Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Токсикофармакологические свойства 2-бром-7-метил-5-оксо-5H-1,3,4-тиадиазоло-[3,2-A]пиримидина

На правах рукописи

ДЖАМШЕДОВ ДЖАМШЕД НАЗАРДОДОВИЧ

ТОКСИКОФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА 2-БР0М-7-МЕТИЛ-5-0КС0-5Н-1,3,4-ТИАДИА30Л0-[3,2-А] ПИРИМИДИНА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

1 7 МАИ 2012

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Душанбе-2012

005042969

005042969

Работа выполнена в лаборатории фармакологии Института химии им. В.И. Никитина Академии наук Республики Таджикистан и лаборатории болезней птиц Института ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор медицинских наук, профессор Рахимов Исматулло Фатхуллаевич; доктор ветеринарных наук Салимов Тоджиддин Мухиддинович

доктор химических наук, профессор кафедры органической и биологической химии Таджикского государственного педагогического университета им. С. Айни, член-корреспондент Академии образования РТ

Бобиев Гуломкодир Мукамолович; доктор медицинских наук, профессор кафедры биохимии Таджикского государственного медицинского университета им. Абуали ибн Сино Сабурова Анна Мухамедовна

Научно исследовательский институт питания Министерства энергетики и промыщленности Республики Таджикистан

Защита диссертации состоится « 8» мая 2012 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета КМ.047.003.01 при Институте химии им. В.И. Никитина АН РТ по адресу: 734063, Душанбе, ул. Айни, 299/2. Сайт института: www.chemistry.tj.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института химии АН РТ по адресу: 734063, г. Душанбе, ул. Айни, 299/2.

Автореферат разослан: «_£__» о^аеиА 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

И.Ф. Рахимов

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Многообразное воздействие на организм производных пиримидинов, объясняется в основном, их влиянием на синтез нуклео-тидов так как они являются составной частью нуклеиновых кислот (ИЛ. Крылов, 2005; К. Агипа е1 а1„ 2004; V. Коуа1еуа е1 а1., 2004, 2005; аагщсЫ, 2004).

При образовании пиримидиновых нуклеотидов в тканях животных происходит полное формирование свободного пиримидина (оротовой кислоты), затем образуется рибонуклеотид - оротидинмонофосфат - обжцй предшественник всех пиримидиновых нуклеотидов, которые кроме основных пут^ синтеза могут образовываться также из свободных пиримидинов и нуклеозидов по так называемым запасным метаболическим путям. Биологическая роль пиримидиновых нуклеидов многообразна, но, прежде всего, связана с биосинтезом различных биополимеров и клеточных элементов, выполняющих разнообразные и сложные функции: нуклеиновые кислоты, полисахариды, белковоуглеродные комплексы, разнообразные сложные липиды, сложные белки (МатпЮс1а1,2001;

Оо§апе1а1, 2002; Уегспее1а1, 2004).

Эксперименты по выяснению фармакологических свойств производных пиримидина показали, что кроме способности стимулировать лейкопоэз и эри-тропоэз, пиримидины обладают способностью стимулировать репаративные процессы, оказывать противовоспалительное действие, вызывать анаболический и антикатаболический эффект, а также повышать фагоцитоз, резистентность к инфекции, поствакцинальный иммунитет. В организме, находящемся в состоянии иммуносупрессии, пиримидины проявляют наибольшую активность. Кроме специфического иммунного ответа, пиримидины активизируют и факторы неспецифической антиинфекционной резистентности - дизоцим, комплемент, пропердин, лейкины (К. Агипа е1 а!.. 2004; 2Ьапее1а1, 2004; У.КоУ^суа е1 а1., 2004,2005; И.Л. Крылов, 2005; вЫррвеЫ, 2005; Б. ЗсЬспопс, е^аЬ, 2006). ;

Были установлены два механизма действия пиримидинов- прямой, при их непосредственном влиянии на клетки, и опосредованный - .через активацию эндокринной системы путем повышения продукции эндогенны* кортикосте-роидов. Способность пиримидинов потенцировать действие ,антибиотиков, в какой-то степени ослаблять побочные действия гормонов, радиационного облучения, является особенно важной. В медицинской практике пиримидины применяют также для стимуляции поствакцинального иммунитета у детей с целью профилактики гриппа совместно с интерфероном. Пиримидины активны при введении внутрь. Производные пиримидина - малотоксичные соединения.

Фармакокинетика пиримидиновых соединений изучена недостаточно. Имеются лишь сведения относительно метилурацила, который уже через час после введения достигает максимальной концентрации во многих органах: в сердце, надпочечниках, селезенке, печени. Большое содержание метилурацила в головном мозге свидетельствует о его способности проникать через гемато-энцефалический барьер и непосредственно влиять на центральную нервную систему. Пиримидины благодаря разностороннему фармакологическому действию на организм; находят широкое применение в медицине (С.С. Сатторов и др., 2002; М.А. Куканиев и др., 2004; V. Kovaieva et al., 2004, 2005; Zhangelal, 2004; И-JI. Крылой, 2005; Shippselal, 2005).

Целью преследования является фармакологический скрининг 2-бром-7-метиЛ-5-оксо-5Н-1,3,4-тнадиазоло[3,2-а]пиримидина.

! Основные задачи исследования. В соответствии с поставленной целью нами Лрёдусматривалось решение следующих задач:

' "¡'.'Изучить антимикробную активность соединения в отношении наиболее распространенных возбудителей болезней сельскохозяйственных птиц, Определить чувствительность эпизоотических изолятов, выделенных от сельскохозяйственных птиц.

2. Установить параметры острой токсичности соединения на лабораторных животных и цыплятах.

3. Изучить хроническую токсичность и влияние соединения на морфологические и биохимические показатели крови. Оценить функциональное состояние печени после введения соединения.

: :4:'Изучить кумулятивные свойства соединения.

5. Изучить эмбриотоксическое и тератогенное свойствахоединения.

'6. Исследовать фармакокинетику соединения.

7. Определить сроки выведения остаточных количеств соединения из организма сельскохозяйственной птицы. ■■■ .

Научная новизна и практическая значимость работы. Впервые исследовано бактериосгатическое и бактерицидное действия соединения в отношении эпизоотических изолятов Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Salmonella: enteritidis, Salmonella pullorum, Pasteurella multocida, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, выделенных or сельскохозяйственной птицы, где установлено, что исследуемое соединение имеет выраженную антимикробную активность.

Определены параметры острой ¡токсичности,соединения для лабораторных животных и Цыплят, и их хроническую токсичность.; Выявлено, что продолжительное введение соединения не вызывает нарушений обмена веществ,

¿емЬп'оэза и лейкопоэза' цыплят. Морфологические нарушения в органах животных (печени, сердце, почках, селезенке) не отмечены.. Длительное введение соединения не вызывает признаков токсического проявления и сдвигов в обме-

ных процессах.- ■ .г . -.

При введении белым мышам, исследуемое соединение в дозе 1/10 ЛД5о не имеет кумулятивных свойств, не вызывает функциональных изменений в печени. В дозах 1/10 и 3/10 ЛД5о соединение не оказывает тератогенного и эмбрио-

токсического действия. f • ■ - j}

Концентрация соединения в сыворотке крови, в скелетной мускулатуре и в сердечной мышце, достигает максимального значения через 6 ч, легких - 8 ч и постепенно снижается, оставаясь через 12 ч на уровне минимальной бактерицидной концентрации для изученных микроорганизмов (St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S: enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa, Kl. pneumoniae). Наиболее высокие концентрации соединения обнаруживаются через б ч в почках и через 8 ч в печени, высокое содержание соединения в которых сохраняется до 12 ч, что свидетельствует об их участии в его выведении. Содержание соединения в крови и внутренних органах начинает

снижаться через 12 ч. ; .

В органах и тканях цыплят через сутки после последнего .введения соединение было обнаружено в количестве от 0,09,да .5,12 мкг/г, через 3 сут следы

соединения установлены только в печени и почках. ,.,

На основе анализа биологической активности выявлено, что 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин проявляет широкий спектр

антимикробной активности и может быть предложен для углубленных исследований как перспективное лекарственное средство. Низкая токсичность и высокая противомикробная активность данного соединения позволяют разработать лекарственные формы нового высокоэффективного химиотерапевтического средства.

Синтезированные препараты обладают широким спектром антибактериальной активности, проявляют противогрибковую- активность и являются малотоксичными в отношении экспериментальных животных. Положения, выносимые на защиту: " 1. Впервые определена чувствительность эпизоотических изолятов, выделенных от сельскохозяйственных птиц к соединению и изучение его антимикробной активности в отношении наиболее распространенных возбудителей болезней сельскохозяйственных птиц. :

2. Определены параметры токсичности исследуемого соединения на лабораторных животных и цыплятах.

3. Определить хроническую токсичность и влияние соединения на морфологические и биохимические показатели крови, уровень естественной резистентности ПТИЦЫ. |

4. Определить кумулятивные свойства исследуемого соединения и изучение функционального состояния печени при введении соединения белым мышам. • ■

5. Изучить эмбриотоксическую и тератогенные свойства соединения.

6. Определить фармакокинетику соединения.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на Всероссийском съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные'н и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2009), VI Нумановских чтениях (Душанбе, 2009), IV Международной научно-практической конференции «Персисктивц развития науки и образования»! (Душанбе, 2010), Республиканской научной конференции «Химия: исследования, преподавание, технология» (Душанбе, 2010)..

Публикации. По результатам исследований опубликовано 18 научных работ. >

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 110 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, главы, посвященной данным собственных экспериментальных наблюдений, обсуждения полученных результатов, выводов и списка использованной литературы, содержащего 203 источников, из которых 97 на иностранных языках. ¡Работа иллюстрирована 10 таблицами и 15 рисунками.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в лаборатории фармакологии Института химии им. В.И. Никитина Академии наук Республики Таджикистан и лаборатории болезней птиц Института ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук в 2007-2011 гг.

Объектом фармакологических исследований явился 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тииадиазоло[3,2-а]пиримидин, который был синтезирован из 2-амино-5-бром-1,3,4-тиадиазола и ацетоуксусного эфира в среде полифосфорной кислоты (рис. 1).

N—N + СН3СОСН2СООС2Н5 РРА

Рис. 1. Синтез 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-М,4-тиа-диазоло [3,2-

а1пиримидин.

• G хорошим выходом 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-т'иа-диазоло[3,2-

а]пиримидии синтезирован путём взаимодействия 2-амино-5-бром-1 3,4-тиадиазола с ацетоуксусным эфиром в среде ПФК. Реакция протекала при температуре 95 - 100°С в течение 3 - 4 часов. При разбавлении реакционной среды

ледяной водой продукт реакции выпадал в осадок. ГоелиНение

Выход конечного продукта в данной реакции достигает 80%. Соединение

хорошо растворяется в большинстве органических растворителей.

Исследуемое соединение представляет собой кристаллически« порошок бело-жёлтого цвета, хорошо растворимый в воде и органических растворитеЛЯХ' Эксперименты проведены на 630 белых мышах обоего пола (масса тела 18 - 20 ri 180 белых беспородых крысах обоего пола (масса тела - 180 - 220 г), 525 цыплятах 60 дневные (масса тала - 545 - 550 г) и 120-дневного возраст, ("масса тела - 1,2 кг). Все животные содержались в виварии на обычном лабораторном рационе. Опыты проводились с соблюдением Правил проведения работ „а экспериментальных животных (приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР №755 от 12.08.1977 г.) и согласовывались с требованиями по гуманному обращению с животными (IACUC, 1994).

Методом серийных разведений в мясопептонном бульоне (МПБ) изучили протнвомикробную активность соединения в отношении 137 эпизоотических изолятов St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. entente, S. pullorum, P.

multocida, Ps. aeruginosa, Kl. pneumoniae.

Острая токсичность соединения изучена в опытах на белых мышах (масса тела - 18 - 20 г, 6 групп, п=10) и 60-дневных цыплятах (масса тела - 545 _ 550 г 6 групп п=10). Соединение вводили белым мышам однократно, внут-рибрюшинно в объеме 0,2 мл в дозах 250 мг/кг массы тела (1-я ipynna)* 500 (2-я) 750 (3-я) 1000 (4-я), 1250 мг/кг массы тела (5-я); ПСроралыю в объеме 2 мл в тех же дозах - цыплятам. В соответствующих объемах й *озах контрольным

животным и цыплятам вводили сахарозу.

После определения максимально переносимой дозы (МПД) - гибели животных и цыплят не наблюдается, и дозы, вызывающей гибель всех животных и цыплят, бывших в опыте (ЛДюо), расчитывали ЛД50, математически обрабатывая полученные результаты по методу Г.Н. Першина.

Хроническая токсичность изучена в опытах по скармливанию испытуемого соединения в' течение 23 суток трем группам (п=10) белых крыс обоего пола массой тела - 180 - 220 гр. и трем группам (п=10) 120-дневных цыплят (масса тела - 1,2 кг) в дозах 65, 130 и 195 мг/кг массы тела исследуемого соединения. В контрольных группах животные и птица испытуемое соединение не получали.

Подсчет количества, эритроцитов крови проводили по общепринятой методике, используя счетную камеру с сеткой Горяева.

Подсчет лейкоцитов проводили по методике A.A. Кудрявцева и Л.А. Кудрявцевой (1974).

Содержание гемоглобина определяли общепринятым методом с помощью гемометра Сали.

Общий белок в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом Рейса.

Уровень естественной резистентности исследовали согласно «Рекомендации по определению показателей естественной резистентности птиц».

На 30 белых мыша* (масса тела - 18 - 20 г) и 10 цыплятах 60-дневного возраста (масса тела - 545 - 550 г) по методу Лима (И.В. Саноцкий и др., 1975) в течение 28 дней исследованы кумулятивные свойства соединения.

Функциональное состояние печени у белых мышей (масса тела - 18 -20 г; 9 групп по 10 гол.: 6 подопытных и 3 контрольные группы) исследуемого соединения определяли по методике Д.Р. Рогозина (М.Л. Беленький, 1969). Соединение в дозе равной 1/10 ЛД50 (65 мг/кг массы тела) натощак перорально вводили половине подопытных животных* а в дозе равной 1/5 ЛД50 (130 мг/кг массы тела)- второй половине и через 1,3 и 6 ч внутрибрюшинно вводили гек-сенал в дозе 60 мг/кг массы тела.

Эмбрнотоксическое и тератогенное действия изучали в опытах на белых крысах (60 самок, масса тела -200 - 210 г) в половозрелом, неонатальном и постнатальном периодах (по методике А.П. Шицковой с соавт., 1977). Животных с первого дня беременности разделили на три группы (п=20), двум из которых (подопытные) для определения эмбриотоксического действия скармливали в смеси с кормом исследуемое соединение в дозах 65 и 195 мг/кг массы тела в течение 17-18 дней, а для определения тератогенного действия - до конца беременности (21 - 23 дня). Крысы контрольной группы исследуемое

вещество не получали. При ежедневном наблюдении за животными учитывали

клиническое состояние, аппетит, поведение.

По 10 крыс из каждой группы забиты методом декапитации на 19-й день беременности. На вскрытии учитывали количество желтых тел беременности, мест имплантации живых и мертвых эмбрионов. Доимплантационную, постим-плантационную и общую эмбриональную смертность рассчитывали общепринятым методом.

От оставшихся в группах крыс получено потомство, за которым наблюдали в течение одного месяца после рождения, учитывая прирост массы тела, рост, обрастание шерстным покровом, подвижность, активность высасывания молока матери.

Фармакокинетику соединения изучали на 50 цыплятах 60-дневного возраста с массой тела 545 - 550 г. Экспериментальная птица не получала корм и воду в течение часа до начала эксперимента и 2 ч после введения исследуемого соединение, которое вводили перорально однократно через зонд в зоб в дозе 65 мг/кг массы тела. По 5 цыплят забивали через 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; 12; 18 й 24 ч после введения соединения, содержание которого определяли в сыворотке крови, скелетной ч сердечной мышцах, легких, печени и почках.

Определение наличия соединения в биосубстратах проводили микробиологическим методом диффузии в агар с тест культурой Bacillus subtilis АТСС

6633. Чувствительность метода - 0,025 - 0,05 мкг/г или мкг/мл.

Определение сроков выведения остаточных количеств соединения из организма после применения проводили на 15 цыплятах 60-дневного возраста с массой тела - 545 - 550 г, которым ежедневно в течение 6 cyt вводили через зонд истытуемое соединение в дозе 65 мг/кг массы тела 2 раза в день.'Через 1, 3 и 5 суток после последнего введения соединения забивали по 5 цыплят и проводили исследования мышечной ткани, сердца, легких, почек, печени, мышечного слоя желудка, крови на наличие действующего'вещества, определение которого в биосубстратах проводили микробиологическим методом с тест-микробом Вас. subtilis АТСС 6633.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Антимикробная активность 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тнадназоло(3,2-а]пиримидина

Антимикробная активность исследуемого соединения изучена в отношении 137 эпизоотических изолятов St. aureus (20 - 14,6%), St. pyogenes (13 -9,5%), E. coli (37 - 27%), Pr. vulgaris (11 - 8%), S. enteritidis (11 - 8%), S.

pullorum (14 - 10,2%), P. multocida (16 - 11,7%), Ps. aeruginosa (10 - 7,3%), Kl.

pneumoniae (5 — 3,7%).

- МБсК соединения для St. aureus и Str. pyogenes находилась в пределах от 0,31 до 1,24 мкг/мл (соответственно 80 и 84,6% изолятов - 0,31 мкг/мл; по 10 и 7,7% - 0,62 и 1,24 мкг/мл), МБцК для этих микроорганизмов - 0,62 - 2,48 мкг/мл (соответственно 75 и 76,9% изолятов - 0,62 мкг/мл; 10 и 15,4% - 1,24; 15 и 7,7% - 2,48 мкг/мл).

- Для Е. coli МБсК соединения составила 0,31 - 4,96 мкг/мл (0,31 мкг/мл -67,6% изолятов; 0,62 и 1,24 - по 13,5%; 2,48 и 4,96 мкг/мл - по 2,7%), а МБцК -2,48 - 9,92 мкг/мл (2,48 мкг/мл - 73% изолятов; 4,96 - 24,3%; 9,92 мкг/мл -2,7%). '

Pr. vulgaris и S. enteritidis были чувствительны к соединению в концентрациях 0,62 - 2,48 мкг/мл (соответственно 81,8 и 72,7% изолятов - 0,62 мкг/мл; 9,1 и 18,2% - 1,24 мкг/мл; по 9,1% - 2,48 мкг/мл).

Испытуемое соединение подавляло рост этих культур в концентрациях 1,24-4,96 мкг/мл (1,24 мкг/мл -соответсвенно 81,8 и 72,7% изолятов; 2,48-по 9,1%; 4,96 мкг/мл - 9,1 и 18,2%).

Бактериостатическое действие исследуемого соединения в отношении S. pullorum отмечали в концентрациях от 1,24 до 4,96 мкг/мл (78,6% изолятов -1,24' мкг/мл; 14,3% - 2,48; 7,1% - 4,96 мкг/мл), а минимальная подавляющая ; концентрация находилась в пределах 2,48 - 9,92 мкг/мл (2,48 мкг/мл - 78,6% >изолятов; 4,96 - 14,3%, 9,92 мкг/мл - 7,1%).

' ' ' МБсК соединения для Р. multocida составила 0,31 - 1,24 мкг/мл (81,3% ( изолятов - 0,31 мкг/мл; 6,2% - 0,62; 12,5% - 1,24 мкг/мл). Рост этой культуры соединение подавляло в концентрациях 0,62 - 2,48 мкг/мл (0,62 мкг/мл - 68,8% изолятов; 1,24 - 12,4%; 2,48 мкг/мл - 18,8%).

Для Ps. aeruginosa МБсК соединения находилась в пределах 1,24 - 4,96 мкг/мл (60% изолятов - 1,24 мкг/мл; по 20% - 2,48 и 4,96 мкг/мл). Концентрации от 2,48 до 9,92 мкг/мл были подавляющими для этого микроорганизма (2,48 и 4,96 мкг/мл - по 40% изолятов, 9,92 мкг/мл - 20%).

Действие соединения в отношении Kl. pneumoniae было бактериостатиче-ским в концентрациях 1,24 - 4,96 мкг/мл (60% изолятов - 1,24 мкг/мл; по 20% -2,48 и'4,96 мкг/мл). Бактерицидность соединения проявлялась в концентрациях 2,48 - 9,92 мкг/мл (2,48 и 4,96 мкг/мл - по 40%; 9,92 мкг/мл - 20%).

Таким образом, бактериостатическое действие испытуемого соединения в отношении исследованных изолятов St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa, Kl. pneumoniae наблюдали в концентрациях от 0,31 до 4,96 мкг/мл (0,31 мкг/мл - 47,4% изоля-

tob- 0 62 - 23,4%; 1,24 - 21,2%; 2,48 - 5,8%, 4,96 мкг/мл - 2,2%), а бактерицидная'концентрация составила 0,62 - 9,92 мкг/мл (26,3% изолятов - 0,62 мкг/мл; 21,2% - 1,24; 36,5% - 2,48; 13,9% - 4,96, 2,1% - 9,92 мкг/мл). Резистентных изолятов не было, что свидетельствует о перспективности изготовления на основе соединения антимикробных препаратов.

3.2. Токсикологические свойства

2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадназоло[3,2-а]пиримидина

3.2.1. Острая токсичность

По принципу парных аналогов из белых мышей (масса тела - 18 - 20 г, п=Ш и 60-дневных цыплят (масса тела - 545 - 550 г, п=10) сформировали по

шесть групп для определения острой токсичности исследуемого соединения, которое вводили белым мышам однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл в дозах 250 мг/кг массы тела (1-я группа), 500 (2-я), 750 (3-я), 1000 (4-я), 1250 мг/кг массы тела (5-я), а циплятам - перорально в объеме 2 мл в тех же дозах. В _ соответствующих объемах и дозах контрольным животным и цыплятам вводили сахарозу.

Летальный исход и характер клинической картины являлись критериями

оценки токсичности.

Параметры острой токсичности соединения, для лабораторных животных

и цыплят: ЛД.оо - 1250, ЛД50 - 650 и 750 мг/кг массы тела соответственно.

3.2.2. Хроническая токсичность

В течение 23 сут трем группам (п=10) белых мышей (масса тела 18 - 20 г) и трем группам (п=10) 120-дневных цыплят (масса тела - 1,2 кг) в дозах 65, 130 и 195 мг/кг массы тела вводили испытуемое соединение для определения опасности повторного применения, степени выведения при длительном применении. Животные и птица контрольных групп соединение не получали.

При изучении хронической токсичности соединения установлено, что у подопытных и контрольных белых мышей поведение, аппетит, прием воды, состояние слизистых оболочек и шерстного покрова не отличались.

Существенных изменений при введении соединения не отмечали и в состоянии птиц, которые активно двигались и хорошо поедали корм.

Влияние различных доз (65, 130, 195 мг/кг массы тела) соединения на организм птиц изучили на 5, 10, 23 дни с учетом динамики массы тела, коэффициента роста, гемолитических, биохимических показателей и уровня естественной резистентности.

•Введение в течение 23 сут соединения не вызывает статистически достоверных нарушений обмена веществ, гемопоэза и лейкопоэза цыплят. В органах (печени, сердце, почках, селезенке) не отмечены морфологические нарушения. Птицы подопытных групп нормально развивались и прибавляли в массе.

Следовательно, ежедневное введение в течение 23 дней соединения не вызывает признаков токсикоза и сдвигов в обмене веществ.

3.2.3. Кумулятивные свойства Кумулятивные свойства соединения исследованы на 30 белых мышах (масса тела - 18 - 20 г) и 10 цыплятах 60-дневного возраста (масса тела - 545 — 550 г) по методу Лима, в соответствии с которым каждые 4 дня доза соединения увеличивается на 50%, что позволяет в течение 28 дней проследить реакцию1 лабораторных животных и птиц на введение от 0,1 до 1,12 ЛД50.

При определении кумулятивных свойств соединения в опытах на цыплятах установлено, что при дозе 0,15 от ЛД50 (на 8 сут) начинается гибель птицы и при суммарной дозе 1425 мг/кг массы тела (на 12 сут) погибают все цыплята (табл. 1). Рассчитано, что при многократном введении для цыплят ЛД50 соединения составляет 975 мг/кг массы тела.

Таблица 1

Результаты изучения кумулятивных свойств соединения

Период введения, сут Доза, мг/кг массы тела Кол-во павших животных, гол.

ежедневная суммарная

по периодам введения за весь период введения

б.м. ц. б.м. ц. б.м. ц. б.м. ц.

1-4 65 75 260 300 260 300 - -

5-8 97,5 112,5 390- 450 1 " 650 750 - 2

9-12 143 165 585- ■■ '675 ■1235 1425 - 10

13-16 221 910'- . -'S-'-".;--- 2145 -

17-20 325 1300 ■-U ' 3445 -

21-24 487,5 1950 • 5395 3

25-28 728! 2925 8320 4

Примечание: б.М. - белые мыши, ц. - цыплята.

Отношение ЛД50 соединения при многократном,введении к ЛД5о при однократном введении 1,3, что свидетельствует об отсутствии выраженных кумулятивных свойств соединения для цыплят.

3.2.4. Функциональное состояние печени . после однократного введения соединения бельтмышам Гепатоксическое действие соединения исследовали^по. методике Д.Р. Рогозина (Беленький М.Л., 1969). 90 белых мышей (масса тела - 18 - 20 г) разделили на группы (п=10): 6 групп - подопытные и 3 группы - контрольные. Половине подопытных животных натощак перорально вводили соединение в дозе равной 1/10 ЛД50 (65 мг/кг массы тела), а второй половине - 1/5 ЛД50 (130 мг/кг массы тела) и через 1, 3 и 6 ч вводили гексенал внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг массы тела. Продолжительность, гексеналового наркоза учитывали с момента принятия мышами бокового положения до первых попыток его изменить. Контрольным животным вводили физиологический раствор в дозе 1 мл/гол..

Продолжительность гексеналового сна при введении соединения в дозе 1/10 ЛД50 (65 мг/кг массы тела), хотя, несколько и снижается, но достоверно не отличается (Р>0,05) от продолжительности сна в контрольной группе (табл. 2).

Таблица 2

Результаты гексеналовой пробы на белых мышах__

Время введения гек-сенала Средняя продолжительность сна, мин

1/ю ЛД50 1/5 ЛД5о Контроль

Через, ч 1 27,5±2,4 27,2±4,3 28,6+4,1

3 25,1±2,1 82,7±16,6 26,9±3,2

6 27,8±6,3 18,7±5,4 28,1+3,9

Через час продолжительность гексеналового сна при увеличении дозы соединения до 1/5 ЛД50 (130 мг/кг массы тела) составила 27,2+4,3 мйй, что достоверно не отличается (Р>0,05) от соответствующего показателя в контрольной группе. Увеличение продолжительности гексеналового сна отмечено через 3 ч после введения соединения (82,7+16,6 мин), уменьшение длительности гексеналового наркоза до 18,7±5,4 мин наблюдали через 6 ч, что достоверно отличается (Р<0,05) от соответствующего показателя в контрольной группе.

Таким образом, в дозе 1/5 ЛД50 соединение вызывает непродолжительное угнетение функции печени, восстанавливающееся через 6 ч после введения. Функциональных изменений в печени соединение не вызывает в дозе 1/10 ЛД50.

3.2.5. Эмбриомоксическое и тератогенное свойства

По методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) в опытах на белых крысах (масса тела - 200 - 210 г) в половозрелом, неонатальном и постнатальном периодах изучили эмбриотоксическое и тератогенное действия соединения.

С первого дня беременности животных разделили на три группы (п=20). Крысам двух подопытных групп для определения эмбриотоксического действия соединение скармливали в смеси с кормом в дозах 65 и 195 мг/кг массы тела в течение 17 - 18 дней, для определения тератогенного действия - до конца беременности (21-23 дня). Животные контрольной группы соединения не получали.

В экспериментальных и контрольных группах беременность проходила без каких-либо отклонений. После вскрытия подопытных и контрольных беременных крыс оценка эмбрионального материала, статистическая обработка полученных данных показали отсутствие каких-либо аномалий при онтогенезе

плодов (табл.3). Таблица 3

Показатель Доза, мг/кг массы тела Контроль

65 195

желтых тел 11,4±0,5 11,3±0,4 11,6±0,4

Кол-во - мест имплантации 10,2±0,6 9,4±0,1 11,2±0,2;

на одну ' • живых эмбрионов 9,8±0,5 9,4±0,5_ 9,6+0,8

самку; мертвых эмбрионов 1,0±0,3 1,0+0,6 1,1 ±0,4

общая эмбриональная 13,1±0,4 1 11,5±0,6 12,8±0,5

Смертность, % постимплантационная 9,3±0,8 9,9±0,4 8,7±0,3

доимплантационная 4,6±0,7 3,8+0,4 5,2+0,6

Выживаемость, % 86,2±10,1 87,8±10,6 88,7±11,1

На процессы овуляции и эмбриогенеза, продолжительность беременности исследуемое соединение в дозах 65 и 195 мг/кг массы тела существенно не оказывает отрицательного влияния. Не обнаружено уродств, аномалии развития внутренних органов и скелета эмбрионов (табл. 4).

Таблица 4

Тератогенное действие соединения__

Показатель Доза, мг/кг массы тела Контроль

65 195

Средний (яя) вес крысенка, мг 6011,1+140,7 5922,9±130,3 5899,2±233,9

длина туловища крысенка, мм 47,6±0,5 46,4±0,9 47,9±0,7

масса плаценты, мг 301,4+38,1 307,1±25,3 309,7±29,9

Уродства внутренн и скелета аномалии развития их органов нет нет нет

Соединение в дозах 65 и 195 мг/кг массы тела не оказывает тератогенного и эмбриотоксического действия на эмбрионы в процессе онтогенеза и в постна-тальный период роста и развития крысят.

3.3. Фармакологические свойства

2-бром.7-метил-5-оксо-5Н-1,3)4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина

3.3.1. Фармакокинемйка , Фармакокинетику изучаемого соединения: (содержание в крови, скелетных мышцах, сердце, легких, печени и почках) изучали на 50 цыплятах 60-дневного возраста (масса тела - 545 - 550 г), которым вводили перорально однократно через зонд в зоб в дозе 65 мг/кг массы тела. Через 0,5; 1 -2; 4; 6; 8; 12; 18 и 24 ч после введения исследуемого соединения забивали по 5 цыплят.

Установлено, что соединение при пероралькой введений хорошо резор-бировалось в органы и ткани цыплят. После применения соединения через 1 ч во всех органах и тканях его содержание достигает уровня минимальнои бактерицидной концентрации (табл. 5).

Таблица 5

Фармакокииетика соединения

при пероральном введении птицам в дозе 65 мг/кг массы тела__

Содержание в 1 мл или 1 г, мкг

Час

0,5

Сыворотка крови

0,68±0,10 5,09±0,64

Мышцы

0,73±0,12 5,67±0,84

Сердце

0,71+0,08 6,91 ±0,71

Легкие

0,58+0,16 5,76±0,54

Печень

1,94+0,11 8,22±0,62

Почки

3,72±0,21 11,86±1,27

2 6,04+0,87 7,20+0,78 7,25±0,96 6,91+0,79 9,82±1,42 12,28±1,23

4 8,72±1,35 7,90+0,84 8,50±0,79 9,70±1,34 10,70+1,12 14,96±1,27

6 9,98+1,11 9,63±1,09 9,90+1,17 10,83±1,23 12,91±1,62 18,34+2,22

8 8,60+1,12 9,55±1,10 9,74+1,18 11,71+1,21 13,63±1,13 14,47±1,16

12 4,31 ±0,75 5,30+0,48 6,54±0,93 7,40±0,89 8,58±0,78 11,79±1,10

18 2,28±0,07 3,16±0,08 3,32+0,10 4,10±0,18 6,54+0,67 8,43±1,13

24 0,11+0,03 2,12+0,01 1,24+0,03 3,18±0,02 4,23±0,25' 5,20±0,34

Через час после введения концентрация в крови соединения составляла 5,09±0,64 мкг/мл, через 6ч- 9,98±1,11, через 12 ч -4,31 ±0,75, через 24 ч - 0,11±0,03 мкг/мл (рис. 2).

В мышечной ткани исследуемое соединение проявлялось через 0,5 ч после введения. Концентрация его была равна 0,73±0,12 мкг/г. Через 6 ч уровень содержания дости-. гал 9,63±1,09, через,12 ч уровень снижался до 5,30±0,48, а через сутки до - 2,12±0,01 мкг/г (рис. 2.

Через час после введения уровень соединения в сердечной мышце цыплят был равен 6,91 ±0,71 мкг/г. Наибольшую концентрацию соединения (9,90±1,17 мкг/г) наблюдали через 6 ч. Через 12 ч содержание соединения составляло 6,54±0,93, через 24 ч - 1,24±0,03 мкг/г (рис. 3).

•5

9,63 9,55

0.5 1

8 12

14

Рис. 2. Динамика концентрации соединения в сыворотке крови (сверху), мкг/мл, и мышечной ткани (снизу), мкг/мг.

■ Сердце О Легкие

Рис. 3. Динамика уровня соединения в сердце и легких, мкг / мг.

В легких концентрация соединения через час после введения достигала 5,76±0,54 мкг/г. Наибольшее содержание соединения (11,71±1,21 мкг/г) наблюдали через 8 ч. Через 12 ч после введения концентрация исследуемого соединения составляла 7,40±0,89, через 24 ч - 3,18±0,02 мкг/г (рис. 3).

Уровень соединения в печени был наиболее высоким через 8 ч (13,63±1,13 мкг/г). Затем концентрация уменьшалась: через 12 ч-до 8,58±0,78,

через 24 ч-до 4,23±0,25 мкг/г (рис. 4).

Рис. 4. Динамика уровня соединения в печени и почках, мкг / мг.

в почках наблюдали наибольший из всех исследуемых органов уровень соединения. Через час после введения концентрация его составляла 11,86±127 мкТпик увеличения содержания в почках соединения наблюдали через, 6 , (18,34±2,22 мкг/г). Через 12 ч >РоВеш. соединения снижался до 11.W1.10. а

чепез 24 ч - 5,20±0,34 мкг/г (рис. 4)- ; i

V ^ Максимального значсЕя к&цеатрация соединения в сыворотке крови, мышцах и сердце достигала через 6 ч. ^ких - 8 ч и постепенна снижалась, оставаясь через 12 ч на уровне минимальной подавляющей концентрации для Гошх микроорганизмов. Наиболее высокие концентрации соединения обна-„али в почках (через 6 ч) и печени (через 8 ч), причем высокое содержание — в этих органах держится на протяжении 12 ч, что свидетельствует об Гучастии в выведении соединения. Содержание данного соедииения в крови и внутренних органах начинает снижаться через 12 ч.

Sm образом, установлено, что минимальная бактерицидная концентрация со«1 в организме птицы в течение суток дости.ется двукратным

его введением в дозе 65 мг/кг массы тела.

3.3.2. Сроки выведения остаточных количеств соединения из организма птицы 'для определения сроков выведения остаточных количеств «ашегосоеди-нения из организма, после ежедневного применения его 15 цыплятам 60-дневно о возраста (масса тела - 545 - 550 г) в течение 6 сут в дозе 65 мг/кг массы тела 2 раза в день. Через 1,3 и 5 сут после последнего введения соединения

уГвГи п 5 ц -ят и проводили исследования (микробиолоп.ческим м^дом

с тест-микробом Вас. subtilis АТСС 6633) мышечной ткани, сердца, легких, почек печени мышечного слоя желудка, крови на наличие соединения.

' после иосл^него^едения соединение было обнаружено «

количестве от0,09 до 5,12 мкгУг во; всех исследованных образцах. Через 3 суг "олич^а соединения были установлены только в печени и почка.

^вательйо, через 5 |уг преле ведения соединение полностью выводится из организма.

выводы

1. В отношении исследованных изолятов St. aureus, Str. pyogenes,^ сЫ> Рг vulgaris. S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aerugmosa, Kl. pneumonme бактериостатическое действие соединения отмечали в --ентрациях-0,31 до 4 96 мкг/мл, а бактерицидная концентрация составила 0,62 - 9,92 мкг/мл.

2 Определены параметры острой токсичности соединения для лабораторных животных и цыплят, ЛД.оо -1250, ЛД50 - 650 и 750 мг/кг массы тела.

3. Продолжительное введение (23 сут) соединения не вызывает статистически достоверних нарушений обмена веществ, гемопоэза и лейкопоэза цыплят. Морфологические нарушения в основных органах (печени, сердце, почках, селезенке) не отмечены. Введение соединения в течение 23 дней не вызывает

токсических проявлений. ,

4. Соединение не обладает кумулятивными свойствами. В дозах . 65мг/кг (1/10 ЛД5о) и 195 мг/кг массы тела (3/10 ЛД50) исследуемое соединение

не оказывает тератогенного и змбриотоксического действия на эмбрионы в процессе онтогенеза и в постнатальный период роста и развития крыс.

5 Концентрация соединения в сыворотке крови, мышцах и сердце достигает максимального значения через 6-8 ч, и постепенно снижается, оставаясь через 12 ч на уровне минимальной бактерицидной концентрации. Содержание соединения в крови и внутренних органах начинает снижаться через 12 ч.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1 Антимикробная активность 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а] пиримидина / Т.М. Салимов, З.Г. Сангов, З.Д. Ашурова, Дж.Н. Джамшедов, М.А. Куканиев, М.Д. Ашурова, С.С. Сатаров, К.Х. Хайдаров // Здравоохранение Таджикистана.

- 2009. - №3, приложение 1. - С. 173 - 176.

2. Влияние некоторых1 производных 1,3>4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидинов на каталазную активность Escherichia coli / З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, М. Мурватуллоева, Т.М. Салимов, М.А. Куканиев, Дж.Н. Джамшедов // Матер. У1 Нумановских чтений (29 - 30 мая 2009 г.). - Душанбе, 2009. - С. 61 - 62.

3. Определение влияния некоторых производных 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидинов на каталазную активность Escherichia coli./ З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, М. Мурватуллоева, З.Д. Холикова, Дж.Н. Джамшедов, Т.М. Салимов, М.А. Куканиев // Докл. АН РТ. - 2009. - Т. 52, №3. - С. 204 - 206. ' (

4. Определение влияния некоторых производных 1,3,4-тиадиазоло [3 2-а]пиримидинов на каталазную активность Escherichia coli / З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, М.С. Мурватуллоева, Т.М. Салимов, М.А. Куканиев //Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии: матер. Всерос. съезда. вет. фармакологов и токсикологов. - СПб., 2009. -С. 9 - 11.

'5 Синтез на основе 6-фторо-2-гидразин-7-метил-1,3,4-тиадиозоло [3 2-а]пиримидин-5-ОН / М.А. Куканиев, З.Г. Сангов, Джафари Бехзод, З.д. Ашурова, Дж.Н. Джамшедов // Докл. АН РТ. - 2009. - Т. 52, №5. - С. 372 -

6. Фармакокинетика соединений 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина / З.Г. Сангов, З.Д. Ашурова, Т.М. Салимов, Дж.Н. Джамшедов, Б.Б. Лакаев, М.А Куканиев, С.С. Саторов, К.Х. Хайдаров // Здравоохранение Таджикистана. -2009.-№3, приложение 1.-С. 177- 182.

7. Взаимодействие лекарственных веществ в процессе выведения из,организма / З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, Дж.Н. Джамшедов, М.Д. Ашурова, З.Д. Хо-ликова, С. Мирзоев, Т.М. Салимов, М.А. Куканиев //.Перспективы развития науки и образования: матер. IV Междунар. науч.-пракГ. конф. - Душанбе, 2010.

-С. 228-230. '' - : ■ .

8. Изучение фармакокинетики соединений 1,3,4-тиадиазоло

[3,2-а]пиримидина / З.Г. Сангов, З.Д. Ашурова, Дж.Н. Джамшедов, Б. Лакаев, Салимов, М.А. Куканиев, С.С. Саторов // Здравоохранение Таджикистана.

-2010. —№1. -С. 27-31.

9. Оценка функционального состояния печени после однократного введения производных 1,3,4-тиадиазоло [3,2-а]пирим идина белым мышам / Дж.Н, Джамшедов, З.Г. Сангов, СаиД Вали Султан, ЪМ*Салимов, З.Д. Ашурова, М.А. куканиев // Здравоохранение Таджикистана. - 2010. - №3. - С. 17 - 19.

10. Синтез 6-фторо-7-метил-2-(5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-

а]пиримидин-2-илсульфид)-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-5-она / М.А. Куканиев, З.Г. Сангов, Джафари Бехзод, З.Д. Ашурова, Дж.Н. Джамшедов // Перспективы развития науки и образования: матер. IV Междунар. науч.-практ. конф. - Душанбе, 2010.- С. 232 - 233.

11. Синтез 6-фторо-7-метил-2-(7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло [3,2-а]пиримидин-2-илсульфид)-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина-57она /

М.А. Куканиев, Сайд Вали Султан, З.Г. Сангов, Джафари Бехзод, З.Д. Ашурова, Дж.Н. Джамшедов // Докл! АН РТ. - 2010. - Т. 53, №2. - С. 122 - 125.

12. Синтез на основе 6-фторо-2-(5-меркапто-1,3,4-тиадиазол-2-

илсульфид)-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина /, Джафари

Бехзод, Сайд Вали Султа^ З.Г. Сангов, ЗД. Ашурова, ,ДН, Джамшедов, М.А. Куканиев // Химия: исследования, преподавание, технология:, матер. Рес-публ. науч. конф., посвящ. «Году образования и технических знаний». - Душанбе, 2010. - С. 35 - 36.

13 Синтез производных 2-К-5-имино-7-оксо-7Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина / Д.М. Осимов, Сайд Вали Султан; З.А. Сангов, Д.Н. Джамшедов, З.д. Ашурова, М.А. Куканиев // Докл.' АН РТ: - 2010: - Т.- 53, №4..- С. 285 -

289. " ' :'"Г ' _ '

14. Фармакокинетика конденсированных производных 1,3,4-тиадиазоло

[3 2-а] пиримидина / З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, Дж.Н. Джамшедов, М.Д. Ашу-

рова, Т.М. Салимов, М.А. Куканиев, С.С. Сатаров // Здравоохранение Таджикистана. - 2010. - №2. - С. 16 - 20.

15. Химия и микробиология фторпроизводных 1,3,4-тиадиазоло [3,2-а]пиримидинов / М.А. Куканиев, З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, Дж.Н. Джамшедов, Сайд Вали Султан, К.Х. Хандаров, С.С. Саторов // Современные аспекты краевой инфекционной патологии в Таджикистане: матер, науч.-практ. конф. сотрудников ТНИИПМ, посвящ. «Году образования и технических знаний». -Здравоохранение Таджикистана. - 2010. - Приложение №2. - С. 146 - 151.

16. Изучение токсического действия мази 2-бром-6-фтор-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина / З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, Дж.Н. Джамшедов, М.А. Куканиев, А.Н. Махмадшоев, Т.М. Салимов // Ветеринарная медицина. - 2011. - Ка2. - С. 50 - 51.

17. Синтез и антимикробная активность Ы-(6-Х-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)диазо-18-краун-6 / З.Г. Сангов, З.Д. Ашурова, З.Д. Холикова, М.А. Куканиев, Т.М. Салимов, Дж.Н. Джамшедов И Хим.-фарм. журн. - 2011. - Т. 45, №9. - С.100 - 101.

18.Изучение токсичности 2-бром-6-фтор-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина З.Д. Ашурова, З.Г. Сангов, И.Ф Рахимов М.А. Куканиев, Т.М. Салимов, Дж.Н. Джамшедов // Ветеринарная медицина. -2011.-№1.-56-57.

Сдано в набор 06.04.2012. Подписано в печать 07.04.2012. Формат 60x841/|6. Бумага офсетная №1. Гарнитура литературная. Печать офсетная. Объем 1,5 пл. Тираж 100 экз.

Заказ № 053._____

Отпечатано в типографии РТСУ,

734025, Республика Таджикистан, г. Душанбе, ул. Мирзо Турсун-заде, 30