Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Цитокины в зубодесневой жидкости человека

На правах рукописи

Рогова Мария Александровна

ЦИТОКИНЫ В ЗУБОДЕСНЕВОЙ ЖИДКОСТИ ЧЕЛОВЕКА

14. 00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА 2002

Работа выполнена в Российском государственном медицинском университете

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор Л.В.Ганковская

Научный консультант:

кандидат медицинских наук Т.П.Иванюшко

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор М.А.Стенина

доктор медицинских наук,

профессор В.Ф.Семенков

Ведущее учреждение:

ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ

Защита диссертации состоится " " 2002г. в" " часов на заседании

диссертационного совета Д.208.072.05. в Российском государственном медицинском университете по адресу: 117997, г.Москва, ул. Островитянова, д.1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке РГМУ (117997, г.Москва, ул. Островитянова, д.1)

Автореферат разослан " " 2002г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Т.Е.Кузнецова

Л /" / / > ! • ! О - С5

р 6 О / • ' - ' ' I. > _ < , .

Общая характеристика работы Актуальность проблемы.

В последние годы активно изучаются цитокины- биорегуляторные медиаторы локального и системного действия, выполняющие важную роль в обеспечении межклеточных взаимодействий, а также в развитии иммунного ответа, воспаления и регенераци.

Применение цитокинов при оптимальном их соотношении позволяет создать достаточно высокую концентрацию их в очаге деструкции и направленно воздействовать на определенные стадии раневого процесса.

Использование комплекса цитокинов заданной специфичности, а не отдельных пептидов, дает возможность более разносторонне корригировать спектр репаративных процессов. Это особенно актуально в лечении пародонтита- хронического воспалительного заболевания, сопровождающегося выраженной деструкцией тканей периодонта и деструкцией кости.

На кафедре иммунологии разработан новый лечебный принцип локальной цитокинотерапии ( Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., 1987г.), основанный на местном применении комплекса цитокинов природного происхождения. Показан положительный терапевтический эффект применения аутологичных цитокинсодержащих супернатантов в лечении раневых процессов различной этиологии ( гнойные раны, ожоги, повреждение тканей глаза), бактериальных инфекций органов дыхания, хронических воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области ( Баярт Б., 1989), а также исследовано стимулирующее влияние комплекса в культуре фибробластов десны ( Карасева М.В., 1991).

Как известно, пародонтит является прогрессирующим хроническим воспалительным заболеванием, влекущим за собой деструкцию опорных

тканей зуба, и трудно поддающимся лечению. Несмотря на то, что пародонтит в настоящее время представляет собой не только медицинскую, но и социальную проблему, вопросы патогенеза данного заболевания изучены недостаточно. Большая роль в развитии воспалительного процесса уделяется иммунологическим аспектам, в частности иследованию роли цитокинов. Кроме того, большое значение отводится поиску новых, патогенетически обоснованных подходов к лечению данного заболевания.

Вышеизложенные данные свидетельствуют об актуальности изучения иммунопатогенеза пародонтита и необходимости применения лекарственного препарата локального действия на основе естественного комплекса цитокинов в лечении данного заболевания.

Цель в задачи работы.

Целью данного исследования явилось проведение анализа цитокинов при хронических воспалительных заболеваниях пародонта, а также оценка эффективности применения локальной цитокинотерапии в комплексном лечении данных заболеваний.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать метод определения цитокинов в зубодесневой жидкости.

2. Исследовать спектр провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в зубодесневой жидкости здоровых доноров.

3. Изучить содержание цитокинов в зубодесневой жидкости больных пародонтитом.

4. Провести анализ пародонтопатогенной микрофлоры содержимого зубодесневых карманов.

5. Разработать схему локального применения препарата "Суперлимф" в комплексном лечении пародонтита и оценить клиническую эффективность цитокинотерапии.

Научная новизна.

В настоящей работе впервые проведено комплексное исследование цитокинового состава зубодесневой жидкости у здоровых доноров и у пациентов, страдающих пародонтитом. При хроническом воспалении в слизистой пародонта отмечено изменение спектра цитокинов. Получены новые данные о содержании провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в зубодесневой жидкости больных различных степеней тяжести, выявлен их дисбаланс в сторону увеличения содержания провоспалительных цитокинов,

таких как ИЛ-1(3 и ФНОа. Снижение ИЛ-4 в зубодесневой жидкости больных пародонтитом является неблагоприятным прогностическим признаком течения заболевания.

Разработана схема применения препарата "Суперлимф" в комплексном лечении пародонтита. Показано, что применение естественного комплекса цитокинов в' лечении больных пародонтитом нормализует уровни содержания провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, что способствует уменьшению воспалительного процесса, ранней эпителизации и заживлению ран после хирургических вмешательств ( кюретаж, лоскутные операции), продлению сроков ремиссии. Практическая значимость.

Проведенный анализ цитокинов в зубодесневой жидкости позволяет уточнить иммунопатогенез пародонтита, а также обосновать применение локальной цитокинотерапии в комплексном лечении данного заболевания. Показано, что естественный комплекс цитокинов является перспективным лекарственным средством локального применения, способным ускорять процессы ранней эпителизации и заживления ран в лечении пародонтита.

Полученные данные позволяют расширить представления о возможностях клинического применения препарата "Суперлимф".

Апробация. Основные положения диссертации были представлены на 6-м Международном Конгрессе по иммунореабилитации и реабилитации в медицине (Сочи, 2000), совместной научной конференции кафедры иммунологии и отдела иммунологии МЛК РГМУ (Москва, 2001). Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ. Объем и структура. Диссертация изложена на .... страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов, Библиографический

указатель включает ..... источников литературы, из которых .....

отечественных и ..... иностранных. Диссертация иллюстрирована .....

рисунками,..... таблицами и..... схемами.

Содержание работы.

Материалы и методы исследования.

Для проведения необходимых исследований нами была подобрана группа здоровых доноров, которую составили лица со здоровым пародонтом без сопутствующей патологии, численностью 17 человек.

Группа больных сформирована из пациентов, страдающих хроническим генерализованным пародонтитом, проходивших курс лечения в клинике челюстно - лицевой хирургии Московской медицинской академии им И.М.Сеченова. Данная группа состояла из 58 человек, из них мужчин 23, женщин 35 в возрасте от 18 до 56 лет.

Локальная цитокинотерапия с использованием препарата суперлимф проводилась в группе пациентов с генерализованным пародонтитом, состоявшей из 25 человек, из которых 14 женщин и 11 мужчин.

Контрольная группа состояла из 22 человек, получавших вместо препарата суперлимф плацебо ( полиглюкин- наполнитель препарата). Показаниями к проведению локальной цитокинотерапии с использованием препарата суперлимф явились длительный и рецидивирующий характер течения заболевания, а также наличие активного воспалительного процесса. Критериями эффективности проводимого лечения служили: оценка клинического состояния пародонта (отсутствие кровоточивости, боли, снятие воспаления, увеличение срока ремиссии), а также определение уровня цитокинов в зубодесневой жидкости. Показатели у больных снимались до проводимого лечения и в динамике: на 7-е, 14-е и 30-е сутки после лечения.

Забор зубодесневой жидкости осуществляли согласно разработанной нами модификации метода, предложенного Барер Г.М. (1992). Исследование концентраций цитокинов в зубодесневой жидкости проводили методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для определения концентрации ИЛ-1(3, ФНОа , ИЛ-4, ИЛ-8, ИФНу и антагониста рецептора ИЛ-1 использовали тест- системы производства ТОО «Протеиновый контур» (Санкт-Петербург, Россия) согласно рекомендуемым методикам. Уровень ТФР-(31 определяли с помощью набора для иммуноферментного анализа производства "С)иапикте" (США).

Комплекс природных цитокинов (препарат суперлимф) получали по оригинальной методике (Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. и др., 1987г.). В состав комплекса входят: ИЛ-1(3 (3200+/-530 ЕД/мг белка), Ил-6 (700+/-100 ЕД/мг белка), ФНОа (212+/-53 ЕД/мг белка), МИФ (3200+/-80 ЕД/мг белка), ТФР-Э1 (5860+/-230 пк/мг) (Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., 1995).

Бактериологическое исследование содержимого зубодесневого кармана, бляшки, слюны проводили на базе кафедры микробиологии

Московской медицинской академии им И.М.Сеченова совместно с ассистентом кафедры, к.м.н. Будановой Е.В.

Идентификацию стафилококков осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями Главного Эпидемиологического Управления РСФСР (1990). Для выделения анаэробных культур использовали кровяной агар Шедлера. Для создания анаэробных условий использовали метод совместного культивирования с аэробным тест-штаммом Serratia marcescen по Хенелю. Определение чувствительности выделенных микроорганизмов к антибиотикам осуществляли общепризнанным методом диффузии в агар.

Статистическая обработка результатов проводилась с использованием компьютерных статистических программ Statistica. Для каждой группы наблюдений вычисляли среднее арифметическое (М), ошибку среднего (т), стандартное отклонение (sd) при известном количестве наблюдений (п). В таблицах и рисунках результаты представлены в виде М+т. Для сравнения средних использовали параметрический t критерий ( критерий Стьюдента) и непараметрический критерий Уилкоксона- Манна- Уитни (Лакин Ф.Г., 1990).

Результаты исследований и их обсуждение. Анализ спектра цитокинов в зубодесневой жидкости здоровых доноров.

Для понимания роли цитокинов в патогенезе хронических воспалительных заболеваний пародонта необходимо было оценить исходный уровень цитокинов у здоровых доноров, что и явилось основной задачей настоящего раздела работы.

В качестве объекта исследования использовали зубодесневую жидкость, которая представляет собой экссудат крови из подлежащих капилляров, а также единичных лейкоцитов, слущенных клеток эпителия, набора ферментов и белков (Грудянов А.И., 1997).

На рисунке 1 представлены данные о содержании провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в зубодесневой жидкости здоровых доноров.

700

600 -

§ 500

о 400

5 300

| 200

0 а

1 100

ИЛ-1р

ФНСЬ.

ИЛ-8

ИФН>

700

600

|500

>400

! 300

|200

л

а.

= 100

ИЛИ Ра

ИЛ-4

ТФРр

Рис.1 Содержание цитокинов в зубодесневой жидкости здоровых доноров.

Как известно, ИЛ-1 является одним из важных регуляторов ответа организма на микробную инфекцию. Наличие ИЛ-1 в зубодесневой жидкости здоровых доноров, очевидно, объясняется тем, что в придесневой части постоянно присутствуют скопления микроорганизмов. На наличие защитной реакции на микробную атаку указывает обязательное присутствие в десневой бороздке минимального количества десневой жидкости

Выявлено, что выработка рецепторного антагониста НЛ-1 коррелирует с уровнем ИЛ-1. Продукцию активированными макрофагами рецепторного антагониста вслед за ИЛ-1 можно, вероятно, рассматривать как один из механизмов негативной регуляции стимулирующих эффектов ИЛ-1.

В результате активации ЛПС клеточной стенки пародонтопатогенных микроорганизмов, мононуклеарными фагоцитами синтезируется ФНОа. Концентрация ФНОа в зубодесневой жидкости здоровых доноров составила 184+/-52,4 пкг/мл. Это говорит о том, что даже при минимальном скоплении микробных агентов, локальное действие ФНОа проявляется в активации лейкоцитов, участвующих в воспалительной реакции.

Стоит отметить также наличие в ЗДЖ здоровых доноров ИЛ-4 и ТФР|М - цитокинов с выраженными противовоспалительными свойствами (уровни содержания 560+/-106,2 пкг/мл и 96+/-16 пкг/мл соответственно). В частности, ИЛ-4 проявляет противовоспалительные свойства, подавляя функции макрофагов и секрецию ими Ил-1(3 и ФНОа.

Многими авторами отмечено, что уровень ИЛ-1 в зубодесневой жидкости значительно выше, чем в сыворотке, однако данные о содержании ИЛ-1 широко варьируют. В связи с этим возникла необходимость в проведении сравнительного исследования содержания ИЛ-1 в зубодесневой жидкости и плазме периферической крови. На

рисунке 2 представлены данные, показывающие более высокое содержание данного медиатора в ЗДЖ по сравнению с периферической кровью, что свидетельствует о преимущественно локальной его продукции клетками пародонта.

При сравнении содержания цитокинов в плазме периферической крови и зубодесневой жидкости обращает на себя внимание тот факт, что значительно увеличен уровень ИЛ-4 в ЗДЖ и менее выражена разница уровней ИЛ-13 и ФНОа в ЗДЖ по сравнению с содержанием в периферической крови.

| 700

□зубодесневая

жидкость □ сыворотка крови

= 600 -

со

х 500 -

к 300 •

I

| 200 -

н

| 100

х

ИЛ-1^, ФНО(. ИЛ-4

Рис.2 Содержание цитокинов в зубодесневой жидкости и плазме периферической крови здоровых доноров.

Таблица 1.

ИЛ-1 р ФНО„> ИЛ-4

Зубодесневая жидкость 360179 184±52 5601106**

Периферическая кровь 277±43 262144 126+27**

р<0,05 -при сравнении по непараметрическому критерию Манна-Уитни.

Анализируя эти данные, можно сделать вывод о том, что в тканях пародонта здоровых людей существует баланс нровоспалительных и противовоспалительных цитокинов, что обеспечивает регуляцию иммунного ответа на микробную инфекцию.

Кроме того, подтверждается тот факт, что наиболее оптимальным объектом исследования цитокинов при изучении хронических воспалительных заболеваний пародонта является ЗДЖ. Исследование содержания цитокинов в зубодесневой жидкости больных пародонтитом.

Известно, что хронический пародонтит является хроническим заболеванием, в основе которого лежит нарушение иммунных механизмов на уровне пародонта. По мере прогрессирования патологического процесса происходит постепенное распространение и углубление воспалительно- деструктивных явлений. Очевидно, что значительную функцию в формировании хронического воспаления на уровне слизистой выполняют цитокины. Поэтому, основной целью данного раздела явилось исследование содержания цитокинов в ЗДЖ больных пародонтитом.

900 800 •

= 700

а?

§ 600 н

к

° 500 Н

=Г

к 400 -

I 300 к

§ 200 г

5 юо н

□ здоровые

□ больные

ИЛ-1^

ФНОх

ИЛ-8

ИФН^

О

1000 900 -800 ■

| 700

| 600

§ 500

1 400

га

Ь 300

01

£ 200 о

100

□ здоровые Эбольные

ИЛ-1 Ра

ИЛ-4

0

Рис. 3. Сравнительное содержание цитокинов в зубодесиевой жидкости здоровых доноров и больных пародонтитом.

Показано, что непосредственную роль в развитии патологического процесса играет группа провоспалительных цитокинов. Нами выявлено достоверное увеличение содержания ИЛ-1(3 по сравнению с группой здоровых доноров (рис.3). По мере прогрессирования воспалительного процесса происходит повышение содержания ИЛ-1(3. Это объясняется тем, что данный медиатор является основным регулятором ответа на микробную инфекцию, инициирующим процесс резорбции кости.

Учитывая тот факт, что ИЛ-1 является инициатором цитокинового каскада в тканях десны, усиливая при этом как собственную продукцию, так и синтез других медиаторов, в частности, ФНО -а, было интересно исследовать содержание последнего в ЗДЖ больных пародонтитом. По нашим данным содержание этого медиатора практически вдвое выше, чем у здоровых доноров. Очевидно, что возросшая концентрация ИЛ-1 [3 и ФНО -а является результатом активации в очаге воспаления макрофагов -основных продуцентов данных цитокинов.

Интересно отметить также изменение содержания ИЛ-8, который определяет хемотаксис нейтрофилов в очаг воспаления. Среднее содержание данного цитокина в ЗДЖ больных пародонтитом составило 740+/-113,6 пкг/мл, что незначительно выше по сравнению с уровнем в ЗДЖ здоровых доноров.

Выявляются интересные особенности содержания противовоспалительных цитокинов в зубодесневой жидкости больных пародонтитом. Так содержание ТФРр1 в среднем составляет 206+/-67 пкг/ мл, что значительно выше уровня этого цитокина в ЗДЖ здоровых людей. Вероятно, это повышение связано с включением компенсаторных механизмов, поскольку ТФР является функциональным антагонистом ИЛ-1.

Уровень ИЛ-4 в ЗДЖ больных пародонтитом значительно снижен по сравнению с содержанием у здоровых доноров (230+/-84,3 и 560+/- 106,2 пкг/мл соответственно). Снижение уровня ИЛ-4 в ЗДЖ можно рассматривать как неблагоприятный признак в течении хронического воспаления в ткани пародонта, так как известно, что ИЛ-4 способен блокировать продукцию ИЛ-1, ИЛ-8, ФИО, а также индуцировать экспрессию адгезивных молекул на макрофагальных клетках и способствовать их выходу в апоптоз.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о значительной роли иммунных процессов на уровне' слизистых в формировании патологического процесса, в частности изменению спектра цитокинов в ЗДЖ.

Исследование содержания пародонтопатогенной микрофлоры

Результатом действия микробных агентов при пародонтите является выработка каскада цитокинов. В связи с этим, одной из наших задач явилось исследование роли пародонтопатогенной микрофлоры в формировании патологического процесса на уровне пародонта.

В качестве объектов исследования были выбраны биотопы полости рта: слюна, зубная бляшка и ЗДЖ. На рисунке 4 представлена сравнительная характеристика частоты высеваемости микроорганизмов в зависимости от их типа дыхания. Показатель частоты высеваемости отражает отношение количества лиц с выявленной патогенной микрофлорой к общему количеству исследуемых. Полученные данные свидетельствуют о том, что анаэробная флора преобладает у здоровых доноров в слюне и в зубной бляшке (100% и 87,5% соответственно), которая представлена преимущественно лактобактериями и бифидобактериями. В десневой жидкости же, напротив, чаще всего присутствовала аэробная микрофлора - в 62,5% случаев.

120

100

£ 80

Я 60

ё 20

□аэробы ■ анаэробы

л* ¿о оУ о!

<Р

Биотопы: слюна бляшка зубодесневой карман

Рис. 4 Частота высеваемости аэробных и анаэробных микроорганизмов из различных биотопов полости рта здоровых доноров и больных пародонтитом.

Анализ этих результатов позволяет говорить о нормальном соотношении микрофлоры различных типов дыхания в биотопах полости рта у здоровых доноров.

Однако, у пациентов, страдающих пародонтитом, в отличие от группы здоровых лиц, в слюне и зубной бляшке преобладали аэробные микроорганизмы, лри этом практически отсутствовала анаэробная микрофлора, это свидетельствует о нарушении нормального баланса микрофлоры и об отсутствии антагонизма в отношении патогенных микроорганизмов.

Стоит отметить, что у больных пародонтитом в десневой жидкости увеличилась до 100% частота высеваемости аэробной микрофлоры, при

этом содержание анаэробов также незначительно возросло по сравнению с группой здоровых доноров.

Таким образом, исследование микрофлоры свидетельствует о нарушении баланса аэробных и анаэробных микроорганизмов в биотопах полости рта, это играет важную роль в развитии и прогрессировании воспалительного процесса в ткани пародонта. Именно в зубодесневом кармане обнаруживаются скопления пародонтопатогенных микроорганизмов. Учитывая, что зубодесневая жидкость является содержимым зубодесневого кармана, подтверждается мысль о том, что наиболее информативным объектом исследования является зубодесневая жидкость.

Итак, наличие скопления микроорганизмов в зубодесневых карманах, способствует инфильтрации пораженных участков ткани пародонта клетками, принимающими участие в развитии реакции воспаления. При этом факторы вирулентности микробных агентов активируют клетки к усиленной продукции различных медиаторов, в частности, цитокинов.

На рисунке 5 изображен процесс развития воспаления, возникающий вследствие усиления микробной атаки и, в качестве

Участие цитокинов в развитии пародонтита

лародонтогенная микрофлора

ЛПС ^ 0

деструкция пародонта

сравнения, представлено равновесие механизмов, характерных для здорового пародонта.

Известно, что на поверхности макрофагов существуют специальные мембранные рецепторы СБ 14, которые участвуют во взаимодействии с ЛПС клеточной стенки пародонтопатогенных микроорганизмов. В результате увеличивается продукция таких цитокинов, как ИЛ-1 и ФНО, а также простагландинов. Происходит постоянное усиление выработки ИЛ-1, который является аутостимулятором, при этом стоит заметить, ПГЕ-2 контролирует этот процесс, подавляя продукцию ИЛ-1.

Вышеперечисленные медиаторы воздействуют на гингивальные фибробласты, что постепенно приводит к их дегенерации, потере коллагена и, в конечном итоге, к деструкции кости.

Следует отметить особую роль ИЛ-4 в развитии воспалительного процесса, отсутствие или снижение концентрации которого можно считать неблагоприятным прогностическим признаком. Ведь данный цитокин проявляет выраженную негативную регуляцию в отношении рецептора СВ14, а это, в свою очередь, устраняет ЛПС-индуцированные эффекты, в частности, продукцию провоспалительных цитокинов. Помимо этого, среди функций ИЛ-4 можно выделить способность запускать к выходу в апоптоз макрофагов в очаге воспаления, а также способствовать уменьшению выраженности воспалительной реакции. Таким образом, в ответ на ЛПС клеточной стенки пародонтопатогенных микроорганизмов клетки пародонта вырабатывают спектр цитокинов, продукция которых в процессе иммунного ответа на уровне слизистой приводит к стимуляции остеокластов и прогрессирующей резорбции кости.

Кроме того, в результате присутствия ИЛ-1 и ФНО происходит снижение хемотаксической активности нейтрофилов, а также наблюдается

нарушение Т-клеточной регуляции на уровне локальных иммунных механизмов.

Оценка клинической эффективности локального применения естественного комплекса цитокинов (препарата суперлимф) у больных пародонтитом.

На кафедре иммунологии РГМУ разработан новый лечебный принцип, основанный на локальном применении аутологичных и аллогенных ( гетерологичных) цитокинов, полученных в результате стимуляции периферической крови в культуре in vitro. Метод дает возможность создания высокой локальной концентрации цитокинов. Ранее проведено изучение использования аутологичного комплекса цитокинов в лечении больных пародонтитом (Баярт Б., 1989). Показано, что после одного курса лечения наблюдалась нормализация показателей фагоцитарной активности нейтрофилов, объективно отмечалась клиническая ремиссия.

Очевидно, что аутолимфокинотерапия дает хороший клинический эффект, который заключается в отсутствии гнойных осложнений, а также в необязательном или резко сниженном применении других химических препаратов или антибиотиков. Однако выявлено, что анализ состава ЕКЦ, полученных у разных пациентов, показал значительные отличия в составе комплексов как внутри группы, так и при сравнении с комплексом клеток здоровых доноров.

В связи с этим возникла необходимость в получении ЕКЦ со стандартным составом. Таким образом, получен стандартизированный лиофилизированный препарат суперлимф (ФСП № 42-0185-05-73-00). Препарат обладает мощным активирующим действием на систему фагоцитарных клеток, а также антиоксидантной активностью.

Показаниями к проведению локальной цитокинотерапии явились длительный рецидивирующий характер течения заболевания, а также

стадия активного воспаления. На рисунке 6 представлена схема локальной цитокинотерапии.

Рис. 6 Схема применения локальной цитокинотерапии в комплексном лечении пародонтита.

«Сунерлимф»

Орошение раны 3 раза в день ^ В течение 3-5 суток.

пациент

/ X

Стандартное лечение

Клиническая оценка состояния тканей пародонта.

Определение спектра цитокинов в зубодесневой жидкости до и после лечения

Препарат «Суперлимф» применялся локально в дополнение к традиционной терапии, включавшей в себя: санацию полости рта, снятие над- и поддесневых камней, кюретаж, обработку поверхности антисептиком. Критериями эффективности проводимого лечения явилась оценка клинического состояния тканей пародонта, а также изменение уровней содержания цитокинов в ЗДЖ пациентов опытной и контрольной групп после лечения.

Данные, представленные на рис.7 показывают изменение уровней содержания цитокинов в зубодесневой жидкости больных пародонтитом после лечения.

I I больные

Е23 больные после лечения -Аг-здоровые

900 т

ИЛ-1£ ФНОх ИЛ-8

HOHj

I [больные

I ~1 больные после лечения -&- здоровые_

I 1000

ИЛ-1 Ра

ИЛ-4

ТФР,

Рис. 7 Сравнительное содержание цитокинов в зубодесневой жидкости больных пародонтитом до лечения и после лечения на 7-ые сутки.

Так, вдвое произошло снижение ИЛ-1Р (с 680+/-96,6 до 389+7-169,4 пкг/мл), также снизились показатели ФНО -а (с 350+/-92,3 до 290+/-85,7 пкг/мл) и ЙЛ-8 (с 620+/-113,6 до 540+/-92,8 пкг/мл). Кроме того, возрос уровень ИЛ-4 (с 230+/- 83,4 до 370+/-98,5пкг/мл).

Наиболее показательные результаты лечения при использовании препарата были получены у больных тяжелой степени с выраженными симптомами воспаления.

Стоит отметить, что через месяц после проведенного лечения в исследуемой группе наблюдалась тенденция к приближению показателей всех цитокинов к среднему уровню содержания в ЗДЖ здоровых доноров.

Итак, действие препарата направлено на нормализацию баланса провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в зубодесневой жидкости. Клинически это подтверждается исчезновением признаков воспаления, более быстрой эпителизацией и увеличением сроков ремиссии. Таким образом, препарат препарат может эффективно использоваться в комплексном лечении больных пародонтитом. Практические рекомендации.

Полученные результаты могут быть применены для объяснения роли цитокинов в развитии хронического воспаления в ткани пародонта, а также для расширения области применения локальной цитокинотерапии с использованием препарата «Суперлимф» в клинике. Выводы.

1. Модифицирован микрометод забора зубодесневой жидкости. С использованием данного метода проведен анализ провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в зубодесневой жидкости. Показано, что концентрация ИЛ-4 в зубодесневой жидкости здоровых доноров вдвое выше уровней

содержания ИЛ-1(3 и ФНО-а, что характерно для нормального состояния тканей пародонта.

2. У больных пародонтитом, в отличие от здоровых доноров, изменен спектр цитокинов в зубодссневой жидкости. Обнаружено увеличение содержания ИЛ-1(3, ФНО-а, ТФР-р1. Снижение уровня ИЛ-4 является неблагоприятным прогностическим признаком в развитии пародонтита.

3. Анализ пародонтопатогенной микрофлоры биотопов полости рта показал, что у больных пародонтитом при активном воспалительном процессе в десневом кармане увеличено содержание анаэробной микрофлоры.

4. Разработана схема локального применения препарата «Суперлимф» в комплексном лечении пародонтита. Показана клиническая эффективность применения локальной цитокинотерапии, которая выражалась в более быстром снятии симптомов воспаления, увеличении сроков ремиссиии, а также в нормализации показателей цитокинов в зубодесневой жидкости.

Список работ, опубликованных но теме диссертации.

1. Цитокины в механизмах развития хронического воспаления в пародонте.// Тезисы докладов 2-го съезда иммунологов России, сентябрь 1999г. В соавт. с Ковальчуком Л.В., Ганковской Л.В., Иванюшко Т.П., Емиленко Г.И.

2. Роль цитокинов в развитии хронического воспаления в тканях пародонта.//Труды 5 -го съезда Стоматологической Ассоциации России. - М. - 1999. - с.131. В соавт. с Ганковской Л.В., Иванюшко Т.П.

3. Цитокинотерапия хронических воспалительных заболеваний пародонта.//Тезисы VI Международного конгресса по

иммунореабилитации и реабилитации в медицине, т.2, №2. - с.89. В соавт. с Ковальчуком Л.В., Ганковской Л.В., Иванюшко Т.П., Сайгитовым Р.Т.

4. Роль цитокинов в механизмах развития хронического воспаления в ткани пародонта.//Иммунология. - М. - 2000. - №6. - с.24 - 26. В соавт. с Ковальчуком Л.В., Ганковской Л.В., Иванюшко Т.П., Будановой Е.В., Шабановой Н.В.

5. Особенности микрофлоры полости рта и локальные факторы иммунитета у больных хроническим пародонтитом.// Труды 6-го съезда Стоматологической ассоциации России, сентябрь 2000. - с. 206-207. В соавт. с Иванюшко Т.П., Ганковской Л.В., Будановой Е.В,