Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Комплексная гигиеническая оценка биотехнологических штаммов микроорганизмов, в связи с загрязнением ими окружающей среды

На правах рукописи

рг§ од

королик \ 3 СЕН да

Виктор Вячеславович

комплексная гигиеническая оценка биотехнологических штаммов микроорганизмов, в связи с загрязнением ими окружающей среды

Специальность 14.00.07 - Гигиена

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 1999

Работа выполнена в Российском государственном медицинском университете.

Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ,

академик МАНЭБ, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Ю.П.Пивоваров

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Ю.Г.Талаева

доктор медицинских наук, профессор Н.Г.Иванов

доктор медицинских наук, профессор С.В.Алексеев

Ведущее учреждение: Московский

научно-исследовательский институт гигиены имени Ф.Ф.Эрисмана

Защита диссертации состоится " /6 " U-fCf-c^ 199 & г. в -/ Ъ часов на заседании Специализированного ученого совета Д084.14.05. при Российском государственном медицинском университете (117869, Москва, ул. Островитянова, 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан "_"_199_г.

Ученый секретарь

Специализированного ученого совета

кандидат медицинских наук, доцент Р.С.Волкова

?№> 'Я-. U0/ 0

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. В течение последних 10-20-ти лет во многих странах мира, в том числе и в нашей стране, происходит развитие биотехнологии. В настоящее время наибольший удельный вес составляют биотехнологические производства, использующие микробиотехнологию, в связи с тем, что микроорганизмы обладают заметными преимуществами перед растительными и животными объектами. Сейчас трудно назвать отрасль народного хозяйства, не применяющую продукты микробиологического синтеза или процессы, обеспечиваемые промышленными микроорганизмами.

Вместе с тем, многочисленные факты свидетельствуют о том, что в процессе эксплуатации биотехнологических производств, а также применения в сельском и лесном хозяйстве микробиологических средств защиты растений, возможно интенсивное загрязнение микроорганизмами-продуцентами производственной и окружающей среды и реальная опасность прямого или косвенного (через нарушение процессов самоочищения в объектах природной среды) негативного влияния на здоровье людей.

Непосредственное воздействие штаммов-продуцентов на организм людей проявляется развитием специфических и неспецифических заболеваний среди работающих на предприятиях биотехнологии и населения, проживающего в районах расположения таких производств (Л.Т.Антонова с соавт., 1988; М.Э.Баумане с соавт., 1991; Н.Ф.Измеров, 1992; Ю.П.Пивоваров с соавт., 1997 и др.).

Массивное загрязнение объектов окружающей среды промышленными микроорганизмами создает реальную опасность нарушения микробиоценозов, процессов самоочищения, увеличения сроков выживания патогенных микроорганизмов в природной среде и т.д. Все это способно привести к негативным эпидемиологическим и экологическим последствиям (Т.Г.Омельянец, 1981; Ю.П.Пивоваров с соавт., 1991, 1994, 1996 и др.).

Вместе с тем, до настоящего времени не разработана научно-обоснованная методика первичной санитарно-гигиенической оценки патогенных свойств микроорганизмов-продуцентов с целью гигиенического отбора таких штаммов, которые могут подлежать регламентированию в объектах производственной и окружающей среды..

Не определен единый перечень критериев ' патогенности, не обоснованы количественные значения этих критериев, в том числе таких важнейших показателей патогенности, как «ферменты патогенности» штаммов-продуцентов.

Не проводились комплексные исследования по изучению воздействия различных групп промышленных микроорганизмов на окружающую среду и не было единых, критериев оценки такого влияния. В связи с этим, не завершена разработка научно-обоснованных подходов к гигиенической регламентации биотехнологических микроорганизмов в объектах окружающей среды. Наименее изученными являются вопросы гигиенического нормирования штаммов-продуцентов в воде водоемов и в почве.

Указанный перечень нерешенных вопросов определил цель исследования: разработать теорию и методологию комплексной гигиенической оценки биотехнологических штаммов и завершить работу по основам гигиенической регламентации этих микроорганизмов в почве и воде водоемов.

Для достижения указанной цели ставились следующие задачи:

1. Провести научные эксперименты и натурные исследования широкого спектра промышленных микроорганизмов, относящихся к различным таксономическим группам.

2. На основании экспериментальных исследований патогенных свойств сапрофитных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов разработать критерии и схему первичной гигиенической оценки штаммов, предлагаемых для использования в биотехнологиях. .

3. Провести первичную гигиеническую оценку микроорганизмов-продуцентов, предполагаемых для промышленного применения.

4. Разработать методы санитарно-микробиологического контроля за загрязнением различных объектов окружающей среды микроорганизмами Вас. ишпг^егшэ - действующим началом многих бактериальных инсектицидов.

5. Изучить особенности поведения микроорганизмов-продуцентов в объектах окружающей среды, их влияния на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы и воды водоемов.

6. Разработать методику оценки воздействия штаммов-продуцентов на объекты природной среды.

7. Закончить разработку теоретических и методологических основ гигиенического регламентирования штаммов-продуцентов в окружающей среде.

Научная новизна и теоретическая значимость.

Научная новизна работы состоит в разработке нового перспективного направления профилактической медицины - гигиены окружающей среды в связи с развитием биотехнологий, включая разработку ряда теоретических, методических и практических вопросов комплексной гигиенической оценки биотехнологических штаммов и основ гигиенической регламентации этих микроорганизмов в объектах окружающей среды.

Получены новые данные по комплексному изучению патогенных свойств сапрофитных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов. Впервые обоснованы количественные показатели патогенности этих групп микроорганизмов, что позволило разработать научно-обоснованную методику отбора штаммов-продуцентов, предполагаемых для промышленного применения. Установлена зависимость степени патогенности от родовой принадлежности микроорганизмов-продуцентов. Это дает возможность целенаправленного отбора микроорганизмов для промышленных целей.

Определены закономерности воздействия на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы и воды водоемов широкого спектра промышленных микроорганизмов. Выявлена динамика содержания в природной среде штаммов-продуцентов, санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов и возможность появления у них изменчивости дифференциально-диагностических и патогенных свойств.

Завершена разработка теоретических и методических основ обязательных этапов гигиенического нормирования штаммов-продуцентов в почве и воде водоемов.

Практическая значимость работы.

Разработаны количественные критерии и схема первичной санитарно-гигиенической оценки патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в биотехнологиях; изучены патогенные свойства и дана оценка степени патогенности 239 штаммов-продуцентов, предлагаемых к использованию на предприятиях биотехнологии; разработаны методы выделения и идентификации Вас. thuringiensis (основы бактериальных инсектицидов) из объектов окружающей среды; разработана методика оценки воздействия штаммов-продуцентов на почву и воду водоемов; разработаны обязательные этапы исследований при гигиеническом нормировании штаммов-продуцентов в почве и воде водоемов.

Результаты работы внедрены в практику в виде:

- Методические рекомендации «Санитарно-микробиологические исследования объектов окружающей среды в связи с производством и применением бактериальных инсектицидов на основе Вас. thuringiensis». Утверждено Минздравом СССР, № 2037-79 от 17.07. 1979 г.

- Методические рекомендации «Выделение и идентификация Bacillus thuringiensis - основы бактериальных препаратов (энтобактерин, дендробациллин и др.) из объектов окружающей среды». Утверждено Минздравом РСФСР, № 06-Б-390 от 21.08. 1979 г.

- Методические рекомендации «Критерии оценки патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в промышленности микробиологического синтеза». Утверждено Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора при Президенте Российской Федерации, 9. 03. 1992 г.

- Методические рекомендации «Методика оценки воздействия штаммов-продуцентов на объекты окружающей среды». Утверждены Ученым Советом РГМУ и переданы в МЗ России для практического использования. М., 1996.

- 5 рецептов плотных питательных сред для выделения и идентификации Вас. Липг^ег^Б из различных объектов окружающей среды, утвержденных Минздравом РСФСР как рационализаторские предложения отраслевого значения.

- По материалам исследований опубликовано 38 научных работ.

Практическая реализация всех этих рекомендаций обеспечит

возможность научно-обоснованного отбора штаммов-продуцентов и дальнейшей регламентации этих микроорганизмов в воде водоемов и в почве, на основе комплексной гигиенической оценки промышленных микроорганизмов по их действию на окружающую среду и здоровье человека.

Предложенные разработки обеспечат организацию действенного санитарно-микробиологического контроля за производством и применением бактериальных инсектицидов.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Республиканской научно-практической конференции «Роль санитарно-микробиологических исследований окружающей среды в профилактике кишечных инфекций» (Подольск, 1975); на I Всесоюзном совещании по гигиене окружающей среды и гигиене труда (Баку, 1977); на I-й Республиканской конференции гигиенистов и санитарных врачей (Ашхабад, 1978); на Всесоюзной конференции по санитарной микробиологии (Киев, 1978); на Всесоюзной конференции по проблеме

"Чужеродные химические вещества в пищевых продуктах" (Алма-Ата, 1979); на IX Всесоюзной конференции «Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды» (Москва, 1983); на Всесоюзной конференции «Биологический фактор - производственная и окружающая среда - здоровье человека» (Новосибирск, 1984); на X Всесоюзной конференции «Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды» (Москва, 1988); на Всесоюзной научной конференции «Медико-биологические и гигиенические аспекты охраны окружающей среды на предприятиях медицинской промышленности» (Москва, 1991); на Всесоюзной конференции «Медицинские аспекты охраны окружающей среды» (Новокузнецк, 1991); на VII Всероссийском симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 1994); на межвузовской научной конференции, посвященной 90-летию со дня рождения академика АМН, заслуженного деятеля науки Российской Федерации, профессора А.А.Минха «Проблемы науки и педагогики в высшей медицинской школе» (Москва, 1994); на межвузовской научной конференции, посвященной 50-летию организации кафедры общей гигиены в Московском медицинском стоматологическом институте по проблеме «Актуальные вопросы гигиены» (Москва, 1996); на I конгрессе работников здравоохранения Республики Таджикистан «Медицина и здоровье» (Душанбе, 1997); на заседании секции «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» (Москва, 1998).

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 38 научных работах, в т.ч. в центральных журналах - 9; сборниках научных работ - 11; в сборниках трудов: 16 - всесоюзных и всероссийских, 2 -республиканских конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 3-х глав обзора литературы, 7-ми глав собственных исследований, заключения по диссертации, выводов, списка литературы, материалов внедрения в практику. Работа изложена на 284 страницах, содержит 48 таблиц и

44 рисунка. Библиография включает 248 источников, из них 185 отечественных.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Научно-обоснованная схема первичной гигиенической оценки патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в биотехнологиях.

2. Методика выделения и идентификации микроорганизмов Вас. thuringiensis - основы многих бактериальных инсектицидов из объектов окружающей среды.

3. Основные закономерности воздействия промышленных микроорганизмов на природную среду.

4. Комплексная гигиеническая оценка воздействия на окружающую среду и здоровье человека микроорганизмов-продуцентов - основа их гигиенической регламентации.

Выражаю глубокую благодарность заслуженному деятелю науки РФ, академику МАНЭБ, члену-корр. РАМН, профессору Ю.П.Пивоварову за консультативную помощь при выполнении настоящей работы, а также сотрудникам кафедры гигиены и основ экологии человека РГМУ за неоценимую помощь и поддержку.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

В первой части работы, состоящей из 3 глав, дан обзор литературы.

В первой главе анализируются экологические и медицинские проблемы использования микроорганизмов-продуцентов в биотехнологиях. В этой связи рассматриваются научные работы авторов, приводящих фактические данные по интенсивному загрязнению производственной и окружающей среды промышленными микроорганизмами, что может вызвать прямое или косвенное негативное воздействие на здоровье человека. Подчеркивается, что большая часть исследований посвящена

непосредственному действию микроорганизмов-продуцентов при попадании их в организм людей с загрязненным воздухом, водой, растительными пищевыми продуктами и проявляется в виде специфических и неспецифических заболеваний. Опосредованное неблагоприятное влияние промышленных микроорганизмов на здоровье человека в результате подавления штаммами-продуцентами микробиоценозов и процессов самоочищения воды водоемов и почвы изучено крайне недостаточно.

Анализ рассмотренного материала сконцентрировал наше внимание на двух гигиенических проблемах. Первая заключается в необходимости разработки новых подходов и критериев оценки патогенных свойств микроорганизмов-продуцентов, предлагаемых к использованию в биотехнологиях, т.к. речь идет о штаммах сапрофитных микроорганизмов, этиологическая роль которых в заболеваемости людей бесспорна.

Вторая проблема состоит в том, что воздействие промышленных микроорганизмов на процессы самоочищения и микробиоценозы водных объектов и почвы практически не изучено.

В заключении главы делается вывод о том, что необходимым следующим этапом решения имеющихся проблем, является анализ научных материалов по гигиенической оценке биотехнологических микроорганизмов.

Во второй главе рассматриваются данные литературы по санитарно-гигиенической оценке штаммов-продуцентов. При изучении патогенных свойств биотехнологических микроорганизмов многие авторы использовали различные методики и критерии, основные из которых по совокупности могут быть представлены исследованиями по изучению инфективности, токсигенности, дисбиотического, иммунотоксического действия, диссеминации микроорганизмов во внутренних органах и выявлению действия, раздражающего слизистую глаза с целью экспериментального обоснования ПДК штаммов-продуцентов в объектах производственной и окружающей среды.

Анализ доступной литературы показал, что не разработан важный методический вопрос - научно-обоснованная методика первичной санитарно-гигиенической оценки патогенных свойств микроорганизмов-продуцентов с целью гигиенического отбора таких штаммов, которые могут подлежать регламентированию в объектах производственной и окружающей среды.

Проблема санитарно-гигиенической оценки микроорганизмов-продуцентов по их действию на объекты окружающей среды и опосредованного негативного влияния на здоровье людей решена еще в меньшей степени. В исследованиях Т.Г.Омельянец (1981), Р.Е.Когай (1993) и наших ранних работах (1981) каждым из авторов изучалось влияние на самоочищающую способность почвы или воды только одной группы промышленных штаммов, относящихся исключительно к энтомопатогенным. микроорганизмам и не представляющим всего таксономического разнообразия микроорганизмов, использующихся в биотехнологиях. Кроме того, в этих работах не исследовался важнейший аспект воздействия промышленных штаммов на микробиоценоз почвы и воды водоемов. Такой научный материал, полученный с использованием различных методик, не дает представления по проблеме в целом.

Отсутствие единых методов постановки экспериментов и критериев оценки влияния штаммов-продуцентов на микробиоценоз и самоочищающую способность воды водоемов и почвы не позволяет выявить закономерности воздействия различных групп промышленных микроорганизмов на природную среду.

Таким образом, ко времени начала наших исследований не была разработана схема, методика и количественные критерии первичной гигиенической оценки патогенных свойств микроорганизмов-продуцентов, не изучено воздействие различных групп микроорганизмов на процессы самоочищения и микробиоценоз объектов окружающей среды, не

проводилась научно-обоснованная комплексная санитарно-гигиеническая оценка микроорганизмов-продуцентов.

В третьей главе оценивается современное состояние вопросов гигиенического нормирования микроорганизмов-продуцентов в объектах окружающей среды. Кратко рассматриваются специфические особенности нормирования промышленных микроорганизмов, определенные в наших работах и работах других авторов достаточно давно (Ю.П.Пивоваров с соавт., 1977; Израйлет Л.И. с соавт., 1977; Омельянец Т.Г., 1981 и др.) и в более поздних исследованиях (В.И.Немыря, 1988; И.О.Петруник с соавт., 1991; К.Н.Дабуров, 1997 и др.). Большое внимание уделено важной работе коллектива авторов по экспериментальному обоснованию ПДК микроорганизмов-продуцентов в объектах производственной и окружающей среды (О.Г.Алексеева и соавт., 1991).

Сделан вывод о том, что до последнего времени наиболее изученными являются вопросы нормирования микроорганизмов-продуцентов в воздухе рабочей зоны, атмосферном воздухе, и остаточных количеств микробных инсектицидов в растительных продуктах питания. Однако, проблему разработки научно-обоснованных подходов к гигиенической регламентации промышленных штаммов в воде водоемов и в почве следует считать незавершенной.

В «Резюме» результаты анализа литературных данных обобщены в виде пяти позиций:

1. К началу наших исследований не была разработана схема, методика и количественные критерии первичной гигиенической оценки патогенных свойств микроорганизмов, предлагаемых для использования в биотехнологиях.

2. Не изучено воздействие различных групп промышленных микроорганизмов на процессы самоочищения и микробиоценоз воды водоемов и почвы.

3. Не разработана единая методика изучения воздействия штаммов-продуцентов на объекты окружающей среды и оценка такого воздействия.

4. Не проводилась научно-обоснованная комплексная санитарно-гигиеническая оценка микроорганизмов-продуцентов по их действию на здоровье человека и окружающую среду.

5. Не завершена работа по основам гигиенической регламентации штаммов-продуцентов в воде водоемов и в почве.-

Во второй части работы, состоящей из 8-ми глав, даны результаты собственных исследований.

В четвертой главе представлены программа, материалы и методы, применявшиеся в работе.

Программа работы соответствовала поставленным задачам и состояла в следующем:

1. Разработать количественные критерии и схему первичной гигиенической оценки патогенных свойств штаммов, предлагаемых для использования в биотехнологиях. Апробировать эту методику.

2. Разработать методы выделения и идентификации микроорганизмов Вас. йшпп^ошз - основы бактериальных инсектицидов из объектов окружающей среды.

3. Изучить влияние микроорганизмов-продуцентов, относящихся к разным таксономическим группам, на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы и воды водоемов. Выявить закономерности такого воздействия.

4. Изучить изменчивость свойств микроорганизмов-продуцентов, санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов, выделенных из почвы и воды, загрязненных промышленными штаммами.

5. Завершить разработку основных этапов гигиенической регламентации штаммов-продуцентов в воде водоемов и в почве.

С целью разработки и апробации количественных критериев первичной санитарно-гигиенической оценки патогенных свойств микроорганизмов, предлагаемых для применения в биотехнологиях, изучены патогенные свойства 33 штаммов, представляющих сапрофитные,

условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, а также 239 штаммов, предполагаемых к промышленному использованию. В экспериментах на животных исследованы клинические проявления заболевания, средневирулентная доза, «пороговая» доза, диссеминация штаммов во внутренних органах и токсигенность. Для изучения патогенных свойств бактерий были использованы белые мыши. Степень патогенности дрожжеподобных грибов определялась в соответствии с методикой проф. Кашкина П.Н. (1973) на кроликах по вирулентности (гибели животных), визуальным патологоанатомическим изменениям в почках и инвазивности (высев «ретро» культур из почек).

Наряду с этими общепринятыми показателями, имеющими обязательное, контрольное значение, определяли активность «ферментов патогенности»: гиалуронидазы, желатиназы, лецитиназы, гемолизинов и декарбоксилаз аминокислот.

Воздействие микроорганизмов-продуцентов на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы изучали путем определения в почве общего количества бактерий, содержания азота аммония и нитратов, интенсивности распада клетчатки, динамики отмирания в почве патогенных энтеробактерий S. typhimurium и . санитарно-показательных микроорганизмов Е. colt Определяли количество почвенных грибов и актиномицетов.

В качестве штаммов-продуцентов в эксперимент было взято всего 9 штаммов: 2-а штамма Вас. thuringiensis, 3-й штамма Вас. subtilis, штамм Ps. aurantiaca и 3-й штамма дрожжеподобных грибов С. tropicalis. В каждом из вариантов эксперимента опытные образцы почвы загрязняли взвесью одного штамма микроорганизма-продуцента в количестве 10' кл/г. Во все образцы почвы вносили культуры тест-микроорганизмов из расчета: Е. coli - 10® кл/г, S. typhimurium - 10'клеток на 1 г. почвы. Экспериментальные исследования осуществлялись в лабораторных и натурных условиях в виде

2-х серий опытов. В одной серии внесение в почву опыта культур промышленных штаммов проводилось однократно, в другой серии -многократно.

Изучение воздействия микроорганизмов-продуцентов (на примере Вас. Шипп^епз15) на микробиоценоз и процессы самоочищения воды водоемов выполняли на модельных водоемах с нативной речной водой из р. Москвы. Испытывалось влияние 2-х штаммов Вас. Липп^егшз уаг. galleria и уаг ёешкоНтщ в концентрациях 10е кл/л.« В одной серии опытов энтомопатогенные штаммы вносили однократно, в другой серии -многократно. Эксперимент ставили в 4-х вариантах. В 1-м варианте исследовали влияние Вас. Шигш§1еп51з на общее число сапрофитных микроорганизмов, водный микробиоценоз и выживаемость промышленных штаммов в воде.

Во 2-м варианте экспериментов исследовали процессы самоочищения воды в условиях загрязнения ее Вас. Шиги^етшз. Общепринятыми методами изучали динамику БГКП, ЛКП, протеолитов, аммонификаторов и нитрификаторов, содержание в воде азота аммония, нитритов и нитратов, концентрацию растворенного кислорода, биохимическую потребность в кислороде, реакцию воды (рН).

В 3-м варианте изучали влияние кристаллообразующих бацилл на выживаемость в воде патогенной микрофлоры (Б. 1урЫтипит).

В 4-м варианте экспериментов изучено непосредственное воздействие микроорганизмов Вас. Шит^етшз на выживаемость, развитие, репродуктивность и другие функции рыб и мельчайших ракообразных в условиях модельных водоемов с дехлорированной водопроводной водой.

В пятой главе приведены результаты собственных исследований 33 штаммов микроорганизмов, представляющих сапрофитные, условно-патогенные и патогенные микроорганизмы и анализ литературных данных по изучению факторов патогенности различных групп микроорганизмов, что позволило нам отобрать не только наиболее адекватные и

информативные показатели, но и определить количественные значения критериев, отличающихся у представителей сапрофитных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, и характеризующих степень их патогенносги.

Было установлено, что у некоторых изученных нами штаммов инфективносгь, инвазивность и токсигенность не всегда коррелируют и могут изменяться независимо друг от друга, являясь относительно самостоятельными. Поэтому при изучении патогенных свойств штаммов-продуцентов необходимо комплексное изучение всех факторов патогенности.

Учитывая задачу оценки патогенных свойств штаммов, незарегистрированных как возбудители инфекционных заболеваний человека, и предлагаемых для биотехнологических целей, было чрезвычайно актуальным изучение «ферментов патогенности» этих микроорганизмов, как косвенных показателей патогенности.

Установлено, что не все роды и виды микроорганизмов обладают полным набором всех «ферментов патогенности». Наличие или отсутствие одного или большего числа ферментов, колебания количественных характеристик активности ферментов зависит как от методики его определения, так и от виды микроорганизма, от происхождения штамма, места и давности его выделения и от индивидуальных особенностей штамма.

Несмотря на варьирование величин факторов патогенности у различных микроорганизмов, нам удалось доказать, что наиболее вероятные значения величин факторов патогенности имеют существенные количественные отличия для различных групп микроорганизмов. На .основании этого были определены величины патогенности и разработана схема исследований.

Первая часть исследований состоит в постановке эксперимента на животных с определением показателей, приведенных выше.

На этом этапе исследования можно закончить, в случае установления даже одного из перечисленных критериев в определенных известных количественных значениях. Такие штаммы следует отнести к группе микроорганизмов, не рекомендуемых к использованию на предприятиях биотехнологии. В противном случае необходимо перейти ко 2-му этапу исследований, состоящему в определении «ферментов патогенности».

На основании результатов только первого или первого и второго этапов все штаммы микроорганизмов разделяют на:

1) рекомендуемые к использованию в биотехнологии;

2) находящиеся на грани риска;

3) не рекомендуемые к использованию на предприятиях биотехнологии.

Возможность изменения патогенных свойств штаммов 2-й группы в сторону возрастания при их вегетировании в окружающей среде, а также возможность их размножения (в воде водоемов, почве, пищевых продуктах), представляют потенциальную опасность для здоровья людей, в связи с чем микроорганизмы данной группы относятся к находящимся на грани риска применения.

Подробное изложение схемы, методов исследования и первичной гигиенической оценки патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в биотехнологии, представлено в составленных нами методических рекомендациях «Критерии оценки патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в промышленности микробиологического синтеза», утвержденных Государственным комитетом сан.-эпид. надзора при Президенте Российской Федерации.

В шестой главе представлены данные по исследованию патогенных-свойств микроорганизмов, предлагаемых для применения в биотехнологиях, в соответствии с разработанными нами критериями оценки. Всего изучено 239 штаммов, представляющих 26 видов и 11 родов микроорганизмов-продуцентов.

Результаты исследований показали, что патогенные свойства одного рода и даже вида микроорганизмов, предлагаемых для промышленного применения, в раде случаев значительно отличаются.

Однако, большинство изученных штаммов родов Bacillus (76,4% штаммов этого рода), Brevibacterium (84,2% штаммов) и Micrococcus (100% штаммов) были апатогенными и с этих позиций - пригодными для промышленного применения.

Противоположно положение заняли микроорганизмы родов Corynebacterium, Moraxella и Candida. Все, или большинство, изученных штаммов этих родов (соответственно 100%, 100% и 75%) расцениваются как патогенные и опасные при промышленном использовании.

Устойчивой промежуточной позицией характеризовались патогенные свойства всех исследованных штаммов родов Enterobacter, Haemophilus, Acinetobacter и Escherichia. Изученные штаммы этих родов имели показатели патогенных свойств, количественно соответствующие условно-патогенным микроорганизмам.

Таким образом, в числе изученных нами 239 штаммов, только 93 штамма (38,9%) рекомендуются к использованию в биотехнологиях; 98 штаммов (41%) - находятся на грани риска применения; 48 штаммов (20,1%) - не рекомендуются к использованию в биотехнологиях.

В седьмой главе приведены результаты исследований по разработке эффективной методики выделения и идентификации микроорганизмов Вас. thuringiensis из почвы, воды и других объектов окружающей среды, т.к. имеющиеся методические рекомендации имели ряд существенных недостатков (отсутствие элективных питательных сред для выделения и идентификации Вас. thuringiensis, не приведены тесты, позволяющие дифференцировать Вас. thuringiensis с другими аэробными спорообразующими микроорганизмами и т.д.) и не могли бьпъ использованы для выделения и идентификации Вас. thuringiensis не только из

почвы и воды водоемов, но были малоэффективны при исследовании других объектов окружающей среды.

Необходимость данного этапа исследований связана с возрастающими темпами и масштабами производства бактериальных инсектицидов на основе Вас. thuringiensis и широким использованием их в сельском и лесном хозяйстве, а также с изучением в нашей работе воздействия этих бацилл на водные объекты и почву.

Нами, совместно с К.Н.Дабуровым, были разработаны и апробированы 5 рецептов плотных питательных сред, утвержденных МЗ РСФСР как рационализаторские предложения отраслевого значения. Две среды (модификация среды Ю.П.Пивоварова с ТТХ и казеин-полимиксиновый агар) могут успешно использоваться для выделения и идентификации Вас. thuringiensis из всех объектов окружающей среды, в том числе из почвы и воды водоемов. Для исследования продуктов питания служат следующие разработанные нами среды: модифицированная среда Мосселя и казеин-полимиксиновый агар с феноловым красным и эскулиновый агар. Сравнительная характеристика специфичности плотных питательных сред показала большие преимущества наших сред по лучшей наглядности роста и большом преобладании Вас. thuringiensis над другими микроорганизмами (4:1 - 9:1).

При разработке питательных сред было исследовано 450 проб почвы, продуктов питания, воды и воздуха.

Идентификация микроорганизмов Вас. thuringiensis проводится на основании ряда особенностей их культуральных, морфологических и биохимических свойств. Используются также и серологические реакции, в частности, реакция агглютинации по Н-антигену. Подробное описание бактериологических исследований дано в составленных нами методических рекомендациях и утвержденных Минздравом СССР и РСФСР: «Выделение и идентификация Bacillus thuringiensis - основы бактериальных препаратов

(энтобактерин, дендробациллин и др.) из объектов окружающей среды» и «Санитарно-микробиологические исследования объектов окружающей среды в связи с производством и применением бактериальных инсектицидов на основе Bacillus thuringiensis».

В восьмой главе даны результаты изучения влияния микроорганизмов-продуцентов на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы.

Экспериментальные исследования проводили.. в лабораторных и натурных условиях. Изучали влияние 2-х штаммов Вас. thuringiensis - var. galleria и var. dendrolimus; 3-х штаммов Вас. subtilis (В-72, 103 и ВНИИ Генетика-42); 1-го штамма Ps. aurantiaca В-1135 и 3-х штаммов С. tropicalis (№ 3 SR-форма, № 9 - 2S, ВСБ-928К).

Результаты исследований показали, что при внесении в почву биотехнологические штаммы, изученные нами, могут длительное время сохранять жизнеспособность - 80 и более суток.

При однократном загрязнении почвы промышленными микроорганизмами происходит медленное отмирание клеток этих штаммов, а при многократном загрязнении - резкие колебания числа этих микроорганизмов и накопление их в почве.

Контаминация почвы массивными количествами биотехнологических микроорганизмов, относящихся к различным таксономическим группам, по-разному влияет на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы.

Штаммы-продуценты рода Bacillus не вызывают существенных сдвигов в почвенном микробиоценозе. Процессы самоочищения почвы от органических загрязнений и патогенных энтеробактерий ускоряются при внесении в почву культур Вас. thuringiensis и Вас. subtilis. С этих позиций загрязнение почвы данными микроорганизмами может не учитываться при разработке гигиенических регламентов.

Загрязнение почвы штаммами Ps. . aurantiaca вызывает разбаллансировку почвенного микробиоценоза (при , многократном внесении в почву псевдомонад подавляется рост почвенных

актиномицетов). Поступление штаммов Ps. aurantiaca в почву неоднозначно влияет на процессы самоочищения почвы. С одной стороны активизируются процессы нитрификации и ускоряется отмирание кишечных палочек и патогенных энтеробактерий в почве. С другой стороны -подавляется активность целлюлозоразрушающих микроорганизмов.

Подобные факты необходимо учитывать при разработке гигиенических регламентов загрязнения почвы промышленными микроорганизмами Ps. aurantiaca.

Еще более негативное действие на микробиоценоз (угнетение почвенных актиномицетов) и подавление процессов самоочищения почвы (увеличение сроков выживания кишечных палочек и сальмонелл, снижение целлюлозоразрушающей активности почвы) оказывают промышленные штаммы С. tropicalis, загрязняющие почву.

Поэтому при разработке гигиенических регламентов содержания данных микроорганизмов в почве должны быть применены более жесткие условия.

В девятой главе приводятся материалы изучения влияния микроорганизмов-продуцентов (на примере штаммов Вас. thuringiensis) на микробиоценоз и процессы самоочищения воды водоемов.

Проведенные исследования показали, что при однократном загрязнении воды водоемов Вас. thuringiensis, эти микроорганизмы сохраняются в воде в течение длительного времени - 2 и более месяцев. При однократном внесении в воду культур Вас. thuringiensis происходит медленное отмирание клеток данного микроорганизма, а при многократном поступлении - накопление Вас. thuringiensis в воде модельных водоемов.

Загрязнение воды водоемов штаммами Вас. thuringiensis существенно влияет на общее микробное число. С одной стороны, это действие выражается подавлением сапрофитной микрофлоры, вырастающей при 22° С и принимающей активное участие в начальных стадиях деструкции

органического вещества, что приводит к торможению процессов самоочищения воды водоемов.

С другой стороны, массивное загрязнение воды клетками Вас. thuringiensis вызывает существенное преобладание микрофлоры, вырастающей при 37° С, что, по мнению ряда ученых, характеризует неудовлетворительное санитарное состояние таких водоемов и может способствовать более длительному выживанию в воде микроорганизмов S. typhimurium, Е. coli и Str. faecalis (JI/В.Григорьева, 1975; Т.Г.Омельянец, 1981 и др.).

Полученные данные вполне объясняются результатами изучения микробиоценоза воды в условиях загрязнения водоемов штаммами Вас. thuringiensis. С одной стороны, энтомопатогенные бациллы приводят к подавлению части аутохтонной микрофлоры, относящейся к представителям грамотрицательных бактерий родов Pseudomonas, Flavobacterium, Acetobacter, Xantomonas, Erwinia, Vibrio, Acinetobacter и Aeromonas.

С другой стороны, вытеснение одних групп сапрофитных бактерий привело к возрастанию удельного веса других групп грамположительных бактерий родов Bacillus, Streptococcus, Micrococcus и Staphilococcus, а также грамотрицательных бактерий рода Proteus.

Подобные изменения в структуре водных сапрофитных микроорганизмов можно объяснить наличием как антагонистического действия чужеродной микрофлоры к одним группам сапрофитов, так и защитного действия со стороны Вас. thuringiensis в отношении других групп сапрофитной микрофлоры.

Негативное значение подобного дисбалланса в микробиоценозе воды водоемов, загрязненных промышленными микроорганизмами, трудно недооценить, т.к. в итоге наблюдается деформация микробного ценоза воды в виде преобладания грамположительных бактерий при одновременном снижении грамотрицательных сапрофитов, что опасно значительным

ухудшением санитарного состояния водоемов, загрязненных биотехнологическими штаммами.

Подтверждением подобных данных являются результаты наших исследований, показывающие, что в водоемах, загрязненных Вас. Липп^епБК, замедляются процессы самоочищения воды от ЛКП, БГКП и патогенных энтеробактерий Б. 1урЫтилит, и удлиняются сроки их выживания в воде.

Полученные данные вполне совпадают со мнением других исследователей (Т.Г.Омельянец, 1981; М.В.Манаева, 1993 и др.).

Интенсивное, особенно многократное, загрязнение воды водоемов энтомопатогенными микроорганизмами Вас. Йшпп^егшз вызывает существенное ухудшение кислородного режима в модельных водоемах, приводя к снижению в воде концентрации растворенного кислорода и возрастанию ВПК. Такое влияние на санитарный режим водоемов является, как известно, крайне неблагоприятным.

Вместе с тем, в воде, загрязненной штаммами Вас. ЛиппретшБ, процессы нитрификации протекали, в целом, более активно, чем в контрольных водоемах. Это объясняется, очевидно, непосредственным активным участием кристаллообразукицих бацилл в процессах минерализации органических веществ, что также доказано и в экспериментах с почвой. Высокая нитрифицирующая активность микрофлоры воды, конгаминированной Вас. Ишгш^егшБ, вызвала и резкое снижение растворенного кислорода в загрязненной воде.

Экспериментальное изучение жизнеспособности, репродуктивности и других функций рыб и мельчайших ракообразных, в условиях загрязнения водопроводной дехлорированной воды модельных водоемов микроорганизмами Вас. Ашгш^ишб, не показало непосредственного отрицательного воздействия энтомопатогенных бацилл на водных обитателей.

Материалы, представленные в настоящей работе, убедительно доказывают активное воздействие биотехнологических штаммов на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы и воды водоемов, поэтому при гигиеническом нормировании промышленных микроорганизмов в воде водоемов и в почве эта часть исследований является необходимой и обязательной.

В связи с этим, на основании многолетнего опыта собственных исследований и литературных данных мы разработали методику комплексной гигиенической оценки микроорганизмов-продуцентов по их действию на почву и воду водоемов, что подробно изложено в наших — • методических рекомендациях («Методика оценки воздействия штаммов-продуцентов на объекты окружающей среды»). Эти методические материалы учитывают, что состояние процессов самоочищения, микробиоценоз воды и почвы, жизнедеятельность водных организмов зависят от целого ряда условий: типов почвы, климатических и биогеохимических особенностей почвы и воды водоемов, гидрологической и гидробиологической характеристики водоема, метеорологических условий й др. В связи с этим, нет единых количественных критериев оценки, характеризующих микробиоценоз, процессы самоочищения воды и почвы, жизнеспособности обитателей водоемов.

Действие микроорганизмов-продуцентов следует учитывать по достоверному изменению вышеуказанных показателей во времени в эксперименте относительно контрольных образцов, не содержащих микроорганизмов-продуцентов.

По степени воздействия на объекты окружающей среды все штаммы-продуценты, предлагаемые к применению в биотехнологии, можно разделить на три группы:

1. Штамм-продуцент не может быть использован в биотехнологии и не подлежит гигиеническому нормированию. К этой группе следует относить штаммы-продуценты, способные к размножению в воде водоемов и почве.

2. Штамм-продуцент может быть использован в биотехнологии и, с позиций воздействия на окружающую среду, не подлежит гигиеническому нормированию.

К этой группе следует относить промышленные микроорганизмы, не размножающиеся в окружающей среде и не обладающие негативным воздействием на обитателей водоемов, микробиоценоз и процессы самоочищения воды водоемов и почвы.

3. Штамм-продуцент может быть использован в биотехнологии при условии гигиенического нормирования этих микроорганизмов в объектах окружающей среды.

К этой группе следует относить штаммы-продуценты, не размножающиеся в воде водоемов и почве, но воздействующие на водных животных, микробиоценоз и процессы самоочищения воды водоемов и пс^вы втопределенных концентрациях. '

В десятой главе рассматриваются результаты изучения актуального вопроса изменчивости свойств микроорганизмов-продуцентов и тест-микроорганизмов Е. coli и S. typhimurium, выделенных из почвы и воды водоемов, загрязненных промышленными штаммами.

Материалы исследований показывают, что длительное нахождение в почве и воде водоемов биотехнологических штаммов Вас. thuringiensis, Вас. subtilis, Ps. aurantiaca и С. tropicalis не вызывает изменчивости основных морфологических, культуральных и биохимических свойств этих микроорганизмов. Лишь ;у некоторых штаммов Вас. thuringiensis, - выделенных из почвы и воды водоемов, наблюдается утрата способности к кристаллообразованию.

При вегетировании в почве тест-микроорганизмов Е. coli и S. typhimurium у некоторых штаммов этих бактерий происходит изменение ряда культуральных и морфологических свойств. Однако изоляты S. typhimurium, выделенные из модельных водоемов, подобной изменчивости не проявили.

Биохимическая активность ряда штаммов Е. coli, выделенных из почвы, значительно снизилась. Сальмонеллы же, после длительного пребывания в почве и воде водоемов, сохранили эти биологические свойства в неизменном виде.

Сравнительное изучение рассмотренных выше свойств микроорганизмов Е. coli и S. typhiimirium, выделенных из опытных и контрольных образцов почвы и воды водоемов, не показало влияния штаммов-продуцентов, загрязняющих, эти объекты природной среды, на изменчивость свойств тест-микроорганизмов.

Изучение патогенных свойств штаммов-продуцентов и тест-микроорганизмов, длительно находившихся в почве и водоемах, по сравнению с исходными, не выявило достоверных отличий у штаммов этих микроорганизмов. Наблюдалась лишь тенденция к снижению их вирулентных свойств. Так же мало изменилась активность «ферментов патогенности» изученных штаммов, за исключением способности декарбоксилировать аминокислоты. Часть штаммов Вас. thuringiensis, изолированных из. почвы и воды, утратили валин-декарбоксилазу, что, впрочем, не повлияло на общую характеристику патогенных свойств этих бацилл.

У кишечных палочек, вегетировавших как в контрольной, так и в опытной почве, декарбоксилазная активность также снизилась. Они не расщепляли аминокислоты аргинин и аспарагин.

Спообность декарбоксилировать аминокислоты у штаммов S. typhimurium, выделенных из воды, не изменилась. Однако штаммы сальмонелл, после длительного нахождения в почве, перестали декарбоксилировать гистидин. У штаммов S. typhimurium, выделенных из почвы, загрязненной Вас. thuringiensis, исчезла способность декарбоксилировать аминокислоту пролин.

Таким образом, длительное вегетирование в почве и воде водоемов энтомопатогенных штаммов Вас. thuringiensis и тест-микроорганизмов Е. coli

и S. typhimurium приводит к изменению у них ряда биологических свойств, что может затруднить идентификацию таких штаммов.

Микроорганизмы-продуценты Вас. subtilis, Ps. aurantiaca и С. tropicalis при длительном их нахождении в почве не изменяют своих исходных свойств.

Загрязнение штаммами-продуцентами почвы и воды водоемов не оказывает достоверного воздействия на изменчивость дифференциально-диагностических и патогенных свойств санитарно-показательных и патогенных бактерий.

ВЫВОДЫ.

1. Первичная санитарно-гигиеническая оценка патогенных свойств штаммов-продуцентов, предлагаемых для использования в биотехнологии,-состоит в комплексном изучении средневирулентной дозы, диссеминации штаммов во внутренних органах экспериментальных животных, определении «пороговой» дозы, токсигенности и «ферментов патогенности».

2. В соответствии с критериями первичной санитарно-гигиенической оценки патогенных свойств все штаммы-продуценты делятся на три группы:

• Штаммы, рекомендуемые к промышленному применению;

• Штаммы, находящиеся на грани риска их применения;

• Штаммы, не рекомендуемые к использованию.

3. Изучение патогенных свойств 239 штаммов, предлагаемых для биотехнологических целей, показало, что большая часть исследованных микроорганизмов представляют прямую или потенциальную опасность для здоровья людей.

Рекомендуемыми к использованию в биотехнологиях оказались только 93 штамма (38,9%); 98 штаммов (41%) находятся на грани риска

применения; 48 штаммов (20,1%) не рекомендуются к использованию в биотехнологиях.

4. Исследования патогенных свойств 11-ти родов, включающих 26 видов микроорганизмов, предлагаемых для применения в биотехнологиях, позволили установить, что патогенные свойства штаммов-продуцентов одного рода и даже вида могут значительно отличаться. Однако, большинство изученных штаммов родов Bacillus (76,4% штаммов этого рода), Brevibacterium (84,2% штаммов) и Micrococcus (100% штаммов) были апатогенными и с этих позиций - пригодными для промышленного применения.

Все микроорганизмы родов Corynebacterium, Moraxella и Candida (соответственно 100%, 100% и 75%) расцениваются как. патогенные и опасные для промышленного использования.

Все микроорганизмы родов Enterobacter, Haemophilus, Acinetobacter и Escherichia имели показатели патогенных свойств, количественно соответствующие условно-патогенным микроорганизмам.

5. С целью проведения санитарно-микробиологического контроля за производством и применением бактериальных инсектицидов на основе Вас. thuringiensis, для выделения Вас. thuringiensis из различных объектов окружающей среды, в том числе из почвы и воды водоемов, наиболее целесообразно использовать модифицированную среду Пивоварова с ТТХ (2, 3, 5 - трифенил тетразолий хлористый) и казеин-полимиксиновый агар, а для выделения из продуктов питания - модифицированную среду Мосселя и казеин-полимиксиновый агар с феноловым красным.

Вас. thuringiensis может быть идентифицирован по культуральным и морфологическим свойствам, по наличию кристаллов и спор, на основании подвижности, положительной реакции на лецитиназу и ацетилмстшжарбинол, а также с помощью реакции агглютинации по Н-антигену.

6. При внесении в почву промышленные штаммы Вас. thuringiensis, Вас. subtilis, Ps. aurantiaca и С. tropicalis, сохраняются в почве в течение длительного времени - 80 и более суток. При однократном загрязнении почвы биотехнологическими микроорганизмами происходит медленное отмирание клеток этих штаммов, а при многократном загрязнении -накопление их в почве.

7. Загрязнение почвы массивными количествами энтомопатогенных штаммов Вас. thuringiensis и штаммов-продуцентов Вас. subtilis не вызывают существенных сдвигов в почвенном микробиоценозе и ускоряют процессы самоочищения почвы от органических загрязнений и патогенных энтеробактерий. С этих позиций загрязнение почвы данными микроорганизмами может не учитываться при разработке гигиенических регламентов содержания этих штаммов в почве.

Внесение в почву промышленных штаммов Ps. aurantiaca вызывает разбаллансировку почвенного микробиоценоза и, наряду с общей активизацией процессов самоочищения почвы, подавляет активность целлюлозоразрушающих микроорганизмов.

Поступление в почву значительных количеств штаммов-продуцентов С. tropicalis вызывает негативное воздействие на почвенный микробиоценоз и подавляет процессы самоочищения почвы. Поэтому, при разработке гигиенических регламентов содержания биотехнологических штаммов Ps. aurantiaca и С. tropicalis, к ним должны быть применены более жесткие условия.

8. При загрязнении водоемов штаммами Вас. thuringiensis, энтомопатогенные бациллы сохраняются в воде в течение длительного времени - 2 и более месяцев. При однократном внесении в воду культур Вас. thuringiensis происходит постепенное отмирание клеток этих бактерий, а при многократном поступлении - накопление Вас. thuringiensis в воде модельных водоемов.

9. Высокие концентрации микроорганизмов Вас. Ищп^мшб (108 кл/л) вызывают существенные нарушения водного микробиоценоза, замедляют процессы самоочищения воды от ЛКП, БГКП и.патогенных энтеробактерий 8. 1урЫтипит и приводят к снижению в воде растворенного кислорода и возрастанию биохимической потребности в кислороде. Подобное влияние Вас. Шип^егшв на воду водоемов должно рассматриваться как один из главных критериев гигиенического нормирования энтомопатогенных бацилл в воде.

10. Изучение воздействия штаммов Вас. Шипг^егшя на жизнеспособность и репродуктивность водных обитателей (рыб и мельчайших ракообразных) не показало непосредственного негативного воздействия энтомопатогенных бацилл на животные организмы воды водоемов.

11. Основные закономерности воздействия промышленных микроорганизмов на природную среду заключаются в следующем:

• штаммы-продуценты, относящиеся к разным группам микроорганизмов, при массивном поступлении в окружающую среду, оказывают отрицательное влияние на различные объекты среды - вызывают разбаллансировку микробиоценозов почвы и воды водоемов и тормозят процессы самоочищения в них;

• степень негативного воздействия на окружающую среду промышленных микроорганизмов определяется: кратностью поступления, а следовательно концентрацией штаммов-продуцентов в объектах природной среды; способностью промышленных микроорганизмов к отмиранию или размножению во внешней среде и принадлежностью биотехнологических штаммов к различным таксономическим группам микроорганизмов.

12. По степени воздействия на объекты окружающей среды все штаммы-продуценты можно разделить на три группы:

• штаммы-продуценты, рекомендуемые к использованию и не

■ подлежащие гигиеническому нормированию. К этой группе следует

относить штаммы-продуценты, не размножающиеся в окружающей среде и не обладающие негативным воздействием на микробиоценоз и процессы самоочищения воды водоемов и почвы в максимально возможных концентрациях;

• штаммы-продуценты могут быть использованы в биотехнологии

при условии гигиенического нормирования этих микроорганизмов в объектах окружающей среды. К этой группе следует относить штаммы-продуценты, не размножающиеся в воде водоемов и почве, но воздействующие на микробиоценоз и процессы самоочищения воды водоемов и почвы в определенных концентрациях;

• штаммы-продуценты не могут быть использованы в биотехнологии и не подлежат гигиеническому нормированию. К этой группе следует относить штаммы-продуценты, способные к размножению в воде водоемов и почве.

13. Длительное вегетирование в почве и воде водоемов энтомопатогенных штаммов Вас. thuringiensis и тест-микроорганизмов Е. coli и S. typhimurium приводит к изменению у них ряда биологических свойств, что может затруднить идентификацию таких штаммов.

Микроорганизмы-продуценты Вас. subtilis, Ps. aurantiaca и С. tropicalis при длительном нахождении в почве не изменяют своих исходных свойств.

Загрязнение штаммами-продуцентами почвы и воды водоемов не оказывает достоверного воздействия на изменчивость дифференциально-диагностических и патогенных свойств санитарно-показательных и патогенных бактерий.

14. Комплексная гигиеническая оценка штаммов-продуцентов должна включать, наряду с изучением степени патогенных свойств этих микроорганизмов, исследование воздействия их на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы и воды водоемов.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Ферменты патогенности Вас. cereus. // Кишечные инфекции. - М. -1974. - С. 86-89 (Соавт.: Волкова P.C., Сазонова Л.П.).

2. Влияние факторов внешней среды на выработку ферментов патогенности штаммов Вас. cereus. // Роль санитарно-микробиологических исследований окружающей среды в профилактике кишечных инфекций. Тез. докл. республик, науч.-практич. конференции. - М. - 1975. - С. 42. (Соавт.: Волкова P.C., Сазонова Л.П.).

3. Влияние некоторых факторов на выработку ферментов патогенности штаммами Вас. cereus. // Кишечные инфекции. - М. - 1976. - С. 16-17. (Соавт.: Волкова P.C., Пивоваров Ю.П., Сазонова Л.П.).

4. Гигиенические проблемы охраны окружающей среды в связи с производством и применением препаратов микробиологического синтеза. II Материалы I Всесоюзного совещания по гигиене окружающей среды и гигиене труда. - Баку. - 1977. - Часть I. - С. 121-129. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Алибаев Т.С., Дабуров К.Н.).

5. Выделение и идентификация Вас. thuringiensis из объектов окружающей среды. // Гигиена и санитария. - М. - 1978. - № 11. - С. 71-75. (Соавт.: Дабуров К.Н., Дериглазов А.Д., Голидонова Н.Д.).

6. Бактерии рода Bacillus и их патогенность для лабораторных животных и человека. // Актуальные вопросы патогенеза и лечения кишечных инфекций. - М. - 1978. - С. 43-47. (Соавт.: Сазонова Л.П., Жданова Н.Ф., Ивашина С.А.).

7. Методы санитарно-бактериологического исследования объектов внешней среды в связи с использованием бактериальных инсектицидов. // Тез. матер. 1-й Республиканской конф. гигиенистов и санитарных врачей. -Ашхабад. - 1978. - С. 61-64. (Соавт.: Дабуров К.Н., Дериглазов А.Д., Голидонова Н.Д.).

8. Влияние бактериальных инсектицидов на основе Вас. thuringiensis на процессы самоочищения почвы. II Тезисы докл. Всесоюзной конференции по санитарной микробиологии. - М. - 1978. - С. 38.

9. Индикация микроорганизмов Вас. thuringiensis - продуцентов бактериальных инсектицидов в объектах окружающей среды. // Тез. докл. Всесоюзной конф. по санитарной микробиологии. - М. - 1978. - С. 36-37. (Соавт.: Дабуров К.Н., Дериглазов А.Д., Голидонова Н.Д.).

10. Методы индикации остаточных количеств бактериальных инсектицидов в продуктах питания. // Чужеродные вещества в пищевых продуктах. Материалы 1-й Всесоюзн. конференции. - Алма-Ата. - 1979. -С. 61-63. (Соавт.: Дабуров К.Н., Дериглазов А.Д., Голидонова Н.Д.).

11. Изучение влияния бактериальных инсектицидов на процессы самоочищения почвы и выживаемость в почве патогенных энтеробактерий на примере S. typhimurium. // Гигиена и санитария. - М. - 1979. - № 9. -С. 78-80.

12. Изучение свойств штаммов Е. coli, S. typhimurium и Cl. perfingens, выделенных из почвы, содержащей бактериальные инсектициды на основе Вас. thuringiensis. // Гигиена и санитария. - М. - 1980. - № 4. - С. 77-78.

13. Выживаемость в почве штаммов Е. coli, S. typhimurium и Cl. perfingens в связи с применением в сельском хозяйстве бактериальных инсектицидов на основе Вас. thuringiensis. // Актуальные вопросы патогенеза и лечения кишечных инфекций. - М. - 1981. - С. 34-37.

14. Комплексная гигиеническая оценка производственных штаммов, предлагаемых для использования в промышленности микробиологического синтеза. // IX Всесоюзная конференция по теме: «Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды». - М. - 1983. - С. 145-146. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Падалкин В.П., Сазонова Л.П.).

15. Комплексная гигиеническая оценка промышленных штаммов, предполагаемых к использованию в промышленности микробиологического синтеза. // Всесоюзная конференция по теме: «Биологический

фактор - производственная среда - здоровье человека». - М. - 1984. -С. 98-100. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Падалкин В.П., Сазонова Л.П.).

16. Некоторые аспекты патогенности производственных штаммов, используемых в микробиологической промышленности. // Вопросы патогенеза, диагностики, лечения и профилактики кишечных и эндогенных инфекций. - М. - 1985. - С. 30-33. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Падалкин В.П., Сазонова Л.П.).

17. Микробиологические средства защиты растений как факторы загрязнения окружающей среды. II X Всесоюзная конференция по теме: «Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды». - М. - 1988. - С. 70-71. (Соавт.: Мялина Л.И., Манаева М.В., Чуб Г.Г.).

18. Некоторые аспекты решения вопроса взаимодействия промышленной биотехнологии с объектами окружающей среды. // X Всесоюзная конференция по теме: «Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды». - М. - 1988. -С. 71-72. (Соавт.: Мялина Л.И., Калина Г.Г., Грачева М.Н.).

19. «Ферменты патогенности» штаммов-продуцентов. // X Всесоюзная конференция по теме: «Гигиенические аспекты изучения биологического загрязнения объектов окружающей среды». - М. - 1988. - С. 72-74. (Соавт.: Шикалов Г.М., Сазонова Л.П., Дериглазов А.Д.).

20. Гигиенические вопросы охраны окружающей среды в связи с производством и применением микробиологических средств защиты растений. // Гигиена и санитария. - М. - 1988. - № 12. - С. 52-54. (Соавт.: М.А.Калугина, Т.С.Телешева).

21. Методика изучения воздействия штаммов-продуцентов на санитарное состояние окружающей среды и выживаемость патогенных энтеробактерий. // Современные вопросы инфекционной патологии. - М. -1991. - С. 64-66. (Соавт.: Сазонова Л.П., Дериглазов А.Д., Шикалов Г.М.).

22. Изучение компонентов токсинов штаммов, рекомендуемых для промышленного производства. // Медико-биологические и гигиенические аспекты охраны окружающей среды на предприятиях медицинской промышленности. Матер. Весоюзн. науч. конф. - М. - 1991. - С. 97. (Соавт.: Мялина Л.И., Чуб Г.Г., Шикалов Г.М.).

23. Изучение воздействия микроорганизмов-продуцентов Вас. subtilis на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы. // Медико-биологические и гигиенические аспекты охраны окружающей среды на предприятиях медицинской промышленности. Материалы Всесоюзной научной конференции. - М. - 1991. - С. 106. - (Соавт.: Остроголовый В.М.).

24. Оценка патогенных свойств производственных штаммов и-выделенных из разных «экологических ниш». // Всесоюзная конференция по теме: «Медицинские аспекты охраны окружающей среды», - Новокузнецк. -1991. - С. 95-98. (Соавт.: Волкова P.C., Колесникова В.В., Телешева Т.С.).

25. Влияние штаммов-продуцентов на микробиоценоз и процессы самоочищения водоемов. // Всесоюзная конференция по теме: «Медицинские аспекты охраны окружающей среды». - Новокузнецк. - 1991. -С. 108-110. (Соавт.: Манаева М.В., Телешева Т.С., Колесникова В.В.).

26. Влияние штаммов-продуцентов Ps. aurantiaca на микробиоценоз и самоочищающую способность почвы. // Всесоюзная конференция по теме: «Медицинские аспекты охраны окружающей среды». - Новокузнецк. - 1991. - С. 102-104. (Соавт.: Остроголовый В.М.).

27. Изучение воздействия Ps. aurantiaca на микробиоценоз и процессы самоочищения почвы. // Гигиена и санитария. - М. - 1993. - № 3. - С. 18-20. (Соавт.: Остроголовый В.М.).

28. Промышленные микроорганизмы как причина нарушения микробиоценоза и процессов самоочищения почвы. // Материалы VII Всероссийского симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации». - М. -1994. - С. 127.

29. Штаммы-продуценты как причина нарушения микробного ценоза водоемов. // Материалы VII Всероссийского симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации». - М. - 1994. - С. 272. (Соавт.: Телешева Т.С., Колесникова В.В.).

30. Влияние штаммов-продуцентов на микробный ценоз и процессы самоочищения водоемов в натурных и экспериментальных условиях. // Проблемы науки и педагогики с высшей медицинской школе. - М. - 1994. -С. 22. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Волкова P.C., Колесникова В.В.).

31. Промышленные микроорганизмы - причина возможного негативного действия на окружающую среду и здоровье людей. // Токсикологический вестник. - М. - 1994. - № 6. - С. 13-16. (Соавт.: Пивоваров Ю.П.).

32. Биотехнологическое производство как возможный источник загрязнения окружающей среды и фактор риска для здоровья человека. // Авиакосмическая и экологическая медицина. - М. - 1995. - Т. 29. - № 3. -С. 26-28. (Соавт.: Пивоваров Ю.П.).

33. Методика оценки воздействия штаммов-продуцентов на объекты окружающей среды. // Актуальные вопросы гигиены. Материалы межвузовской научной конф. - М. - 1996. - С. 22. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Колесникова В.В., Зиневич JI.C.).

34. Современное состояние вопроса о гигиенической регламентации биотехнологических штаммов в объектах окружающей среды. // Прикладная нелинейная динамика. - Саратов. - 1996. - № 1. - С. 96-101. (Соавт.: Пивоваров Ю.П.).

35. Комплексная гигиеническая оценка биотехнологических штаммов микроорганизмов в связи с загрязнением ими окружающей среды. // Вестник Российского государственного медицинского университета. - М. - 1996. -№ 1-2. - С. 71-76. (Соавт.: Ю.П.Пивоваров).

36. Гигиенические аспекты применения биологических средств защиты растений в сельском хозяйстве. //1 конгресс работников здравоохранения

Республики Таджикистан. - Душанбе. - 1997. - Т. 1. - С. 274-277. (Соавт.: Пивоваров Ю.П., Рафиев Х.К. и др.).

37. Эколого-гигиеническая оценка микробиологического метода защиты растений в сельском хозяйстве. // IV научно-практическая конференция «Проблемы патологии человека и последипломного образования». (Труды Таджикского института последипломной подготовки медицинских кадров). - Душанбе. - 1998. - С. 637-640. (Соавт.: Дабуров К.Н., Рафиев Х.К., Пивоваров Ю.Р., Рустамбекова Д.Х., Телешева Т.С.).

38. Биологическое загрязнение объектов внешней среды как важная, гигиеническая и экологическая проблема. // Гигиена и экология человека. -М. -1999. - С. 105-114. (Соавт.: Колесникова В.В.).