Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Токсиколого-гигиеническая оценка микроорганизмов-продуцентов как загрязнителей производственной среды (к обоснованию принципов, методов и иммунологических критериев их санитарнойстандартизации)



МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР ЛЕНИНГРАДСКИЙ САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

Квятковская Изабелла Яковлевна

УДК 615.9:614.7

ТОКСИКОЛОГО-ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

МИКРООРГАНИЗМОВ-ПРОДУЦЕНТОВ

КАК ЗАГРЯЗНИТЕЛЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

(к обоснованию принципов, методов и иммунологических критериев их санитарной стандартизации)

(14.00.07. — гигиена)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

ЛЕНИНГРАД - 1990

Работа выполнена в Рижском медицинском институте

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор АРТАМОНОВА В. Г. доктор медицинских наук доцент МИХЕЕВ М. И. доктор медицинских наук профессор РЕТНЕВ В. М.

Ведущая организация — Научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний АМН СССР

Защита диссертации состоится «_» __ 1990 г. в

_ часов на заседании Специализированного совета Д.084.21.01

по защитам диссертаций при Ленинградском санитарно-гигиеническом институте МЗ РСФСР (195067, Ленинград, Пискаревский пр., 47).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЛСГМИ.

Автореферат разослан «_»_ 1990 г.

Ученый секретарь Специализированного сс доктор медицинских на

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБО'Ш

Актуальность проблемы. Б многообразном лекса проблем, разрабатываемых сегодня специалистами в области профилактической медицинн-гигиенистами, токсикологами, профпатологами и представителями других смежных отраслей знаний, В1 з больше выступают на первый план вопроси профилактики неблагоприятных воздействий на организм человека пг-екцияльно токсичных химических и -биологических веществ.

Вновь вводимые в народное хозяйство новые химические соединения и продукты микробиологического синтеза во все возрастающих масштабах продолжают загрязнять как производственную, тал и окружающую среду, в связи с чем проблемы предотвращения этих загрязнений тесно связаны сегодня с общими проблемами современной экологии.

Весьма показательно, что в "Итоговом документе венской встречи представителей государств-участников совещания по безопасности и сотрудничеству в Европе" и качества самостоятельного выделен раадел "Окружающая среда", в котором отмечается первоочередная "необходимость поддержания и восстановления экологического равновесия в атмосфере, водах, почве".

Сказанное выше в полной мере относится к биологическим загрязнителям производственной и окружающей среды.

Как известно, основным компонентом любого биоте^нологичес-кого процесса являются микроорганизмы-продуценты, широкое использование которых позволяет получать весьма ценные и крайне необходимые для различных отраслей современного народного хозяйства вещества: антибиотики, ферменты, аминокислоты, кормовие добавки, бактериальные удобрения инсектициды.

ЦелыМ рдд авторов (В.Г.Артамонова, Л.А.Курмаевд, '.Г,Г.0м?\яья~

нец, В.П.Падалкин) изучали и последние годы влияние на организм человека биологических факторов производственной среды. Для предотвращения неблагоприятного воздействия этих факторов били разработана методические указания по их гигиенической регламентации. Однако, принципиальные положения этих указаний основаны на данных по изучению, преимущественно, отдельных-групп микроорганизмов. Между тем, особенности развития биотехнологии за последние годы, постоянное увеличение количества новых штаюшв и опыт, накопленный специалистами, по их изучению, диктует необходимость и создают реальные предпосылки для разработки боле? универсальных методических подходов к гигиеническому нормированию промышленных микроорганизмов, базирующихся на изучении взаимосвязи как общих, так и специфических механизмов их вредного действия на макроорганизм. Разумеется, что при отом чрезвычайно важно учитывать реальную экологическую ситуацию в конкретных регионах их производства.

Цель работы - дать токсиколого-гигиеническую оценку мик-роорганизтев-продуцентов как загрязнителей производственной среди; обосновать принципы, методы и иммунологические критерии их санитарной стандартизации.

Для реализации указанной цели предстояло редить следующие конкретике задачи:

1. Изучить в эксперименте особенности влияния различных групп промшгленних микроорганизмов (бактерии, ¡теснеьив к црожжеяодобные грибы) на эубиоз кишечника и иммунологическое состояние макроорганизмг

2. Оценить отдельные эоен'' патогенеза развития патологических состояний, вызываемых промышленными микроорганизмами.

3. Выявить зависимость между силой адгезии исследуемых микроорганизмов к клеткам макроорганизма хозяина, аллергенной способностью штаммов и колонизационной резистентностью биоценоза.

4. Обосновать возможность использования показателя адгезиз-ности в качеств^ одного из критериев при решении с гигиенических позиций вопроса о внедрении штаммов в крупнотоннажное производство.

5. Выяснить роль и значение зу'биоза и иммунологических реакций в механизме развития патологического процесса, возникающего у лиц, работающих с кивой культурой.

6. Обобщить и подвергнуть клинико-статистическоыу анализу данные углубленного медицинского обследования контингентов работающих в цехах чистой культуры, а также контактирующих одновременно и с микроорганизмами-продуцентами, и с химическими веществами (амшгч, формальдегид и др.).

7. Разработать критерии профотбора для изучаемого контингента, а также комплекс гигиенических, саиитарно-технических и лечебно-профилактических мероприятий. ,

Научная новизна работы заключается в том, что на осно'чнии экспериментального моделирования окологич ских токсикобиологи-ческих эффектов, нарушающих физиологические функции макроорганизма, изучены дисбиотическое и иммуномсдулирующеч действие промышленных микроорганизмов-продуцентов.

Наряду с дисбиозом толстого кишечника изучалась пристеночная аутофлора тонкого кишечника, что позволило углубить представления о механизмах вред: )го воздействия промышленных шгаммои на организм.

Определение роли бактероидов в формировании аллергии и уст ■ новлении сияэи между силой адгезии штамЛоы и их сенсибилизируй-

щей активностью дает возможность производить дифференцированный выбор при внедрении в биотехнологию наименее опасных штаммов.

Доказана особенность градиента нарушения основных популяций Т-лимфоцитов (киллеров, регулирующих клеток) в тимусе, селезенка, крови, как наиболее информативного критерия иммуномо-Аудирующего геар. иммунодепрессиьного эффекта изученных промышленных микроорганизмов-продуцентов. При этом, исходя из выраженности и совокупности характеристики нарушения иммуно-цитов и факторов резистентности, выделены классы опасности для бактерий и грибов.

Рас. аботала сокращенная схема экспериментальных исследований с целью гигиенического нормирования микробного фактора в воздухе рабочей зоны.

Изучены эффекты сочетанного действия химического и биологического факторов на иммунореактивность организма рабочих с учетом длительности и характера их контакта с производственными вредностями. При этом был применен оригинальный метод изучения субпопуляций розеткообразующих 'Г-клеток, включая зи-мозановьш B-лимфоциты, в сочетании с новым внутрикожным тестом выявления Т-клеток в коже к Т-зависимому антигену с.albicans и модулирующего гвзр. стимулирующего эффекта другого гриба Aspergillus fcerreua (свидетельствующего, возможно, о " элисенсибилизации) у часто болеющих ОРЗ по сравнению с редко болеющими рабочими.

Разработаны тесты, позволяющие i-щелить группы повышенного риска. Кроме того, установлено, что пр сочетанном контакте и химическими и биологическим^ факторами, наряду с высоким

риском развития патологических процессов у рабочих, часто болеющих ОРЗ, имеется определенный риск развития патологии у практически здоровых редко болеющих рабочих.

Теоретическое значение работы состоит в тон, что на оснсвз экспериментальных данных установлены особенности патогенеза патологических' нарушений, обусловленных промь- ценными, штаммами-продуцентами, определены степень и характер связей между иммуномодулирущим действием штаммов и вызываем« ими дисбак-териозом, что позволило углубить представление о механизме взаимодействия микро- и макроорганизмов, а таюе разграничить адаптацию от пред- и патологических нарушений. Результаты изучения адгезивной способности промышленных штаммов явились основанием для рекомендации оценивать указанные свойства в качестве одного из критериев в ряду других показателей при исследовании цитадгеэии.

Практическая значимость работы. Анализ и обобщение полеченных результатов позволили обосновать и разработать следующие методические рекомендации, гигиенические требсвшшя и санитарные стандарты:

1. Рекомендации по трудоустройству беременных женщин ка предприятиях, в организациях и учреждениях системы Министерства сельского хозяйства СССР, а также б колхозах. М.: М'З СССР, 1985.

2. Сравнительная оценка сенсибилизирующей активности дрож-жеподобных грибов попа оЯп<НЛа , предполагаемых к внедрений в производство кормовых белков. М. , 1986; Методические рекомендации.

3. Способ выявления иммуномоцулируюа'сго дсйотеия ми;:робных

препаратов. Рига.: шЗ ЛССР, 1989. Методические рекомендации.

4. Методические указания по обоснованию ПДК микроорганизмов-продуцентов и содержащих их готовых форм препаратов в воздухе рабочей зоны в атмосферном воздухе. - М.: МЗ СССР, 1990 г.

5. Система стандартов безопасности труда. Биологический фактор. Термины и определения. Отраслевой стандарт. ОСТ 59. 11.003.58-85. М.: МЗ СССР, 1986, '¿0 с.

6. Утверждены ПДК в воздухе рабочей зоны производственных помещений: Bacillus thuriinjisusis v.v.doadrolliaus.insectus, tínthcf.opíithora fchaxberiaaa., Aspergillus terraua,Candida Bal-

tose, rugosa,tropicalis,acotti. Внедрены на пред-

приятиях микробиологической промышленности.

7. Способ выявления иммуномодулирующего действия микробных препаратов. Изобретение. Авт. свлд. № I2I6I97 от 8.12.85 г.

8. Способ выявления сенсибилизирующей активности для промышленных микроорганизмов. Изобретение Пол.реш. от I4.0¿,89 г. -внедрен на предприятиях микробиологической промышленности.

9. Способ определения аллергии в условиях микробиологических производств. Изобретение. Пол. реш. от 30.06.89 г. - внедрен на предприятиях микробиологической промышленности.

10. Разработаны три рационализаторских предложения: модифицированная микробиологическая горелка (авт.св. J? 1907), штатив для внутритрахеального введения (авт.св. № 2562), затравочный блок (авт.св. № 2673). Используются в Р!Д1.

11. Практические рекомендации по улучшению условий труда переданы на НПО "Биолар" и Краснодарскую биофабрику.

12. Материалы диссертации используются при обучении студентов Рижского медицинского инст тута.

Апробация работы. Материалы работы докладывались на съезде

гигиенистов Армении (Ереван. 1983); на Всесоюзной конференции "Биологический фактор —производственная и окрукающая среды—здоровье человека" (Новополоцк, 1934); на Международной конференции "Биотехнология и новые токсические препараты защиты растений в свете зг даты окружающей среди" (София, 1986); на Всесоюзном съезде токсикологов (Ростов-на-Дону, 1986); на Всесоюзной конференции "Колонизационная резистентность, хиыиото-рапевтичеекие и антибактериальные препараты" (М., 1988); на Всесоюзной конференции "Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды" (Ташкент, 1988).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 40 работ,из которых две монографии: "Гигиено-профпатологическая характеристика антибиотиков и нитрофуралов", 1982 (соавт. Л.И.йзрайлет), "Методы чения хронического действия химических и биологических загрязнителей", 1987 (соавт. И.М.'Грахтенберг, Л.А.Ти-мофиевская), один научный обзор ^Гигиена труда при производстве микробных препаратов", ВНШМИ, 198Г-, остальные- статьи в периодической печати и сборниках.

Структура диссертации. Диссертация сос^ит из введения, шести глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает '¿ОЬ названий. Работа 'изложена на 305 страницах, содержит 12 рисунков и 9Э таблиц.

Осиовные положения, выносите на зящит.у:.

I) постановка эксперимента с целью санитарной стандартизации промышленных микоооргаилзмов-продуцентоа дол~ча проводиться в два этапа: первый- решение вопроса о допуске штамма и промышленное производство на .основе показателей патогенноеги, высевяекости и адгезивной способности, второй- гигиеническое

в

нормирование, которое предусматривает установление уровня воздействия изучаемого агента на эубиоз и иммунологический статус макроорганизма*,

2) особенности патогенеза развития патологических процессов при воздействии микробного агента на организм человека'характеризуется иммуномодулирующим эффектом на систему "Т- и В-лим-фоцит-макрофаг" с формированием вторичного иммунодефицита различной глубины, на фоне которого развивается дисбиоз кишечника различной степени выраженности;

3) выявление групп повышенного риска среди работающих на предприятиях микробиологической промышленности, где имеет место сочетанное действие химических и биологических загрязнителей, производится путем определения соотношения содержания Т-лимфоцитов-хелперов к Т-лимфоцитам-супрессорам; содержания В-лимфоцитов, а также проведением кожных проб на соответствующий штамм с учетом их иммунологического статуса. К группе риска отнесены лица« у которых при отсутствии клинических проявлений имеет место снижения Т-супрессоров, нарастание В-лим-фоцитоа, положительные кожные пробы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Методы, объекты и объем исследований. Работа проводилась в экспериментальных и производственных условиях. Были проведены острые, подострые и хронические опыты на 8877 лабораторных животных (мьши, крысы, морские свинки, кролики) с использованием 34 промышленных микроорганизмов-продуцентов (представители бактерий и грибов). Дана сравнительная оценка двух микробиологических производств. Проанализировано состояние здоровья 333 рабочих.

При первичной токсикологической оценке штаммов определяли вирулентность, способность к высеваемости из внутренних органов подопытных животных и адгезивные свойства. 3 хронических опытах изучали эубиоз кишечника. Для этого определяли количественный состав микрофлоры стенки тонкого и просвета тэлстого кишечника методом М.Э.Микельсаар с соавт. (1972). Согле но методике определяли общее количество анаэробов и аэробсв, а также количество лактобацилл, кишечных палочек, стафилококков, протеев, бактероидов и грибов рода Кандида. Всего произведено 76628 микробиологических исследований,

С целью определения иммунологического статуса макроорганизма в эксперимента определяли содержание Т-лммфоцитов (<Топ<1а1 въ аХ. , 1972), предшественников иммунорегулируклцих Т-лимфоци-тов (Ауто-РОК) по методу Сагоих вt а1. , В-лимфоцитов ( Цспйие , 1974), в тимусе, селезенке и крови. Иммуномодулирущео действие изучали в нашей модификации (Авт.св-во №1216197). Для определения функции В-системы иммунитета использовали электрофорез на ацетатных пленках (И.А.Пувларев, 1976). Фагоцитарная реакция нейтрофилов крови изучалась по общепринятой методике, согласно которой, оценивали индекс и процент фагоцитоза, индекс и процент переваривания, фагоцитарное число. Принимали во внимание клинические показатели крови, динамику относительной массы иммуно-компетентных органов. Всего проделано 32400 иммунологических исследований.

Для статистической обработки полученного цифрового материала использован метод вариационной статистики с вычислением М+и и определением уровней значимости по таблице Стькдента.

Санитарно-микробиологические исследования проводились на НПО "Биолар" г.ОлаЙке Латвийской ССР (произяодсгчс итакпноьой

кислоты) и на Экспериментальной биологической фабрике по производству средств защиты растений г.Краснодар. Взятие проб воздуха на бактериальную обсемененность осуществляли аппаратом Кротова и седиминтационнда методом"на чашки Петри с селективными питательными средами для каждого продуцента. Взято 571 проба. В цехе итаконовой кислоты проводили замеры содержания аммиака и формальдегида - колориметрическим методом по стандартной шкале. При изучении микроклимата проводили измерение температуры, влажности и скорости движения воздуха.

Медицинское обследование проводилось группой специалистов: терапевт, невропатолог, отоларинголог, дерматолог, гинеколог, аллерголог. Состояние здоровья оценивалось общепринятыми методами и приемами.

Поскольку важнейшими тестами иммунологического мониторинга являются показатели количества и функций Т-, В-лимфоцитов и макрофагов различных тканей организма, нами проводились следующие иммунологические исследования:

В крови определяли содержание тотальных Т-лимфоцитов (М.Доа <1а1 , 1972); теофиллин-резистентных Т-лимфоцитов-хелперов и теофиллин-чувствителькых Г-лимфоцитов-супрессоров ( в.Ыша-Ъ1Ъи1 ) 1978); термостабильных Т-лимфоцитов (К.даапвЪгоиеЬ , 1979); ауторозеткообразующих Т-лимфоцитов (.Х.Сагоцх , 1979); В-лимфоцитов (Ы.Кепйев , 1974).

Для оценки функциональной активности Т-лимфоцитов и макрофагов, а также особенностей кооперативного взаимодействия Т-, В-лимфоцитов и макрофаге . был применен набор иммунодерматоло-гиуеских теетоз: виутрикожны-' тест с фитогемаглютинином.тест с зимозаном (Х.М.Векслер, 1969), комбинированный внутрикожный тест с Т-ачтивг.чом и пирогеиалом (А.Ф.Блюгер, Х.М.Бекслер,

1987), комбинированный тест с аллергеном С. а-Мсапз и аллергенами исследуемых грибов, а также предварительно с этими грибами (в нашей модификации).

Проводилась оценка содержания основных лассов иммуноглобулинов , 1еМ , ( О.Мапс1п1 ), а также важнейших факторов неспецифической за чты организма^ клеточных (фагоцитарна? активность нэйтрофилов) и гумморальных (лизоцимная активность сыворотки крови, аутофяора кожи и бактерицидность кожи, микрофлора кишечника) общепринятыми методами.

Показатели заболеваемости статистически обработаны по таблицам В.С.Генеса (1967).

Часть исследований по иммунологии выполнена в соавторстве с И.М.Ремез.

Результаты исследований и их обсуждение. При проведении первичной токсикологической оценки иэучапи патогенность штаммов. При этом принимали во внимание вирулентность штаммов и способность к высеваемости из внутренних органов подопытных животных.

В результате оценки способности к высеваемости из внутренних органов нами установлено, что наиболее информативным является одноразовое введение штамма. Путей введения два: внутрибрюшин-ный, как традиционный в микробиологической практике, и чнутри-трахеальный, как наиболее адекьатный путь попадания в организм микробов в производственных условиях. Второй путь наиболее приемлем для изучения мицелиальных грибов, т.к. в дыхательные . пути вводится полностью культура, содержащая мицелий и споры, тем самым избегая нежелательного действия на брюшину. Выявлением места локализации и срока пребывания микробов в макроорганизме (выявление органа-мишеки-наиболее поражаемого орг&нз)

можно в последующем определить, адекватный выбор соответствующих показателей и избирательности действия штамма.

Особо следует рассмотреть адгезию микроорганизмов (способность прикрепляться). Ранее з^от критерий в практике гигиенической регламентации не использовался. Вместе с тем пате еннце микроорганизмы от непатогенных и условно патогенных отличаются по степени адгезии. Особо следует подчеркнуть, что природа феномена адгезии длительное время не изучалась (В.В.Овод,1982),

Однако, в последние годы сформировался единый методологический подход, позволяющий рассматривать взаимодействие микробных клеток с тканями макроорганизма в аспекте общих закономерностей явлений биологического узнавания. Регистрируя способности млкробны' меток прикрепляться к клеткам макроорганиэма, мож-нс оценить силу их адгезии, что характеризует степень их вредного действия на организм хозяина.

При оценке адгезивных свойств микробов использовали показатели СПА- средний показатель адгезии, ИАМ-индеке адгеэивности, К-коэффициент участия эритроцитов а адгезивном процессе.

Установлено, что у всех изученных нами штаммов СПА меньше I, чго расценивается как нулевое значение. Это дает основание утэервдать, что все эти штаммы ке патогенны.

Однако, дрожженодобные грибы рода СаасИйа между собой существеачо отличаются по способности адгезироваться на эритроцитах. При чем их адгезивная способность находится в прямой зависимости от их вредного действиям частности, от сенсибилизирующей активности. А по-скольку адгезивнеоть обуславливает вытеснение лактобацилл и другой жизненно важной микрофлоры со стенок слизистой кишечника и его крипт, что в свою очередь

приводит к дисбиозу к сдвигу иммунологическо? защиты, то нельзя при гигиеническом нормировании группировать штамм только по принадлежности к одному роду и даже семейству. Следует учитывать их видовую принадлежность и объединят в однородную группу лишь те микроорганизмы, которые связаны генетически.

Таким образом, вирулентность, высеваемость и адгеэивиость должны изучаться для всех новых перспективных штаммов на 1' этапе токсикологической оценки, когда решается вопрос о возможности допуска их в промышленное производство в качество продуцента.

п

Показатели - средняя вирулентная доза 10 м.т./жив.,высеваемость не белее 30 суток, едгезивность (СПА) менее 1,0 - должны служить критериями для разрешения или запрещения вводить итамм в технологический процесс промышленного производства.

При представлении штамма для гигиенического нормирования должен быть представлен паспорт штамма со следующими данными:

1. Полное название штамма.

2. Морфолого-культуральные свойства.

3. Биохимические свойства.

4. Физиологические свойства.

5. Услозия культивирования.

6. Токсикологическая характеристика: ВУ5о» сроки дисс.емина-ции из внутренних органов, орган-мишень, средний показатель адгезии.

Оценивать для всех штаммов местное раздражающее действие нецелесообразно, т.к. по нашим данным подавляющее большинство микроорганизмов им не обладает. Данный эффект следует изучать только у тех микроорганизмов, в паспорте которых указано, что они вырабатывают токсины.

Проведение одноразовых ингаляционных затравок в течение четырех часов (такая экспозиция общепринята в токсикологических исследованиях для получения пороговых концентраций) показало, что интегральные показатели не изменяются, а специф ческое действие при однократном попадании микроорганизмов в макроорганизм за столь короткий срок не успевает проявиться.

На основании исследований при одноразовых затравках представителей исследованных нами бактерий и грибов можно придти к заключению о возможности исключить этот ¡этап при обосновании гигиенических нормативов промышленных микроорганизмов-продуцентов.

С цель» изучения влияния промышленных микрооргениэмов-про-дуцентов на эубиоз кишечника теплокровного организма было проведено ряд серий опытов на белых крысах.

Из группы бактерий в сравнительном аспекте изучались Василия ^иг1пд1епе18 . Штаммы Вас. ЬЬиг1пб1ваз1я V. V. с1шзе1го1-11ти8,1пзеоЪиа вводились ингалпционно в течение четырех месяцев с проведением восстановительного периода в течение одного

п о А С

месяца. Исследовалисо дозы 1Э'м.т,/м и 10 м.т./м .

Штамш кигг^аЫ и 1егач1эпв18 вводились внутрижелудоч-но и внутрибрюшикно в течение одного-двух месяцев, в дозах от

7 Т9

10 ДО 10м.т./жив.

При анализе возникших изменений по срокам, можно заключить, что максимальные изменения проявляются через один месяц от на-чача опытов. Это относится ко всем трем путям введения штаммов в организм. Через две недели выявляются нарушения одного-двух видов микроорганизмов кишечника, но только при поступлении штаммов через желудок и эти изменения углубляются к концу первого месяца. В дальнейшем дисбиоз практически не претерпевает

каких-либо сдвигов. Изменения, если они имеют место и течение первого месяца, остаются на том же уровне.

При ингаляции штаммов denirollimus к концу первого месяца достоверно уменьшилось общее количество аэробов, увеличилось количество стафилококков и прогеев. Количество анаэробов уменьшено на 1,6 lg/r- это свидетельствует о снижени- иммунологической резистентности организма. Однако увеличение количеотва лак-тобацилл на 1,2Ig /г по всей видимости компенсирует этот процесс.

Ко второму месяцу эубиоз восстанавливается и в дальнейшем до конца опыта- нарушений количественного состава микрофлоры кишечника не регистрируется.

Таким образом, ингаляционный путь введения и длительность четыре месяца не дали какой-либо новой информации в отношении дисбиоза, вызываемого штаммом dendrollimus.

К аналогичному заключению можно придти на основе результатов длительной ингаляционной затрави. E.Thexterlana , а также дрожжеподобными грибами рода С.maltose

Enthomophtora thaxtariana вводился в организм животных в условиях ингаляционной затравки в течение четырех месяцев (концентрация ГО** и 10^ м.т./м*^). Параллельно штамм вводили и внутрижелудочно в дозе Ю4 м,т./жив. в течение двух месяцев. Эубиоз выражался в изменении количества ки зчных палочек и протеев. Незначительно (на 1,1 lg /г) было увеличено количество дрожжеподобных грибов рода Candida . При воздействии концен-

С

трации 10 м.т./жив. эти и: мнения исчезли только в восстановительном периоде. Порог действия установлен на уровне Ю^м.т./м**.

Asp.terreue вводили внутрижелудочно в дозах 10е",

I04, 10® м.т./жив. Дисбиоз выражался также снижением количест-

ва аиаоробнсй микрофлоры к увеличением представителей условно- , патогэнной микрофлоры (кишечные пблочки, стафилококки). Порого-

ц

вия деза была установлена на уровне Ю м.т./жив.

Штьммы дрожжеподобных грибов рода Candida - штаммы maltosa,

rugosa , troplcalip.parepailosis, acotti,valida

3 7 9 ТО вводили внутрижелудочно в дозах 10 , 10 , 10 , 10

м.т./жиа. к hits у мо м С. ¡nal tosa (BCS-569) проводили 2-х месяч-

7 9 /3

ную ингаляцию ь концентрациях 10 и 10 м.т./м .

Анализируя характер и глубину дисбиоза, возникащего при воздействии различных штаммов одного и того же рода Oendida , можно заключить, что самым безопасным в отношении диебиотичес-кого действия оказался штамм С. scottl ; а самым агрессивным по денно у эффекту - штамм С. ша1Ьоза (ВСВ-930). Установленный фгкт несомненно должен быть учтен при внедрении штаммов в технологических процессах производства корыових С лков в качестве продуцентов, а также при их гигиеническом нормировании. Отдельно следует отмстить характер дисбиоза, вызываемого различными штаммами принадлежащими к одному веду С. maltosa

В группе штаммоБ, генетическл идентичных (ВСВ-930, 569, 839, 773), для которых репрезентативным является штамм ВСБ-569, самый глубокий дкебиоз был вызван штаммом ВСВ-930. Такой факт свидетельствует о том, что не всегда репрезентативный штамм является определяющим по какому-либо вредному эффекту и ориентироваться по нему не безопасно.

Дисбиоэ при воздействии различных групп микроорганизмов-продуцентов (бактерии, грибы, дрожжи) ьыра. лея, в основном, ь уменьшении количества анаэробной и лактобациллярной микрофлору, а также в усиленном размножении условно патогенной мик-

рофлоры, т.е. нет специфического воздействия различных штаммов избирательно на какие-либо отдельные представители микрофлоры кишечника. Этот факт был отмечен наш к в предыдущих исследо-

I

ваниях, касавшихся не только «ликроорганиьмов-продуцентов, но и готовых форм препаратов на основе жизнеспособны^ мкробов.

Однако, следует более подробно рассмотреть вопрос изменения количества бактероидов при воздействии различных групп микроорганизмов. При воздействии грибов Е.thíOCtarlana.E.flbullnser, Ае^3rglllus terreua.E.гепатит количество бактероидов не

отличается от такового в контрольных группах. Дело в том, что указанные микроорганизмы не проявляли сенсибилизирующего действия в экспериментах. При воздействии бактерий рода Thurlnglen-sis количество бактероидов увеличивалось только при введении v.lcuretalci t обладающего иммуномодулируощим действием. Остальные представители этого рода приводили к развитию различного по характеру и виду дисбиоэа, при этом количество бактероидов не менялось. Что же касается дрожжеподобных грибов рода Gandida , то у всех представителей отой группы были нарушения в количественном составе бактероидов. При этом у штамма С.rugosa , обладающего наибольшей сенсибилизирующей активностью среди остальных выявлены наиболее выраженные изменения, а у С.nal-tosa - наименее выраженные.

Изложенное выше позволяет предположить, что членения содержания бактероидов в кишечнике, возможно, связано с происходящими в организме аллергическими реакц"чми: чем больше выражены аллергические свойства штамма, тлм более резко возрастает количество бактероидов в организмо животного, получакцего ¿тот штамм. Это позволяет аргументировать положение о целесообразности оп-

ределения содержания этой группы микроорганизмов в составе микрофлоры кишечника е опытах при токсикологической оценке и обоснований гигиенических нормативов новых штаммов.микроорганизмов.

Как показали наши исследования, восстановительный период длится в течение всего времени пребывания микроба в органкзп и в поел едущие ДО дней.

Изложенные выше данные характеризуют эубиоз толстого кишечника, в частности, его просвета, т.к. изучается микрофлора фекалий.

Однако а различных физиологических процессах организма и поддержании иммунологического гомеостаза в большей мере принимает участие микрофлора стенки кишечника, и прежде всего, тонко-го^ В связи с этим мы, впервые в токсикологической практике,изучили коли-ественный состав пристеночной микрофлоры тонкого кишечника белых крыс. Были проведены опыты с использованием 256 белых крнс. Штаммы вьодили внутрижелудочно в дозах, которые проявили себя как действующие при изучении эубиоэа фекалий. Тан,для Е.

№ахСвг1апа _ Ю5М.т./жиь., для АвР- Реггей» - Ю6

м.т./жив., для бактерий 2Ъиг1пз1епв1в _ Ю^ м.т./жив., для грибов рода ОшадХАя ~ ^ м.т.-'кио.,, для остальных штаммов -10®м.т./жив. Забор анализов проводили в течение первых недель, с целью выяснить, имеются ли нарушения в кишечнике раньше установленного наш месячного срока.

Анализируя полученные данные, мк пришли к заключению, что нарушение количественного состава нормальной аутофлоры микроорганизма наступает уже на 7-9 день После начала получения микроорганизма-продуцента. Глубина и характер дисб. ¡за находится в прямой зависимости от адгезивной способности микроба. Если последний обладает значительной адгезией, он прикрепляется к стенке

кишечника и вытесняет тем самым находящуюся ам аутофлору. А если принять во внимание, что пристеночная микрофлора принимает участие во всех жизненно важных процессах макроорганизма, то понятно, что нежелательные последствия дисс юза развиваются гораздо раньше, чем мы обнаруживаем сдвиги эубиоэа в просвете толстого кишечника. В ряд« случаев дисбиоз стенки выражачся в уменьшении количества анаэробной и лактобациллярной микрофлоры, что обуславливает снижение иммунологической защиты. Следовательно, если на организм действуют несколько факторов (физические," химические, биологические), то воздействие физических и химических происходит на организм с уже сниженной резистентностью. Это объясняет воэникновениэ вторичного иммунодефицита у рабочих .контактирующих с комплексом химических и биологических загрязнителей.

Выявленный нами эффект заставляет по новому оценить механизм дисбиотического действия. Увеличение количества анаэробной и лпк-тобациллярной микрофлоры в фекалиях считать признаком адаптационной реакции уже не правомерно. Увеличение микроорганизмов в просвете толстого кишечника может идти за счет вытеснения пристеночной микрофлоры, а это свидетельствует о дисбиозс пристеночной микрофлоры. Последний сопровождается нарушением морфологических структур слизистой оболочки (очогозаядееквамация ¡эпителия, расширение просвета желез с накоплением слизи), что свидетельствует о начальной стадии повреждающего действия изучаемого агента.

Таким образом, изучив изменения количественного состава микрофлоры толстого и тонкого кишечника при воздействии микроорганизмов-продуцентов различных групп и классов, можно сформулировать несколько основных положений:

I) для выявления дисбиоза адекватным является внутрижелудсч-

ный путь введения штаммов в макроорганизм;

2) оптимальный срок эксперимента - I месяц;

3) дисбиозом следует считать любое^нарушение количества микроорганизмов кишечника, как их уменьшение, так и увеличение;

4) особое внимание следует уделять изучению группы бактероидов; Ь) при оценке степени выраженности дисбиоза следует учитывать

данные восстановительного периода, т.е. после прекращения поступления изучаемого агента в организм;

6) критерии дисбиоза желудочно-кишечного тракта белых крыс при исследовании микрофлоры содержимого толстого кишечника: (1б/г)

Анаэробы_

< 8 или<П

Аэробы

или -¿II

Лакто-бациллы

<7 или «-II

Кишечная палочка

<6 или

Протои

Стафилококки

<■4 или с 7

<7 или-¿9

Если показатели колччественного состава одной или дЕух групп микроорганизмов у подопытных животных достоверно отличаются от таковых в контроле, а после прекращения дачи штамма различия исчезают, то это слабое дисбиотичаское действие. Если показатели количественного состава микрофлоры более, чем в двух группах микроорганизмов, отличаются от контроля, но после прекращения дачи штамма различия исчезают, то это дисбиотическое действие средней силы. Если показатели количественного состава микрофлоры. кишечника подопытных животных отличаются от контроля хотя бы по одной из изучаемых групп, но изменения не исчезают в течение восстановительного периода, то это сильное дисбиотическое действие. При гигиеническом нормировании дозу, вызывающую слабое дисбиотическое действие, следует считать порогом, а вызывающую дисбиоэ средней силы или сильны., действующей по этому эффекту.

Одним из важных этапов в обосновании гигиенических нормативов

микроорганизмов-продуцентов согласно "Методическим указаниям". (1983), является определение сенсибилизирующей активности штаммов. Первый этап- определение средней аллергенной дезы, второй-определение порога сенсибилизирующего действия при ингаляционной „атравке. Для этих исследований требуется приготовление аллергена, что затруднительно по отношению к кристаллоспорообразующим бактериям и некоторым грибам.

Кроме того, для штаммов со слабыми сенсибилизирующими свойствами этот метод не дает желаемых результв.тов, требуются дополнительные опыты с гистаминовой провокацией или с воспроизведением шока. Полученные величины средней аллергенной дозы весьма приблизительно характеризуют степень сенсибилизации организма, а соответствующий класс опасности не всегда отражает истинную опасность того или иного штамма. Следует отметить, что любые микроорганизмы чужеродны для теплокровного макргчрганизма, а, слёдовательно, обладают в той или иной степени сен чбилизирующим эффектом. В связи с этим нами предложен способ, объединяющий эти два этапа и не требующий приготовления аллергена. Суть его, в том, что крысам, затравленным исследуемым продуцентом, в одну лапку вводят конка-навалин .А, а в другую- конканавалин + взвесь штамма (Ю^м.т./мл), и по разнице наступившего через 24 часа от^ча судят о наличии сенсибилизации животного.

Однако в настоящее время считается, что аллергия развивается не только вследствии иммуногенетической реакции на аллерген, но и в результате нарушения механизмов иммунного надзора, в частности, угнетения клеток-супрессоров. В этой связи очень важен поиск надежных критериев отличия адаптационной сенсибилизации иммуно- '.той от дисадаптацлонной сенсибилизации, обуславливающей патологическое аллергенное поражениэ. Для этой цели целесообразно

проводить оценку содержания и функциональной активности Т- и В-лимфоцитов и их популяций в крови, а также содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови, что позволяет проследить за фазой сенсибилизации и напряжения иммунных функций, перенапряжения этой функции, а также неполноценностью компенсаторных процессов, когда иммунная реактивность приближается к реактивности организма с аллергическими заболеваниями.

Нами предложен новый методический подход для изучения выраженности иммуномодулирующего ответа различных микроорганизмов-продуцентов на модели аутсроэаткообразования в основных иммуноком-петеитных органах (тимус, селезенка).

Весьма существенным представляется также использование метода "эимоэановых" комплемент-зависимых розеток для оценки имму-нодепрессивного эффекта. Следует отметить, что указанный методический подход для изучения иммуномодулирующего эффекта промышленных аллергенов был применен О.Г.Алексеевой и соавт., Л.А.Дуе-вой, Г.Д.Хилько. Однако аллергенами были химические соединения, в то время как нами рекомендовано использовать в указанном выше тесте роэеткообразования препараты бактериальных и грибных аллергенов.

Кроме того, был изучен градиент концентрации ауто-РОК в тимусе и селезенке, а также общее количество Т-лимфоцитов и коэффициенты массы иммунекомпетентных органов; в селезенке определяли фракцию комплемент-зависимых "эимоэановых" В-лимфоцитов.

При исследовании влияния промышленных микроорганизмов-продуцентов на макроорганизм, установлен разнонаправленный характер их иммуномодулирующего действия с различными вариантами этого эффекта по степени его выраже^лости.

При попадании в дыхательные пути микро' )ганизмы становятся

гз

жертвой инициаторов иммунного ответа-макрофагов, .которые фагоцитируют, переваривают микробы в иммуногенную форм*'. При зтом антиген микроорганизма передается Т-лимфоциту, взаимодействует с В-лимфоцитом и далее-макрофаг-через Т-клетку, а т^сже при непосредственном воздействии на В-хлетку, передает специфический игнал включения В-лимфоцитг в антителогенеэ, и в коне1шом счете, позволяет организму освободиться от чужерод-ых агентов.

Длительное поступление микроорганизмов, в с^ою очередь, вызывает иммуномодулирующий эффект на различные звенья Т- и В-системы иммунитета, которые в конечном счете ведут к истощению защитных механизмов иммунитета. При этом могут формироваться различные уровни вторичного иммунодефицита. На начальных этапах имеют место реакции сенсибилизации, развивающиеся по гиперэргическо у типу с наличием реакции немедленного и замедленного типа, однако с преобладанием последней, на фоне дефицита только Т-лим? цитов-супрес-соров. На последних этапах происходит углубление иммунодефицита с формированием недостаточности других важных клеток Т- и В-системы и макрофагов а центральных и периферических органах иммунитета.

Преобладающее большинство бактерий и грибов подавляли иммунитет, меньшая часть микроорганизмов-продуцентов оказывала преимущественно стимулирующий эффект на системном уровне. Примером указанного варианта является продуцент антибиотиков, применяемых в онкологической практике, гриб 81;г.в11лгого$1си11 Однако, при этом развива гея подавление Т-лимфоцитов, включая еубпопуляции прекиллерных ауто-РОК в центральном иммунопоэтическом органе-тимусе. Примером другого вариан1а преимущественно иммуностимулирующего действия представляет действие дрожжвподобного гриба

«.valida, который стимулирует рооеткообразущие Т-клетаи и их прекиллерныэ популяции ауто-POti непосредственно в тимусе и селезенке, т.е. в основных иммунопоэтических органах, при отсутствии существенных сдвигав этих субпопуляций в крови.

Как известно, вредное действие различных экологических факторов окружающей, в том числе производственной среды,-можно дифференцировать по характеру их влияния и направленности воздействия прекмущесгаенно на Т- или В-систему иммунитета (0.Г.Алексеева, 1ЭЬЗ, Л.А.Дуева, 1985, Х.Р.Хилько, 1989), но в основном на системном уровне, з пределах циркуляции в крови. Безусловно, там, где затрагиваются обе системы, речь идет о более выраженном действии на иммунологический статус организма. Однако, даже мал о выраженный ишуномодулир.ующий эффект на одну из систем на начальном &А'апе формирования ишунного ответа, т.е. на Т-тСиетему, может способствовать риску развития препатологических и патологических нерушений в организме.

Наибольшие трудности представляет иммуно к о рре к ци я нарушений, происходящих на ранних этапах созревания клеток-эффекторов иммунитета. Б частности, наиболее трудно прогнозируемым является подавляющий эффект микробного агента на предшественников киллер-ных и иммуномодулируицих Т-лимфоцитоа (иуто-РОК), дающие в процессе своего созревания различные кланы лимфоцитов: ходперу.киллеры , супрессорк- з зависимости от исходного Состояния этих субпопуляций иммуноцитов в конкретном организме при конкретных условиях.

Сложная ситуация сегодня создалась в микробиологической промышленности , где имеется сочетанное действие биологического и химического факторов, которое помимо всего прочего еще больше осложняется генетическими особенностями макроорганизма с гипо- и ги-

перформами реализации иммунного ответа.

Все это представляет весьма сложную проблему <3 позиции гигиены

1

труда и профилактической токсикологии, которая только начинает разрабатываться, в связи с чем и проводились наф исследования. Учитывая выше изложенное, нами было обращено внимание на к 'етки-предшественники иммуорегулирующих Т-лимйоцито^ в центральном органе иммунитета (тимусе) и прослежена .х динамика по пути к органу-депо (селезенке) и в процессе гемоциркуляци^ 1кровь). Вместе с тем представлялось очень важным изучить конечный результат иммунного ответа организма, реализуемый В-лимфоцитами, формирующими специфические антитела, нейтрализующие, вредный агент.

Исходя из указанной выше оценки результатов иммунсмодулиругаще-го эффекта микробиологического фактора, возникающего в тает на разные звенья иммунитета в отдельные фазы иммуногенеза, нами но совокупности изученных критериев были выделены чети\ класса риска.

1 класс - с весьма высоким риском патологии (чрезвычайноопр",-ные). Микроорганизмы-продуценты обладеит способностью нарушать иммунологический статус макроорганизма в дозе Ю^-104м.т./жив. ( ),

2 класс - с высоким риском патологии (высокоопасные). Микроорганизмы-продуценты обладают способностью нарушать иммунологический статус макроорганизма в дозе Ю^-Ю^м.т./жив.

3 класс - с умеренным риском патологии (умеренноопасные). Микроорганизмы-продуценты обладают способностью нарушать иммунологический статус макроорганизма в дозе 10^-10®м.т./жив.

4 класс - с низким риском патологии (малоопасные). Микроорганизмы-продуценты обладают способностью нарушать иммунологический статус макроорганизма в дозе ю' л.т./жив. и выше. В эту же классификацию мы включаем показатели пороговых доз по дисбиотическ^му эффекту (э1а и Цп ¿0Ь).

Соответственно этой классификации ГЩК будет на один порядок ниже и Ыт(1ву. Иньши словами при наличии у микроорганизма-продуцента действия на иммунную систему, сопровождающееся дис-биотическим эффектом, коэффициент запаса- 100. Общепринятый десятикратный запас в данном случав увеличивается в 10 раз при переходе от дозы в м.г./жив. к концентрации в м.т./м .

Классификация микроорганизмов-продуцентов по классам опасности

Показатель Един. Классы опасности

иэм. т 2 3 4

LiBdsb Dlm ЦДК м.т./жив. м.т./жив, ю3-ю3- •Ю4 ■Ю4 Ю5-Ю6 107-Ю8 Ю4-Юб Ю6-Ю8 выше выше Ю9 ю8

м.т./м3 I02- •I03 Ю3-Ю4 Ю4-Ю7 выше ю7

В частности, бактерли рода Thuringienola оказывали угнетающее действие на В-систему иммунитета. Однако эти наблюдения имели место при воздействии на организм больших доз штаммов (10*^-10^ м.т./жив.}. Это позволяет отнести данный штамм к 4 классу опасности.

Грибы рода Asp. terreus подавляли как Т-, г^к и В-сис-

о

тему, причем в довольно низкой дозе-10 м.т./жив. Штамм обусловил подавление ауто-РОК-клеток предшественников эффекторных Т-клеток. Это, безусловно, характеризует штамм Asp. terreus как

чрезвычайно опасный, т.е. относящийся к I классу опасности.

Что касается дрожжеподобных грибов рода Candida, то различные виды этого рода проявили себя по-разному. Следует отметить, что по средней аллергенной дозе почти все эти грибы относятся ко 2-му классу опасности. Штамм О.всоы^ в дозе ю\.т./жив. не вызывал изменения числа иммунокомпетентных клеток, с также не влиял

на их функции. Это дает нам право данный штамм (по этому эффекту) отнести к 4-му классу опасности. Штамм О. г »вой а в дозе Ю^м.т./жив. подавлял клетки-предшественники в Центральном им-мунокомпетентном органе-тимусе. Штамм вызывал угнетение как Т-, так и В-системы. Этот штамм близок по : грактеру действия " Aeperglllus terrena , т.е. 1-го класса опасности. Штамм O.tropicalia в дозе ДО^м.т./жив. об словил снижение содержания Т-клеток в тимусе, а снижение количества предшественников отмечалось лишь в селезенке. Таким обрааом,действие имелось только на Т-систему. Только на Т-систему оказывал действие гриб K.thaxfceriana в довольно небольшой дозе-10 м.т./жив. Ото диктует «зсзможность отнести грибы ко 2-му классу опасности (высо-хоопасные).

Следует отдельно остановиться на путях введения микроорганизмов-продуцентов в макрооргакизм при изучении иммуно--одупирующего действия. Безусловно, изучение влияния на иммунологический статус организма предполагает самый адекватный путь введения- парентеральный. Но, учитывая специфику токсикологических исследований, когда требуется максимально приблизить условия эксперимента к натурным, мы применяли те пути, которыми микроорганизм попадает а организм работающих в процессе производства, т.е. вну-трижелудочно и ингаляционно. Первый не всегда дает возможность установить первичные нарушения, т.к. промышленные миг тоорганиз-мы,попадая в желудочно-кишечный тракт, вступают во взаимодействие с аутофпорой (особенно обладающие большей адгезивной активностью), вызывая изменения в ее количественном составе, что в своп очередь приводит к иммунол гическим нарушениям. Таким образом мы сталкиваемся со вторичной реакцией. При попадании гэ в легкие, мы получаем .ервичный иммунный ответ. На слизистых лег-

ких непосредственно имеется контакт с макрофагами легких- утилизаторами экзогенных факторов, которые являются третьим основным звеном эффекторной системы иммунного ответа (Т-лимфоциты, В-лим-фоциты-макрофаги), определяющим конечный ответ иммунологической системы на вредный фактор.

В то же время следует отметить, что ингаляционный метод затравки животных не всегда практически выполним в отношении грибов, содержащих мицелий. Эти микроорганизмы трудно нарастить в_ нужном объеме, сложно дозировать в затравочных камерах, сложно еоблюд^ь герметизацию камер. Кроме того требуется наполнитель, который тоже может повлиять на иммунологический статус. В связи с этим нами рекомендовано применение (для микробных суспензий) внутритрахеального пути введения.

При этом штамм подается в легкяе строго дозировано, по объему требуется небольшое количество биомассы, срок эксперимента сокращается до 20 дней (3 дня иммунизация и 18 дней введение), т.е. - соответственно фазе антителогенеза.

Дозы, указанные выше Д - это минимально действующие дозы по иммунологическому эффекту, т.е. самое маленькое количество штамма, обуславливающее иммунологические сдвиги в макроорганизме. Чтобы получить эту дозу, следует начать с максимально вводимой, т.е. с максимально густой взвеси, которую практически можно ввести внутритрахеально белой крысе однократно. Затем повторить опыт с дозами, на 1-2 порядок ниже, чтобы определить недействующую по этому эффекту. Аналогично устанавливают и пороговые дозы по дисбиотическому эффекту.

Нами были прозе^'.ны санитарно-микробиологические исследования на 2-х микробиологических проиэв дствах: цех по изготовлению ита-коновой кислоты НПО "Биолар" и Краснодарская Чиофабрика по произ-

водстяу биологических средств защиты растений. Установлено,что в цехах биофабрики периодически концентрации гриСов-продуцеитов достигает Ю^-Ю^м.т./м^. Производство ручное. В! цехе итаконо-воЯ кислоты концентрации грибов-продуцентов вид^чкиваются на уровне 200-300мл'./м^, за исключением момента засева (1-2 ^аза в смену). Однако в оздухе этого цеха имеются п'ары аммиака»концентрация которых не превышает 1ЩК (20 мг/м^). Производство мехе-ни~ировано на 80%. I

С целью выяснения роли и значения эубисза и иммунологических реакций в механизме развития патологического процесса, возникающего у лиц, контактирующих с живой культурой, било проведено углубленное медицинское обследование рабочих указанных выше производств: цех итаконовой кислоты НПО "Биолар" и Краснодар ;кяя биофабрика по производству средств защиты растений. Всего осмотрено 333 человека. Основные группы составили рабочие, непосредственно контактирующие с шкроорганизмеми-продуцентами, внутрен (й контроль - лица административно-хозяйственного персонала к инженерно-технические работники, внешний контроль - практически здоровые лица Краснодарской инспекции по карантину растений и сотрудники медицинского института.

По возрасту, по стажу, по заболеваемости сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта и другим но?^логическим формам, группы были идентичны.

При иммунологическом у микробиологическом обследовании у рабочих Краснодарской биофабрики было установлено, что у рабочих основной группы снижены показатели иммунологической ; эзистент-ности (лизоцим сыворотки крови, бактерицидность кожи и плазмы, фагоцитарная функция нейтрофилов крови, нарушение количественного состава микрофлоры фекалий за счет снижения количества

лактобацилл), У этой же группы по сравнению с внешним контролем отмечено снижение содержания Т-лимфоцитов-супрессоров с относительным нарастанием хелперных субклассов Т-клеток, снижено содержание Х^А к на фоне гипер- ^-глобулинемии. Все это указывает на нарушение как в клеточной иммунорегуляции, так и гуморальном иммунитете.

Указанные сдвиги в гораздо меньшей степени, но все же были выявлены у отдельных лиц внутреннего контроля.

Учитывая данные литературы о том, что кожа является частью иммунной системы, мы применили внутрикожные тесты. Показатели внутрикожных проб с ¿ГА, зикозаном и Т-активином в комплексе с гшрогеналом были значительно выше у рабочих с аллергоэами в активной стадии по сравнению с внутренним и внешним контролем.

Углубленный анализ иммунологических показателей внутри групп здоровых людей (I группа) позволил установить, что у лиц, контактирующих с продуцентами, не Т-активин с пирогеналом повышенных реакций 80$, а у лиц административно-хозяйственного персонала -33%. У лиц с завышенными показателями кожных проб были снижены показатели 1еа и 1еМ , а также показатели неспецифической защиты. Этих лиц мы отнесли к группе риска, а тест "Т-активин+пирогенал" к наиболее информативным для выявления таких лиц. Углубленный анализ позволил установить у них частые ОРЗ.

При обследовании рабочих НПО "Биол&р" установлено, что у лиц основной группы, контактирующих с грибами и аммиаком, имело место снижение содержания в крови тотальных лимфоцитов, теофиллин-зависимых Т-лимфоцитов-хелперов и супрессоров, а также снижение числа термостаби.. .лых и аутороэвткообраэующих Т-лимфоцитов,представляющих предшественников м 'лерных иммунорегулирующих Т-клеток, по сравнению с лицами внешнего контроля.

Снижение содержания Т-лимфоцитов свидетельствует о Т-икмуиоде-фиците. Один из механизмов нарушения иммунорегуляции- значительные сдвиги в содержании и соотношении основных иммунорегулирующих субпопуляций лимфоцитов, выражающиеся в нарушении соотношения хелперов и супрессоров. Термостабильные Т-клетки относятся к числу интерлейкин-1-чувствительным, а ауторозет ^образующие - к интерлейкин-2-чувствительным, предполагаеглым предшественникам иммунорегулирующих и киллерных лимфоцитов. Нарушение их соотношения - еще одно нарушение важного звена иммунитета.

У лиц внутреннего контроля также были снижены показатели как клеточного,'так и гуморального иммунитета. Следует особо подчеркнуть, что на крупнотоннажных производствах нет существенной разницы в состоянии иммунологической резистентности у лиц основных и контрольных групп, что представляется новым и весьма важным фактом.;. На фоне сниженных показателей резистентности организма отмечена высокая заболеваемос'ю ЛОР-органов. Весь этот комплекс очевидно следует объяснить сичетанным действием химического и биологического модулирования факторов, когда один из них вызывает при длительном воздействии малых доз сенсибилизацию организма, а другой играет роль разрешающей дозы. Это положение встречается и при экспериментальных исследованиях. У работающих на предприятии с применением ручного труда, несмотря на высокие концентрации продуцентов, имеется значительное отличие между состоянием иммунитета у рабочих цехов и лиц, не контактирующих с производственными факторе и.

Таким образом, выявленные иммунологические нарушения у рао'о-тающих на микробиологических производствах диктуют необходимость учитывать (в качестве лимитирующих) критерии, показатели л тесты, характеризующие состояние как клеточного (Т- и в-сисгем), так ¡,

гуморального иммунитета. Все они в своей совокупности должны использоваться при обосновании устанавливаемых гигиенических нормативов, призванных обеспечить безопасность контакта работающих с промышленными микроорганизмами.

ВЫВОДЫ

1. Постоянное или периодическое наличие микроорганизмов-продуцентов в воздухе рабочей зоны предприятий микробиологической промышленности свидетельствует о их гигиенической значимости в качестве загрязнителей производственной среды и о необходимости их санитарной стандартизации и контроля.

2. Поступление промышленных микроорганизмов-продуцентов в макроорганизм оказывает влияние на эубиоз кишечника, обуславливая "чсбиоз различного характера и глубины, а также приводит к развитию иммуномодулирующего эффекта, выражающегося в нарушениях как ки,точного (Т- и В-систем), так й гуморального иммунитета.

3. Постановка эксперимент с целью гигиенического нормирования микроорганизмов-продуцентов должна предусматривать в первую очередь устаног ение соответствующего уровня воздействия изучаемого агента на эубиоз с обязательным изучением группы бактероидов и иммунологический статус с использованием показателей клеточного

и гуморального иммунитета.

4. Показатель адгезивности - один из обязательных (наряду с патогенностью и высееаемостыо) критериев при решение вопроса о разрешении или запрете внедрения нового штамма в производственный процесс в качестве продуцента.

5. У рабочих, контактирующих с живой культурой, развиваются нарушения как клеточного, так и гуморального иммунитета.регистрируется адижение ¡«специфической резистентности организма. Более

I

- всажены з л изменения при сочетанием действии химических и Оио-

логических факторов.

6. Внутрикожные тесты с комплексом "Т-актииин + пирогенал", а также тесты с аллергенами используемых з производстве грибов с аллергеном о. albicans - наиболее информативны для определения группы риска.

7. В целях профилактики иммунологических нарушений у работающих на микробиологических предприятиях следует проводить предварительные (при приеме на работу) и периодические медицинские обследования, а при необходимости, иммунокоррекцию.

8. Следующие величины ЦЦК в воздухе рабочей зоны Bacillus thuring-:enais v.äendrolliisug 2'10 м.Т. /м3 Baoillua fchurinsien3Ís v.inaacfcua Satkomophtbora thaxteriana Bacillus thooingienbis v.kurstaki Gandida maltosa BCB-569

ВСБ-930 ВСБ-899 ВСБ-778

Gandida maltosa Candida maltosa Candida aal коза Candida scotti

2'104 м.т./м:

Ю5 м.т./м3

Ю7 m.t./mj

ю3 м.т./м3

ю3 м.т./м3

го3 м.т./м3

ю3 м.т./м3

ю3 о bi.T./м

З'Ю3 м.т./м3

Candida rugosа Candida tropicalis 5"I0^ м.Т./м3

должны исключить вредное действие штаммов на здоровье рабочих.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕШ.ВДАЩИ

1. В воздухе рабочей зонч следует определять величины установленных ПДК микроорганизмов-продуцентов и готовых продуктов систематически - не менее одного раза в месяц.

2. Необходимо максимально герметизировать процесс засела конидий ' ибов в растительные камеры, используя переходник между

горловиной колбы и отверстием камеры.

3. Для защиты коми целесообразно использовать различные кремы (силиконовый, микосектин, канестек и др.), а также профилак-тичзскую иазь Семесского.

4. Конечный продукт подлежит таблетированию, при этом следует, при возможности, исключить процесс сушки.

5. Продуценты, обладающие выраженными аллергезирующими свойствами подлежат замене на менее опасные,

6. К критериям профотбора при поступлении на работу следует отнести ослабление естественной резистентности организма. При этом особое внимание следует обращен на состоянье кожи, ее барьерную функцию, анамнестические данные об аллергических

п; -(явлениях различного характера.

7. Ежегодно (I раз в год) в профилактических целях необходимо проводить терапию иммуномодулирующими препаратами (нуклеи-ньт натрия, аэвит).

8. В душевых отделениях следует регулировать бесперебойность стока, пр водить обязательную дезинфекцию полов и стен Ъ% раствором хлорамина, обеспечить регулярную стирку спецодежды.

9.' В целях повышения качества медицинского обслуживания работающих на микробиологических предприятиях следует предусмотреть поэтапный принцип с дифференциацией следующих лечебно-профилактических мероприятий:

- на первом этапе (здравпункт, поликлиника) - выявление в наиболее ранние сроки лиц о измененными кожными покровами; постановка кожных проб с целью выявления сенсибилизации; выявление носительства грибов; организация диспансерного наблюдения ь у ювиях поликлиники; решение вопроса о рациональном трудо-

устройстве больного;

- на втором этапе (стационар) - обследование о целью уточнения диагноза, лечение больных;

- на третьем этапе - последующее оздоро~чение в кабинетах медицинской реабилитации, профилакториях, санаториях,

СПИСОК РАБОТ, 01Г ЗЖКОВАННЫХ ПО ТЬМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Современный подход к оценке иммунологической реактивности в промышленной токсикологии // Тез.докл.1У научн. конф. по проблеме клинической иммунодиагностики. - Рига, 1978. -

С.264-266 (соавт. Л.И.ИэраЙлет, Е.П.Седьшева, А.И.Устиненко, И.А.Иванова).

2. Влияние тилозина на микрофлору кишечника белых крыс (а хроническом эксперименте) // Гигиена труда и профзаболевания.-Рига, 1979. - в.З. - С.97-100 (соавт. Е.В.Алексеев, М.Н.Вако, Д.И.Израйлет).

3. Влияние дилудина на микрофлору белых крыс в эксперименте // Гигиена труда и профзаболевания. - 1979. - $3. - С.50-62 (соавт. И.М.Ремез, Д.Р.Цируле).

4. Патогенный, аллергенный, иммуногенный, -антимикробный эффекты в профилактической токсикологии // Тоз.д^чл.Всес. учредит, конф. по токсикологии, - Ы.: 1980. - С.52 (соавг. Л.И.Изрьйлет, М.Э.Баумане, И.А.Иванова, В,Н.Слинькп,Д.Р.Цирул«).

5. Иммунный ответ организма человека и экспериментальных животных на профессиональные факторы рДичной природы // Тез. докл. Всес. конф.: Биологическая характеристика лабораторных животных и экстраполяция на человеке, данных, полученных в эксперименте // М., 1980. - С.126 (соавт. А.И.Устиненко, М.З.Баумане, И.М.Ремез", Л.Р.Шамсутдинова, В.А.Шестеркин).

6. Влияние микробных препаратов, применяемых в сельском хп-

зяйстве на микрофлору кишечника // Гигиена и санитария. -1981. - №6. - С.82-63.

7. Влияние микробных препаратов, применяемых в спиртовой и пивоваренной промышленности, на микрофлору кишечника // Гчгие-п труда и профзаболевания. - 1981, - №4. - С.38-39.

8. Некоторые аспекты биологического действия нитрагина в эксперименте // Промышленная иммунология и аллергология. - Рига,

1981, - С.5-7 (соавт. М.Э.Баумане, В.С.Силкалне).

9. Влияние дилудиьа на иммунитет человека и животных // Иммунопатология и имк.„норегуляция. - Рига, 1982. - С. 177т132.

10. Влияние антибиотика лактоцида на микрофлору кишечника // Тез.докл. на республ. конф. молодых ученых-медиков. - Рига, 196«;. - 0.61-62,

11. Экспериментальные данные о воздействии бактериального удобр ния нитрагина на организм // Тез.докл. Всесоюзн. конф.: Биологический фактор-окруж°ющая среда-здоровье человека. - М.,

1982. - С.150 (соавт. М.Э.Баумане, И.А.Иванова, Д.Р.Спрудаа).

12. Гиг"ено-профпатологическая характеристика антибиотиков

и нитрофуранов // "Зинатне". - 1982. - С.160 (с-оавт.Д.И.Израйлет).

13. Способ определения токсичности биологически активных

вецеств. Изобретение. Авт.св. № 991302 (соавт.Л.И.Израйлет, 1

Ё. Л.Седышева).

14. Гигиена труда при производстве микробных препаратов // Научный обзор ВШШМИ. М., 1983 (соавт. к.Э.Баумане, В.Н.Слинь-ко, Ы.К.орман),

15. Определение количественного состава микрофлоры кишечни-ка-уувствительный метод определения антимикробного действия биологических загрязнителей производственно^ среды //' Тез.докл. Республ. чонф.: Возможности лабораторной диагностики. - Рига,

1984.

16. Показатели количественного состава микрофлоры кишечнмка-один из критериев гигиенического нормирования препаратов бисло-гического происхождения // Гигиена труда. - 1985, №5. - С.37-39.

17. Критерии вредности при гигиенической г-»гламентации микробных препаратов, применяемых для защиты растений // Тез.докл. научн. конф.: Продовольственная програша ССОР и комплексная проблема гигиены села. - Киев. - 1984. - С.86 (соавт., М.И.Эр-ман, В.Н.Слинько, Х.М.Векслер, И.А.Иванова, И'.М.Ремзз).

[8. Влияние бацилл Турингиенсис и препаратов на их основе на микрофлору кишечника белых крыс // Тез.докл. на конф.: Современные вопросы токсикологии и гигиенического.применения.пестицидов и полимерных материалов. - Киев, 1985. - С.85.

19. ОСТ 59.001,003-85. Система стандартов безопасности труда. Биологический фактор. Термин и определения. М., 1985. -

С. ¿0 (соавт. М.И.Эрман, В.Н.Слинько и др.).

20. Вляиние микробных препаратов на микрофлору кишечника // Тез.докл. II респ. конф. молодых ученых. - Рига, 1985, - С.90.

21. Показатели пристеночной микрофлора тонкого кишечника подопытных животных как критерий вредного действия промшлен-ных микроорганизмов при их токсикологической оценке и гигиеническом нормировании //Сб.докл.Всес. семинара: Проблемы взаимодействия химиотерапии, агентов и нормальной микрофлоры человека

и животных. - М., 1986.

22. Способ выявления сенсибилизации для микробных препаратов. Авт.св. №1216197. Биллет.изобр.К'Э, 1985. - ^.112 (соавт. Х.М.Векслер, И,А.Иванова И.М.Ремез, М.Э.Эглите).

23. Влияние биопрепарата знтомофтсрина на тенлокроьныЧ уач--

роорганизм // Вопросы гигиены труда и охраны окружающей среда в микробиологической промышленности. - Ы., 1986. - С.41-44 (соавт. Д.Р.Спрудаа, В.Н.Слинько, Л.Н.Калинина).

24. Гигиеническое нормирование микробиологических сре. отв

• чщиты растений, применяемых в СССР // Межд. конф.: Биотехнология и новые токсические препараты защиты растений в свете защиты окружающей среда. - София, 1986. - С.6-7 (соавт.И.М.Ре-мез, Д.Р.Спруджа, Л.А.Антоновича).

25. Перспективы изучения пристеночной микрофлоры кишечника при гигиеническом нормировании промышленных микроорганизмов // Тез.докл. Всес. съезда токсикологов. - Ростов-на-,Г^ну, 1986. -С.267-268.

-.6. Показатели пристеночной микрофлоры тонкого кишечника подопытных животных как критерий вредного действия промышлен-еых »-.кроорганйзмов при их токсикологической оценке и гигиеническом нормировании // Проблема взаимодействия химических агентов и нормирования микрофлоры человека и животных. М., 1966. - С,п7-Ю1.

27. Влияние микробных инсектицидов на здоровье контактирующих с ними лиц // Тез.докл. на съезде гигиенистса Молд.ССР.: Актуальные вопросы гигиены. - Кишинев, 1966 (соаву. Е.П.Седышева]

28. Сравнительная оценка сенсибилизирующей активности дрожжеподобных грибов рода Кандида, предполагаемых к внедрению в производство кормового белка // Методические рекомендации. -М.: 1986, - С.12 (соавт. Н.В.Градова, М.В.Далин, З.О.Караев

и др.).

29. О характере дисбиоза кишечника, вызванного продуцентами кормочого белка паприна // Гигиена труда и профпатология. -1986. - ".45-48.

30. Метода научения хронического действия химических и биологических загрязнителей // "Зинатне", 1987. - Рига. - С. 172 (соавт. И.М.Трахтенберг, Л.А.Тимофиевская).

31. Проблема токсикологической оценки и гигиенического нормирования микробных штаы.юв-продуцентов // Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения обьг-тов окружающей среды. - 1982. - ч.2. - С.27-29.

32. Показатели пристеночной микрофлоры тонкого кишечника подопытных животных как критерий вредного действия промышленных микроорганизмов при токсикологической оценка и гигиеническом нормировании // Антибиотики и микроэкология человека и кивот-ных, И., 1968. - С.21-22.

33. Иммунологические и днсбиотические изменения при воздействии на макроорганизм промешенных штаммов-продуцентов // Колонизационная резистентность, хнкиотерапевтические и антибактериальные препараты.- М.,1583, - С.137-138 (соавт.И..М.Ремез , А.Н.Устиненко, И.А.Иванова, II.П.Седьшева).

34. Способ выпадения тлзгношдудирувдего действия микробных препаратов // Методические рекомендации, - Рига, 1969. - С.7 (соавт. Х.М.Векслер, И..'.¡.Ремез, И.А.Иванова, М.Э.Эглите).

25. Способ определеьил сеисибшшзирудаеп активности прю-изяеи-ных штатов-продуцентов // Изобр.заявка ',"4'"Х)Э17. Пол.реп. от 10.03.69 (соавт.X.!.!.Взкелер, И.М.Реиез).

36. Способ диагностики аллергического состояния // Изобр. паяв. '.М4190541. Пол. р5<з. "Т 6.04.Ь9. (соавт. Х.М.Векслер, И. М. Рс: • зз).

37, Опит проведения исслел.Ойания по токсикологической оцени« проявленных ьшкрооргенизмов с целью их гигиеигооского иоршре-ьвнип ,Гите«!* и санитария. - 1969 (сою?. И.П»Р'»т, К.II.

Седышева).

38. Показатели количественного состава микрофлоры - один

из критериев оценки вредного действия промышленных загрязнителей // Тез.докл. Всес.конф. - Ангарск, ч.II,III, 1989. - С.58.

39. Проблема токсикологической оценки комбинированного действия химических и биологических загрязнителей // Мат. II Всес.съезда токсикологов // Комбинированное и изолированное действие химических веществ на организм. - Ереван, 1989. - С.76.

40. Вопросы оценки комбинированного действия химических и биологических загрязнителей // Проблемы мониторинга за здоровьем населения промышленных городов. - Ангарск: 1989. - С.84 (соавт. И.М.Ремез).

Считаю своим долгом выразить глубокую благодарность профессору Исааку Михайловичу ТрахтенОергу за консультативную помощь при выполнении настоящей работы.