Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Профилактика и лечение бактериальных болезней птиц с использованием новых химиотерапевтических и биологических препаратов в условиях Таджикистана

САЛИМОВ ТОДЖИДЦИН МУХИДДИНОВИЧ

ПРОФИЛАКТИКА И ЛЕЧЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ПТИЦ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НОВЫХ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ В УСЛОВИЯХ ТАДЖИКИСТАНА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология 16.00.04 — ветеринарная фармакология с токсикологией

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург- 2006

Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте Таджикской академии сельскохозяйственных наук.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук,профессор Борисенкова Адель Наумовна

доктор биологических наук,профессор Смоленский Владимир Иванович

доктор ветеринарных наук,профессор Аргунов Муаед Нурдинович

Ведущая организация: «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина» (МГАВМиБ) по адресу : г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23.

Защита состоится 19 октября 2006 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан «18 » сентября 2006 г.

Ученый секретарь

доктор ветеринарных наук

Научные

консультанты доктор биологических наук

профессор

Джавадов Эдуард

Джавадовнч Андреева Надежда Лукояновна

диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из перспективных отраслей сельского хозяйства Республики Таджикистан (РТ) является птицеводство, развитию которого в значительной мере препятствуют бактериальные болезни, наносящие прямой (падеж птицы, снижение продуктивности, низкая конверсия корма, ухудшение биологических качеств эмбрионов, снижение выводимости и др.) и непрямой (иммуносупрессивное воздействие на организм, следствием чего является снижение поствакцинального противовирусного иммунитета) экономический ущерб (Акатов А. К. с соавт., 1983; Коровин Р. Н. с соавт., 1997; Бессарабов Б. Ф., 2001; Тихонов И. В. с соавт., 2004; Борисенкова А. Н„ 2004).

Широкое распространение во внешней среде условно-патогенной микрофлоры, ее циркуляция и рециркуляция среди поголовья птиц является одной из особенностей бактериальных болезней на современном этапе (Борисенкова А. Н., 2004).

Исследованию распространения бактериальных болезней птиц в Таджикистане посвящено незначительное количество работ (Попова З.В., Горева И.П., 1972, Мальцева Т. Н., 1986), поэтому многие важные вопросы этой проблемы остаются нерешенными. В восстанавливаемых после экономического спада в начале 90-х годов XX в. крупных птицехозяйствах РТ наблюдается, по данным лаборатории по изучению болезней птиц (ЛИБП) Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института (ТаджНИВИ) Таджикской академии сельскохозяйственных наук (ТАСХН), рост числа бактериальных болезней, среди которых большой удельный вес имеют стафилококкоз, колибактериоз, сальмонеллез и пастереллез (Мальцева Т. Н. с соавт., 1994; Салимов Т. М., 1999; Назаров Ш. X., 2004), что обусловило проведение наших исследований согласно отраслевым научно-техническим программам -«Изыскать эффективные методы и средства профилактики смешанных бактериальных инфекций птиц» и «Разработать и внедрить систему мероприятий по профилактике бактериальных инфекций у птиц».

Для профилактики и терапии указанных болезней широко используются химиотерапевтические и биологические средства. Однако длительное и бессистемное применение антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов и других препаратов (Сидоров И. В., 1976; Борисенкова А. Н., 1979; Мозгов И. Е., 1985; Коровин Р. Н. с соавт., 1997; Соколов В. Д., 1997; Соколов В. Д. с соавт., 2002) привело к снижению эффективности этих антимикробных средств из-за формирования устойчивости к ним у патогенных микроорганизмов (Малявин А. Г. с соавт., 1962; Соколов В. Д., 1990; Антипов В. А., 1995), что определяет потребность ветеринарии в новых действенных препаратах.

Предотвращение развития устойчивости патогенной микрофлоры к лекарственным средствам, нежелательных побочных эффектов, уменьшение курсовой дозы определяют эффективность и экономичность комплексных химиотерапевтических препаратов при профилактике и лечении самостоятельных и смешанных бактериальных болезней птиц (Соколов В. Д., 1990; Соколов В. Д. с соавт., 1992).

Одной из ведущих проблем современной ветеринарии является разработка эффективных антибактериальных средств, поиск которых ведется среди синтезированных (Малявин А. Г. с соавт., 1962; Соколов В. Д., 1990; Лнтипов В. А., 1995) и биологически активных природных веществ (Николаевский В. В., 1985; Николаевский В. В. с соавт., 1987).

В течение последнего десятилетия значительно расширились исследования в обл. химии и биологической активности конденсированных производных 1,3,4-тиадиазола, среди которых особое место занимают 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидины (Карлинская Р. С., 1956; Лазарева Д. Н. с соавт., 1985; Камилов Ф. X. с соавт., 1992; Куканиев М. А. с соавт., 2004; Cieplik J. et al., 1995).

Разнообразное применение в ветеринарной медицине нашли эфирные масла (ЭМ) Чупахина Н. В. с соавт., 2004), проявляющие различные виды биологической активности (Гаммерман А. Ф., 1964; Муравьева Д. А., 1991; Самылина И. А. с соавт., 1995).

Для специфической профилактики колибактериоза и стафилококкоза разработаны моновакцины (Бурханова X. К., 1979; Радчук Н. А., 1983; Крылова Т. В. с соавт., 1988). В борьбе же со смешанными инфекциями птиц, вызываемыми Е. coli и St. aureus, наиболее эффективными могут быть ассоциированные вакцины, действенность которых может быть повышена за счет сочетанного применения с иммуномодуляторами, одним из которых является препарат тимогар, разработанный ООО «Занд» (РТ).

ТаджНИВИ ТАСХН для профилактики и терапии бактериальных болезней сельскохозяйственных животных и птиц разработаны препараты САП-1 и САП-2, действующими веществами которых являются производные 1,3,4-тиадиазола; комбинированные препараты ДС-1100 и шодмон; способ применения ЭМ душицы мелкоцветковой (ДМ) для профилактики бактериальных болезней птиц; ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц.

Цель исследования - изучить распространение бактериальных болезней птиц в условиях Таджикистана и разработать систему рационального применения новых химиотерапевтических и биологических препаратов для профилактики и терапии этих заболеваний.

Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:

1. Изучить распространение бактериальных болезней птиц в специализированных хозяйствах РТ.

2. Синтезировать новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина.

3. Разработать препараты на основе новых производных 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина.

4. Исследовать антимикробную активность новых препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон в отношении доминирующих возбудителей бактериальных болезней птиц.

5. Изучить токсикологические и фармакологические свойства САП-1 и САП-2.

6. Экспериментально определить эффективность:

а) САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмона, определить оптимальные дозы, разработать схемы применения этих средств при бактериальных болезнях птиц;

б) использования ЭМ ДМ для профилактики бактериальных болезней

птиц;

в) сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуномодулятора тимогар.

7. Провести производственные испытания:

а) профилактической и терапевтической эффективности препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при бактериальных болезнях птиц;

б) эффективности ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней

птиц;

в) эффективности сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и препарата тимогар.

8. Разработать наставления по применению новых препаратов для профилактики и лечения бактериальных болезней птиц.

Научная новизна. Изучено распространение бактериальных болезней птиц в птицеводческих хозяйствах Таджикистана в 1994 — 2004 гг. Комплексными исследованиями показано, что наибольшее распространение получили стафилококкоз, колибактериоз, сальмонеллез и пастереллез, которые протекают как в виде моноинфекций, так и ассоциаций.

Синтезированы новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина, на основе которых созданы антимикробные препараты САП-1 и САП2.

В экспериментальных условиях определены эффективность препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон (определены дозы и разработаны схемы применения препаратов при профилактике и лечении бактериальных болезней птиц); ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней птиц; сочетанного применения ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуностимулятора тимогар. Научная новизна проведенных исследований подтверждена патентами:

- Патент Республика Таджикистан на изобретение № ^ 304. Тарзи ваксинатсиякунии паррандахо зидди колибактериоз ва стафилококкоз /Бобиев Г.М.,Салимов Т.М.,Мурватулоев С.А.2001 г.

-Патент Республика Таджикистан на изобретение № Т] 395. Дорувори ДС-1100 барои муолича кардани энтеритхои сирояткунандаи гусолахо /Сатторов И.Т.,Салимов Т.М.ДНайхов М.Х.2002 г.

-Патент Республика Таджикистан на изобретение № Т] 395. Дорувори Шодмон барои муолича кардани энтеритхои сирояткунандаи гусолахо /Сатторов И.Т.,Салимов Т.М.Дурдиев Ш.А.2003 г.

- Положительное решение о выдаче Патента Республика Таджикистан на изобретение по заявкам № 02000745 «8(7-Метил-5-оксо-5Н-1,2,3-тиадиазоло{3,2-а}пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромид, обладающий антибактериальной активностью», № 02000735 «2-Бром-7-Метил-5-оксо-5Н-

1,2,3-тиадиазоло{3,2-а}пиримидин обладающий антибактериальной активностью», № 03000788 «Средство обладающий антибактериальной активностью» .

Практическая ценность. Разработана система рационального применения химиотерапевтических и биологических препаратов для профилактики и терапии бактериальных болезней птиц. Ветеринарной практике предложены новые химиотерапевтические препараты САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон для этой цели. Для предупреждения бактериальных болезней птиц предложено ЭМ ДМ. С целью повышения эффективности ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц предложено сочетанное применение этого препарата с иммуномодулятором тимогар.

Материалы диссертации вошли в нормативно-техническую документацию на:

- САП-1 (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- САП-2 (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- ДС-1100 (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- шодмон (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- ЭМ ДМ (наставление по применению одобрено ученым советом ТаджНИВИ 15 сентября 2005 г., протокол №2),

ассоциированную формолвакцину против колибактериоза и стафилококкоза птиц (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 1999 г.),

- иммуномодулятор тимогар (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 1999 г.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на

защиту:

1. Результаты изучения распространения бактериальных болезней птиц в специализированных хозяйствах Таджикистана.

2. Результаты синтеза новых производных 1,3,4-тиадиазоло-[3,2-а]пиримидина.

3. Результаты исследования противобактериальной активность новых препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон в отношении доминирующих возбудителей бактериальных болезней птиц.

4. Результаты изучения токсикологических и фармакологических свойств САП-1 и САП-2.

5. Результаты экспериментального определения эффективности:

а) САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмона;

б) использования ЭМ ДМ для профилактики бактериальных болезней

птиц;

в) сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуномодулятора тимогар.

6. Результаты производственной проверки:

а) профилактической и терапевтической эффективности препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при бактериальных болезнях птиц;

б) эффективности ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней

птиц;

в) эффективности сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и препарата тимогар.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ТаджНИВИ (1994 - 2005 гг.); республиканских и областных семинарах-совещаниях ветеринарных работников РТ (1994 - 2005 гг.); Международной конференции ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях» (Воронеж, 2002 г.); Международной научно-практической конференции «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» (Санкт-Петербург - Ломоносов, 2004 г.).

Публикации. По результатам исследований опубликованы в печати 42 научные работы, получены 3 патента РТ и 3 положительных решения на получение патента, 1 удостоверение на рационализаторское предложение.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Диссертация изложена на 285 страницах, иллюстрирована 43 таблицами и 62 рисунками. Список литературы содержит 492 источника. В приложение включены материалы, подтверждающие внедрение результатов исследования в практику.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Настоящая работа выполнена в 1994 - 2004 гг. на базе ЛИБП ТаджНИВИ ТАСХН.

Научно-производственные опыты, апробация и производственная проверка полученных результатов проведены на 9 птицефабриках (яичного направления) РТ.

С 1994 по 2004 гг. бактериологически исследованы 1250 проб воздуха инкубационных и выводных шкафов, птичников, 2046 проб из объектов внешней среды, 1050 яиц, 2384 павших и вынужденно убитых цыплят 1-30 дней, 1813 - 31 - 60, 797 - 61 - 150 и 569 птиц старше 151 дня.

Антимикробную активность препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон изучали методом серийных разведений препаратов в мясопептонном бульоне (МПБ). Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 - 48 ч. По истечении срока инкубации учитывали результат. Минимальной бактериостатической концентрацией (МБсК) считали концентрацию, которая вызывала задержку роста культуры, минимальной бактерицидной (МБцК) (определили при пересеве на МПА) - гибель микроорганизмов (отсутствие роста). Параллельно ставили контроли на МПБ и МПА.

Острая токсичность препаратов САП-1 и САП-2 изучена в опытах на белых мышах (с массой тела 18 - 20 г) и 60-дневных цыплятах (с массой тела

545 - 550 г), из которых по принципу парных аналогов сформировали по шесть групп (п=10) для каждого препарата.

Белым мышам препараты САП-1 и САП-2 вводили однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл в дозах 250 мг/кг массы тела (1-я группа), 500 (2-я), 750 (3-я), 1000 (4-я), 1250 мг/кг массы тела (5-я); цыплятам - перорально в объеме 2 мл в тех же дозах. Контрольным животным и цыплятам в соответствующих объемах и дозах вводили сахарозу.

Хроническая токсичность препаратов САП-1 и САП-2 изучена в опытах по скармливанию каждого препарата в течение 23 суток трем группам (п=10) белых мышей (с массой тела 18 - 20 г) и трем группам (п=10) 120-дневных цыплят (с массой тела 1,2 кг, яичное направление) в дозах 60 мг/кг массы тела (ориентировочно-терапевтическая), 120 и 180 мг/кг массы тела. Животные и птица контрольных групп препарат не получали.

Морфологические, биохимические исследования крови, определение показателей естественной резистентности проводили общепринятыми методами.

Исследование кумулятивных свойств препаратов САП-1 и САП-2 проводили на 30 белых мышах массой 18 - 20 г и 10 цыплятах 60-дневного возраста массой 545 - 550 г (для каждого препарата) по методу Лима.

Определение функционального состояния печени у белых мышей при введении препаратов САП-1 и САП-2 проводили по методике Д. Р. Рогозина.

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия препаратов САП-1 и САП-2 проводили в опытах на белых крысах в плодном, неонательном и постнатольном периодах по методике Шицковой А. П. с соавт. (1977).

Фармакокинетику препаратов САП-1 и САП-2 изучали на 50 цыплятах (для каждого препарата) 60-дневного возраста (яичного направления) массой 545 — 550 г. В течение часа до начала эксперимента и 2 ч после введения препарата птица не получала корм и воду. Препараты птице вводили перорально однократно через зонд в зоб в дозе 60 мг/кг массы тела. Через 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; 12; 18 и 24 часа после введения препаратов убивали по 5 цыплят и определяли содержание препаратов в сыворотке крови, скелетной и сердечной мышцах, легких, печени и почках.

Определение препаратов в биосубстратах проводили микробиологическим методом диффузии в агар с тест культурой Bacillus subtilis АТСС 6633. Чувствительность метода 0,025 - 0,05 мкг/г или мкг/мл.

Определение сроков выведения остаточных количеств САП-1 и САП-2 из организма после применения препаратов проводили на 15 цыплятах 60-дневного возраста (яичного направления) массой 545 - 550 г (для каждого препарата), которым ежедневно в течение 6 суток вводили через зонд препараты в дозе 60 мг/кг массы тела 2 раза в день. Через 1, 3 и 5 суток после последнего введения препарата убивали по 5 цыплят и проводили исследования мышечной ткани, сердца, легких, почек, печени, мышечного желудка, крови на наличие действующего вещества, определение которого в биосубстратах проводили микробиологическим методом с тест-микробом Вас. subtilis АТСС 6633.

За основу выводов и практических предложений взяты результаты контролируемых опытов в лабораторных и производственных условиях.

Для проверки достоверности различий. Цифровой материал диссертационной работы обработан статистически по критерию Стьюдента при доверительной вероятности 0,95(уровень значимости а =0,05)

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространение бактериальных болезней птиц в птицеводческих хозяйствах Таджикистана

В настоящее время в Таджикистане действуют 12 птицефабрик по производству яйца. Экономическая ситуация в птицеводстве обусловливает ряд проблем, препятствующих обеспечению биологической безопасности отрасли:

- несоблюдение всех принципов организации предприятий и санитарных

норм,

- необеспечение адекватных условий содержания поголовья птицы,

- непроведение вакцинации и серологического контроля,

- отсутствие контроля за состоянием яиц, предназначенных для выведения цыплят,

- реализация не в полном объеме мер при вспышках заболеваний.

При анализе эпизоотологических данных за 11 лет (1994 - 2004 гг.) нами установлено, что ежегодный отход птицы в РТ составлял 7 - 10%, из которых 91 - 94% приходилось на долю молодняка и 6 - 9% - взрослой птицы. Основными причинами падежа птицы были незаразные болезни (авитаминозы, подагра, нефрит, расклев, гепатит, болезни органов пищеварения, болезни органов дыхания, нерассосавшийся желток, травмы).

Существенный экономический урон птицеводству наносят инфекционные заболевания вирусной и бактериальной этиологии, представляющие серьезную потенциальную угрозу конкурентоспособности отрасли. Значительный удельный вес (1994 - 2004 гг. - 67,2%) среди инфекционных болезней птиц имеют бактериальные, отход птицы от которых в 1994 - 2004 гг. составил в среднем 10,3% (1994 - 2004 гг.). И если проблема вирусных инфекций разрешима за счет использования основных методов контроля, предупреждающих возникновение болезней, то результативность профилактики и терапии бактериальных заболеваний зависит от эффективности применяемых препаратов.

Острая ветеринарная проблема промышленного птицеводства — бактериальные болезни, наличие агентов которых в хозяйстве создает эпизоотическое напряжение и обусловливает значительные экономические потери при развитии инфекции.

Моно- и ассоциированные инфекции существенно влияют на падеж молодняка, прирост массы и яйценоскость, конверсию кормов, чувствительность к стрессам, поствакцинальный противовирусный иммунный ответ, выводимость цыплят, биологические качества эмбрионов, их рашпою гибель.

Проблема бактериальных болезней рассматривается в двух аспектах -ветеринарном и медицинском: персистирующие в организме птиц без выраженной симптоматики микроорганизмы (наиболее опасные -сальмонеллы, кишечная палочка, кампилобактерии) способны вызывать заболевания людей при употреблении ими в пищу некачественных продуктов птицеводства. Поэтому вопрос эффективной терапии и профилактики бактериальных болезней птиц определяет актуальность разработки целостной системы контроля.

На птицефабриках Таджикистана с 1994 по 2004 гг. сохранность молодняка составила 77,1 (1998 г.) - 81,7% (2004 г.) (в среднем - 79,8%), взрослых птиц - 89,5 (1998 г.) - 92,3 (2004 г.) (в среднем - 90,7%), падеж птиц от бактериальных болезней- 1,1 (1994 г.) - 1,4% от общего падежа (1996, 1997, 2001, 2003 гг.) (в среднем - 1,3%).

Среди заболевших и павших от бактериальных болезней наибольший удельный вес имели птицы, заболевшие колибактериозом (89,6%) и павшие от него (95,1%). Большинство павших от колибактериоза — птицы в возрасте 30 — 120 дней, что связано с физиологической перестройкой организма в этот период. Стафилококкозом заболели и пали от него в среднем соответственно 1,1 и 0,2%, сальмонеллезом - 5,2 и 2,5, пастереллезом - 4,1 и 2,2% птиц.

На птицефабриках Таджикистана заболеваемость птиц стафилококкозом не выявлена в 1997 - 1999, 2002 гг., сальмонеллезом - 2001 г., пастереллезом -1997, 1999 гг.

3.2. Доминирующие возбудители бактериальных болезней птиц на птицефабриках Республики Таджикистан

Для выделения возбудителей бактериальных болезней птиц проведены бактериологические исследования патологического материала с 9 птицефабрик Таджикистана, на которых условно-патогенная микрофлора представлена St. aureus, Е. coli (02, Oll, 026, 078, 082, 086, Olli, 0115, 0119, 0126, 0137), Pr. vulgaris, S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa.

Нами выделены и идентифицированы 3113 культур микроорганизмов. Максимальное количество эпизоотических штаммов St. aureus, Е. coli и S. enteritidis выделено в 1994 г. (соответственно 117, 216 и 94), Pr. vulgaris - 2003 г. (28), S. pullorum и Р. multocida - 2004 (соответственно 57 и 134), Ps. aeruginosa - 2000 г. (32) (табл. 1).

Наибольший удельный вес среди выделенной условно-патогенной микрофлоры имела Е. coli (36,7%).

Соотношение видов микроорганизмов меняется в зависимости от эпизоотической ситуации на птицефабрике, однако доминирующая роль Е. coli в инфицировании птиц очевидна.

Условно-патогенную микрофлору выделили в инкубаторах и птичниках как при бактериологическом исследовании патологического материала от клинически здоровых, павших и вынужденно убитых птиц, так и из проб воздуха и от объектов внешней среды (табл. 2).

Наибольшее количество возбудителей бактериальных болезней птиц выделили из проб от объектов внешней среды как в инкубаторах (467 штаммов), так и в птичниках (489 штаммов).

Таблица 1

Динамика выделения возбудителей бактериальных болезней на птицефабриках РТ (1994 - 2004 гг.)

Года St. aureus Е. coli Pr. vulgaris S. enteritidis S. pullorum P. multocida Ps. aeruginosa ИТОГО

1994 117 216 13 94 30 94 - 564

1995 83 123 - 61 13 63 - 343

1996 24 110 - 76 11 42 7 270

1997 - 54 21 24 12 - 10 121

1998 - 71 27 22 23 26 24 193

1999 - 107 15 20 26 - - 168

2000 18 64 13 21 33 20 32 201

2001 16 51 - - 34 50 11 162

2002 - 67 11 13 32 | 54 27 204

2003 63 110 28 61 43 86 24 415

2004 17 169 - 74 57 134 21 472

ВСЕГО 338 1142 128 466 314 569 156 3113

Таблица 2

Выделение условно-патогенной микрофлоры из патологического материала и объектов внешней среды на птицефабриках Таджикистана (1994 - 2004 гг.)

St. aureus Б. coli Pr. vulgaris |3 ■c 1 t/5 S. pullorum Ps. aeruginosa P. multocida ИТОГО

Инкубатор

Воздух 33 101 - 74 31 23 37 299

Объекты внешней среды 51 168 12 97 39 44 56 467

Поверхность яиц 36 123 - 61 43 47 21 331

Птичник

Воздух 1 41 i 126 ! 37 | 48 | 33 | 31 | - | 316

Объекты внешней среды 32 203 46 59 55 81 13 489

Возраст павшей 1-30 102 299 33 29 22 11 - 496

и вынуэаденно 31-60 И 122 - 63 56 18 123 393

убитой птицы, 61 - 150 11 - 24 13 - 156 204

сутки 151 и старше 21 - - 11 22 - 64 118

ВСЕГО 338 1142 128 466 314 255 470 3113

Анализ выделения условно-патогенной микрофлоры в зависимости от возраста птицы выявил, что St. aureus, S. enteritidis, S. pullorum выделяется во всех возрастных группах. Наибольшее количество штаммов St. aureus (70,3%) выделено от птиц в возрасте 1-30 дней, S. enteritidis (49,6%) и S. pullorum (49,6%) — 31 - 60 дней. 299 штаммов (71%) Е. coli выделены от цыплят в возрасте 1-30 дней, 156 штаммов (45,5%) P. multocida - 61 - 150 дней.

При определении роли возбудителей в этиологии заболеваний установлено, что из 3113 выделенных культур 275 (8,8%) были патогенными, в том числе изолированы 27 ассоциаций (табл. 3). За изученный нами период не выделены патогенные штаммы Рг. vulgaris, S. pullorum и Ps. aeruginosa, что подтверждено биопробой.

Таблица 3

Выделение патогенных микроорганизмов на птицефабриках РТ (1994 - 2004 гг.)

St. aureus £. coli S. enteritidis P. multocida Ассоци a uii и Итого

1994 И 21 9 9 4 50

1995 8 12 6 6 4 32

1996 2 11 7 4 3 24

1997 0 5 2 0 0 7

1998 0 7 2 2 1 11

1999 0 10 2 0 1 12

2000 1 6 4 2 2 13

2001 1 5 0 5 1 11

2002 0 6 7 5 4 18

2003 6 21 6 8 3 41

2004 3 26 14 13 4 56

Всего 32 130 59 54 27 275

Наибольшее количество патогенных штаммов (56) выделено в 2004 г., максимальное количество ассоциаций (по 4) - в 1994, 1995, 2002, 2004 гг.

На птицефабриках Таджикистана наблюдаются уменьшение количества выделенных патогенных штаммов St. aureus с 2003 г. и увеличение - Е. coli, S. enteritidis и Р. multocida соответственно с 2001,2003 и 1999 гг.

Стационарно неблагополучными по стафилококкозу, сальмонеллезу, пастереллезу были по 4, колибактериозу - 8 птицефабрик. Чем крупнее были птицефабрики, тем дольше они были неблагополучными, так как полная смена поголовья не могла быть проведена в течение 1—2 лет.

Динамика соотношения непатогенных и патогенных штаммов возбудителей бактериальных болезней, выделенных на птицефабриках РТ свидетельствует, что непатогенные штаммы в стационарно неблагополучных по бактериальным болезням хозяйствах, пассажировали через организм птицы и под влиянием предрасполагающих факторов становились патогенными.

Изучение чувствительности выделенных патогенных культур к антибиотикам и другим препаратам показало, что большинство изученных штаммов оказалось резистентными к широко применяемым на птицефабриках Таджикистана антимикробным препаратам, что обусловлено их применением (в рекомендуемой дозе) в течение ряда лет.

Установлено, что большинство штаммов St. aureus чувствительно к препарату САП-2 (92,8%), Е. coli - ДС-1100 (88,4%), S. enteritidis -окситетрациклину гидрохлорида (89%), P. multocida - САП-2 (98,1%). Наибольшее количество выделенных штаммов St. aureus и P. multocida были резистентны к фуразолидону (соответственно 88 и 100%), Е. coli и S. enteritidis - сульфадимезину (86,2 и 100%). К ЭМ ДМ чувствительными были от 57,0 (St. aureus) до 79,6% патогенных бактерий (P. multocida).

Полученные нами данные подтверждают основной принцип применения противобактериальных лекарственных средств — необходимость определения чувствительности микроорганизмов - и указывают на необходимость внедрения в ветеринарную практику новых лечебно-профилактических препаратов.

Ретроспективный анализ выделения условно-патогенной микрофлоры на птицефабриках РТ в 1994 - 2004 гг. показал, что с 2001 г. наблюдается рост выделения патогенных штаммов бактерий (Е. coli, S. enteritidis, P. multocida), поэтому профилактика и терапия бактериальных инфекций птиц является острой проблемой птицеводства Таджикистана, решение которой зависит от обеспечению биологической безопасности отрасли. В связи с этим актуальными являются разработка системы рационального применения биологических и химиотерапевтических препаратов для профилактики и терапии бактериальных болезней птиц, а также внедрение в птицеводство новых антибактериальных средств из-за выработки устойчивости патогенных микроорганизмов к применяемым препаратам.

3.3. Синтез 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло [3,2-а]пиримидина и 8(7-метил-5-оксо-5Н-1,3»4-тиадиазоло [3,2-а]пиримидин-2-ил)-изо1иурон гидробромида

Новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина синтезированы в лаборатории гетероциклических соединений Института химии им. В. И. Никитина АН РТ (заведующий - доктор химических наук, профессор М. А. Куканиев) совместно с ЛИБП ТаджНИВИ.

Конденсированные производные 1,3,4-тиадиазола (1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина) являются синтетическими аналогами пурина и имеют широкий спектр физиологической активности (ОоЬиш К.А.,1974,Чернобровин Н.И.,Сатторов С.С.,2002.) что определяет перспективность создания на основе соединений этого класса лекарственных веществ. Однако тиадиазолы и их конденсированные аналоги, содержащие различные функциональные группы, мало изучены.

Из 2-бром-5-амино-1,3,4-тиадиазола (1), синтезированного непосредственным бромированием в среде ледяной уксусной кислоты и растворяющегося в полифосфорной кислоте (ПФК) при температуре 50 - 60°С, и ацетоуксусного эфира в среде ПФК синтезирован 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-

Рис. 1. Синтез соединения 2.

В соединении 2 атом брома во втором положении является подвижным и легко замещается различными нуклеофилами, что позволяет получать широкий круг производных тиадиазолопиримидинов.

Тиоамиды, в основном, участвуют в реакциях, обусловленных нуклеофилыюй активностью этих соединений. Реакционным центром является атом серы или азота. Тиоамиды очень легко реагируют с алкилгалогенидами или алкилсульфидами, образуя S-алкил изотиуроневые соли, которые благодаря реакционной способности, легкости получения и наличию биологической активности вызывают научный и практический интерес [16, 128, 180, 302,418].

С целью изучения реакционной способности и выявления новых физиологически активных соединений в ряду 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина нами проведены исследования по синтезу тиурониевых солей из тиоамидов (тиомочевина, тиосемикарбазид, дитиокарбогидразин, дитиооксамид) и соединения 2.

Синтез тиурониевых солей (рис. 2) осуществляли взаимодействием эквимолярных количеств соединения 2 и тиоамидов в спиртовом растворе в течение 3 ч при температуре кипения растворителя. Через час после начала кипения начиналось выпадение осадка. В случае тиосемикарбазида при взаимодействии с соединением 2 использовали бромистоводородную соль тиосемикарбазида.

Рис. 2 Синтез соединений 3 — 6.

X=NH2 (3); NH-NH2 (4); NH-NH-CS-NH2 (5); CSNH2 (6)

В результате оценки антимикробной активности синтезированных соединений для создания противомикробных препаратов с целью применения в ветеринарии были отобраны 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин и 5(7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромида, из которых в производственном отделе ТаджНИВИ ТАСХН были изготовлены препараты САП-1 и САП-2.

3.4. Антимикробная активность САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон

Противомикробную активность препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон изучали методом серийных разведений препаратов в МПБ в отношении эпизоотических (3113) и музейных (37) штаммов St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa, KI. pneumoniae.

Установлено, что наибольшую чувствительность (МБсК - 0,31 - 1,24 мкг/мл) к препарату САП-1 проявляют St. aureus, Str. pyogenes, P. multocida, САП-2, обладающему широким спектром антимикробного действия, — все испытанные микроорганизмы.

Pr. vulgaris, S. enteritidis, Ps. aeruginosa, E. coli, S. pullorum, Kl. pneumoniae более устойчивы к САП-1: в отношении этих культур МБсК препарата составила 0,62 - 4,96 мкг/мл. САП-1 вызывает гибель исследованных культур в концентрациях 0,62 — 9,92 мкг/мл, САП-2 - 0,155 - 4,96 мкг/мл, причем МБцК САП-1 для St. aureus, Str. pyogenes и P. multocida - 0,62 - 2,48 мкг/мл (рис.3), САП-2 для St. aureus и P.

multocida - 0,155 - 0,62, Str. pyogenes и E. coli - 0,31 - 1,24, Pr. vulgaris,.

В минимум □ максимум

Рис. 3. Минимальная бактерицидная концентрация САП-1, мкг/мл.

@ минимум □ максимум

Рис. 4. Минимальная бактерицидная концентрация САП-2, мкг/мл.

Результаты проведенных исследований показали, что наиболее чувствительными (МБсК - 0,2 - 1,6 мкг/мл) к препарату ДС-1100 были 8.

enteritidis, S. pullorum, P. multocida, St. aureus, Str. pyogenes, шодмону - St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. pullorum.

Препарат ДС-1100 в концентрациях 3,2 - 12,8 мкг/мл задерживает рост Е. coli, Kl. pneumoniae, Pr. vulgaris, Ps. aeruginosa, шодмон в концентрациях 3,2 -6,4 мкг/мл - S. enteritidis, Ps. aeruginosa, Kl. pneumoniae, P. multocida.

ДС-1100 обусловливает гибель исследованных культур при концентрациях 0,4 - 25,6 мкг/мл (0,4 мкг/мл - S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida; 1,6 - St. aureus, 3,2 - Str. pyogenes, 6,4 - E. coli, 12,8 - KI. pneumoniae, 25,6 мкг/мл - Pr. vulgaris, Ps. aeruginosa), шодмон - 0,4 - 12,8 мкг/мл (0,4 мкг/мл - St. aureus, Str. pyogenes, E. coli; 3,2 - Pr. vulgaris, S. pullorum; 6,4 - S. enteritidis, Ps. aeruginosa, Kl. pneumoniae; 12,8 - P. multocida).

Таким образом, САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон имеют широкий спектр противомикробного действия в отношении эпизоотические и музейные штаммов исследованных тест-культур.

3.5. Токсикологические свойства САП-1 и САП-2 3.5.1. Острая токсичность

Результаты изучения антимикробной активности препаратов САП-1 и САП-2 свидетельствуют о перспективности их применения в ветеринарной практике. Поэтому нами были изучены токсикологические и фармакологические свойства этих лекарственных средств.

Определение острой токсичности препаратов САП-1 и САП-2 проводили в опытах на белых мышах (с массой тела 18 - 20 г) и 60-дневных цыплятах (с массой тела 545 - 550 г), из которых по принципу парных аналогов сформировали по шесть групп (п=10) для каждого препарата.

Белым мышам препараты САП-1 и САП-2 вводили однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл в дозах 250 мг/кг массы тела (1-я группа), 500 (2-я), 750 (3-я), 1000 (4-я), 1250 мг/кг массы тела (5-я); цыплятам - перорально в объеме 2 мл в тех же дозах. Контрольным животным и цыплятам в соответствующих объемах и дозах вводили сахарозу.

Критериями оценки токсичности служили летальный исход и характер клинической картины.

При изучении острой токсичности препаратов САП-1 и САП-2 на лабораторных животных и цыплятах определены параметры острой токсичности: МПД - соответственно 325, 375 и 250, 300 мг/кг, ЛДюо - 1250, 1250 и 1000, 1250, ЛДю - 650, 750 и 525, 600 мг/кг массы тела.

На основании результатов изучения острой токсичности САП-1 и САП-2 установлено, что они относятся к среднетоксичным препаратам.

3.5.2. Хроническая токсичность

Для определения опасности повторного применения, степени выведения при длительном назначении препараты САП-1 и САП-2 вводили в течение 23 суток трем группам (п=10) белых мышей (с массой тела 18 - 20 г) и трем группам (п=10) 120-дневных цыплят (с массой тела 1,2 кг, яичное направление)

в дозах 60 мг/кг массы тела (ориентировочно-терапевтическая), 120 и 180 мг/кг массы тела. Животные и птица контрольных групп препарат не получали.

Исследование хронической токсичности препаратов САП-1 и САП-2 показало, что поведение, аппетит, прием воды, состояние слизистых оболочек и шерстного покрова подопытных и контрольных белых мышей не отличались.

При введении препаратов цыплятам не отмечали существенных изменений в состоянии птиц, которые активно двигались и хорошо поедали корм.

При определении влияния различных доз (60, 120, 180 мг/кг массы тела) препаратов САП-1 и САП-2 на организм птиц проводили изучение динамики массы тела, рассчитывая коэффициент роста, гемолитических, биохимических показателей и уровня естественной резистентности. Исследования проводили на 5, 10, 23 дни.

В опыте по определению хронической токсичности используемые дозы САП-1 и САП-2, вводимые в течение 23 суток, не вызывали нарушений обмена веществ, гемопоэза и лейкопоэза цыплят. Не отмечены морфологические нарушения в основных органах: печени, сердце, почках, селезенке. Птицы подопытных групп нормально развивались и прибавляли в массе.

Таким образом, ежедневное введение в течение 23 дней препаратов САП-1 и САП-2 не вызывало признаков токсикоза и сдвигов в обмене веществ.

3.5.3. Кумулятивные свойства

Исследование кумулятивных свойств препаратов САП-1 и САП-2 проводили на 30 белых мышах массой 18 - 20 г и 10 цыплятах 60-дневного возраста массой 545 - 550 г (для кавдого препарата) по методу Лима, суть которого заключается в увеличении дозы препарата каждые 4 дня на 50%, что позволяет проследить реакцию лабораторных животных и птиц в течение 28 дней на введение от 0,1 до 1,12 ЛДзо-

Изучение кумулятивных свойств препаратов САП-1 и САП-2 показало, что в связи с отсутствием гибели 50% подопытных белых мышей коэффициент кумуляции для этих животных рассчитать невозможно. Следовательно, препараты при алиментарном введении их белым мышам не обладают кумулятивным свойством.

Изучение кумулятивных свойств САП-1 и САП-2 в опытах на цыплятах показало, что на 8 сутки при дозе 0,15 от ЛД50 начинается гибель птицы и к концу 12 суток при суммарной дозе 1425 и 1140 мг/кг массы тела погибают все цыплята. Проведенные расчеты показали, что для цыплят ЛД50 при многократном введении САП-1 и САП-2 составляют соответственно 975 и 825 мг/кг массы тела.

Отношение ЛД50 препаратов САП-1 и САП-2 при многократном введении к ЛДзо при однократном введении было больше 1 и составило соответственно 1,3 и 1,4, что свидетельствует об отсутствии выраженных кумулятивных свойств препаратов для цыплят.

3.5.4. Оценка функционального состояния печени после однократного введения препаратов белым мышам

Гепатоксическое действие препаратов САП-1 и САП-2 исследовали по методике Д. Р. Рогозина [21] на 90 белых мышах массой 18 - 20 г (для каждого препарата), которых разделили на группы (п=10): 3 группы - контрольные, 6 групп - подопытные. Контрольным животным вводили физиологический раствор в дозе 1 мл на голову. Половине подопытных животных натощак перорально вводили препараты в дозе равной 1/10 ЛД50 (соответственно 65 и 52,5 мг/кг массы тела), а второй половине — 1/5 ЛД50 (соответственно 130 и 105 мг/кг массы тела) и через 1, 3 и 6 часов вводили гексенал внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг массы тела. Продолжительность гексеналового наркоза учитывали с момента принятия мышами бокового положения до первых попыток его изменить.

Установлено, что при введении препаратов САП-1 и САП-2 в дозе 1/10 ЛД50 (соответственно 65 и 52,5 мг/кг массы тела) продолжительность гексеналового сна, хотя несколько и снижается, но достоверно не отличается (Р>0,05) от продолжительности сна в контрольной группе.

При увеличении дозы САП-1 и САП-2 до 1/5 ЛД5о (соответственно 130 и 105 мг/кг массы тела) продолжительность гексеналового наркоза через час составила соответственно 27,1+4,5 и 26,7+3,9 мин, что достоверно не отличается (Р>0,05) от соответствующего показателя в контрольной группе. Однако через 3 часа после введения препаратов было отмечено увеличение продолжительности гексеналового сна (соответственно 82,6+18,8 и 81,7±16,3 мин), а через 6ч — уменьшение длительности гексеналового наркоза соответственно до 18,6±6,2 и 17,6±5,1 мин, что достоверно отличается (Р<0,05) от соответствующего показателя в контрольной группе.

Таким образом, препараты САП-1 и САП-2 в дозе 1/5 ЛД50 вызывают непродолжительное угнетение функции печени, восстанавливающееся через 6 ч после введения препарата. Меньшие дозы препаратов (1/10 ЛД50) не вызывают функциональных изменений в печени.

3.5.5. Эмбриотоксическое и тератогенное свойства

В опытах на белых крысах (массой 200 — 210 г) в плодном, неонательном и постантольном периодах по методике Шицковой А. П. с соавт. (1977) проводили изучение эмбриотоксического и тератогенного действия препаратов САП-1 и САП-2.

С первого дня беременности крыс разделили на три группы. Для определения эмбриотоксического действия животным 2-х подопытных групп (п=20, для каждого препарата) препарат скармливали в смеси с кормом в дозах 60 и 180 мг/кг массы тела в течение 17 - 18 дней, для определения тератогенного действия - до конца беременности (21 - 23 дня). Животные контрольной группы препараты не получали.

В опытах по изучению тератогенного действия препаратов САП-1 и САП-2 наблюдение за беременными самками крыс показали, что у всех животных

как подопытных, так и контрольных групп беременность проходила без каких либо отклонений.

Проведена оценка эмбрионального материала после убоя и вскрытия подопытных и контрольных беременных крыс. Изучение вскрытых беременных самок и последующая статистическая обработка полученного материала показала отсутствие каких-либо аномалий при онтогенезе плодов.

Препараты САП-1 и САП-2 в дозах 60 и 180 мг/кг массы тела не оказывают отрицательного влияния на процессы овуляции и эмбриогенеза, продолжительность беременности. Уродств, аномалий развития внутренних органов и скелета эмбрионов не обнаружено.

Введение препаратов САП-1 и САП-2 белым крысам в дозах 60 и 180 мг/кг массы тела не оказывает тератогенного и эмбриотоксического действия на эмбрионы в процессе онтогенеза и в постнатальный период роста и развития крысят.

3.6. Фармакологические свойства САП-1 и САП-2 3.6.1. Фармакокинетика

В настоящем опыте определили содержание препаратов САП-1 и САП-2 в крови, скелетных мышцах, сердце, легких, печени и почках.

Фармакокинетику препаратов изучали на 50 цыплятах 60-дневного возраста (яичного направления) массой 545 — 550 г (для каждого препарата). Препараты птице вводили перорально однократно через зонд в зоб в дозе 60 мг/кг массы тела. Через 0,5; 1; 2; 4; 6; 8; 12; 18 и 24 ч после введения препаратов убивали по 5 цыплят.

Проведенный опыт показал, что препараты САП-1 и САП-2 при пероралыюм введении хорошо резорбировапись в органы и ткани цыплят. После применения препаратов через 1 (САП-1) и 0,5 ч (САП-2) во всех органах и тканях содержание действующих веществ достигает терапевтических концентраций.

Через час после введения уровень действующих веществ был равен соответственно 0,72±0,12 и 8,64±1,44 мкг/г. Наибольшую концентрацию препаратов САП-1 (9,82±1,12 мкг/г) и САП-2 (13,24±2,16 мкг/г) наблюдали соответственно через 6 и 2 ч. Через 12 ч содержание препаратов составляло соответственно 6,54±0,91 и 6,48±1,32, через 24 ч - 1,12±0,02 и 1,44±0,24 мкг/г.

В легких концентрация препаратов через час после введения достигала 5,77±0,51 (САП-1) и 11,24±2,52 мкг/г (САП-2). Наибольшее содержание САП-1 (11,60±1,12 мкг/г) наблюдали через 8, САП-2 (14,76±1,2 мкг/г) -4 ч. Через 12 ч после введения концентрация САП-1 и САП-2 составляла соответственно 7,43±0,99 и 5,16+1,08, через 24 ч - 3,16±0,01 и 1,92+0,12 мкг/г.

Уровень препаратов САП-1 и САП-2 в печени был наиболее высоким соответственно через 8 (13,47+1,23 мкг/г) и 4 ч (20,48+1,16 мкг/г). Затем концентрация уменьшалась: через 12 ч соответственно до 8,56±0,96 и 12,72±1,92, через 24 ч - 4,21+0,36 и 2,52+0,72 мкг/г.

В почках наблюдали наибольший из всех исследуемых органов уровень препаратов. Через час после введения концентрация препаратов САП-1 и САП-2 составляла соответственно 11,89+1,24 и 16,68±1,88 мкг/г. Пик увеличения

содержания в почках САП-1 наблюдали через 6 (18,18±2,26 мкг/г) и САП-2 - 4 ч (20,64±1,52 мкг/г). Через 12 ч уровень действующих веществ препаратов САП-1 и САП-2 снижался соответственно до 10,78±1,14 и 9,36±1,68, а через 24 ч - 5,18±0,54 и 2,16±0,48 мкг/г.

Максимального значения концентрация действующих веществ препаратов САП-1 и САП-2 в сыворотке крови, мышцах и сердце достигала соответственно через 6 и 2 ч, легких - 8 и 4 ч и постепенно снижалась, оставаясь через 12 ч на уровне минимальной подавляющей концентрации для многих микроорганизмов. Наиболее высокие концентрации действующих веществ препаратов САП-1 и САП-2 обнаруживали в почках (через 6 и 4 ч) и печени (через 8 и 4 ч), причем высокое содержание действующих веществ препаратов в этих органах держится на протяжении 12 ч, что свидетельствует об их участии в выведении препарата. Содержание действующих веществ препаратов САП-1 и САП-2 в крови и внутренних органах начинает снижаться через 12 ч.

Таким образом, терапевтическая концентрация препаратов САП-1 и САП-2 в организме птицы в течение суток обеспечивается двукратным их введением в дозе 60 мг/кг массы тела. ■

3.6.2. Сроки выведения остаточных количеств препаратов из организма птицы

Для определения сроков выведения остаточных количеств САП-1 и САП-2 из организма после применения препаратов 15 цыплятам 60-дневного возраста (яичного направления) массой 545 - 550 г (для каждого препарата) ежедневно в течение 6 суток вводили через зонд препараты в дозе 60 мг/кг массы тела 2 раза в день. Через 1, 3 и 5 суток после последнего введения препарата убивали по 5 цыплят и проводили исследования мышечной ткани, сердца, легких, почек, печени, мышечного желудка, крови на наличие действующего вещества микробиологическим методом с тсст-микробом Вас. subtilis АТСС 6633.

Через сутки после последнего введения САП-1 и САП-2 их действующие вещества были обнаружены в количестве от 0,08 до 2,61 мкг/г во всех исследованных образцах. Через 3 суток следовые количества действующих веществ препаратов были установлены только в печени.

Отсутствие действующих веществ САП-1 и САП-2 в организме цыплят через 120 часов после последнего введения препаратов может дать основание рекомендовать использовать в пищу человека мясо и субпродукты не ранее, чем через пять суток после окончания лечения птицы этими препаратами.

Токсикологические и фармакологические свойства препаратов ДС-1100 и шодмон изучены ранее (И. Т. Сатторов, 2001, 2003). Установлено, что препараты относятся к среднетоксичным; не вызывают нарушений обмена веществ, гемопоэза и лейкопоэза; морфологических нарушений в печени, сердце, почках, селезенке; токсикоз цыплят; не имеют выраженных кумулятивных свойств для птиц; не угнетают функции печени цыплят; не

оказывают тератогенного и эмбриотокеичеекого действия на эмбрионы в процессе онтогенеза и в постнатальный период роста и развития крысят.

Терапевтическая концентрация препаратов ДС-1100 и шодмон в организме птицы в течение суток обеспечивается двукратным их введением в дозе 300 мг/кг массы тела.

Мясо и субпродукты могут использоваться в пищу человека через семь суток после окончания лечения птицы препаратами ДС-1100 и шодмон.

3.7. Эффективность САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон в эксперименте

Эффективность антимикробных средств при инфекционных заболеваниях обусловливается антибактериальным спектром препаратов, то есть активностью в отношении возбудителя конкретной инфекции. Однако не всегда данные, полученные in vitro, коррелируют с таковыми при назначении препаратов птице. Кроме того, действенность противомикробных средств зависит от дозы и длительности применения.

Учитывая вышеизложенное, в следующей серии опытов в условиях эксперимента изучили эффективность препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при экспериментальных стафилококкозе, колибактериозе, сальмонеллезе, пастереллезе в зависимости от применения лекарственного средства до, одновременно или после заражения, дозы препарата и длительности его введения.

Влияние препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон на сохранность цыплят при экспериментальных бактериальных инфекциях птиц изучено на 7 группах цыплят (n=50) 1- (стафилококкоз), 30- (колибактериоз и сальмонеллез) и 120-дневного возраста (пастереллез) для каждого препарата. Птиц заражали культурами St. aureus интраорбитально в дозе 10 тыс. м.к., Е. coli и S. enteritidis внутрибрюшинно - 1 млрд м.к., P. multocida интравенозно - 1000 м.к. Препараты вводили перорально в дозах 60 (САП-1, САП-2) и 300 мг/кг массы тела (ДС-1100, шодмон) за 3 ч до заражения, одновременно с ним и через 3 ч после заражения. Зараженные цыплята контрольных групп (п=10 - для каждой культуры) препараты не получали. За птицей наблюдали в течение 10 дней, учитывая падеж и сохранность.

При назначении препарата САП-1 за 3 ч до заражения наибольшую терапевтическую эффективность (100%) наблюдали при стафилококкозе, сальмонеллезе и пастереллезе, одновременно с заражением - стафилококкозе. Через 3 часа после заражения введение препарата САП-1 обеспечивало сохранность 92% цыплят при колибактериозе.

Применение препарата САП-2 за 3 ч до заражения предохраняло 100% цыплят от стафилококкоза и пастереллеза, одновременно с заражением — стафилококкоза. Наименьшую эффективность препарата САП-2 (94%) отмечали в случае введения одновременно и через 3 ч после заражения при сальмонеллезе.

Препарат ДС-1100 был наиболее эффективен (100%) в случае применения за 3 ч до заражения при стафилококкозе, сальмонеллезе и пастереллезе,

наименее (94%) - одновременно с заражением при колибактериозе, через 3 ч после заражения при стафилококкозе и колибактериозе.

За 3 часа до заражения и одновременно с ним введение препарата шодмон обеспечивало сохранность 100% цыплят при стафилококкозе. При применении препарата за 3 ч до заражения при пастереллезе, одновременно с заражением при сальмонеллезе и пастереллезе и через 3 ч после заражения при колибактериозе, сальмонеллезе и пастереллезе терапевтическая эффективность составила 94%.

Для определения оптимальной терапевтической дозы САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при бактериальных инфекциях птиц (п=50), которых заражали по схеме описанной выше, препараты применяли через 2 дня после заражения 2 раза в сутки перорально в дозах 50, 60, 70 (САП-1, САП-2) и 200, 300, 400 мг/кг массы тела (ДС-1100, шодмон) в течение 6 (САП-1, САП-2) и 5 дней (ДС-1100, шодмон). Зараженные цыплята контрольных групп (п=10 - для каждой культуры) препараты не получали. За птицей наблюдали в течение 10 дней, учитывая падеж и сохранность.

В дозах 60 и 70 мг/кг массы тела терапевтическая эффективность препаратов САП-1 и САП-2 составила соответственно 90 - 96 и 90 - 98% (рис.5), а препараты ДС-1100 и шодмон наиболее эффективны (90 - 96%) были в дозах 300 и 400 мг/кг массы тела. Следует отметить, что повышение дозы препаратов САП-1, САП-2 с 60 до 70 и ДС-1100, шодмон с 300 до 400 мг/кг массы тела не влияло на эффективность препаратов. Поэтому оптимальная терапевтическая доза препаратов САП-1 и САП-2 - 60 мг/кг массы тела, ДС-1100 и шодмон - 300 мг/кг массы тела.

Щ

50 60 70

мг/кг массы тела

В КарЬуктсоссш аигеш □ ЕясЬспсЬи соК Ш 5аЬтюпе||а еМегйнГе Н РавтеигеЛа тиНосМа

САП-2

мг/кг массы 11X18

О 5иц>|1у|ооос1Л18 иигемя □ ЕясИсгкЫа спЦ И ептегп кН* И РимеигсОи тш1п>.'иЬ

98

96

94

92

90 88

88 ■ 86

86 - -

84

82

80

ДС-1100

П

300

мг/кг мас£ы тела

94 w 92 рС с ,90 '

Ei Si Jfi by Ii >c< ил-'us aureus С Escherichia coli (D Salmonellacnterilidis В PusteurcUa muhocida

Шодмон

мг/кг массы тела

ES Staphylococcus aureus С Escherichia coli □ Salmonella ento-itidis ЕЭ Pasteurella mullocida

Рис. 5. Терапевтическая эффективность препаратов в зависимости от дозы, %.

При определении длительности лечения препаратами САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при экспериментальных бактериальных инфекциях птиц (п=50), зараженных по аналогичной схеме, препараты вводили 2 раза в сутки пероралыю в оптимальной терапевтической дозе (САП-1, САП-2 - 60, ДС-1100, шодмон - 300 мг/кг массы тела) в течение 5, 6, 7 (САП-1, САП-2) и 4, 5, 6 дней (ДС-1100, шодмон). Зараженные цыплята контрольных групп (п=10 - для каждой культуры) препараты не получали. За птицей наблюдали в течение 10 дней, учитывая падеж и сохранность.

Установлено, что при лечении стафилококкоза, колибактериоза, сальмонеллеза и пастереллеза наибольшая эффективность препаратов САП-1 и САП-2 достигается при применении в оптимальной терапевтической дозе в течение 6, ДС-1100 и шодмон - 5 дней.

3.8. Производственные испытания лечебно-профилактической эффективности препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон

Изучение терапевтической и профилактической эффективности препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон проведено на птицефабриках Таджикистана в соответствии с требованиями к врачебно-биологическому эксперименту по постановке контроля, подбору аналогов, соблюдению одинаковых условий кормления и содержания животных в период исследования по И. Т. Фролову (1965).

После постановки диагноза и определения чувствительности возбудителя препараты САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон применяли по разработанным нами схемам, препараты сравнения - в соответствии с наставлениями по их применению.

Ежедневно велись наблюдения за состоянием цыплят. Павших вскрывали и проводили бактериологические исследования паренхиматозных органов.

При определении терапевтической и профилактической эффективности препаратов в производственных условиях учитывали заболеваемость, падеж и сохранность цыплят.

На птицефабрике АООТ «Паррандапарварии Худжанд» р-на Б. Гафурова Согдийской обл. в 1999 г. испытывали терапевтическую эффективность препарата САП-1 в сравнении с левомицетином при ассоциации колибактериоза и сальмонеллеза. Для лечения 3300 цыплят (возраст - 5 дней, масса тела - 52 г) подопытной группы применяли препарат САП-1 в дозе 60 мг/кг массы тела 2 раза в сутки в течение 6 дней. В контрольной группе (п=25700; возраст - 5 дней, масса тела - 52 г) использовали левомицетин в соответствии с наставлением по применению. За цыплятами вели наблюдение в течение срока лечения.

Установили, что терапевтическая эффективность САП-1 при ассоциированном течении колибактериоза и сальмонеллеза составляет 91,3%, что на 0,5% выше, чем при лечении левомицетином (90,8%).

В 2000 г. на этой же птицефабрике с профилактической целью после выделения патогенной культуры Б. еШегшсНв применяли препарат САП-1 в дозе 30 мг/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней (подопытная группа, п=4600; возраст - 5 дней, масса тела - 55 г) и олеандомицин в соответствии с наставлением по применению (контрольная группа, п=4200; возраст - 5 дней, масса тела - 55 г). За цыплятами наблюдали в течение 30 дней.

Применение этих препаратов способствовало улучшению общего состояния цыплят, повышению аппетита, нормализации температуры тела. Однако профилактическая эффективность препарата САП-1 при сальмонеллсзе (88,5%) была выше, чем у олеандомицина (87,4%).

Терапевтическая эффективность препарата САП-2 изучена на птицефабрике ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на в 2004 г. 8500 цыплят 90-дневного возраста с массой тела 900 г разделили на две группы. Цыплятам первой группы (п=4500) с кормом групповым способом давали САП-2 в дозе 60 мг/кг массы тела 2 раза в сутки в течение 6 дней, цыплятам второй (контрольной) группы (п=4000) - окситетрациклина гидрохлорид (используемый на птицефабрике) в соответствии с наставлением по его применению. За цыплятами наблюдали в течение срока лечения.

Установлена высокая терапевтическая эффективность САП-2 (92,4%) в сравнении с окситетрациклином гидрохлоридом (82,5%).

Профилактическая эффективность САП-2 исследована на птицефабрике АООТ «Мургпарварии навруз» Вахдатского р-на в 2004 г. 7250 цыплят 90-дневного возраста с массой тела 905 г разделили на две группы. Цыплятам первой группы (п=4250) с кормом групповым способом давали САП-2 в дозе 30 мг/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней, цыплятам второй (контрольной) группы (п=3000) - норсульфазол (используемый на птицефабрике) в соответствии с наставлением по его применению. За цыплятами наблюдали в течение 30 дней.

Результаты изучения в производственных условиях профилактической эффективности САП-2 при пастереллезе показали, что применение САП-2 и

норсульфазола способствует улучшению общего состояния цыплят, повышению аппетита, нормализации температуры тела. Однако сохранность цыплят, которым с кормом давали САП-2, была выше (84,3%), чем цыплят, которым с кормом давали норсульфазол (75,9%).

Терапевтическая и профилактическая эффективность комплексного препарата ДС-1100 изучена на птицефабриках ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на и ООО «Паррандапарварии Душанбе» р-на Рудаки в птичниках, где были выделены возбудители колибактериоза, сальмонеллеза и пастереллеза как в отдельности, так и в ассоциации.

При бактериологическом исследовании 45 проб патологического материала выделены патогенные культуры Е. coli (2 - в 2002 г. на птицефабрике ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на, 1 - в 2002 г. на птицефабрике ООО «Паррандапарварии Душанбе» р-на Рудаки), S. enteritidis (1 - в 2002 г. на птицефабрике ООО «Паррандапарварии Душанбе» р-на Рудаки) и P. multocida (2 - в 2002 г. на птицефабрике ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на).

Терапевтическая эффективность препарата ДС-1100 изучена на птицефабрике ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на. 7900 цыплят 5-дневного возраста с массой тела 47 г разделили на две группы. Цыплятам первой (подопытной) группы (п=4600) давали ДС-1100 в дозе 300 мг/кг массы тела 2 раза в сутки в течение 5 дней, цыплятам второй (контрольной) группы (п=3300) окситетрациклина гидрохлорид (применяемый на птицефабрике) в соответствии с наставлением по его применению. За цыплятами вели наблюдение в течение срока лечения.

Применение препарата ДС-1100 способствовало улучшению общего состояния цыплят, повышению аппетита, нормализации температуры тела. Терапевтическая эффективность препарата ДС-1100 составила 94,6%, а окситетрациклина гидрохлорида-91,3%.

Профилактическая эффективность препарата ДС-1100 изучена на птицефабрике ООО «Паррандапарварии Душанбе» р-на Рудаки. 6400 цыплят 5-дневного возраста с массой тела 52 г разделили на две группы. Цыплятам первой (подопытной) группы (п=3250) давали препарат ДС-1100 в дозе 150 мг/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней, цыплятам второй (контрольной) группы (п=3150) - фуразолидон (применяемый на птицефабрике) в соответствии с наставлением по его применению. За цыплятами вели наблюдение в течение 30 дней.

Применение ДС-1100 и фуразолидона способствовало улучшению общего состояния цыплят, повышению аппетита, нормализации температуры тела. Сохранность в первой группе (ДС-1100) была выше - 85,3%, чем во второй (фуразолидон) - 82,5%.

В АООТ «Паррандапарвар-2» р-на Дж. Расулова Согдийской обл. в 2000 г. были выделены 7 непатогенных и 1 патогенный штамм St. aureus и соответственно 7 и 2 штамма S. enteritidis от 120-дневных цыплят (массой 1,15 кг). Изолирована одна ассоциация микроорганизмов (St. aureus + S. enteritidis). Как moho-, так и ассоциированная инфекция протекали в острой форме.

Для терапии 3800 цыплят подопытной группы, в которой выделили патогенную ассоциацию, применяли препарат шодмон в дозе 300 мг/кг массы тела 2 раза в сутки в течение 5 дней. В контрольной группе (п=2700), в которой диагностировали сальмонеллез, использовали стрептомицин в соответствии с наставлением по применению. За цыплятами вели наблюдение в течение срока лечения.

В результате опыта установили, что терапевтическая эффективность препарата шодмон при ассоциированном течении стафилококкоза и сальмонеллеза была выше (93,4%), чем при лечении сальмонеллеза стрептомицином (89,8%).

В 2003 г. на этой же птицефабрике была изолирована одна ассоциация St. aureus + S. enteritidis. С профилактической целью применили препарат шодмон в дозе 150 мг/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней (подопытная группа, п=5600; возраст - 120 дней, масса тела - 1,2 кг) и сульфадимезин в соответствии с наставлением по применению (контрольная группа, п=2700; возраст - 120 дней, масса тела - 1,2 кг).

Наблюдения за состоянием цыплят в течение 30 дней показали, что препарат шодмон является высокоэффективным (86,4%) средством для профилактики стафилококкоза и сальмонеллеза, повышающим сохранность птицы. Профилактическая эффективность препарата шодмон (86,4%) была на 8,2% выше, чем у сульфадимезина (78,2%).

Сравнительный анализ результатов испытания в производственных условиях лечебной и профилактической эффективности при бактериальных болезнях птиц препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон свидетельствует об их большей эффективности в сравнении с широко применяемыми антимикробными средствами.

Производственные испытания показали, что САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон являются эффективными лечебно-профилактическими средствами, применение которых в комплексе с зоогигиеническими и встеринарно-санитарными мероприятиями снижает заболеваемость и смертность птиц от бактериальных болезней.

3.9. Применение эфирного масла душицы мелкоцветковой для профилактики бактериальных болезней

Концентрация микроорганизмов и снижение резистентности птицы создают благоприятный фон для возникновения инфекции. Накопление микрофлоры и практически неограниченное ее перепассажироваиие через восприимчивый организм приводят к нарушению взаимоотношений между организмом птицы и окружающим ее микромиром, изменению качественного состава микрофлоры, ее свойств, что обусловливает заболеваемость и гибель птицы во все периоды ее жизни, при отсутствии единой картины клинических признаков, патологоанатомических изменений, единого нозологического возбудителя. При этом существенную роль в патологии птиц может играть условно-патогенная микрофлора.

Одной из причин распространения инфекционных болезней в инкубационный период является недостаточность или несвоевременность ветеринарно-санитарных мероприятий, в том числе и профилактической дезинфекции в периоды инкубации и вывода.

Наибольшие потери наблюдаются среди цыплят, зараженных из-за инфицирования инкубационных яиц через скорлупу экзогенным путем, а также трансовариально от больной птицы. Микрофлора воздуха выводного шкафа по мере удлинения срока вывода цыплят увеличивается в несколько раз. Заражению способствуют значительное накопление микрофлоры в инкубационном шкафу и высокая бактериальная обсемененность инкубационных яиц.

В период массового вывода цыплят в выводном шкафу происходит быстрое накопление микрофлоры, источниками которой являются скорлупа, подскорлупные оболочки инкубационных яиц, хориоаллантоисная жидкость, частично накопление микроорганизмов происходит и за счет размножения. Состав микроорганизмов обусловлен эпизоотическим и ветеринарно-санитарным состоянием птицефабрики.

Патогенная микрофлора в среде накапливается в процессе вывода цыплят, заболеваемость и гибель которых в первые дни жизни коррелирует со степенью микробной контаминации воздуха в выводном шкафу.

В первые 6-8 часов массового вывода микрофлора воздуха выводных шкафов состоит, в основном, из грамположительной микрофлоры (стафилококки, стрептококки и др.). Позже за 6 - 8 часов до выборки цыплят появляется грамотрицательная микрофлора.

В выводном инкубаторе цыплята заражаются главным образом имеющейся в воздухе микрофлорой: заболеваемость и гибель цыплят в первые часы и дни жизни в количественном и качественном отношениях коррелирует с уровнем микробов в воздухе выводного шкафа.

При длительном применении в птицеводческих хозяйствах дезинфектантов нарастает устойчивость к ним микрофлоры и снижается качество дезинфекции. Это необходимо учитывать при организации дезинфекционных обработок инкубационных и выводных шкафов. Поэтому нами проведены исследования эффективности ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней птиц.

С целью снижения инфицированности цыплят в ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на в 2005 году для дезинфекции инкубационых и выводных шкафов нами было использовано ЭМ ДМ, имеющее широкий спектр антимикробного действия и безвредное для лабораторных животных (Халифаев Д. Р., 2005).

При изучении эффективности ЭМ ДМ ее использовали в цельном виде, устанавливая чашки Петри с препаратом из расчета 1 г/м3 при отключенной вентиляции в инкубаторах после закладки яиц и в выводных шкафах за 3 дня до вывода (экспозиция - 6 - 8 часов). Для контроля над качеством обработки проводили микробиологический мониторинг вывода цыплят подопытной и

контрольной групп. Контрольную группу обрабатывали (общепринятым методом) формалином, применяемым на птицефабрике.

Установлено, что обработка яиц ЭМ ДМ обеспечивает снижение количества колоний микроорганизмов в 1,6 - 3,7 раза по сравнению с контролем (количество колонии, % вывода, ссылка по методу ВНИВИП (Борисенкова А. Н., Рождественская Т. Н. и др.).

Снижение количества микроорганизмов в воздухе инкубационных и выводных шкафов, обработанных ЭМ ДМ, способствовало снижению инфицированности цыплят на выводе и при посадке их на выращивание.

Оценка этих показателей была основана на частоте встречаемых признаков патологоанатомических изменений, характерных для поражения органов дыхания, от общего числа павших и сохранности цыплят за 20 дней выращивания.

Установлено, что в подопытной группе, обработанной ЭМ ДМ, павших с патологией органов дыхания (пневмонии) было в 2 раза меньше, чем в контрольной группе, обработанной формалином (Р<0,05). Сохранность в подопытной группе была на 1,4% выше, чем в контрольной группе (Р<0,05).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что ЭМ ДМ может быть использовано на птицефабриках для дезинфекции воздушной среды в инкубаторе и выводных шкафах.

3.10. Сочетанное применение ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуностимулятора тимогар

В системе ветеринарно-санитарпых мероприятий важное место занимает специфическая профилактика многих вирусных и бактериальных болезней животных и птиц. В то же время ряд причин: иммунодефинитное состояние организма, нарушение условий хранения и транспортировки вакцин, технологии вакцинации, отсутствие контроля биологической активности вакцин и другие, - способствуют тому, что в стаде не всегда создастся достаточный иммунный фон и возможно снижение напряженности иммунитета у птиц. Для создания достаточного иммунного фона в стаде и устранения возможного снижения напряженности иммунитета под воздействием различных стрессовых факторов нами исследована эффективность комплексного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуномодулятора тимогар.

Исследования по сочетанному применению ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуномодулятора тимогар проведены в трех сериях опытов в ТаджНИВИ, в которых использованы 630 цыплят суточного возраста (яичного направления) с массой тела 42 г.

Для иммунизации применяли экспериментальную серию ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза,

изготовленную в ТаджНИВИ. Иммунизирующая доза вакцины - 6 млрд м.к_/мл. Цыплят в возрасте 1 и 30 дней иммунизировали аэрозольным методом в дозе 1,5 мл/м3 в общем объеме помещения 40 м3, время экспозиции 30 мин.

Тимогар смешивали с вакциной в дозах 10, 20, 30 мкг/кг живой массы тела и применяли цыплятам в суточном возрасте.

Заражение цыплят вакцинированных и контрольной групп осуществляли через 12 суток после ревакцинации в дозе 3 ЛД50 (колибактериоз - 0,23х109 м.к., стафилококкоз 0,25х109м.к.) внутримышечно.

Продолжительность опытов составила 45 дней (в соответствии с инструкцией по контролю иммуногенности вакцины). Диагноз на колибактериоз и стафилококкоз ставили при патологоанатомическом вскрытии, а в сомнительных случаях подтверждали бактериологическим исследованием. Профилактическое действие вакцины и ее сочетаний с тимогаром определяли общепринятым коэффициентом эффективности (КЭ), выраженным в %.

Лучший КЭ иммунизации (98%) получен при применении тимогара в дозах 20 и 30 мкг/кг массы тела. Следует отметить, что при применении одной вакцины защитный эффект составил 92%.

Через 15 дней после вакцинации и ревакцинации цыплят в реакции агглютинации определили уровень специфических антител в сыворотке крови к возбудителям колибактериоза и стафилококкоза. Установлено, что на 15 сутки после вакцинации у цыплят наблюдался прирост специфических антител, уровень которых составил к Е. coli 3,22±0,11 (4 группа) - 4,40±0,12 log2 (3 группа), St. aureus - 3,80±0,18 (4 группа) - 4,38±0,21 (3 группа) log2 (указать титры до опыта). Ревакцинация стимулировала образование специфических антител, титр которых на 15 сутки составил к Е. coli 4,21 ±0,23 (4 группа) -8,51 ±0,34 log2 (2 группа), St. aureus - 4,34±0,33 (4 группа) - 8,91±0,39 (3 группа) log2. Полученные данные свидетельствуют, что тимогар в дозах 20 и 30 мкг/кг массы тела активизирует образование специфических антител к Е. coli и St. aureus, что свидетельствует о положительном влиянии препарата тимогар на формирование иммунитета к колибактериозу и стафилококкозу. Оптимальная доза иммуномодулятора тимогар - 20 мкг/кг массы тела.

Применение тимогара во всех случаях дало положительный результат. Смертность от колибактериоза и стафилококкоза цыплят иммунизированных вакциной с тимогаром составила - 0,1 - 0,2%, вакциной - 0,5 - 0,6%, невакцинированных- 7,5 -9,1%.

Так, в ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на (2003 г.) вакциной в сочетании с тимогаром было обработано 4000, вакциной - 800 цыплят. За 45 дней выращивания смертность от колибактериоза в группе привитой вакциной с добавлением тимогара составила 0,1%, т.е. уровень заболеваемости снизился в пять раз. В этом же зале содержался невакцинированный контроль в количестве 500 голов. За весь период выращивания здесь пал от колибактериоза 41 цыпленок (8,2%), от стафилококкоза 1 цыпленок (0,2%). Поэтому содержание невакцинированных групп в хозяйстве нецелесообразно.

Результаты испытаний в экспериментальных и производственных условиях иммуномодулятора тимогар свидетельствуют о целесообразности его

применения для повышения эффективности вакцинации против колибактериоза и стафилококкоза и возможности широкого использования препарата в ветеринарии.

ВЫВОДЫ

1. На птицефабриках РТ в 1994 - 2004 гг. условно-патогенная микрофлора была представлена St. aureus, Е. coli (02, Oll, 026, 078, 082, 086, 0111,0115, Ol 19, 0126, 0137), Pr. vulgaris, S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa. Наибольший удельный вес среди выделенной условно-патогенной микрофлоры имела Е. coli (36,7%).

2. Синтезированы новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а] пиримидина, на основе которых разработаны химиотерапевтические препараты САП-1 и САП-2.

3. Препараты САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон имеют широкий спектр противомикробного действия в отношении эпизоотических и музейных штаммов исследованных тест-культур.

4. Наибольшую чувствительность к препарату САП-1 проявляют St. aureus, Str. pyogenes, P. multocida, к САП-2 - все испытанные микроорганизмы, к ДС-1100 - S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, St. aureus, Str. pyogenes, к шодмону - St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. pullorum.

5. Для препаратов САП-1 и САП-2 определены МПД для белых мышей и цыплят - соответственно 325, 375 и 250, 300 мг/кг, ЛДию - 1250 (для белых мышей и цыплят) и 1000, 1250, ЛД50 - 650, 750 и 525, 600 мг/кг массы тела. Препараты относятся к среднетоксичным.

6. Препараты САП-1 и САП-2 не оказывают эмбриотоксического и тератогенного действия. У САП-1 и САП-2 не выявлено выраженных кумулятивных свойств для белых мышей и цыплят.

7. САП-1 и САП-2 в дозе 1/5 ДД50 вызывают непродолжительное угнетение функции печени, восстанавливающееся через 6 ч после введения препарата. Меньшие дозы препаратов (1/10 ЛД50) не вызывают функциональных изменений в печени.

8. Исследования хронической токсичности показали, что САП-1 и САП-2 не вызывают нарушений обмена веществ, гемопоэза и лейкопоэза у белых мышей и цыплят.

9. Препараты САП-1 и САП-2 не оказывают побочного воздействия на кроветворение и не стимулируют неспецифические факторы иммунитета.

10. Двукратная дача САП-1 и САП-2 с кормом в дозе 60 мг/кг массы тела обеспечивает терапевтическую концентрацию препарата в организме птицы в течение суток.

11. Препараты САП-1 и САП-2 выводятся из организма цыплят через 120 часов после последнего введения препаратов.

12. Наибольшая эффективность препаратов САП-1 и САП-2 достигается при применении в дозе 60 мг/кг массы тела в течение 6, ДС-1100 и шодмон -300 мг/кг массы тела в течение 5 дней.

13. В производственных условиях применение препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон в комплексе с зоогигиеническими и ветеринарно-санитарными мероприятиями профилактирует заболеваемость птицы бактериальными болезнями, снижает заболеваемость и смертность.

14. Применение ЭМ ДМ при инкубации яиц и в выводном шкафу обеспечивает снижение количества колоний микроорганизмов в 1,6 - 3,2 раза по сравнению с формалином.

15. Коэффициент эффективности иммунизации ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц совместно с иммуномодуляторам тимогар в дозах 20 и 30 мкг/кг массы тела составлял 98% .

16. Применение тимогара на 4 птицефабриках Таджикистана дало положительный результат. Смертность от колибактериоза и стафилококкоза цыплят иммунизированных вакциной с тимогаром составила - 0,1 - 0,2%, вакциной - 0,5 - 0,6%, невакцинированных - 7,5 - 9,1%.

17. Разработана нормативная документация.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики (перорально 1 раз в сутки в течение 10 дней в дозе 30 мг/кг массы тела) и терапии (перорально 2 раза в сутки в течение 5-6 дней в дозе 60 мг/кг массы тела) бактериальных болезней птиц рекомендуется применять препараты САП-1 и САП-2.

2. Для профилактики (перорально 1 раз в сутки в течение 10 дней в дозе 150 мг/кг массы тела) и терапии (перорально 2 раза в сутки в течение 5 дней в дозе 300 мг/кг массы тела) бактериальных болезней птиц рекомендуется применять препараты ДС-1100 и шодмон.

3. Для профилактики бактериальных болезней птиц рекомендуется аэрозольное применение ЭМ ДМ при инкубации яиц и в выводном шкафу.

4. Для повышения эффективности ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц рекомендуется сочетанное ее применение с иммуномодулятором тимогар.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Мальцева Т. Н., Салимов Т. М. Диагностика сальмонеллеза птиц // Сб. науч. тр. ТаджНИВИ. - Душанбе, 1994. - С.26-29.

2 Бобиев Г. М., Салимов Т. М., Чориева С. А., Бандаев С. Г. Влияние иммуномодулирующего препарата тимогар на организм птицы при вакцинации против стафилококкоза и колибактериоза // Тр. республ. конф., посвящ. 50-летию ТГНУ. - Душанбе, 1998. - С. 12 - 13.

3. Бобиев Г. М., Салимов Т. М., Чориева С. А. Повышение эффективности вакцинации цыплят против колибактериоза и стафилококкоза с помощью иммуностимулирующих препаратов // Информ. листок / НПИЦентр. -Душанбе, 1998.-4 с.

4. Мальцева Т. Н., Асельдеров А. Г., Салимов Т. М. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц // Сб. науч. тр. ТаджНИВИ. - Душанбе, 1998. - С. 96 - 99.

5. Салимов Т. М. Результаты испытания в лабораторных условиях ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза на суточных и месячных цыплятах. И Сб. науч. тр. ТаджНИВИ. - Душанбе, 1998. -С. 77-78.

6. Салимов Т. М. Ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц (антигенные и иммуногенные свойства): Автореф. дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / ТаджНИВИ. - Душанбе, 1999.- 15 с.

7. Салимов Т. М. Ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц (антигенные и иммуногенные свойства): Дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / ТаджНИВИ. - Душанбе, 1999. -110 с.

8. Салимов Т. М. Изучение ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза на стерильность и безвредность / Салимов Т. М. // Тез. докл. конф. молод, ученых. - Душанбе, 1999. - С. 106 - 107.

9. Салимов Т. М. Иммунологические показатели у цыплят, привитых ассоциированной вакциной против колибактериоза и стафилококкоза // Тез. докл. конф. молод, ученых - Душанбе, 1999. - С. 102 - 103.

10. Салимов Т. М. Подбор штаммов эшерихии коли и стафилококкус ауреус для изготовления ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза // Тез. докл. конф. молод, ученых - Душанбе, 1999.-С. 104- 105.

11. Салимов Т. М., Чориева С. А. Влияние препарата тимогара на иммунобиологические показатели организма цыплят, привитых ассоциированной формолвакциной против колибактериоза и стафилококкоза И Проблемы изыскания, синтеза и производства препаратов для ветеринарии: Матер, докл. науч. конф. - Самарканд, 1999. - С. 163 - 164.

12. Салимов Т. М., Юсупов Р. М., Муллоджанова Н. Д. Эпизоотология смешанных бактериальных инфекций у птиц в Республике Таджикистан // Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях: Матер. Междунар конф., посвящ. 30-летию ВНИВИПФТ. - Воронеж, 2000. - Т. 2. - С. 213.

13. Патент № Т] 304. Тарзи ваксинатсиякунии паррандахо зидди колибактериоз ва стафилококкоз /Бобиев Г.М.,Салимов Т.М.,Мурватулоев С.А.2001.

14. Бактерицидное действие эфирных масел иссопа и герани, сорбированных на бентоните / Халифаев Д. Р., Куканиев М. А., Салимов Т. М., Шаропов Ф., Юсупов М. М. // Экологические особенности биологического разнообразия: Тез. докл. Междунар. науч. конф. - Душанбе, 2002. - С. 173 -174.

15. Изучение острой токсичности 2-бром-6-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина для цыплят / Салимов Т. М., Муллоджонова Н. Д., Сангов 3. Г., Куканиев М. А., Хайдаров К. X. 2002.

16. Патент № Tj 395. Дорувори ДС-1100 барои муолича кардани энтеритхои сирояткунандаи гусолахо /Сатторов И.Т.,Салимов Т.М.,Шайхов М.Х.2002.

17. Об антимикробной активности 1,3,4-тиадиазола[3,2-а]пиримидина / Сатторов С., Куканиев М., Сангов 3., Осимов Д. М., Исупов С., Салимов Т. М. -// Совершенствование диагностики и лечения часто встречающихся заболеваний в Таджикистане: Матер. VIII науч.-практ. конф. / ТИППМК. — Душанбе, 2002. - С. 106. - 107.

18. Острая токсичность производных тиадиазолопиримидина / Салимов Т. М., Назаров Ш., Сатторов И. Т., Куканиев М. А. - // Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях: Матер. Междунар конф., посвящ. 30-летию ВНИВИПФТ. - Воронеж, 2000. - Т. 2. - С. 215.

19. Спектр действия и сравнительная антимикробная активность in vitro производных 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина/ С. Сатторов, 3. Г. Сангов, М. А. Куканиев, Т. М. Салимов, С. Д. Исупов, Д. М. Осимов, Н. Д. Муллоджонова // Совершенствование диагностики и лечения часто встречающихся заболеваний в Таджикистане: Матер. VIII науч.-практ. конф. / ТИППМК. -Душанбе, 2002. - С. 104. - 105.

20. Шайхов М. X., Салимов Т. М., Сатторов И. Т. Бактерицидное действие препаратов ДС-1100 и шодмон на возбудителей бактериальных болезней птиц / ВНИИВИПРиТ. - // Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях: Матер. Междунар конф., посвящ. 30-летию ВНИВИПФТ. - Воронеж, 2000. - Т. 2.-С. 216-217.

21. Шахматов А. Н., Салимов Т. М., Бобиев Г. М. Влияние иммуномодуляторов на биохимические показатели крови цыплят при иммунном стрессе, вызванном вакцинацией // Докл. ТАСХН. - Душанбе, 2002. - С. 120 - 122.

22. Диско-диффузный метод определения чувствительности микроорганизмов к эфирным маслам душицы мелкоцветковой / Салимов Т. М., Сатторов И. Т., Куканиев М. А., Халифаев Д. Р., Юсупов М. М., Муллоджонова Н. Д. // Тр. ТаджНИВИ. - Душанбе, 2003. - С.

23. Патент № Tj 395. Дорувори Шодмон барои муолича кардани энтеритхои сирояткунандаи гусолахо /Сатторов И.Т.,Салимов Т.М.,Турдиев Ш.А.2003.

24 Антимикробное действие эфирного масла душицы мелкоцветковой / Салимов Т. М., Сатторов И. Т., Куканиев М. А., Халифаев Д. Р., Юсупов М. М., Муллоджонова Н. Д. // Матер. Междунар. юбил. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИВИП, «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. -СПб - Ломоносов, 2004. - С. 231 - 233.

25. Куканиев М. А., Салимов Т. М., Хайдаров К. X. Химия и биологическая активность производных 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина. -М.: Компания Спутник+, 2004. - 157 с.

26. Перспективы создания ветеринарных препаратов па основе эфирных масел / Салимов Т. М., Куканиев М. А., Аблакулов И. Ш., Халифаев Д. Р. // Ветеринария. - 2004. - №4.

27. Салимов Т. М. Изучение бактериостатической активности и токсичности САП-2 // Матер. Междунар. юбил. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИВИП, «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. -СПб - Ломоносов, 2004. - С. 140 - 142.

28. Салимов Т. М., Назаров Ш. X. Изучение специфической активности и определение оптимальной терапевтической дозы и длительности лечения препаратом САП-2 II Матер. Междунар. юбил. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИВИП, «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. -СПб - Ломоносов, 2004. - С. 142 - 143.

29. Салимов Т. М., Назаров Ш. X. Производственные испытания терапевтической и профилактической эффективности «САП-2» при пастереллезе // Ветеринарная медицина. - 2004. -№4. - С. 12 - 13.

30. Салимов Т. М., Назаров Ш. X. Хосияти зиддимикробии S(7-mcth.i-5-OKCO-5H-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромид in vitro // Ветеринария. - 2004. - №2. - С. 31 - 33.

31.Салимов Т. М. Применение ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц // Докл. ТАСХН. - 2004. - № 7 - 8. - С. 82-83.

32.Салимов Т. М. Противомикробный препарат САП-2 // Птицеводство. -2004. -№7. С. 18-19.

33.Салимов Т. М., Шайхов М. X. Производственные испытания комплексного препарата ДС-1100 при бактериальных желудочно-кишечных и респираторных инфекциях и их ассоциациях И Матер. Междунар. юбил. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИВИП, «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. - СПб - Ломоносов, 2004. - С. 143 - 145.

34.Салимов Т. М., Шайхов М. X. Терапевтическая эффективность ДС-1100 при экспериментальном колибактериозе // Естественные и технические науки. - 2004. -№3 (12). - С. 103 - 105.

35.Салимов Т. М., Шайхов М. X. Экспериментальное определение оптимальной терапевтической дозы и длительности лечения колибактериоза комплексным препаратом ДС-1100 // Матер. Междунар. юбил. науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ВНИВИП, «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве. - СПб - Ломоносов, 2004. - С. 145 - 146.

36.Сорбция эфирного масла душицы на бентоните / Бунятян Н. Д., Халифаев Д. Р., Холназаров Б. М., Куканиев М. А., Салимов Т. М. // Фармация. -2003.-С. 26-27.

37.Синтез и антимикробная активность 2-бром-7-метил-5-оксо-5н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина / Салимов Т. М., Куканиев М. А., Сатторов И. Т., Осимов Д. М. // Хим.-фарм. журн. - 2005. - №6. - 28 - 29.

38.Салимов Т. М., Хайдаров К. X., Мурватуллоева М. С. Кумулятивные свойства САП-1 и САП-2 // Лекарства и здоровье: Матер. 53-й годичной науч.-практ. конф. (с междунар. участием), посвящ. 1025-летию со дня рождения Абуали ибн Сино. - Душанбе, 2005. - С. 104 - 105.

39.Салимов Т. М., Мурватуллоева М. С., Куканиев М. А. Функциональное состояние печени после однократного введения препаратов САП-1 и САП-2 // Лекарства и здоровье: Матер. 53-й годичной науч.-практ. конф. (с междунар. участием), посвящ. 1025-летию со дня рождения Абуали ибн Сино. - Душанбе, 2005.-С. 105-106.

40.Салимов Т. М., Хайдаров К. X., Мурватуллоева М. С. Хроническая токсичность, эмбриотоксическое и тератогенное свойства препаратов САП-1 и САП-2 // Лекарства и здоровье: Матер. 53-й годичной науч.-практ. конф. (с междунар. участием), посвящ. 1025-летию со дня рождения Абуали ибн Сино. -Душанбе, 2005. - С. 106 - 107.

41.Салимов Т. М., Хайдаров К. X., Мурватуллоева М. С. Фармакокинетика препаратов САП-1 и САП-2 // Лекарства и здоровье: Матер. 53-й годичной науч.-практ. конф. (с междунар. участием), посвящ. 1025-летию со дня рождения Абуали ибн Сино. - Душанбе, 2005. - С. 107 - 109.

42.Салимов Т. М., Мурватуллоева М. С. Сроки выведения остаточных количеств препаратов САП-1 и САП-2 из организма птицы П Лекарства и здоровье: Матер. 53-й годичной науч.-практ. конф. (с междунар. участием), посвящ. 1025-летию со дня рождения Абуали ибн Сино. - Душанбе, 2005. - С. 109.

Сдано в набор 05.09.2006 г. Подп. к печ. 08.07.2006 г. 60x84 1/16 Зак.256 Тираж 100 экз. Объем 2V' п.д Гарнитура Times New Roman Типография Компания "Квадра-print" - услуги по полиграфии Санкт-Петербург, ул. Курчатова, д. 10 /завод "Позитрон"/, офис 32

Актуальность темы. Одной из перспективных отраслей сельского хозяйства Республики Таджикистан (РТ) является птицеводство, развитию которого в значительной мере препятствуют бактериальные болезни, наносящие прямой (падеж птицы, снижение продуктивности, низкая конверсия корма, ухудшение биологических качеств эмбрионов, снижение выводимости и др.) и непрямой (иммуносупрессивное воздействие на организм, следствием чего является снижение поствакцинального противовирусного иммунитета) экономический ущерб [3, 23, 32, 82, 174].

Широкое распространение во внешней среде условно-патогенной микрофлоры, ее циркуляция и рециркуляция среди поголовья птиц является одной из особенностей бактериальных болезней на современном этапе [32].

Исследованию распространения бактериальных болезней птиц в Таджикистане посвящено незначительное количество работ, поэтому многие важные вопросы этой проблемы остаются нерешенными. В восстанавливаемых после экономического спада в начале 90-х годов XX в. крупных птицехозяйствах РТ наблюдается, по данным лаборатории по изучению болезней птиц (ЛИБП) Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института (ТаджНИВИ) Таджикской академии сельскохозяйственных наук (ТАСХН), рост числа бактериальных болезней, среди которых большой удельный вес имеют стафилококкоз, колибактериоз, сальмонеллез и пастереллез [100, 101, 116, 162, 208], что обусловило проведение наших исследований согласно отраслевым научно-техническим программам - «Изыскать эффективные методы и средства профилактики смешанных бактериальных инфекций птиц» и «Разработать и внедрить систему мероприятий по профилактике бактериальных инфекций у птиц».

Для профилактики и терапии указанных болезней широко используются химиотерапевтические и биологические средства. Однако длительное и бессистемное применение антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов и других препаратов [35, 79, 82, 108, 167, 175] привело к снижению эффективности этих антимикробных средств из-за формирования устойчивости к ним у патогенных микроорганизмов [9, 102, 176], что определяет потребность ветеринарии в новых действенных препаратах.

Предотвращение развития устойчивости патогенной микрофлоры к лекарственным средствам, нежелательных побочных эффектов, уменьшение курсовой дозы определяют эффективность и экономичность комплексных химиотерапевтических препаратов при профилактике и лечении самостоятельных и смешанных бактериальных болезней птиц [176,177].

Одной из ведущих проблем современной ветеринарии является разработка эффективных антибактериальных средств, поиск которых ведется среди синтезированных [9, 102, 176] и биологически активных природных веществ [119, 120].

В течение последнего десятилетия значительно расширились исследования в обл. химии и биологической активности конденсированных производных 1,3,4-тиадиазола, среди которых особое место занимают 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидины [76, 78, 90, 93,442].

Разнообразное применение в ветеринарной медицине нашли эфирные масла (ЭМ) [202], проявляющие различные виды биологической активности [46, 112, 164].

Для специфической профилактики колибактериоза и стафилококкоза разработаны моновакцины [38, 85, 148]. В борьбе же со смешанными инфекциями птиц, вызываемыми Е. coli и St. aureus, наиболее эффективными могут быть ассоциированные вакцины, действенность которых может быть повышена за счет сочетанного применения с иммуномодуляторами, одним из которых является препарат тимогар, разработанный ООО «Занд» (РТ).

ТаджНИВИ ТАСХН для профилактики и терапии бактериальных болезней сельскохозяйственных животных и птиц разработаны препараты САП-1 и САП-2, действующими веществами которых являются производные 1,3,4-тиадиазола; комбинированные препараты ДС-1100 и шодмон; способ применения ЭМ душицы мелкоцветковой (ДМ) для профилактики бактериальных болезней птиц; ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц.

Цель исследования - изучить распространение бактериальных болезней птиц в условиях Таджикистана и разработать систему рационального применения новых химиотерапевтических и биологических препаратов для профилактики и терапии этих заболеваний.

Для достижения поставленной цели решены следующие задачи:

1. Изучить распространение бактериальных болезней птиц в специализированных хозяйствах РТ.

2. Синтезировать новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина.

3. Разработать препараты на основе новых производных 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина.

4. Исследовать антимикробную активность новых препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон в отношении доминирующих возбудителей бактериальных болезней птиц.

5. Изучить токсикологические и фармакологические свойства САП-1 и САП-2.

6. Экспериментально определить эффективность: и а) САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмона, определить оптимальные дозы, разработать схемы применения этих средств при бактериальных болезнях птиц; б) использования ЭМ ДМ для профилактики бактериальных болезней птиц; в) сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуномодулятора тимогар.

7. Провести производственные испытания: а) профилактической и терапевтической эффективности препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при бактериальных болезнях птиц; б) эффективности ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней птиц; в) эффективности сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и препарата тимогар.

8. Разработать наставления по применению новых препаратов для профилактики и лечения бактериальных болезней птиц.

Научная новизна. Изучено распространение бактериальных болезней птиц в птицеводческих хозяйствах Таджикистана в 1994 - 2004 гг. Комплексными исследованиями показано, что наибольшее распространение получили стафилококкоз, колибактериоз, сальмонеллез и пастереллез, которые протекают как в виде моноинфекций, так и ассоциаций.

Синтезированы новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина, на основе которых созданы антимикробные препараты САП-1 и САП2.

В экспериментальных условиях определены эффективность препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон (определены дозы и разработаны схемы применения препаратов при профилактике и лечении бактериальных болезней птиц); ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней птиц; сочетанного применения ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуностимулятора тимогар. Научная новизна проведенных исследований подтверждена:

- Патентом Республики Таджикистан на изобретение № Tj 304. Тарзи ваксинатсиякунии паррандахо зидди колибактериоз ва стафилококкоз / Бобиев Г. М.,Салимов Т. М., Мурватулоев С. А. (2001 г.);

- Патентом Республики Таджикистан на изобретение № Tj 331 Дорувори ДС-1100 барои муолича кардани энтеритхои сирояткунандаи гусолахо / Сатторов И. Т., Салимов Т. М., Шайхов М. X. (2002 г.);

- Патентом Республики Таджикистан на изобретение № Tj 395. Дорувори Шодмон барои муолича кардани энтеритхои сирояткунандаи гусолахо / Сатторов И. Т., Салимов Т. М., Турдиев Ш. А. (2003 г.);

- Положительными решениями о выдаче Патентов Республики Таджикистан на изобретения по заявкам №02000745 «8(7-Метил-5-оксо-5Н-1,2,3-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромид, обладающий антибактериальной активностью», №02000735 «2-Бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,2,3-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин, обладающий антибактериальной активностью», №03000788 «Средство, обладающее антибактериальной активностью».

Практическая ценность. Разработана система рационального применения химиотерапевтических и биологических препаратов для профилактики и терапии бактериальных болезней птиц. Ветеринарной практике для профилактики и терапии этих заболеваний предложены новые химиотерапевтические препараты САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон. Для предупреждения бактериальных болезней птиц предложено ЭМ ДМ. С целью повышения эффективности ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц предложено сочетанное применение этого препарата с иммуномодулятором тимогар.

Материалы диссертации вошли в нормативно-техническую документацию на:

- САП-1 (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- САП-2 (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- ДС-1100 (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- шодмон (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 2005 г.),

- ЭМ ДМ (наставление по применению одобрено ученым советом ТаджНИВИ 15 сентября 2005 г., протокол №2),

- ассоциированную формолвакцину против колибактериоза и стафилококкоза птиц (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 1999 г.),

- иммуномодулятор тимогар (НД утверждена ГУВ МСХ РТ в 1999 г.).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения распространения бактериальных болезней птиц в специализированных хозяйствах Таджикистана.

2. Результаты синтеза новых производных 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина.

3. Результаты исследования противобактериальной активность новых препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон в отношении доминирующих возбудителей бактериальных болезней птиц.

4. Результаты изучения токсикологических и фармакологических свойств САП-1 и САП-2.

5. Результаты экспериментального определения эффективности: а) САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмона; б) использования ЭМ ДМ для профилактики бактериальных болезней птиц; в) сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и иммуномодулятора тимогар.

6. Результаты производственной проверки: а) профилактической и терапевтической эффективности препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон при бактериальных болезнях птиц; б) эффективности ЭМ ДМ при профилактике бактериальных болезней птиц; в) эффективности сочетанного применения ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц и препарата тимогар.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на заседаниях ученого совета ТаджНИВИ (1994 - 2005 гг.); республиканских и областных семинарах-совещаниях ветеринарных работников РТ (1994 - 2005 гг.); Международной конференции ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях» (Воронеж, 2002 г.); Международной научно-практической конференции «Новое в эпизоотологии, диагностике и профилактике инфекционных и незаразных болезней птиц в промышленном птицеводстве» (Санкт-Петербург -Ломоносов, 2004 г.).

Публикации. По результатам исследований опубликованы в печати 42 научные работы, получены 3 патента РТ и 3 положительных решения на получение патента, 1 удостоверение на рационализаторское предложение.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

ВЫВОДЫ

1. На птицефабриках РТ в 1994 - 2004 гг. условно-патогенная микрофлора была представлена St. aureus, Е. coli (02, 011, 026, 078, 082, 086, 0111, 0115, 0119, 0126, 0137), Pr. vulgaris, S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, Ps. aeruginosa. Наибольший удельный вес среди выделенной условно-патогенной микрофлоры имела Е. coli (36,7%).

2. Синтезировать новые производные 1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина, на основе которых разработаны химиотерапевтические препараты САП-1 и САП-2.

3. Прапараты САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон имеют широкий спектр противомикробного действия в отношении эпизоотических и музейных штаммов исследованных тест-культур.

4. Наибольшую чувствительность к препарату САП-1 проявляют St. aureus, Str. pyogenes, P. multocida, к САП-2 - все испытанные микроорганизмы, к ДС-1100 - S. enteritidis, S. pullorum, P. multocida, St. aureus, Str. pyogenes, к шодмону - St. aureus, Str. pyogenes, E. coli, Pr. vulgaris, S. pullorum.

5. Для препаратов САП-1 и САП-2 определены МПД для белых мышей и цыплят - соответственно 325, 375 и 250, 300 мг/кг, ЛДюо - 1250 (для белых мышей и цыплят) и 1000, 1250, ЛД50 - 650, 750 и 525, 600 мг/кг массы тела. Препараты относятся к среднетоксичньш.

6. Препараты САП-1 и САП-2 не оказывают эмбриотоксического и тератогенного действия. У САП-1 и САП-2 не выявленно выраженных кумулятивных свойств для белых мышей и цыплят.

7. САП-1 и САП-2 в дозе 1/5 ЛД5о вызывают непродолжительное угнетение функции печени, восстанавливающееся через 6 ч после введения препарата. Меньшие дозы препаратов (1/10 ЛД50) не вызывают функциональных изменений в печени.

8. Исследования хронической токсичности показали, что САП-1 и САП-2 не вызывают нарушений обмена веществ, гемопоэза и лейкопоэза у белых мышей и цыплят.

9. Препараты САП-1 и САП-2 не оказывают побочного воздействия на кроветворение и не стимулируют неспецифические факторы иммунитета.

10. Двукратная дача САП-1 и САП-2 с кормом в дозе 60 мг/кг массы тела обеспечивает терапевтическую концентрацию препарата в организме птицы в течение суток.

11. Прапараты САП-1 и САП-2 выводятся из организма цыплят через 120 часов после последнего введения препаратов.

12. Наибольшая эффективность препаратов САП-1 и САП-2 достигается при применении в дозе 60 мг/кг массы тела в течение 6, ДС-1100 и шодмон - 300 мг/кг массы тела в течение 5 дней.

13. В производственных условиях применение препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100 и шодмон в комплексе с зоогигиеническими и ветеринарно-санитарными мероприятиями профилактирует заболеваемость птицы бактериальными болезнями, снижает заболеваемость и смертность.

14. Применение ЭМ ДМ при инкубации яиц и в выводном шкафу обеспечивает снижение количества колоний микроорганизмов в 1,6 - 3,2 раза в сравнению с формалином.

15. Коэффициент эффективности иммунизации ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц совместно с иммуномодуляторам тимогар в дозах 20 и 30 мкг/кг массы тела составлял 98%.

16. Применение тимогара на 4 птицефабриках Таджикистана дало положительный результат. Смертность от колибактериоза и стафилококкоза цыплят иммунизированных вакциной с тимогаром составила - 0,1 - 0,2%, вакциной - 0,5 - 0,6%, невакцинированных 9,1%.

17. Разработана нормативная документация.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики (перорально 1 раз в сутки в течение 10 дней в дозе 30 мг/кг массы тела) и терапии (перорально 2 раза в сутки в течение 5 - 6 дней в дозе 60 мг/кг массы тела) бактериальных болезней птиц рекомендуется применять препараты САП-1 и САП-2.

2. Для профилактики (перорально 1 раз в сутки в течение 10 дней в дозе 150 мг/кг массы тела) и терапии (перорально 2 раза в сутки в течение 5 дней в дозе 300 мг/кг массы тела) бактериальных болезней птиц рекомендуется применять препараты ДС-1100 и шодмон.

3. Для профилактики бактериальных болезней птиц рекомендуется аэрозольное применение ЭМ ДМ при инкубации яиц и в выводном шкафу.

4. Для повышения эффективности ассоциированной вакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц рекомендуется сочетанное ее применение с иммуномодулятором тимогар.

Заключение

Птицеводческие хозяйства несут значительные убытки в связи с широким распространением бактериальных болезней (и их ассоциаций). Однако в Таджикистане исследования этиологии этих заболеваний не проводились, что в значительной степени затрудняет их терапию и профилактику. Поэтому в специализированных хозяйствах РТ нами проведены ретроспективный анализ выделения условно-патогенной микрофлоры, микробиологический мониторинг, изучены этиологические факторы бактериальных болезней (и их ассоциаций) птиц.

Установлено, что наиболее распространенными в Таджикистане бактериальными заболеваниями являются стафилококкоз, колибактериоз, сальмонеллез и пастереллез, протекающие как отдельно, так и в различных ассоциациях.

В последние годы ТаджНИВИ ТАСХН также разработан ряд антимикробных препаратов для применения в ветеринарии: САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон, проявляющие антимикробную активность в отношении возбудителей наиболее распространенных в РТ заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц. Эти препараты пока не нашли широкого применения в промышленном птицеводстве из-за отсутствия исследований их токсикологических и фармакологических свойств, необходимости экспериментальной проверки их эффективности в отношении этиологически значимых возбудителей болезней и их ассоциаций, определения оптимальных доз, разработки схем применения и производственной проверки терапевтической и профилактической эффективности.

Для дезинфекции в инкубаторе было испытано ЭМ ДМ, проявляющее широкий спектр антимикробной активности.

Для профилактики колибактериоза и стафилококкоза птиц ТаджНИВИ ТАСХН разработана ассоциированная формолвакцина, которую для повышения эффективности использовали совместно с иммуностимулятором тимогаром.

Эти задачи были решены при достижении цели нашего исследования - изучить распространение бактериальных болезней (и их ассоциаций) птиц в условиях Таджикистана и разработать систему рационального применения химиотерапевтических и биологических препаратов для профилактики и терапии этих заболеваний.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Настоящая работа выполнена в 1994 - 2004 гг. на базе ЛИБП ТаджНИВИ ТАСХН.

В проведении ряда комплексных исследований принимали участие И. Т. Сатторов, М. А. Куканиев, Д. Р. Халифаев, Т. Н. Мальцева, А. Г. Асельдеров, Г. М. Бобиев, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и сотрудничество.

Научно-производственные опыты, апробация и производственная проверка полученных результатов проведены на 9 птицефабриках (яичного направления) РТ, на которых производство носит сезонный характер:

1) АООТ «Бустон» Матчинского р-на Согдийской обл.;

2) АООТ «Мургпарварии навруз» Вахдатского р-на;

3) ЗАО «Паррандапарвари» Шахринауского р-на;

4) АООТ «Паррандапарвар-2» р-на Джабора Расулова Согдийской обл.;

5) ООО «Паррандапарварии Душанбе» р-на Рудаки;

6) АООТ «Паррандапарварии Зафаробод» Зафарабадского р-на Согдийской обл.;

7) АООТ «Паррандапарварии Худжанд» р-на Бободжона Гафурова Согдийской обл.;

8) АООТ «Симург» Истаравшанского р-на Согдийской обл.;

9) АООТ «Сайхун» Канибадамского р-на Согдийской обл. Работу провели на 89130 цыплятах и курах.

В опытах использовали следующие препараты: 1. САП-1 и САП-2. Действующие вещества препаратов синтезированны лабораторией гетероциклических соединений Института химии им. В. И. Никитина АН РТ совместно с ЛИБП ТаджНИВИ ТАСХН.

Лекарственные средства изготовлении производственным отделом ТаджНИВИ.

САП-1 - смесь 2-бром-7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидина с сахарозой (1:1) - однородный мелкий порошок белого цвета (Инструкция по изготовлению и контролю препарата САП-1, утв ГУВ МСХ РТ 24.09.2005 г.).

САП-2 - смесь 8(7-метил-5-оксо-5Н-1,3,4-тиадиазоло[3,2-а]пиримидин-2-ил)-изотиурон гидробромида с сахарозой (1:1) -кристаллический порошок белого цвета со слабым специфическим запахом (Инструкция по изготовлению и контролю препарата САП-2, утв. ГУВ МСХ РТ 24.09.2005 г.).

2. ДС-1100 и шодмон, изготовленные производственным отделом ТаджНИВИ.

ДС-1100 - комбинация антибиотиков, сульфаниламидного препарата, растительных и минеральных наполнителей (Инструкция по изготовлению и контролю препарата ДС-1100, утв. ГУВ МСХ РТ 24.09.2005 г.).

Шодмон - комплексный препарат, в состав которого входят антибиотик, нитрофурановый и сульфаниламидный препараты, анестетик, витамин, адсорбирующие вещества (Инструкция по изготовлению и контролю препарата шодмон, утв. ГУВ МСХ РТ 25.11.2004 г.).

3. Эфирное масло душицы мелкоцветковой, полученное методом перегонки с водяным паром (в соответствии с Опытно-производственным регламентом) Научно-экспериментально-производственным фармацевтическим центром при Министерстве здравоохранения РТ.

Эфирное масло душицы мелкоцветковой имеет желто-коричневый цвет, сильно смолистый освежающе-травянистый запах, становится приятным на вкус только при сильном разведении.

4. Ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц, изготовленная производственным отделом

ТаджНИВИ ТАСХН, и иммуностимулятор тимогар производства ООО «Занд».

Ассоциированная формолвакцина против колибактериоза и стафилококкоза птиц изготовлена из трех серотипов (02, 078, 0115) Е. coli и одного штамма (№3) St. aureus в соответствии с Инструкцией по изготовлению и контролю ассоциированной формолвакцины против колибактериоза и стафилококкоза птиц (утв. ГУВ МСХ РТ 30.01.1999 г.).

5. Тимогар - 0,01%-ный водный раствор синтетического иммуноактивного пептида, обладающего свойствами (активностью) тимусного гормона тимозина aj. Препарат представляет собой прозрачный, бесцветный раствор без запаха; совместим с лекарственными средствами различных фармакологических групп. Тимогар произведен в соответствии с Инструкцией по изготовлению и контролю препарата тимогар (утв. ГУВ МСХ РТ 6.07.1999 г.).

2.1. Диагностика бактериальных болезней птиц

Диагноз на бактериальные болезни ставили на основании анализа эпизоотологических данных, с учетом клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и результатов бактериологического исследования патологического материала от клинически больных, павших и вынужденно убитых птиц.

При анализе эпизоотологических данных учитывали факторы, влияющие на резистентность организма (условия содержания, полноценность кормления, породу, физиологическую активность кур). Выясняли источники возбудителя инфекции, время возникновения заболевания, благополучие хозяйств по другим инфекциям. Учитывали также характер проявления болезни, возможность ее бессимптомного течения.

2.2. Бактериологические исследования

Бактериологическую диагностику проводили в ЛИБП ТаджНИВИ.

С 1994 по 2004 гг. бактериологически исследованы 1250 проб воздуха инкубационных и выводных шкафов, птичников, 2046 проб из объектов внешней среды, 1050 яиц, 2384 павших и вынужденно убитых цыплят 1 - 30 дней, 1813 - 31 - 60, 797 - 61 - 150 и 569 птиц старше 151 дня.

Бактериологическую диагностику стафилококкоза осуществляли в соответствии с "Рекомендациями по диагностике, профилактике и мерам борьбы со стафилококкозом птиц" [154]; колибактериоза - "Наставлением по бактериологической диагностике колибактериоза сельскохозяйственных, промысловых животных и птиц" [117]; сальмонеллеза - методическими указаниями "Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды" [92] и "Рекомендациями по оздоровлению птицеводческих хозяйств от сальмонелла тифимуриум инфекции" [156]; пастереллеза - "Рекомендациями по диагностике, профилактике и мерам борьбы с пастереллезом птиц" [155].

Патологический материал для исследования - трупы, смывы с тушек, паренхиматозные органы, трубчатая кость. Материалом для прижизненной диагностики служили смывы с яичной скорлупы, мазки из трахеи, помет.

Бактериологическая диагностика включала в себя: а) микроскопию мазков крови или мазков-отпечатков внутренних органов, б) выделение культуры из патологического материала путем высева на элективные питательные среды или биологическим методом путем заражения лабораторных животных и птицы, в) идентификацию культуры, г) серологическую типизацию культур кишечной палочки и сальмонелл.

2.3. Микробиологический контроль объектов внешней среды

Для проведения микробиологического мониторинга (изучение динамики накопления условно-патогенной и патогенной микрофлоры в воздухе выводных шкафов инкубатория) вывода цыплят чашки Петри со средами (желточно-солевой агар, агар Эндо, 5% кровяной агар, агар Сабуро) устанавливали в выводные шкафы на трех уровнях (верх, середина, низ) с экспозицией 1 мин в момент достижения вывода 10 - 15%, 30 - 40%, 60%, 80% - конец вывода. В момент экспонирования чашек вентиляцию в выводных шкафах отключали, двери шкафов плотно закрывали. Чашки Петри с пробами помещали в термостат на 24 ч при температуре 37°С (ЖСА, агар Эндо, 5% КА) или 48 ч при температуре 22°С (агар Сабуро).

Микробиологический контроль воздуха инкубатория и птичников проводили по этой же методике.

Приготовление питательных сред

ЖСА (Г. Н. Чистович, 1982) - для выделения кокковой микрофлоры. В расплавленный и остуженный до 60°С мясопептонный агар (МПА) (рН 7,2 - 7,4) с 10% хлористого натрия прибавляли 1 - 20% желточной взвеси. Желток извлекали из яйца, взбалтывали с 200 мл физиологического раствора, смешивали тщательно агар с желточной взвесью, разливали в чашки Петри.

Агар Эндо - для выделения энтеробактерий. Готовили из порошка фабричного производства в день использования.

5% КА - для выявления гемолитических форм бактерий и подсчета общего количества микроорганизмов. МПА (рН 7,2 - 7,4) смешивали при температуре 50°С с 5 - 10% свежей дефибринированной крови петуха или барана. Разливали в чашки Петри, подсушивали в термостате 20 - 30 мин.

Агар Сабуро - для выделения плесневых микозов. Основа среды -дрожжевая вода. На 1 л воды брали 80 г прессованных пекарских дрожжей, кипятили 15 мин, фильтровали, стерилизовали при 1 атм. в течение 20 мин. К 100 мл стерильной дрожжевой воды добавляли 1% пептона, 2% агара, нагревали до растворения агара, затем добавляли 4% глюкозы, стерилизовали при 0,5 атм. в течение 20 мин, разливали в чашки Петри.

Объекты микробиологического контроля - воздух инкубационных и выводных шкафов, птичников.

Отбор проб смывов осуществляли стерильными ватными или ватно-марлевыми тампонами. Их монтировали на деревянной палочке или проволоке, пропущенной через пробку, помещали в пробирку и стерилизовали 30 мин при температуре 120°С. Затем в каждую пробирку наливали 2 мл предварительной среды обогащения - забуференной пептонной воды (рН 7,0). Непосредственно перед взятием смыва тампон увлажняли, наклоняя пробирку, излишек влаги отжимали о стенку пробирки.

Смывы брали с площади не менее 100 см2, если нет специальных указаний для данного объекта.

При взятии смывов с яичной скорлупы один тампон использовали для исследования 10 яиц [92].

Объекты бактериологических исследований с помощью смывов -оборудование (клетки, пометные листы, поилки, кормушки).

2.4. Определение чувствительность выделенных культур к противобактериальньш препаратам

Чувствительность выделенных культур к антибиотикам (левомицетину, окситетрациклину гидрохлориду, олеандомицину, стрептомицину) и другим антимикробным препаратам (сульфадимезину, фуразолидону, САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмону и ЭМ ДМ) определяли методом серийных разведений в плотной среде. Наличие роста бактерий свидетельствовало об их резистентности к данному препарату, а отсутствие роста являлось показателем высокой чувствительности бактерий к лекарственному средству [106].

2.5. Изучение противомикробной активности САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон

Антимикробную активность препаратов САП-1, САП-2, ДС-1100, шодмон изучали методом серийных разведений препаратов в мясопептонном бульоне (МПБ). Из основного раствора (САП-1, САП-2: 5 мг препарата на 100 мл стерильной дистиллированной воды) или суспензии (ДС-1100, шодмон: 100 мг порошка на 100 мл стерильной дистиллированной воды) готовили последовательные двукратные разведения в МПБ в объеме 2 мл. В приготовленные разведения вносили суспензию тест-культуры в изотоническом растворе натрия хлорида в количестве 2x102 м.к. на 1 мл среды. Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 - 48 ч. По истечении срока инкубации учитывали результат. Минимальной бактериостатической концентрацией (МБсК) считали концентрацию, которая вызывала задержку роста культуры, минимальной бактерицидной (МБцК) (определили при пересеве на МПА) - гибель микроорганизмов (отсутствие роста). Параллельно ставили контроли на МПБ и МПА.

В работе использовали эпизоотические (3113) и музейные (37) штаммы тест-культур: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Salmonella enteritidis, Salmonella pullorum, Pasteurella multocida, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae.

2.6. Исследование токсикологических свойств САП-1 и САП-2 2.6.1. Определение острой токсичности

Острая токсичность препаратов САП-1 и САП-2 изучена в опытах на белых мышах (с массой тела 18 - 20 г) и 60-дневных цыплятах (с массой тела 545 - 550 г), из которых по принципу парных аналогов сформировали по шесть групп (п=10) для каждого препарата.

Перед началом исследований за лабораторными животными и цыплятами, которых содержали в обычных условиях, наблюдали в течение 14 дней. Последний раз корм давали вечером накануне опыта, прием воды не ограничивали.

Белым мышам препараты САП-1 и САП-2 вводили однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл в дозах 250 мг/кг массы тела (1-я группа), 500 (2-я), 750 (3-я), 1000 (4-я), 1250 мг/кг массы тела (5-я); цыплятам - пероралыю в объеме 2 мл в тех же дозах. Контрольным животным и цыплятам в соответствующих объемах и дозах вводили сахарозу.

Через 6 ч после введения препарата производили очередную дачу корма животным и цыплятам, которых в дальнейшем переводили на обычный режим.

Определяли максимально переносимую дозу (МПД), при которой гибели животных и цыплят не наблюдается, и дозу, вызывающую гибель всех животных и цыплят, бывших в опыте (ЛДюо)- Расчет ЛД50 производили при помощи математической обработки полученных результатов по методу Г. Н. Першина.

Среднюю смертельную дозу рассчитали по формуле: 1[{а + Ь)-(т-п)]

Хср 200 где (а+b) - сумма смежных доз; ш - п) - разность процента смертности от двух последующих доз.

За лабораторными животными и цыплятами наблюдали в течение 10 дней, учитывая общее состояние, внешний вид, поведенческие реакции, прием пищи и воды, ритм и частоту сердцебиения, количество дыхательных движений.

2.6.2. Изучение хронической токсичности

Хроническая токсичность препаратов САП-1 и САП-2 изучена в опытах по скармливанию каждого препарата в течение 23 суток трем группам (п=10) белых мышей (с массой тела 18 - 20 г) и трем группам (п=10) 120-дневных цыплят (с массой тела 1,2 кг, яичное направление) в дозах 60 мг/кг массы тела (ориентировочно-терапевтическая), 120 и 180 мг/кг массы тела. Животные и птица контрольных групп препарат не получали.

Наблюдение за клиническим состоянием белых мышей и цыплят вели на протяжении 25 суток.

2.6.3. Методы морфологического, биохимического исследования крови, определения показателей естественной резистентности

Подсчет количества эритроцитов крови проводили по общепринятой методике, используя счетную камеру с сеткой Горяева. Кровь разводили 35%-ным раствором хлористого натрия в пропорции 1:200. Для этого в меланжер набирали кровь до отметки 0,5 и раствор хлористого натрия до отметки 101. После заполнения счетной камеры разведенной кровью из меланжера подсчитывали количество эритроцитов в пяти больших квадратах. Затем число клеток одного большого квадрата умножали на 50000 (так как разведение было 1:200) и получали число эритроцитов в 1 мм3 крови (И. А. Болотников, Ю. В.Соловьев, 1980).

Подсчет лейкоцитов проводили по методике А. А. Кудрявцева и J1.

А. Кудрявцевой (1974). В стеклянные пробирки объемом 5 мл, в которые предварительно опускали по стеклянной бусинке, наливали по 3,9 мл жидкости для разведения крови. С помощью пипетки из гемометра Сали на дно пробирки вносили 20 мм крови и промывали пипетку несколько раз раствором хлористого натрия (разведение 1:200). Затем пробирки закрывали пробками и содержимое перемешивали. Каплю содержимого пробирки переносили в счетную камеру с сеткой Горяева и с помощью микроскопа подсчитывали количество лейкоцитов в 400 малых (25 больших) квадратах. Расчет производили по формуле: vn-400-y л —-,

400 где Х- количество лейкоцитов в 1 мм3; п - число клеток в 400 малых квадратах; у - степень разведения крови (1:200).

В качестве разбавителя использовали разбавитель, приготовленный на основе фосфатного буфера (Natt, Herrick, 1932).

Содержание гемоглобина определяли общепринятым методом с помощью гемометра Сали. В пробирку до деления с цифрой 10 наливали 0,1 N раствора соляной кислоты, затем с помощью пипетки опускали кровь в кислоту. Верхний слой жидкости оставался прозрачным, так как кровь оседала на дно пробирки. Его 2-3 раза набирали в капилляр, каждый раз осторожно выдувая обратно в пробирку. Кровь в пробирке тщательно размешивали. Спустя 15 мин добавляли дистиллированную воду до тех пор, пока раствор гематина по цвету не становился одинаковым со стандартом в гемометре. Цифра, показывавшая уровень жидкости, указывала на содержание гемоглобина в процентах. Содержание в % переводили в г/литр с помощью таблицы.

Общий белок в сыворотке крови определяли рефрактометрическим методом Рейса. Белки сыворотки крови обладают оптической активностью, поэтому степень преломления луча света пропорциональна концентрации белка в пробе.

Предварительно проверяли установку рефрактометра на дистиллированной воде. Устанавливали освещение и четкость шкалы, видимой в окуляр прибора. На нижнюю призму рефрактометра наносили 1 - 2 капли сыворотки крови и камеру закрывали. Вращая камеру с помощью специальной ручки, добивались такого положения светотени, чтобы она проходила через точку пересечения визирных линий. По шкале проводили отсчет преломления. Процентное содержание в пробе общего белка находили по таблице. Все определения проводили при температуре 18-20°С.

Уровень естественной резистентности исследовали согласно «Рекомендации по определению показателей естественной резистентности птиц» [157].

2.6.4. Изучение кумулятивных свойств

Исследование кумулятивных свойств препаратов САП-1 и САП-2 проводили на 30 белых мышах массой 18 - 20 г и 10 цыплятах 60-дневного возраста массой 545 - 550 г (для каждого препарата) по методу Лима [165]. Схема введения препаратов в течение 28 дней представлена в таблице 1.