Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Иммуномодулирующее действие интерферонов и иммуноглобулинов на гуморальный и клеточный иммунитет у собак при чуме плотоядных

УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИНСТИТУТ

ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

МИХАЙЛОВА МАРИНА ВЛАДИМИРОВНА

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ИНТЕРФЕРОНОВ И ИММУНОГЛОБУЛИНОВ НА ГУМОРАЛЬНЫЙ И КЛЕТОЧНЫЙ ИММУНИТЕТ У СОБАК ПРИ ЧУМЕ ПЛОТОЯДНЫХ

16.00.04. Ветеринарная фармакология с токсикологией

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научные руководители:

доктор ветеринарных наук, профессор А. В. Ермолин

доктор медицинских наук, профессор А. В. Зурочка

Троицк, 1999

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ ..... 3

ВВЕДЕНИЕ ................ 4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............ 10

1.1. Характеристика чумы плотоядных ...... 10

1.2. Состояние иммунной системы организма

при чуме плотоядных.........29

1.3. Фармакокоррекция иммунной системы животных

при чуме плотоядных.........40

1.3.1. Зтиотропные препараты ....... 42

1.3.2. Патогенетические средства......55

1.3.3. Симптоматическая терапия......5?

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ......... 60

2.1. Материал и методы исследования ...... 60

2.1.1. Методы постановки диагноза ..... 61

2.1.2. Иммунологические методы......

2.1.3. Морфо-биохимические методы.....7.0

2.1.4. Метод комбинированной Фармакокоррекции иммунной системы при чуме плотоядных . . 72

2.1.5. Статистическая обработка материала ... 73

2. 2. Изучение клинико-физиологических показателей

у собак с различными Формами чумы плотоядных . 75

2. 3. Оценка иммунного статуса у собак при чуме

плотоядных............102

2.4. Влияние фармакологических препаратов

Смиксоферона, кинорона и иммуноглобулинов)

на активность иммунокомпетентных клеток

животных при чуме плотоядных......116

2.5. Эффективность применения комбинации Фармакологических средств у собак, больных

чумой плотоядных..........131

ЗАКЛЮЧЕНИЕ...............138

ВЫВОДЫ................14?

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ....................149

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ................150

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИНЯТЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

АлАТ - аланин-аминотрансфераза

АсАТ - аспартат-аминотрансфераза

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГЭБ - гематоэнцефалический барьер

ИЛ - интерлейкин

ИМ - иммуномодулятор

ИФ - интерферон

ИОЛЛ - индекс общей люминесценции лизосом

ИФА - иммуноферментный анализ

НСТ - нитросиний тетразолий

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РГА - реакция гемагглютинации

РДП - реакция диффузной преципитации

РИФ - реакция иммунофлуоресценции

РН - реакция нейтрализации

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

РТГА - реакция торможения гемагглютинации

СМЖ - спинномозговая жидкость

Тс - Т-супрессоры

Тх - Т-хелперы

ФНО - фактор некроза опухоли

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

ЦНС - центральная нервная система

ЦП - цветовой показатель

ЧП - чума плотоядных

ВВЕДЕНИЕ АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Среди заразный болезней животных наиболее опасны и рас) у

пространены инфекции, вызываемые вирусами. Проблема ликвида- I /

I/

ции целого ряда инфекционных заболеваний и снижение уровня распространения некоторых из них по существу стала основной задачей как научно-исследовательских учреждений, так и специалистов, работающих в широкой сети ветеринарных пунктов, лечебниц, лабораторий. Положение это диктуется самой действительностью, так как многие инфекционные болезни пока еще имеют значительное распространение и наносят большой ущерб народному хозяйству С Н. В. Лихачев, 19863.

Известно, что инфекционный процесс, обусловленный патогенными микроорганизмами, состоит из двух составляющих: защитно-иммунологического ответа макроорганизма и инфекцион-но-патологического воздействия микроорганизма в условиях окружающей среды. В ответ на проникновение возбудителя организм восприимчивого животного прежде всего мобилизует все механизмы защиты на уничтожение и освобождение чужеродного агента. Проявляются неспецифические и специфические реакции иммунитета, поддерживающие структурный гомеостаз организма. Специфичность адекватна антигенным детерминантам возбудителя.

Ни одна инфекционная болезнь у млекопитающих не может протекать без защитно-иммунологических реакций. Иммунитет, как важнейшее биологическое свойство позвоночных, призван охранять генетическую стабильность организма на протяжении всей его жизни. Поэтому при инфекционном процессе имеется довольно прочный и интенсивный иммунный ответ макроорганизма на возбудителя болезни. Этим и определяется высокая

чувствительность и специфичность иммунологических реакций С П. И. Притулин, Н. В. Привалова,! 984; Р. В. Петров, 1990).

В большинстве исследований, посвященных изучению роли нейтрофилов, последние рассматриваются как вспомогательные, эФФекторные клетки, воспринимающие и выполняющие "команды" лимфоцитов и макрофагов. Вместе с тем известно, что именно полиморфноядерные лейкоциты и, прежде всего нейтрофилы, являются клетками, первыми реагирующими на введение большинства антигенов, вслед за которыми в иммунные реакции вовлекаются макрофаги и лимфоциты. Эти данные послужили основой для предположения о том, что нейтрофилы могут быть не только исполнителями, но и инициаторами и регуляторами иммунологических реакций организма С И. И. Долгушин и соавт. , 1992).

Проблема развития ветеринарной иммунологии в последнее время привлекает все большее внимание специалистов. Без изучения иммунитета нельзя с достоверностью доказать этиопато-генез болезни, точно провести индикацию возбудителя и обеспечить разработку и внедрение более совершенных методов и средств предупреждения и лечения болезней животных, связанных с применением эффективных биологических ветеринарных препаратов. В то же время литературы, посвященной проблемам состояния иммунной системы у плотоядных при вирусных болезнях, а также и лечения инфекционной патологии у них, очень мало. Все это свидетельствует о том, что активный поиск средств и способов лечения вирусных инфекций является актуальной задачей ветеринарии, решение которой возможно только на основании точных знаний механизмов развития патологических процессов при этих болезнях.

Одной из наиболее опасных вирусных инфекций плотоядных является чума, в изучении которой в последние годы достигну-

ты определенные успехи. В то же время профилактика и лечение чумы плотоядных до сих пор остается сложной проблемой С П. И. Игнатов, 1994; А. Л. Лазовская, 3. Г. Воробьева, 1996) .

До настоящего времени остается практически неисследованным состояние иммунной системы собак при вирусных инфекциях. В основе противовирусного иммунитета важная роль принадлежит клеткам фагоцитарной и лимфоцитарной систем организма. В связи с этим возникает необходимость изучения состояния этих звеньев иммунитета у собак при вирусных болезнях, а также их изменений при терапии данных заболеваний, в частности, чумы плотоядных. Решение этого вопроса позволит разработать правильную, патогенетически обоснованную терапию данного заболевания, направленную на снижение падежа животных (особенно элитных пород) в собаководстве. Вот почему изучение состояния фагоцитарного и лимфоцитарного звеньев иммунитета у собак при чуме плотоядных и его коррекция интерферонами и иммуноглобулинами представляется актуальной и своевременной задачей.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Целью работы является изучение влияния иммунотерапии вирусных инфекций плотоядных с использованием интерферонов и иммуноглобулинов на состояние иммунной системы животных.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе ставились следующие задачи:

1. Изучить функциональную активность Фагоцитарного и лимфоцитарного звеньев иммунитета у здоровых собак.

2. Определить характер изменения иммунного статуса животных при чуме плотоядных.

3. Исследовать иммунотропные эффекты интерферонов Смик-

соферона и кинорона) и полиглобулина у собак с чумой плотоядных.

4. Оценить клинико-иммунологическую эффективность применения комбинированной иммунотерапии в комплексном лечении I

И

чумы плотоядных у собак.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые на основе проведенных исследований разработаны методы диагностики чумы плотоядных с использованием сыворотки крови животных. В работе впервые проведено изучение состояния фагоцитарного и лимфоцитарного звеньев иммунитета | у плотоядных, наличие инфекции у которых подтверждено лабо- У раторно. Впервые установлено влияние комбинированной интер-фероно- и иммуноглобулинотерапии на состояние Фагоцитарных клеток и лимфоцитов у животных с подтвержденной вирусной инфекцией. На основе полученных данных впервые разработана патогенетически обоснованная схема терапии, позволяющая полностью санировать животных от инфекционного агента.

ПРАКТИЧЕСКАЯ И ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

На основании полученных данных о состоянии Фагоцитарного и лимфоцитарного звеньев иммунитета у собак при чуме в эксперименте разработана научно обоснованная противоинфек-ционная терапия данного заболевания. В то же время показано выраженное иммуностимулирующее влияние интерфероно- и иммуноглобулинотерапии на состояние фагоцитов и лимфоцитов у животных при чуме плотоядных. Кроме того, на основании разработок получены данные о возможности использования сыворотки крови в качестве исследуемого материала для иммуноферментно-

го анализа на обнаружение антигена вируса чумы плотоядный, что позволило повысить точность и качественно улучшить контроль за эффективностью проводимой терапии. В крови вирусный антиген может определяться до развития клинической симптоматики и раньше,чем он появляется в выделениях животного. Кроме того, вирус может определяться и в стадии выздоровления при отсутствии клинических проявлений болезни. Поэтому критерием излечиваемости животного может служить только отсутствие вируса чумы плотоядных в крови.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Обнаружение антигена вируса чумы плотоядных в крови больных животных при помощи ИФА способствует не только раннему выявлению заболевания, но и служит критерием излечиваемости собак с этой болезнью.

2. При чуме плотоядных отмечаются выраженные нарушения в иммунной системе животных, проявляющиеся в увеличении количества Т-клеток и субпопуляций Т-лимфоцитов, уровней иммуноглобулинов и ЦИК, усилении фагоцитарной активности нейтро-Филов при одновременном снижении лизосомальной и НСТ-актив-ности этих клеток, уменьшении числа В-лимфоцитов. Все это сопровождается метаболическими сдвигами со стороны активности Ферментов, отражающих нарушение функции печени.

3. Комплексная интерфероновая С миксоферон в количестве 10 доз на 1 кг массы тела и кинорон из расчета 1 доза на 10 кг массы тела 1-2 раза в сутки в течение 10-15 дней) и имму-ноглобулиновая терапия Сполиглобулин в дозе 0,25-0,5 мл на 1 кг массы тела 1-2 раза в сутки в течение 5 дней ) восстанавливает нарушенные звенья иммунной системы и нормализует выявленные метаболические сдвиги.

4. Разработанная система диагностики и терапии чумы плотоядных позволяет снизить летальность животных при различных формах заболевания в среднем до 3,21X.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции молодых ученых и специалистов (Троицк, 26 мая 199? года) и на Межвузовской научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины, животноводства, обществознания и подготовки кадров на Южном Урале" СТроицк, 20 мая 1998года).

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано шесть печатных работ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

С целью оценки роли фармакокоррекции фагоцитарного и лимфоцитарного звеньев иммунитета у собак при чуме плотоядных, изучения состояния фагоцитарных и лимфоцитарных клеток у животных до и после лечения данного заболевания, необходимо не только дать полную характеристику болезни, определить состояние заболеваемости в настоящее время и изложить меры профилактики этого заболевания, но и охарактеризовать состояние иммунной системы у собак при чуме и описать методы иммунотерапии данного заболевания.

1.1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ

Как известно, особую опасность как для собак, так и для других видов животных, представляют заразные болезни СВ. Н. Сю-рин и соавт. ,1991; П. Е. Игнатов, 1995; Ф. Г. Гизатуллина и со-авт. ,1998 и др. X Они вызываются бактериями, вирусами, патогенными грибами С инфекционные болезни), а также простейшими одноклеточными паразитами,паразитическими червями - гельминтами, насекомыми, клещами С инвазионные болезни). Инфекционные болезни наносят значительный материальный и моральный ущерб развитию современного собаководства. Инфекционные болезни характеризуются способностью передаваться другим животным, стадийностью развития, специфической реакцией макроорганизма (образование антител, аллергия) и обычно - выработкой иммунитета после заболевания.

Наибольшее беспокойство у хозяев собак вызывают вирусные инфекции, которые протекают тяжело и зачастую приводят к гибели животных. Некоторые возбудители инфекционных болезней общие для собак и человека. Таким образом, проблема ин-

Формации об инфекционных болезнях собак на современном этапе весьма актуальна С П. Е. Игнатов, 1995; A. D. Osterhaus, 1997 и ДР. ).

Возбудитель инфекционной болезни попадает в организм и размножается, проникает в различные органы и ткани, выделяет ядовитые вещества С токсины), отравляющие организм. Но не всякое внедрение болезнетворных микробов в организм вызывает заболевание. Инфекция хотя и может быть всюду, но для борьбы с ней организм имеет целую систему охраны или самозащиты. Борьба агентов инфекции с организмом -сложный биологический процесс, в котором участвует весь организм, как целостная единая система в единстве с окружающей средой. Решающая роль в возникновении болезни, ее течении и исходе принадлежит организму, что зависит от состояния его защитных сил СР. В. Петров, 1982; Я. Е. Поляков, 1986; П. Е. Игнатов, 1995; Ф. Г. Гизатуллина и соавт. , 1998; R. L. de Swart et. al. , 1996 и др. ).

Одной из наиболее опасных вирусных болезней плотоядных является чума С В. Д. Бойко, В. В. Туркевич, 1990; В. Н. Сю-рин и соавт. , 1991; П. Е. Игнатов, 1995; А. Л. Лазовская, 3. Г. Воробьева, 1996; Ф. Г. Гизатуллина и соавт. , 1998; М. Blixenkrone - Möller, 1993; В. А. Summers, М. J. Appel, 1994; Т. S. Harder, A.D. Osterhaus, 1997 и др.), которая вызывается вирусом из семейства Paramyxoviridae и характеризуется лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек, поражением кожи, органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, центральной нервной системы СВ. Д. Бойко, В. В. Туркевич, 1990; A.B. Васильев, 1996; Т. Б. Щербакова, 1997; М. Blixenkrone - Moller et. al. , 1989; A. Zurbriggen et. al. , 1995; L. Haas et. al. , 1996;

A. Bencsik et. al. ,199?; И. Okita et.al.,1997 и др.).

Чума плотоядный СЧГО - инфекционная болезнь,которая наиболее изучена, но трудноизлечима у животных. Это связано не только с тем, что болезнь вызывается вирусом, на который сложно воздействовать, но также и с поражением центральной нервной системы СЦНС) С П. Е. Игнатов, 1994; A.Bernard et. al. , 1993; A. Zurbriggen et. al. , 1993; P. J. Duignan et. al. , 1997 и др. ).

Инфекционный процесс при чуме может протекать и бессимптомно, скрыто, без функциональных расстройств и патологических изменений. Такие животные бывают скрытыми вирусоно-сителями. Скрытая инфекция при снижении резистентности или при действии различных стрессовых факторов может перейти в явную С К. Н. Груздев, А. В, Селиванов, 1985; В. Д. Бойко, В. В. Тур-кевич, 1990; R. L. de Swart et. al. , 1996).

К чуме восприимчивы собаки всех возрастов, но особенно щенки и животные молодого возрастаСС. И. Снигирев, 1989; П. Е. Игнатов, 1995; М. Blixenkrone-Moller et. al.,1993 и др.). Щенята в возрасте 1-1,5 мес. наиболее устойчивы - заболевает лишь 9,96Z щенков этого возраста, что объясняется наличием у них пассивного иммунитета за счет материнских антител С С.И.Снигирев, 1989; В. И. Уласов и соавт. , 1989; В. Д. Бойко, В. В. Турке-вич, 1990; П.Е.Игнатов, 1995; P.S.Ross et. al. , 1994 и

др.). Максимальный показатель приходится на животных в воз- ']

j

I /

расте 3-7 мес. После щенков названных групп наиболее чувстви- // тельны к вирусу чумы щенки от 7 мес. до 1 года. Заболеваемость собак старшего возраста составила 0,45У. С С. И. Снигирев, 1989; П. Е. Игнатов, 1995 и др.), что объясняется более эффективной системой иммунологической защиты у взрослых животных.

Малоустойчивы к этому заболеванию собаки таких пород, как ротвейлеры, лайки, пудели, колли, эрдельтерьеры, немецкие овчарки и некоторые другие С С. И. Снигирев, 1989; П. Е. Игнатов, 1994, 1995; Ф. Г. Гизатуллина и соавт. , 1998). Причем часть животных (около 20X3 имеет такой генотип, который не способен обеспечить адекватный иммунный ответ именно к вирусу ЧП. Такие животные очень трудно поддаются лечению и обычно в результате болезни погибают СП. Е. Игнатов,1995).

Восприимчивость к ЧП очень высока не только у собак, но и среди лисиц, песцов, енотов, хорьков, норок (В. Д. Бойко, В. В. Туркевич, 1990; В. Н. Сюрин и соавт. , 1991; Ф. Г. Гизатуллина и соавт.,1998 и др.), а также отмечается у львов, тигров, леопардов, шакалов (K.A.Alexander et. al. , 19946; M.J.Appel et. al. , 1994; B.A.Summers et. al., 1994; D.L.Myers et. al.,199? и др.) и даже у морских м�