Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Цитоэнзимохмическое изучение полиморфноядерных лейкоцитов и их роль в механизме естественной резистентности к чуме

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ РОССИИ ПО САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОМУ НАДЗОРУ

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ . НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ 'МИКРОБ'

На правах рукот- л

РУДНЕВ СЕРГЕЙ МАРАТОВИЧ

УДК 579. 842. 23-097:6х^. 018. 5

ЦИТОЭНЗИМОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУ :НИЕ ПОЛИМОРФНОЯДЕРНЫХ ЛЕЙКОЩ ОВ И ИХ РОЛЬ В МЕХАНИЗМЕ ЕСТЕСТВЕ. 'НОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ К ЧУМЕ

(14. 00. 36 - аллергология и иммунология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

/О . S Саратов, 1992

/*г Г у /■i-'-*"V\

у / г о/

Работа выполнена в Научно-исследовательском противочумном институте Кавказа и Закавказья!г.Ставрополь

- Научный руководитель: доктор медицинских наук Локтев H.A. Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,профессор Самойлова Л.В.,какд«дат медицинских наук,ст.н.о.Адамова Г.В.

Ведущая организация: - Росторский Научно-исследовательский противочумный институт

защита состоится " 3" ¿с/-0/?Л- 1992 г. в УЗ час он на заседании специализированного совета К 074.32.01 по присуждению ученой степени кандидата наук при Всесоюзном ордена Трудового Красного Знамени научно-мсследовательском противочумном институте "Микроб" ( 4I007I,г.Саратов,ул.Университетская,46 ).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке института "Микроб".

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного сонета, кандидат медицинских наук

Девдариани З.Л.

irSEi'Sii, ,<fil

■ - 3 -

т:ци4

--'ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Проблема естественной резистентности к чуме издавна привлекала к себе внимание исследователей.Не утратила она своей актуальности и в наши дни ( Исин Ж.M.,I985iДятлов А.И.,1983 ).Это обусловлено наличием на территории нашей страны и за рубежом природных очагов этой инфекции,а также существованием животных одного вида,имеющих различную чувствительность к возбудителю' чумы ( Леви М.И. с соавт.,1963}Дятлов А.И.,1989 ).

В настоящее время считается установленным,что.в защите организма от инфекционного агента значительную роль'играет клеточный иммунитет ( Пальцкн А.А.,19885Маянский А.Н.,Маянский Д.Н.,198Э ), в том числе и при чуме ( Коробкова Г.И.,1960 ).

Рядом авторов отмечена зависимость состояния естественного иммунитета от вирулентности чумного микроба-( Акимович В.В.,Доб-роцветова Т.Я.,I960 ),сезона года ( Апарин Г,П. с соаьт.,1962 ) и целого ряда других факторов.

Исследования механизмов естественного иммунитета при чуме получают дальнейшее развитие в связи с применением новых методов и приемов ( Мареев В.И.,1983$Исин Ж.М.,1985 ).В последние годы появились работы,свидетельствующие об участии полиморфноядерных лейкоцитов ( ПМЯЛ ) в реализации неспецифической защиты.Выявлены значительные изменения метаболизма ПМЯЛ при различных патологических состояниях и заболеваниях С Нагоев Б.С.,197351966;Мэ.зинг Ю.А.»Старосельская И,Я.,1981 ).С помощью цитоэнзимохимических методов исследования достигнуты определенные успехи в установлении функциональной и метаболической зависимости гранул ПМЯЛ в процессе их жизнедеятельности ( Пигаревск'/й В.Е.,19785Маянский А.Н.,Маянский Д.Н., 1989 ).Известно,что активность микробкцкдных систем обеспечивается

содержимым азурофильных.и специфических гранул нейтрофилов,в частности кислой и щелочной фосфатазаыи,миелопероксидазой»неферментны-ми катионными белками,лактофериноы,лизоцимом и другими ( Пигаревс. кий В.Е.,1978 ).Состояние цитохимического спектра ПМЯЛ отражает р< активные изменения в организые(позтому оказывается полезнш для суждения о глубине и динамике патологических процессов.

При инфекционных заболеваниях весьма ценным представляется изучение внутриклеточных изменений высокоспециализированных клето: периферической крови - ПШЛ, основной функцией которых является фа гоцитоз ( Бахов Н.И. с соавт.а1987,1988 ). В этих условиях нейтро филы ввделявт в кровь вещества,обладающие бактерицидными и антитоксическими свойствами С Нагоев Е.С.,1986 ).

Вышеизложенное позволяет заключить,что изучение механизмов естественной защиты при.чуме с применением цитоэнзимохимических методов позволит глубже проникнуть в процессы изменений'энзимати-ческих и неферментных'систем ПШД периферической крови в динамике инфекционного процесса и определить значимость этих изменений з с щем иммунном ответе организма и,прежде всего,в осуществлении фаге цитарной реакции.

Полученные результаты будут способствовать раскрытию механи: мов естественной резистентности на клеточном и ферментативном ур< нях в эксперименте на лабораторных животных и у грызунов - носшм лей чумы в природных очагах этой инфекции.С помощью разработанны тестов ыогно будет прижизненно судить об уровне естественной рез: тентности к чуме определенного вида,подвида,популяции грызунов и даже отдельной особи.

ЦЕЛЬ НАСТОЯЩЕГО ИССЛЕДОВАНИЯ: выявить некоторые ферыентатив ные механизмы естественного иммунитета у животных с различной

- 5 - .

чувствительностью к возбудителю чумы и определить степень участия основных бактерицидных систем ПМЯЛ в защите ыа'кроорганизма на различных этапах течения чумного инфекционного процесса.

ОСНОВНЫЕ ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Провести сравнение показателей содержания биологически активных веществ и ферментов»играющих ключевую роль в бактерицидных системах ПМЯЛ как в норме,так и в различные периоды течения чумного инфекционного процесса у животных с различной чувствительностью к этой инфекции.

2. Определить зависимость, содержания биологически активных веществ и активности ферментов,играющих основную роль в бактерицидных системах ПМЯЛ,от дозы заражения и стадии течения чумного инфекционного процесса,а также характер и тяжесть течения болезни от содержания бактерицидных веществ у интактньк животных.

3. Изучить степень участия биологически активных веществ и ферментов в фагоцитозе чумнглс микробов,особенно в его заключительной стадии и дать оценку фагоцитарному процессу ПМЯЛ крови животных,имеющих различную чувстьлтельность к возбудителю чумы.

4. Выявить особенности гистоморфологических изменений в органах и тканях экспериментальных животных с различной чувствительностью к чуме,зараженных вирулентным штаммом чумного микроба в различные сроки течения инфекционного процесса.

5. Разработать методические подходы к оценке естественной резистентности грызунов с различной чувствительностью к возбудителю чумы с помощью цитоэнзимохимических показателей.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.Впервые проведено исследование ло изучению динамики ряда цитоэнзимохимических показателей в ПМЯЛ периферической крови у животных с' различной чувст- •

вительностью к возбудителю чумы на разных стадиях инфекционного процесса.Выявлена зависимость тяжести течения инфекционного процесса от содержания в ПШЯ периферической крови биологически активных белков и активности ферментов,являющихся ключевыми факторами их бактерицидных систем.Определено участие некоторых белков и ферментов в реализации естественной резистентности к чумной инфекции.Проведено сравнительное исследование патоморфологии инфекционного процессе у животных с различной чувствительностью к чуме на разных этапах развития заболевания.Получены новые данные,подтверждающие незавершенный характер фагоцитоза при чуме и впервые получены результаты,доказывающие наличие бактерицидного действия биологически активных веществ ПМЯЛ периферической крови с помощи экетрацеллюлярного воздействия на чумной микроб.

По результатам проведенных исследований составлены "Методические рекомендации по определению состояния естественного иммунитета к чуме у полуденных песчанок по уровню содержания катион-ьых белков и активности миелоперонсидазн в полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови",утвер?эденяые Ученым советом Научно-исследовательского противочумного института Кавказа и Закавказья 15 июня 1990 г. ( протокол № ) и "Методические рекомендации по определению состояния естественного иммунитета к чуме у горных сусликов ло уровню содержания катионных белков и активности мие-лоперсксидазы в полиморфноядерных лейкоцитах периферической кров утвержденные Ученым советом того же института 29 мая 1991 г.( пр токол КЗ ).

Методические рекомендации реализованы в исследовательской практике Научно-исследовательского противочумного института Кавказа 'и Закавк83ья,Кабардинской ПЧС,Дагестанской ПЧС,Уральской ДО

а также в учебном процессе при чтении лекций по иммунологии чумы •¿а курсах специализации врачей по особо опасным инфекциям в Сред- . неазиатском научно-исследовательском противочумном институте.

При проведении экспериментов оформлено авторское свидетельство № 1302.627 "Способ выявления лизосомных катионных белков в ней-трофильных гранулоцитах крови" и 4 рационализаторских предложения.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.Основные фрагменты диссертации доложены и обсуждены: 4

1. На межлабораторных научных конференциях Научно-исследовательского противочумного института Кавказа и Закавказья ( 1989 -1991 г*)*

2. На заседании Ставропольского краевого отделения Всесоюзного научного общества патологоанатомов ( 1991 г. ).

3. На межреспубликанской научной конференции "Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций" ( Ставрополь,1991 г. ).

Диссертационная работа апробирована на межлабораторной научной конференции Научно-исследовательского противочумного института Кавказа и Закавказья 18 февраля 1992 года.

ПУБЛИКАЦИИ.Материалы диссертации отражены в 10 опубликованных статьях и тезисах.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ЛИССЕРТАЦИИ.Диссертация состоит из оглавления, введения, обзора литературы,изложения материалов и методов исследования,глав собственных исследований,заключения,выводов и списка литературы,включающего 176 работ отечественных авторов и 95 работ зарубежных.Общий объем диссертации 142 страницы.Материалы исследований иллюстрированы 24 таблицами,4 рисунками и 13 микрофотографиями.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Катиокные белки и миелолероксидаза полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови являются одними из основных факторов способствующих реализации естественной защиты макроорганизма от возбудителя чумы.

2. Естественная резистентность к возбудителю чумы у исследуе мых животных обеспечивается высоким исходным содержанием основных бактерицидных факторов полиморфноядерных лейкоцитов - катионными белками и миелопероксидазой.Одним из основных механизмов реализации функции защиты является экстрацеллюлярное воздействие бактеру цкдных веществ лолиморфноядерных лейкоцитов на возбудителя чумь;.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. Материалы и методы исследований

Эксперименты проводились на беспородных белых мышах,полуденных песчанках с левого берега реки Волги (Meriones meridianus meridianus Fall.) и с правого берега реки Волги (Meriones meridianus nagaicrum Hepta. ) и горных сусликах,отловленных на те] ритории Центрально-Кавказского природного очага чумы.Левобережные полуденные песчанки и большинство горных сусликов из популяции "Гижгит" ("Г")считаются относительно устойчивыми к возбудите, чумы,а правобережные песчанки и значительное количество горных сусликов из популяции "Уллукам" ("У") - высокочувствительными к этой инфекции.Всего использовано 1256 животных,из них белых мыше 390,полуденных песчанок - 482 и горных сусликов - 384 особи.

Белых мышей заражали вирулентным штаммом возбудителя чумы №231 подкожно в правую паховую область в дозе 25 ( I ДСЬ ) и 50 ( 2 ДСЬ ) з 0,5 мл физиологического раствора,полуденных песчанок штаммом 7-Аз в дозе Ю^м.к. и горных сусликов - вирулентным штам

мом №231 в дозе Ю^м.к. в том же объеме физиологического раствора.

Для цитоэнзимохимических исследований у интактйых и зараженных животных производили взятие периферической крови из хвоста и делали мазки на предметных стеклах.В ПШЛ определяли катионные белки ( КБ ) пс В.Е.Пигаревскому ( 1978 ) в нашей модификации ( авторское свидетельство №1302627 ),миелопероксидазу ( МПО ) по В.Б.Лецкому С 1973 ),кислую фосфатазу ( КЗ? ) noT.J.Barkai I960 ) и A.Suzuki ( 1965 ),щелочную фосфатазу ( ЩФ ) по L.S.Kaplow(1955) и гликоген С Гл ) по J.F.A.McManus ( 1946 ) .Исследования проводили у белых мышей ка 3-е и 6-е сутки после заражения*у полуденных песчанок - на 4-е,10-е и 20-е сутки,а у горных сусликов - через 3 ч,6 ч,12 ч,а также на I-15-e сутки и на 20-е сутки после заражения. Проводи ли также постановку НСТ-теста по методу Ю.И.Бажора с ссавт.( 1981 ) в нашей модификации у белых мышей на 3-е и 6-е сутки,а у песчанок и горных сусликов - на 4-е,10-е и 20-е сутки после заражения.

В каждом случае в мазке крови подсчитывали 100 ПМЯЛ и в каждой клетке оценивали содержание биологически активных веществ или активность фермента с последующим выведением среднего цитохимического коэффициента.При постановке НСГ-теста подсчитывали процент формазан-положительных клеток.

Бактериологическое исследование проводили путем посева на чашки с агаром Хоттингера и генциановым фиолетовым С рН 7,2 ) методом мазков отпечатков тканей забитых и павших животных с места

•v.

введения,вирулентного штамма чумного микроба,селезенки,печени, легких и крови из сердца.Посевы выдерживались в термостате при температуре 38°С в течение 6 суток.

Антитела к F-I определяли в комплексе реакций РПГА и РНАг

макрометодом у интактных и инфицированных животных.

Для гистологического исследования от всех забитых во срокам и павших животных брали кусочки тканей из места введенияврегио-нарных^контрлатеральных и отдаленных лимфатических узлов»селезен-кирпечени»лепшх,почек с надпочечниками.Натериал фиксировали в. 10 нейтральной формалине.Парафиновые среза окрашивали гематоксилином и эозином.

Полученные результаты обрабатывали методом вариационной ста« тистики е определением средних величин С М ) и их ошибок ( ш ), среднего квадратического отклонения ( ) и достоверных различий с помощью критерия Стьюдента при уровне статистической значимости различий ( Р ) не более 0,05.

2. Результаты исследований

У высокочувствительных к чуме белых мышей проводили изучена динамики в активности ферментов и содержании биологически активм веществ в зависимости от тяжести инфекционного процесса.Использо. вание при экспериментальном заражении разных доз возбудителя чум; позволило вызвать инфекционный процесс разной степени тяжести.Пр заражающей дозе 25 м.к. ( I ДСЬ > выявлено достоверное снижение содержания КБ и активности Ш0 ( Р^ 0*001 ).При заражающей дозе 50 м.к. ( 2 ДС1 ) снижение было еще более значительным.Отмечено существенное увеличение показателей НСТ-теста к 3-м суткам после заражения при разлиных антигенных нагрузках^причем при большей заражающей дозе увеличение процента форыазан-положительных клетс более значительноевчем при меньшей дозе заражения.К 6-м суткам показатели НСГ-теста закономерно снижались.Активность КФ и соде} жание Гл при различных дозах заражения и во все сроки исследований не изменялись.

При гистологическом исследовании отмечена типичная картина острого чумного инфекционного процесса»яодгвержденного бактериологическими методами.

Пря заражении полуденных песчанок вирулентнш штаимом возбудителя чуны 7-Аз в дозе Ю^м.к. установлено»что резистентные левобережные животные почти все выживапт ( падеж - 2% ),а чувствительные - все погибапт ( падеж - 100£ ) на фоне развития чумного инфекционного процесса.

При цитохимическом исследовании 'интактных животных выявлено, Ч*о у левобережных резистентных' полуденных песчанок в ПМШ1 периферической крови содержание КБ и активность НПО достоверно выше0 чей у чувствительных правобережных песчанок ( Р-^ 0,001 ), а активность и содержание Гл существенно не различалось.

Таблица I

Содержание КБ в ПШЛ периферической крови полуденных песчанок,

зараженных вирулентным штаммом возбудителя чумы

Живот- ! } Количество "'контрольная группа ! ' Содержание КБ у зараженных животных •

ныв ! 1 4 сут | 10 сут | 1 20 сут

Девобер. песч. 20 1,57±0„02 1„06±0в02 1,13-0,02 1344±0902

Правобер, песч. ' 50 1,17±0»02 0в6б±0,04 -

После заражения содержание КБ у песчанок из обеих групп снижалось ( табл.1 )»причем наибольшее снижение отмечалось у право-

бережных животных,после чего наступала их гибель ( средняя продолжительность их жизни после заражения - 4,48 суток ).У левобе-' режных песчанок в более поздние сроки после заражения содержание КБ повышалось#хотя и не достигало контрольных величин.

Таблица 2

Активность ШО в ПМШ1 периферической крови полуденных песчанок» зараженных вирулентным штаммом возбудителя чумы

Живот- I Коли- 'контрольная ' Активность ШО у зараженных живота

ные 1 чест- 1 группа 1--------------------

I во 1 } 4 сут 10 сут | 20 сут

Левобер. , .

песч. 50 2,0в±0,01 0о23±0,02 1,61±0,02 1,63±0#02

Правобер.

песч. 50 №±0,01 0,09±0,02

Активность ШО у зараженных песчанок снижалось еще более значительно ( табл.2 ) на 4-е сутки,с последующим повышением на 10-е и 20-е сутки у левобережных животных.

Активность Ш и ЩВ у зараженных животных изменялась незначительно. Отмечена тенденция к повыпению содержания Гл у левобережных песчанок в поздние сроки после заражения.

При постановке НСГ-теста выявлено,что процент форыазан-по-ложительных клеток у резистентных левобережных полуденных песчанок на 4-е сутки после заражения был достоверно вьше»чем у правобережных ( Р< 0,001 ).

Проведенное патоморфологическое исследование подтвердило различный характер течения чумного инфекционного процесса у левобе-

рекных И' правобережных полуденных песчанок.Морфологические изменения у правобережных животных,по сравнению с левобережньми,были бо- , лее выраженными.У них отмечены значительные очаговые явления в квоте введения вирулентного штамма чумного мигроба.В органах и тканях выявлялись воспалительные очагн серозно-геморрагического и гнойно-геморрагического характера,со скоплениями чумных микробов и некрозами прилежащих клеточных элементов.У левобережных песчанок в регионарных лимфатических узлах отмечались явления гиперплазии клеточных элементов.В поздние сроки исследований в единичных случаях обнаруживались абсцессы,а также участки грануляционной и зрелой соединительной ткани.В селезенке отмечались ярко выраженные явления гиперплазии лимфоидных клеточных .элементов.Изменения в легких характеризовались утолщением межальвеолярных перегородок за счет скоплений лимфоидных элементов.В печени отмечались явления дистрофик.

Таким образом,результаты проведенных исследований свидетельствуют о достоверных различиях в содержании КБ и НПО в ШЯЛ иссле-

' А

дуемых лесчанокЛевобережные полуденные песчанкн#характеризующиесл высоким содержанием КБ и активностью ЫПО,легко переносят эксперимен тальное заражение вирулентны* штаммом возбудителя чумы 7-Аз,что подтверждается данными гистологического и микробиологического исследований.

Дальнейшие исследования механизмов естественной защиты при чуме проводились на горных сусликах из Центрально-Кавказского природного очага чумы.Из литературы известно ( Дятлов А.И.,1989 ), что в популяции Тижгит" имеется значительное количество особей, обладающих значительной естественной резистентностью к возбудителю чуыы.Падеж у них составил 17% от общего количества заразенных

животных С.:Дятлов, А. И., 1989 ).В популяции "Уллукам" большинство сусликов»обладающих значительной чувствительностью к возбудителе чумы.При экспериментальной заражении 83% животных погибало от чумы. В наших исследованиях падеж горных сусликов из этих же популяций был близок к литературным данным^

Выявлено,что содержание КБ и активность ЫПО у интактных горных сусликов из популяции "Г" достоверно больше,чем у животных из

у

популяции "У",а также показатели НСТ-теста ( табл.3 ).

Таблица 3

Цитоэнзимохимические показатели в ПШЛ периферической крови горных еусликов из популяций "Гижгит" и "Уллукам"

Популяции!Коли-! -Биологически активные вещества в ПШЛ!

сусликов 1чест-1--------^онтеольная_гШпа_]-------, ^^

I во { КБ ! МПО ! КФ ! Гл I

"Уллукам" 15 1,Г7±0,06 2,17±0,05 1,14±0,02 2,03±0в01 9,60+0,68 "Гижгит" 15 1,34-0,06 2,30±0,04 1,12±0а02 2,02±0,01 Нв6±0,62

Р< 0,05 0,05 Р< 0В05

Активность Ш и содержание Гл у горных сусликов из обеих по пуляций не различались.

После заражения животных вирулентным штаммом возбудителя чу мы при определении КБ в ПМШ1 периферической крови отмечены определенные тенденции,характерные для обеих популяций.Выявлено снижение содержания КБ у животных из популяции "Г" с 3-х суток до минимальных значений к 10-м суткам,после чего происходило его повышение до конца исследований ( 20 сутки ),так и не достигшее конт-

рольных величин.У горных сусликов из популяции "У" также отмечено снижение КБ с 3--х суток. Самое низкое содержание КБ пришлось на 9-е сутки,после чего отмечено повышение содержания КБ до конца иссле-дований.На 20-е сутки после заражения содержание КБ у горных сусликов из обеих популяций достоверно не различалось.

Активность ШО у животных из обеих популяций также характеризовалась снижением»причем минимальная активность фермента у животных из популяции "У" пришлась на 8-9 сутки,а в популяции "Г" - на 5-6 сутки.В более поздние сроки исследований отмечено постепенное повышение активности фермента.К концу наблюдений ( 20 сутки ) активность ШО достоверно не различалась у сусликов из обеих популяций в но значительно превосходила контрольные величины.

Показатели активности К<£ и содержание Гл у горных сусликов из обеих популяций изменялись незначительно и достоверно не различались к концу наблюдений.

¡г

Отсутствие достоверных различий в содержании КБ и активности ШО у горных сусликов из обеих популяций к концу наблюдений объясняется тем,что в результате заражения погибли все чувствительные животные и остались лишь резистентные.Это подтверждается результатами постановки НСТ-теста.К концу наблюдений количество форыазан-положительных клеток у животных из обеих популяций достоверно не различалось. >

Из горных сусликов популяций "Г" и "У" были сформированы две группы по признаку чувствительности к возбудителю чуыы.Первую груп пу образовали животные,выжившие после заражения.Они получили название "резистентные".Во вторую группу вошли все паБшие суслики, получившие название "чувствительные".Отмечено,что содержание КБ и активность МП0 у ингактных горных сусликов из "резистентной"

группы значительно выше,чем у животных из "чувствительной" группы ( Р-^ 0,001 ).Различий в активности КФ и содержании Гл не выявлено С табл.4 ).

Таблица 4

Цитоэнзимохимические показатели в ПШЯ периферической крови "резистентных" и "чувствительных" горных сусликов из популяций "Гижгит" и "Уллукам"

Группы !Коли-! Биологически активные вещества в ПШЛ

сусликов !чест-!---------------------------------------------

I в0 , КБ ! ШО ! КФ ! Гл

"Чувстви- 13 о,99±0,01 2,05±0,02 1,14±0,02 2,03±0,01 тельные"

"Резистент- 1? 1,46+0,02 2,38±0,02 1,Ю±0,02 2,03±0,01

ные "

Р^ 0,001 Р^ 0,001 Р^ 0,05

После заражения у животных из обеих групп отмечено снижение содержания КБ и активности ЫПО,причем тенденция к снижению у чувствительных животных сохранилась вплоть до их гибели,а у резистентных эти показатели повышались в поздние сроки исследований.Активность КФ и содержание Гл во все сроки исследований изменялись незначительно.

При бактериологическом исследовании от всех павших горных сусликов вьщелена культура возбудителя чумы.У большинства животных, забитых на 20-е сутки после заражения культуру возбудителя чумы ввделить не удалось.Серологическое исследование показало,что у павших от чумы животных,как правило,антитела не выявлялись или

были выделены в низких титрах ( 1:20-1:160 ).У выживших к 20-м суткам животных специфические антитела были обнаружены в реакциях Н1ГА и РНАг в титрах 1:160-1:640 и 1:160-1:1280 соответственно.

При морфологическом исследовании выявлено,что в обеих популяциях встречались суслики,характерной особенностью у которых является преобладание в исследуемых тканях и органах острых альте-ративно-экссудативных проявлений инфекционного процесса,что полностью соответствует морфологической картине у животных из "чувствительной" группы.В то же время,в обеих популяциях встречались животные с преобладанием гиперпластических и продуктивных процессов в лимфоидных и других внутренних органах,которые и составили "резистентную" группу горных сусликов.

В результате проведенных исследований установлено,что в популяциях горных сусликов "Г" и "У",расположенных на территории Центрального Кавказавсуществуют особи,обладающие различной чувствительностью к возбудителю чумы.Инфекционный процесс у резистентных животных,подтвержденный данными бактериологических,серологических и латоморфологических исследований,протекает благоприятно с последующим выздоровлением,а все чувствительные животные в результате заражения погибают на фоне разгара чумного инфекционного процесса.Резистентные животные отличаются от чувствительных по двум признакам:'содержанию КБ и активности МПО в ПШЛ периферической крови,причем,отличия эти статистически высоко достоверны.Аналогичная картина наблюдалась у левобережных и правобережных полуденных песчанок.

Изменение активности МПО и содержания КБ в ПШЛ периферической крови в результате заражения животных вирулентным штаммом возбудителя чумы свидетельствует об активном участии бактерицидных

систем в защите организма.Отсутствие существенных изменений в активности КФ и !ЦФ и содержании Гл свидетельствует о неучастии указанных веществ в заключительной стадии фагоцитоза,что подтверждает мнение целого ряда исследователей о незавершенном характере фагоцитоза при чуме.Механизм защиты,очевидно,осуществляется за счет экстрацеллюляр-ного действия бактерицидных веществ ПШШ ( КБ и МПО ) на возбудителя чумы.

В К В О Д Ы

1. Исследования цитоэнзимохимической активности полиморфноя-дерных лейкоцитов позволяет дифференцировать горных сусликов из популяций "Гижгит" и "Уллукам" из Центрально-Кавказского природного очага на резистентных и чувствительных к возбудителю чумы животных.

2. У резистентных к чуме интактных полуденных песчанок и горных сусликов уровень содержания катионных белков и активность миелопероксидазы достоверно вше,чем у чувствительных животных.В тс же время,различий в активности кислой и щелочной фосфатаз и содержании гликогена не выявлено.

3. Для указанных видов резистентных животных характерно снижение содержания катионных белков и активности миелопероксидазы в полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови в начале чумного инфекционного процесса с последующим повышением в более поздние сроки.

4. У чувствительных к возбудителю чумы белых мышей,полуденных песчанок и горных сусликов отмечено .снижение содержания катионных белков и активности миелопероксидазы в полиморфноядерных лейкоцитах периферической крови на всем протяжении болезни до их гибели.

5. У зараженных чумой резистентных и чувствительных животных

отмечено отсутствие заметных изменений активности кислой и щелочной фосфатаз,а также содержания гликогена,что предполагает преимущественное экотрацеллюлярное воздействие бактерицидных веществ поли-морфноядерных лейкоцитов на возбудителя чумы.

6. Содержание катионных белков и активность миелопероксидазы

в полиморфноядерннх лейкоцитах периферической крови белых мышеЙ»по-луденных песчанок и горных сусликов на всех стадиях болезни чумой являются прогностическими показателями тяжести течения инфекционного процесса и его исхода.

7. Разработанные нами цитохимические показатели оценки состояния естественного иммунитета можно использовать в качестве дополнительных критериев при прогнозировании интенсивности эпизоотического процесса в исследуемых популяциях.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Руднев С.М. Функционально-метаболическая активность системы лолиморфнсядерных лейкоцитоз при развитии инфекпионно-патологлчес-кого лроцессе // Н.-и. противочумный институт Кавказа и Закавказья.-Ставрополь,1986.-36 с.-Библиогр.142 назв.-Рус.-Деп.-в ВИНИТИ 2.04.86 S23I8-B.

2. Руднев С.М.,Сафронояа В.М.,Локтев H.A. Авт\свидетельство №1302627,СССР МКИ G 01 № 1/28 Способ выявления лизосомных катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах крови.Заявка № 3775106/28-14, заявл.27.07.1984$зарегистр.в Гос.реестре изобретений СССР 8.12.1966г

3. Руднев С.М. Длительность сохранения структуры катионных белков и миелопероксидазы п фиксированных мазках ;:рови // Особо опаенче инфекции на Кавказе: Тез.докл.6-й краев.науч.-практич.конф. посвящ.ТО-летич) Великой Октябрьской сои.революции ( дек.,1987 г. ).-Ставрополь,1987.-С.379.

■4.- Руднев С.М. »Сафроновв В.К. Уровень катионных белков в: поли- : морфноядерных лейкоцитах периферической крови белых мышей зараженных чумой,как показатель тяжести инфекционного процесса // Особо опасные инфекции на Кавказе.-Ставрополь,1987.-СЛ01-102,

5. Руднев С.М.,Сафронова В.М.,Локтев H.A. Факторы клеточного иммунитета как отражение течения инфекционного процесса // Актуальные вопросы иммунологии и иммунопатологии в медицине и курортологии : Тез.докл.конф.-Пятигорск,1987.-С.59-60.

6. РУднев С.М.,Сафронова В.Ы.,Локтев К.А.аШнранович М.Г!. Обеззараживание ыазков крови от возбудителя чумы при подготовке к цигоэнзимохимическому исследованию // Тр.рабочего совещ.молодых ученых и специалистов:Злидемиол.,молек.биол.,генетика и иммунол. возбудителя чумы,Саратов,18-21 окт.,1986.-4.2. / Всесоюз.Н.-и. противочумный ин-т "Микроб".-Саратов,1988.-С.99-103.-Библиогр.7 назв.

( Рус.-Дел.в ВИНИТИ 12.04.83, №2777-В88 ).

7. Руднев С.М. Катиокные белки и миелопероксидаза э полиморфно-ядерных лейкоцитах крови как показатель естественного иммунитета

у полуденных песчанок с различной чувствительностью к возбудителю чумы // Н.-и. противочумный ин-т Кавказа и Закавказья.-Ставрополь, ' I989.-8 с.-Библиогр.19 назв.-Рус.-Деп.в ВИНИТИ 8.06.89 (Ю8Г7-В89.

8. Руднев С.М.»Локтев H.A. О механизме чувствительности к возбудителю чумы // Молекулярные механизмы развития инфекционных заболеваний : Тез.докл.Всесоюз.конф.-Звенигород,1990.-С.98-99.

9. Руднев С.М.^Локтев H.A. Конституциональный иммунитет у горных сусликов из Центрально-Кавказского природного очага чумы // Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций ! Тез.докл.науч. конф.-Ставрополь,I99I.-C.I87-I88.

10.'FtyflHSB С.М.»Локтев H.A. О механизмах естественной защиты