характеристика типов рзцепторов, регулирующих автоматик) клетск миокарда, определено изменение сродства рецепторов к адренергиче ским препаратам в зависимости от температур! окружаю-

щей среды, исследовано содержание катохоламинсв в миокарде в динамике онтогенетического развития и, наконец, изучено действие связывающих белков на хемочузствительность клетск.

При наличии автоматизма, кардиомиоциты эмбрионального и нео-натального миокарда отличаются чувствительностью и реактивностью к действию биологически активных веществ. На ранних этапах развития обнаружено влияние адренергических препаратов на автоматизм, а в процессе дальнейшей дифференцировки появление инотропного эффекта. В процессе дифферонцпровки сердца реактивность к катехол-аминам возрастает, однако, при этом превалирует чувствительность к адреналину (рис. I). У новорожденных цыплят чувствительность к адреналину проявляется уже в концентрации 3>10~%, а к норадреиа-

п

лану - 1.10 М. Изолированные клетки миокарда менее чувствительны к адренергическим агонистам, нежели фрагменты миокарда, т.е. трип-синизация способствует снижению адренореактнзности, особенно у 9-11 дневных эмбрионов. Это указывает на возможность влияния про-теолитических ферментов на адренореактивность, а также на важную роль, которую може!г играть белковый фактор в структуре рецептор, и в частности синтезируемые к этому времени в миокарде Са^+-свя-зывающие белки. При этом выявлена обратная зависимость между-внутритканевым содержанием катехоламинов и развитием адрзночувст-вительности: в процессе развития четко фиксируется повышение чувствительности к адреналину и снижение к норадреналину, в то же время количество норадреналина в миокарде во много раз превышает содержание адреналина (табл„ 3). Поскольку известно, ''то содвр-жание норадреналина в миокарде связано с выделением его из нервных окончаний, это указывает на окончательное созревание сикнати« ческой нервной системы к моменту вылупленая цыплят. Было изучено появление и развитие хемочувствительности и реактивности к спеца-

Ал

НЛ

II и!

!>П

у.ь

ни?

7:5 151) 215

7!5 151) 21»

Л д ; /

тж И | 1 1 1 1 ]

X* ■—1 э-н т * Ь' X с -

=т

I-

II' 71 П1 Г)1 }) Н" 7' Г." !»' л' |у,|

Еис.1. Изменение адренореактивности кардиомиоцитов в зависимости от сроков дифференцировки (изменение частоты сокращения в % к исходно^ в зависимости от влияния адреналина (АД) или норадреналина (НА): А - 3-4 да.эмбрионы; В - 6-7 да., С - 9-11 дн.; Д - однодневные цыплята. й - токсичный эффект,

фическим с<- и £-блокаторам в динамике онтогенетического развития: так на 3-4 день развития ингибиругаций эффект пропранолола на автоматизм проявляется в очень высокой концентрации (1»10~%), к 7-Ц

Таблида 3

Изменение концентрации адреналина и норадреналина в миокарде, куриных эмбрионов и цыплят в динамике развития сократительного и адренорецепторного аппарата (с II по 21 день развития, в мкг/г)

Группа эмбрионов (по дням развития) Количество К а т е х о л а м и н ы

адреналин М+м норадреналин М+м

1-11 55 0,145+0,008 0,143+0,003

П - 13 39 0,154+0,001 0,187+0,002*

Ш - 16 25 0,137+0,002х* 0,338^0,002*

1У - 21 50 0,117+0,005* 0,471+0,008*

Примечание: н - достоверные различия средних значений

показателей по сравнению с II днем развития;

** - по сравнению с 13 днем.

В каждой группе проведено измерение в 5 пробах.

дню развития повышается чувствительность к ингибиругацему действию пропранолола в 100 раз. Фентоламин сам по себе не оказывает влияния на автоматизм сокращений клеток и фрагментов. К 7-9 дню развития проявляется способность как пропранолола, так и фентоламина ингибировать стимулирующее действие адренергических агонистов (рис. 2). К этому времени проявляется дифференцированное действие и /-блокаторов на эффекты чистого ^-агониста - изадрина, и смешанных агонистов - норадреналина и адреналина. Обнаружено также изменение хемочувствительности при отклонении от оптимальной температуры (37,5°С). По-видимому, изменение сродства рецепторов к адренергическим веществам связано с тем, что в структуру адрено-рецептора входят балки с определенной чувствительностью к температурным колебаниям. На основании анализа ряда параметров оокращвншт

ИНГ;

^ =г

... ? !И)

'А'.

за юн'/« принят положу.-тпльный эффект лдт:-шпт/лшск'/.у. агонистои

/М()~''М ПРОПРЛМОЛОЛ 1- ингиб'/.тормый эффикт у- ингикитш'ный зффр.кт

НА -1.1(Г''.\', Ал - 1.1(Г'\\',

з-ингшшн'ный эффект изадркна- 1.кГ'',\',

с:

<

фемтоаамин а. 7и ^нштоламин 02

— ни» к 0 10(1 0

3 "/15 у 7'л

2 !н) :и)

У.'Л 1 1 1 У.1г 1111

{»у фентоллминл(м) ьч фпнт()алминл(м на 1(ш7„ принят по- :»д 1п«'/. принят поло-аожит1:л1)н1>1й эф — жительный эффект

фект Ад.1.1(Г{'м НОРЛДРННЛЛМИА.

Рис. 2. Ингибирующий эффект пропранолола и фентоламина на действие адренергических агоннстов в культура шока рда на 7-9 день развития.

делается допущение, что в системе адренорецепции участвуют белки с определенной чувствительностью к температурным колебаниям и таковыми могут быть представители Са^+-связывающих белков, в частности, входящие в состав кальциевых каналов. Выявлено также, что трипсинизация способствует снижению адренореактивности, так как фрагменты миокарда оказываются более чувствительными к действию катехоламинов, нежели изолированные клетки, полученные в результате переваривания протеолитическим ферментом. Это свидетельствует о возможности протеолитических ферментов воздействовать на адренореактивность через влияние на белковую субъединицу, входящую в структуру рецептора. Перспективным оказалось использование Са2+-активируемых нейтральных шшечных протеаз (СаНМП), как ферментного модификатора специфических структур клеточных мембран, с целью анализа роли Са^+-связывагацих белков в механизме изменения адреночувствитальности. Основанием для подобных экспериментов послужили данные о способности Са2"!*-активируемой нейтральной мышечной протеазы (СаНМП), обнаруженной в мышечных клетках, специфически разрушать Са2+-связызающие балки (Dayton , 1979; Нага , Ischiura , 1982). Согласно последним литературным сведениям (suzuki , Koichi , 1987), СаНМП оказывают влияние на мембраны. Есть связь и между активацией лизосомальных протеаз 'И дефектами мембран ( strauber et ai, 1986). На основании данных о сходстве первичной структуры и свойствах тропонина (IH) с Са -связывающими белками мембран и данных С.С,Оганесян, С.Б. Баринян, &.С.Давтян (1975) о специфичности реакции ТН-ТМ комплекса и ТН с адренергическиш соединениями было допущено, что адре-норецепторные субъбдиницы могут принадлежать Са^+-связывающему семейству белков. Участие этих белков в механизме модуляционного действия адренергических веществ выявлялось в экспериментах

на тканевой культуре сокращающихся кардиомиоцитов. В отличие от других белковых препаратов, очищенный ТН и ТН-ТМ белковый комплекс способен не только модулировать параметры сокращающихся клеток и фрагментов миокарда, но а восстанавливать сокращения, ингибирован-ные адреноблокаторами, или Са-анта гонистами и блокаторами Са2+-ка-налов. Вероятно, что Са2+-связывающие белки воздействуют на автоматические сокращения путем встраивания в мембраны шшечной клетки и образования неспецифаческих ионных каналов переносящих также Са2+ (А.Г.Саркисян, М.ХЛанасянц, А.А.Шагинян, С.С.Оганесян,1981). Итак, в раннем периоде онтогенетического развития уже на 7-11 день в мембранах кардиомиоцитов куриных эмбрионов присутствуют белки, сходные с ТН и ЗН-5М комплексом, которые могут связываться с адреноблокаторами и участвовать в модуляции автоматических сокра щений . С другой стороны, адренергические соединения модулируют функцию Са2+-связывашцих белков, последние обладая адренорецептор-ными свойствами участвуют в механизме действия кардиогропных агентов на миокардиальную клетку. Результаты экспериментов позволила поставить вопрос о прямом влиянии адренергических соединений на Са2+-связывающие белки, локализованные в мембранах, в механизме их действия на транспорт Са^+, подтвержденном в экспериментах на культуре 7-11 дневных эмбрионов с применением СаНШ. Обработка миокардиальной культуры нейтральней шшечной протеазой приводила к снижению амплитуды сокращения и скорости расслабления, по всей вероятности, связанное с уменьшением мест связывания, ввиду про-теолиза соответствующих белковых компонентов. Важным фактором ЯВИ' лось снижение и полное исчезновение шохреготрешто ответа клеток и фрагментов миокарда при увеличении ионов Са^+ в культивируемой среде, а также снижение и полное исчезновение реактивности к адренергическим препаратам при 20 минутной обработке культуры

СаНМП, что, на наш взгляд, связывается с протеолизом системы трансмембранного переноса Са2+. Косвенным доказательством, также свидетельствующим о роли тропониноподобных белков в механизме адрено-реактивности и хемочувствительности служат исследования (Геворкян P.A., Элоян М.А., Давтян Ж.С., ШЪ) о влиянии СаНМП на ТН-Ш белковый комплекс при электрофоретическом анализе этих белков под действием СаНМП.

Результаты опытов с использованием СаНМП свидетельствуют о

способности этого фермента модулировать параметр» сокращения к

моменту квалитативного развития сердца куриных эмбрионов, под-

р,

твервдзют предположение, что Ca -связывающие белки в мембранах могут участвовать в осуществлении эффекта адренергических веществ, что очень важно для понимания изменчивости адренореактив-ности и хемочуввтвительности при изменении биомеханического режима работы сердца. Возможно, что в механизме изменения хемочувствительности и реактивности кардиомиоадтов к с^армакологаческим препаратам в условиях патологии некоторую роль может играть и активация нейтральных шшечных протеаз.

Пятая гдва - "Сократительный аппарат и рецепторная функция мембран кардиомиоцитов в условиях функциональней нагрузки (экспериментальная гипертрофия и кардиомиопатия)" - посвящен исследованию клеточко-молекулярных механизмов формирования сократительного и адренорецепторного аппарата в условиях гемодинамичес-кой нагрузки, приводящей к гипертрофии сердца курчннх эмбрионов и цыплят (I модель), и изменения метаболизма, приводящего к развитию кардиомегалии, напоминающую кардиомиопатию (П модель) (табл. 4).

Изменение физиологического режима работы сердаа в обоих слу-гаях, вызывая значительные гемодинамические сдвиги, индуцировали

Таблица 4

Изменение веса сердца и тела куриных эмбрионов и цыплят в динамике онтогенетического развития в различных условиях функционирования сердца

' рулиг эмбрионов К Ц1Т7ЛЯТ День развития Количество Вес тела (масса) Вес сердца в г (масса) в мт (М+м) (М+м) Индекс .К = y

II 53 4,74+0,11 45,25+0,92 9,54+0,25

13 ' 19 11,8+0,11 93,0+4,63 7,89+0,28

15 17 17,5+0,10 102,00+4,63 5,80+0,24

'•'контрольная 17 16 18,83+0,37 115,00+4,96 5,48+0,35

19 12 24,75+0,34 143,70+9,31 5,92+0,48

21 108 37,26+0,56 ' 173,5+8,92 4,65+0,06

Опытная - I модель 21 115 39,9+1,07 225,0^7,14 5,66+0,17

Опытная - П модель 13 19 9,55+0,21 103,0+3,05 10,7+0,36

15 29 15,1+0,19 138,6+3,08 8,71+0,22

17 20 16,3+0,37 145,0+4,40 8,9+0,27

19 40 21,9+0,32 181,75+3,61 8,3+0,30

21 83 32,87+0,68 273,0+7,5 8,8+0,25

изменения в сократительной деятельности серцпз, характерные для рабочей перегрузки сердпа. Наблкщалзсь тетденция к снижению величины развиваемого напряжения и скорости расслабления и повышению индексов расслабления, что особенно было выражено в условиях развития кардиомегалии. Изменения в процессе расслабления указывают на нарушения в реакциях высвобождения или захвата ионов в

частности, изменение индексов расслабления указывают на перегрузку ионами Са2+, что в свою очередь, может способствовать разрушению внутриклеточных структур и снижению сократимости. В связи с этим встал вопрос о роли изменения: в самом сократительном аппарате миофибрилл, причем возникла необходимость оценить удельное значение изменения регулируемости сократительного аппарата ионами Са2+ и инотропными кардиоактивннми соединениями для выявления путей нарушения регуляторных процессов, зависящих от изменения концентрации свободного в саркоплазме и внеклеточной жидкости.

Как показали результаты опытов, изменение ряда параметров сокращения и расслабления очень сходны с теми, которые вызываются в культуре миокарда под влиянием СаНШ. Кроме того, в обеих экспериментальных моделях рабочей перегрузи! сердца наблюдается снижение инотропного эффекта что в первую очередь можно

объяснить уменьшением в доставке ионов Са миофибриллам. Ранние нарушения Са2+-пронищемости мембран при рабочей перегрузке сердца могут служить причиной активирования протеолитических ферментов, в частности СаНШ, находящихся в цитозоле мышечной клетки, и атакующих миофибриллярные белки. Кроме того, возможно, в механизме изменения хемочувствительности некоторую роль их^рает и активирование НМЛ, которые моцут изменять хемочувствительность к некоторым кардиотропннм препаратам. Обнаружена прямая связь между

. - 30 -

снижением едреночувствительности при адаптации к рабочей перегрузке в обеих иоделях и изменением внутритканевого содержания кате-холаминов (табл. 5).

Таблида 5

Изменение концентрации катехоламинов в миокарде куриных эмбрионов и цыплят при изменении режима работы сердца в двух экспериментальных моделях (в шг/г) (по 5 проб в каждой группе)

Группа

Количество -

эмбрио- адреналин нов и

цыплят_

Катехоламины

норадреналин

Контрольная 50

Опытная - I модель 50 Опытная - II модель 45

0,117+0,005 0,192+0,011*

0,471+0,008 0,676t0,009*

0,172^0,012* 0,842+0,075*

- достоверные различия с контрольной группой.

Анализируя данные об изменении изопротеинового состава мио-фибриллярных белков необходимо основываться на известной парадигме, что изменение режима сократительной деятельности миокарда в процессе формирования сократительного аппарата может влиять на состав белков через их генетическую экспрессию. Переход на качественно новый функциональный уровень сопровождается сближением белковых компонентов сократительного аппарата миокарда и быстросок-ращающейся скелетной мышцы не только по количественному соотношению белков, но и появлению низкомолекулярной субъединицы ЛЦМд, отсутствующей в составе актомиозина желудочков как эмбрионального, так и неонательного и взрослого миокарда (табл. 6). Тот $акт, что изменение биомеханического режш® работы особенно влияет на содержание Са2+-связывающих белков подтверждает справедливость

Таблица 6

Изменение иэопротеинового состава миофибриллярных белков в миокарде и скелетных мышцах разного „ /ипа в условиях гравитационной перегрузки (I) и гипотерми-ческого (П) инкубирования куриных эмбрионов и цыплят (среднее на 15 форе грамм;)

Мышца Б е л к о вые фракции

Группы , актин тропонш-Т тропомио-эин тропогаш-И + тропонин-С + ЛЦМз лцм3

контрольная 22,2+1,4 14,512,3 3,510,15 14,512,3 5,310,1 . -

ц опытная I И,5±0,25х 10,4±0,1к 12,610,11* 22,ЗД),7* 10,8+0,14 2,710,07* 5,010,15*

® П 10,2±0,34й 8,910,23* 14,7+0,56*, 23,710,3* 9;110,1 1,6±0,02* 7,(^0,06*

контрольная 14,0±0,6 10,(^0,2 9,610,7 8,210,2 5,310,1 3,610,1

ы опытная I 18,0±2,2 25,9^1,7* 18,1±1,9* 18,510,6* 15,110,6 13,511,1я 12,110,14*

й1 П 16,0^1,8 16,811,2й 17,711,3* 19,4+0,7* 14,310,8 10,311,4* 8,611,1*

Продолжение табл. 6

Мышца Белковые фракции

Группы актин тропонин-Т тропомио- тропонин-И тропонин-С ЛИМч

айн +"ЛЦИХ + ЛЩ2

контрольная 13,2+2,0 7,3+0,8 14,3±2,2 5,1+0,3 б.ОцОД

2 „ 28,5+3,Iя _

£ опытная I 13,7+1,8 10,2+1, Ö* I2,I±I,9 -=- 14,5^1,7*

rl ~ 20,8+2,8 1

? ~ to

26 3+2 2й M

П 14,0+2,0 8,8+1,4 11,2+1,1 —L^-i— I2,I±0,6K - •

~ 18,2+3,1

* - достоверные различия средних показателей по сравнению с контрольной группой.

допущения зависимости формирования функции Са-переносящей системы в миокарциальных клетках от режима работы сердца.

Появление новой легкой цепи миозина - ЛЦМ3 в процессе адаптации к нагрузке имеет, по-видимому, адаптивное значение (Кошкарян А.О., 1974 ), ибо благодаря устойчивости к протеолизу, приводит к увеличению массы миофибрилл. Следовательно, адаптация миокарда к нагрузке сопровождается изменением качества и состава миофибрилляр-ных белков (1Н-Щ комплекса). Относительное снижение ТН-С вместе с увеличением ингибиторной субъедиюшы - ТН-И свидетельствует о снижении сократительнсй способности сердечной мышцы при гемодина-мических нарушениях. Одновременно наблюдается достоверное значительное снижение Мг -АТФ-азной активности актомиозина в миокарде при рабочей.перегрузке сердца в обеих моделях, по сравнению с контрольной группой.

В то же время формирование гипертрофии и кардиомегалии в обеих экспериментальных моделях изменения биомеханического режима работы сердца сопровождается значительным повышением катепсической активности шо^брилл; особенно выраженной при кардиомегалии (табл. 7).

Полученные данные указывают на однонаправленность изменений катепсическоА активности в миокарде и трудней мышце, превышающей таковую в бедренной мышце. Это характеризует значительную скорость обновления белков в миокарде и грудной мышце цыпленка, и соответственно большой объем катаболических реакций совпадает с количественным изменением в миофибриллярных белках. Тот факт,что наибольшей активностью катепсинов отличаются миофибриллы миокарда, далее быстросокращающиеся волокна грудной и наименьшей активностью миофибриллы бедренной мышцы, легко объясняется наличием

Таблица 7

Изменение катепсической активности миофибрилл миокарда и скелетных мышц разного типа куриных эмбрионов в условиях гравитационной перегрузки и гипотермического инкубирования (активность выражена в мкг/тирозина на мг белка при 37°С, 60 мин)

Типы мышц

Группа миокард 'скелетная (бедренная) скелетная (грудная)

Контрольная 28,2+1,1 18,0+0,7 27,9+0,8

Опытная I модель 39,6+2,3х 26,3+1,8х 34,2^0,9*

Опытная П модель . 42,7+1,4* 29,7+1,2х 39,6+0,5*

Примечание: в каждой группе проведено измерение в 10 пробах.

ж - Р-с 0,001 по сравнению с контрольной группой.

определенной корреляции между интенсивностью обновления мышечных белков и катепсической активностью миофибрилл.

В шестой главе - "Об- использовании метода анализа физиологических параметров сокращений миокардиальной культуры в практической кардиологии" - рассштриваются возможности использования биотестов в практической медицине, в частности, для дифференциальной диагностики дилатационной кардиомиопатии у больных на основе выявления кардиотоксичности сыворотки их крови по показателям сократимости фрагментов миокарда культуры под влиянием сыворотки пациентов; для определения индивидуальной фармакологической чувствительности больных; а также возможности использования культур» ткани и Са^+-связывающего белкового комплекса для определения роли рецептора в мехак/зме действия кардиотропных препаратов в фармакологии.

Известно, что при сердечно-сосудистых: заболеваниях в сыворотке крови больных появляется ряд биоактивных и кардиоактивных соединений, которые имеют значение в биодиагностических тестах. Определение концентраций указанных соединений связано о применением труднодоступных и дорогостоящих методов. По этой причине целесообразно использование биодиагностических тестов, при которых тест-системы (клетки и фрапяенты миокарда) проявляют высокую чувствительность к малым концентрациям биоактивных веществ. Для оценки кардиоактивности сыворотки крови определялись следующие показатели: амплитуда, ритм, время появления аритмии, наличие остановки автоматических сокращений в культуре ткани миокарда. Полученные данные выявили неоднозначный эффект сыворотки кардиологических больных и здоровых лиц на параметры сокращения фрагментов миокарда в культуре. Кардиодепрессивный эффект на миокардиальные эксплантаты оказывает сыворотка только больных ДОП. В остальных случаях отмечается положительно инотропное действие испытуемых сывороток. По результатам обследования 58 больных ДКШ выделены 3 типа физиологической реакции эксплантатов миокарда куриных эмбрионов (ЭМКЭ) на сыворотку крови больных соответственно тйжести клинического течения заболевания. У больных с выраженной кардиомегалией и дилатацией полостей сердда, с выраженной рефрактерной НК П, Ш, 1У степени, наличием нарушения ритма и проводимости, гипотонией, пробы сывороток вызывали значительное снижение амплитуды сокращений ЭМКЭ - на 60-80%, по сравнению с исходной величиной, учащение ритма, переходящее в аритмию в течение 5-10 мин с последующей остановкой сокращения к 15-20мин наблюдения. Такой тип реакции символически оценивался как (++++) и был выявлен у 22 больных с тяжелой формой течения заболевания. Летальный исход зафиксирован у 10 больных этой группы. Диагноз ДКШ на вскрытии подтвердился.

При выявлении снижения амплитуда сокращения на 25-50% по сравнению с исходной, появлении учащения, переходящего в аритмию после 10 мин наблюдения, тип реакции ЭЖЭ обозначался символически (+++). Он был выявлен у 16 больных со стабильным течением ДКШ, с дилатацией полостей сердца, наличием НК ПБ стадии, нарушением ритма - т.е. средней тяжести клинического течения заболевания. И, наконец, при выявлении в эксперименте ответной физиологической реакции ЭЖЭ на сыворотку крови больных, когда амплитуда сокращений снижалась всего на 15-20$ по сравнению с исходной величиной, наблюдалось только учащение ритма без признаков нарушения ритмичности и остановки сокращения в течение всего периода наблюдения (20 мин) - данный тип физиологической реакции ЭЖЭ на сыворотку крови символически обозначается (++) и был выявлен у 20 больных с кардиомега-лией и НК I, П степени, и характерен для больных с легким клиническим течением заболевания (в основном эту группу составляли больные, пришедшие на консультацию). Предложенный метод подкрепляется примерами конкретного осуществления способа диагностики ДШ1. Дифференцированность ответа сыворотки больных ДШП позволила не только предложить способ дифференциальной диагностики, но и наметить пути исследования патогенеза этого заболевания на основе выявления биоактивного начала сыворотки и ее фракций. Автор анализирует возможности использования биотеста для определения индивидуальной чувствительности ЭЖЭ к фармакологическим кардио-тропным препаратам в присутствии сыворотки больных. Так, в присутствии сыворотки больных ДКМП с тяжелой и средней формой клинического течения исчезает чувствительность ЭЖЭ к ионам Са^+ и адрен-ергическим агонистам. Эта реакция очень напоминает подобную в условиях действия СаНМП на культивируемые фрагменты, но при использовании нормальной сыворотки.

На основе комплексного исследования механизма действия известных вазодилататоров, путем сопоставления в целостном организме, на клеточном уровне (культура ткани миокарда) и на молекулярном уровне с использованием в качестве Са2+-связывающего белкового комплекса (ТН-Ш) - показано, что в механизме кардиотропного действия функциональное состояние / -адренорецепторов роли не играет, в го же время гипотензивное действие через СПС осуществляется, по-видимому, через изменение функционального состояния -а—адренорецепторов.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны и модифщированы способы культивирования, регистрации параметров сокращения клетск и фрагментов миокарда в культуре на основе фотоэлектрического принципа; определены критерии и возможности использования способа в экспериментальной и клинической кардиологии и фармакологии.

2. Предложен способ анализа физиологических параметров сокра-цения клеток и фрагментов миокарда в культуре с использованием 2а^+связывающего мышечного белкового комплекса (тропомиозина-гропонина) с целью исследования механизмов кардиотропного дейст-зия фармакологических препаратов, а также Са-активируемых мы^ч-

„ 9л-

мх протеаз для оценки формирования адрено- и Са -чувствитель-юсти кардиомиоцитов.

3. Разработан и апробирован простой биотест дифференциальной диагностики ДОИ в клинике на основе выявления ингибирования сократимости фрагментов миокарда куриных эмбрионов сывороткой больна. Создавая возможность проведения экспресс-диагностики и оценен тяжести, метод позволяет уточнить прогноз заболевания, сущест-зенно сократить время, необходимое для постановки правильного диагноза. Способ целесообразен и при проведении массовых исследо-

ваний для выявления ДОП. Указанный способ выявил возможность определения реактивности больного к кардиотропнш средствам на основе анализа и.систематизации данных об индивидуальной фармакологической чувствительности в тест-объекте.

4. Предложен метод, позволяющий воспроизводить функциональную нагрузку (гравитационное поле) сердвд куриных эмбрионов и цыплят, в результате чего развивается гипертрофия миокарда. Определены условия и критерии, значимые для интерпретации данных, полученных в условиях, имитирующих гравитационную перегрузку.

5. Процесс формирования сократительного аппарата миокарда и мышц разного типа характеризуется неоднозначными изменениями субъединичного состава миофибриллярных белков. Наибольшие изменения от возраста эмбрионов и цыплят обнаруживаются в синтезе субъединиц тропонина и легких цепей миозина.

6. На ранних этапах развития обнаруживается влияние адренер-гических препаратов на автоматию сердар; в процессе дальнейшей дифференцирдаки появляется также и инотропный эффект. Выявлена обратная связь между внутритканевым содержанием катехоламинов и развитием адреночувствитальности, причем, в процессе развития повышается чувствительность к адреналину и снижается к норадрена-лину.

7. На основании использования специфических л- и />-блокаторов, выявлено, что в регуляции автоматических сокращений кардио-миоцитов участвуют как л-, так и г-рецепторы, которые уже сформированы к 7-11 дням развития куриных эмбрионов. В те же сроки развития обнаруживается температурная зависимость чувстви- • тальности к катехоламинам, обусловленная, по-видимому, наличием уже в этот период в системе адренорецепции белка с определенной чувствительностью к температурным колебаниям.

- 39 -

8. Показано, что в формировании адрадочувствительности и в механизме изменения транспорта Са2+ - принишют участие Са2+-связы-вающие балки, локализованные в мембранах миокарда. Эти исследования указывают на возможную роль, которую может играть активация нейтральных мышечных протеаз в условиях патологии сердца в изменении хемочувствитальности и реактивности к фармакологическим препаратам.

9. в условиях изменения биомеханического режима•обнаруживается значительное повышение протеолитической активности, что может играть определенную роль в пост трансляционной модификации миофиб-риллярных белков. Наблюдаемые изменения катепсической активности

и состава мисфибридлярных белков сходны в миокарде и быстросокра-щающейся скелетной мышце.-

10. Выявлено, что при изменении биомеханического режима работы сердца одновременно с гипертрофией и кардиомегадией наблюдается сближение белкового состава миофибрилл миокарда и быстросокра-щающейся скелетной мышцы кек по количественному составу белков миофибрилл, так и легких цепей миозина. Появление нового изомиози-на имеет адаптивное значение, ибо благодаря устойчивости к протео-лизу, может способствовать увеличению массы миофибрилл. Рост катепсической активности оообенно выражен при экспериментальной кардиомиопатии

11. Изменение ре«™ма работы миокарда в условиях патологии сердца отражается на интенсивности синтеза Са2+-связывающих белков (ТН-С и лЦМ), что указывает на зависимость формирования Са2+-переносящей системы в миокардиальных клетках от режима работы сердвд. В то же время изменение ряда параметра сокращения и расслабления кардиомиоцитов в условиях рабочей перегрузки сердвд в эксперименте очень сходны с результатами, полученными в культуре

миокарда под влиянием СаНМП, что указывает на снижение инотропного эффекта Са2+ в связи с изменением доставки этого иона миофибриллам.

12. Установлено, что в процессе формирования адреночувстви-тельности и хемочувствительности в условиях рабочей перегрузки

в обеих экспериментальных моделях наблюдается снижение химочувст-вительности, Са2+-чувствительности и адренореактивности, последнее взаимосвязано с изменением внутритканевого содержания кате-холаминов.

13. Полученные результаты исследований позволили предложить новые подходы и методические приемы к решению задач экспериментальной и клинической кардиологии и фармакологии: для анализа функциональных параметров кардиомиоцитов разного фенотипа, анализа роли рецепторов в механизме действия физиологически активных веществ; для биодиагностики сердечно-сосудистых заболеваний и определения индивидуальной фаршкологической чувствительности.

СВЕДЕНИЯ О ВНЕДРЕНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ '

Принято к внедрению 3 рационализаторских предложения: "Способ экспресс-диагностики дилатационной кардиомиопатии с помощью сыворотки больных и культуры ткани", "Моди^икавдя способа наблюдения за пульсацией объекта", "Приставка к лабораторнш центрифугам для создания перегрузки на животных".

По материалам диссертации разработаны и изданы 2 методические рекомендации, получено одно авторское сивдетельство на изобретение и одно положительное решение на заявку по изобретению. Метод диагностики ДОЯ внедрен в практическую работу Института кардиологии МЗ АрмССР, а также в практическую работу кардиологического отдаления республиканской больницы "Эребуни" г.Еревана к учебный процесс кафедры кардиологии Ереванского

института усовершенствования врачей МЗ СССР. "Способ наблюдения за пульсацией объекта" и "Модификация способа наблюдения за пуль-социей объекта" вместе с"Метадякой культивирования миокарда" внедрены в практическую работу и учебный процзсс на кафедре клинической фармакологии Ереванского государственного медицинского института, а также ордена Трудового Красного Знамени Киевского медицинского института им.ан. А.А«Богомольца.

СПИССК РАБОТ, опубликованных по теме диссертации

1. Новая модификация методика получения сокращающихся эксплантатов эмбрионального сердца теплокровных животных для изучения влияния фармакологических препаратов // Недостаточность миокарда. -Ереван. - 1969. - С.ПЗ-122. В соавт. А.Е.Карапетян.

2. Установка для фотоэлектрической регистрации амплитуды сокращения клеток и эксплантатов миокарда куриного эмбриона // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1969. - № 9. - С.124-125.

В соавт.: А.Е.Карэпетш, Г.А.Манукян, М.В.Львов.

3. Аппарат для регистрации амплитуды сокращения клеток и эксплантатов // Механизма мышечного сокращения. - Наука. - М., -1972. - С.230-235. В соавт.: А.Е.Карапетян, Г.А.Манукян, М.В.Львов.

4. Модель аритмии в культуре ткани // Материалы конференции молодых ученых, посвященная 50-летию ВЛКСМ. - Ереван. - 1971. -С.185-187

5. Влияние гипотермии на сердца куриных эмбрионов // Тезиш П конференции молодых ученых кардиологов по проблеме: Актуальные вопросы кардиологии. - Ереван. - 1974. - С.34-35.

6. Культура эмбрионального миокарда как модель для изучения кардиотропных препаратов // Тезисы Ш конференции молодых ученых кардиологов по проблеме: Актуальные вопросы кардиологии. - Каунас.-

- 42 -

1975. - С.51-52. В соавт.: Г.А.Манукян.

7. Regulation of protein composition of nyofibrils ад the

I,?yo cardinal // USA-USSR Second Joint Symposium of % о cardial Metabolism. - Sochi, 1975- - USSR. — P.29-49. Ed. S.S.Oganesyan, T.S. Saminyan, M.A.Eloyan, A.R.Mowsisyan.

8. Влияние гипотермии и гравитационной перегрузки на сократительную функцию и некоторые стороны метаболизма сердечной мышцы// Тезисы У Всесоюзного симпозиума по проблеме: Биофизические и биохимические основы мышечного сокращения. - Киев. - 1977. - С.44. В соавт.: С.Б.Бариняк, А.Р.Мовсесян.

9. Регуляция сократительной функции миоцитов в культуре эмбрионального миокарда// Тезисы У Всесоюзного симпозиума по проблеме: Биофизические и биохимические основы мышечного сокращения. -Киев. - 1977. - С.45.

10. Регуляция белкового состава миофибрилл в процессе компенсаторной гипертрофии // Метаболизм миокарда. - Наука. - М., 1977. С.189-200. В соавт.: Оганесян С.С., Заминян Т.О., Элоян М.А., Мовсесян А.Р.

11. Действие гравитационной перегрузки на развитие эмбрионального сердца и белковый состав миофибрилл// Тезисы конференции кенщин-ученых Советской Армении, посвященной 60-летию Великой Скт.соц.революции. - Ереван, 1977. - C.280-28I. В соавт. Заминян т.е.

12. Исследование рецепторной функции мембран в регуляции переноса Са2+// Материалы Ш Всесоюзной конференции по биохимии мышц. - Ленинград. - 1978. - С.52-53.

13. Изучение действия кардиотропных препаратов на миокард в культуре ткани // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума по проблеме: Теоретические и практические проблемы молекулярной

- 43 -

кардиологии. - М., 1978. - С.46.

14. Бета-рецепторные свойства тропонина и механизм действия катехоламинов // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума по проблеме: Теоретические и методические проблемы молекулярной кардиологии. - М., 1978. - С.39. В соавт,: Оганесян С.С., Баринян С.Б.

15. B-receptor properties of troponin and Chemi-Sensitivity

of Cell Membranes of Hypertrophied Heart. // The J. Mol. Cell. Cardiology. - 1978. - V. 10. - Suppl. 1. - P. 71.' Ed. S.S.Oganesyan, S.B.Barinyan, J.S.Davtyan, 1Л.A.Kajfadyan.

16. Исследование свойств тропонина как модели бета-рецептора. Характеристика рН зависимости, стабильности структуры тропонина миокарда // Отчет по программе сотрудничества СЭВ и СФРЮ по проблемам исследования в области биофизики. - Пущино, 1978. - С.25-36. В соавт..: Оганесян С.С., Баринян С.Б., Бай Н.В., Давтян Я.С., Кай-фаджян М.А.

17. Регуляция сократительной функции миоцитов в культуре миокарда // Кровообращение. - 1979. - Л 2. - С.67-68.

18. Влияние факторов кратковременной гравитационной перегрузки на развитие миокарда куриных эмбрионов // Тезисы Всесоюзной конференции по проблеме: Влияние факторов космического полета на наследственность и развитие организмов. - М., 1979. - С.6-8. В соавт.: Заминян Т.С.

19. Влияние на миокард куриного эмбриона гравитационной перегрузки // Космическая биология и авиакосмическая медицина. -1980. - С.54-57. В соавт.: Оганесян С.С., Заминян Т.О., Элоян М.А.

20. The Role of Ca-binding proteins in the Mechanism of action of Cardioactive Agents. // J. Mol. Cell. Cardiology. - 1980. —

V. 12(8). - Suppl. 1. - P.115. Ed. S.S.Oganesyan, S.B.Barinyan, J.S.Davtyan, H.A.Kajfadyan.

21. Влияние гипотермии и гравитационной перегрузки на сократительную функцию и некоторые стороны метаболизма мышцы сердца// Структурные основы и регуляция биологической подвижности. - Наука.-M., 1980. - С.34-37. В соавт.: Баринян С.Б., Мовсисян А.Р.

22. Действие катехоламинов на миокардаальную клетку// Тезисы докладов I съезда кардиологов Армении. - Ереван, 1981. - С.59-60. В соавт.: Оганесян С.С., Баринян С.Б., Кайфаджян М.А., Петросян Г.Р.

23. Изучение клеточно-молекулярных механизмов роста миокарда в процессе развития и индукции гипертрофии в эмбриотенезе// Тезисы докладов I съезда кардиологов Армении. - Ереван, 1981. -С.48-50.

24. Молекулярно-клеточные механизмы действия вазодилататоров // Тезисы докладов I съезда кардиологов Армении. - Ереван -1981. - С.53-55. В соавт.: Чекман И.С., Баринян С.Б., Казак Л.И. Оганесян С.С.

25. О молекулярно-клеточных механизмах действия вазодилататоров// Кровообращение. - Т.ХУ. - № 4. - 1982. - С.3-7. В соавт.: Оганесян С.С., Чекман И.С., Казак Л Л.

26. The Rôle of Ca-binding proteins In fche mechanism of actions of cardioactive agents. // Advances in f.fyocardiology. - 1982. - Canada. - V. 3. - P. 4-39-454-'. Ed. S.S.Oganesyan, S.B.Barinyan, J.S.Davtyan, M.A.Kajfadyan.

27. Молекулярный механизм влияния температурного фактора и гравитационной перегрузки на сократительную функцию миокарда в процессе эмбриоиальнсго развития // Тезисы докладов I Всесоюзного

- 45 -

биофизического съезда. - M., 1982. - T.II. - С.60. В соавт.: Заминян Т.О., Кайфаджян М.А.

28. Трансформация реактивности миокарда к кардиотоническим препаратам при экспериментальной гипертрофии // Тезисы докладов Ï Всесоюзного съезда фармакологов по проблеме: Физиологически активные вещества - медицине. - Ереван, 1982. - С.352-353.

29. Исследование механизма адаптационных изменений сократительного аппарата развивающегося миокарда в онтогенезе при изме-1бнии режима работы сердца // Тезисы докладов У1 Всесоюзного зимпозиума по проблеме : Метаболизм, структура, функция сердечной метки. - Ташкент, 1983. С. ¿5. В соавт.: Заминян Т.О.

30. Сократительная деятельность кардиомноцитов при изменении функции переноса Са^+ // Тезисы симпозиума "Биофизика и биохимия яышечного сокращений". - Тбилиси. - 1983. - Мицниероба. - С.130.

31.- Влияние кратковременной гравитационной перегрузки на развитие миокарда куриного эмбриона // Биологические исследования

sa орбитальных станциях 'Салют". - Наука. - 1984. - M. - С .219224. В соавт.: Заминян Т.С.

32. Молекулярно-клеточные механизмы адаптации миокарда и мышц к экстремальным условиям // Макромолекулы и функционирование •слетки. - Изд. АН АрмССР. - Ереван. - 1986. - С.35. В соавт.: Оганесян С.С., Баринян С.Б.

33. Физико-химические аспекты использования нейтральных протеаз в кардиологии // Тезисы докладов конференции по проблеме: Физико-химическая биология и биотехнология. - Ереван. - 1984. -2.60. В соавт.: Элоян М.А., Баринян С.Б.

34. Действие фармакологических средств на Са-связыващие 5елки и вопросы поиска новых кардиотропных соединений // Тезисы ркоадов конф. физико-химической биологии и биотехнологии. -

• - 46 -

Ереван. - АН АрмССР. - 1986. - С.122. В соавт.: Элоян М.А., Давтян Ж.С., Карапетян Р.

35. О механизме изменения Са-чувствительности сократительно-то аппарата миокарда в условиях патологии // Тезисы докладов

УШ Всесоюзного симпозиума по биохимии и биофизике биологической подвижности. - Пущино. - 1987. - С. В соавт.: Элоян М.А.

36. Разработка биотеста в диагностике ДШ1 на реактивность фрашентов миокарда в культуре и сыворотке крови и ее фракциям у больных // Тезисы докладов конференции "Новейшие достижения биотехнологии в республике и пути их внедрения". - Ереван. - 1989,

37. Сравнительное изучение воздействия сыворотки больных с патологией сердца на сократимость в культуре эмбрионального миокарда //Кро в о о б ращен ие .-1989.-Т.ХХП.-№3.-С.3-6.В соавт.Аванян H.A.

36. Использование биотестов для изучения возможных механизмов развития лилятагионной кардиомиопатш (ДКМЮ// Тез. локл.Всесоюп.сом."Актуальн.пробл.серд.недостат."- Тбилиси.--1989. -С.61-62. В ссавт.:Баринян С.Б.,Аванян H.A..Абрамян Г.М. Авторские свидетельства

1. Способ наблюдения за пульсацией объектов // Авторское свидетельство К 267818, 1970.'

2. Способ диагностики дилатацконной кардиомиопатии. Заявка на авторское свидетельство от 29.11.1987 за Js 434685/14.

Методические рекомендации

I. Экспериментальное (фармакологическое) изучение новых препаратов, предлагаемых для клинических испытаний в качестве кардпстонических средств. - .V.., 1388. - :.'.З.СССР. - Фармкомитет.

/коллективная''.

-стел <?ргкцкалько;: дг.лгкегт:;;::: -с использованием

сыворотки крови больных и культуры миокарда. - Ереван. - 1989. В соавт.: Аванян H.A.

1. Способ экспресс-диагностики дилатацаонной кардиомиопатии// Удостоверение на рац.предложение № 77. - 1988.

2. Модификация способа наблюдения за пульсацией объектов// Удостоверение на рацпредложение № 30. - 1981.

3. Приставка к лабораторным центрифугам для создания перегрузок на животных // Удостоверение на рацпредложение № 21, -1979.

Рационализаторские предложения