Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Цитоэнзимохимическая активность нейтрофилов периферической крови при хронических заболеваниях печени

РГБ ОД

6 / ЯНЭ 2000

На правах рукописи

ШОПЕН Ирина Вадимовна

ЦИТОЭНЗИМОХИМИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ / ХРОНИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПЕЧЕНИ

14.00.05 - внутренние болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ставрополь - 1999 г.

-2-

Работа выполнена в Ставропольской государственной медицинской академии.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор А.В.Ягода

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Н.А.Локтев

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор П.С.Филипенко

доктор медицинских наук, профессор В.В.Колесников

Ведущее учреждение: Волгоградская государственная

медицинская академия

Защита диссертации состоится "_"_2000г. в "_"

часов на заседании диссертационного совета К-084.61.01 в Ставропольской государственной медицинской академии по адресу (355017, г.Ставрополь, ул.Мира, 310).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан "_"_1999 года

Ученый секретарь диссертационного совета К-084.61.01

кандидат медицинских наук, доцент В.Д.Перхурова

Л^ГД SY - з. о

Список сокращений

Гл - гликоген

ГЦН - гепатоцеллюлярная недостаточность

КБ - катионные белки

КФ - кислая фосфатаза

МВС - мезенхимально-воспалительный синдром

МГТО - миелопероксидаза

НЛ - нейтрофильные лейкоциты

ХАГ - хронический активный гепатит

ХГ - хронический гепатит

ХПГ - хронический персистирующий гепатит

ЦП - цирроз печени

ЩФ - щелочная фосфатаза

Актуальность исследования. Хронические диффузные заболевания печени занимают важное место в структуре патологии органов пищеварения. Они, как правило, характеризуются прогрессирующим течением, развитием осложнений, нарушением трудоспособности и ухудшением качества жизни больных.

Вопросы патогенеза, диагностики и лечения хронических гепатитов и циррозов'печени явились предметом значительного количества клинических и экспериментальных исследований (Ивашкин В.Т., 1997; Czaja A.J., 1996; Zucker К., 1996; Kakumu S., 1997; Madejon А., 1997). Одним из приоритетных научных направлений последних лет является изучение клеточных аспектов метаболизма печени и определение на этой основе механизмов формирования важнейших синдромов печеночной патологии. Открытие новых гепатотропных вирусов поставило ряд проблем, в частности, в отношении их влияния на иммунную систему как одного из возможных путей клеточного повреждения (Подымова С.Д., 1993).

В то же время многие вопросы хронических заболеваний печени изучены совершенно недостаточно. Это в первую очередь относится к системе клеточного иммунитета и ее важнейшего компонента - ней-трофильных лейкоцитов, обеспечивающих базальный уровень структурного гомеостаза (Маянский А.Н. и Пикуза О.И., 1993).

НЛ обеспечивают иммунитет за счет реакций деструктивной, трофической, регуляторной направленности и входят в систему гумо-рально-клеточных взаимодействий, нацеленных на стабилизацию внутренней среды организма.

Реакции нейтрофилов патогенетически связаны с острым воспалением, однако нарушение фагоцитарной активности может служить основой для формирования хронического заболевания печени. Депрессия нейтрофильного звена у больных ХГ и ЦП нередко ассоциируется с высокой частотой сопутствующих бактериальных инфекций и тяжелым течением основного печеночного процесса.

Оценка функционально-метаболической активности HJI способна дать объективную характеристику естественной резистентности организма, в ряде случаев оценить тяжесть течения и глубину патологического процесса в печени, а при определенных условиях служить контролем проводимой терапии при ХГ и ЦП.

Таким образом, определение биологически активных веществ и ферментативной активности HJ1 периферической крови больных хроническими диффузными заболеваниями печени представляется доста-

точно актуальным и обосновывает целесообразность изучения этого вопроса в клинике.

Цель работы. Определение диагностической и прогностической информативности некоторых ферментов и биологически активных веществ нейтрофильных лейкоцитов периферической крови больных хроническим гепатитом и циррозом печени.

Задачи исследования:

1.Изучение активности миелопероксидазы, кислой и щелочной фосфатазы, а также содержания неферментных катионных белков и гликогена в НЛ периферической крови здоровых и больных хроническим гепатитом и циррозом печени.

2.Установление взаимосвязи метаболической активности нейтро-филов с этиологией заболевания, тяжестью течения, фазой развития В-вирусной инфекции, а также основными клинико-лабораторными синдромами печеночной патологии.

3.Анализ корреляционной зависимости между ферментами и биологически активными веществами нейтрофильных лейкоцитов.

4.0ценка динамики КБ, Гл, МПО, КФ и ЩФ в нейтрофилах больных при различных видах лечения и разной его эффективности.

5.Определение диагностической и прогностической информативности показателей ферментов и биологически активных веществ НЛ при заболеваниях печени.

Научная новизна работы. Впервые предпринято комплексное изучение ферментов и биологически активных веществ, характеризующих метаболическую активность НЛ, при различных формах хронических заболеваний печени и дана клиническая оценка полученных результатов. Установлено повышение активности миелопероксидазы, кислой и щелочной фосфатаз, снижение количества катионных белков и гликогена в нейтрофилах более выраженное у больных ХАГ и ЦП. Впервые установлена зависимость функционально-метаболической активности НЛ от этиологии заболевания печени и фазы развития В-вирусной инфекции. У больных ХГВ определены минимальные среди всех этиологических групп ХГ показатели КБ и Гл и максимальные уровни КФ и ЩФ, а у пациентов с вирусным ЦП - относительно сниженные значения Гл, максимальная активность ЩФ и более высокое, чем при алкогольном циррозе, содержание КБ в нейтрофилах. Продемонстрированы увеличение активности МПО, КФ, ЩФ и снижение уровня КБ в репликативной фазе НВУ по сравнению с интегративной. При нарастании тяжести клинико-биохимических синдромов ХГ и ЦП (мезенхимально-воспалительного,

цитолитического, ГЦН и др.), возникновении холестаза впервые охарактеризована универсальная реакция метаболизма нейтрофилов, свидетельствующая о дезинтеграции различных звеньев фагоцитоза. Получены оригинальные данные об особенностях динамики цитохимических показателей НЛ периферической крови в процессе различных видов терапии и при разной ее эффективности. Показана. способность интерферонов к формированию физиологических концентраций некоторых компонентов метаболического цикла нейтрофилов и нормализации взаимосвязей между ними у больных ХГ.

Практическая значимость. Установлена взаимосвязь функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови с этиологией хронического гепатита и цирроза печени, стадией НВУ, основными клинико-лабораторными проявлениями патологии. На основе данных цитохимического спектра НЛ предложены дополнительные критерии дельта инфекции и стадии вируса гепатита В, которые могут быть использованы при наличии проблем в определении соответствующих маркеров или сомнительных результатах тестов. Разработан метод оценки тяжести клинико^биохимических синдромов патологии печени (мезенхимально-воспалителыюго,. гепато-целлюлярной недостаточности и др.), в том числе охарактеризованы цитохимические показатели нейтрофилов свойственные тяжелой форме ЦП (класс С по СЫ1с1-Р1^Ь). Установлена зависимость между видом проводимого лечения больных ХГ и ЦП, эффективностью лечебных мероприятий (характером динамики клинико-биохимических показателей) и исходным уровнем КБ, Гл, МПО, КФ и ЩФ в нейгро-фильных лейкоцитах. Предложен способ прогнозирования исходов лечения, основанный на измерении активности МПО НЛ до его проведения.

Внедрение результатов работы. Результаты исследования внедрены в практику работы гастроэнтерологического отделения и иммунологической лаборатории краевой клинической больницы г.Ставрополя. Полученные данные используются в лекциях и на практических занятиях по гастроэнтерологии со студентами лечебного факультета и слушателями факультета последипломного образования Ставропольской государственной медицинской академии.

Положения диссертации, выносимые на защиту.

- сдвиг показателей метаболической активности НЛ у больных ХГ и ЦП в виде снижения уровней КБ и Гл, повышения активности

МПО, КФ, ЩФ; максимальные значения МПО и ЩФ и минимальные - КБ у пациентов с ХАГ;

- сравнительное снижение уровня КБ и увеличение активности МПО, КФ и ЩФ в нейтрофилах больных ХГВ в репликативной стадии по отношению к интегративной;

- максимально высокие среди всех групп вирусного ХГ показатели КФ и ЩФ и минимальные значения КБ и Гл в НЛ больных ХГВ; минимум содержания КБ при алкогольном и максимум активности ЩФ - при вирусном циррозе печени;

- универсальная реакция метаболизма нейтрофилов в виде снижения уровней КБ и Гл и увеличения активности МПО, КФ и ЩФ при нарастании тяжести клинико-биохимических синдромов патологии печени;

- особенности динамики показателей метаболической активности НЛ и взаимосвязей между ними в зависимости от вида и эффективности лечения больных; использование цитохимического анализа нейтрофилов для целей прогнозирования результатов лечения ХГ и ЦП.

Публикации и апробация работы. Материалы диссертационного исследования изложены в 6 печатных работах, доложены на II, III, V итоговых научно-практических конференциях студентов и молодых ученых СГМА (Ставрополь, 1994, 1995, 1997), 1-й Российской гастроэнтерологической неделе (Санкт-Петербург, 1995), 1-й Национальной конференции Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (Москва, 1997), на объединенном заседании кафедр внутренних болезней №1, внутренних болезней ФПО и кафедры патологической анатомии с курсом судебной медицины Ставропольской государственной медицинской академии.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит 167 страниц машинописного текста, 47 таблиц, 2 рисунка, 6 клинических наблюдений, состоит из введения, 4 глав, обсуждения, выводов, библиографического указателя, включающего 309 источников, в том числе 161 на русском и 148 на иностранных языках. Диссертация выполнена в соответствии с планом НИР Ставропольской государственной медицинской академии. Номер государственной регистрации - 01.96.0013211.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Обследован 101 больной хроническим гепатитом и циррозом печени (67 мужчин, 34 женщины) в

возрасте 16-67 лет, лечившихся в клинике кафедры внутренних болезней №1 Ставропольской государственной медицинской академии на базе гастроэнтерологического отделения краевой больницы.

На основании проведенного клинико-лабораторного, инструментального и патогистологического обследования у 29 больных был диагностирован ХПГ, у 20 - ХАГ и у 52 - цирроз печени. В нозологических группах ХПГ и ЦП отмечалось преобладание мужчин. Вирусная этиология заболевания печени установлена у 70 больных (69.3%). алкогольная - у 10 (9.9%), смешанная (вирус+алкоголь) - у 8 (7.9%). У 13 больных (12.9%) причина патологии не была определена. В соответствии с итоговыми рекомендациями разработанными международной рабочей группой (Лос-Анджелес, 1994), в 16 случаях был установлен диагноз ХГВ, в 11 - ХГС, в 6 - XrD. У 7 пациентов с ХГ определялось поражение печени двумя вирусами (В и С), у 8 причина ХГ осталась неуточненной. Интегративная стадия HBV определена у 9 больных ХГВ, репликативная - у 7. Для установления этиологической принадлежности ХГ и ЦП изучали маркеры вирусов гепатита В, С и D: HBsAg, HBeAg, aHBs, аНВе, аНВс классов JgM и JgG, aHDV, aHCV. У части больных в крови определяли ДИК-HBV и PHK-HCV с использованием метода полимеразной цепной реакции (наборы НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи). Морфологическая верификация диагноза проведена у 13 больных.

Контрольную группу составили 20 практически здоровых людей в возрасте от 23 до 75 лет.

Клиническое и специальное обследование больных осуществляли в первые дни пребывания в стационаре и через 4-6 недель лечения - в период формирующейся клинико-биохимической ремиссии ХГ и ЦП.

Всем пациентам до и после лечения проводили цитохимическое исследование нейтрофильных лейкоцитов в мазках периферической крови (определение содержания катионных белков, гликогена, активности МПО, КФ и ЩФ). Содержание КБ определяли по методу В.Е.Пигаревского в модификации С.М.Руднева. Количество Гл в НЛ изучали по J.MacManus. Активность МПО устанавливали методом В.Б.Лецкого, КФ - методом, предложенным T.Barka и A.Suzuki, ЩФ — азосочетанием по L.Kaplow. При проведении цитоэнзимохимиче-ских исследований применяли полуколичественную оценку результатов, используя принцип L.Kaplow в модификации G.Astaldi и L.Verga, основанный на выявлении специфической окраски различной степени интенсивности в цитоплазме НЛ. Определяли средний цитохимиче-

' '••-.■• -9-

ский коэффициент путем подсчета 100 нейтрофилов. Изучение мазков проводили на микроскопе "Биолам Р-11" (объектив х90, окуляр хЮ) с использованием оранжевого (КБ) или синего фильтров.

Статистическую обработку результатов проводили с определением I критерия Стьюдента и расчетом коэффициента парной корреляции.

Результаты исследования. Данные изучения цитохимических показателей НЛ у здоровых людей и больных ХГ и ЦП представлены в таблице 1.

Таблица 1

Цитохимические показатели нейтрофильных лейкоцитов у

здоровых и больных (М±т)

Изучаемые показатели

Группы КБ Гл МПО КФ ЩФ

ооследо-

ванных

Здоровые 1.90±0.07 2.86±0.02 1.69±0.09 0.61±0.08 0.92±0.01

Больные:

ХПГ 1,07±0.02* 2.75±0.01* 1.69±0.07 0.76±0.03* 1.14±0.05*

ХАГ 0.94±0.04*(,,) 2.55±0.03*(") 2.07±0.05,("' 1.55±0.08*(,,) ,28±0.0б'(">

ЦП 1.48±0.07*<") 2.45±0.02*'") 1.94±0.03'Г) 1.49±0.03*Г) 1.56±0.04,(**>

- Р < 0.05 в сравнении со здоровыми; ~Р<0.05 в сравнении с больным ХПГ.

Установлено, что у больных ХПГ, ХАГ и ЦП содержание КБ и Гл в НЛ было достоверно снижено, активность КФ и ЩФ увеличена. Активность МПО была нормальна при ХПГ и повышена в случаях ХАГ и ЦП. У больных ХАГ и ЦП, по сравнению с ХПГ, установлено увеличение активности МПО, КФ и ЩФ и уменьшение Гл. Содержание КБ у больных ХАГ было ниже, а у пациентов с ЦП - выше, чем при ХПГ! У пациентов с ХАГ наблюдались наиболее высокая из всех нозологических групп активность МПО и ЩФ и низкое содержание КБ в НЛ. У больных ХПГ выявлена прямая корреляционная зависимость между МПО и КФ нейтрофилов, тогда как в контроле ни одной достоверной взаимосвязи между цитохимическими показателями нейтрофилов не определялось.

С увеличением возраста больных установлена тенденция к более низким значениям КБ, МПО и ЩФ и более высоким - Гл и КФ в отдельных группах ХГ и ЦП, свидетельствующая об определенной воз-

растной зависимости показателей метаболизма НЛ. Последние практически не зависели от пола больных. Корреляционный анализ показателей с учетом пола и возраста не выявил каких-либо принципиальных различий.

У больных ХАГ и ЦП с непродолжительным анамнезом болезни активность МПО в НЛ была практически нормальной. С увеличением длительности заболевания печени отмечалось повышение содержания КБ и активности МПО и КФ в нейтрофилах. У больных с продолжительностью ХАГ более 5 лет установлено сравнительное снижение Гл и активизация ЩФ. Показатели Гл и ЩФ в клетках больных ХПГ и ЦП не зависели от длительности заболевания. При увеличении срока болезни тенденция изменения КБ характеризовалась приближением к данным контроля, тогда как вектор динамики КФ, а также Гл и ЩФ (у больных ХАГ) был направлен в сторону увеличения патологических отклонений этих показателей обмена нейтрофильных лейкоцитов. С увеличением продолжительности ХАГ и ЦП изменялся характер взаимосвязей между отдельными цитохимическими константами ней-трофилов - МПО и КФ, КФ и Гл, ЩФ и Гл.

Во всех этиологических группах ХГ установлено значительное снижение уровней КБ и Гл и повышение активности КФ и ЩФ НЛ. Активность ,МПО была достоверно увеличена у пациентов с ХГВ, ХГО, ХГС и не отличалась от контроля в случаях ХГВ+С и ХГ неуточненной этиологии. При хроническом вирусном гепатите В определены максимально высокие показатели КФ и ЩФ и одни из наиболее низких значений КБ и Гл ней-трофилов среди анализируемых групп больных ХГ. Пациентов с неуточненной этиологией ХГ характеризовали низкие уровни КБ, близкие к значениям нормы показатели Гл, КФ, ЩФ и нормальная активность МПО нейтрофилоп.' '->; ;

Различия показателя КБ в НЛ больных ХГВ и у лиц, дополнительно инфицированных неполным (дефектным) вирусом (ХГО), предложено использовать для целей диагностики дельта инфекции при наличии технических проблем в определении аНОУ или сомнительных результатах теста. При этом содержание КБ в НЛ ниже 1.18 ед. можно считать характерным для ХГВ, тогда как значения показателя выше 1.37 ед. (в условиях инфицированности НВУ) следует относить к случаям поражения дельта вирусом.

Таблица 2

Цитохимические показатели НЛ больных ХГВ в _разные фазы НВУ (М±т)_

Изучаемые показатели

Фаза НВУ КБ Гл МПО КФ ЩФ

Репликации 1.04±0.08* 2.44±0.05* 2.24±0.05* 1.52±0.02* 1.70±0.06*

<0.001 >0.05 <0.001 <0.001 <0.001

Интеграции 1.44±0.06* 2.56±0.03* 1.82±0.04 1.32±0.03* 1.46±0.05*

*- Р < 0.05 в сравнении со здоровыми.

В фазе репликации НВУ активность МПО НЛ характеризовалась как повышенная, а в интегративной - нормальная. В фазе репликации вируса по сравнению со стадией интеграции НВУ в геном клетки определялись более высокая активность МПО, ЩФ и КФ и более низкий уровень КБ в нейтрофштьных лейкоцитах (таблица 2).

Выявленные цитохимические особенности НЛ могут быть применены в клинике в качестве дополнительных критериев фазы вируса (HBeAg-нeгaтивныe "мутанты", низкий уровень репликации НВУ, технические проблемы выявления ДНК вируса и др.). Для этой цели целесообразно использование показателей КБ и МПО: значения КБ ниже 1.20 ед. в сочетании с повышенной активностью МПО свойственны репликативной стадии НВУ, а уровни КБ, превышающие 1.32 ед., в комбинации с нормальными значениями МПО НЛ - фазе интеграции вируса гепатита В. В фазе репликации НВУ определялась обратная взаимосвязь между КБ и ЩФ, а в фазе интеграции - прямая корреляционная зависимость показателей КФ и МПО.

Во всех этиологических группах ЦП уровень КБ и Гл был низким, тогда как активность КФ и ЩФ характеризовалась как повышенная. Основные отличия вирусного ЦП от алкогольного, с одной стороны, и от смешанного, с другой (помимо относительно сниженного уровня Гл), заключались в сравнительном с алкогольным циррозом увеличении КБ и сравнительном со смешанной формой заболевания уменьшении активности КФ. Наиболее низкие показатели КБ в НЛ определены у больных алкогольным, а максимально увеличенная активность ЩФ - у пациентов с вирусным (В или С) циррозом. У больных ЦП В-вирусной этиологии установлена повышенная, а при С-вирусном цир-

розе - нормальная активность МПО в НЛ. При ЦПВ активность МПО, КФ и ЩФ нейтрофилов была выше, чем при ЦПС. У пациентов с ЦПС (в отличие от ЦПВ) определены нарушения корреляционных взаимосвязей между цитохимическими показателями метаболизма НЛ.

Тяжелый мезенхимально-воспалительный синдром у больных ХГ и ЦП сопровождался сравнительным снижением содержания в нейтро-фильных лейкоцитах КБ и Гл и увеличением ферментативной активности МПО, кислой и щелочной фосфатаз. При умеренном МВС активность МПО и КФ у больных была практически нормальной (таблица 3).

Таблица 3

Цитохимические показатели НЛ больных с учетом тяжести МВС (М±ш)

Изучаемые показатели

Группы МВС КБ Гл МПО КФ ЩФ

больных

ХГ

ЦП

умеренный 1.61±0.07 2.75±0.02 1.74±0.08

выраженный 1.13±0.03* 2.45±0.06* 2.47±0.12*

умеренный 1.40±0.07 2.62±0.05 1.73±0.06

выраженный 122^0.05' 2.31 ±0.06' 2.77±0.04'

0.67±0.06 1.26±0.07 1.55±0.09* 2.11±0.16*

1.39±0.05 1.58±0.06 1.72±0.05* 2.3710.08*

- Р < 0.05 в сравнении с умеренным МВС.

При легком течении цитолиза у больных ХГ отмечалось снижение уровней КБ и Гл в НЛ крови, повышение активности МПО и нормальные значения КФ и ЩФ. При среднетяжелом и, особенно, тяжелом цитолизе определялось достоверное снижение КБ и Гл и значительное повышение активности МПО, КФ и ЩФ. У больных ХГ с тяжелым цитолитическим синдромом содержание КБ и Гл в клетках было ниже, а активность МПО, КФ и ЩФ выше, чем в случаях легкого течения цитолиза. Аналогичная тенденция установлена у больных циррозом печени с различной тяжестью цитолиза, однако изменения КБ и Гл были менее очевидны, тогда как динамика ферментов НЛ в сторону их возрастания по мере увеличения цитолиза была более отчетливой, чем в случаях ХГ. Анализ коэффициентов корреляции определил максимальное количество взаимосвязей между показателями метаболизма НЛ в группе больных с легким цитолизом и констатировал их отсутствие при тяжелом цитолитическом синдроме.

В случаях компенсации печеночных функций у больных ХГ ус-

тановлена нормальная активность МПО, КФ и ЩФ в нейтрофилах периферической крови. С увеличением тяжести ГЦН определено прогрессирующее снижение уровней КБ и Гл и достоверное возрастание активности ферментов (МПО, КФ и ЩФ), максимально выраженное на этапе функциональной декомпенсации печени.

Повышение уровня билирубинемии сопровождалось' ростом" ферментативной активности МПО, КФ и ЩФ в лейтрофильных лейкоцитах и снижением содержания КБ и Гл. Общая тенденция динамики взаимосвязей между отдельными показателями нейтрофилов при нарастании билирубинемии характеризовалась увеличением силы отрицательной связи КФ-Гл и ЩФ-Гл и уменьшением положительной -между МПО и КФ.

У больных ХГ и ЦП с наличием холестатического синдрома отмечалось более низкое, чем при его отсутствии, содержание КБ и высокая активность МПО и ЩФ (КФ) НЛ. В последней группе пациентов показатели МПО, ЩФ и КБ были нормальными. Развитие холестаза у больных ХГ и ЦП характеризовалось появлением взаимосвязей между отдельными показателями метаболизма нейтрофилов: прямой между МПО и КФ и обратной между ЩФ и Гл.

Таким образом, увеличение тяжести клинико-биохимических синдромов ХГ и ЦП (мезенхимально-воспалительного, цитолитического, ГЦН), рост уровня билирубинемии, возникновение холестаза у больных сопровождалось универсальной реакцией метаболизма нейтрофилов в виде снижения уровней КБ и Гл, повышения активности МПО, КФ и ЩФ, появления корреляционных связей КФ - Гл, ЩФ - Гл, МПО - КФ, свидетельствующих о дезинтеграции различных звеньев фагоцитоза в условиях энергетического дефицита как одной из возможных причин нарушения неспецифической резистентности при тяжелых формах патологии печени. Клинический аспект установленной закономерности заключается в возможности использования цитохимических показателей НЛ для оценки тяжести отдельных синдромов и заболевания печени в целом.

С увеличением тяжести ЦП отмечались достоверное снижение уровней КБ и Гл и повышение активности КФ, достигающие крайних значений при наиболее тяжелых формах (3-я степень тяжести ЦП, класс С по СЫИ-Р^Ь), а также появление обратной корреляционной зависимости между КФ и Гл нейтрофильных лейкоцитов.

Анализ цитохимических показателей в стадии формирования кли-нико-лабораторной ремиссии выявил повышение содержания КБ, ак-

тивности МПО и снижение ЩФ нейтрофилов. Уровень Гл возрастал у больных ХПГ и ХАГ, а активность КФ уменьшалась в клетках больных ХАГ и ЦП. Содержание Гл у больных ЦП и активность КФ при ХПГ в процессе лечения не изменились. Большинство показателей метаболизма НЛ (за исключением МПО) после лечения имело тенденцию к нормализации, однако только у больных ХПГ некоторые из них (Гл и ЩФ) достигали значений нормы. Во всех нозологических группах после лечения сохранялись имевшие место до лечения или возникали новые (отсутствующие у здоровых людей) взаимосвязи между отдельными показателями метаболизма НЛ, в частности, КБ и 1ЦФ (ХПГ, ЦП), МПО и КФ (ХПГ, ХАГ), ЩФ и Гл (ЦП). Различия сдвигов цитохимических показателей НЛ в ходе лечения вирусных ХГВ и ХГС касались только Гл и МПО: при ХГС оба они снижались (отклоняясь при этом еще более от нормы), при ХГВ - не изменялись. В случаях комбинированного поражения вирусами В и С снижение МПО сопровождалось отсутствием динамики гликогена, а при наличии дельта инфекции - его увеличением (с тенденцией к нормализации).

Таблица 4.

Цитохимические показатели НЛ больных ХГ и ЦП в _динамике различных видов лечения (М±т)_

Использованные препараты

Изучаемые показатели ге пато проте кторы глкжокортикоиды интерферон

КБ 1.18±0.07* 0.99±0.03* 1.12=0.09*

1.53±0.10*(") 1.49±0.0б'<") 1.52±0.10*(,,)

Гл 2.63±0.04* 2.45±0.09* 2.43±0.08*

1.47±0.03*(,,) 2.57±0.08* 2.60±0.09*

МПО 1.79±0.06 2.15±0.08* 1.88±0.09

2.13±0.05*(,,) 2.31±0.05* 2.12±0.1 Г

КФ 1.11±0.07* 1.48±0.08* 1.55±0.12*

1.02±0.04* 1.15±0.06*(,,) 1.21±0.09*(")

ЩФ 1.10±0.07* 2.28±0.13* 1.70±0.09*

1.43±0.03*(,,) 1.70±0.07*(") 1.53±0.09*

В числителе показатели до лечения, в знаменателе - после лечения;

- Р < 0.05 в сравнении со здоровыми;

- Р < 0.05 в динамике лечения.

Как показано на таблице 4, основные закономерности динамики цитохимических показателей НЛ в ходе различных видов лечения ХГ и ЦП заключались в том, что глюкокортикоиды и реаферон, в отличие от гепатопротекторов, способствовали формированию более физиологических концентраций отдельных цитохимических составляющих метаболического цикла НЛ. В противоположность гепатопротекторам интерферон вызывал в фазе начинающейся клинико-биохимической ремиссии ХГ нормализацию (исчезновение) взаимосвязи между КБ и ЩФ нейтрофилов. ......

При наличии хорошего результата лечения активность НЛ имела отчетливую тенденцию к нормализации (особенно у больных ХГ) в отличие от случаев незначительного эффекта терапии. У больных с хорошим непосредственным результатом лечения исходные уровни КБ и Гл были выше, а активность МПО, КФ и ЩФ в НЛ - ниже, чем у пациентов с неудовлетворительным исходом. При этом активность МПО, измеренная до лечения, у больных с последующим формированием ремиссии ХГ и ЦП находилась в пределах нормы (в противоположность повышенным значениям фермента при малоэффективном лечении), что может использоваться в целях прогнозирования его возможных результатов.

ВЫВОДЫ

1.Нарушения метаболической активности НЛ периферической крови у больных ХГ и ЦП проявлялись снижением КБ и Гл и повышением активности МПО, КФ, ЩФ. Отклонения цитохимических показателей при ХАГ и ЦП были более выражены, чем у больных ХПГ. У пациентов с ХАГ определялись максимальные значения МПО и ЩФ и минимальные КБ. Увеличение продолжительности заболезания печени сопровождалось относительным повышением КБ, прогрессирующим отклонением от нормы МПО, КФ, ЩФ и Гл, -диссоциацией взаимосвязей между отдельными показателями метаболизма нейтрофилов.

2.Увеличение активности КФ и ЩФ, снижение содержания КБ и Гл определялось во всех этиологических группах ХГ и ЦП. Активность МПО была повышена у пациентов ХГВ, ХГС, ХГО и нормальна - в случаях ХГВ+С и ХГ неуточненной этиологии. У больных ХГВ установлены максимальные значения КФ и ЩФ и минимальные среди всех групп вирусного гепатита уровни КБ и Гл. В фазе репликации НВУ наблюдалось сравнительное с фазой интеграции снижение уровня КБ и увеличение активности МПО, КФ и ЩФ в ней-трофилах. Активность МПО характеризовалась как повышенная в реплика-тивной и нормальная - в интегративной стадии В-вирусной инфекции.

3.У больных вирусным циррозом печени в сравнении с другими этиологическими группами ЦП установлено снижение в НЛ уровня Гл, максимальные значения ЩФ, а также более высокий, чем при алкогольном циррозе, уровень КБ и низкая относительно смешанной формы заболевания активность КФ. С-вирусный цирроз отличался от НВУ-ассоциированного нормальной активностью МПО,

относительно сниженными показателями КФ и ЩФ, наличием отрицательной корреляции КБ-ЩФ и КФ-Гл нейтрофилов.

4.Нарастание тяжести клинико-биохимических синдромов ХГ и ЦП (ме-зенхимально-воспалительного, цитолитического, гепатоцеллюлярной недостаточности), а также возникновение холестаза и рост уровня билирубинемии сопровождались развитием универсальной реакции метаболизма нейтрофилов в виде снижения уровней КБ и Гл, повышения активности МПО, КФ и ЩФ, нарушения взаимосвязей между КФ и Гл, ЩФ и Гл, МПО и КФ, свидетельствующих о дезинтеграции различных звеньев фагоцитоза как одной из причин нарушения естественной резистентности при тяжелых формах заболевания печени.

5.После проведенного лечения ХГ и ЦП уровень КБ и активность МПО в нейтрофилах увеличились, активность ЩФ уменьшилась. У больных ХПГ в процессе лечения нормализовались показатели Гл и ЩФ; содержание Гл возросло в НЛ больных ХАГ, а активность КФ снизилась (с тенденцией к нормализации) у пациентов с ХАГ и ЦП. При ХГС, в отличие от ХГВ, наблюдалось снижение Гл и МПО в нейтрофилах. Во всех нозологических группах после лечения сохранялись или появлялись не свойственные здоровым взаимосвязи между отдельными показателями метаболизма НЛ.

6.Применение реаферона и глюкокортикоидов у больных ХАГ и ЦП, способствовало формированию физиологических концентраций некоторых компонентов метаболического цикла НЛ. Реаферон вызывал у больных ХГ в фазе формирования клинико-биохимической ремиссии нормализацию взаимосвязей между ферментами и биологически активными веществами нейтрофилов. В случаях успешного лечения ХГ и ЦП исходные (измеренные до лечения) уровни КБ и Гл были выше, а активность МПО, КФ и ЩФ - ниже, чем при незначительном его результате, что может быть использовано в целях прогнозирования эффективности терапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1.Использовать цитохимические показатели нейтрофильных лейкоцитов для оценки тяжести клинико-биохимических синдромов патологии печени (мезенхимально-воспалительного, гепатоцеллюлярной недостаточности и др.).

2.Различия уровней КБ НЛ у больных ХГВ и ХГЭ применять в качестве дополнительного критерия дельта инфекции.

3.Использовать установленные пределы колебаний КБ и МПО нейтрофильных лейкоцитов как один из вспомогательных признаков определения фазы НВУ у больных ХГВ в сложных случаях диагностики.

4.Измерять активность МПО в нейтрофилах до начала лечения больных ХГ и ЦП с целью прогнозирования его возможной эффективности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О возможности использования цитоэнзимохимических тестов в обследовании больных с хронической патологией печени /II итоговая научная конференция молодых ученых и студентов СГМА (сборник научных работа-Ставрополь, 1994,- С.136-137.

2. К вопросу об использовании цитоэнзимохимических методов в диагностике и лечении больных хронической патологией печени /Рукопись депонирована в ВИНИТИ, Москва, 1994,-21с,- №1425-В-94. (соавторы Руднев С.М., Ягода A.B., Чвалун A.B.)

3. Энзимохимическая активность нейтрофилов при хронических диффузных заболеваниях печени /III итоговая научная конференция молодых ученых и студентов СГМА (сборник научных работ).- Ставрополь, 1995.- С.245-246.

4. Цитоэнзимохимические реакции нейтрофилов при хронических заболеваниях печени /Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, коло-проктологии,- 1995.- T.V.- №3, С.265.

5. Ферментативная активность нейтрофилов при хронической патологии печени /V итоговая научная конференция молодых ученых и студентов СГМА (сборник научных работ).- Ставрополь, 1997,- С.352-353.

6. Клеточные механизмы нарушения функции гранулоцитов у больных хроническим гепатитом /1-я Национальная конференция Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов (сборник трудов).- Москва, 1997,- С.352 (соавторы Ягода A.B., Байда М.А., Филимонова Т.Ю.)