Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Устойчивость к стрессу как прогностический фактор в лечении травматического токсикоза антигипоксантами

На правах рукописи

ЮНУСОВ

Исломуддин Айнидннович

УСТОЙЧИВОСТЬ К СТРЕССУ КАК ПРОГНОСТИЧЕСКИЙ ФАКТОР В ЛЕЧЕНИИ ТРАВМАТИЧЕСКОГО ТОКСИКОЗА АНТИГИПОКСАНТАМИ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология 14.03.03 — патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

2 3 ОКТ 2014

005553808

Санкт-Петербург 2014

005553808

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» МЗ РФ

Научные консультанты: доктор биологических наук профессор Ирина Викторовна Зарубина доктор медицинских наук профессор Петр Дмитриевич Шабанов

Официальные оппоненты:

Крауз Владислав Алексеевич, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» МЗ РФ, кафедра фармакологии и клинической фармакологии, профессор

Петров Александр Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, ФГБУН «Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства», лаборатория психофармакологии, заведующий Денисенко Наталия Петровна, доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» МЗ РФ, кафедра патологической физиологии, профессор

Ведущее учреждение

ГБОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия» МЗ РФ

Защита диссертации состоится «11» ноября 2014 года в 13.00 на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215.002.07 на базе ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ (194044, Санкт-Петербург, ул. акад. Лебедева, д. 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке и на сайте ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова» МО РФ www.vmeda.org, на сайте ВАК Министерства образования и науки РФ www.vak.ed.gov.ru

Автореферат разослан « ок 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор Богомолов Борис Николаевич

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

Одной из наиболее тяжёлых форм травматических повреждений является компрессионная травма, встречающаяся, как правило, при ведении боевых действий, природных и техногенных катастрофах мирного времени. После освобождения пострадавшего от компрессии развивается травматический токсикоз. Частота его возникновения при травмах колеблется в пределах от 5,5% до 20%, при этом в 81% случаев страдают конечности (Шутеу Ю. и др., 1981; Нечаев Э.А. и др., 1994, Акулов А.Н. и др., 1995). Основными патогенетическими факторами травматического токсикоза служат болевое раздражение, токсемия вследствие всасывания продуктов распада поврежденных тканей, плазмо- и кровопотеря с развитием тканевой гипоксии. Особенностью травматического токсикоза является острая почечная недостаточность, которая часто становится причиной гибели пострадавших (Кузин М.И. и др., 1968; Vanholder R. et al., 2007). Летальность при данной форме острой почечной недостаточности варьирует от 50% до 70%, а в случае присоединения полиорганной недостаточности - до 95% (Усалева H.H., 2005; Подкорытова O.J1. и др., 2005). Поражение внутренних органов, главным образом почек, при длительном механическом сдавлении мягких тканей первым описал У. Байотерс (1941). Позднее А.Я. Пытель (1951) установил, что первой на компрессионную травму реагирует печень нарушениями ряда функций, что подтверждает особую чувствительность органа к действующим патогенетическим факторам. У больных с миоренальным синдромом в 100% случаев встречаются поражения печени, выражающиеся в массивных коагуляционных некрозах, жировой и белковой дистрофии гепатоцитов (Зимина JI.H., 1985; Новикова Р.И. и др., 1992). Тяжесть гепаторенального синдрома во многом определяет течение и исход компрессионной травмы (Березовский В.А. и др., 2001; Лукьянова Е.С., 2006, 2009). Несмотря на наличие универсальных закономерностей, особенности течения травматического токсикоза и, в частности, нарушений функций печени определяются индивидуальной стрессоустойчивостью организма. Научные исследования и клинические наблюдения, как правило, оперируют средними статистическими значениями показателей, что позволяет судить об основных закономерностях, но нивелирует индивидуальные варианты течения процесса. В связи с этим проблема индивидуальных особенностей реагирования организма на тяжелую компрессионную травму до настоящего времени остается актуальной.

Тяжелая компрессионная травма конечностей требует комплексного лечения, в котором значительное место принадлежит хирургическим методам, нередко ведущим к инвалидности пострадавших и не решающим проблему коррекции полиорганной недостаточности (Gonzalez D., 2005; Matsuoka T. et al., 2002). Общие закономерности течения травматического токсикоза позволяют выделить универсальные фармакологические подходы к лечению нарушенных

функций жизненно важных органов, тканей и клеток. Комплекс структурных и функциональных клеточных нарушений, получивший название «шоковой клетки» (Шутеу Ю.И. и др., 1981), с успехом поддается коррекции цитопротекторами, среди которых наиболее перспективны препараты метаболического типа действия (Лукьянова Л.Д., 2010). Благодаря своим клинико-фармакологическим свойствам они широко вошли в практическую медицину, обладают высокой лечебной эффективностью и безопасностью, незначительной токсичностью, позитивным взаимодействием с другими медикаментами. Среди них следует выделить субстратные антигипоксанты (Зарубина И.В., 2002; Шабанов П.Д. и др., 2010). С позиций молекулярной фармакологии их применение при травматическом токсикозе обусловлено возникновением субстратного «голода» вследствие нарушения метаболизма (Зарубина И.В., Шабанов П.Д., 2004). Для повышения энергетического потенциала клетки перспективно использование сукцинатсодержащих антигипоксантов благодаря их энергостабилизирующим, антиоксидантным свойствам, а также функции сукцината как регуляторной сигнальной молекулы, запускающей и поддерживающей метаболический гомеостаз на системном уровне (Лукьянова Л.Д., 2011).

Степень разработанности темы исследования

Сведения о функционально-метаболической активности печени в раннем периоде травматического токсикоза малочисленны, фрагментарны и не учитывают особенностей индивидуальной устойчивости к гипоксии и боли. Между тем, от устойчивости к каждому из этих патогенетических факторов зависит развитие печеночной недостаточности и течение травматической болезни. Исследования в этом направлении позволяют выделить общебиологические закономерности, лежащие в основе развития адаптационных возможностей организма в посттравматическом периоде и особенностей индивидуального подхода к фармакологической коррекции травматического токсикоза.

Лекарственная терапия травматического токсикоза, как правило, проводится без учета индивидуальной устойчивости к основным патогенетическим факторам — боли и гипоксии. Применение стандартных протоколов лечения травматического токсикоза часто не позволяет уделять внимание индивидуальной чувствительности пациентов к фармакологическим препаратам (Середенин С.Б., 2006; Roses A.D., 2000).

В связи с этим очевидна необходимость научных разработок нового направления в медицинской науке - индивидуализации лечения патологических состояний, включая и травматический токсикоз, средствами патогенетической терапии.

Цель исследования. Изучение роли индивидуальной устойчивости к стрессу как прогностического фактора в фармакологической коррекции антигипоксантами дисфункции печени при травматическом токсикозе.

Задачи исследования

1. Дать общую характеристику раннего периода травматического токсикоза по изменениям ультраструктуры печени, основных показателей системы дыхания, кровообращения и кислотно-основного состояния крови животных с различной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли.

2. Изучить экскреторную, антитоксическую, ферментную и эрготропную функции печени у крыс с различной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли в раннем периоде травматического токсикоза.

3. Изучить влияние травматического токсикоза на процессы перекисного окисления липидов и активность антиоксидантных систем печени крыс с различной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли.

4. Провести фармакологический анализ поддержания функционально-метаболической активности печени субстратными сукцинатсодержащими антигипоксантами (реамберин, цитофлавин, соединение ВМ-616, метапрот плюс) у крыс с различной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли в раннем периоде травматического токсикоза.

5. Разработать математические модели для прогнозирования сроков нормализации функционально-метаболической активности печени и оценки эффективности применения антигипоксантов при травматическом токсикозе.

6. Сопоставить экспериментальные и математические данные по выявлению наиболее значимых факторов индивидуальной стрессустойчивости, оценке прогнозирования сроков нормализации функционально-метаболической активности печени и эффективности применения антигипоксантов при травматическом токсикозе.

Научная новизна

Проведено сопоставление функционально-метаболической активности печени крыс с различной индивидуальной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли в раннем периоде травматического токсикоза.

Доказано, что наиболее значимым фактором для функционально-метаболической активности печени в раннем периоде травматического токсикоза является индивидуальная устойчивость к гипоксии.

Разработаны новые фармакологические подходы к коррекции нарушенных функций и метаболизма печени при травматическом токсикозе с использованием оригинальных субстратных сукцинатсодержащих антигипоксантов. Сформулированы практические рекомендации по применению субстратных сукцинатсодержащих антигипоксантов в раннем периоде травматического токсикоза с учетом индивидуальной стрессустойчивости организма.

Разработаны и апробированы оригинальные математические модели, позволяющие прогнозировать сроки нормализации (восстановления) функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе и оценивать эффективность применения фармакологических средств в посттравматическом периоде. Обоснована перспективность применения

математических моделей для оптимизации (удешевления) материальных затрат на проведение лечения травматического токсикоза.

Работа относится к фундаментальным исследованиям в области медицины катастроф. Полученные в ней данные принципиально важны для решения проблемы лечения травматического токсикоза с учетом индивидуальной устойчивости к экстремальным факторам.

Научно-практическая значимость

Разработана концепция о сопряженности функционально-метаболической активности печени с индивидуальной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли, что позволяет рассматривать стрессоустойчивосгь как прогностический фактор течения раннего периода травматического токсикоза и его фармакологической коррекции.

Установленные на основании наблюдаемой динамики изменений функций печени временные периоды наиболее выраженных нарушений позволяют дифференцированно проводить фармакологическую коррекцию повреждений печени при травматическом токсикозе.

Анализ и выделение фактора индивидуальной устойчивости к гипоксии как наиболее значимого для формирования функционально-метаболических нарушений в печени расширяют представления о патогенезе раннего периода травматического токсикоза и роли печени в течении травматической болезни.

Данные о возможности коррекции нарушенных функций печени субстратными антигипоксантами служат основанием для разработки рекомендаций по «метаболической реанимации» печени при данной патологии с учетом индивидуальной устойчивости к экстремальным факторам.

Разработанные математические модели позволяют оценивать в эксперименте и практической медицине эффективность применения фармакологических средств, прогнозировать динамику функционально-метаболических изменений печени при травматическом токсикозе в зависимости от индивидуальной стрессоустойчивости и экономить время и материальные средства на проведение трудоемких исследований.

Данная работа вносит вклад в проблему патогенеза и лечения травматического токсикоза.

Методология и методы исследования

Методология исследования предусматривала оценку функционально-метаболической активности печени в раннем периоде травматического токсикоза и эффективности ее коррекции сукцинатсодержащими антигипоксантами у животных с различной индивидуальной устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли. С этой целью использован комплексный подход, включающий физиологические, патофизиологические, биохимические, морфологические, фармакологические и математические методы исследования.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В раннем периоде травматического токсикоза нарушается ультраструктура гепатоцитов и возникают функционально-метаболические расстройства печени, характеризующиеся развитием цитолитического синдрома, нарушением экскреторной, детоксикационной, ферментной и углеводной функций, а также снижением энергетического потенциала, активацией процессов перекисного окисления липидов и угнетением антиоксидантных систем.

2. В функционально-метаболических изменениях печени и степени их восстановления при травматическом токсикозе существенную роль играет генетически детерминированный тип метаболизма, который проявляется в различной устойчивости к гипоксии и чувствительности к боли. Тяжелая компрессионная травма у животных вызывает качественно одинаковые изменения функционально-метаболического состояния печени, но более глубокие у низкоустойчивых к гипоксии и высокочувствительных к боли животных.

3. Критическими временными периодами при травматическом токсикозе, характеризующимися наибольшими изменениями основных функциональных систем организма и метаболизма, у животных с различной болевой чувствительностью являются период сразу после декомпрессии и спустя 6 ч после травмы, у животных с различной устойчивостью к гипоксии — спустя 612 ч после травмы.

4. Применение сукцинатсодержащих антигипоксантов при травматическом токсикозе увеличивает выживаемость и препятствует нарушению функционально-метаболической активности печени у животных с различной стрессоустойчивостью.

5. Эффективность антигипоксантов различна на протяжении посттравматического периода. Позитивные эффекты цитофлавина у высокоустойчивых к гипоксии животных проявляются через 12 ч после травмы. Эффективность реамберина и цитофлавина в обеих группах животных наблюдается через 72 ч, соединения ВМ-616 — через 12 ч после травмы, а метапрота плюс через 6 ч после травмы. Метапрот плюс проявляет наибольшую эффективность у низкоустойчивых животных, чем у животных с высокой устойчивостью к гипоксии.

6. Применение реамберина у животных с различной болевой чувствительностью эффективно через 24 ч после травмы, цитофлавина и соединения ВМ-616 - через 12 ч, а метапрота плюс через 6 ч после травмы. Метапрот плюс проявляет равную эффективность у высоко- и низкочувствительных к боли животных.

7. У животных с различной стрессоустойчивостью по убыванию эффективности защитного действия при травматическом токсикозе препараты располагаются в ряду: метапрот плюс > соединение ВМ 616 > цитофлавин > реамберин.

8. Разработанные математические модели позволяют прогнозировать возможное отклонение метаболических показателей в печени животных от нормальных значений, сроки их восстановления и оценивать эффективность фармакотерапии травматического токсикоза.

Степень достоверности и апробация материалов исследования

Достоверность исследования определялась достаточным количеством данных, полученных с использованием 1920 крыс, соблюдением правил доказательной медицины (выборка, рандомизация, наличие контролей), сроками наблюдений (3-е сут), использованием адекватных методов исследования, корректной статистической обработкой полученных данных с помощью современных компьютерных программ.

Апробация материалов исследования. Материалы диссертации доложены на Международной научной конференции «Экспериментальная и клиническая фармакология» (Минск, 2009); VII Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 160-летию со дня рождения И.П. Павлова «Механизмы функционирования висцеральных систем», (Санкт-Петербург, 2009); V международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2010); I Российском конгрессе с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное» (Санкт-Петербург, 2010); 2-й конференции Российской ассоциации психонейроэндокринологии (Москва, 2010); XXI съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010), на XV Юбилейном международном Салоне изобретений и инновационных технологий «Архимед-2012», XXII съезде физиологического общества им. И.П.Павлова (Волгоград, 2013).

Апробация диссертации прошла на межкафедральном заседании кафедры патологической физиологии с курсами иммунопатологии и медицинской информатики и Научно-исследовательского центра ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, кафедры теории и методики физической культуры ГБОУ ВПО «Российский государственный педагогический университет им. А.И.Герцена», кафедры медико-биологических дисциплин Санкт-Петербургского медико-социального института и кафедр фармакологии и патофизиологии ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия им. С.М.Кирова» Министерства обороны РФ».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 34 научные работы, в том числе 18 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Личный вклад автора. Личное участие автора осуществлялось на всех этапах работы и включало планирование и проведение исследований, формулирование цели и задач, определение объема и методов исследования, анализ и обобщение всех полученных данных. Участие автора в выполнении, сборе и анализе — 95%, статистической обработке - 100%, В написании статей и тезисов - 90%, написании диссертации и автореферата - 95%. Под

руководством автора выполнялись морфологические исследования при участии д.м.н. А.В Дробленкова и разрабатывались математические модели к. физ.-мат. н. А.Г.Курицыным.

Реализация результатов работы. Диссертационная работа выполнена в рамках плановых тем НИР ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» МЗ РФ и темы НИР Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова МО РФ «Разработка методов коррекции дисфункции печени при травматическом токсикозе, возникающем в условиях боевых действий, аварийных ситуациях и стихийных бедствиях». Результаты работы реализованы в научно-исследовательской деятельности и учебном процессе кафедры патологической физиологии ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» МЗ РФ, кафедры фармакологии Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова и Физиологического отдела им. И.П. Павлова ФГБУ «Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины» СЗО РАМН. Автором получен Патент РФ «Средство, защищающее от травматического токсикоза» по заявке №2009110696 от 23.03.2009 г. Разработка патента удостоена бронзовой медали на XV Юбилейном международном Салоне изобретений и инновационных технологий «Архимед-2012».

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 358 страницах машинописного текста, иллюстрированы 97 таблицами, 36 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, научно-практических рекомендаций, списка использованной литературы, приложения. Библиографический указатель содержит 465 наименований, в том числе 344 отечественных и 121 иностранных.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Выбор животных. Опыты выполнены на 1920 половозрелых крысах-самцах Вистар массой 160-180 г, полученных из питомника Рапполово РАМН (Ленинградская область). Животных содержали в виварии в стандартных условиях освещения и питания при свободном доступе к воде и пище. Исследования осуществляли в соответствии с «Руководящими методическими материалами по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств» (1984), «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных (1985), «Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных» (1996) и «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ от 2003 г. № 267). Работа одобрена локальным комитетом по этике при Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова.

Разделение животных по их устойчивости к острой гипоксии. За 48 ч до моделирования травматического токсикоза животных поднимали в

барокамере на высоту 11 ООО м со скоростью 50 м/с и экспозицией на высоте до возникновения атонального дыхания. Животные, выдерживающие воздействие гипоксии менее 5 мин, считались низкоустойчивыми (НУ), более 10 мин-высокоустойчивыми (ВУ).

Разделение животных по индивидуальной болевой чувствительности. Индивидуальную болевую чувствительность определяли по отдергиванию хвоста при воздействии на него фокусированного теплового луча, тест tail-flick (Kawakita К., Funakoshi М., 1987). Латентный период отдёргивания хвоста регистрировали с помощью оптоэлектронного аналгезиметра ТФ-003 (Россия). Мощность лампы осветителя составляла 50 Вт, сила тока 3 мА, точность регистрации — 0,1 с. Животные с болевым порогом менее 5 с (временем задержки отдергивания хвоста) считались высокочувствительными к боли (ВЧ), более 10 с - низкочувствительными (НЧ) к боли. Спустя 48 ч моделировали травматический токсикоз.

Моделирование травматического токсикоза. Травматический токсикоз воспроизводили у животных 4-часовым сдавлением мягких тканей тазовых конечностей в тисках площадью 5 см2 с желобообразным вырезом дня предупреждения перелома бедренной кости, расстояние между пластинами составляло 3-4 мм, кожу и кости при этом не повреждали (Кулагин В.К., 1978). Материал для исследования забирали сразу после травмы и спустя 6, 12,24 и 72 часа.

Физиологические методы исследования. Системное артериальное давление у крыс измеряли в общей сонной артерии с помощью ртутного манометра. Частоту сердечных сокращений подсчитывали по интервалу R-R электрокардиограммы, зарегистрированной во втором стандартном отведении на электрокардиографе ЭКСПЧ-061. Частоту дыхательных движений у крыс подсчитывали визуально в течение 10 секунд с последующим пересчетом на одну минуту. Ректальную температуру измеряли медицинским термометром «ТПЭМ-1». Потребление кислорода у крыс определяли с помощью аппарата закрытого типа конструкции С.В. Миропольского. Показатели кислотно-основного состояния крови измеряли на приборе микро-аструп (Дания). Продолжительность гексеналового сна крыс оценивали после введения 0,6% раствора гексенала (в/бр, 60 мг/кг).

Биохимические методы. [Исследование ферментативной активности печенн. Активность аланин- и аспартатаминотрансфераз определяли стандартными наборами реактивов «Lachema» (Чехия). Активность лактатдегидрогеназы оценивали по скорости окисления НАДН (Bergmeyr H.U., 1974). Активность сукцинатдегидрогеназы определяли по реакции восстановления феррицианида калия сукцинатом под действием сукцинатдегидрогеназы (Ещенко Н.Д., Вольский Г.Г., 1982). Активности всех изучаемых ферментов относили к содержанию белка в пробах, определяемого унифицированным методом О.Н. Lowry.

Исследование экскреторной функции печени. Содержание бромсульфалеина в крови определяли по модифицированному нами методу Л.И. Израйлет и др. (1976).

Исследование детоксикационнон функции печени. Содержание цитохромов Р-450 и Ьз определяли по методу T.S. Omura, R. Sato (1964); активность N-деметилазы амидоприна определяли в микросомах, выделенных из гепатоцитов центрифугированием при 105 000q на ультрацентрифуге L-8-55 М Beckman (Campbell et al., 1978). Содержание в крови мочевины, мочевой кислоты, креатинина, калия определяли наборами реактивов на автоматическом анализаторе «Hitachi 902 w ISE» (Япония).

Исследование энергетического потенциала печени. Об энергетическом потенциале печени судили по содержанию АТФ, АДФ, АМФ, цАМФ и величине энергетического заряда системы адениннуклеотидов (Atkinson D., 1968). Свободные адениннуклеотиды в охлажденной жидким азотом печени определяли тонкослойной хроматографией с последующей прямой флуориметрией пластин на спектрофлуориметре MPF-4 (Hitachi, Япония) (Зарубина И.В., Криворучко Б.И., 1982). В качестве свидетелей использовали хроматографически чистые аденозин-5-моно-, ди- и трифосфаты фирмы «Sigma» (США). Содержание циклического аденозинмонофосфата исследовали с использованием набора реактивов фирмы «Amersham» (Англия). Содержание глюкозы определяли наборами реактивов на автоматическом биохимическом анализаторе «Hitachi 902 w ISE» (Япония). Содержание молочной и пировиноградной кислот определяли спектрофотометрическими методами (Методы биохимических исследований..., 1982).

Методы определения продуктов перекисного окисления липидов. Об интенсивности свободнорадикальных процессов в печени судили по концентрации первичных (диеновые конъюгаты ненасыщенных жирных кислот) и вторичных (малоновый диальдегид, МДА) продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Путилина Ф.Е. и соавт., 2006; Стальная И.Д. и соавт., 1977).

Методы определения активности антиоксидантных ферментов.

Активность супероксиддисмутазы (СОД) оценивали методом Е.Е. Дубининой и соавт., (1983) и относили к содержанию белка в пробах. Содержание восстановленного глутатиона определяли по его реакции с избытком аллоксана (Путилина Ф.Е. и др., 2006).

Морфологические методы. Ткани печени для исследования обрабатывали по стандартной электронно-микроскопической методике (Уикли Б., 1975). С полученных блоков на ультратоме Ultracut Е фирмы Reichert (Австрия) изготавливали срезы ткани печени в вертикальной плоскости: полутонкие (1 мкм) и ультратонкие (70 нм). Полутонкие срезы окрашивали 1% раствором толуидинового синего, ультратонкие - спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца. Просмотр и фотосъемку полученных срезов осуществляли в фотомикроскопе фирмы Opton (Германия), ультратонких - в электронных микроскопах JEM-100 СХ фирмы JEOL и Hitachi Н300 (Япония)

при ускоряющем напряжении 80 кВ. На светооптическом и электронно-микроскопическом уровнях параллельно анализировали структуру гепатоцитов в различных слоях. Раздел выполнен совместно с д.м.н. A.B. Дробленковым.

Характеристика фармакологических препаратов. В работе использовали фармакологические средства из группы субстратных сукцинатсодержащих антигипоксантов: цитофлавин и реамберин (ЗАО «Полисан», СПб), 1ч[-2-(4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]нндолил) сукцинаминовую кислоту под лабораторным шифром ВМ 616, (синтезирована на кафедре фармакологии ВМедА им. С.М. Кирова), метапрот плюс (ЗАО «Антивирал», СПб). Сразу после декомпрессии и далее ежедневно на протяжении 3-х суток животным вводили внутрибрюшинно в оптимальных эффективных дозах: цитофлавин 1,5 мл/кг, реамберин 10 мл/кг, метапрот плюс 25 мг/кг и растворенную в физиологическом растворе с добавлением твина-80 субстанцию К-2-(4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индолил)сукцинаминовую кислоту 25 мг/кг.

Математические модели. Разработаны математические модели, позволяющие у животных с различной стрессоустойчивостью (ВУ, НУ, ВЧ, НЧ) исследовать изменения во времени показателей функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе и при ее коррекции антигипоксантами. Для построения моделей анализировали влияние следующих факторов: иммобилизация, травма, травма+реамберин, травма+цитофлавин, травма+ВМ616, травма+метапрот плюс. При анализе использованы средние значения независимых измерений соответствующих показателей в моменты: 0 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч и 72 ч после травмы и их среднеквадратические погрешности. Во всех случаях непосредственно после травмы имело место значительное отклонение значений показателей от контроля - вверх или вниз (табл. 1).

Таблица 1

Основные тенденции изменений показателей для большинства воздействий

Показатель Отклонение после травмы Локальный экстремум

ВУ ВЧ НУ НЧ

Ы-деметилаза Вниз Мин Нет Мин Нет

АлТ в сыворотке крови Вверх Макс Макс Макс Нет

АсТ в сыворотке крови Вверх Макс Нет Макс Макс

АТФ Вниз Нет Нет Мин Нет

Глюкоза Вверх Макс Нет Макс Нет

МДА Вверх Нет Нет Нет Нет

мк Вверх Макс Нет Макс Нет

Р-450 Вниз Нет Нет Мин Нет

сод Вниз Мин Нет Мин Нет

Дальнейшие изменения показателя можно описать двумя моделями. Для первой модели показатель возрастает (или убывает), достигая локального экстремума (максимума или минимума), а затем возвращается в сторону

нормального значения. Для второй модели показатель монотонно возвращается в сторону нормального значения, локальный экстремум отсутствует. Для оценки влияния соответствующего фактора предложено в качестве интегральной характеристики отклонения показателя от нормы использовать среднее по времени наблюдения отклонение:

я = ;/0г(у(0 -УЯИТ)Л =Уср-Уи«т. где

у.р = i/ory(t)dt - среднее значение показателя;

y(t) — функция, описывающая зависимость показателя от времени;

Унт — значение показателя у интактной группы;

Т-общее время наблюдения (в нашем случае: Т= 72 ч.).

Поскольку зависимость y(t) неизвестна, оценку уср можно приближённо найти, используя квадратурную формулу:

п

Уср = ^ ск ■ У* ■

Для каждого из показателей, при различных воздействиях (включая контроль) отдельно по группам (ВУ, НУ, ВЧ и НЧ) вычисляли отклонение R и относительное отклонение:

я

—100% У ИНТ

Для сравнения значимости отличий средних для каждого из воздействий в различных группах (ВУ-НУ, ВЧ-НЧ) использовали критерий Стьюдента. Указанные расчеты проводили при помощи специальной базы данных на основе программ Microsoft Excel и Microsoft Access 2007. Для обработки экспериментальных данных был создан специализированный программный модуль на языке VBA (Visual Basic for Application), позволяющий находить оценки параметров каждой из выше рассмотренных моделей, а также ряд их характеристик (момента достижения параметром наибольшего отклонения от нормы, величину этого отклонения и др.). В результате анализа характера изменения во времени рассматриваемых показателей при различных воздействиях предложена следующая формула:

y(t) = 0l + oj ■ (1 - е-^-%1 + a4 • t)). (1)

При этом величина а\ = >(0) (значение показателя непосредственно после

Uj + а2 = lim y(t)

травмы) - одна и та же при всех воздействиях; - предельное

значение показателя; а3 > 0 - величина, характеризующая скорость приближен™ показателя к предельному значению. Величина <я4 «отвечает» за наличие локального экстремума у функции. В частности, если а4 = 0:

у(0 = аг + а2 • (1 - е'а'") (2) - монотонная функция (модель 2).

- 1 _-L

'гдггг — ~ ~ *

Если щ * 0, локальный экстремум достигается в точке 3 4

Условие texir > 0 выполняется, если а* < 0, либо а* > аз. Случай 0 < д4 < Дз означает, что при t > 0 y{t) - монотонная функция, и можно использовать более простую формулу (2). Вычисления проводили в системе компьютерной алгебры

MathCAD (версия 13). Зная коэффициенты аи а2, аз, а4 для комбинаций «показатель-воздействие-группа», найденные по методу наименьших квадратов, для каждой из зависимостей рассчитывали значения texlr, y{tex,r), а также моменты fc , после которых величина параметра отличается от уякт менее, чем на 20%. Значения у^ найдены путем интегрирования выражений (1) — (2). Используя разработанные модели и соответствующие им коэффициенты, можно прогнозировать максимальное отклонение изучаемых показателей от нормальных значений и сроки их восстановления. Наряду с этим модели позволяют оценивать эффективность фармакотерапии. Раздел выполнен совместно с к.физ-мат.н. А.Г. Курицыным.

Статистическая обработка результатов исследования. Математическую обработку результатов исследования проводили с использованием стандартного пакета программ STATISTICA for Windows по общеизвестным методам вариационной статистики. Подтверждено соответствие вида распределения признаков закону нормального распределения. Минимальная выборка для каждой группы животных составила 10 крыс. Для сравнения независимых и зависимых групп использовали t-критерий Стьюдента, а также критерии Фишера, Манна-Уитни и Вилконсона (Реброва О.Ю., 2002). Различия в сравниваемых группах считались достоверными при уровне значимости 95% (р<0,05). В тексте, таблицах и на рисунках результаты экспериментов представлены в виде М ± ш, где: М -среднее значение исследуемых показателей, ш - среднеквадратичная ошибка. Анализ результатов статистического исследования проводили с позиций доказательной медицины (Гринхальх Т., 2006; Григорьев С.Г., Евдокимов В.И., 2008).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Общая характеристика раннего периода травматического токсикоза в зависимости от индивидуальной стрессоустойчивостн

Показано, что интактные НУ к гипоксии животные отличаются от ВУ более высокими значениями потребления кислорода и напряжения углекислого газа в крови, высоким уровнем в тканях лактата, продуктов липопероксидации, а также низким напряжением кислорода в крови, содержанием в тканях пирувата, энергетическим потенциалом и активностью антиоксидантных систем. Интактные НЧ и ВЧ к боли крысы не имеют существенных различий по большинству исследованных показателей. Тяжелая компрессионная травма у животных с высокой и низкой устойчивостью к гипоксии и чувствительностью к боли вызывает качественно одинаковые изменения функционального состояния. Во время наложения тисков на мягкие ткани бедра нижних конечностей у крыс наблюдали неспецифическое возбуждение, нарушение актов физиологических отправлений, сильную голосовую реакцию, учащение и углубление дыхания. Во время компрессии эти реакции у животных продолжались в течение часа и можно полагать, что они относились к эректильной фазе травматического шока. В дальнейшем возбуждение сменялось угнетением общего состояния, животные были адинамичны, что

характерно для фазных изменений при шоке (Мазуркевич Г.С., Багненко С.Ф., 2004). Гибели животных сразу после декомпрессии не наблюдали, а спустя 6 ч после травмы у части животных развивалось терминальное состояние. Наименьшая выживаемость у животных с различной устойчивостью к гипоксии наблюдалась через 12 ч, у крыс с различной чувствительностью к боли через 6 ч после травмы (рис. 1).

Рис. 1. Выживаемость животных при травматическом токсикозе

У всех животных была выраженная гипотензия, брадикардия, дыхание урежалось и становилось поверхностным или периодическим, снижалось потребление кислорода, нарушалось кислотно-основное состояние. Эти изменения были более выражены у НУ к гипоксии и у ВЧ к боли животных и сохранялись в течение 3-х сут после декомпрессии. Тяжелая травма вызывала нарушение экскреторной функции печени сразу после декомпрессии, о чем свидетельствовало замедление равномерного распределения бромсульфалеина (БСФ) в крови крыс с различной стрессоустойчивостью (рис. 2).

400 ■*>/„

350 300 250 200 150 100 50 0

353

82 7П бЗг-1 70

Ж!

□ ВУ ОНУ

256

198

147

400 350 300 250 180 200 150 100 50 0

НЧ ВЧ

311

77

II

221

184 184

0ч

6 ч

12 ч 24 ч

0 ч 6 ч 12 ч 24 ч 72 ч

Рис. 2. Процент задержки бромсульфалеина в крови животных с различной стрессоустойчивостью при травматическом токсикозе

Наибольший процент задержки БСФ в крови НУ к гипоксии крыс и с различной чувствительностью к боли обнаружен спустя 6 ч, а у ВУ к гипоксии спустя 12 ч после декомпрессии. В эти периоды у животных наблюдалась атипичная кривая выведения БСФ из крови, что свидетельствует о замедлении тканевого кровотока печени. О развитии эндотоксемии сразу после декомпрессии животных свидетельствует увеличение в крови содержания мочевой кислоты, мочевины, креатинина и калия. Нарушение антитоксической функции печени подтверждало удлинение продолжительности гексеналового сна животных (рис. 3) и снижение в печени активности микросомальных ферментов - цитохрома Р-450 и цитохрома Ь5. 144%, активность АсТ - на 74%, в группе ВЧ животных соответственно на 188% и 74% (р<0,05).

300

200

100

%

□ву о НУ

554 500 | 482

336

100

240

500

300

200

контроль 1 6 12 24 72 ч контроль 1 6 12 24 72 ч

Рис. 3. Продолжительность гексеналового сна при травматическом токсикозе у крыс с различной стрессоустойчивостью

Изменения процессов биотрансформации в печени были наиболее выражены у животных с различной чувствительностью к боли спустя 1 ч, а животных с разной устойчивостью к гипоксии спустя 12 ч после декомпрессии. Проявления цитолитического синдрома, регистрируемые по увеличению в крови и снижению в печени активности печеночно-специфических аминотрансфераз, у животных наблюдались сразу после декомпрессии и были наиболее выражены у НУ к гипоксии через 12 ч и ВЧ к боли крыс сразу после травмы. Спустя 12 ч после травмы активность АлТ в крови ВУ крыс была на 44%, а АсТ на 76% выше контрольных значений, в крови НУ крыс - на 65% и 80% соответственно (р<0,05). В печени ВУ крыс активность АлТ снижалась на 50%, АсТ на 35%, в печени НУ крыс на 39% и 59% (р<0,05). У животных с различной чувствительностью к боли наибольшие изменения наблюдали сразу после декомпрессии. В крови НЧ к боли животных активность АлТ увеличивалась на В печени крыс сразу после травмы активность АлТ и АсТ достоверно снижалась у НЧ животных на 46% и 73%, ВЧ крыс - на 56% и 84%. К третьим суткам после травмы активность аминотрансфераз в крови и печени животных не восстанавливалась до контрольных величин. В эти же сроки посттравматического периода в печени животных и, особенно у НУ и ВЧ крыс,

увеличивалась активность лактатдегидрогеназы, что свидетельствует об анаэробном пути метаболизма в раннем периоде травматического токсикоза (рис. 4).

550% ■ 450% ■ 350% • 250% ■ 150% ■ 50% ■ ^ -* -ВУ ЛДГ / ч —»"НУ ' / \\ / > ^ / \ 750% • 650% • 550% • 450% • 350% • 250% • 150% • 50% • ^ -* нч -в-вч \ \\ лдг %

-50% ■ -50% • ^ -г: * ^ -Ш--

-150% ■ сдг -150% »- сдг

0 6 12 24 72 ч 0 6 12 24 72ч

Активность ЛДГ И СДГ В печени крыс с

различной

Рис. 4.

стрессоустойчивостью при травматическом токсикозе

Известно, что в условиях анаэробиоза основным источником энергии становится окисление флавинзависимых субстратов и, в первую очередь, сукцината (Лукьянова Л.Д., 2008; Маевский Е.И. и соавт., 2009). Однако нами установлено снижение активности сукцинатдегидрогеназы в печени крыс и, особенно у НУ и ВЧ. При травматическом токсикозе в печени животных с различной стрессоустойчивостью увеличивалось содержание глюкозы и лактата, снижалось содержание гликогена и пирувата. Подобные изменения показателей углеводного обмена свидетельствует о переходе гепатоцитов преимущественно на анаэробный гликолиз и возникновении метаболического ацидоза. Наибольшие изменения наблюдались у ВУ к гипоксии крыс через 12 ч и ВЧ к боли животных сразу после травмы. Таким образом, в раннем периоде травматического токсикоза нарушается ферментная функция печени. В печени крыс при травматическом токсикозе снижалось содержание АТФ и цАМФ на фоне увеличения содержания АДФ и АМФ. Наибольшие изменения наблюдали в группе НУ к гипоксии животных через 12 ч и в группе ВЧ к боли крыс через 6 ч после травмы. Изменения содержания адениннуклеотидов в печени крыс приводили к снижению величины энергетического заряда адениловой системы 0,800

0,600 0,400 0,200 0,000

(рис. 5).

6ч

12ч

24ч 72ч

Рис. 5. Изменение величины энергетического заряда в печени крыс с различной стрессоустойчивостью при травматическом токсикозе

Энергодефидит и сопутствующие ему нарушения метаболизма печени создают предпосылки для инициации перекисного окисления липидов в тканях печени при травматическом токсикозе (рис. 6).

Сразу после декомпрессии животных и на протяжении всего периода наблюдений в печени и, особенно, у НУ к гипоксии и ВЧ к боли крыс увеличивалось содержание диеновых конъюгатов и малонового диальдегида на фоне снижения активности СОД и содержания восстановленного глутатиона. Таким образом, в функционально-метаболических изменениях печени при травматическом токсикозе существенную роль играет генетически детерминированный тип метаболизма, который проявляется в различной устойчивости к гипоксии и чувствительности к боли. Травматический токсикоз вызывает качественно одинаковые изменения функционально-метаболического состояния печени, но наиболее глубокие у НУ к гипоксии и ВЧ к боли животных.

Наибольшие изменения у животных с различной устойчивостью к гипоксии наблюдаются спустя 6 - 12 ч после травмы, у крыс с различной болевой чувствительностью — сразу и спустя 6 ч после травмы. Это позволяет выделить эти этапы посттравматического периода как критические временные периоды при травматическом токсикозе.

120

О 6 12 24 72 О 8 12 24 72

-20 -40 -60 -80 -юа

%

-93

56

-77 -79

рг

;36-зэ -40

1ВУ нч

□ НУ ВЧ

Рис. 6. Изменение содержания малонового диальдегида (А) и активности супероксиддисмутазы (Б) в печени крыс с различной стрессоустойчивостью при травматическом токсикозе

Наблюдаемые нарушения функционально-метаболической активности печени у животных были подтверждены морфологическими исследованиями. Следует отметить, что между группами ВУ и НУ к гипоксии, НЧ и ВЧ к боли интактных животных различий в структурных изменениях печени не выявлено и при травматическом токсикозе морфологическая картина была сходна. Сразу после травмы ультраструктура гепатоцитов претерпевала изменения, которые прогрессировали на протяжении суток и были наиболее выражены спустя 6 ч после травмы. В гепатоцитах возрастало количество ядер и их инвагинаций, что увеличивает площадь поверхности ядра и позволяет поддерживать обменные процессов между ядром и цитоплазмой. Митохондрии как наиболее лабильные органеллы гепатоцитов изменялись сразу после декомпрессии и через сутки большинство из них имели признаки набухания и редукции крист, что свидетельствует о глубоких нарушениях энергопродуцирующей функции гепатоцитов. В клетках появлялось большое количество вакуолей, встречающихся даже в ядрах. Сразу после травмы и далее на протяжении суток в гепатоцитах уменьшалось количество гранул гликогена, появлялись вторичные крупные лизосомы и значительное количество липидных включений. На протяжении всего периода наблюдений аппарат Гольджи гепатоцитов был гипертрофирован, изменялся агранулярный эндоплазматический ретикулум, что свидетельствует о нарушении антитоксической функции печени. Таким образом, установлено наличие ультраструктурных изменений, свидетельствующих о повреждениях митохондриального аппарата, цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса, ответственных за энергетический, углеводный и белковый обмен в печеночных клетках.

Сравнительная характеристика эффективности антигипоксантов при травматическом токсикозе в зависимости от стрессоустойчивости

Применение антигипоксантов оптимально на догоспитальном этапе оказания помощи в практике медицины катастроф (само- и взаимопомощь, медпункты предприятий, на транспорте, неспециализированная скорая помощь и т.п.) (Организация ..., 1991; Виноградов В.М., Криворучко Б.И., 2004). Для решения вопроса об эффективности раннего применения антигипоксантов для предупреждения развития дисфункции печени при травматическом токсикозе животным вводили сукцинатсодержащие антигипоксанты в минимальных эффективных дозах сразу после декомпрессии. Эффекты антигипоксантов оценивали в динамике посттравматического периода.

Установлено, что соединение ВМ 616 и, особенно метапрот плюс, достоверно увеличивали выживаемость животных с различной стрессоустойчивостью в наиболее критические для них периоды травматического токсикоза (рис. 7). Цитофлавин защищал НЧ, ВЧ и ВУ

животных, а реамберин не увеличивал выживаемость животных. Положительная динамика показателей основных функциональных систем наблюдалась на фоне действия метапрота плюс у ВУ и НУ к гипоксии животных спустя 6 ч после травмы (табл. 2).

Рис. 7. Влияние антигипоксантов на выживаемость животных с различной устойчивостью к гипоксии через 12 ч после травмы и чувствительностью к боли через 6 ч после травмы: 1 - травма, 2 — травма+реамберин, 3 — травма+цитофлавин, 4 - травма+ВМ-616, 5 - травма+метапрот плюс

Эффективность цитофлавина в коррекции физиологических показателей проявлялась спустя 12 ч после травмы в группе ВУ крыс и соединения ВМ 616 в обеих группах животных, а реамберина и цитофлавина в группе НУ крыс -спустя 3-е сут после травмы.

У крыс с различной чувствительностью к боли эффективность цитофлавина, соединения ВМ 616 и метапрота плюс проявлялась спустя 12 ч после травмы, а реамберина — спустя сутки после травмы (табл. 3). Улучшение показателей системы дыхания и кровообращения может быть обусловлено уменьшением степени кислородного голодания тканей, что является основным механизмом лечебного эффекта антигипоксантов (Лукьянова Л.Д., 2011).

Таблица 2

Влияние антигипоксантов на показатели системы кровообращения и дыхания ВУ и НУ к гипоксии крыс _ при травматическом токсикозе (М + ш, п = 10-15)__

ч Воздействие АД, мм рт.ст. ЧСС, уд/мин ЧД, мин П02, мл/мин ЮОг1

ВУ НУ ВУ НУ ВУ НУ ВУ НУ

6 Травма (контроль) 72±5 62±7 314+17 228+16 85,9+7,5 73,8+6,8 2,42+0,23 2,22+0,25

Травма+реамберин 74±6 67±5 321+15 231+14 87,6+6,4 75,2+6,2 2,55+0,24 2,31+0,22

Травма+цитофлавин 77±7 65±3 317+14 234+12 86,4+5,6 74,8+5,8 2,62+0,22 2,38+0,24

Травма+ВМ 616 75±4 68+6 334+16 244+13 88,1+6,5 76,4+6,4 2,74+0,25 2,42+0,26

Травма+метапрот плюс 124±4* 112+6* 366+11* 357+11* 96,5+6,3* 92,4+5,4* 3,55+0,25* 3,66+0,27*

12 Травма (контроль) 75+4 52±3 335+11 213+17 82,0+13 72+12 2,85+0,30 2,38+0,25

Травма+реамберин 79+5 57±5 338+12 217+14 87,6+6,4 75,2+6,2 2,55+0,24 2,31+0,22

Травма+цитофлавин 88±4* 54±3 421+13* 223+16 96,5+6,3* 68,4+5,4 3,55+0,25* 2,66+0,27

Травма+ВМ 616 81+3* 76±3* 422+14* 334+15* 92,3+6,2* 86,7+6,6* 3,79+0,23* 3,44+0,26*

Травма+метапрот плюс 124+4* 97±5* 420+7* 341+15* 106,2+5,5* 99,6+6,4* 3,88+0,22* 4,11+0,23*

24 Травма (контроль) 107+6 87+4 375+11 289+12 105,0+11,0 88,0+14,0 3,48+0,26 2,66+0,25

Травма+реамберин 112±7 92+4 394+13 294+14 99,2+5,4 84,4+5,2 3,45+0,25 2,57+0,24

Травма+цитофлавин 107+6* 88±3 375+11* 292+12 122,4+5,6* 99,5+5,4* 4,21+0,22* 3,77+0,23*

Травма+ВМ 616 127+5* 117+6* 442+15* 392+15* 127,7+5,3* 122,0+5,4* 4,47+0,21* 4,22+0,24*

Травма+метапрот плюс 129+3* 121+6* 464+15* 422+14* 129,8+4,4* 128,2+4,4* 4,48+0,23* 4,56+0,22*

72 Травма (контроль) 117±5 97±6 387+11 343+8 128,9+4,4 117,0+4,4 2,96+0,31 2,66+0,34

Травма+реамберин 129+7* 122+4* 422+13* 457+9* 131,7+5,4 125,8+4,4* 3,52+0,22* 3,78+0,24*

Травма+цитофлавин 127+6* 127+4* 445+12* 388+11* 134,2+5,4* 128,2+5,4* 3,65+0,22* 4,11+0,25*

Травма+ВМ 616 131+8* 121+6* 465+11* 492+12* 139,4+5,3* 132,4+4,5* 4,35+0,22* 4,22+0,25*

Травма+метапрот плюс 133±4* 129+5* 479+9* 483+11* 145+13* 139+14* 4,52+0,25* 5,63+0,27*

Примечание: * - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

Таблица 3

Влияние антигипоксантов на показатели системы кровообращения и дыхания НЧ и ВЧ к боли крыс _ при травматическом токсикозе (М + ш, п = 10-15)__

ч Воздействие АД, мм рт.ст. ЧСС, уд/мин ЧД, мин П02, мл/мин ЮОг'1

НЧ ВЧ НЧ ВЧ НЧ ВЧ НЧ ВЧ

6 Травма (контроль) 84±5 70±9 322+11 212+12 89,0+5,0 64,0+8,0 2,44+0,13 2,15+0,24

Травма+реамберин 79±4 68±3 326+12 222+13 92,4+4,4 70,3+5,4 2,38+0,14 2,22+0,25

Травма+цитофлавин 85±6 71±4 330+13 214+15 88,7+3,5 71,2+3,6 2,22+0,12 2,41+0,22

Травма+ВМ 616 87+4 73+5 332+15 216+11 89,6+4,5 66,7+7,4 2,54+0,15 2,12+0,28

Травма+метапрот плюс 88±2 77±4 328+11 229+11 93,2+3,3 72,6+4,4 2,55+0,16 2,16+0,23

12 Травма (контроль) 95±5 81±4 356+12 244+14 95,0+15,0 88,0+12,0 2,94+0,11 2,47+0,15

Травма+реамберин 99±6 87±5 363+14 251+17 96,2+6,8 87,8+7,2 2,88+0,14 2,51+0,12

Травма+цитофлавин 125+5* 112+4* 428+15* 332+13* 102,4+5,4* 96,8+5,2* 3,16+0,15* 3,28+0,17*

Травма+ВМ 616 128+4* 127+5* 435+12* 345+12* 112,4+4,2* 97,8+4,5* 3,43+0,13* 3,55+0,16*

Травма+метапрот плюс 129+5* 131+6* 448+15* 352+14* 126,2+4,4* 111,3+3,4* 3,38+0,22* 3,87+0,13*

.24 Травма (контроль) 99±6 89±4 383+13 294+12 116,0+12 102,0+13 3,03+0,16 2,87+0,15

Травма+реамберин 122+5* 125+2* 421+12* 358+12* 129,7+3,4* 135,6+3,2 3,53+0,15 3,53+0,21

Травма+цитофлавин 128+4* 127+4* 398+11* 366+13* 124,5+5,4* 129,7+5,4* 4,11+0,12* 3,57+0,23*

Травма+ВМ 616 129+5* 131+4* 454+14* 422+15* 128,9+4,3* 127,3+3,4* 4,51+0,21* 4,31+0,17*

Травма+метапрот плюс 132+4* 134+6* 4774+15* 475+14* 132,5+4,4* 131,3+4,4* 4,37+0,23* 4,45+0,12*

72 Травма (контроль) 121+5 107+6 392+14 376+7 127,0+14,0 115,0+14,0 3,17+0,23 4,66+0,34

Травма+реамберин 131±4* 124+2* 453+12* 452+6* 131,5+3,4 126,8+3,5* 3,58+0,21* 3,72+0,24*

Травма+цитофлавин 129±3* 131+3* 456+15* 397+8* 133,5+4,3* 131,3+4,6* 3,71+0,22* 4,22+0,23*

Травма+ВМ 616 132+4* 135+4* 472+12* 483+13* 139,4+5,3* 132,4+4,5* 4,35+0,22* 4,22+0,25*

Травма+метапрот плюс 134+2* 132+5* 484+3* 479+12* 143,4+4,3* 138,2+4,5* 4,38+0,21* 5,56+0,22*

Примечание: * - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

Применение антигипоксантов восстанавливало кислотно-основное состояние крови животных (табл. 4, 5).

Таблица 4

Влияние антигипоксантов на показатели КОС крови различных по устойчивости к гипоксии крыс при травматическом токсикозе (М±ш, п = 10-20)

Показатели/ Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

+ х 00 _о 1 X о. Травма (контроль) ВУ 7,11±0,02 7,17±0,02 7,22±0,02 7,33±0,02

НУ 6,82±0,02 6,95±0,02 7,00±0,02 7,23±0,02

Травма+ реамберин ВУ 7,14±0,03 7,14±0,03 7,24±0,03 7,46±0,02*

НУ 6,78±0,04 6,89±0,04 7,05±0,04 7,45±0,03*

Травма+ цитофлавин ВУ 7,16±0,03 7,57±0,02* 7,61±0,03* 7,63±0,04*

НУ 6,81±0,04 6,91±0,03* 7,19±0,02* 7,48±0,03*

Травма+ ВМ616 ВУ 7,19±0,04 7,54±0,02* 7,61±0,02* 7,62±0,04*

НУ 6,85±0,04 6,96±0,03* 7,22±0,02* 7,45±0,03*

Травма+ метапротплюс ВУ 7,35±0,02* 7,68±0,02* 7,62±0,02* 7,61±0,04*

НУ 7,08±0,04* 7,15±0,04* 7,22±0,02* 7,54±0,03*

н о и о. 5 S о CU Травма (контроль) ВУ 76,15±0,62 47,52±0,48 58,55±0,51 84,16±0,35

НУ 65,15±0,61 41,11±0,42 48,33±0,51 59,16±0,26

Травма+ реамберин ВУ 76,22±0,54 47,48±0,44 57,58±0,44 92,75±0,32*

НУ 65,11±0,51 42,01±0,42 48,53±0,41 71,56±0,34*

Травма+ цитофлавин ВУ 77,62±0,52 47,74±0,45 95,11 ±0,42* 95,75±0,32*

НУ 65,54±0,51 45,63±0,42 59,22±0,35 91,56±0,34*

Травма+ ВМ616 ВУ 77,67±0,42 85,44±0,43* 92,22±0,42* 94,59±0,34*

НУ 66,14±0,41 66,88±0,42* 85,45±0,34* 92,25±0,36*

Травма+ метапрот плюс ВУ 82,72±0,42* 86,32±0,33* 89,47±0,32* 92,94±0,44*

НУ 74,43±0,41* 76,57±0,32* 86,52±0,34* 90,21±0,46*

н U н о. s S (N о о CL, Травма (контроль) ВУ 22,12±0,41 26,23±0,63 27,33±0,52 37,12±0,44

НУ 12,25±0,42 17,33±0,52 20,16±0,34 26,42±0,32

Травма+ реамберин ВУ 24,30±0,42 21,66±0,35 25,54±0,31 16,65±0,35*

НУ 15,21±0,41 18,47±0,45 19,55±0,33 17,02±0,42*

Травма+ цитофлавин ВУ 24,55±0,42 31,48±0,52* 32,28±0,35* 35,62±0,41*

НУ 15,42±0,41 16,53±0,51 20,44±0,35 42,52±0,42*

Травма+ ВМ616 ВУ 22,53±0,32 36,55±0,42* 37,65±0,33* 36,43±0,41*

НУ 14,32±0,31 28,78±0,41* 32,56±0,42* 42,44±0,32*

Травма+ метапрот плюс ВУ 31,14±0,32* 37,28±0,42* 38,15±0,32* 36,22±0,41*

НУ 24,45±0,31* 29,82±0,41* 35,48±0,42* 43,01±0,32*

Таблица 5

Влияние антигипоксантов на изменение показателей КОС крови у животных с различной чувствительностью к боли при травматическом

Показатели /Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

+ л со 1 Я & Травма (контроль) НЧ 7,10±0,04 7,12±0,03 7,19±0,02 7,23±0,02

ВЧ 6,91±0,02 6,84±0,02 6,98±0,03 7,02±0,03

Травма+ реамберин НЧ 7,13±0,01 7,11±0,03 7,28±0,01* 7,37±0,02*

ВЧ 6,87±0,03 6,91±0,02 7,19±0,02* 7,38±0,03*

Травма+ цитофлавин НЧ 7,12±0,05 7,48±0,02* 7,64±0,03* 7,65±0,04*

ВЧ 6,88±0,04 6,95±0,04* 7,22±0,02* 7,52±0,03*

Травма+ ВМ616 НЧ 7,13±0,05 7,47±0,02* 7,63±0,02* 7,52±0,04*

ВЧ 6,89±0,02 6,98±0,04* 7,25±0,02* 7,48±0,03*

Травма+ метапрот плюс НЧ 7,37±0,02* 7,58±0,02* 7,64±0,02* 7,62±0,04*

ВЧ 7,11±0,05* 7,21±0,04* 7,28±0,04* 7,56±0,02*

н и н О. ГЧ О 0- Травма (контроль) НЧ 76,13±0,62 47,48±0,42 58,48±0,31 84,14±0,25

ВЧ 65,11±0,61 41,22±0,42 48,21±0,41 59,12±0,23

Травма+ реамберин НЧ 76,12±0,44 47,42±0,34 57,64±0,34 93,45±0,32*

ВЧ 65,15±0,41 41,32±0,32 48,63±0,41 72,62±0,34*

Травма+ цитофлавин НЧ 77,62±0,52 57,42±0,33 94,15±0,42* 96,58±0,32*

ВЧ 65,14±0,32 48,68±0,42 91,32±0,35* 92,66±0,34*

Травма+ ВМ616 НЧ 77,17±0,42 86,21±0,33* 93,31±0,32* 94,63±0,34*

ВЧ 65,24±0,31 67,82±0,42* 86,51±0,34* 92,35±0,36*

Травма+ метапрот плюс НЧ 82,63±0,32* 86,54±0,33* 90,42±0,32* 93,14±0,44*

ВЧ 74,63±0,41* 77,64±0,32* 86,58±0,34* 90,25±0,36*

Н и н о. 2 г о о Травма (контроль) НЧ 47,11±0,24 22,12±0,41 26,23±0,33 27,21±0,32

ВЧ 56,01±0,32 12,11±0,22 17,12±0,22 20,11±0,14

Травма+ реамберин НЧ 44,32±0,42 21,15±0,32 26,34±0,31 36,53±0,35

ВЧ 55,27±0,41 13,14±0,35 20,41±0,35 28,03±0,42

Травма+ цитофлавин НЧ 46,65±0,32 32,41±0,32* 31,56±0,36* 36,22±0,31*

ВЧ 55,44±0,41 27,14±0,31* 31,11±0,33* 43,12±0,42*

Травма+ ВМ616 НЧ 42,88±0,32 36,62±0,32* 36,35±0,35* 37,13±0,44*

ВЧ 54,37±0,31 29,12±0,41* 33,62±0,42* 43,24±0,32*

Травма+ метапрот плюс НЧ 30,11±0,32* 36,57±0,42* 37,76±0,32* 37,12±0,42*

ВЧ 34,23±0,31* 30,32±0,41* 36,22±0,42* 44,04±0,32*

Примечание: * - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

Снижение уровня рН крови, увеличение напряжения кислорода и уменьшение напряжения углекислого газа на фоне применения цитофлавина наблюдали через 12 ч после травмы лишь в группе ВУ к гипоксии крыс. В обеих группах животных с различной устойчивостью к гипоксии позитивное действие на КОС реамберин и цитофлавин оказывали лишь на 3-й сут после травмы, соединение ВМ 616 — через 12 ч после травмы, а метапрот плюс

защищал ВУ и НУ животных уже спустя 6 ч после травмы. У НЧ и ВЧ крыс метапрот плюс корригировал кислотно-основное состояние через 6 ч после травмы. При введении реамберина, цитофлавина и соединения ВМ 616 позитивная динамика изменений КОС у ВЧ и НЧ животных наблюдалась через 12 ч после травмы. Применение антигипоксантов способствовало восстановлению экскреторной функции печени, о чем свидетельствовало снижение ретенции БСФ в крови животных. Однако эффективность препаратов была различной (рис. 8).

250 ■ —--" —------------

200 ■ 150 ■ 100 ■ 50 ■ 0 ■

12345 12345

Рис. 8 Влияние антигипоксантов на коэффициент ретенции бромсульфалеина в крови крыс с различной устойчивостью к гипоксии через 72 ч после травмы и с различной болевой чувствительностью через 24 и 72 ч после травмы. Обозначения: 1 - травма, 2 - травма+реамбернн, 3 - травма щггофлавин, 4 - травма ВМ-616, 5 — травма метапрот плюс

Таблица 6

Влияние антигипоксантов на содержание цитохрома Р-450 в печени ВУ и НУ

к гипоксии животных при травматическом токсикозе (М ± ш, п = 10)

Воздействие / Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) ВУ 0,422±0,021 0,322±0,015 0,456±0,019 0,556±0,023

НУ 0,164±0,024 0,102±0,017 0,148±0,024 0,255±0,021

Травма+ реамберин ВУ 0,434±0,025 0,334±0,017 0,461±0,017 0,786±0,022*

НУ 0,168±0,022 0,110±0,016 0,151±0,021 0,600±0,024

Травма+ цитофлавин ВУ 0,441±0,023 0,542±0,014* 0,641±0,016* 0,811±0,021*

НУ 0,171±0,025 0,112±0,016 0,167±0,021 0,269±0,022

Травма+ ВМ616 ВУ 0,435±0,021 0,577±0,012* 0,689±0,014* 0,865±0,017*

НУ 0,166±0,024 0,213±0,014* 0,539±0,015* 0,721±0,022*

Травма+ метапрот плюс ВУ 0,565±0,021* 0,598±0,016* 0,724±0,014* 0,881±0,017*

НУ 0,276±0,023* 0,345±0,014* 0,539±0,015* 0,745±0,024*

Примечание: здесь и в табл. 7 - 11 * - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

На всех этапах наблюдений препятствовал нарушению равномерного распределения БСФ и его задержке удаления из крови животных обеих групп

только метапрот плюс. Эффективность соединения ВМ 616 у ВУ и НУ крыс проявлялась через 12 ч после травмы. Цитофлавин через 12 ч после травмы снижал коэффициент ретенции красителя только у ВУ крыс. На 3-й сутки после травмы коэффициент ретенции БСФ у крыс обеих групп, получавших цитофлавин, соединение ВМ 616 и метапрот достоверно не отличался от значений у интактных крыс. На фоне действия реамберина к 3-им суткам посттравматического периода экскреторная функция восстанавливалась только у ВУ крыс. Введение животным антигипоксантов препятствовало развитию эндотоксемии при тяжелой компрессионной травме мягких тканей конечностей вследствие снижения в крови животных обеих групп содержания мочевины, мочевой кислоты, креатинина и калия. У животных с различной устойчивостью к гипоксии метапрот плюс предупреждал увеличение уровня этих метаболитов в крови животных обеих групп через 6 ч после травмы. Содержание токсичных метаболитов снижалось на фоне действия реамберина в группе ВУ животных через 3-е суток после травмы, цитофлавина — через 12 ч, а через 3-е суток в обеих группах крыс. При введении соединения ВМ 616 содержание мочевины, мочевой кислоты, креатинина и калия в крови ВУ и НУ животных снижалось через 12 ч после травмы. У животных с различной болевой чувствительностью уровень токсичных метаболитов в крови снижался на фоне действия метапрота плюс через 6 ч после травмы, на фоне действия цитофлавина и соединения ВМ-616 через 12 ч после травмы, на фоне действия реамберина спустя 24 ч. Оценка влияния антигипоксантов на активность микросомальных монооксигеназ показала, что реамберин и цитофлавин не влияли на содержание цитохрома Р-450 и Ьз, деметилирующую активность печени НУ к гипоксии животных (табл. 6, 7, 8).

Таблица 7

Влияние антигипоксантов на содержание цитохрома Ьз в печени ВУ и НУ

к гипоксии животных при травматическом токсикозе (М ± т, п = 10)

Воздействие / Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) ВУ 0,413±0,016 0,332±0,015 0,357±0,017 0,462±0,014

НУ 0,254±0,014 0,224±0,013 0,266±0,016 0,331±0,018

Травма+ реамберин ВУ 0,411±0,012 0,322±0,014 0,412±0,014 0,562±0,014*

НУ 0,221 ±0,013 0,211 ±0,015 0,281±0,016 0,348±0,017

Травма+ цитофлавин ВУ 0,432±0,015 0,426±0,016* 0,487±0,015* 0,559±0,014*

НУ 0,231±0,014 0,247±0,014 0,271±0,016 0,342±0,017

Травма+ ВМ616 ВУ 0,447±0,016 0,488±0,013* 0,502±0,015* 0,565±0,014*

НУ 0,265±0,017 0,308±0,014* 0,333±0,016* 0,454±0,015*

Травма+ метапрот плюс ВУ 0,475±0,013* 0,511±0,015* 0,532±0,014* 0,563±0,014*

НУ 0,308±0,014* 0,421±0,016* 0,437±0,016* 0,486±0,015*

Метапрот плюс увеличивал содержание цитохромов и активность деметилазы в печени ВУ и НУ животных через 6 ч, а соединение ВМ 616 через 12 ч после травмы. В группах НЧ и ВЧ к боли животных эти изменения наблюдались на фоне действия реамберина и цитофлавина через 24 ч, соединения ВМ 616 — через 12 ч и метапрота плюс через 6 ч после травмы (табл. 9, 10, 11).

Таблица 8

Влияние антигипоксантов на активность Ы-демитилазы амидошфина в печени ВУ и НУ к гипоксии животных при травматическом токсикозе (М±т, п=10)

Воздействие / Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) ВУ 0,72±0,12 0,57±0,15 1,33±0,14 1,35±0,12

НУ 0,31 ±0,12 0,22±0,14 0,44±0,16 0,61±0,13

Травма+ эеамберин ВУ 0,67±0,09 0,61±0,12 1,27±0,12 1,98±0,09*

НУ 0,36±0,07 0,24±0,11 0,53±0,13 0,74±0,04

Травма+ цитофлавин ВУ 0,75±0,08 0,58±0,12 1,31±0,11 2,08±0,07*

НУ 0,33±0,09 0,25±0,14 0,43±0,09 0,64±0,4

Травма+ ВМ616 ВУ 0,79±0,11 0,87±0,12* 1,36±0,13* 2,37±0,07*

НУ 0,38±0,12 0,45±0,16* 0,48±0,11* 1,54±0,04*

Травма+ метапрот плюс ВУ 0,89±0,11* 1,74±0,14* 2,31±0,12* 2,41±0,09*

НУ 0,48±0,12* 0,65±0,12* 0,89±0,13* 1,58±0,11*

Таблица 9 Влияние антигипоксантов на содержание цитохрома Р-450 в печени НЧ и ВЧ к боли животных при травматическом токсикозе (М ± ш, п = 10)

Воздействие/Группы 6ч 12ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) НЧ 0,374±0,017 0,447±0,011 0,586±0,016 0,798±0,013

ВЧ 0,122±0,024 0,178±0,022 0,284±0,025 0,457±0,021

Травма+ реамберин НЧ 0,289±0,015 0,387±0,019 0,675±0,018* 0,881±0,014*

ВЧ 0,118±0,021 0,181±0,014 0,354±0,019* 0,600±0,024

Травма+ цитофлавин НЧ 0,381±0,019 0,500±0,012 0,687±0,016* 0,891±0,021*

ВЧ 0,359±0,015 0,189±0,013 0,345±0,014* 0,854±0,022*

Травма+ ВМ616 НЧ 0,131±0,021 0,552±0,012* 0,721±0,012* 0,783±0,016*

ВЧ 0,166±0,024 0,213±0,014* 0,539±0,015* 0,721±0,022*

Травма+ метапрот плюс НЧ 0,551±0,019* 0,648±0,016* 0,747±0,016* 0,884±0,015*

ВЧ 0,183±0,021* 0,275±0,014* 0,592±0,015* 0,755±0,014*

Таблица 10 Влияние антигипоксантов на содержание цитохрома Ь5 в печени НЧ и ВЧ ъ боли животных при травматическом токсикозе (М ± ш, п = 10)

Воздействие/Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) НЧ 0,385±0,012 0,415±0,014 0,428±0,011 0,452±0,014

ВЧ 0,246±0,015 0,314±0,014 0,325±0,013 0,372±0,018

Травма+ реамберин НЧ 0,391±0,014 0,428±0,012 0,522±0,012* 0,571±0,013*

ВЧ 0,256±0,016 0,211±0,015 0,389±0,013* 0,448±0,015*

Травма+ цитофлавин НЧ 0,382±0,013 0,431±0,016 0,531±0,012* 0,559±0,014*

ВЧ 0,239±0,011 0,344±0,017 0,424±0,014* 0,581±0,016*

Травма+ ВМ616 НЧ 0,382±0,016 0,484±0,016* 0,521±0,015* 0,569±0,014*

ВЧ 0,253±0,015 0,423±0,014* 0,432±0,013* 0,444±0,015*

Травма+ метапрот плюс НЧ 0,463±0,013* 0,503±0,011* 0,528±0,014* 0,573±0,011*

ВЧ 0,304±0,012* 0,407±0,013* 0,424±0,012* 0,464±0,015*

Таблица 11

Влияние антигипоксантов на активность Ы-демитилазы амидопирина в печени НЧ и ВЧ к боли животных при травматическом токсикозе (М ± т, п = 10)

Воздействие/Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) НЧ 0,86+0,13 1,26±0,12 1,78±0,14 2,35±0,21

ВЧ 0,27±0,14 0,51±0,15 0,62±0,16 0,77±0,18

Травма+ реамберин НЧ 0,87±0,11 1,18±0,14 2,21±0,11* 1,98+0,09*

ВЧ 0,31±0,17 0,48±0,16 0,78±0,12* 1,44±0,13*

Травма+ цитофлавин НЧ 0,91±0,14 1,31±0,14 2,23+0,11* 2,62+0,09*

ВЧ 0,35±0,09 0,63±0,12 0,84±0,09* 1,54+0,14*

Травма+ ВМ616 НЧ 0,87±0,11 1,85±0,12* 2,14+0,13* 2,57+0,12*

ВЧ 0,33±0,12 0,78+0,14* 1,22+0,11* 1,51±0,14*

Травма+ метапрот плюс НЧ 1,24+0,14* 1,84±0,13* 2,37±0,13* 2,57±0,12*

ВЧ 0,38±0,12* 0,76+0,12* 0,87+0,13* 1,51±0,11*

Таким образом, антигипоксанты препятствуют нарушениям активности микросомальных монооксигеназ и угнетению процессов детоксикации при травматическом токсикозе.

Антигипоксанты предупреждали нарушения ферментной функции печени у животных, что выражалось в снижении интенсивности гиперферментемии печеночно-специфических аминотрансфераз в крови животных и увеличении их содержания в печени, восстановлению активности лактат- и сукцинатдегидрогеназ (табл. 12, 13).

Таблица 12

Влияние антигипоксантов на активность лактатдегидрогеназы

(мкмоль /ч /мг белка) в печени ВУ и НУ к гипоксии крыс (М ± ш, п = 10)

Воздействие / Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма (контроль) ВУ 2,34±0,22 3,72±0,22 3,11±0,21 1,12±0,13

НУ 4,12±0,31 5,87±0,22 4,47±0,16 1,88±0,14

Травма+ реамберин ВУ 2,21±0,24 3,68±0,25 3,22±0,24 0,72±0,16*

НУ 4,22±0,21 5,75±0,24 4,35±0,18 1,58±0,15

Травма+ цитофлавин ВУ 2,44±0,22 3,64±0,22 3,41±0,26 0,65+0,12*

НУ 4,02±0,25 5,58±0,25 4,56±0,19 2,01±0,15

Травма+ ВМ616 ВУ 2,48+0,21 1,12+0,27* 0,49±0,22* 0,58+0,12*

НУ 3,98±0,24 2,42+0,21* 0,96±0,15* 0,72±0,14*

Травма+ метапрот плюс ВУ 1,12+0,21* 2,03+0,22* 1,62±0,21* 0,51+0,03

НУ 1,45+0,22* 2,26+0,24* 1,62±0,17* 0,65+0,05

Таблица 13

Влияние антигипоксантов на активность лактатдегидрогеназы (мкмоль /ч /мг белка) в печени НЧ и ВЧ к боли животных (М ± ш, п = 10)

Воздействие/Группы 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма НЧ 3,24±0,21 2,12±0,22 1,05±0,24 0,59±0,23

(контроль) ВЧ 4,55±0,23 3,42±0,21 1,44±0,21 1,25±0,14

Травма+ НЧ 2,85±0,22 2,61±0,23 1,27±0,22 0,52±0,17

реамберин ВЧ 4,37±0,24 3,45±0,25 1,45±0,19 0,49±0,15*

Травма+ НЧ 3,21 ±0,25 2,34±0,21 0,71±0,16* 0,45±0,12*

цитофлавин ВЧ 4,02±0,19 3,17±0,15 0,88±0,15* 0,51±0,13*

Травма+ НЧ 3,18±0,21 1,11±0,17* 0,52±0,22* 0,58±0,12*

ВМ616 ВЧ 4,27±0,22 2,10±0,11* 0,76±0,17* 0,52±0,13*

Травма+ НЧ 1,11±0,18* 1,33±0,22* 0,67±0,21* 0,54±0,12*

метапрот плюс ВЧ 2,45±0,22* 2,44±0,24* 0,68±0,19* 0,45±0,15*

Примечание:* - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

Положительное влияние антигипоксантов на функции печени при травматическом токсикозе обусловлено способностью антигипоксантов препятствовать нарушению адениннуклеотидного пула печени животных (табл. 14, 15, рис. 8).

Показано, что на фоне действия антигипоксантов содержание АТФ, АДФ, АМФ, цАМФ и величина энергетического заряда адениловой системы в печени крыс с различной стрессоустойчивостью восстанавливалось до уровня интактных животных к 3-им суткам посттравматического периода.

При этом у крыс с различной устойчивостью к гипоксии позитивные изменения компонентов адениловой системы на фоне действия метапрота плюс наблюдали сразу после травмы.

Соединение ВМ 616 корригировало адениннуклеотидный пул у ВУ и НУ к гипоксии животных через 12 ч, а реамберин на 3-й сутки после травмы. Цитофлавин в этот срок был эффективен лишь у ВУ крыс, а у НУ к гипоксии животных восстанавливал уровень нуклеотидов к 3-им суткам после травмы.

У животных с различной болевой чувствительностью энергостабилизирующее действие реамберина наблюдали на 3-й сутки после травмы, цитофлавина через 24 ч, соединения ВМ 616 через 12 ч и метапрота плюс через 6 ч после травмы.

Таблица 14

Влияние антигипоксантов на содержание адениловых нуклеотидов в печени ВУ и НУ к гипоксии крыс при травматическом токсикозе (М ± т, п = 10)

Показатели / Воздействие 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

АТФ, мкмоль/г Травма (контроль) ВУ 1,16+0,15 1,86 ±0,17 2,13 ±0,13 2,45±0,14

НУ 0,34 ±0,16 0,84 ±0,13 1,35 ±0,15 1,88±0,13

Травма+ реамберин ВУ 1,19 ± 0,17 1,88 ±0,12 2,17 ±0,21 3,64±0,12*

НУ 0,42 ±0,15 1,97 ±0,14 1,26 ±0,14 2,87±0,14*

Травма+ цитофлавин ВУ 1,21 ±0,21 2,65±0,12* 2,89±0,11* 3,14+0,12*

НУ 0,52 ±0,14 2,11+0,14 2,16 ±0,14 2,57±0,11*

Травма+ ВМ616 ВУ 1,18 ± 0,13 2,56+0,14* 3,12+0,15* 3,45±0,12*

НУ 0,44 ±0,12 1,43±0,12* 1,89+0,14* 2,72±0,14*

Травма+ метапрот плюс ВУ 2,27+0,16* 2,87±0,16* 3,52±0,13* 3,78±0,15*

НУ 0,85+0,15* 1,76+0,12* 2,85±0,12* 3,25±0,16*

АДФ, мкмоль/г Травма (контроль) ВУ 1,86 ±0,12 1,28 ±0,12 1,16 ±0,14 0,93±0,12

НУ 2,25 ±0,14 1,96 ±0,14 1,27 ±0,12 1,34±0,14

Травма+ реамберин ВУ 1,69 ±0,11 1,14 ±0,14 1,11 ±0,15 0,62±0,11*

НУ 2,18 ±0,13 1,84 ±0,16 1,12 ±0,12 0,99 ±0,13

Травма+ цитофлавин ВУ 1,52+0,14 0,74±0,14* 0,61 ±0,15 * 0,63±0,11*

НУ 1,98 ±0,13 1,77 ±0,15 1,12 ±0,12 0,82±0,13*

Травма+ ВМ616 ВУ 1,56 ±0,16 0,68±0,13* 0,64±0,16* 0,58±0,15*

НУ 2,11+0,13 0,85±0,17* 0,62±0,15* 0,72±0,13*

Травма+ метапрот плюс ВУ 0,96+0,16* 0,64±0,18* 0,54±0,13* 0,53±0,14*

НУ 0,93±0,14* 0,81±0,17* 0,77±0,14* 0,74±0,13*

АМФ, мкмоль/г Травма (контроль) ВУ 1,15±0,05 0,86±0,03 0,73±0,04 0,45±0,05

НУ 1,64 ±0,06 1,17+0,05 1,14±0,05 0,96+0,07

Травма+ реамберин ВУ 0,89±0,07 0,78±0,04 0,66±0,06 0,31 ±0,05*

НУ 1,47±0,04 0,99+0,02 0,88±0,03 0,78±0,04

Травма+ цитофлавин ВУ 1,13±0,06 0,77±0,03 0,58±0,04* 0,28±0,03*

НУ 1,37±0,04 0,99±0,02 0,86±0,03 0,67±0,05*

Травма+ ВМ616 ВУ 0,93±0,05 0,72±0,03* 0,51 ±0,04* 0,31+0,06*

НУ 1,16+0,04 0,92±0,02* 0,71 ±0,03* 0,72±0,05*

Травма+ метапрот плюс ВУ 0,97±0,04* 0,64±0,05* 0,48±0,02* 0,27±0,03*

НУ 0,87±0,04* 0,75±0,06* 0,63±0,04* 0,59±0,07*

Таблица 15

Влияние антигипоксантов на содержание адениловых нуклеотидов в печени НЧ и ВЧ к боли животных при травматическом токсикозе (М ± т, п = 10)

Показатели / Воздействие 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

АТФ, мкмоль/г Травма (контроль) НЧ 1,05+0,16 1,68+0,19 2,41 ±0,14 3,78±0,14

ВЧ 0,74+0,07 0,89+0,15 1,76±0,16 1,93 ±0,15

Травма+ реамберин НЧ 1,10+0,15 1,71+0,13 2,87 ±0,17 4,12±0,12*

ВЧ 0,67±0,14 0,92+0,14 2,08 ±0,12 4,17±0,15*

Травма+ цитофлавин НЧ 1,15+0,17 1,63 ±0,12 3,26±0,13* 4,54±0,14*

ВЧ 0,74±0,12 0,91 ±0,15 2,57±0,14* 4,12±0,13*

Травма+ ВМ616 НЧ 1,12+0,14 2,73±0,14* 3,45±0,11 * 4,25±0,12*

ВЧ 0,82±0,16 1,32+0,12* 2,57±0,15* 3,82±0,14*

Травма+ метапрот плюс НЧ 2,21+0,13* 2,76±0,14* 3,75±0,12* 4,18±0,16*

ВЧ 1,45±0,14* 1,64 ±0,12* 2,93±0,15* 1,21+0,17*

АДФ, мкмоль/г Травма (контроль) НЧ 1,28±0,12 1,16+0,14 0,88±0,14 0,63±0,12

ВЧ 1,96±0,14 1,27±0,12 1,97±0,13 0,92±0,17

Травма+ реамберин НЧ 1,31+0,15 1,15+0,12 0,91+0,12 0,55+0,11*

ВЧ 1,82±0,13 1,34 ±0,16 1,82±0,15 0,49±0,14*

Травма+ цитофлавин НЧ 1,32±0,17 0,87±0,14* 0,71±0,15* 0,52±0,12*

ВЧ 1,87±0,15 0,96±0,15* 0,82±0,12* 0,57±0,13*

Травма+ ВМ616 НЧ 0,86±0,16* 0,68±0,13* 0,64±0,16* 0,58±0,15*

ВЧ 0,81±0,13* 0,85+0,17* 0,62+0,15* 0,72±0,13*

Травма+ метапрот плюс НЧ 0,96±0,16* 0,78+0,18* 0,64±0,13* 0,53+0,14*

ВЧ 0,93±0,14* 0,85±0,17* 0,67±0,12* 0,54±0,13*

АМФ, мкмоль/г Травма (контроль) НЧ 0,88±0,07 0,73±0,04 0,56±0,04 0,35+0,05

ВЧ 1,27±0,05 1,01 ±0,07 0,79±0,05 0,68±0,03

Травма+ реамберин НЧ 0,78±0,06 0,68±0,04 0,61 ±0,07 0,32±0,05

ВЧ 1,17±0,02 0,89±0,02 0,59±0,03 0,28±0,04*

Травма+ цитофлавин НЧ 0,83±0,05 0,71 ±0,03 0,42±0,04* 0,27±0,03*

ВЧ 1,16±0,04 0,85±0,02 0,46±0,03* 0,37±0,04*

Травма+ ВМ616 НЧ 0,79±0,02 0,52±0,03* 0,42±0,04* 0,32±0,06*

ВЧ 1,12+0,03 0,64+0,02* 0,51+0,03* 0,33±0,02*

Травма+ метапрот плюс НЧ 0,71 ±0,04* 0,62±0,05* 0,47±0,02* 0,29±0,03*

ВЧ 0,78+0,04* 0,71 ±0,06* 0,62±0,04* 0,29+0,04*

1,000 метапрот плюс 1,000

0,900 ВМ 616 0,900

0,800 /^/¿^итофлавин Г/<Д/"реамберин 0,800

0,700 //¡С^^^^ травма 0,700

0,600 0,600

0,500 «Г 0,500

0,400 0,400

0,300 0,300

0,200 0,200

0,100 < ВУ 0,100

0,000

метапрот плюс

ВМ 616 цитофлавин реамберин травма

НУ

6ч 12 24 72ч

6 ч 12 24 ч 72 ч

1,000 0,900 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000

метапрот плюс ВМ 616 '¿цитофлавин реамберин

травма

НЧ

1,000 0,900 0,800 0,700 0,600 0,500 0,400 0,300 0,200 0,100 0,000

метапрот плюс ~ ВМ616 итофлавин реамберин

травма

вч

6 ч 12 24 ч 72 ч

6ч 12 24 72ч

Рис. 9. Влияние антигипоксантов на величину энергетического заряда адениловой системы в печени крыс с различной стрессоустойчивостью

Для практической медицины важен поиск антигипоксических средств, сочетающих энергостабилизирующие свойства с антиоксидантными. Большинство антигипоксантов в той или иной мере способны подавлять процессы перекисного окисления липидов в клетке (Лукк М.В.и др., 2010). Известно, что сукцинат и препараты на его основе уменьшают гиперлипопероксидацию в клетке (Александрова А.Е., 2007; Афанасьев В.В. и др., 2007). Однако сведения об антиоксидантных свойствах изучаемых сукцинатсодержащих антигипоксантов у особей с различной стрессоустойчивостью при травматическом токсикозе отсутствуют. В настоящей работе установлено, что применение при травматическом токсикозе

изучаемых антигипоксаитов, за исключением соединения ВМ 616, препятствовало увеличению в печени животных содержания продуктов перекисного окисления липидов и угнетению активности антиоксидантных систем (табл. 16, 17).

Таблица 16

Влияние антигипоксаитов на содержание продуктов ПОЛ в печени ВУ и НУ к гипоксии крыс при травматическом токсикозе (М ± т, п = 10)_

Показатели / Воздействие 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Диены, нмоль/г Травма (контроль) ВУ 37,61±1,12 31,19± 1,12 26,18±1,12 22,51+0,64

НУ 39,68±1,14 33,89±1,13 27,98±1,11 21,12±0,52

Травма+ реамберин ВУ 40,21±1,17 36,22±1,П 24,33±1,17 16,41±1,15*

НУ 44,15±1,14 34,17±1,15 25,44±1,13 17,24±1,12*

Травма+ цитофлавин ВУ 36,18±1,16 32,36±1,15 18,37±1,15* 15,45±1,13*

НУ 37,96±1,15 32,42±1,17 19,41±1,14* 16,31±1,14*

Травма+ ВМ616 ВУ 41,15±1,16 38,27±1,14 27,13±1,14 19,1410,68

НУ 42,35±1,12 35,11±1,15 29,24±1,17 20,17±0,57

Травма+ метапрот + ВУ 28,14±1,12* 21,73±1,14* 17,34±1,12* 13,16±1,14*

НУ 19,74±1,13* 18,68±1,13* 16,24±1,14* 14,53±1,11*

МДА, нмоль/г Травма (контроль) ВУ 12,22±0,62 10,57±0,26 9,19±1,04 8,47±0,41

НУ 14,56±0,22 11,89±0,22 10,11±1,12 9,66±0,43

Травма+ реамберин ВУ 13,44±0,33 9,79±0,26 8,97±0,41 6,25±0,44*

НУ 13,89±0,42 10,97±0,34 9,75±0,34 7,34±0,33*

Травма+ цитофлавин ВУ 12,01±0,44 8,96±0,28 7,73±0,36* 6,21±0,41*

НУ 14,22±0,42 11,12±0,44 8,51 ±0,24* 7,32±0,43*

Травма+ ВМ616 ВУ 11,88±0,42 10,11±0,46 8,94±0,54 8,21±0,43

НУ 13,96±0,33 11,21±0,32 9,97+0,42 8,77±0,46

Травма+ метапрот + ВУ 7,41±0,43* 8,22±1,11* 8,84±0,62* 7,47±0,28*

НУ 8,73±0,45* 9,87±1,12* 10,16±0,24* 9,12±0,22*

Примечание. * - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

Антиоксидантные свойства реамберина у крыс с различной стрессоустойчивостью проявлялись на 3-й сутки после травмы.

Цитофлавин снижал уровень продуктов липопероксидации и активировал антиоксидантную систему в печени НЧ и ВЧ к боли, а также у ВУ к гипоксии крыс через сутки после травмы. Антиоксидантная активность метапрота плюс наблюдалась через 6 ч после травмы у животных всех изученных групп (табл. 18, 19). При этом его эффекты были более выражены у животных с низкой устойчивостью к гипоксии. Механизмы антиоксидантного действия метапрота плюс очевидно складываются из способности метапрота ослаблять действие гидроксильных радикалов и прерывать цепные радикальных процессы, что уменьшает образование продуктов ПОЛ (Зарубина И.В., Миронова О.П., 2002) и способности входящего в его состав сукцината уменьшать уровень продуктов ПОЛ (Александрова Л.Н., Суханов Д.С. и соавт., 2006,2008). Следует отметить,

что если у животных с различной устойчивостью к гипоксии эффекты метапрота плюс были более выражены у низкоустойчивых крыс, то у высоко- и низкочувствительных к боли животных метапрот плюс проявляет равную эффективность.

Таблица 17

Влияние антигипоксантов на активность АОС в печени ВУ и НУ к гипоксш _крыс при травматическом токсикозе (M ± m, п = 10)_

Показатели/Воздействие 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

Травма ВУ 1,89±0,12 1,49±0,14 2,13±0,16 2,23±0,16

(контроль) НУ 0,24±0,13 0,82±0,12 0,91 ±0,13 0,91±0,13

Травма+ ВУ 1,81±0,16 1,45±0,17 2,22±0,15 3,75±0,11*

(Я X реамберин НУ 0,22±0,12 0,78±0,13 1,04±0,16 1,39±0,15

Ч 1> ю U Травма+ ВУ 1,78±0,14 1,55±0,12 2,85±0,12* 3,75±0,11*

цитофлавин НУ 0,18±0,11 0,88±0,15 1,24±0,16* 1,56±0,15*

S > Травма+ ВУ 1,77±0,14 1,38±0,15 1,98±0,13 2,07±0,14*

И 1=1 о ВМ616 НУ 0,22±0,12 0,94±0,17 1,11±0,13 1,21±0,15

Травма+ ВУ 4,68±0,41* 5,41±0,22* 5,11±0,31* 3,44±0,21*

о Метапрот + НУ 2,27±0,34* 3,61±0,34* 4,02±0,24* 2,22±0,24*

Травма ВУ 20,22±0,14 15,27±0,12 20,77±0,14 25,68±1,13

(контроль) НУ 10,33±0,17 9,31 ±0,13 13,14±0,16 17,32+1,11

Травма+ ВУ 19,46±0,16 14,82±0,15 19,56±0,12 37,94+1,16

J5 ц реамберин НУ 10,21±0,15 9,62±0,14 12,62±0,12 28,77±1,14

о S Травма+ ВУ 19,67±0,13 15,26±0,12 39,51±0,17* 42,54±1,12*

it S цитофлавин НУ 10,25±0,14 9,54±0,11 22,12±0,15* 33,24±1,16*

t_ CQ Травма+ ВУ 19,14±0,12 14,77±0,12 20,22±0,12 24,88±1,12

ВМ616 НУ 11,11±0,15 9,12±0,14 13,13±0,14 16,57+1,14

Травма+ ВУ 42,19±1,14* 32,22+1,17* 27,11+1,12* 38,32±1,17*

метапрот + НУ 29,11+1,16* 22,14±1,11 * 20,55±1,13* 41,34±1,16*

Примечание: СОД - супероксиддисмутаза, ВГ - восстановленный глутатион, * - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

По убыванию эффективности защитного действия при травматическом токсикозе у животных с различной стрессоустойчивостью препараты можно расположить в ряду: метапрот плюс > цитофлавин > сукцинаминовая кислота 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола > реамберин.

Действие изучаемых антигипоксантов обусловлено особенностями биологических эффектов его активных компонентов, среди которых важное значение имеют высокие энерготропные свойства сукцината благодаря его термодинамическим преимуществам в скорости окисления над другими субстратами клеточного дыхания. Сукцинат также выполняет регуляторную функцию сигнальных молекул, участвующих в поддержании метаболического гомеостаза на системном уровне (Не W., Miao F.J., Lin D.C. et al., 2004). Это в полной мере относится к эффектам реамберина, содержащему в своем составе

сукцинат. В то же время нами показано, что во многом эффекты реамберина уступают другим исследованным антигипоксантам, что указывает на необходимость включения сукцината в качестве добавочного компонента при лечении травматического токсикоза.

Таблица 18

Влияние антигипоксантов на содержание продуктов перекисного окисления липидов в печени НЧ и ВЧк боли при травматическом токсикозе (М ± ш, п = 10)

Показатели / Воздействие

6ч

12 ч

24 ч

72 ч

Диены, нмоль/г

Травма (контроль)

Травма+ реамберин

Травма+ цитофлавин

Травма+ ВМ616

Травма+ метапрот +

НЧ

47,44+1,12

37,94±1,12

25,14±1,12

23,54±0,85

ВЧ

59,81±1,13

43,93+1,15

34,48+1,15

29,7810,72

НЧ

45,23+1,14

35,87+1,13

24,22+1,16

17,23+1,15*

ВЧ

54,57+1,16

40,74+1,16

33,75+1,12

21,46+1,12*

НЧ

46,83+1,18

35,64+1,12

17,32+1,14*

18,11+1,13*

ВЧ

58,62+1,15

42,65+1,15

23,58+1,17*

22,86+1,14*

НЧ

46,58±1,18

38,12+1,16

24,83+1,12

22,79+0,89

ВЧ

62,51±1,14

42,75±1,11

33,48±1,15

28,74±0,75

НЧ

27,44+1,12*

20,33+1,16*

18,31+1,12*

14,15+1,17*

ВЧ

29,85+1,15*

21,24+1,15*

18,87+1,14*

15,04+1,14*

Травма (контроль)

НЧ

13,47+0,52

11,54+0,46

10,15+1,14

8,74+0,45

ВЧ

16,87+0,54

15,74+0,42

12,31+1,12

10,11+0,43

Травма+ реамберин

НЧ

12,75+0,53

10,91+0,36

9,98±0,44

7,25+0,44*

ВЧ

15,89+0,52

14,98+0,34

11,86+0,54

8,48+0,53*

МДА, нмоль/г

Травма+ цитофлавин

НЧ

12,87+0,54

11,27+0,38

8,35±0,36*

7,11+0,45*

ВЧ

16,11+0,52

15,11+0,44

10,2110,34*

8.27+0,46*

Травма+ ВМ616

НЧ

13,23+0,42

10,75+0,46

9,97+0,52

8,24+0,43

ВЧ

15,94+0,53

15,01+0,52

11,77Ю,32

9,97+0,45

Травма+ метапрот +

НЧ

8,44+0,43и

7,22+1,14*

7,04+0,32*

6,27+0,27*

ВЧ

11,23+0,45*

10,17+1,13*

9,12+0,27*

7,61+0,32*

Примечание. * - достоверные различия (р<0,05) по сравнешпо с контролем

Присутствие сукцината в составе цитофлавина, содержащего также никотинамид, рибоксин, рибофлавин мононуклеотид повышает эффективность лечения травматического токсикоза у животных с различной стрессоустойчивостью. Обширные исследования механизмов действия метапрота свидетельствуют, что препарат обладает энергостабилизирующим и антиоксидантным действием благодаря его способности усиливать процессы протеинсинтеза (Смирнов A.B., 2003; Зарубина И.В., Шабанов П.Д., 2004). Включение в его состав сукцината значительно повышает его эффективность (Шабанов П.Д., 2010). Механизмы действия нового соединения ВМ 616, относящегося к сукцинатсодержащим тиазолоиндолам, Таким образом, лечебное применение сукцинатсодержащих антигипоксантов при травматическом токсикозе можно рассматривать как новый подход к

профилактике витальных нарушений функций печени и необратимых обменных нарушений на клеточном уровне.

Таблица 19

Влияние антигипоксантов на активность антиоксидантных систем в печени

НЧ и ВЧ к боли при травматическом токсикозе (М + ш, п = 10)

Показатели / Воздействие 6ч 12 ч 24 ч 72 ч

се ы ч щ ю и > М « О и Травма (контроль) НЧ 1,76±0,42 2,03±0,46 2,47±0,46 2,42+0,41

ВЧ 0,88±0,43 1,95±0,43 1,98±0,43 2,02+0,42

Травма+ реамберин НЧ 1,65±0,15 1,85+0,15 2,34±0,25 3,55+0,21*

ВЧ 0,77±0,14 1,77+0,16 1,84+0,16 3,32+0,17*

Травма+ цитофлавин НЧ 1,68±0,17 2,00±0,18 3,01±0,22* 3,37+0,21*

ВЧ 0,75±0,21 1,69±0,15 2,46±0,26* 3,51+0,16*

Травма+ ВМ616 НЧ 1,77±0,14 2,31 ±0,17 2,24±0,15 2,25+0,18

ВЧ 0,92±0,15 1,91+0,18 1,81+0,13 1,98±0,24

Травма+ метапрот + НЧ 2,25±0,41* 3,21 ±0,24* 3,32±0,34* 3,46±0,21*

ВЧ 1,14±0,44* 3,12±0,34* 3,32±0,24* 3,25±0,24*

ВГ, мкмоль/г Травма (контроль) НЧ 15,27±0,24 24,71±0,22 30,28±0,24 42,56±1,13

ВЧ 10,11±0,27 12,27±0,23 22,42±0,26 30,42±1,14

Травма+ реамберин НЧ 15,16±0,26 24,22±0,16 29,62±0,22 51,41+1,18*

ВЧ 10,11+0,25 11,78+0,18 22,32±0,22 48,53±1,14*

Травма+ цитофлавин НЧ 14,78±0,15 25,22±0,17 41,17+0,17* 48,56±1,17*

ВЧ 10,21+0,14 11,84+0,15 34,22±0,15* 47,24±1,16*

Травма+ ВМ616 НЧ 14,84±0,12 24,12±0,22 31,42+0,19 34,54±1,19

ВЧ 11,35±0,17 12,18±0,24 23,13+0,18 26,78±1,17

Травма+ метапрот + НЧ 22,65±1,14* 34,26±1,17* 47,17+1,15* 55,32±1,17*

ВЧ 15,16+1,16* 18,17+1,15* 30,51±1,14* 58,34±1,16*

Примечание. СОД - супероксиддисмутаза, ВГ - восстановленный глутатион,

* - достоверные различия (р<0,05) по сравнению с контролем

Для выделения наиболее значимого фактора индивидуальной стрессустойчивости, а также для прогнозирования восстановления функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе и на фоне его фармакокоррекции были разработаны математические модели. Показано, что средние значения показателей (уср ), найденные путем интегрирования основных формул математической модели (1-2), совпадают в пределах погрешности с полученными в эксперименте значениями, что подтверждает адекватность разработанных математических моделей. Построенные с помощью математических моделей графики изменений изучаемых показателей во времени подтверждают, что наиболее выраженные изменения показателей у животных с различной чувствительностью к боли наблюдаются сразу после травмы и спустя 6 ч после декомпрессии, а у животных с различной устойчивостью к гипоксии — через 6 - 12 ч после травмы. Это позволяет считать эти временные периоды критическими для

животных. Расчетные данные свидетельствуют, что у животных с различной стрессоустойчивостью большинство ' значений изучаемых показателей функционально-метаболической активности печени без лечения антигипоксантами не восстановятся до уровня интактных животных. Отдельными исключениями являются значения содержания цитохрома Р-450 и АТФ у НЧ к боли, способные достичь исходного уровня через 40 - 43 ч после травмы, а также активности АлТ в сыворотке крови у ВУ к гипоксии животных, возможность восстановления которой прогнозируется через 80 ч после травмы. Анализ относительного отклонения показателей в группах животных с различной стрессоустойчивостью дает основание утверждать, что наиболее значимые изменения функционально-метаболической активности печени наблюдаются у НЧ к боли и НУ к гипоксии животных. Относительное отклонение показателей у ВЧ к боли и ВУ к гипоксии животных сопоставимы. Следовательно, математический анализ подтверждает сделанные на основании экспериментов выводы о значимости индивидуальной стрессустойчивости для течения травматического токсикоза. Можно полагать, что фактор устойчивости к гипоксии оказывает большее влияние на изменение функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе, чем фактор чувствительности к боли.

Разработанные математические модели позволяют прогнозировать отклонение значений изучаемых показателей от нормы на фоне применения антигипоксантов при травматическом токсикозе. Так, прогнозируемая на основании математических моделей нормализация показателя АТФ в печени ВУ к гипоксии животных предполагается при введении реамберина через 60 ч, ВМ-616 — через 46 ч и метапрота плюс — через 21ч после травмы (прил. табл. 16). В печени НУ к гипоксии животных при введении реамберина через 37 ч и метапрота плюс - через 20 ч после травмы. В группе НЧ к боли животных восстановление уровня АТФ в печени возможно при введении реамберина через 40 ч, цитофлавина - 33 ч, ВМ-616 через 26 ч и метапрота плюс через 18 ч после травмы. В группе ВЧ к боли животных соответственно через 53 ч, 48 ч, 50 ч и 35 ч после травмы. В большинстве случаев относительное отклонение значений показателей уменьшается в ряду, реамберин - цитофлавин - ВМ-616 - метапрот плюс, что свидетельствует об общей тенденции в эффективности антигипоксантов. В количественном отношении величина относительного отклонения значений показателей меньше в группах' животных НЧ к боли и ВУ к гипоксии. Это свидетельствует о том, что более глубокие нарушения функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе у животных с высокой чувствительностью к боли и низкой остойчивостью к гипоксии труднее поддаются фармакологической коррекции.

С помощью математической модели можно прогнозировать и сроки их восстановления каждого из изучаемых показателей функционально-метаболической активности печени на фоне применения антигипоксантов. Применение математических моделей позволяет сэкономить время и •атериальные средства на проведение трудоемких экспериментов.

выводы

1. Травматический токсикоз у крыс с различной стрессоустойчивостью (высоко- и низкоустойчивых к гипоксии и/или боли) вызывает однонаправленные изменения функционального состояния, выражающиеся в гипотензии, брадикардии, снижении температуры, частоты дыхания и потребления кислорода, нарушении кислотно-основного равновесия с признаками лактацидоза. Степень изменений у низкоустойчивых к гипоксии и высокочувствительных к боли более выражена в сравнении с высокоустойчивыми к гипоксии и низкочувствительными к боли.

2. При травматическом токсикозе у животных с различной стрессоустойчивостью нарушается экскреторная, антитоксическая, ферментная функции печени, снижается ее энергетический потенциал, усиливаются процессы перекисного окисления липидов и угнетается антиоксидантная система.

3. В функционально-метаболических изменениях печени и степени их восстановления при травматическом токсикозе существенную роль играет генетически детерминированный тип метаболизма, который проявляется в различной стрессустойчивости к гипоксии и боли. Интактные низкоустойчивые к гипоксии животные отличаются от высокоустойчивых более высоким потреблением кислорода, напряжением углекислого газа, уровнем лактата в крови и уровнем продуктов липопероксидации, низким напряжением кислорода и содержания пирувата в крови и печени, энергетическим потенциалом, активностью микросомальных ферментов и антиоксидантных систем. Интактные низкочувствительные к боли крысы не имеют существенных различий по большинству исследованных показателей. При травматическом токсикозе изменения функционально-метаболического состояния печени наиболее выражены у низкоустойчивых к гипоксии и высокочувствительных к боли животных.

4. Нарушения основных функциональных систем и функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе у животных с различной устойчивостью к гипоксии особенно тяжелы через 6-12 ч после декомпрессии и наиболее выражены у низкоустойчивых крыс.

5. Нарушения основных функциональных систем и функционально-метаболической активности печени при травматическом токсикозе у животных с различной чувствительностью к боли особенно тяжелы сразу после декомпрессии и спустя 6 ч после травмы и наиболее выражены у высокочувствительных особей.

6. Применение при травматическом токсикозе сукцинатсодержащих антигипоксантов увеличивает выживаемость животных с различной индивидуальной стрессоустойчивостью, корригирует основные физиологические показатели, препятствует нарушению экскреторной, антитоксической, ферментной функций печени, снижению ее энергетического потенциала, процессов перекисного окисления липидов и угнетению антиоксидантных систем.

7. Эффективность антигипоксантов различна на протяжении постгравматического периода. Применение реамберина и цитофлавина в группе низкоустойчивых животных неэффективно на протяжении 24 ч после травмы. Позитивные эффекты цитофлавина у высокоустойчивых к гипоксии животных проявляются через 12 ч после травмы. Эффективность реамберина и цитофлавина в обеих группах животных наблюдается через 72 ч после травмы. Эффективность метапрота плюс у высоко-и низкоустойчивых животных наблюдается а через 6 ч, а соединения ВМ 616 через 12 ч после травмы. Метапрот плюс проявляет наибольшую эффективность у низкоустойчивых животных, чем у животных с высокой устойчивостью к гипоксии.

8. Применение реамберина у животных с различной болевой чувствительностью эффективно через 24 ч и 72 ч после травмы, цитофлавина и соединения ВМ 616 - через 12 ч, а метапрота плюс через 6 ч после травмы. Метапрот плюс проявляет равную эффективность у высоко- и низкочувствительных к боли животных.

9. У животных с различной стрессоустойчивостью по убыванию эффективности защитного действия при травматическом токсикозе препараты располагаются в ряду: метапрот плюс > соединение ВМ 616 > цитофлавин > реамберин.

10. Разработанные математические модели позволяют прогнозировать возможное отклонение метаболических показателей в печени животных от нормальных значений, сроки их восстановления и оценивать эффективность фармакотерапии травматического токсикоза.

НАУЧНО - ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Уменьшение степени выраженности функционально-метаболических нарушений в печени животных с различной стрессоустойчивостью на фоне действия сукцинатсодержащих антигипоксантов (реамберина, цитофлавина, соединения ВМ-616 и метапрота плюс) определяет возможность их использование в раннем периоде травматического токсикоза.

2. При выборе средств фармакологической коррекции последствий травматического токсикоза необходимо учитывать индивидуальную болевую чувствительность и устойчивость организма к гипоксии, которые определяют степень тяжести посттравматических функционально-метаболических изменений в печени.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК

1. Юиусов И.А. Влияние цитофлавина на биоэнергетические процессы в печени при тяжелой компрессионной травме конечностей / И.А.Юнусов, И.В.Зарубина / Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2009. — Т. 72, №6.-С. 42-45.

2. Юнусов И.А. Функциональная активность печени при тяжелой компрессионной травме / И.А.Юнусов, И.В.Зарубина / Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2009. - Т. 147, № 11. - С. 515 - 518.

3. Зарубина И.В. Роль печеночно-почечной недостаточности при синдроме длительного раздавливания и основные принципы ее фармакологической коррекции / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов / Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии - 2009. - Т. 7, Вып. 1. — С. 37- 60.

4. Зарубина И.В. Эффективность антигипоксантов при травматическом токсикозе / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях - 2009. - № 2. - С. 68 - 72.

5. Юнусов И.А. Значение болевой чувствительности для метаболической активности печени при компрессионной травме / И.А.Юнусов И.В.Зарубина, П.Д.Шабанов / Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях - 2009, №4. - С. 59-61.

6. Таракановская Т.А. Нарушения липидного обмена при хронической болезни почек в сочетании с метаболическим синдромом / Т.А.Таракановская, И.А.Юнусов / Медицинский академический журнал - 2009. - Т. -9, № 3. - С. 78 -84.

7. Зарубина И.В. Эффективность цитофлавина при травматическом токсикозе / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2010. - Т. 73, № 7. - С. 23 - 27.

8. Зарубина И.В. Значение индивидуальной устойчивости к гипоксии при тяжелой компрессионной травме / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2010, № 3. — С. 24 -29.

9. Марышева В.В. Отсроченное действие гидробромида 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола на физическую выносливость у мышей / В.В.Марышева, М.В.Лукк, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2010. - Т. 73, № 7. - С. 19 - 22.

10. Зарубина И.В. Сравнительная эффективность сукцинатсодержащих антигипоксантов при травматическом токсикозе / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, В.В.Марышева, П.Д.Шабанов / Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2010. - Т. 150, № 8. - С. 176 - 180.

11. Зарубина И.В. Антиоксидантные эффекты метаболических протекторов при экспериментальном травматическом токсикозе / И.В.Зарубина,

И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях - 2010. -№ 3 - С. 69-72.

12. Юнусов И.А. Функционально-метаболические изменения при тяжелой травме у крыс с разлшшой чувствительностью к боли / И.А.Юнусов, И.В.Зарубина, П.Д.Шабанов / Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2010. - Т. 8, № 1. - С 80.

13. Юнусов И.А. Нейроэндокринные реакции на тяжелую механическую травму / И.А.Юнусов, В.В.Давыдов, И.В.Зарубина / Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2010. - Т. 8, № 1. — С 79 - 80.

14. Юнусов И.А. Значение болевой чувствительности в патогенезе компрессионной травмы и ее лечении цитофлавином / И.А.Юнусов, И.В.Зарубина / Экспериментальная и клиническая фармакология. -Приложение. - 2010. - С. 75.

15. Зарубина И.В. Эффективность метапрота плюс при травматическом токсикозе у крыс с различной устойчивостью к гипоксии / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Экспериментальная и клиническая фармакология. - Приложение. -2010. - С. 43.

16. Марышева В.В. Средство, защищающее от травматического токсикоза / В.В.Марышева, И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов // Патент РФ на изобретение № 2420282. Опубл. 27.09.2010. Бюл. № 27.

17. Зарубина И.В. Ультраструктура печени при травматическом токсикозе / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Вестник Российской Военно-медицинской академии.-2011, № 1 (33). Прил.-С. 298.

18. Зарубина И.В. Влияние острого гипокинетического стресса на функции печени / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов / Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях

-2013,№4.-С. 61-65.

Прочие работы, опубликованные по теме диссертации

19. Зарубина И.В. Влияние тяжелой компрессионной травмы на функции печени (статья) / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов // Проблемы и перспективы

овременной науки: сб. научн. трудов. - Томск. - 2008. - Вып.2. - С. 26 - 27. 10. Belevitin A.B. Adaptive effects of metabolic correctors in hypoxia / LB.Belevitin, I.V.Zarubina, I.A.Yunusov, V.N.Tsygan, A.E.Nikitin, A.I.Zubenko // nternational review of the armed forces medical services. — 2009. - Vol. 82, № 4. -\ 16 - 20. (Белевитин А.Б. Адаптивные эффекты метаболических корректоров фи гипоксии / А.Б.Белевитин, И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, В.Н.Цыган, Э.Никитин, А.И.Зубенко / Междунар. журн. медицинских служб юоруженных сил - 2009 - Vol. 82, № 4. - Р. 16 - 20.)

!1. Юнусов И.А. Энергостабилизирующие эффекты цитофлавина при яжелой компрессионной травме конечностей / И.А.Юнусов, И.В.Зарубина / 1сихофармакология и биологическая наркология - 2009. - Т. 9, № 1. - С. 2540 -¡545.

22. Юнусов И.А. Роль болевой чувствительности в патогенезе компрессионной травмы и ее лечении / И.А.Юнусов, И.В.Зарубина // Экспериментальная и клиническая фармакология: материалы 3-й междун. научн. конф. Минск, 2009. - С. 135 - 137.

23. Юнусов И.А. Коррекция цитохромом С функциональной активности печени в раннем периоде компрессионной травмы // Механизмы функционирования висцеральных систем: материалы VII Всерос. конф. с междун. участием, поев. 160-летию со дня рождения И.П.Павлова. - СПб. -2009.-С. 468-469.

24. Юнусов И.А. Влияние тяжелой компрессионной травмы на активность микросомальных монооксигеназ печени / И.А.Юнусов // Механизмы функционирования висцеральных систем: материалы VII Всерос. конф. с междун. участием, поев. 160-летию со дня рождения И.П.Павлова. - СПб. -2009.-С. 469-470.

25. Зарубина И.В. Влияние индивидуальной устойчивости к гипоксии на эффекты цитофлавина при компрессионной травме / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов // Современный мир, природа и человек. - Томск -

2009.-Т. 1,№2.-С. 57-59.

26. Yunusov I.A., Zarubina I.V. The significance of pain sensitivity in pathogenesis of compression trauma and treatment it with cytoflavine /1. A. Yunusov, I.V.Zarubina // 5th International Conference «Biological Basis of individual Sensitivity to Psychotropic Drugs» - Eksperim. I klin. farmakologia. - Supplement -

2010,- C. 77-78

27. Zarubina I.V. Efficacy of metaprot plus in traumatic toxicosis in rats with different resístanse to hypoxia / I.V.Zarubina, I.A.Yunusov, P.D.Shabanov // 5th International Conference «Biological Basis of individual Sensitivity to Psychotropic Drugs» -Eksperim. I klin. farmakologia. - Supplement-2010.- C. 79 - 80.

28. Юнусов И.А., Курицына H.A., Зарубина И.В., Шабанов П.Д. Оценка эффективности фармакотерапии травматического токсикоза с помощью математической модели / И.А.Юнусов, Н.А.Курицына, И.В.Зарубина, П.Д.Шабанов // Клинико-лабораторный консилиум. - 2010, № 2 - 3 (33 - 34). -С. 191-192.

29. Юнусов И.А. Зависимость эффективности метаболических активаторов от индивидуальной стрессустойчивости при компрессионной травме / И.А.Юнусов // Экспериментальная и клиническая фармакология: материалы 5-й междунар. конф. «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам. 1-4 июня 2010, пансионат «Клязьма» Управления делами Президента РФ, М. 2010. - С. 43.

30. Юнусов И.А. Функционально-метаболические механизмы адаптации к иммобшшзационному стрессу у крыс с различной устойчивостью к гипоксии / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, П.Д.Шабанов // Материалы XXI съезда физиологического общества им. И.П.Павлова, Москва-Калуга. — 2010. - С.221-222

31. Марышева B.B. Способ защиты от травматического токсикоза / В.В.Марышева, И.В.Зарубина, И.А.Юнусов // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. СПб, 2010, Вып. 41. - С.80 -81.

32. Зарубина И.В., Марышева В.В., Юнусов И.А. Триндолоны - новые гепатопротекторы при травматическом токсикозе / И.В.Зарубина, В.В.Марышева, И.В.Юнусов // Инновационная деятельность в Вооруженных Силах РФ: труды Всеармейской научно-практич. конф. - СПб.: ВАС, 2010. - С. 231 -235.

33. Зарубина И.В., Марышева В.В., Юнусов И.А., Шабанов П.Д. Гепатопротекторные свойства нового производного тиазолоиндола при

эавматическом токсикозе / И.В.Зарубина, В.В.Марышева, И.А.Юнусов, i.Д.Шабанов // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической родукции: сб. научн. тр. / под ред. М.В.Гавршшна. - Пятигорск: Пятигорская ФА, 2011. - Вып. 66. - С. 515 - 516.

4. Зарубина И.В., Юнусов И.А., Шабанов П.Д. Значение болевой увствительности для устойчивости к стрессу / И.В.Зарубина, И.А.Юнусов, [.Д.Шабанов // Материалы XXII съезда физиологического общества им. .П.Павлова, Волгоград. - 2013 - С. 180.

Тираж 100 экз. Подписано в печать 10.07.2014 г. Формат 60x84

Объем 2,5 п.л. Заказ №

Отпечатано с готового орнгинал-макета в типографии СПбГПМУ (193020, Санкт-Петербург, ул. Литовская, д.2)