Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Цереброваскулярные эффекты антагонистов серотонина тропанового ряда

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНО- ИССЛЕЛСШТЕЛЬСКШ ИНСТИТУТ ФАРМАКОЛОГИИ

РОМАНЫЧЕВА Наталья Александровна

ЦЕРЕБРОВАСКУЛЯРШЕ ЭЗМЕКТЫ АНТАГОШСТОВ СЕРОТОШНА ТРСПАНОЙОГО РЯДА

14.00.25 - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

Для служебного пользования Экз. N Ю

На правах рукописи

. кандидата биологических наук

МОСКВА -. 1992 г.

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте фармакологии РАМН

доктор медицинских наук Р. С. Мирзоян

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Г. Г. Чичканов доктор медицинских наук М. Э. Каминка

Бедувдя организация - Московская медицинская академия

на заседании Специализированного Совета Д. 001.25.01 в ШШ фармакологии РАМН по адресу: г. Москва, 125315, ул. Балтийская, д. 8.

С диссертацией модно ознакомиться в ученой части Института фармакологии РАМН

Научный руководитель:

им. И. М. Сеченова

Защита состоится

года в. /О часов

Автореферат разослан

года

Ученый секретарь Специализированного Совета доктор медицинских наук

А. К Яворский

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

AicryanbiiocTb темы исследования. В связи с широким распространением мигрени среди населения многих стран мира поиск новых средств и методов лечения этого заболевания рассматривается в качестве актуальной задачи современной , медицины.

Для профилактики и лечения мигрени используются лекарственные средства, относящиеся к различным группам (фармакологических препаратов.' Однако, наибольшее распространение получили вещества, обладающие антисеротониновыми свойствами. Из последних наиболее известны метисергид и сандомиг-ран, которые используются для профилактики приступа мигрени. Указанные средства наряду с выраженной терапевтической эффективностью обладают рядом побочных нежелательных эФК'К-тов, к которым относятся полиневропатия, забрюишший фиброз, парестезии,тошнота, рвота, головокружения, прибавление массы тела. Все это существенно ограничивает применение данных препаратов в клинической практике и способствует поиску антагонистов серотонина среди других классов химических соединений. В течение последних лет внимание исследователей привлекли производные тропана. В частности, новые антагонисты серотонина среди производных тропана разрабатывается фирмами "Sandoz" Швейцария и "Ely Lilly" США. Одно из таких веществ - антагонист третьего типа серптоншюгык рецепторов ICS-205-930 (тронисетрон) предложено фирмой "Sandoz" в качестве нового противомигреневого средства.

- 4 - ■

На основании вышеизложенного и учитывая существенную роль сосудов мозга в патогенезе мигрени в лаборатории фармакологии цереброваекулярных расстройств НИИ фармакологии Российской АМН проводится изучение механизма цереброваску-лярного действия серотонина и его антагонистов. Скрининг новых эффективных антагонистов серотонина был проведен среди ароматических и гетероароматических эфиров оксима тропи-нона, синтезированных ведущим научным сотрудником JL М. Косточкой. В качестве препаратов сравнения были выбраны классический противомигреневых препарат метисергид и новый антагонист серотонина трописетрон, синтезированные фирмой "Sandoz".

Целью исследования явилось изыскание и изучение антагонистов серотонина по отношению к сосудам мозга среди ароматических и гетероароматических эфиров оксима тропинона.

Задачи исследования

1. Провести систематическое изучение влияния серотонина на мозговое кровообращение с целью разработки экспериментальной модели цереброваекулярных расстройств серотонинер-гической природы.

2. Исследовать антисеротониновые цереброваскулярные свойства метисергида и трописетрона (IC5-205-930) - антагониста серотонина тропанового ряда, разработанного фирмой "Sandoz" (Швейцария).

3. Провести сравнительную оценку антисеротониновой це-реброваскулярной активности соединений в ряду ароматических и гетероароматических эфиров оксима тропинона и выявить на-

- в -

иболее активное соединение.

4. Провести экспериментальное изучение специфической фармакологической активности отобранного производного трепана как нового перспективного средства для лечения мигрени.

. Научная новизна работы. Впервые проведено систематическое изучение влияния серотонина на церебральную гемодинамику с регистрацией регионального и локального кровотока и разработана модель цереброваскулярпых расстройств серотонинергической природы. Анализ цереброваскулярпых реакций на серотонин позволил выявить неодинаковую к нему чувствительность артериальных систем мозга. Показано, что серотонин вызывает более выраженную констрикторную реакцию сосудов каротидного- бассейна по сравнению с вертебробази-лярной системой! Сравнительное изучение антисеротоиипошх цереброваскулярпых свойств метисергида и тронисетрона (103205-930), разработанного фирмой "БалсЗог" позволило установить, что метисергид существенно ослабляет копстрикторние реакции сосудов мозга на серотонин, тогда как трописетрон таким действием не обладает. В результате скрининга выявлена антисеротониновая цереброваскулярная активность в новом ряду химических соединений - среди солей ароматических и гетероароматических эфиров оксима тропинона. Наиболее активное из них оригинальное соединение под шифром ЛК-86 может рассматриваться как перспективное лекарственное средство для лечения больных мигренью.

- в -

Научно-практическое значение рабдты. Использованная в работе схема эксперименов может быть рекомендована для" поиска новых соединений с антисеротониновой цереброваскуляр-ной активностью. Выявленные различия в механизме церебро-васкулярных эффектов метисергида и трописетрона имеют принципиальное значение для направленного поиска новых антагонистов серотонина с противомигреневым действием. В результате скрининга среди солей ароматических и гетроарома-тических эфиров оксима тропинона выявлено новое соединение под шифром ЛК-86, обладающее выраженными антисеротониновыми цереброваскулярными свойствами, значительно превосходящими трописетрон и выгодно отличающимися от метисергида . В настоящее время проводятся расширенные доклинические испытания этого соединения.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Итоговой конференции НИИ фармакологии АМН СССР (1988), на VI Всесоюзном съезде фармакологов "<Сар-макология и научно-технический прогресс'Ч Ташкент, 1988), на II Всесоюзной конференции "Физиология, патофизиология и Фармакология мозгового кровообращения" (Тбилиси, 1988), на Финлянско-Советском симпозиуме по нейрофармакологии и биологическим исследованиям алкоголизма (Куопио, Финляндия, 1989), на Межреспубликанской научно-практической конференции "Синтез, фармакология и клинические аспекты новых психотропных и сердечно-сосудистых веществ" (Волгоград, 1989), на Всесоюзной конференции "Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы", Мэсква,

1989. на III Конгрессе Болгарского фармакологического общества (София, Болгария, 1990), на Всеюзном симпозиуме и школе молодых ученых "Серотонин мозга, нервно-психические -нарушения и их лекарственная коррекция" (Донецк, 1990), Международной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения академика С. В. Аничкова (С. Петергбург, 1992).

Объем я структура работы. Материалы изложены на 110 страницах машинаписного текста, иллюстрированы 10 таблицами и 17 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов, трех глав

.с изложением результатов собственных исследований, заключе-

fb

ния и выводов. Список литературы включает отечественных и ^иностранных источников.

Материалы и методы исследования.

Исследование выполнено на 204 кошках массой 2,8-4,5 кг' •под общей анестезией, 20 кроликах массой 2- 3 кг и 7 ненар-котизированных крысах массой 180-210 г.

В работе использован комплекс современных количественных методов исследования мозгового кровобращения. Эксперименты проводились как на изолированных кольцевых сегментах базилярной артерии кролика так и на целом животном с регистрацией мозгового кровотока с помощью электромагнитного измерителя и водородного клиренса

Кольцевые сегменты основной артерии кролика (3-G мм шириной) фиксировались между двумя нихромовыми держателями ( диаметром 70-80 мкм) и помешали в ванночки обч^мом 10 ил

с раствором Кребса-Хенселяйта ( Ш П. Ведерников и со-авт. ,1988). Изменения изометрического напряжения сегментов регистрировали преобразователем ЦС-2 на димографе 11-711 (Бекман, США).

Мозговой кровоток у кошек регистрировали с помощью электромагнитного измерителя РКЭ-2-БИ. Использовали датчики с диаметрам просвета 1,0 и 2,0 мм, которые устанавливали на общей сонной артерии. При этом перевязывали все артерии, питающие кровью экстракраниальные ткани головы. Запись мозгового кровотока, артериального давления, электрокардиограммы производили на мингографе-81 фирмы "Е1еша-БсЬопапёег" (Р. С. Мирзоян, 1974).

Локальный мозговой кровоток в коре головного мозга крью определяли полярографическим методом с регистрацией водородного клиренса при его ингаляции (Аик1апс!'К. , 1965). Для этой цели платиновый электрод диаметром 0,3мм предварительно имплантировали в теменную область коры головного мозга крыс. Измерения проводили через 5-7 дней после операции, регистрацию производили на полярографе ЬР 7Е ЧССР.

Для определения тонуса мозговых сосудов была использована методшса раздельной двухсторонней перфузии каротидных и вертебробазилярных систем мозга (Р.С. Мирзоян, 1973) с помощью многоканального перфузионного насоса с постоянным объемом (К М. Хаютин и соавт. , 1958).

Влияние исследуемых веществ на нервную регуляцию кровообращениями оценивали с помощью регистрации артериального

давления и мозгового кровотока при электрической стимуляции большеберцововго нерва электростимулятором ЭСЛ-2 (20-40 стим. в сек., 1-3 мсек, 20 В. 10-15 сек.), и биоэлектричес-1Сой активности в симпатическом нерве почт!. Почечный нерв препарировали внебрюшиннно заднебоковым доступом, выбирали одну из ветвей, идущих между почечной артерией и веной, потенциалы отводили биополярными платиновыми электродами. Электроды с помещенными на них симпатическими нервами залипали подогретым до 37°С вазелиновым маслом (ПК Каверина , К1 Б. Розанов, 1966). Регистрацию биопотенциалов проводили на Мингографе-81 фирмы "ЕЬета-ЗсЬопапЗег".

Учитывая существенную роль рС04 в регуляции мозгового кровотока, представлялось важным контролировать напряжение углекислоты в артериальной крови. Определение напряжения углекислоты производили на установке АВС-1 фирмы "ИасИотеЬег" с помощью рС04 - электрода типа Е 5036.

Исследуемые соединения вводили в бедренную вену, внут-рибрюшшшо или в боковой желудочек мозга с помощью специальной канюли (Э. А. Бендиков, 1964).

Использовали субстанции метисергид фирмы 5ап<]ог (Швейцария), серотонин фирмы Пика (Швейцария).

Полученные данные обрабатывали статистически с вычислением доверительных границ, достоверность различий определяли с помощью I-критерия Стьюдента (М. Л. Нелеиький, 1963).

- 10 -

Результаты исследования и их обсуждение 1. ВЛИЯНИЕ СЕРОТОНИНА НА МОЗГОВОЕ КРОВООБРАЩЕНИЕ 1.1. Изменение мозгового кровобращекия при многократном введении серотонина Проведенные опыты позволили установить, что серотонин ^ дозе 20 мкг/кг при внутривенном введении в подавляющем большинстве экспериментов (110 из 114 )вызывает у кошек выраженное уменьшение объемной скорости мозгового кровотока в среднем на 44 + 1. 57. Цереброваскулярный эффект серотонина наблюдается сразу же после введения, в большинстве случаев достигая максимального значения в течение первой минуты. Восстановление исходного уровня мозгового кровотока отмечается через 5-7 минут после инъекции серотонина. Уменьшение притока крови в мозг в большинстве экспериментов (96 из 114) сопровождается понижением уровня артериального давления, на 26+1.3% В 18 экспериментах наблюдалось повышение уровня артериального давления под рлиянием серотонина на 20 ±2.5%, которое в 10 экспериментах сменялось его уменьшением ниже исходного уровня. Порученные нами данные о церебровас-кулярных реакциях серотонина согласуются с результатами исследований Каупог и соавт. (1961), Е П. Ланского (1968), Lowe Gilboe (1973), Edvinsson и соавт. (1984) и других исследователей, также продемонстрировавших способновсть серотонина понижать уровень кровоснабжения мозга и повышать тонус церебральных сосудов.

Учитывая значение серотонина для моделирования коне-

трикторных реакций сосудов мозга и поиска средств с антисе-ротониновой активностью, была проведена серия опытов с многократным введением серотонина. Опыты показали, что при повторных введениях с интервалом в 30 минут серотонин вызывает аналогичные изменения мозгового кровотока. Изменения уровня артериального давления, при этом, также не претерпевают существенных изменений С Рис. 1). Полученные данные указывают на то, что реакции сосудов мозга и артериального давления на серотонин отличаются стабильностью на протяжении всего эксперимента и позволяют исследовать влияние фармакологических веществ на цереброваскулярные реакции серотонина при многократном введении последнего.

Исследование локального кровотока в коре головного мозга бодрствующих крыс показано, что серотонин в дозе 50 мкг/кг при внутрибрюшинном введении вызывает уменьшение кровотока на 17^3,9%. Наиболее выраженный эффект наблюдается на 10-20 минуте после введения серотонина, а восстановление исходного уровня кровотока, отмечается спустя 40-60 минут.

о

-юн J -20

-30 --40-50-60

I

2

4

3

I

о

-10 -20 -30 -40-50

Рис. 1. Влияние серотонина (20 мкг/кг. в/в) на мозговое кровообращение (I) и артери'чьное давление (II) у кошек под общей анестезией при многократном введении (1-4 с интервалом 30 минут) в X к исходному уровню

2

3

4

- 13 -

Це ребро вас кулярные реакции на серотанин ксследсв.глиоь тага® при его воздействии на боковой далудочек мозга, т.е. минуя гемато-энцефалический барьер. Эксперименты показали, что серотонин в дозе 20 мкг/кг при введении в боковой желудочек мозга кошек вызывает двухфазные изменения мозгового кровообращэния. В большинстве опытов С в 4 из 6) с>?ротон;т вызывает кратковременное ( в течении первых пята минут.) небольше увеличение притока крови в мозг на 19+2.5;!, которое сменяется длительным ослаблением кровоснабжения мозга на 38+4,9Х. В других экспериментах первая фаза отсутстеозала. Изменения мозгового кровотока в этой серии опытов сопрсвол-дались двухфазными изменениями артериального давленая. Первоначальное повышение уровня артериального давления сыьчш-дось выраженной гнпстекзией на 2У+4.9Х. Аналога а-не результаты были получены и при внутрижелудичковом №í.íohm;i серотошша в дозах 0,5-1 мг/кг. В большинстве опытов навидались диухфозные изменения мозгового кровотока и артериального деления. IVpyoHcutuibHcv. кратковременное увеличен».* притока крови в ншг на tn hluSZ и повышение уроуэд аксиального впадения на сменяюсь ухудшением кроаос;кл? ■ жчим мозга и гшютонзи^й (39+4.8У. Следшки^ль • но, счп*>тонии и при мюденаи » соковой желудочкк мезга BttóuvsHOT, ь основном, конотрйкгерну» реакции мсвго&ьа сосуда.

- 14 - ■

1. 2. Неодинаковая чувствительность артериальных систем мозга к серотонину

В отдельных сериях опытов исследовали влияние серотонина на тонус сосудов в системах каротидных и вертебробази-лярных артерий. При изучении влияния серотонина на напряжение изолированных кольцевых сегментов базилярной артерии кроликов было показано, что серотонин при введении в суммарно-возрастающей концентрации от 10 -9М до 10 -5Ы вызывает дозозависимое сокращение сегментов сосуда . ЭД50-5.5+ 0,6-10 -8М.

Эксперименты с использованием методики раздельной двухсторонней перфузии каротидных и вертебробазилярных артерий позволили выявить неодинаковую чувствительность артериальных систем мозга . Оказалось, что серотонин в дозе ^Омкг/кг при внутривенном введении в значительно большей степени повышает тонус в каротидной артериальной системе в среднем на 37+10%, тогда как в вертебробазилярной системе увеличение сопротивления сосудов составляет лишь 10 +3.1Z. Разница статистически значима при Р<0,05(Рис. 2). Полученные нами данные не согласуются с результатами Youn? и со-авт.(198б) свидетельствующими о более высокой чувствительности изолированной базилярной артерии по сравнению с изолированной средней мозговой артерией у кошек. Выявленное различие, повидимому, обусловлено неодинаковыми условиями экспериментов in vitro и in vivo. Действительно, в наших опытах одновременно производилась регистрация сопротивления

сосудов в двух артериальных системах мозга, что отражает состояние тонуса всей сосудистой сети, а не изолированных отрезков отдельных артерий.

6050403020100-

Рис.2. Влияние сёротонина (20 мкг/кг, внутривенло ) на тонус сосудов каротидного бассейна ( Щ] ) и вер-тебробазилярной системы () в X к исходному уровню, л Р<0,05

Полученные нами данные о более высокой чувствительности каротидной артериальной системы к серотонину согласуются с наблюдениями Р. С. Мирзояна (1976), свидетельствующими о неодинаковом чувствительности артериальных систем мозга к но-радреналину. Норадреналин повышает тонус сосудов в бассейне каротидных артерий на 35+5.2%, тогда как повышение перфузи' онного давления в вертебробазилярной системе составляет 3.27. ( разница статистически значима при р<0,05). Следова-

тела но. оба нейромедкатора - серотонин и норадреналин оказывают более выраж-нкое влияние на сосуды каротидного бассейна Эти данные следует учитывать как при обсуждении патогенеза мигрени, так и при поиске противоиигреневых и цереброЕзскулярных средств.

1-З.Елияние серотонина на вазомоторные и соматосимпа-

гкческие рефлексы Было кг учено влияние серотонина на биоэлектрическую активность в симпатических нервах и прессорный вазомоторный рефлекс, т. е. на адревергкческие механизмы регуляции крово-оОраткия. Б .опытах с изучением влияния серотонина при внутривенном введении в дозе 20 мкг/ кг на тоническую активность в симпатических нериах была выявлена его способность оказывать делримируицее влияние ' ка биоэлектрические лроцессы В большинстве экспериментов под елиянж.-ы серото-ыика отмечается угнетением тонической активности, которое .рагвилается сразу же после введения серотонина и продолжается в течение 3-5 минут.

Деиркмирупщее влияние серотонина на биоэлектрическую активкоот! в симпатических нервах Еыражено в большей степе-Н/! яри введении меноашна в боковой лалудоч^к мозга, Под влиянием серотонина в дозах 20 мкг/ кг, 0,6 и 1 м;7кг при в.ыэдек.ии я боковой желудочек мозга отмечается карастат-е •угнетение как тонической, так и рефлисгсфкой активности ь е/шатических нервах почки. Угиетаодй аффект серотонина начинает развиваться и« 3-20 минутах после ььедеиия в.дест-

ва и продолжается до конца экспериментов (60-90 мин.). В этих же опытах наблюдается выраженное угнетение прессорного вазомоторного рефлекса. Депримирующий эффект серотонина при введении в дозе 20 мкг/кг в Соковой желудочек мозга составил 57+7,27. . При увеличении дозы серотонина до 1 мг/ кг этот эффект увеличивался до 79+4,87.. Полученные данные указывают на способность серотонина взаимодействовать с центральными норадренергическими структурами и оказывать депри-мирующее влияние на соматосимпатич^ские и вазомоторные рефлексы.

2. ЦЕРЕБРОВАСКУЛЯРИЙ: Л1ГГИСЕР0Т0НИГОВЫЕ Э'МЕКТН МЕТИСЕРГИЛА И'ТРОПИСЕТРОНА ( 1СЗ-205-930)

Прежде чем перейти непосредственно к поиску .новых це-• ебропаскуляриых антагонистов серотонина представлялось важным исследовать влияние классического антагониста се[ю-тонина метиоергида на мозговое кровообращение интактных животных и в условиях воздействия се|ч>тонина. В сиипи с этим проводился анализ 1^':-бро[ии'ку.л>1р!!их :<ФФ»-ктоп метиоергид.ч. В «том же разделе представлены данные о цереАровмасудирних свойствах нового антагониста серотонина троиисет^на, пред-лоа.-нного фирмой .'»аыо.: п качестве -нового противомигреиево-го средства. В наших исследованиях трописепюн послужил препаратом сравнения длл поиска новых антагонистов скрито-

НИНП Г1 (»ИДУ СЛОЖНЫХ !«фИрОВ ОКСИМ?» ТрОНИНоНа.

2.1. Метисергид

В опытах с регистрацией мозгового кровотока у копек с помощью электромагнитного измерителя метисергид в дозе 1 мг /кг внутривенно вызывает уменьшение притока крови в мозг на 45+5,5Х. Максимальный эффект наблюдался на 1-3 минутах эксперимента, после чего в большинстве опытов наблюдалось частичное востановление кровоснабжения мозга. Одновременно отмечалось понижение уровня артериального давления в среднем на 31 ¿4,67..

Метисергид оказывал выраженное депримирующее влияние на нервную регуляцию артериального давления. Под его влиянием наблюдалось угнетение прессорного вазомоторного рефлекса в среднем на 62+9,6Х. Максимальное угнетение отмечалось на 15 -30 минутах эксперимента, затем в большинстве опытов имело место восстановление указанного рефлекса через 40-60 минут после введения препарата.

Анализ нейрограмм показал, что метисергид в большинстве экспериментов (4 из 5) вызывал слабое угнетение биоэлектрической активности в симпатических нервах, которое начинало развиваться на 2-15 минутах после введения и в некоторых случаях наблюдалось до конца регистрации ( 30-60 минут). Одновременно в трех экспериментах отмечено небольшое угнетение рефлекторных разрядов в симпатических нерЕах.

Исследовали также влияние метисергида на цереброваску-лярные реакции сосудов мозга, вызванные серотонином как в опытах In vitro, так и in vivo.

Результаты опытов по изучению влияния метисергида на напряжение изолированных сегментов базилярной артерии кролика, вызванное предварительно введенным серотонином в концентрации 10 -6М показали,что метисергид вызывает уменьшение напряжения сегментов базилярной артерии мозга кролика, ЭД50метисергида - 1,6+0,2 10 -4М. Предварительно введенный метисергид (10 -6М) уменьшал дозозависимую реакцию изолированных сегментов базилярной артерии на серотонин ( ЭД50се-ротонина - 7,3+0,7-10 -8М, а ЭДБОсеротснина через 30 мин после метисергида - 3.0+0.3-10-4М ).

Изучение антисеротониновых цереброваскулярных свойств метисергида на целом животном позволило установить, что метисергид существенно ослабляет констрикторную реакцию сосудов мозга на серотонин (Рис.4). Если в контроле серотонин в дозе 20- мкг/кг внутривенно вызывал уменьшение мозгового кровотока на 47+3,5Х, то через 20 минут после введения метисергида снижение притока крови в мозг составило всего 25+ 4.5Х (Р<0,002). Полученные нами данные согласуются с наблюдениями Karlsberg и соавт. (1963), Welch и соавт. (1974), Mylecharane и соавт. (1978) свидетельствующими о способности метисергида как предупреждать- развитие сбротониновых спазмов мозговых сосудов, так и восстанавливать исходный уровень кровоснабжения мозга, нарушенный серотонином.' Изменения уровня артериального давления при этом не отличалось однородностью. Б ряде опытов (5 из 9) серотонин на фоне действия метисергида вызывал понижение уроеня артериального

давления на 22+4,47. в остальных четырех экспериментах серо-тонин повышал уровень артериального давления на 1С/4.6Х. Следует отметить, что в контроле серотонин вызывал понижение уровня артериального давления в среднем на 21+3,2 X.

4. 2. Трописетрон ( ICS-205-930)

Соединение тропанового ряда трописетрон в дозе 2 мг/кг при ЕнутриЕенном введении в большинстве экспериментов вызывало двухфазные изменения объемной скорости мозгового кровотока. Первоначальное ( 3-5 минут) увеличение притока крови в мозг сменялось длительным снижением уровня кроьосн'Л»,-ния мозга. Увеличение мозгового кровотока составляло ь среднем 18*3,4Z, а уменьшение - 33+4,87.. В ос-талышх экспериментах (4 из 9) уменьшению кровоснабжения wwii не гплдшостиоиало увеличение притока крови в мозг. 0Л'-ДУ»:Т ОТМЕТИТЬ, ЧТО IKtM-.-IIOHMH мозгового кровотока сопро-ЬОЛДИЛИ'-'Ь /ШПЛОГ'ИЧНЫМИ колебаниями уровня арТерИ£1ЛЫ10Г0 лт-.лчнш. Ил'ллй-иио уровня артериального давления составляло :?)<1'>,'/.Х,н понил-ни« - 1ЙМ.2Х.

Tf»jllH'M'T|)OH ОК^ШЛИЛ HtJJli lilltXJ ДйПрИМИруШЦгЧ) liJUWIIlIt; на изринут [«¡гулкий») щт-риального дтикчиш. Под ого плия-НИ';М J1 'iTIJt*J/1 <VJICjfjЬ ynit,-T«IIM'J I!p<--CCl)pi|(>ro ШШОМПТОРИОГО JHHli-Jih-n:ti ti с[,(-л1|.;U tin L^i'J, I'jZ, biCCTUHulUH-llUr исходного ypoium ■bfi;)ow;T'j[/Hoi'o pi-ijijir-iica отмучилось чщюй ;«)-40 минут после ЫИ'.АчЩМ Трч|1И1!«;Т|ЮИп, li ЧТО ill к'Mil ИаО.ШиД'и!« i.![, уГ1Ь>Т«|1И<» И посд^луши.;« ЬМ.'ПТиюьЛгИИг! Т01ШЧ'-1;К'|Ц ill. I'llr.li. и'ГII И [юф Л«КТОрНи/, рчнрндов b 1'ИМИНТИЧе('КИХ l|r!|iti:U .

- 21 -

Исследование антисеротониновых цереброваскулярних

свойств соединения 105-205-930 проводили как в опытах на изолированных сосудах, так и при регистрации мозгового кровотока электромагнитным измерителем на кошках под обдай анестезией.

Эксперименты показали, что трописетрон в зависимости от концентрации вызывал уменьшение напряжения кольцевых сегментов базилярной артерии кроликов, вызванное серотонином (10 -6М). Наиболее выраженный эффект соединение проявляет в концентрации 10 -4М, понижая тонус основной артерии на 45Х от исходного уровня.

Опыты, проведенные на кошках позволили установить, что соединение 103-205-930 не ослабляет реакции сосудов мозга на серотонин (Рис. 4). Мы не обнаружили статистически значимых различий между изменениями мозгового кровотока, вызванного серотонином на фоне действия 1СБ-205-930 по сравнению с контролем. Реакция артериального давления на серотонин также не претерпевает существенных изменений под влиянием 103-205-930. Наблюдалась лишь тенденция к ослаблению этой реакции после применения трописетрона

- 22 -

3. ИЗУЧЕНИЕ АШ'ИСЕРОТОНИНОВЫХ СВОЙСТВ ПРОИЗВОДНЫХ СЛОЖНЫХ МИРОВ ОКСИМА ТРОГШНОНА. ЦЕРЕБГ'йВАСКУЛЯРНЫЕ СВОЙСТВА ЛК-86 3.1. Церейроваскулярные антисеротониновые свойства арктических и гетероароматических зфиров оксима тропинона

Поиск новых антагонистов серотонина по отношению к сосудам мозга проводился среди ароматических и гетероароматических эфиров оксима тропинона (Рис.3).

СНа

• X

О

л\ 11

К <§ка <о>г

^-205-930 ^СН, ^СН^

.ОСНь

О

Уо-с ЧрУо^ь

ЛК-86 4—<г\

СНз л(

3,4,5-ТРИМЬТОКСИБЕНЗОАТ ОКСИМА-ТРОПИНОНА ГИДРОХЛОРИД

оси, • на

Рис. 3. Структурные формулы изученных соединений и препарата сравнения 1СЗ 205-930.

- 23 -

Исходя из пели настоящего исследования представлялось важным оценить способность этих соединений как уменьшать констрикцию церебральных сосудов, вызванную предварительно введенным серотонином, так и продотвратать цереброваскулярные нарушения серотонинергической природы.

В первой серии экспериментов была проведена оценка способности изучаемых соединений уменьшать напряжение кольцевого сегмента базилярной артерии кролика, вызванное серотонином (10 -6М). Результаты этих экспериментов представлены в таблице 1.

Таблица 1. '

Уменьшение напряжения базилярной артерии кроликов, вызываемое серотонином (10 -6М), под влиянием исследуемых соединений в 7. к исходному уровню.

Соединение концентрация (М)

10 -9 10 -8 10 -7 10 -б 10 -5 10 -4

ЛКМ-25 0 . 0 0 4.0 6,0 32,5

ЛКМ-28 0 0 0 0 0 2,5

ЛК- 86 4,5 4.3 5,0 14,0 26,0 58,0

Ж- 97 2,8 2.8 0 • 0 10,8 25,0

ЛК- 99 0 0 0 0 12.0 37,0

ЛК-100 0 " 0 0 0 0 ' 33,0

ЛК-101 0 0 0 0 0 36.0

Ж-103 0 0 7.0 7,0 7.0 100,0

103-205-930 5,2 5,0 10,6 10,6 16,0 45,0

- 24 -

Как видно из таблицы все изученные соединения в той или иной степени обладают антисеротониновыми свойствами. О„нако, наиболее стабильную и выраженную антисеротониновую активность проявило соединение ЛК-86, хотя максимальный эффект был отмечен для соединения ЛК-103 в концентрации 10 -Ш

Вторая серия экспериментов была проведена на кошках под общей анестезией. Регистрировали изменения мозгового кровотока и артериального давления, вызванные серотонином (20 иг/кг, в/в) до и после введения исследуемого вещества.

Эксперименты показали. что соединения ЛК-86 и ЛК-97 в наибольшей степени способны предотвращать нарушения церебральной гемодинамики, вызванные серотонином. Соединение ЛК-103 подобным действием не обладает.

13 отдельной серии экспериментов была изучена острая токсичность указанных соединений. Опыты показали, что наименьшей токсичностью обладает соединение ЛК-86. Поэтому представлялось целесообразным провести подробное изучение цереброваскулирных эффектов соединения'ЛК-86.

3. 2. Цереброваскулярные антисеротониновые свойства ЛК-86

Эксперименты показали, что соединение ЛК-86 в дозе 10 мг/кг при внутривенном введении вызывает неоднородные изменения мозгового кровообращения. В большинстве экспериментов ( 12 из 16) отмечено уменьшение объемной скорости мозгового кровотока в среднем на 51+7,0. В другой части опытов (8 из 16) наблюдалось улучшение мозгового кровооиращения в сред-

нем на 26+6,0?.. при этом в некоторых экспериментах (4 из 16) отмечено как снижение, так и увеличение притока крови в мозг.

Максимальные изменения объемной скорости мозгового кровотока под влиянием ЛК-86 отмечены на 1-7 минутах эксперимента, после чего имело место восстановление кровоснабжения мозга в большинстве случаев до исходного уровня на 8-15 минутах после введения.

ЛК-86 вызывал снижение уровня артериального давления в среднем на 41+6,2X на первых минутах эксперимента. Далее в большинстве опытов отмечено частичное или полное восстановление уровня артериального давления на 7-13 минутах после введения ЛК-86.

Что касается влияния ЛК-86 на формирование вазомоторного прессорного рефлекса то было показано, что ЛК-86 вызывает угнетение указанного рефлекса в среднем на 28+5,7%. Этот эффект был максимальным на 3-10 минутах эксперимента, после чего отмечалось восстановление вазомоторного прессорного рефлекса до исходного уровня,, а в ряде опытов (3 из 7) и его увеличение.

Изучение антисеротониновых цереброваскулярных свойств Ж-86 показало, что соединение способно статистически значимо ослаблять нарушения церебральной гемодинамики, вызванные серотонином (Рис.4). Серотонин на фене действия ЛК-86 в 6 из 9 экспериментах вызывает уменьшение мозгового кровотока в среднем на 26+2,0% . в контроле на 39+2,07. (р<0.001).

%

504030-

Рис. 4. Влияние ЛК-86, ыетисергида и трописетрона на изменения мозгового кровотока, вызванные серотонином ( 20мкг/кг, внутривенно). * Р<0,002 ** Р<0,001

I I контрольные реакции на серотоцин ¡21 реакции на фоне ЛК-86 ^ реакции на фоне ЫЕТИСЕРГИЛ ^ реакции на фоне ТРОПИСЕТРОНА

-30

-40 ^ -50

-60-

Следует отметить, что в 5 из 9 опытов серотонин на фоне действия Ж-86 вызывал увеличение притока крови в мозг на 21+4,8%. которое в двух экспериментах наблюдалось после первоначального ухудшения мозгового кровообращения. Необходимо отметить, что трописетрон подобным защитным эффектом не обладает. Что касается метисергида, то он как было отмечено выше, существенно ослабляет констрикторные реакции мозговых сосудов, вызванные серотонином. Однако, под влиянием метисергида мы гораздо реже наблюдали усиление притока крови в мозг, вызванное серотонином, нежели на фоне действия Ж-86. Если в контроле серотонин вызывал понижение уровня артериального давления в среднем на 25+4,6%, то на фоне действия Ж-86 отмечены разнонаправленны^ изменения "ровня артериального давления под влиянием моноамина. В большинстве опытов (7 из 9) отмечено Повышение уровня артериального давления на 23+2,4%, в некоторых экспериментах наблюдалось его понижение на 13+2,45%, а в двух случаях имели место двухфазные изменения уровня артериального давления.

Учитывая необходимость перорального применения противо-мигреневых средств была проведена специальная серия опытов в которой исследовалось влияние ЛК-86 при пероральном введении на изменения мозгового кровотока, вызванные серотонином. Эксперименты показали, что и в этих условиях Ж-86 существенно ослабляет нарушения церебральной гемодинамики, вызванные серотонином.

выводы

1.В опытах с регистрацией регионального и локального мозгового кровотока показано, что серотонин существенно уменьшает кровоснабжение мозга. Этот эффект не претерпевает изменений и при многократном введении моноамина, что позволило создать экспериментальную модель цереброваскулярных расстройств серотонинергической природы.

2.0бнаружена неодинаковая чувствительность артериальных систем мозга к серотонину. Констрикторная реакция на серотонин выражена в большей степени в бассейне каротидных артерий по сравнению с вертебробазилярной системой.

3. Классический противомигреневый препарат метисергид в значительной степени способен предотвращать изменения церебральной гемодинамики, вызванные серотонином. Новый препарат трописетрон (ICS-205-930). предложенный фирмой Sandoz для лечения мигрени,подобным действием не обладает.

4. Соли ароматических и гртероароматических эфиров ок-сима тропинона обладают антисеротониновыми свойствами по отношению к сосудам мозга

5. Производное тропана под лабораторным шифром ЛК-86 (3,4,5-триметоксибензоат оксима тропинона ) обладает выраженными антисеротониновыми цереброваскулярными свойствами, •значительно превосходит трописетрон, выгодно отличается от метисергида и является перспективным для создания нового противомигреневого лекарственного средства.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Neuromediator mechanisms involved in the cerebrovascular effects of clotam and ptcamilon. Abstracts of Finish Soviet Symposium on Neuropharmacology and Biological Alkohol recearch, Kuoplo, 1989, p. 37 ' соавт. R. S. Mirzoyan, Ganshina T. S. , Puhalskaya T. G. , Parantainen J.).

2. Пикамилон и нейромедиаторные механизмы регуляции мозгового кровообращения. Тезисы докладов межреспубликанской научно- практической конференции "Синтез, фармакология и клинические аспекты новых психотропных и сердешю- сосудистых веществ", Волгоград, 1989, с. 151 ( соавторы Р. С. Мирзоян, Т. С. Ганьшина, Т. Г. Пухальская).

3. Пути поиска протиЕомигреневых средств. Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Оценка фармакологической активности химических соединений: принципы и подходы", Москва, 1989, с. 208 (соавторы 3. С. Мирзоян, Т. С. Ганьшинз, Т. И. Во-лобуева).

4. Neurotransmi tters as modulators of cerebral circulation. Abstracts of third congress of the Bulgarian pharmacological society, Sofia, Bulgaria, 1990, p. 175 ( соавторы R. 3. Mlrzcyan, ' T. S. Ganshina. T. G. Puhalskay, M. B. Neverovich).

5. Влияние противомигреневых средств на транспорт серо'тонина и регуляцию мозгового кровообращения. Тезисы докладов XV конференции по клинической Фармакологии с международным участием "Актуальные вопросы клинической фармакологии", Волгоград, 1990, с. 87-88 (соавторы Р. С. Мирзоян, Т. Г. Пу-

- 50 -

хальская, Т. С. Ганьшина. Т. И. Волобуева). '

6. ЦереСроваскулярные эффекты антагонистов серотонина. Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума и школы молодых ученых "Серотошш мозга, нервно-психические нарушения и их лекарственная коррекция", Донецк, 1990, с.60.

?.Синтез производных тропана, потенциальных антагонистов серотонина. Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Химия природных низкомолекулярных биорегуляторов", Ереван, 1990, с. 78 ( Л. М. Косточка, А. П. Сколдинов).

8. Нейромедиаторы в механизме действия цереброваскулярных средств. Итоги науки и техники, том 26. Фармакология. Химиотерапевтические средства с. 5-19 (соавторы Р. С. Мир-аоин, Т. С. Ганьшина, Т. И. Волобуева).

9. Соли ароматических и гетероароматических эфиров оксима Т{10иинона, обладающие антисеротониновыми свойствами и противомигреневым действием. Авторская заявка на изобретение N4718768/04 (096542) Приоритет от 13.07.89 (соавторы Л. М. Косточка, Т. С. Ганьшина, С. Е. Мочаловский, Т. И. Волобуева, Р. С. Мирзоян, А. П. Сколдинов, Ю. П. Ведерников, Б. Ы. Пятин, В. А. Быков, А. В. Вальдман, А. П. Родионов, Б. И. Любимов).

Подл, в печать 15.10.1';! >'> г. 604

ьохЫ/К. Тир. 100

Москва. Типография Т,ЛСХ!.