Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Аналитические исследования при создании нового противомигреневого средства из группы производных тропана

На правах рукописи

ПОПОВА Анна Ивановна

АНАЛИТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ СОЗДАНИИ НОВОГО ПРОТИВОМИГРЕНЕВОГО СРЕДСТВА ИЗ ГРУППЫ ПРОИЗВОДНЫХ ТРОПАНА

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1997

Работа выполнена в Лаучно-исследовательском институте фармакологии Российской академии медицинских наук.

Научный руководитель:

кандидат химических наук Б.М.Пятин.

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор В.И. Прокофьева; докюр фармацевтических наук.вед.науч.сохр. К. Полиёвктоо

Ведущая организация:

Научно- исследовательский институт фармации ( НИМФ)

Защита диссертации состоится "Ш-" 1997 р.

в часов на заседании диссертационного совета Д-074.05.06 в Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова по адресу: Москва, Суворовский бульвар,13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им.И.М.Сеченова (Москва, Зубовская площадь,

д.1).

Автореферат разослан "_" _1997 г.

Ученый секретарь Диссертационного ученого совета кандидат фармацевтических наук, доцент

Н.П.Садчикова

- I -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. Мигрень является в настоящее время одним из самых распространенных заболеваний. По данным целого ряда авторов мигренью страдает до 20 % населения различных стран мира. В основном, это лица молодого трудоспособного возраста. В настоящее время для купирования и предупреждения приступов мигрени используются лекарственные средства, относящиеся к различным классам биологически активных соединений (метисергид, лизурид, редерган, сермион, циннаризин и др.). Однако, названные препараты не всегда могут быть применимы в медицинской практике так как наряду с выраженной терапевтической активностью, обладают рядом побочных эффектов (увеличение массы тела, рвота, головокружение, снижение артериального давления, сонливость и т.д.).

Поэтому большое медико-социальное значение приобретает проблема создания и производства высокоэффективных лекарственных средств для лечения и своевременной профилактики мигрени.

Большинство исследователей придают существенное значение роли серотонина в процессе возникновения приступа мигрени. Об этом свидетельствуют как изменения содержания этого моноамина в крови и цереброспинальной жидкости у больных, страдающих мигренью, так и высокая эффективность антагонистов серотонина в качестве средств профилактики данного заболевания.

В соответствии с этим,важным и своевременным представляется поиск оригинальных антагонистов серотонина среди других классов биологически активных соединений, в частности, среди производных тропана.

В лаборатории фармакологии цереброваокулярных растройств НИМ фармакологии РАМН под руководством доктора биол.наук Р.С.Мир-зояна был проведен скрининг новых биологически активных веществ

из группы ароматических и гетероароматических эфиров оксима тро пинона, синтезированных ведущим научным сотрудником лаборатории химии медиаторов канд.хим.наук Л.М.Косточкой.

В результате исследований был выявлен и фармакологическ изучен новый оригинальный препарат, получивший название тропок син. Препарат обладает выраженной противосеротониновой активное тью, устраняет или существенно ослабляет констрикторные реакци сосудов мозга, вызванные серотонином. По своим цереброваскулярны свойствам тропоксин выгодно отличается от эталонного противоми греневого препарата метисергида.

Для внедрения препарата в медицинскую практику, наряду фармакологическими испытаниями, необходимо разработать методы ег контроля и стандартизации и на их основе нормативную документаци на лекарственную форму.

Целью настоящей работы явилась разработка методик фармацевтического анализа тропоксина и его лекарственной формы - таблето по 50 мг, стандартизация показателей и норм качества, составлени проектов Временных фармакопейных статей на субстанцию и лекарственную форму.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить еле дующие задачи:

- изучить физико-химические и химические свойства тропоксин (спектральные характеристики, растворимость, прозрачность, цвет ность, рН растворов);

- изучить хроматографическое поведение препарата и его воз можных примесных соединений методами ТСХ и ВЭЖХ, разработать со ответствующие методики определения посторонних примесей в субстанции и лекарственной форме тропоксина;

-разработать методы количественного определения основног

вещества в субстанции и лекарственной форме тропоксина;

- изучить стабильность субстанции и лекарственной формы тропоксина и установить их сроки годности.

Научная новизна.

Впервые проведено комплексное изучение физико- химических свойств тропоксина - представителя нового класса химических соединений, являющегося оригинальным отечественным препаратом проти-вомигреневого действия. Изучены физико-химические свойства промежуточных продуктов синтеза тропоксина и установлены закономерности между их качеством и качеством целевого продукта, позволяющие стабильно получать тропоксин высокого качества. На основании изучения хроматографического поведения тропоксина и возможных примесных соединений установлено отношение веществ к различным сорбентам, системам растворителей и способам обнаружения, а также выбраны оптимальные условия их разделения и идентификации методами ТСХ и ВЭ5ЮС. Хроматографически изучено влияние различных факторов (рН, влажность, окислители) на субстанцию и лекарственную форму тропоксина. Показано, что препарат является достаточно лабильным соединением и легко подвергается процессам гидролиза и окисления. При комплексном использовании методов дериватографии и определения температуры плавления по ГФ XI установлено, что препарат не имеет четко выраженной температуры плавления и под влиянием высоких температур разлагается. Использование для изучения препарата термических методов (дериватография, высушивание при различных температурах до постоянной массы) в сочетании с титро-

вашем по К.Фишеру позволило установить, что для молекулы тропоксина характерно наличие как кристаллизационной, так и сорб-ционной влаги. Изучена стабильность субстанции и лекарственной формы тропоксина в различных условиях. Показано, что для установления их сроков годности использование метода "ускоренного старения" нецелесообразно, так как под воздействием высоких температур препарат разлагается.

Практическая значимость работы. Впервые были разработаны методики аналитического контроля и проведено комплексное изучение нового оригинального препарата из группы производных тропана -тропоксина, обладающего противомигреневым действием. Практические результаты исследований реализованы в проектах ВФС на субстанцию тропоксина и лекарственную форму (таблетки по 0,05 г).

Внедрение в практику. Методики анализа и стандартизации нового оригинального препарата с противомигреневым действием - тропоксина внедрены в Опытно-технологическом отделе и Лаборатории готовых лекарственных форм НЮ фармакологии РАМН для контроля его качества. Полученные данные вошли в проекты ВФС на субстанцию и лекарственненную форму тропоксина.

Апробация работы. Основные результаты выполненной работы были доложены на Российской национальной конференции "Формирование приоритетов лекарственной политики" (Москва, 1995 г) и на межлабораторных конференциях НИИ фармакологии РАМН (1995-1997 г).

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках государственной научно-технической программы "Создание лекарственных средств методами химического и биологического синтеза" (Направление 02.09) и в рамках плановой теш НИР НИИ фармакологии РАМН - "Изыскание новых лекарственных средств на основе рецепторных механиз-

мов действия" (Номер гос.регистрации 01950002859).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликованы 3 работы.

На защиту выносятся: результаты комплексного изучения физико-химических и химических свойств нового оригинального противо-мигреневого препарата - тропоксина, полученные с использованием термических, спектральных, хроматографических методов анализа, а именно, результаты экспериментальных исследований:

- по разработке методик анализа субстанции и лекарственной формы тропоксина;

- по разработке методик определения качества промежуточных продуктов синтеза тропоксина и проведению постадийного контроля в процессе его производства;

- по изучению влияния различных факторов на стабильность субстанции препарата и его лекарственной формы.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, четырех глав экспериментальных исследований и списка литературы. Работа изложена на Й&б'страницах машинописного текста, содержиттаблиц,2.6 графиков и рисунков. Библиографический указатель включает ¿Щ источников, из них источников отечественной литературы.

Во введении сформулированы актуальность темы, цели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе обобщены литературные данные по фармакологической активности лекарственных препаратов группы тропана, их физико-химическим и химическим свойствам и методам анализа. Показано, что для их анализа наиболее широко применяются титриметри-ческие, оптические и хроматографические метода.

Вторая глава диссертации посвящена изучению свойств противо-

мигреневого препарата тропоксина и разработке методик его анализа.

Третья глава посвящена разработке методик контроля производства тропоксина и содержит показатели и нормы качества всех исходных и промежуточных продуктов синтеза, а также методику определения конца реакции на последней стадии синтеза.

В четвертой главе описано изучение устойчивости тропоксина к воздействию кислорода, света и влаги воздуха, а также к воздействию окислителей и рН среды методом хроматографии в тонких слоях сорбента. Представлены результаты эксперимента по разработке условий хранения и установлению срока годности субстанции.

В пятой главе описана разработка методик аналитического контроля для лекарственной формы тропоксина - таблеток по 0,05 г и приведены данные по установлению срока их годности.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Изучение физико-химических свойств и разработка методик анализа субстанции тропоксина

Объектами нашего исследования являлись субстанция тропоксина, исходные и промежуточные продукты синтеза, твердая дозированная лекарственная форма - таблетки по 0,05 г.

В процессе исследования были использованы методы: УФ- и ИК-спектроскопии; дэриватографш, высушивания в изотермическом режиме, ГСХ, ВЭЖХ, а также титриметричёские.

Физико - химические свойства тропоксина

В соответствии с требованиями ГФ XI для субстанции тропоксина были установлены нормы качества препарата по показателям: внешний вид, растворимость, прозрачность, цветность и рН раство-

ров. Для анализа тропоксина предложено использовать легкую растворимость тропоксина в воде и умеренную растворимость в хлороформе.

Оптическая активность тропоксина в ультрафиолетовой области спектра обеспечивается наличием в его химической структуре остатка 3,4,5-триметоксибензойной кислоты. Поэтому при изучении спектральных характеристик препарата были сняты УФ- спектры обоих соединений в воде, 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной и спирте этиловом 95 % в области длин волн от 200 до 400 нм и расчитаны основные оптические характеристики электронных полос поглощения.

Исследования показали, что все изученные растворы препарата имеют близкие спектры поглощения с выраженным максимумом в области 272 нм. Наибольшее различие в максимумах поглощения растворов тропоксина и 3,4,5-триметоксибензойной кислоты, наблюдается при использовании в качестве растворителя воды (Рис.1). Поэтому вода была выбрана нами для целей спектрофотометрического анализа тропоксина.

При анализе Ж- спектра тропоксина, снятого в таблетках ка-

ч

лия бромида были отмечены полоса поглощения при 1725 см, отнесенная нами за счет колебаний карбонильной группы в сложноэфирном фрагменте молекулы препарата, полосы поглощения в области от 965 см до 910 см[ обусловленные валентными колебаниями N-0 связи ок-симного фрагмента молекулы, а также полосы поглощения при 1428 см и 1420 см', характеризующие валентные колебания м- метильного фрагмента тропанового цикла. Присутствие в молекуле тропоксина значительных количеств воды обуславливает наличие в его ИК-спектре ряда полос поглощения в области 3600-3200 см'.

В результате сравнительного изучения тропоксина спектральными методами была подтверждена его химическая структура и показана возможность их использования для целей идентификации. Методы УФ-

и ИК- спектроскопии были включены в раздел "Подлинность" проекта ВФС на субстанцию.

При определении температуры плавления тропоксина по ГФ XI установлено, что препарат разлагается под действием высоких тем-

и 3,4,5-триметоксибензойной кислоты в воде

1 - тропоксин

2 - 3,4,5- триметоксибензойная кислота

образца. Точка разложения растянута и трудно определяется. Для изучения процесса термической деструкции тропоксина был использован метод дериватографии. На кривой нагревания тропоксина разложению препарата соответствует наличие 2-х экзотермических эффектов. Первый, слабовыраженный, наблюдается в интервале температур от 130- 175°С, характеризует начало термической дес-

трукции и проявляется незначительным изменением цвета образца. Второй, сильновыраженный, экзотермический эффект (175,0-190,0 °С) был нами отнесен к почернению и вспениванию анализируемой пробы. Он сопровождается резким изменением ее массы. Полученные данные выявили нецелесообразность использования температуры плавления для оценки качества тропоксина.

Установление показателя "Потеря в массе при высушивании".

При определении потери в массе при высушивании в тропоксине был обнаружен высокий процент остаточного влагосодержания (около 8 %). Опытным путем было найдено, что наиболее оптимальным режимом сушки тропоксина является высушивание препарата при 105 °С б течение 3 часов. На дериватограмме тропоксина в интервале температур от 45 до П0°С наблюдается четко выраженный эндотермический эффект, отнесенный за счет процесса дегидратации.

Для изучения причины высокого влагосодержания в тропоксине, а также природы влаги были предприняты определение воды в препарате методом К. Фишера и определение остаточного растворителя методом ГЖХ. Присутствие абсолютного этанола в образцах субстанции обнаружено не было. При этом данные по определению влаги методом К.Фишера практически совпадали с результатами, полученными методом высушивания (Таблица I). Поэтому было сделано заключение, что высокая потеря в массе в препарате обусловлена только присутствием в нем воды.

Для установления природы связывания воды с молекулой тропоксина были изучены способность препарата к поглощению вообще, а также в зависимости от влаги, уже имеющейся в тропоксине. Изучение проводили в нормальных условиях, и в условиях камеры с 90 % влажностью. Содержание поглотившейся тропоксином влаги уста-

Таблица 1

Результаты определения влаги в тропоксине

различными методами

номер

содержание воды в %

образца • м-д Фишера 1 высуш-ние при юъ о1

3-92

2-92

1-92

6,97 7,02 7,04

б,92 7,02

в,53

навливали путем взвешивания образцов. Общую влагу в момент окончания эксперимента определяли методом высушивания. Зависимость поглотительной способности тропоксина от исходного содержания влаги представлена на рисунке 2.

Исследования показали, что содержание в препарате не менее чем 4,5 % влаги, что соответствует I молекуле кристаллизационной вода (теоретически 4,55 %), является характерным для тропоксина. Достаточно легкое удаление и такое же быстрое поглощение этого количества воды говорит о слабой координационной связи между молекулами. Вода, присутствующая в препарате свыше 4,5 % является сорбционной. В нормальных условиях препарат содержит около 7,5 % вода и способен поглощать дополнительно до 10 % влаги из воздуха без изменения своего агрегатного состояния. Полученные данные были подтверждены дериватографически.

Сходство химического строения тропановых производных, единая схема их разложения являются причиной определенных трудностей, связанных с разработкой специфических реакций подлинности для данной группы соединений.

Химические свойства тропоксина

тропоксина от исходного содержания влаги.

1 - кривая зависимости образцов тропоксина,

высушенных до постоянной массы

2 - кривая зависимости образцов тропоксина, не

подвергавшихся высушиванию до постоянной

массы

Была проанализирована возможность взаимодействия тропоксина с рядом общеалкалоидных осадительных реактивов. На основании экспериментальных данных, в качестве химических реакций, подтверждающих подлинность тропоксина предложены реакции с реактивом Драгендорфа, с раствором фосфорномолибденовой кислоты и с раствором танина. Так как тропоксин является хлористоводородной солью органического основания для идентификации препарата использовали реакцию на хлориды. Последняя включена нами в проект ВФС.

Для количественной оценки трогоксина в субстанции были использованы его основные свойства. Определение проводили методом кислотно- основного титрования в среде уксусного ангидрида и кислоты муравьиной (20:1). Правильность перехода окраски индикатора кристаллического фиолетового подтверждена потенциометричес-ки. Дополнительно количественную оценку трогоксина проводили методом аргентометрического титрования по Фольгарду. Метрологические характеристики используемых методов количественного определения тропоксина в субстанции представлены в таблице 2.

По фактическим данным, полученным обоими методами, содержание действующего вещества в образцах препарата составляет от 98,83 до 101,41 %. Поэтому предлагаем нормировать содержание тропоксина в субстанции от 98,50 % до 101,5 % в пересчете на сухое вещество.

Таблица 2

Метрологические характеристики метода кислотно-основного титрования в среде уксусного ангидрида и муравьиной кислоты и метода аргентометрического титрования по Фольгарду для количественного определения тропоксина в субстанции (Р=95 %,п=5)

1 Название 1 Способ опре- 1™ - ------- г 1 1 1 1

метода деления точки эквивал-сти ХД Б Ч АХ

1 невод, титрование 1 1 индикатор 1 99,98 1 1 0,11 1 0,05 1 0,13 1 1 0,13

1 1 потенциометр. ' 99,22 ' 0,35 1 ' 0,16 'о,43 '0,44 '

аргенто- 1 ' 1 1 1 1 1

метрич. индикатор 99,04 0,37 0,17 0,46 0,46

тит-ние

Использование хроматографии для анализа тропоксина Исходя из химической структуры тропоксина возможными при-

месями в препарате могут быть оксим тропинона, 3,4,5- триметок-сибензойная кислота и тропинон. Для определения "чистоты" субстанции тропоксина нами использовались методы ТСХ и ВЭЗКХ.

При выборе условий анализа препарата методом ТСХ были опро-бированы 12 систем растворителей, из которых наиболее оптимальной оказалась смесь состава: хлороформ;-этанол-аммиака раствор концентрированный (7:3:0,1). Значения изучаемых веществ, коэффициенты их разделения в системе и величина ее разделяющей способ-

ности на пластинках Silufol-UV'254 И Kieselgel 60Fn

представлены

в таблице 3.

Таблица 3

Характеристики хроматографической системы, выбранной для разделения веществ

Состав

пары

п-

Silufol-UV254

1 Rf ^

Kiesel gel 60F,.

тропоксин тропинон

0,54

1 DP

~Г

R~f

Т

3,6

0,78 0,63

т-—г

1,4

DP

тропинон

0,54

оксим тропинона 0,23

6,2 1,0

0,63 0,40

1-1

2,3

1,0

'-1—^ „„ I

оксим тропинона 0,23

3,4,5-ТМБ-кис- 2,4

лота

0,12

0,40 0,15

3,3

Хроматографированию подвергались хлороформные растворы тропоксина и веществ свидетелей. В качестве свидетелей использовали все указанные ранее соединения. Обнаружение зон адсорбции веществ осуществляли с помощью УФ- света с длиной волны 254 нм и парами иода. Данные условия проведения анализа использовались нами в дальнейшем во всех случаях изучения тропоксина методом ТСХ. В ходе анализа в образцах субстанции была обнаружена примесь 3,4,5- триметоксибензойной кислоты. Примеси оксима тропинона и

грошшона обнаружены не были. Они появлялись в препарате толь» в процессе длительного хранения тропоксина под воздействием таки: факторов как овет и влага воздуха. Поскольку технологически н удавалось получить тропоксин без примеси кислоты, а также, в свя зи с тем, что она является одним из продуктов гидролиза тропокси на, имеет высокий предел обнаружения (0,2 мкг) и может служит критерием качества субстанции, ее содержание необходимо было нор мировать. Качественными считались образцы тропоксина с содержа нием примеси 3,4,5- триметоксибензойной кислоты не более 1,0 % п сравнению со свидетелем.

При подборе условий хроматографического изучения тропоксин методом ВЭЖХ исследования проводили на жидкостном хроматограф Ferkxn-Eimer, снабженном УФ- детектором с переменной длиной волны. В качестве аналитической использовали длину волны 272 нм. Та как оксим тропинона и тропинок оптически неактивны в данной об ласти спектра, разработку методики определения посторонних при месей в субстанции проводили с учетом только 3,4,5- триметокси бензойной кислоты. Исследования показали, что оптимальное разде ление тропоксина и кислоты наблюдается в подвижной фазе состава: ацетонитрил - метанол - раствор фосфатного буфера (120:80:100) Хроматограмма модельной смеси представлена на рисунке 3. Коэффициент удерживания для тропоксина составляет 2,59 мин, а дл$; 3,4,5- триметоксибензойной кислоты 0,76 мин.

Для количественной оценки содержания примеси кислоты в сус станции тропоксина использовали метод абсолютной калибровки. Мб трологические характеристики метода ВЭК для количественного ог ределения 3,4,5-триметоксибензойной кислоты представлены в таблице 4.

л/

лремя

--1-1-ц-«->■ .

о г.о 4.о $д г,о (мин)

Рис.3 Хроматограмма модельной смеси тропоксина и 3,4,5- -триметоксибензойной кислоты

1 - тропоксин

2 - 3,4,5- триметоксибензойная кислота

Таблица 4

Метрологические характеристики метода ВЭЖХ для количественного определения примеси 3,4,5- триметоксибензойной кислоты

в тропоксине

•номер мод. смеси I л. 1 У.,Га 1 3 3Х 1 ■ 1 ЛХ Г " 1

1 I '98,84 ' 1,53 ' 0,68 ' 1,89 ' 1,91 '

2 99,20 Г,62 0,72 2,00 2,02

3 100,36 1,59 0,71 1,94 1,97

Сопоставление данных хроматографического изучения тропоксин; методами ТСХ и ВЭЖХ показало, что результаты анализа практичесга совпадают. Разработанная методика ТСХ была включена в разде. "Посторонние примеси" проекта ВФС на субстанцию.

Тропоксин - 3-(3,4,5-тршетоксибензоилоксиимино-)8-метил-8-азабициклосз,2,1зоктана гидрохлорид синтезирован в НИИ фармакологии РАМН.

Синтез серийных образцов препарата осуществлен в химико-технологической лаборатории опытно- технологического отдела и состоит из 3-х стадий:

Контроль производства тропоксина.

X

\м-сн I_:

Е>

\|-сн3 \_ .. -/ / - и:

тропинон (I)

оксим тропинона (и)

II

ОСН_ -

3,4,5- триметоксибен-зойная кислота (IV)

он

3,4,5- триоксибен-зойная кислота (ш)

ОСИ,I осн.

"'оск. °

0>

оси.

хлорангидрид 3,4,5-гриметоксибензойной кислоты (V)

iii

= м- он

+

осн_ I осн. -'оо-и

(Щ

осн.,

о

3- (3,4,5-тршетоксйбензоилоксиимино-)8- метил-8-азабидикло 3,2,1 октана гидрохлорид (vi)

Получение субстанции фармакопейного качества во многом зависит от качества исходных и промежуточных продуктов синтеза. Галловая и 3,4,5- триметоксибензойная кислоты являются достаточно широко используемыми химическими реагентами. Тропинон и оксим тропинона относятся к соединениям, малоизученным с аналитической точки зрения. Однако, найденные нами литературные источники не содержат достаточной информации, необходимой для характеристики качества указанных веществ как исходных и промежуточных продуктов синтеза. Поэтому нами были разработаны методики анализа и установлены нормы качества веществ по показателям: внешний вид, температура плавления, потеря в массе при высушивании, посторонние примеси и количественное содержание основного вещества.

Поскольку при хранении оксима тропинона в нормальных условиях со временем отмечалось появление или усиление окрашивания образцов, что, в свою очередь, может послужить причиной оттенка у субстанции тропоксина, была изучена устойчивость оксима (и) к

воздействию света, окислителя и pH водных растворов. Исследован! проводили методом ТСХ в условиях, разработанных для анализа сус станции. Обнаружение пятен на хроматограммах осуществляли с поме щью паров иода и 0,1 % спиртовым раствором бромкрезолового пу^ пурного. Использование дополнительного способа обнаружения вызве но низкой специфичностью паров иода. Проведенные исследоваш показали, что основным продуктом разложения оксима тропинона i всех случаях является тропинон, и позволили установить налич! прямой зависимости между интенсивностью окраски образцов соедине ния ix и присутствием в них определенных количеств примеси трош нона. Вследствие легкой окисляемости оксима (и) на последней стадии синтеза предложено использовать только свежеперекриста; лизованный оксим тропинона, по качеству отвечающий установленнь нормам.

Для 3,4,5-триметоксибензойная кислоты было установлено отсутствие зависимости качества образцов от факта проведения у перекристаллизации. Все разработанные нормы качества на исхо; ные и промежуточные продукты синтеза тропоксина представлены таблице 5.

Для стадии получения тропоксина была разработана метода определения конца реакции методом ТСХ на пластинках siiufoi-uv2i Конец реакции устанавливали по количеству в реакционной масс исходного оксима тропинона. Для обнаружения исследуемых вещест! применяли 0,1 % спиртовой раствор бромкрезолового пурпурногс Анализ качества технических образцов тропоксина осуществляли г методикам, предусмотренным проектом ВФС на субстанцию. На основг нии полученных данных было установлено, что оптимальным варианте кристаллизации тропоксина является абсолютный этанол с добавле нием активированного угля. При использовании данного метог кристаллизованные образцы препарата не содержат примесей промеж^

Таблица 5

Показатели качества для исходных и промежуточных

1 Наименование'Внешний ввд' 'Температура ■1 - "1 Потеря в тех 'колич.1

продукта плавления, массе %, Отсут. сод-е

°С не более приме- не ме-

сей в нее Д

тропинон Белый с кре- 40,5- i 1 1 i 97,0

мовым оттен- - 20 мкг

ком или кре- 44,5

мовый крист.

порошок

1 оксим 1 Белый или 1 i 1 1UU мкг! i

тропинона белый с кре- 111,0- 0,00 доп.пятно 97,0

моватым от- 114,0 не более

тенком цвета пятна

свидетеля

' 3,4,5-три- 'крист.пор-к' 230,0- 1 i i 50 мкг i

оксибензой белого цвета 10,0 99,0

ная (гал- с сероватым, 236,0

ловая к-та) серовато-

желтоватым

цветом

' 3,4,5-три- Кристалли- 1 i i i

метоксибен ческий по- 164,0- 1,0 100 мкг 98,0

зойная рошок бело 168,0

кислота го цвета

точных продуктов синтеза. Полученные результаты и разработанные методики были использованы при наработке субстанции препарата и оформлении технологической документации на получение тропоксина.

Устойчивость тропоксина к воздействию различных факторов Наличие сложноэфирного фрагмента в молекуле тропоксина обуславливает высокую лабильность препарата при воздействии различных факторов, а также характер возможных превращений.

Было проведено изучение устойчивости субстанции к воздействию света, кислорода,влаги воздуха, окислителей и рН растворов. Качество субстанции в процессе хранения оценивали по показателям: внешний вид и посторонние примеси. Изменения внешнего вида уста-

навливали визуально. Наличие в препарате примесей и степень егс разложения в субстанции и растворах определяли методом ТСХ в условиях, предусмотренных проектом ВФС.

Исследования показали, что при длительном влиянии кислорода, света и влаги воздуха цвет верхнего слоя кристаллов тропоксина г процессе хранения изменяется от белого до белого с кремоватыг» оттенком.

Основным путем деструкции тропоксина является его гидроли; по сложноэфирной связи с образованием оксима тропинона и триме-токсибензойной кислоты. Затем оксим тропинона под влиянием светг окисляется до тропинона. Суммарное содержание примесей в образца} субстанции,,вне зависимости от влияющего фактора, к моменту окончания эксперимента (3 месяца) составляло 2,4- 3,5 %

Анализ водных растворов тропоксина с различным значением рН показал, что в растворе с рН 7,5 препарат разлагается в 3-4 раза быстрее, чем в кислой и нейтральных средах. Так за 7 суток эксперимента в растворе с рН 7,5 подвергалось разложению до 85 % тропоксина, с рН 2,0 до 13 %, а с рН 5,0 до 4,0 % препарата.

В растворе препарата в присутствии окислителя за 10 суток хранения содержание разложившегося препарата составляло 8-10 %.

На основании полученных данных были разработаны следующие условия хранения субстанции: в естественных условиях в защищенном от света месте.

Тропоксин не выдерживает действия повышенных температур, поэтому применение метода "ускоренного старения" для установлена его срока годности было невозможно. Образцы субстанции препарат? хранили в естественных условиях в течении 5 лет. В качестве упаковки использовали банки оранжевого стекла с прокладками и навинчиваемыми крышками, а также банки оранжевого стекла с натягиваемыми пластмассовыми крышками.При выпуске, а затем через равные

промежутки времени проводили полный анализ образцов по всем показателям качества, предусмотренным проектом ВФС на субстанцию.

Проведенные исследования показали, что в течение всего срока хранения качественные характеристики тропоксина оставались практически без измененений и соответствовали требованиям проекта ВФС. Оба вида упаковки можно рекомендовать для хранения препарата.

Аналитический контроль таблеток тропоксина.

На основании результатов доклинического изучения тропоксина была рекомендована лекарственная форма препарата - таблетки по 0,05 г.

Разработку методов анализа и установление норм качества лекарственной форш проводили на 5 сериях таблеток. Были определены средний вес, отклонение от среднего веса и распадаемость таблеток. Качество лекарственной формы по указанным показателям соответствовало требованиям статьи "Таблетки" ГФ XI.

Так как УФ- спектр водного раствора препарата имеет характерную форму и четкий максимум поглощения при длине волны 272 нм, данный метод был использован нами для идентификации тропоксина в таблетках. Помимо этого, в раздел "Подлинность" проекта ВФС на лекарственную форму был включен метод ТСХ по свидетелю.

Присутствие в образцах таблеток посторонних примесей устанавливали также методом ТСХ. Исследования показали, что содержание примеси 3,4,5-триметоксибензойной кислоты в лекарственной форме не превышает 1,0 %. Других примесей обнаружено не было.

Для количественной оценки содержания тропоксина в таблетках использовали спектрофотометрический метод (СФ) при длине волны 272 нм. Вспомогательные вещества, входящие в состав лекарственной форш не поглощают в данной области спектра и не мешают определе-

нию. В качестве растворителя использовали воду. На модельных оме сях было показано, что разработанная методика количественног анализа отличается достаточно высокой точностью и воспроизводи мостью. Данная методика была включена нами в проект ВФС на лекар ственную форму, а также использовалась для определения показателе "Однородность дозирования". Метрологические характеристики спек-трофотометрической методики количественного определения тропок си-на в таблетках представлены в таблице 6.

Таблица 6

Метрологические характеристики СФ- методики количествен-

ного определения тропоксина в таблетках (Р=95 %,п=5)

•номер 1 1 ъзято 1 г - -■ 1 '1 1 1 1 1

п/п тропок- Х,Г 3 Б— >; АХ

сина, г

' I 1 ' 0,1998 'о,1999 'з,9-1ба' 1,7-103 '2,78 'з,7-1ба' 'I,50'

2 0,2006 0,2006 3,2-103 1,4 -103 2,78 3,9*1б3 1,90

3 0,1923 0,1923 2.2-163 1,0-Ю3 2,78 2,7-1б3 1,42

Тест "Растворение" таблеток проводили на приборе "Вращающая ся корзинка".Средой растворения служила вода. Установлено, что уже за первые 10 минут эксперимента в раствор переходит не менее 95 % тропоксина. В проекте ВФС качество таблеток по данному показателю предложено нормировать как высвобождение за 15 минут не менее 90 %.

Для установления срока годности лекарственной формы тропоксина образцы таблеток хранили в естественных условиях в течение 3-х лет. В качестве упаковки использовали банки оранжевого стекла с навинчиваемыми крышками. При выпуске, а затем через равные промежутки времени проводили полный анализ исследуемых образцо: таблеток тропоксина по всем показателям качества, предусмотренны! проектом ВФС на лекарственную форму. На протяжении всего срок; хранения все показатели качества таблеток оставались практически

без изменений, что позволило рекомендовать выбранную упаковку для хранения лекарственной формы. Срок годности таблеток тропоксина установлен как 2 года в естественных условиях, в защищенном от света месте. Исследования по изучению стабильности лекарственной формы в процессе хранения продолжаются. Дополнительно таблетки хранят в контурной ячейковой упаковке.

Разработанные в результате исследований методики аналитического контроля и установленные показатели качества стали основой для составления проекта ВФС на лекарственную форму.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Впервые проведено изучение физико-химических и химических свойств нового лекарственного препарата противомигреневого действия - тропоксина.

2. Изучены спектральные характеристики тропоксина (УФ-, ИК-, 1ЖР-), проведена их интерпретация. Установлена возможность использования этих методов для идентификации тропоксина в субстанции и лекарственной форме.

3. С помощью ТСХ и ВЭЖХ методов анализа изучено хроматогра-фическое поведение тропоксина, промежуточных продуктов его синтеза и продуктов разложения. Разработаны методики определения посторонних примесей в препарате.

4. Разработаны методы аналитического контроля и установлены нормы качества промежуточных продуктов синтеза тропоксина- 3,4,5-триметоксибензойной кислоты и оксима тропинона. Изучено влияние качества промежуточных продуктов синтеза на выход и качество тропоксина, проведен контроль производства.

5. С помощью термических методов анализа изучен характер процесса разложения тропоксина при повышенных температурах. Уста-

новлено, что с повышением температуры препарат разлагается и I имеет характерной температуры плавления.

6. Методами дериватографии и высушивания до постоянной масс определен характер содержащейся в тропоксине влаги. Установленс что препарат в естественных условиях содержит не менее 4,5% крис] таллизационной воды и, в зависимости от влажности окружающей сре да, способен поглощать до 10 % воды дополнительно.

7. Исследованы пути разложения тропоксина в нейтральной кислой и щелочной средах. Изучено влияние света, кислорода и влаги воздуха, а также окислителей на стабильность и качеств тропоксина. Показано, что основными продуктами разложения пре парата являются оксим тропинона и 3,4,5- триметоксибензойная кис лота. Проведена полуколичественная оценка степени разложения пре парата в зависимости от влияющего фактора.

8. Разработана УФ-спектрофотометрическая методика определе ния количественного содержания действующего вещества в лекарстве ной форме тропоксина - таблетки по 0,05 г. Предложены услов!! проведения теста "Растворение" таблеток, определен показатед "Однородность дозирования".

9. Предложены методики ТСХ для идентификации тропоксина в таблетках, а также для определения посторонних примесей в лекаре венной форме.

10. Изучена стабильность тропоксина в субстанции и лекарст венной форме при хранении в естественных условиях: субстанции -течении 5 лет, таблеток- в течении 4 лет.

11. На основании проведенных исследований разработаны мете дики контроля и установлены показатели качества препарата и ег лекарственной формы. Разработаны проекты ВФС на трогоксин и таС летки тропоксина по 0,05 г.

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ:

1. Изучение природы и установление нормы содержания влаги в лекарственном средстве из группы производных тропана /А.И. Попова,В.Ю. Решетняк, О.Б. Степаненко, Б.М. Пятин // Формирование приоритетов лекарственной политики: Матер, докл. Росс. нац. науч.конф.- Москва,1995.-С. 134-135.

2. Определение чистоты нового лекарственного средства из группы производных тропана / А.И. Попова, Е.А. Чеснокова, 0.Б.Степаненко, Б.М. Пятин // Формирование приоритетов новой лекарственной политики: Матер. докл.Росс. нац. науч.конф.-Москва,1995. С.135-136.

3.Изучение влияния различных факторов на стабильность водных растворов тропоксина / А.И. Попова, Б.М. Пятин, О.Б. Степаненко, O.A. Михайлова // Человек и лекарство:Тез. докл.III Росс. нац. конгр.- Москва,1996.- C.I94.

пмп мне 3.722 т.100 - 97 г. Москва, новая .Басманная, ь