Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии

Парсункова, Кармен Анатольевна

Диссертации по медицине → Онкология

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Парсункова, Кармен Анатольевна Москва 2010 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.12

Автореферат диссертации по медицине на тему Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии

На правах рукописи

ПАРСУНКОВА КЕРМЕН АНАТОЛЬЕВНА

ЦИТОКИНОВЫЙ ПРОФИЛЬ У БОЛЬНЫХ с ДИССЕМИНИРОВАННОЙ МЕЛАНОМОЙ В ХОДЕ ВАКЦИНОТЕРАПИИ

14.01.12-онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА - 2010 г.

003492932

Работа выполнена в Учреждение Российской академии медицинских наук Российском онкологическом центре им. Н.Н.Блохина РАМН (директор - академик РАН и РАМН М.И.Давыдов).

Научные руководители:

доктор медицинских наук И.В. Евсегнеева кандидат медицинских наук И.Н. Михайлова

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор М.В. Киселевский Доктор медицинских наук, профессор А.К. Голенков.

Ведущая организация:

ФГУ Московский научно-исследовательский онкологический институт им. А.П. Герцена МЗ СР РФ.

Защита состоится «18» марта 2010 г. в часов на заседании диссертационного совета Д.001.017.02 Учреждения Российской академии медицинских наук Российского онкологического научного центра им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, Москва, Каширское шоссе 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Российского онкологического научного центра им. Н. Н. Блохина РАМН

Автореферат разослан «_£>Г_££_2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор медицинских наук, профе ^ Ю. А. Барсуков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации

По мнению многих специалистов-онкологов, биотерапия рака является_ четвертой модальностью в ленении злокачественных новообразований . наряду с хирургическим, лучевым и химиотерапевтическим методами [Якубовская Р.И. 2002].

Исследования на экспериментальных моделях животных и у человека показали, что защита от опухоли осуществляется с помощью различных типов клеток обладающих специфическим и неспецифическим цитотоксическими эффектами, и антител. Многие из клеточных эффектов реализуются через действие растворимых факторов-цитокинов [Козлов В.А. 2004].

Цитокины - группа полипептидных медиаторов межклеточного взаимодействия, которые участвуют в формировании и регуляции защитных реакций организма при внедрении патогенов и нарушении целостности тканей, а также в регуляции ряда нормальных физиологических функций. В рамках иммунной системы цитокины осуществляют взаимосвязь между неспецифическими защитными реакциями и специфическим иммунитетом, действуя в обоих направлениях. Иммунная система подразделяется на два основных типа: опосредованный антителами гуморальный B-клеточный ответ и опосредованный клетками Т-клеточный ответ. Оба ответа стимулируются антигенами. В случае несостоятельности местных защитных реакций цитокины попадают в циркуляцию, и их действие проявляется на системном уровне, что приводит к развитию острофазного ответа на уровне организма [Симбирцев A.C. 2004].

Специфический клеточный иммунный ответ на меланомные антигены классически происходит путем узнавания чужеродных пептидов рецепторами Т-клеток посредством молекул главного комплекса гистосовместимости (МНС) дендритных клеток [Моисеенко В.М. 2001].

Эффективность биотерапии рака может быть усилена путем повышения иммуногенности опухолевых клеток, активации антигенпрезентирующих клеток (АПК) и специфического клеточного

иммунного ответа. Изучение эффективности вакцинного препарата,

требуется, как минимум, осуществлять оценку реакции гиперчувствительности замедленного типа in vivo и, учитывая преимущественное воздействие его на то или иное звено иммунной системы, необходимо предварительно оценивать параметры иммунитета в каждом конкретном случае, в зависимости от назначения препарата и его вида, проводить мониторинг ^процессе вакцинотерапии.

Таким образом, актуальным на сегодняшний день является изучение динамики показателей цитокинового профиля (IL-2, IL-12, IL-4, IL-10, IFN-y), факторов роста TGF-ß2, VEGFA, сывороточного маркера меланомы S100, молекулы адгезии CD44 для мониторинга в ходе вакцинотерапии.

Цель работы

Изучение изменения уровней цитокинов у больных с диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии.

Задачи исследования

1. Оценить цитокиновый профиль (IL-2, IL-12, IL-4, IL-10, IFN-y, TGF-ß2, VEGFA) на фоне вакцинотерапии дендритной вакциной.

2. Определить цитокиновый профиль (IL-2, IL-12, IL-4, ILIO, IFN-y, TGF-ß2, VEGFA) на фоне вакцинотерапии генно-инженерной вакцины модифицированной геном tag-7.

3. Определить спектр цитокинов, который можно использовать для иммунологического мониторинга эффективности проводимой терапии.

4. Определить наличие корреляционной связи между динамикой заболевания и уровнем S100 у больных меланомой кожи в ходе вакцинотерапии.

5. Оценить значение изменения уровня CD44 как предполагаемого прогностического маркера при вакцинотерапии.

Научная новизна

Впервые исследован цитокиновый профиль в комплексе с сывороточным маркером, молекулой адгезии и трансформирующим фактором роста у больных диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии..

Выявлены различия в уровнях ТЬ1/ТЪ2-типах цитокинов у пациентов профилактической группы, получающих дендритную вакцину, в зависимости от возраста.

У онкологических больных на фоне прогрессирования выявлена корреляционная связь между уровнями сывороточного маркера меланомы S100, трансформирующим фактором роста TGF ß2.

Научно-практическая значимость

Определен спектр цитокинов, который можно использовать для иммунологического мониторинга эффективности проводимой терапии.

Изученные серологические показатели рекомендованы для предварительного скрининга пациентов перед вакцинотерапией.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на: 6-th ISREC Conference on Cancer Research (Lausanne, Switzerland 2006); VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва 2007); Научно-практической конференции с международным участием (Элиста 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Опухоли кожи и мягких тканей» (Санкт-Петербург 2009); Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва 2009).

Апробация диссертационной работы состоялась на совместной научной конференции с участием лаборатории экспериментальной иагностики и биотерапии опухолей, лаборатории медицинской биотехнологии, лаборатории фармакоцитокинетики, лаборатории

клеточного иммунитета НИИ ЭДиТО РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН, отделения биотерапии НИИ КО РОНЦ 24 июня 2009 года.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, собственных результатов, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 21 отечественных и 154 зарубежных источников. Материалы диссертации изложены на 143 страницах машинописного текста и включают 23 таблицы и 8 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-12 (IL--12), интерферон-гамма (IFN-y), фактор роста эндотелия сосудов (VEGFA), молекулу адгезии sCD44std определяли в сыворотке крови с помощью диагностических тест-систем Bender MedSystems® (Австрия).

Интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-10 (IL-10) определяли в сыворотке крови с помощью диагностических тест-систем ООО «Цитокин» (г. Санкт-Петербург).

Трансформирующий фактор роста Ь2 (TGFb2) определяли в сыворотке крови с помощью диагностических тест-систем DRG Diagnostic (США).

Белок S-100 (S-100A1B и S-100BB формы) определяли в сыворотке крови с помощью диагностической тест-системы CanAg Diagnostics (Швеция).

В качестве лечебного препарата применялась противоопухолевая вакцина на основе аутологичных дендритных клеток (ДК), нагруженных опухолевым лизатом in vitro, а также противоопухолевая вакцина на основе аллогенных опухолевых клеток метастатической линии меланомы человека, трансфицированных геном tag7.

В исследование были включены 55 больных, проходивших вакцинотерапию аутологичными дендритными клетками, 15 больных с аллогенной вакциной, 83 больных с меланомой без вакцинотерапии и 13 здоровых доноров.

Больные были разделены на клинические группы: пациенты с регионарными и/или отдаленными метастазами, получающие вакцину в терапевтическом режиме в виде монотерапии, большинству из них до начала вакцинотерапии проводилось интенсивное лекарственное лечение (химиотерапия, биохимиотерапия, иммунотерапия), на фоне которого отмечено прогрессирование заболевания. Также пациенты с той же распространенностью процесса после радикального хирургического вмешательства, получающие лечение в профилактическом режиме.

На основании уровня сывороточного маркера меланомы S100 пациенты были разделены на 2 группы. Пациенты с уровнем S100 ыше нормального значения, принимаемого за 69,4±38,13 ng/L, или о значительным (в 2 раза) повышением уровня S100 вскоре после ачала вакцинотерапии (2) п=26. И пациенты с нормальным и табильным значением сывороточного маркера S100 (1) п=29.

Г. В группу (№1) вошли пациенты с меланомой кожи III и IV стадии после радикального хирургического лечения или в полной ремиссии после химио-/иммунотерапии (условно профилактическая группа), п=29.

2. Группа (№2) в основном состояла из пациентов с регионарными и/или отдаленными метастазами меланомы (III и IV стадии), а также из пациентов без проявлений заболевания после радикального хирургического лечения по-поводу метастатической меланомы. (III и IV стадий), у которых вскоре после начала вакцинотерапии развилось прогрессирование болезни (условно терапевтическая группа). Всего включено п=26.

3. Группа больных (№3) состояла из пациентов с регионарными и/или отдаленными метастазами меланомы (III и IV стадии), терапевтическая группа с аллогенной вакциной (вакциной, представленной опухолевыми клетками, модифицированными геном tag-7), п=15.

4. Контрольную группу (№4) составили больные с меланомой без вакцинотерапии на фоне химиотерапии, п=83.

5. В группу №5 вошли здоровые доноры, сопоставимые по возрасту и полу с пациентами исследуемых групп, п=13.

Забор крови проводился до вакцинации и перед каждой 5-й вакцинацией. Срок наблюдения 10 недель. Материалом для исследования служила сыворотка крови.

Статистический анализ проводился с использованием статистических непараметрических критериев, не зависящих от характера распределения — точного метода Фишера и критерия "хи-квадрат", а также традиционно используемого в биомедицинских исследованиях t-критерия Стьюдента для нормально распределенных переменных.

При проведении статистического анализа данных (проверка нормальности распределений показателей и др.) и формирования графиков использованы также статистические пакеты EXCEL 2003 и STATISTICA 6.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ Цитокины на фоне терапии дендритными клетками.

Первоначально проведенный сравнительный анализ исследуемых показателей свидетельствовал о том, что уровень IL-2 до лечения у всех больных, в группах пациентов, проходивших вакцинацию аутологичными дендритными клетками, относительно контрольных групп получающих аутологичную дендритную вакцину, и в группе больных меланомой без вакцинации был значительно выше по сравнению с группой здоровых доноров (рис. 1).

Содержание IL-12 в профилактической группе у больных было снижено относительно обеих контрольных групп и незначительно отличалось в терапевтической группе.

Значения IFN-y в двух исследуемых группах были в 3 раза ниже по сравнению со значениями в группе здоровых доноров и сопоставимы по значениям с контрольной группой больных без вакцинации.

Уровень IL-4 в профилактической группе в 3 раза превышал значения по сравнению с группой доноров и был сопоставим с группой больных без вакцинации. Значения данного цитокина в терапевтической группе превышали значения доноров в 1,8 раза, но были в 1,5 раза ниже уровней в группе больных без вакцинации.

Рисунок 1. Сравнение дитокинового профиля больных до начала лечения и здоровых доноров.

Значения 1Ь-10 в исследуемых группах значительно превышали уровни данного цитокина по сравнению с группой доноров и были сопоставимы с группой больных без вакцинации.

Таким образом, уровни исследуемых цитокинов до вакцинотерапии у пациентов, получающих вакцину с профилактической и терапевтической целью, были различными относительно контрольных групп.

Далее был проведен сравнительный анализ отдельно взятых цитокинов в динамике вакцинотерапии (табл. 1).

В ходе лечения наблюдалось незначительное повышение П_-2 у пациентов в исследуемых группах.

Уровень 1Ь-12 у пациентов профилактической группы был значительно ниже по сравнению со всеми группами и в ходе лечения не менялся. Повышение данного показателя в ходе вакцинации наблюдалось у пациентов терапевтической группы.

Содержание ПТ<Г-у в начале вакцинотерапии у всех пациентов в исследуемых группах было ниже по сравнению с группой здоровых доноров и оставалось неизменным в процессе лечения.

Таблица 1. Распределение цитокинов у больных в процессе вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками

Содержание (pg/mL, М±ш) Профилактичес кая группа п =29 Терапевтическая группа п =26 Контрольная группа больных без вакцинотерапии п =83 ~ Доноры п =13

IL-2 до лечения 19,04±2,2* 16,29±2,3* 16,37±1,5* 1,13±0,1

во время лечения 19,64±3,1 16,52±2,9

IL-12 до лечения 77,87±6,2 98,73±10,9** 96,13±5,1* 100,63±9,8

во время лечения 77,94±6,3* 104,35±11,6**

IFN-? до лечения 11,65±2,1 *** 12,53±3,04*** 14,84±1,8*** 39,13±5,

во время лечения 11,55±2,2 11,28±2,2

IL-4 до лечения 6,03±1,9 3,62±0,9 5,06±0,9 1,93 ±0,6

во время лечения 4,57±1,1 4,1 ±1,4

IL-10 до лечения 8,84±1,6* 7,75±1,6 8,28±0,9 4,89 ±0,5*

во время лечения 7,04±1,2 7,92±1,8

Примечание. Значимость различий (р<0,05) при сравнении показателей - до лечения; * * - во время лечения и (р<0,001): * * * - до лечения.

Уровень 1Ь-4 у пациентов профилактической группы уменьшился — с 6,03 по 4,57 р£/тЬ, у пациентов терапевтической группы значение данного показателя незначительно повысилось.

В результате наших исследований в начале вакцинотерапии в профилактической группе также выявлена прямая корреляционная связь между уровнем 1Ь-4 и динамикой заболевания. Коэффициент корреляции по Спирману равен 0,4 (р=0,02).

Уровень 1Ь-10 в ходе лечения у больных профилактической группы незначительно уменьшился. Значения данного показателя практически не изменились у пациентов терапевтической группы.

Таким образом, значения 1Ь-2 у больных с диссеминированной меланомой, получающих дендритную вакцину, изначально были различными и незначительно повысились в ходе вакцинотерапии; статистически достоверное повышение средних значений уровня 1Ь-12 наблюдалось в терапевтической группе; уровень ШЫ-у в сыворотке крови исследуемых пациентов в ходе вакцинации не

изменился; отмеченное снижение уровня 1Ь-4, 1Ь-10 у больных профилактической группы и повышение средних значений этих цитокинов ходе вакцинотерапии у больных терапевтической группы были статистически незначимы. Необходимо отметить, что в исследуемых группах больных выявлена прямая корреляционная зависимость между уровнем 1Ь-10 и средним количеством дней до прогрессирования заболевания. В профилактической группе коэффициент корреляции по Спирману равен 0,6 (р=0,00096) до начала вакцинотерапии и 0,53 (р=0,004) в процессе лечения. В терапевтической группе коэффициент корреляции равен 0,4 (р=0,033) до начала вакцинотерапии.

Сравнительный анализ содержания цитокинов у больных с дендритной вакциной распределенных по среднему количеству дней до прогрессирования заболевания.

При сравнительном анализе было выявлено, что наибольшее количество дней до прогрессирования заболевания имели большинство пациентов профилактической группы, получающих дендритную вакцину, а у большинства больных терапевтической группы среднее количество дней до прогрессирования заболевания было в 8 раз меньше (табл. 2).

Таблица 2. Распределение пациентов по среднему количеству дней до прогрессирования заболевания

Группы Количество пациентов Дни*

Профилактическая группа 1 подгруппа 7 171,43±23,34

2 подгруппа 20 823,25±102,9

Терапевтическая группа 3 подгруппа 20 109,5±15,28

4 подгруппа 6 419,17±47,16

Достоверность различий Р<0,05 1-3; 2-4

Р<0,01 1-2

Р<0,001 1-4; 2-3; 3-4

* - среднее количество дней до документально зафиксированной даты метастазирования

Уровни исследуемых показателей у пациентов профилактической группы с наибольшим количеством дней до прогрессирования заболевания были стабильны, при этом на фоне вакцинотерапии достоверно снижалось значение УЕОБА (р<0,005). В терапевтической группе больных с наименьшим количеством дней до прогрессирования заболевания на фоне значительного повышения уровня сывороточного маркера меланомы Б100 (р<0,005) отмечалась тенденция к повышению значений 1Ь-12 и ТОР(32.

Сравнительный анализ содержания цитокинов у больных с дендритной вакциной, распределенных по возрасту относительно среднего количества дней до прогрессирования заболевания.

Наши данные показали, что пациенты профилактической группы младше 50 лет имели самое высокое среднее количество дней до документально зафиксированной даты метастазирования заболевания-861 ±161,06 (табл.3).

В сыворотке крови этой группы больных отмечалось статистически достоверное снижение уровня 1РКу и уменьшение содержания цитокинов клеточного звена иммунитета, при этом наблюдалась тенденция к росту уровня 1Ь-4, что может свидетельствовать об активации ТЬ2-типа иммунитета (рис. 2).

У больных профилактической группы старше 50 лет, наоборот, на фоне снижения 1Ь-4 и достоверного уменьшения уровня 1Ь-10 наблюдался подъем уровней цитокинов клеточного звена иммунитета, что в свою очередь предполагает развитие ТЫ-типа иммунитета (рис. 3).

Таблица 3. Распределение пациентов, получающих аутологичную дендритную вакцину, по возрасту

Группы Количество пациентов Дни*

Профилактическая группа 11 861 ±161,06

I подгруппа <50 лет

2 подгруппа >50 лет 18 532,65 ± 109,08

Терапевтическая группа 13 169,23 ±33,05

3 подгруппа <50 лет

4 подгруппа >50 лет 13 192,69 ±52,13

Достоверность различий р<0,05 2-4

р<0,01 2-3

р<0,001 1-3; 1-4

* - среднее количество дней до документально зафиксированной даты метастазирования

ИФНу

И после лечения Е после лечения

Н.-2 П.-12

□ Профилактическая I гр.<50 лет □ до лечения

□ Терапевтическая 3 гр.<50 лет И до лечения

Рисунок 2. Динамика цитокинов у пациентов младше 50 лет.

р<0,05

■11.-2 11-12

□ Профилактическая 2 ф.>50 лет (

□ Терапевтическая 4 ф.>50 лет I

О после В после

Рисунок 3. Динамика цитокинов у пациентов старше 50 лет.

Уровни 8100, СБ44, ТСР Ь2 были стабильны, значения УБОРА не менялись в ходе лечения.

Цитокины на фоне терапии аллогенными клетками.

В начале вакцинотерапии содержание 1Ь-2 в сыворотке крови у всех пациентов в исследуемой группе достоверно превышало значения в контрольных группах (табл.4). Уровень этого цитокина в сыворотке крови у больных 1 группы был изначально самым высоким и составил 24,38 pg/ml. В процессе вакцинотерапии аллогенными клетками отмечено достоверное повышение уровня 1Ь-2 с 24,38 до 32,51 р£/т1.

Сывороточные концентрации 1Ь-12 до вакцинотерапии в группе больных, получающих аллогенную вакцину, были несколько выше, по сравнению с двумя контрольными группами и составили в среднем 112,25 pg/ml. После лечения отмечено значительное повышение исследуемого цитокина в группе больных с аллогенной вакциной с 112,25 до 173,97 pg/mL

Содержание ШЫ-у в сыворотке крови до вакцинотерапии в группе больных, получающих аллогенную вакцину, было ниже по сравнению с контрольной группой здоровых доноров и превышало значения контрольной группы без вакцинации. В ходе лечения отмечено снижение уровня интерферона с 34,71 до 26,85 рв/т1.

Таблица 4. Содержание цитокинов в сыворотке крови больных и доноров.

Группы

Содержание (р§/тЬ, М±т)

1. Аллогенная

1Ь-2

1Ь-12

1Ь4

до лечения

24,38±3,8*

112,25±9,7*

34,71±19,6

12,05±2,4*

10,3±10,3

во время лечения

32,51±5,7*

173,97±25,5*

26,85±11,7

8,03±1,1*

8,54±5,6

2.Контрольная

16,37±1,5

96,13±5,05

14,84±Ю,7

5,6±0,9

8,28±8,1

3. Доноры

1,13±0,1

100,63±9,8

39,12±19,7

1,93±0,6

4,89±1,8

Достоверность различий

р<0,001 1-3; 2-3

р<0,05 1-2

р<0,05 1-2; р<0,01 1-3

р<0,001 1-2; 2-3

р<0,05 1-3 р<0,01 1-2 р<0,001 1-3

' - р<0,05 в динамике вакцинотерапии.

В результате нашего клинического исследования уровень 1Ь-4 в ыворотке крови до вакцинотерапии в группе больных, получающих шогенную вакцину, был значительно выше и составил в среднем 12,05 pg/ml. В ходе лечения отмечено значительное уменьшение 1Ь-4 12,05 до 8,03 pg/ml.

При анализе содержание 1Ь-10 в сыворотке крови до акцинотерапии в исследуемой группе больных, отмечено высокое одержание интерлейкина-10 по сравнению с группой здоровых оноров, которое составило в среднем 10,3 р§/т1.

Таким образом, средний уровень 1Ь-12 в группе больных, олучающих аллогенную вакцину, изначально был высоким и татистически достоверно повысился в 1,5 раза в процессе акцинотерапии; уровень Ш^-у был схож с уровнем здоровых оноров, но в процессе вакцинации он снижался; уровень 1Ь-4 был

значительно выше по сравнению с контрольными группами и статистически достоверно снижался в ходе вакцинотерапии; в ходе лечения отмечалось уменьшение содержания 1Ь-10, однако, не имевшее статистически значимого подтверждения.

Сравнительный анализ содержания 8100, СВ44, ТСГ Ь2, УЕСРА

в группах.

Далее целесообразным представилось сравнить изменения содержания Б100, СЕ>44, ТСБ Ь2, УЕОРА между исследуемыми группами в процессе вакцинотерапии. •

Анализ содержания Б100 выявил следующее: В начале вакцинотерапии пациенты исследуемых групп имели высокие значения 8100 по сравнению с группой здоровых доноров (табл. 5), кроме больных в профилактической группе с аутологичной дендритной вакциной.

Таблица 5. Динамика уровня Б100 в процессе вакцинотерапии.

Группы Содержание (пщ/Ь М±ш)

до лечения во время лечения

1. Профилактическая группа ДВ 66,34±6,19 89,62±15,13

2. Терапевтическая группа ДВ 121,14±16,94* 314,23±73,52*

3. Аллогенная вакцина 214,28±39,3* 365,29±Ю5,7*

4. Контрольная 117,36±12,49 117,36±12,49

5. Доноры 69,4±9,84 69,4±9,84

Достоверность различий р<0,05 2-3; 2-5; 1-4

р<0,01 1-2; 3-4 1-2

р<0,001 1-3; 3-5 1-3

* - р<0,05 в динамике вакцинотерапии.

Уровень исследуемого сывороточного маркера меланомы в этой группе был сопоставим с группой доноров, и составил 66,34 п§/т1.

В ходе лечения в профилактической группе с аутологичной дендритной вакциной уровень сывороточного маркера меланомы Б100 повысился незначительно. В то время как в остальных группах отмечалось значительное статистически значимое его увеличение: в терапевтической группе с дендритной вакциной в 2,6 раз, а в терапевтической группе с аллогенной вакциной в 1,7 раза. Анализ содержания СБ44 выявил следующее: В начале вакцинотерапии пациенты исследуемых групп имели высокие значения С044 по сравнению с группой здоровых доноров (табл. 6).

Таблица 6. Динамика уровня СБ44 в процессе вакцинотерапии.

Группы Содержание (гщ/тЬ М±т)

до лечения во время лечения

1 .Профилактическая группа ДВ 506,69±57,83 496,14±41,42

2.Терапевтическая группа ДВ 570,04±53,74 577,56±46,54

З.Аллогенная вакцина 1145,47±128,69* 1295,43±149,52*

4.Контрольная 667,1±50,86 667,1±50,86

5. Доноры 347,67±20,54 347,67±20,54

Достоверность различий р<0,01 2-5; 4- 5

р<0,001 1-3; 2-3; 3-4; 3-5 1-3; 2-3

* - р<0,05 в динамике вакцинотерапии

Уровень исследуемой молекулы адгезии в профилактической группе пациентов с дендритной вакциной был в 1,5 раза выше группы доноров, но ниже, чем уровень в контрольной группе больных без вакцинации.

Пациенты терапевтической группы с дендритной вакциной также имели изначально высокий уровень СВ44 по сравнению с

группой здоровых доноров, но он был ниже по сравнению с группой невакцинируемых больных.

Содержание исследуемого показателя в группе пациентов с аллогенной вакциной превышал значения в группе доноров в 3 раза, а в контрольной группе без вакцинации в 1,7 раз.

В ходе лечения в профилактической группе с аутологичной дендритной вакциной уровень СБ44 незначительно снизился. В терапевтической группе с дендритной вакциной отмечалось незначительное увеличение данного показателя, а в терапевтической группе у пациентов с аллогенной вакциной наблюдался значительный статистически достоверный подъем уровня С044 в сыворотке крови.

Анализ содержания УЕвРА выявил следующее:

В начале вакцинотерапии уровень УБвРА во всех исследуемых группах был в 2 и более раз выше по сравнению с группой здоровых доноров (табл. 7).

В ходе лечения у пациентов, получающих аутологичную дендритную вакцину, уровень УЕОБА незначительно снизился. Содержание эндотелиального фактора роста в терапевтической группе у больных с аллогенной вакциной в сыворотке крови не менялось в процессе вакцинотерапии.

Таблица 7. Динамика уровня УЕСБА в процессе вакцинотерапии.

Группы Содержание (р§/тЬ М±т)

до лечения во время лечения

1 .Профилактическая группа ДВ 172,76±33,77 163,74±31,17

2.Терапевтическая группа ДВ 320,77±106,52 309,52±110,05

З.Аллогенная вакцина 124,75±27,37 123,34±94,92

4.Контрольная 182,62±26,15 182,62±26,15

5. Доноры 74,93±25,17 74,93±25,17

Анализ содержания ТСБ Ь2 выявил следующее: в начале вакцинотерапии пациенты обеих групп с дендритной вакциной имели

высокие значения ТСБ Ь2 по сравнению с группой больных без вакцинации.

Содержание исследуемого показателя в группе пациентов с аллогенной вакциной было ниже в 1,3 раза по сравнению с контрольной группой больных без вакцинации (табл. 8).

В ходе лечения в профилактической группе с аутологичной дендритной вакциной уровень ТСР Ь2 незначительно снизился с 1248,28 до 1199,52 рв/т1.

В терапевтической группе с дендритной вакциной отмечалось незначительное увеличение данного показателя с 1165,12 до 1256,07 Р£/т1.

В то время как в терапевтической группе с аллогенной вакциной уровень ТвР Ь2 в сыворотке крови повысился с 827,46 до 983,39 РЕ/т1.

Таблица 8. Динамика уровня ТвБ Ь2 в процессе вакцинотерапии.

Группы

Содержание (р£/шЬ М±ш)

до лечения

во время лечения

1. Профилактическая группа ДВ

1248,28±95,48

1199,52±64,82

2. Терапевтическая группа ДВ

1165,12±105,98

1256,07±78,86

3. Аллогенная вакцина

827,46±97,82

983,39±121,05

. Контрольная

• 1129,85±62,22

1129,85±62,22

Достоверность различий

р<0,05 2-3; 3-4

р<0,01 1-3

Таким образом, наблюдается различие средних значений ТОР Ь2 - исследуемых группах, которые меняются в ходе вакцинотерапии.

Заключение

Целью данного исследования было изучение изменения уровней итокинов у больных с диссеминированной меланомой в процессе акцинотерапии.

В ходе исследования был оценен цитокиновый профиль (IL-2, IL-12, IL-4, IL-10, IFN-y, TGF-p2, VEGF-A) на фоне вакцинотерапии дендритной и аллогенной вакцинами; определена возможность его использования для иммунологического мониторинга эффективности проводимой терапии; оценена корреляционная связь между динамикой заболевания и уровнями белка S100, молекулы адгезии CD44 у больных с меланомой кожи как предполагаемых прогностических маркерах при вакцинотерапии.

Материалом для исследований послужили образцы сыворотки периферической крови (СК). Количественное определение интерлейкинов, факторов роста и ангиогенеза, онкомаркера и молекулы адгезии производили с помощью иммуноферментного метода (ИФА).

В , качестве лечебного препарата применялась противоопухолевая вакцина на основе аутологичных дендритных клеток (ДК), нагруженных опухолевым лизатом in vitro и аллогенная вакцина, представленная опухолевыми клетками,

модифицированными геном tag-7.

В исследование были включены 55 больных проходивших вакцинацию аутологичными дендритными клетками, 15 больных с аллогенной вакциной, 83 больных с меланомой без вакцинотерапии и 13 здоровых доноров.

повышение произошло у большинства лиц с наименьшим количеством дней до прогрессировать заболевания. Все пациенты имели изначально низкий уровень №N-7, и в ходе вакцинации он не изменился. В ходе вакцинотерапии у больных профилактической группы отмечалось снижение уровней 1Ь-4 и 1Ь-10, которое не имело статистически значимого подтверждения. В группах больных с аутологичной дендритной вакциной выявлена прямая корреляционная, зависимость между уровнем 1Ь-10 и средним количеством дней до прогрессирования заболевания. В профилактической группе коэффициент корреляции по Спирману равен 0,6 (р=0,00096) до начала вакцинотерапии и 0,53 (р=0,004) в процессе лечения. В терапевтической группе коэффициент корреляции равен 0,4 (р=0,033) до начала вакцинотерапии, остоверных данных по изменению содержания ШЫ-у и 1Ь-4 при равнительном анализе по среднему количеству дней до рогрессирования заболевания выявлено не было.

Уровень сывороточного маркера меланомы Б100 у пациентов рофилактической группы, получающих лечение дендритными летками, изначально соответствовал референтным значениям, пределенным у здоровых доноров и незначительно повышался в оде лечения. У больных терапевтической группы его средние начения превышали в 2 раза средние уровни Б100 по сравнению с рофилактической группой в начале вакцинации и значительно овысились в процессе лечения.

При статистическом анализе всей группы больных с дендритной акциной выявлена обратная корреляционная зависимость между оказателями среднего количества дней до прогрессирования аболевания и уровнем Б100.

Динамика СО44 и ТСБ Ь2 имела разнонаправленный характер, начимые изменения произошли в терапевтической подгруппе у ольных с наименьшим количеством дней до прогрессирования аболевания, уровень СВ44 и ТОР Ь2 в этой подгруппе увеличился в ,1 раза в процессе вакцинотерапии.

Полученные данные наглядно продемонстрировали, что ациенты профилактической группы младше 50 лет с аутологичной ендритной вакциной имели самое высокое среднее количество дней о прогрессирования заболевания и у них снизились уровни итокинов клеточного звена иммунитета, при этом отмечалась

тенденция к росту уровня 1Ь-4 , что может свидетельствовать об активации ТЬ2-типа иммунитета. У лиц старше 50 лет, наоборот, на фоне снижения 1Ь-4 и статистически достоверного снижения 1Ь-10 наблюдался подъем уровней цитокинов клеточного звена иммунитета, что в свою очередь предполагает развитие ТЫ-типа иммунитета.

При проведенном анализе содержания цитокинов в сыворотке крови больных с диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии аллогенными клетками получили следующие данные: уровни исследуемых цитокинов до вакцинотерапии у пациентов, получающих аллогенную вакцину с терапевтической целью, были значительно выше по сравнению с контрольными группами (исключение составлял №N-7, уровень которого был сопоставим с группой доноров); значение 1Ь-2 у пациентов с аллогенной вакциной достоверно повысилось, а средний уровень 1Ь-12, который изначально был высоким, увеличился в 1,5 в процессе вакцинотерапии; уровень №N-7 в процессе вакцинации статистически достоверно снижался; отмечалось достоверное снижение экспрессии 1Ь-4, а наблюдаемое уменьшение экспрессии 1Ь-10 в процессе вакцинотерапии не имело статистически значимого подтверждения. Значительное повышение экспрессии 1Ь-2, 1Ь-12 в ходе вакцинации наблюдается во всех возрастных подгруппах у больных с аллогенной вакциной. Изменение содержания №N-7, рассмотренные по возрастному признаку, носили разнонаправленный характер. Наибольшее снижение данного показателя наблюдается у лиц старше 50 лет с аллогенной вакциной. Значительное снижение экспрессии 1Ь-4 в ходе вакцинации наблюдается во всех возрастных подгруппах у больных с аллогенной вакциной.

Независимо от возраста пациентов, наблюдалось повышение уровня Б100, на фоне которого повышались уровни СБ44 и ТвР Ь2 у больных старше 50 лет, получающих лечение аллогенными клетками.

При сравнительном анализе содержания 8100, СБ44, ТОР Ь2, УЕвРА относительно всех групп в терапевтической группе с аллогенной вакциной наблюдался значительный подъем уровней Б100, СБ44, ТСБ Ь2 при этом уровень УЕОБА в сыворотке крови не менялся, но достоверности различий для средних значений данного признака выявлено не было.

Выводы

1. Выявлено низкое содержание 1Ь-12, ШЫ-у и напротив высокие уровни 1Ь-4 и 1Ь-10, которые свидетельствуют о существующем дисбалансе ТЫЛЪ2-типа иммунной системы у больных диссеминированной меланомой, получающих лечение аутологичной дендритной вакциной.

2. Обнаружено снижение уровней 1Ь-2, 1Ь-12, ГРЫ-у (ТЫ-типа цитокинов) и повышение уровня 1Ь-4 (ТК2-типа цитокинов) на фоне вакцинотерапии у больных профилактической группы младше 50 лет с наибольшим количеством дней до прогрессирования заболевания, свидетельствующее о развитие гуморального В-клеточного ответа.

3. Выявлено повышение уровней 1Ь-2, 11,-12, П^-у (ТЫ-типа цитокинов) и снижение уровня 1Ь-4 (ТЬ2-типа цитокинов) в процессе вакцинотерапии у пациентов профилактической группы старше 50 лет, получающих лечение дендритными клетками, которое свидетельствует о развитии клеточного иммунного ответа.

4. Обнаружена прямая корреляционная зависимость между средним количеством дней до прогрессирования заболевания и уровнем 1Ь-10 в профилактической и терапевтической группах больных, получающих лечение аутологичной дендритной вакциной: с увеличением продолжительности жизни пациентов возрастает уровень 1Ь-10.

5. Обнаружена обратная корреляционная связь между средним количеством дней до прогрессирования заболевания и уровнями 8100, ТвР Ь2, УЕОБА у больных диссеминированной меланомой, получающих аутологичную дендритную вакцину: увеличение уровней исследуемых показателей сопровождается снижением продолжительности жизни больных.

6. У пациентов на фоне терапии генно-инженерной вакцины, из опухолевых клеток, трансфицированных геном повышались уровни 1Ь-2, 1Ь-12 и снижались 1Ь-4 и 1Ь-10, что свидетельствуют об активации ТЫ-типа иммунного ответа.

7. Выявлена обратная корреляционная связь между динамикой заболевания и уровнем сывороточного маркера меланомы Б100:

снижение продолжительности жизни пациентов сопровождается

повышением уровня сывороточного маркера меланомы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Михайлова И.Н., Бурова О.С., Лукашина М.И., Морозова Л.Ф., Утяшев И.А., Петенко Н.Н., Барышников К.А., Иванов П.В., Парсункова К.А., Черемушкин Е.А., Демидов Л.В., Барышников А.Ю. «Вакцинотерапия диссеминированной меланомы геномодифицированными клетками» - Русский журнал Материалы 15-й Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье» Санкт-Петербург т10, т2,22-26 мая 2006г, стр.25.

2. Mikhaylova I.N., Burova O.S., Lucashina M.I., Morozova L.F., Utyashev U.A., Petenko N.N., Barishnikov K.A., Ivanov P.V., Parsunkova K.A., Cheremushkin E.A., Demidov L.V., Barishnikov A.U. «Gene modified tumor therapy of advanced melanoma» - B-th International Biological Therapy of Cancer -June 21-24,2006, Dresden.

3. Mikhaylova I.N., Chkadua C.Z., Borunova A.A., Petenko N.N., Parsunkova K.A., Balatskaya N.V., Cheremushkin E.A., Titov K.S., Krasnova B.K., Kadagidze Z.G., Demidov L.V., Barishnikov A.U «Autologous dendritic cell based of melanoma»» - 8-th International Biological Therapy of Cancer -June 21-24,2006, Dresden.

4. Михайлова И.Н., Демидов Л.В., Петенко H.H., Чкадуа Г.З., Парсункова К.А., Краснова Л.Б., Кузьмин С.Г., Ворожцов Г.Н., Барышников А.Ю. «Растворимая форма CD44 в сыворотке пациентов с диссеминированной меланомой кожи» - Онкология сегодня. Успехи и перспективы. Материалы Всероссийской научно-практической конференции. Труды КОД МЗ РТ. Том 9. Казань 2006 г., стр. 166-167.

5. Mikhaylova I.N., Demidov L.V., Petenko N.N., Parsunkova K.A., Balatskaya N.V., Krasnova L.B.,Kuzmin S.G. «Serum CD44 in advanced melanoma patients» - 6-th ISREC Conference on Cancer Research , October 11-13, 2006, Lausanne, Switzerland.

6. Михайлова И.Н., Демидов Л.В., Петенко H.H., Бурова О.С., Парсункова К.А. и др. «Использование БАД «кордицепс новый рецепт» у больных диссеминированной меланомой кожи на фоне химиотерапии» - Российский биотерапевтический журнал, 2006, т.5, №4, стр.38-42.

7. Михайлова И.Н., Петенко H.H., Чкадуа Г.З., Вишнякова Л.Ю., Огородникова Е.В., Черемушкин Е.А., Титов К.С., Хатырев С.А., Харатишвили Т.К., Парсункова К.А., Алиев М.Д., Барышников А.Ю., Демидов JI.B. «Вакцинотерапия метастатической меланомы с использованием дендритных клеток: клиническое исследование I/II фазы» - Российский биотерапевтический журнал, 2007, №2, стр.39-43.

8. Парсункова К.А., Михайлова И.Н., Краснова Л.Б., Кузьмин С.Г., Ворожцов Г.Н., Барышников А.Ю. «Динамика уровней ИЛ-2 и ИФНу в сыворотке крови при диссеминированной меланоме» - Российский биотерапевтический журнал, Материалы VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты», 24-26 марта 2007г., Москва, стр.61.

9. Парсункова К.А., Михайлова И.Н., Евсегнеева И.В., Гандурина И.А., Краснова Л.Б., Кузьмин С.Г., Ворожцов Г.Н., Петенко H.H., Барышников А.Ю. «Динамика уровней цитокинов в сыворотке крови при диссеминированной меланоме» - Актуальные вопросы онкологии. Материалы научно-практической конференции с международным участием, 23-24 апреля, 2007 г., Элиста, стр.30-31.

Ю.Балацкая Н.В., Парсункова К.А., Гольдина H.A., Гандурина И.А., Краснова Л.Б., Кузьмин С.Г., Ворожцов Г.Н., Петенко H.H., Михайлова И.Н., Барышников А.Ю. «Состояние антиоксидантной системы у больных меланомой кожи» -Актуальные вопросы онкологии. Материалы научно-практической конференции с международным участием, 2324 апреля, 2007 г., Элиста, стр.31-33.

И.Михайлова И.Н., Петенко H.H., Бурова О.С., Парсункова К.А., Балацкая Н.В., Гольдина H.A., Гандурина И.А., Сомонова О.В., Манджуга A.B., Краснова Л.Б., Кузьмин С.Г., Ворожцов Г.Н., Демидов Л.В. «Применение БАД «Высший

Линчжи» у больных диссеминированной меланомой кожи на фоне химиотерапии» - Российский биотерапевтический журнал, 2008, №3, стр.80-85.

12.Михайлова И.Н., Парсункова К.А., Евсегнеева И.В., Краснова Л.Б., Петенко H.H., Чкадуа Г.З., Черемушкин Е.А., Караулов A.B., Демидов Л.В., Барышников А.Ю. «Динамика цитокинов у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии аутологичными дендритными клетками» -Иммунология, 2010, №3, стр.131-135.

13.Парсункова К.А., Михайлова И.Н., Петенко H.H., Чкадуа Г.З., Барышников А.Ю., Демидов Л.В. «Цитокиновый профиль на фоне вакцинотерапии у больных диссеминированной меланомой» - Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Опухоли кожи и мягких тканей», 3-4 сентября 2009г., Санкт-Петербург, стр.31-34.

Н.Михайлова И.Н., Парсункова К.А., Евсегнеева И.В., Краснова Л.Б., Барышников К.А., Черемушкин Е.А., Морозова Л.Ф., Бурова О.С., Караулов A.B., Киселев С.Л., Демидов Л.В., Барышников А.Ю. «Динамика цитокинов у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии аллогенными опухолевыми клетками» -Российский биотерапевтический журнал, 2010, №4, 8 том, стр. 13-16.

15.Парсункова К.А., Михайлова И.Н., Евсегнеева И.В., Петенко H.H., Караулов A.B., Барышников А.Ю., Барышников К.А., Чкадуа Г.З., Морозова Л.Ф., Бурова О.С., Ворожцов Г.Н. «Сравнительный анализ содержания S100, CD44, TGF Ь2, VEGFA в сыворотке крови больных диссеминированной меланомой на фоне вакцинотерапии» -Материалы VI Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность», 10-11 ноября 2009г., Москва, стр.178-181.

Подписано в печать 04.02. ю Формат 60*84/16 Бумага офисная «БуеЮСору». Тираж 100 экз. Заказ № 67 Отпечатано на УМТ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

Оглавление диссертации Парсункова, Кармен Анатольевна :: 2010 :: Москва

Список сокращений

Введение 6 Часть I.

Обзор литературы

1.1 Иммунологический надзор и механизмы противоопухолевого иммунитета.

1.2 Биотерапия.

1.3 Общая характеристика цитокинов.

1.4 Роль цитокинов в развитии опухолей.

1.5 Роль цитокинов в защите организма от опухолей.

1.6 Онкомаркеры и молекулы адгезии.

Часть II.

Собственные исследования

Глава 1. Материалы и методы

1.2 Иммунологические методы исследования.

1.2.1 Определение ТЫ-типа цитокинов.

1.2.2 Определение ТЬ2-типа цитокинов.

1.2.3 Определение факторов роста и ангиогенеза.

1.2.4 Определение S100 и sCD44std.

1.3 Статистический анализ.

Глава 2. Характеристика клинического материала

Результаты

2.1 Цитокины на фоне терапии дендритными клетками.

2.1.1 Сравнительный анализ содержания цитокинов у больных с дендритной вакциной распределенных по среднему количеству дней до прогрессирования заболевания.

2.1.2 Сравнительный анализ содержания цитокинов у больных с дендритной вакциной, распределенных по возрасту относительно среднего количества дней до прогрессировали* заболевания.

2.2 Цитокины на фоне терапии аллогенными клетками.

2.3 Сравнительный анализ содержания S100, CD44, TGF Ь2, VEGFA в группах. 102 Обсуждение 108 Заключение 116 Выводы 120 Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АПК — антиген-презентирующая клетка

МКА — моноклональные антитела

МПК — мононуклеары периферической крови

МНС — major histocompability complex (главный комплекс гистосовместимости)

CD — cluster of differentiation (кластер дифференцировки) CTL — цитотоксический Т-лимфоцит ДК — дендритные клетки

HLA — human leukocyte antigen (человеческий лейкоцитарный антиген)

IL — интерлейкин

TIL — Т-лимфоциты инфильтрирующие опухоль

LAK— лимфокин-активированные киллеры

Th — Т-лимфоциты хелперы

TNF —фактор некроза опухолей

TGF — трансформирующий ростовой фактор

TCR — Т-клеточный антигенный рецептор

TLR — То11-подобные рецепторы

Трег — регуляторные Т-лимфоциты

IFN — интерферон

VEGF —фактор роста сосудистого эндотелия

ОСА — опухолеспецифические антигены

ОАА — опухолеассоциированные антигены

ГЗТ — гиперчувствительность замедленного типа

ELISPOT — Enzyme-linked immunosorbent spot (разновидность иммунно-ферментного анализа для количественного определения цитокин-продуцирующих клеток (spots - точки) и относительного количества цитокина на клетку (spot size - размер точки).

NK — естественные киллерные клетки NKT — естественные киллерные Т-лимфоциты NFkB — ядерный транскрипционный фактор кВ Jak — Janus-киназа

MDA — «melanoma differentiation associated» гены

MDSCs — myeloid-derived suppressor cells

MIF — macrophage migration inhibitory factor

M-CSF — macrophage colony-stimulating factor (колониестимулирующий фактор для моноцитов/макрофагов)

STAT — сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции

Введение диссертации по теме "Онкология", Парсункова, Кармен Анатольевна, автореферат

Актуальность темы

Значительные успехи в области генетики, молекулярной биологии, иммунологии углубили современные представления об иммунологии опухоли, механизмах канцерогенеза и регуляции опухолевого роста. Охарактеризованы различные этапы развития злокачественных новообразований, выделены основные звенья патогенеза, обнаружены и продолжают выявляться специфические мишени для воздействия.

Полученные данные позволили начать разработку патогенетических подходов в лечении рака, объединив их под общим названием «биотерапия». В настоящее время основными задачами которой являются:

• воздействие на опухолевую клетку (ингибирование клеточного деления, предотвращение ауто- и паракринной стимуляции клеточного роста, индуцирование нормальной дифференцировки, запуск апоптоза и т.д.);

• блокирование процессов ангиогенеза;

• активирование иммунной системы.

Основными мишенями в биотерапии рака являются генный, рецепторный аппараты, опухолеассоциированные антигены опухолевых клеток, гены и сигнальные аппараты клеток, участвующие в процессах ангиогенеза, метастазировании и иммунном ответе [Якубовская Р.И. 2002].

В связи с этим в последнее время наблюдается всплеск интереса к активной специфической иммунотерапии (вакцинотерапии) и подтверждается перспективность её развития. Противоопухолевая вакцинотерапия условно подразделяется на следующие группы:

• вакцины на основе цельных клеток: аутологичные и аллогенные;

• аутологичные белки теплового шока;

• ганглиозиды; синтетические пептиды; в ДНК — вакцины;

• рекомбинантные вирусы;

• вакцины на основе дендритных клеток [Моисеенко В.М. 2002].

Стимулом в развитии двух направлений вакцинации на основе цельных и дендритных клеток стало, во-первых, идентификация обширных панелей опухолеспецифических антигенов (ОСА), распознаваемых цитотоксическими Т-лимфоцитами и, во-вторых, развитием методов биотехнологии, благодаря которым возможно получение дендритных клеток человека in vitro в достаточно больших количествах {Москалева ЕЮ. 2002].

Вакцины на основе облучённых цельных опухолевых клеток, а также их лизатов и иммунологических адъювантов, способных вызывать устойчивый противоопухолевый иммунный ответ, производятся из двух ключевых компонентов: одного или более опухолеассоциированных антигенов, как источника антигенности для индукции специфического иммунитета, и адъюванта, генерирующего сигналы, которые усиливают иммуногенность специфических антигенов [Osanto S. 1997; Boon Т. 2006; Hanagiri Т. 2006; Salsedo М. 2006]. Источником индивидуального набора опухоль-ассоцииированных антигенов является аутологичная опухоль, полученная в результате радикальной или циторедуктивной операции.

В качестве адъюванта используют введённые в эти клетки генетические конструкции, экспрессирующие цитокины, стимуляторные, хемоаттрактантные и другие молекулы.

В производстве дендритных вакцин используют дендритные клетки (ДК) — самые совершенные антигенпредставляющие клетки организма, способные активировать, инициировать и регулировать как первичный, так и вторичный Т- и В- клеточный иммунный ответ [Banchereau J. 1998; Fong L. 2000; Schuler G. 2003].

Нагруженные» опухолеассоциированными антигенами (ОАА) ДК способны стимулировать генерацию противоопухолевых цитотоксических Т-лимфоцитов.

В настоящее время существует множество разнообразных подходов к созданию противоопухолевых вакцин с использованием дендритных клеток (ДК). При этом ДК получают из клеток периферической крови или из костного мозга больного и обрабатывают их in vitro опухолеассоциированными антигенами, а затем вводят пациентам [Sallusto F. 1994; Jonuleit Н. 2001; O'Neill D. 2004].

Доказана эффективность использования зрелых ДК, которые отличаются от незрелых высокой экспрессией антигенов главного комплекса гистосовместимости I и П классов, молекул адгезии (CD54), костимулирующих молекул (CD86), а также экспрессией de novo CD80 (костимулирующая молекула) и CD83 (маркер зрелых ДК) [Janeway Ch. 2001; Гантиевская Ю. А. 2001].

Как правило, результаты биотерапии с помощью вакцин оцениваются по клиническим параметрам, прогрессированию заболевания, продолжительности жизни больного, а также по реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) in vivo.

Существующие на сегодняшний день лабораторные методы оценки состояния вакцинируемых больных с диссеминированной меланомой кожи EL1SPOT и фенотипирование иммуннокомпетентных клеток трудоемки, дорогостоящи и пока остаются методами для научных разработок.

Все это указывает на необходимость не только предварительной оценки параметров иммунитета в каждом конкретном случае и назначения в зависимости от этого соответствующего препарата, но и мониторинга в процессе применения этих препаратов [Кадагидзе З.Г. 2002].

Предлагаемые нами показатели цитокинового профиля (IL-2, IL-12, IL-4, EL-10, IFN-y, TGF-p2, VEGFA) перспективны для мониторинга в ходе вакцинотерапии и характеристики биологического «поведения» новообразования, в частности, его инвазивного роста и метастатического потенциала, современного понимания механизмов активации и индивидуального терапевтического подхода к больным с меланомой колеи, что поможет определять клиническое течение и прогноз заболевания.

Цель работы:

Изучение изменения уровней цитокинов у больных с диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии.

Задачи исследования:

1. Оценить цитокиновый профиль (IL-2, EL-12, IL-4, EL-10, IFN-у, TGF-P2, VEGFA) на фоне вакцинотерапии дендритной вакциной.

2. Определить цитокиновый профиль (EL-2, IL-12, EL-4, IL-10, IFN-y, TGF-j32, VEGFA) на фоне вакцинотерапии генно-инженерной вакциной модифицированной геном tag-7.

4. Определить наличие корреляционной связи между динамикой заболевания и уровнем сывороточного маркера меланомы белка S100 у больных меланомой кожи в ходе вакцинотерапии.

5. Оценить значение изменения уровня молекулы адгезии CD44, как предполагаемого прогностического маркера при вакцинотерапии.

Научная новизна:

Выявлены различия в уровнях Thl/Th2-Timax цитокинов у пациентов профилактической группы, получающих дендритную вакцину, в зависимости от возраста.

У онкологических больных на фоне прогрессирования выявлена корреляционная связь между уровнями сывороточного маркера меланомы S100, трансформирующим фактором роста TGF 02.

Научно-практическая значимость:

Заключение диссертационного исследования на тему "Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии"

выводы

1. Выявлено низкое содержание IL-12, IFN-y и напротив высокие уровни IL-4 и IL-10, которые свидетельствуют о существующем дисбалансе Thl/Th2-Traia иммунной системы у больных диссеминированной меланомой, получающих лечение аутологичной дендритной вакциной.

2. Обнаружено снижение уровней IL-2, IL-12, IFN-y (Thl-типа цитокинов) и повышение уровня IL-4 (ТЬ2-типа цитокинов) на фоне вакцинотерапии у больных профилактической группы младше 50 лет с наибольшим количеством дней до прогрессирования заболевания, свидетельствующее о развитие гуморального В-клеточного ответа.

3. Выявлено повышение уровней IL-2, IL-12, IFN-y (Thl-типа цитокинов) и снижение уровня IL-4 (ТЪ2-типа цитокинов) в процессе вакцинотерапии у пациентов профилактической группы старше 50 лет, получающих лечение дендритными клетками, которое свидетельствует о развитии клеточного иммунного ответа.

4. Обнаружена прямая корреляционная зависимость между средним количеством дней до прогрессирования заболевания и уровнем IL-10 в профилактической и терапевтической группах больных, получающих лечение аутологичной дендритной вакциной: с увеличением продолжительности жизни пациентов возрастает уровень IL-10.

5. Обнаружена обратная корреляционная связь между средним количеством дней до прогрессирования заболевания и уровнями S100, TGF Ь2, VEGFA у больных диссеминированной меланомой, получающих аутологичную дендритную вакцину: увеличение уровней исследуемых показателей сопровождается снижением продолжительности жизни больных.

6. У пациентов на фоне терапии генно-инженерной вакцины, из опухолевых клеток, трансфицированных геном tag-7, повышались уровни IL-2, IL-12 и снижались IL-4 и IL-10, что свидетельствуют об активации Th l-типа иммунного ответа.

7. Выявлена обратная корреляционная связь между динамикой заболевания и уровнем сывороточного маркера меланомы S100: снижение продолжительности жизни пациентов сопровождается повышением уровня сывороточного маркера меланомы.

Я преклоняюсь перед светлой памятью Ларисы Борисовны Красновой кандидата химических наук заведующей нашей лаборатории клинической химии и выражаю ей глубокую признательность за веру, поддержку и мудрые жизненные уроки, которые я никогда не забуду. Эта работа выполнена благодаря ей и посвящается этому Человеку.

Работа выполнена при финансовой поддержке Правительства Москвы в рамках научно-технической программы «Разработка и внедрение в медицинскую практику новых методов и средств диагностики и лечения онкологических и других заболеваний».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Целью данного исследования было изучение изменения уровней цитокинов у больных с диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии.

В ходе исследования был оценен цитокиновый профиль (EL-2, EL-12, EL-4, IL-10, IFN-y, TGF Р2, VEGFA) на фоне вакцинотерапии дендритной и аллогенной вакцинами; определена возможность его использования для иммунологического мониторинга эффективности проводимой терапии; оценена корреляционная связь между динамикой заболевания и уровнями белка S100, молекулы адгезии CD44 у больных с меланомой колеи как предполагаемых прогностических маркерах при вакцинотерапии.

В качестве лечебного препарата применялась противоопухолевая вакцина на основе аутологичных дендритных клеток (ДК), нагруженных опухолевым лизатом in vitro и аллогенная вакцина, представленная опухолевыми клетками, модифицированными геном tag-7.

В исследование были включены 55 больных, проходивших вакцинацию аутологичными дендритными клетками, 15 больных с аллогенной вакциной, 83 больных с меланомой без вакцинотерапии и 13 здоровых доноров.

При проведенном анализе содержания цитокинов в сыворотке крови больных с диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии дендритными клетками получили следующие данные: уровни исследуемых цитокинов до вакцинотерапии у пациентов, получающих дендритную вакцину с профилактической и терапевтической целью, были различными и отличались относительно контрольных групп. Значения IL-2 в исследуемых группах изначально были различными и достоверно повышались в ходе вакцинотерапии. Наблюдавшееся повышение IL-2 происходило в сыворотке крови больных профилактической подгруппы с наибольшим количеством дней до прогрессирования заболевания и в терапевтической подгруппе у лиц с наименьшим количеством дней до прогрессирования заболевания. Уровни IL-12 также в исследуемых группах также изначально были различными. Статистически достоверное повышение средних значений этого цитокина наблюдалось в терапевтической группе и, как выяснилось далее, это повышение произошло у лиц с наибольшим количеством дней до прогрессирования заболевания. Все пациенты имели изначально низкий уровень IFN-y, и в ходе вакцинации он не изменился. Достоверное снижение экспрессии IL-4 отмечалось в ходе вакцинотерапии у больных профилактической группы. В ходе лечения в профилактической группе уровень IL-10 незначительно уменьшился с 8,84 до 7,04 pg/ml, но наблюдаемое уменьшение экспрессии IL-10 в процессе вакцинотерапии не имело статистически значимого подтверждения. При этом в терапевтической группе больных выявлена прямая корреляционная зависимость между 1L-10 и средним количеством дней до прогрессирования заболевания. Достоверных данных по изменению содержания IFN-y и IL-4 при сравнительном анализе по среднему количеству дней до прогрессирования заболевания выявлено не было.

Уровень сывороточного маркера меланомы S100 у пациентов профилактической группы, получающих лечение дендритными клетками, изначально соответствовал референтным значениям, определенным у здоровых доноров. Однако, независимо от количества дней до прогрессирования заболевания, во всех подгруппах повышался. У больных терапевтической группы его средние значения превышали в 2 раза средние уровни S100 по сравнению с профилактической группой в начале вакцинации и значительно повысились в процессе лечения.

При статистическом анализе всей группы больных с дендритной вакциной выявлена обратная корреляционная зависимость между показателями среднего количества дней до прогрессирования заболевания и уровнем S100.

Полученные данные наглядно продемонстрировали, что пациенты профилактической группы младше 50 лет с аутологичной дендритной вакциной имели самое высокое среднее количество дней до прогрессирования заболевания и у них снизились уровни цитокинов клеточного звена иммунитета, при этом отмечалась тенденция к росту уровня IL-4, что может свидетельствовать об активации ТЬ2-типа иммунитета. У лиц старше 50 лет, наоборот, на фоне снижения IL-4 наблюдался подъем уровней цитокинов клеточного звена иммунитета, что в свою очередь предполагает развитие ТЫ-типа иммунитета.

Динамика CD44 и TGF Ь2 имела разнонаправленный характер. Значимые изменения произошли в терапевтической подгруппе у больных с наименьшим количеством дней до прогрессирования заболевания, уровень исследуемых показателей в этой подгруппе увеличился в 1,1 раза в процессе вакцинотерапии.

При проведенном анализе содержания цитокинов в сыворотке крови больных с диссеминированной меланомой в процессе вакцинотерапии аллогенными клетками получили следующие данные: уровни исследуемых цитокинов до вакцинотерапии у пациентов, получающих аллогенную вакцину с терапевтической целью, были значительно выше по сравнению с контрольными группами (исключение составлял IFN-y, уровень которого был сопоставим с группой доноров); значение IL-2 у пациентов с аллогенной вакциной достоверно повысилось, а средний уровень IL-12, который изначально был высоким, увеличился в 1,5 в процессе вакцинотерапии; уровень IFN-y в процессе вакцинации статистически достоверно снижался; отмечалось достоверное снижение экспрессии IL-4, а наблюдаемое уменьшение экспрессии IL-10 в процессе вакцинотерапии не имело статистически значимого подтверждения. Значительное повышение экспрессии JL-2, IL-12 в ходе вакцинации наблюдается во всех возрастных подгруппах у больных с аллогенной вакциной. Изменение содержания IFN-y, рассмотренные по возрастному признаку, носили разнонаправленный характер. Наибольшее снижение данного показателя наблюдается у лиц старше 50 лет с аллогенной вакциной. Значительное снижение экспрессии IL-4 в ходе вакцинации наблюдается во всех возрастных подгруппах у больных с аллогенной вакциной.

Повышение уровня S100, молекулы адгезии CD44 и фактора роста TGF Ь2 наблюдалось во всех возрастных подгруппах у больных, получающих лечение аллогенными клетками.

При сравнительном анализе содержания S100, CD44, TGF Ь2, VEGFA относительно всех групп в терапевтической группе с аллогенной вакциной наблюдался значительный подъем уровней S100,CD44, TGF Ь2 при этом уровень VEGFA в сыворотке крови не менялся, но достоверности различий для средних значений данного признака выявлено не было.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Парсункова, Кармен Анатольевна

1. Астахова С.Е., Лихванцева В.Г., Ухов Ю.И. и др. Маркеры ангиогенеза в прогнозе увеальной меланомы // Мед. Иммунол. -2003.-5 (3-4).-С. 346.

2. Балдуева И. А. Разработка, обоснование и оценка современной биотерапии у больных солидными опухолями // Автореферат докторской диссертации. Санкт-Петербург. - 2008.

3. Барышников А.Ю. Принципы и практика вакцинотерапии рака // Бюллетень СО РАМН. 2004. - №2 (112). - С.59.

4. Барышников А.Ю. Принципы и практика вакцинотерапии рака // Бюллетень СО РАМН. 2004. - №2 (112). - С.61.

5. Взаимодействие системы иммунитета и опухоли www.anticancer.net/resan/rbasis.html

6. Галактионов В.Г. Иммунология // Москва. Нива России - 2000. -С.337.

7. Галактионов В.Г. Иммунология // Москва. Нива России - 2000. -С.340-341.

8. Гантиевская Ю. А., Селявко В.В. Дендритные клетки: роль в системе иммунитета // Иммунопатология, аллергология, инфектология. -2001.-№4.-С. 5-23.

9. Давыдов М.И. Энциклопедия клинической онкологии // ISBN: 57182-0026-2 РЛС. 2004. - С. 350.

10. Иммунологические методы. Под ред. Фримеля Г. Пер. с англ. // Москва. Медицина - 1987. - С.162-170.

11. П.Кадагидзе З.Г., СлавинаЕ.Г. Иммунологические подходы к биотерапии опухолей //1 Всероссийская научно-практическая конференция «Биотерапия рака». Москва. - 2002. - С.31.

12. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С. Цитокины // СПб: ООО «Издательство Фолиант» — 2008 С.15-17.

13. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины // СПб: ООО «Издательство Фолиант» 2008 - С. 537.

14. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С Цитокины // СПб: ООО «Издательство Фолиант» 2008 — С. 369-378.

15. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С Цитокины // СПб: ООО «Издательство Фолиант» — 2008.— С. 536-537.

16. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины // СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2008 С.9.

17. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины // СПб: ООО «Издательство Фолиант», 2008 С. 292.

18. Киселев C.JL, Ларин С.С., Гнучев Н.В., Георгиев Г.П. Генетика. -2000.-Т. 36,- №11.-С. 1431-1435.

19. Козлов В.А; Черных Е.Р. Современные проблемы иммунотерапии в онкологии // Бюллетень СО РАМН. 2004,- №2 (112). - С. 13.

20. Михайлова И.Н., Морозова Л.Ф. и др. Вакцина tag-7. Фаза I клинического изучения // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. М.2002 - С. 63.

21. Моисеенко В.М. Клинические аспекты вакцинотерапии злокачественных опухолей // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. М.2002. С. 64.

22. Моисеенко В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи // Практическая онкология. 2001. - №4(8) (декабрь) - С.59.

23. Моисеенко В.М. Клинические аспекты вакцинотерапии злокачественных опухолей //1 Всероссийская научно-практическая конференция «Биотерапия рака» Москва. 2002. - С.64-65.

24. Моисеенко В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи // Практическая онкология 2001 - №4(8) - С.58.

25. Моисеенко В.М., Балдуева И.А. Иммунологические аспекты опухолевого роста и возможности вакцинотерапии // Материалы Всероссийской научно-практической конференции -М.2008. С.5.

26. Москалева Е.Ю., Родина А.В. и др. Теоретические основы и подготовительный этап использования дендритных клеток для биотерапии рака // Материалы Всероссийской научно-практической конференции М.2002 . С. 66.

27. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление. 2004. - .Т. 3, №2 - С. 16-22.

28. Чиссов В.И. Состояние онкологической помощи населению России в 2003 году М. - 2004г. - С.256.

29. Якубовская Р.И. Современный взгляд на биотерапию рака //1 Всероссийская научно-практическая конференция «Биотерапия рака» М.2002 - С.139-140.

30. Almand В., Clark J. I., Nikitina E. et al. Increased production of immature myeloid cells in cancer patients: a mechanism of immunosuppression in cancer // The Journal of Immunology 2001. - V. 166. - no. 1. - P. 678689.

31. Bakin A. et al. p38 mitogen-activated protein kinase is required for TGFbeta-mediated fibroblastic transdifferentiation and cell migration // J Cell Sci. -2002. -V. 115. -P. 3193-3206.

32. Balkwill F. Tumor necrosis factor or tumor promoting factor? // Cytokine Groth Factor Rev-2002. -V. 13. -P.135-141.

33. Banchereau J., and Steinman R. Dendritic cells and the control of immunity // Nature. 1998. - 392. - P. 245-52.

34. Barrio M.M., de Motta P. Т., Kaplan J., von Euw E.M., Bravo A. I., Chacon R. D., Mordoh J. A phase I study of an allogenic vaccine (VACCIMEL) with GM-CSF in melanoma patients // Journal of Immunotherapy-July/August 2006 V.29 - Issue 4 - P 444-454.

35. Barlow J. et al. Higher stromal expression of transforming factor-beta type П receptors is associated with poorer prognosis breast tumors // Breast Cancer Res Treat 2003. V. 79. - P. 149-159.

36. Bierie В., Moses H. TGF-p and cancer // Cytokines Growth Factor Rev. -2006-V. 17.-P. 29-40.

37. Bonfrer J.M.G., Korse C.C., Nieweg O.E. et al. The luminescence immunoassay S-100: a sensitive test to measure circulating S-100: its prognostic value in malignant melanoma. // British Journal of Cancer — 1998. V.77(12) - P.2210-2214.

38. Bonfrer JM, Korse CM: Monitoring malignant melanoma with the S-100B tumour marker. 2001;158():149-57

39. В oon Т., Coulie P.G., Van denEynde В J I Immunol. Today. 1997. - V. 18.-P. 267-268.

40. Boon Т., Pierre C., Benoiit J. et al. Human T-Cell Responses Against Melanoma // Annu. Rev. Immunol. 2006. - 24. - P. 6.1- 6.34.

41. Boon Т., Coulie P.G., Van den Eynde B. .Tumor antigens recognized by T cells// Immunol. Today. 1997. - Vol. 18. - P. 267-268.

42. Bottom U, Izzo P, Richetta A, Mannooranparampil TJ, Devirgiliis V, Del Giudice M, et al: S100 serum level: a tumour marker for metastatic melanoma // Melanoma Res. 2003 - 13:427-429.

43. Brady MS, Eckels DD, Lee F, Ree SY. Cytokine by CD4+ T-cells responding to antigen presentation by melanoma cells // Melanoma Res -1999.-9: 173-80.

44. Brown M., Hural J. Functions of IL-4 and control of its expression // Crit. Rev. Immunol. 1997. - V. 17. - P. 1-32.

45. Caudell E., Mumm J.B., Poindexter N. et al. The protein product of the tumor suppressor gene, melanoma differentiation-associated gene 7, exhibits immunostimulatory activity and is designated IL-24 // J Immunol. -2002. -V. 168. -P. 6041-6046.

46. Clark R., Engvall E. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Theoretical and practical aspects. Enzyme-Immunoassay (E.T. Maggio ed.) //BocaRaton, Florida- 1981. -P.167-179.

47. Clark WH, Elder DE, GueiTy D, Braitman LE, Halpern AC // A modell predeicting survival in stage I melanoma based upon the tumor progression.// J natl Cancer Inst. 1989. - V. 81. - S.l893.

48. Cohen S., Taylor JM; Mitchell WMI I Characterization of the binding protein for epidermal growth factor I I The Journal of biological chemistry 1974 - V. 249(7) -P. 2188-94.

49. Colombo M., Trinchieri G. Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy // Cytokine Groth Factor Rev 2002. - V. 13. - P. 155168.

50. Coussens L., Werb Z. Inflamatory cells fiid cancer: think different! // J. Exp. Med. -2001. -V. 193 -F23-F26.

51. Cunningham C., Chada S., Merrit J. et al. Clinical and local biological effects of an intratumoral injection of mda-7 (IL24; INGN 241) in patients with advanced carcinoma: a phase I study // Molec. Ther. 2005. - Vol. 11.-P. 149-159.

52. Dadabayev A. R., M. H. Sandel, A. G. Menon, et al. Dendritic cells in colorectal cancer correlate with other tumor-infiltrating immune cells // Cancer Immunology, Immunotherapy 2004. - V. 53. - no. 11. - P. 978986.

53. DeKruyff F., Fang Y., Secrist H., Umetsu D. IL-4 synthesis by in vivo primed memory CD4+ T-cells // J. Clin. Immunol. 1995. - V. 15. - P. 105-115.

54. Djukanovic D, Hofmann U, Sucker A. et al. Comparison of SI00 protein and MIA protein as serum marker for malignant melanoma // Anticancer Res 2000. - 20 (3B): 2203-7.

55. Dummer W, Becker JC, Schwaaf A, et al. Elevated serum levels of interleukin-10 in patients with metastatic malignant melanoma // Melanoma Res 1995 - 5:67-8.

56. Dumont N., Bakin A., Arteaga C. Autocrine transforming growth factor-beta signaling mediates Smad-independent motility in human cancer cells // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278. - P.3275-3285.

57. Edwards, B. S., Merritt, J. A., Fuhlbrigge, R. C., and Borden, E. C. Low doses of interferon alpha result in more effective clinical natural cell activation // J. Clin. Invest. 1985 - V.75. -P.1908-1913.

58. Ellerhost J., Prieto V., Ekekcioglu S. et al. Loss of MDA-7 expression with progression of melanoma // J Clin Oncol. 2002. - V. 20. - P. 10691074.

59. Espinoza-Delgado I. Cancer Vaccines // The Oncologist. 2002. - Vol. 7. (suppl. 3). - P. 20-33.

60. Fallarino F., Grohmann U., Hwang K. W., et al. Modulation of tryptophan catabolism by regulatory T cells // Nature Immunology -2003. V. 4. - no. 12. - P. 1206-1212.

61. Fisher P. Is mda-7/IL24 a «magic bullet» for cancer? // Cancer Res. -2005. V. 65. - P. 10128-10138.

62. Fong L., Engleman E., Dendritic cells in cancer immunotherapy // Annu. Rev. Immunol. -2000. 18. - P. 245-73.

63. Fujivara К., T. Yoshino., K. Miyake., N. Ohara., and T. Akagi. Expression of a lymphocyte adhesion molecule (CD44) in malignant lymphomas: relevance to primary site, histological subtype and clinical stage // Acta Med Okayama 1993. - V.47. - P.215-222.

64. Gerosa F., Tomassi M., Benati C. et al. Differential effect of tyrosine kinase inhibition in CD69 antigen expression and lytic activity induced by IL-2, IL-12 and IFN-alpha in human NIC cells // Cell Immunol 1993. -V. 150.-P. 382-390.

65. Goldstein L.A., D.F.H. Zhou., L.J.Picker., C.N. Minty., R.F. Bargatze., J.F. Ding, and E. C. Butcher. A human lymphocyte homing receptor, the Hermes antigen, is related to cartilage proteoglycan core and link proteins // Cell 1989. - 56, 1063-1072.

66. Gomperts В., Strieter R. Chemokine-directed metastasis // Contrib. Microbiol. 2006. - V. 13. - P. 170-190.

67. Gorelik L., Flavell R. Transforming groth factor-beta in T-cell biology // Nat. Rev. Immunol. 2002. - V. 2. - P. 46-53.

68. Gupta P., Su Z., Lebedeva I. et al. mda-7/IL-24: Multifunctional cancer -specific apoptosis- inducing cytokine // Pharmacol. Ther. 2006. - V. 111.-P. 596-628.

69. Hagenbaugh A, Sharma S, Dubinett SM, Wei SH, Aranda R, Cheroutre H, Fowell DJ, Binder S, Tsao B, Locksley RM, Moore KW, Kronenberg M, et al. Altered immune responses in interleukin 10 transgenic mice. // J Exp Med 1997. - 185: 2101-10.

70. Halak BK, Maguire Jr HC, Lattime EC. Tumor-induced interleukin-10 inhibits type 1 immune responses directed at a tumor antigen as well as nontumor antigen present at the tumor site. // Cancer Res 1999. - 59: 911-7.

71. Hauschild A, Engel G, Brenner W, Glaser R, Monig H, Henze E, et al: Predictive value of serum S100B for monitoring patients with metastatic melanoma during chemotherapy and/or immunotherapy. // Br J Dermatol. 1999. - 140:1065-1071.

72. Henze G., Dummer R., Joller-Jemelka H.I. et al. Serum SI00 a marker for disease Monitoring in metastatic melanoma. // Dermatology - 1997. -V. 194. -P.208-212.

73. Hersey P, Menzies S.V, Halliday G. M, Nguyen T, Farrelly M. 1, DeSilva C, Lett M. Phase I/TI study of treatment with dendritic cell vaccines in patients with disseminated melanoma. // Cancer Immunology Immunother. 2004. - Feb. - V.53 (2). - P. 125-34.

74. Howard M., Farrar J., Hilfilcer M. et al. Identification of a T-cell-derived B-cell growth factor distinct from interleukin-2 // J. Exp. Med. 1982. -V.155.-P. 914-923.

75. Hudson J., Shoaibi M., Maestro R. et al., A proinflamatory cytokine inhibits p53 tumor suppressor activity // J. Exp. Med. 1999. - V. 90. -P. 1375-1382.

76. Hui Li, Hong-Jing Jiang, Ming-Quan Ma, Feng Wei, Xiu-Mei An, Xiu-Bao Ren. Vaccination with Allogenic GM-CSF Gene-Modified Lung Cancer Cells: Antitumor Activity Comparing with that Induced by

77. Autologous Vaccine // Cancer Biotherapy@ Radiopharmaceuticals -2007. V.22 (6). - P. 790-798.89.1saack A., Lindemann J., Virus interference. I. The Interferon // Proc. Roy. Soc. Series B. 1957. - V. 147. - P. 258-267.

78. Janeway Ch. Immunobiology 5E: The immune system in health and disease // Garland Publising 2001. - P. 307-9.

79. Jemal A, Clegg LX, Ward E, Ries LA Wu X, Jamison PM, et al. Annual report to the nation on the status of cancer, 1975-2001, with a special feature regarding survival // Cancer- 2004. 101:3-27.

80. Jochen Utikal, Dirk Schadendorf, and Selma Ugurel. Serologic and immunohistochemical prognostic biomarkers of cutaneous malignancies // Arch Dermatol Res 2007 March - V.298 (10). - P.469-477.

81. Jury C.S., McAllister E.J., MacKie R.M. Rising levels of serum S100 protein precede other evidence of disease progression in patients with malignant melanoma // Br J Dermatol 2000. - 143:269-274.

82. Kaplan M. H., San Y. I., Hoey Т., Grusby M. J. Impaired EL-12 responses and enhanced development of Th2 cells in STAT4-deficient mice // Nature. 1996. - V. 382. - P. 174-177.

83. Karjalainen J.M., Tammi R.H., Tammi M.I., Eskelinen M.J., Agren U.M., Parkkinen J.J., et al. Reduced level of CD44 and hyaluronidase associated with unfavorable prognosis in clinical stage I cutaneous melanoma // Am J Pathol 2000. - 57: 957-965.

84. Kawabe S., Niahikawa., Munshi A. et al. Adenovirus-mediated mda-7 gene expression radiosensitiezes non-small cell lung cancer cells via TP53-independent mechanisms // Molec Ther. 2002. - V. 6. - P. 637644.

85. Kililcuchi Т., Alcasaki Y., Irie M. et. al. Results of a phase I clinical trial of vaccination of glioma patients with fusions of dendtitic and glioma cells // Cancer Immunol. Immunother- 2001. V. 50. - P. 337-344.

86. Klebanoff C., Finkelstein S., Surman D. et al. EL-15 enchances the in vivo antitumor activity of tumor-reactive CD8+ T-cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2004. -V. 101. P. 1969-1974.

87. Kubin M., Kamoun M,, Trinchiery G. IL-12 synergizes with B7/CD28 interaction and cytokine production of human T-cells // J Exp Med-1994.-V. 180.-P. 211-222.

88. Kuppner M.C., van Meir, T. Gauthier, M.F. Hamou, and N. De Tribolet. Differential expression of the CD44 molecule in human brain tumours // Int. J. Cancer 1992. - V.50. - P.572-577.

89. Cederbom L., Hall H., and Ivars F. CD4+CD25+ regulatory T cells down-regulate co-stimulatory molecules on antigen-presenting cells // European Journal of Immunology 2000. - V. 30. - no. 6. - P. 15381543.

90. Mellor L. and Munn D. H. ШО expression by dendritic cells: tolerance and tryptophan catabolism // Nature Reviews Immunology -2004.-V. 4.-no. 10.-P. 762-774.

91. Lauerova L, Dusek L, Simickova M, Kosak I, Vagundova M, Zaloudik J, Kovarilc J. Malignant melanoma associates with Thl/Th2 imbalance that coincides with disease progression and immunotherapy response.//Neoplasma 2002. - 49(3): 159-66.

92. Le thi Bich Thuy, Queen, C., and Fauci, A. S. IFN-y induces light chain synthesis in IL-2 stimulated human В cells. // Eur. J. Immunol. -1986.-V.16.-P.547-550.

93. Lazar-Molnar E., Hegyesi H., Toth S., Falus A. Autocrine and paracrine regulation by cytokines and growth factors in melanoma // Cytokines 2000. - V.12 (6) - P.547-54.

94. Lebedeva I., Su Z., Chang Y. et al. The cancer growth suppressing gene mda-7 induces apoptosis selectively in human melanoma cells // Oncogene-2002. -V. 21. P. 708-718.

95. Lin E., Nguyen A., Russell R., Pollard J. Colony-stimulating factor 1 promotes progression of mammary tumors to malignancy // J. Exp. Med. 2001. - V. 193. - P. 727-740.

96. Martenson E.D., Hansson L.O., Nilsson В., von Schoultz E., Mansson Brahme E., Ringborg U. et al. Serum S-lOOb protein as a prognostic marker in malignant cutaneous melanoma // J Clin Oncol. -2001.- 19:824-361.

97. Matsumura Y. and D. Tarin. Significance of CD44 gene products for cancer diagnosis and disease evaluation // The lancet 1992. - 340, 1053-1058.

98. Missotten G.S., Korse C.M., van Dehn C. et al. S-100B protein and melanoma inhibitory activity protein in uveal melanoma screening. A comparison with liver function tests // Tumour Biol 2007. - 28 (2): 639.

99. Mocellin S., Panelli M.C., Wang E., Nagorsen D., Marincola F.M. The dual role of IL-10 // Trends Immunol 2003. - V.24. - P.36-43.

100. Moore K.W., Malefyt R.W., CoffinanR.L., O'Garra A. Interleukin-10 and the Interleukin-10 receptor// Annu Rev Immunol 2001.-V.19. -P.683-765.

101. Morgan D.A., Ruscetti F.W., Gallo R.C. Selective in vitro growth of T lymphocytes from normal human bone marrows // Science 1976. -V.193, N4257. - P.1007-1008.

102. Morinobu A., Gadina M., Strober W. et al. STAT4 serine phosphorylation is critical for IL-12-induced IFN-y production but not for cell proliferation // Proc Natl Acad Sci 2002. - V. 99. - P. 1281-1286.

103. Moses H., Tucker R., Leof E. et al. Type beta transforming growth factor is a growth stimulator and a growth inhibitor // Cancer Cells -1985. V. 3. -P. 65-71.

104. Mosmann T.R., Cherwinski H., Bond M.W., Giedlin M.A. and Coffman R. L. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins // J. Immunol. 1986. - V.136. - P.2348-2357.

105. Mullen A., High F. A., Hutehins A. S. et al. Role of T-bet in commitment of Thl cells before IL-12-dependent selection // Science -2001. V. 292. - P. 1907-1910.

106. Muranski P., A. Boni, P. A. Antony, et al. Tumor-specific Thl 7-polarized cells eradicate large established melanoma // Blood 2008. - V. 112.-no. 2.-P. 362-373.

107. Naume В., Gately M., Espevik T.A. A comparative study of IL-12, IL-2 and IL-7-induced effect on immunomagnetically purified CD-56+ NIC cells // J Immunol 1992. - V. 148. - P.2429-2436.

108. Naylor S.L., Sakaguchi A.Y., Law M.L., Goeddel D.V. and Gray P.W. Human immune interferon gene is located on chromosome 12 // J. Exp. Med. 1983. - V.157. - P.1020-1027.

109. Nemunaitis J., Fong Т., Shabe P., Martineau D., Ando

110. D.Comparison of serum interleukin-10 (IL-10) levels between normal volunteers and patients with advanced melanoma // Cancer Invest 2001. - V.19(3).-P.239-47.

111. Nestle F.O., Burg G., Dummer R. New perspectives on immuno-biology and immunotherapy of melanoma// Immunol. Today 1999. -V.20.-P. 5-7.

112. Nicola N. A. (Ed.) General Classes and Functions of Four-Helix Bundle Cytokines // Guedbook to Cytokines and Receptors // Oxford University Press. 1994. - P. 244.

113. O'Connel J., Bennett M., O'Sullivan G. et al. The Fas counterattack: cancer as a site of immune privilege // Immunol. Today -1999.-V. 20-P. 46-52.

114. Ohm J., Carbone D. VEGF as a mediator of tumor-associated immunodeficiency // Immunol. Res. 2001. - V. 23. - P. 263-272.

115. O'Neill D., Adams S., Bhardwaj N. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer // Blood. 2004. -104(8).-P. 2235-46.

116. Osanto S., Vaccine Trials for the Clinician: Prospects for Tumor Antigens // The Oncologist. 1997. - V.2. - P. 284-99.

117. Ostrand- Rozenberg S., Pulasko B.A., Clements V.K et. al. Cellbased vaccines for the stimulation of immunity to metastatic cancer // Immunol. Reviews 1999. - V. 178. - P. 101-114.

118. Parmiani G., Castelli C., Dalerba P., Mortarini R., Rivoltini L., Marincola F.M., Andrea A.// J. of the National Cancer Institute 2002. -Vol. 94.-№11.-P. 805-818.

119. Paul W. E., Kishimoto Т., Melchers E. et al. Nomenclature for secreted regulatory proteins of the immune system (interleukins). WHO-IUIS Nomenclature Subcommittee on Interleukin Designation // Clin. Exp. Immunol. 1992. - Vol. 88. - P. 367.

120. Pick E., Roberts A. Suppressor and oncogenic roles of transforming growth factor beta and its signaling pathways in tumorigenesis // Adv. Cancer Res. 2001. - V. 83. - P. 1-54.

121. Presky D.H, Yang H., Minetti L. J. et al. A functional IL-12 receptor complex is composed of two beta-type cytokine receptor subunits // Proc Natl Acad Sci USA 1996 - V. 93. - P. 14002-14007.

122. Redondo P., Sanchez-Carpintero I., Bauza A., Idoate M., Solano Т., Mihm M.C. Jr . Immunologic escape and angiogenesis in human malignant melanoma II Am J Dermatol, acad. -2003. V.49 (2). - P.255-63.

123. Restifo N., Sznol M. Cancer vaccines // Cancer: Principles @ Practice of Oncology, 5th ed. / Eds. V. DeVita, S. Helmann, S. Rosenberg. Philadelphia: Lippincott-Raven Publishers - 1997. - Chapter 61. -P.3023-3043.

124. Richards JO, Chang X, Blaser BW, Caligiuri MA, Zheng P, Liu Y. // Tumor growth impedes natural-killer-cell maturation in the bone marrow. // Blood. 2006 - V. 108(1) - P. 246-52.

125. Roberts A., Wakefield L. The two faces of transforming growth factor beta in carcinogenesis // Proc Natl Acad Sci USA. 2003. - V. 100.-P. 8621-8623.

126. Rosenberg S. Cancer: Principles and Practice of Oncology: Ed. V. T. Devita, Hellman, S.A. Rosenberg. //Philadelphia: Lippincott-Raven -1997.-5th ed. P. 349-379.

127. S. Kusmartsev and D. I. Gabrilovich. Role of immature myeloid cells in mechanisms of immune evasion in cancer // Cancer Immunology Immunotherapy 2006. - V. 55. - no. 3. - P. 237-245.

128. Saeki Т., Mhashilkar A., Swanson X. et al. Inhibition of human lung cancer growth following adenovirus-mediated mda-7 gene expression in vivo // Oncogene -2002. V. 21. - P. 4558-4566.

129. Salsedo M., Bercovici N., Taylor R. et al. Vaccination of melanoma patients using dendritic cells loaded with an allogeneic tumor cell lysate // Cancer Immunol. Immunother. 2006. - V.55. - P. 819-29.

130. Sato Т., McCue P., Masuoka K., Salwen S., Lattime E.C., Mastrangelo M.J., Berd D. // Interleukin 10 production by human melanoma. // Clin Cancer Res. 1996. - Aug;2(8). - P. 1383-90.

131. Saunier E., Akhurst R. // TGF beta inhibition for cancer therapy.// Curr Cancer Drug Targets. 2006 - Nov;6(7) - P. 565-78.

132. Schaider H, Rech-Weichselbraun I, Richtig E, Seidl H, Soyer HP, Smolle J, et al. Circulating adhesion molecules as prognostic factors for cutaneous melanoma // J Am Acad Derm 1997. — V.36. - 209-213.

133. Schiltz PM, Dillman RO. Serum cytokines in metastatic melanoma patients treated with an autologous tumor vaccine // Cancer Biother Radiopharm 2003 Dec. - 18(6). - P. 879-86.

134. Schuler G., Schuler- Thurner В., Steinman R. The use of dendritic cells is cancer immunotherapy // Curr. Opin. Immunol. 2003. - 15(2). -P. 138-47.

135. Segal BM, Glass DD, Shevach EM. Cutting edge: IL-10-producing CD4+ T cells mediate tumor rejection // J Immunol 2002. - V.168. P. 14.

136. Utikal J, Schadendorf D, Ugurel S // Serologic and immunohistochemical prognostic biomarkers of cutaneous malignancies // Arch Dermatol Res. 2007 March - V. 298(10) - P. 469-477.

137. Sheu В., Lin R., Lien H. et al. Predominant Th2/Tc2 polarity of tumor-infiltrating lymphocytes in human cervical cancer // J. Immunol. -2001.-V. 167.-P. 2972-2978.

138. Sidman C.L., Marshall J.D., Shults L.D., Gray P.W. and Johnson H. M. IFN-y is one of several direct В cell-maturing lymphokines // Nature -1984.-V.309.-P.801-804.

139. Steinbrink K., Jonuleit H., Muller G., Schuler G., Knop J., Enk A. Interleukin-10-treated human dendritic cells induce a melanoma-antigenspecific anergy in CD8+ T cells resulting in a failure to lyse tumor cells // Blood 1999. - V.93. -P.1634-42.

140. Street S., Trapani J., MacGregor D., Smyth M. Suppression of lymphoma and epithelial malignancies effected by interferon gamma // J. Exp. Med. 2002. - V. 196. - P. 129-134.

141. Sy M.S., Mori H., Liu D. CD44 as a marker in human cancers // Current Opinion in Oncology 1997. - V.9. - P. 108-112.

142. Toi M., Taniguchi Т., Yamamoto Y. et al. Clinical significance of the determination of angiogenic factors // Eur. J. Cancer 1996. - V. 32A.-P. 2513-2519.

143. Trinchieri G. Interleukin-12 and the regulation of innate resistance and adaptive immunity // Nature Rev Immunol 2003. - V, 3. - p. 133148.

144. Kalinski P., Storkus W. J., Thomson A. W., Lotze M.T. Interleukin-12 family (IL-12, -23, 12RA, and -27) // In The Cytokine Handbook, 4 edition, vol. 1, Ed. By A.W. Tompson, M. T. Lotze 2003. - P. 383-408.

145. Trinchieri G., Pflans S., Kastelein R. The IL-12 family of heterodimeric cytokines: new players in the regulation of T-cell response //Immunity-2003. V. 19.-P. 641-644.

146. Tsuchida K., Sunada Y., Noji S. et al. Inhibitors of the TGF-beta superfamily and their clinical applications // Mini Re. Med. Chem. -2006.-V. 6.-P. 1255-1261.

147. Urban J.L., Shepard H.M., Rothstein J.L., Sugarman В J. and Schreiber H. Tumor necrosis factor: a potent effector molecule for tumor cell killing by activated macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. -1986. V.83. -P.5233-5237.

148. V. Bronte, P. Serafini, E. Apolloni, and P. Zanovello. Tumor-induced immune dysfunctions caused by myeloid suppressor cells // Journal of Immunotherapy 2001. - V. 24. - no. 6. - P. 431-446.

149. Wakefield L., Sporn M. Suppression of carcinogenesis: a role for TGF beta and related molecules in prevention of cancer // Immunol. Ser.- 1990. V. 51.-P. 217-243.

150. Wang G., Tschoi R., Spolski M. et al. In vivo antitumor activity of interleukin-21 mediated by natural killer cells // Cancer Res. 2003. - V. 63.-P. 9016-9022.

151. Brady J., Haykawa Y., Smyth M., Nutt S. IL-21 induces the functional maturation of murine NK-cells // J Immunol. 2004. - V. 172.- P. 2048-2058.

152. Wolk K., Kunz S., Asadullah K., Sabat R. Cutting edge: immune cells as sources and targets of the IL-10 family members? // J Immunol. -2002. V. 168. - P. 5397-5402.

153. Yasasever V., Tas F., Duranyildiz D., Camlica H., Kurul S., Dalay N. Serum levels of the soluble adhesion molecules in patients with malignant melanoma // Pathol Oncol Res 2000. - V.6. - P.42-45.

154. Yokota T. et al // Molecular biology of interleukin 4 and interleukin 5 genes and biology of their products that stimulate В cells, T cells and hemopoietic cells. // Immunol Rev. 1988 Feb - V. 102 - P. 137-87.

155. Yoshimura A. Signal transduction of inflammatory cytokines and tumor development I I Cancer Sci. 2006. - V. 97. - P. 439-447.

156. Yu P., Lee Y., Liu W. et al. Priming of naive T-cells inside tumors leads to eradication of established tumors // Nat. Immunol. 2004. - V. 5. -P. 141-149.

157. Zavadil J. et al. Genetic programs of epithelial cell plasticity directed by transforming growth factor-beta // Proc Nattl Acad Sci USA -2001.-V. 98.-P. 6686-6691.

158. Zheng M., Bocangel D., Doneske B. et al. Human interleukin-24 (MDA-7/IL-24) protein kills breast cancer cells via the IL-20 receptor and is antagonized by IL-10 // Cancer Immunol Immunother. 2007. - V. 56. -P. 205-215.

159. Ziv E. et al. Association between the T29 С polymorphism in the transforming growth factor betal gene and breast cancer among elderly white women // JAMA 2001. - V. 285. - P. 2859-2863.

160. Zlotnik A. Chemokines and cancer // Int. J. Cancer 2006. - V. 119.-P. 2026-2029.

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии

Автореферат диссертации по медицине на тему Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии

Оглавление диссертации Парсункова, Кармен Анатольевна :: 2010 :: Москва

Введение диссертации по теме "Онкология", Парсункова, Кармен Анатольевна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Цитокиновый профиль у больных с диссеминированной меланомой в ходе вакцинотерапии"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Парсункова, Кармен Анатольевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций