Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Токсический синдром при инфекционном воспалении. Патогенез, обоснование методов коррекции

РГ6 о

2 3 МЛР ад*

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ ПОСЛЕДИПЛОМНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

АБИДОН МУСА ТАЖУДИНОВИЧ

ТОКСИЧЕСКИЙ СИНДРОМ ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ БОСПАЛЕНИИ. ПАТОГЕНЕЗ, ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДОВ КОРРЕКЦИИ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург -1994 г.

На правах рукописи

Работа выполнена в Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова

Научные консультанты:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Доктор медицинских наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор действительный член Международной академии • информатизации, заслуженный деятель науки РФ Н.И.Кочегыгов

Ведущая организация: Российская медицинская академия

последипломного образования

Защита диссертации состоится 15 апреля 1994 г. в 13 »асов на заседании специализированного совета по защите докторских диссертаций (Д 074.16.02) в СПб медицинской академии последипломного образования (193015, Санкт-Петербург, Салтыкова-Щедрина," 41)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан "—" марта 1994 г.

С.Г.Пак В.И.Сергиенко

Н.Н.Петрищев В.Г.Кубась

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук.

А.И.Тюкавин

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Патогенез токсического синдрома, возникающего на фоне генерализации инфекции, изучен недостаточно, что затрудняет разработку новых методов фармакотерапии для купирования инфекционного процесса.

По современным представлениям токсический синдром представляет собой патологический процесс сложного генеза, возникающий в результате массивного поступления бактериального токсина из очага в кровоток и взаимодействия его с клетками и различными системами организма. При этом происходят глубокие структурные и функциональные нарушения клеток-мишеней и одновременно возникают расстройства кровообращения в виде дистонии сосудов микроциркуляторного руста, агрегации в них эритроцитов (сладж-синдром); возчикновение ДВС-синдрома вызывает отек, кровоизлияние, вторичные дистрофические н некротические изменения тканей с соответствующими клиническими проявлениями.

Чаще всего возбудителями токсического синдрома являются представители граммотрицательвой микробной флоры (А. К.Агеев, 1980; А.А.Балаян, 1984; W.Altemaer, 1978; АискепШаИсг, 1977), для которых первичными клеточными элементами служат клетки крови и прежде всего макрофаги (В.И.Пигаревскяй, 1978; В.ВЛецкий, 1980; В.И.Покровский, 1983; Б.С.Нагоев и др. 1988, 1989; А.Н.Маянский, 1989; К1еЬапо(Г, 1978; ВавдаШЦ, 1982). Активация последних (или гиперактивация) микробным токсином приводит к высвобождению простагландинов (ПГ) и их метаболитов, вызывающих сокращение сосудов и бронхиол, потенцирующих агрегацию тромбоцитов; интерлейкина-1 (ИН-1), способного вызывать пролиферацию клеток, лихорадку, синтез ПГ и т.д. и фактора некроза опухолей (ФНО). Последний, являясь ключевым фактором в воспалительной реакции и иммунологическом ответе, сехргткруется на ранних этапах инфекционного процесса, стимулируя синтез других пептидов, которые играют существенную роль в патогенезе токсических и септических состояний и нередко определяют исход патологического процесса (О.СИапеЦа, 1984; М.ВеШгака, 1987; С.Ш]<1, 1988; М.Ма1ко\¥5ку, 1988; и др). Таким образом, синтезированные в небольших количествах ФНО оказывают защитный адаптационный эффект.

В эксперименте доказано, что появление фактора в больших количествах в крови существенно меняет клиническую картину заболевания. Поэтому не удивительно, что удаление ФНО из циркулирующей крови с помощью моноклональных антител .способствует значительному снижению симптомов

интоксикации. Применение антиохсидактов и ингибиторов ПГ з этих случаях было значительно менее эффективным (О.Мгнс!, !988).

В литературе накоплен материал о нарушении функции клеток крови при введении эндотоксина сальмонелл и шигелл Флекснера экспериментальным животным (Б.С.Нагоеп. 1989). Однако, за исключением единичных исследований, авторы не предполагают, что именно нейтрофильные гранулоциты и макрофаги могут явиться основными источниками биологически активных соединений, определяющих развитие токсического синдрома на ранних стадиях заболевания.

Таким образом, изучение защитных систем крови имеет большое значение и напрямую связано с перспективами патогенетического лечения инфекционных заболеваний. В связи с этим возникает необходимость изучения механизма регуляции актипности клеток крови при интоксикациях. Цитохимическое изучение лейкоцитов, являясь самым объективным методом исследования функции клеток, позволяет судить об общей реактивности организма (B.Nagoev, М.БЬиЫсЬ, 1989).

Исследование этих систем при токсических и септических состояниях усугубляется отсутствием лекарственных препаратов, способных прямо модулировать функциональную активность гранулоцитов и макрофагов.

Все вышеизложенное определило актуальность проблемы, цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования. Выявить роль клеток крови и их компонентой з формировании патогенетических механизмов токсического синдрома.

Задачи исследования.

1. Установить патогенетическое значение изменений активности макрофагов и нейгрофгиьных гранулоцитов при токсических и септических состояниях в клинике и в эксперименте.

2. Выявить роль фактора некроза опухолей и других продуктов активации макрофагов как пусковых агентов синдрома интоксикации при экспериментальной эндотоксинемии.

3. Оценить влияние эндотоксинов граммотрйцательных бактерий на метаболическую активность и эластазно-ингкбиторную систему нейтрофильных гранулоцитов. '

4. Обосновать необходимость применения лекарственных препаратов, дифференцированно изменяющих метаболическую активность и функциональное состояние гранулоцитов и макрофагов при инфекционной патологии.

5. Дохазитъ возможность моделирования септических состояний посредством применение лекарственных средств, рейдирующих метаболическую акгивность клеток крови.

6. Осуществить доклинические испытания новых лекарственных средств, меняющих активность лейкоцитов, и провести апробацию наиболее активного лекарственного препарата на животных с острыми инфекционными заболеваниями.

7. На основе полученных данных предложить схему возникновения основных клинических симптомов интоксикации и диарейного синдрома при острых кишечных инфекциях (ОКИ):

Научная новизна. Установлено, что под действием токсинов граммотрицательных бактерий в ранних этапах развития патологического процесса происходит подавление функциональной и метаболической активности нейтрофнльных гранулоцитов, а активация макрофагов сопровождается высвобождением ФИО, интерлейкина -I, окислов азота и других биологически активных соединений, определяющих развитие токсического синдрома.

Б эксперименте доказано, что под действием новых лекарственных препаратов происходит временное подавление активности макрофагов, восстаногление компонентов микробицидной системы нейгрофильных гранулоцитов, что клинически сопровождается купированием основных симптомов интоксикации.

С использованием перигонаальных макрофагов, как интактных, так и рекрутированных, в опытах in vivo и in vitro показано изменение скорости синтеза макромолекул (ДНК, РНК, белка) под действием лекарственных препаратов, что свидетельствует о временном снижении их биологической активности. Из испытанных средств для этих целей предложено использовать 5-амикофталгидрозид в дозах от 5 до 50 мг/кг массы тела.

На основании полученных данных разработана новая схема патогенеза токсического синдрома и диареи, ведущую роль в котором играют макрофаги и гранулоциты, а также предложен способ их коррекции.

Впервые открыты новые дозозависимое иммуномодулирующее и аитиоксидзнтное свойства 5-аминофталгидрозида и проведено полное доклиническое испытание препарата. Доказано, что 5-аминофталгидрознд в дезах от 150 мг и выше временно подавляет активность лейкоцитов, создавая благоприятные условия для генерализации инфекционного процесса в эксперименте. Разработанные на этой основе экспериментальные модели септических состояний позволяют исследовать деятельность клеток крови, органов и систем при различных степенях тяжести генерализованного

инфекционного процесса, а также проводить предварительное испытание лекарственных препаратов.

Полученные фактические результаты о роли гранулоцитоз и макрофагов в развитии основных клинических симптомов интоксикации дополняют представление о взаимоотношении микро- и макроорганизма при токсических и септических состояниях.

Установлено увеличение нитросоединений и их маркеров цГМФ в слизистой оболочке тонкой кишки экспериментальных животных, что, несомненно, играет роль в патогенезе заболевания.

Применение этой группы лекарственных средств с бифункциональной активностью открывает новые возможности для воздействия на патологический процесс на ранних стадиях его развития.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При экспериментальной эндотоксинемии установлено подавление микробицндной системы нейтрофильных гранулоцитоз в зависимости от дозы н вида токсина, что потенцирует течение токсического синдрома.

2. Установлено, что ведущее значение в возникновении синдрома интоксикации принадлежит соединениям, зырабатываемым активированными макрофагами на ранних стадиях инфекционного процесса - фактору некроза опухолей, нитросоединениям и др.

В условиях эксперимента доказано, что массированный выброс ФИО и нитросоединений имеет место ка ранних стадиях патологи веского процесса ч предшествует по времени появлению тохсического сивдрома.

3. Временное подавление активности макрофагов посредством введения специфических лекарственных средств приводит к снижении содержания этих соединений и предотвращает развитие симптомов интоксиха1хии.

4. Применение средств, подавляющих активность макрофагов, торможения хемотаксиса, янгибирозания цГМФ-синтетазной реакции и восстановления хислородзависимой микробицидной системы под' действием нового лекарственного препарата приводит к купированию симптомов интоксикация и диареи.

5. Выявленный нами эффект - временное подавление активности лейкоцитоз большими дозами лекарственных средств - был использован для создания адекватной модели сепсиса.

6. Проведенные доклинические испытания нового лекарственного средства доказали перспективность использования подобных соединений в клинической практике.

Практическая значимость. Проведена разработка и полное доклиническое испытание нового лекарственного препарата из группы фталгцдрозкзов

согласно требованиям фармкомитета. Предварительное испытание препарата на животных, »оказало его высокую эффективность в плане купирования симптомов интоксикации и диареи, вызванными бактериями как граммположительными, так и граммотрицательными. Получено разрешение Веткомитета РФ на проведение широких испытаний (протокол N3 от 2.07.93 г.). Налажено полупромышленное производство препарата.

С использованием специфического влияния препарата на гранулоциты и макрофаги разработаны экспериментальные модели сепсиса.

Исследования микробицндной системы нейтрофильных гранулоцитов и активности макрофагов на предложенных моделях можно использовать как тесг для диагностики и прогноза токсических и септических состояний.

Внедрение результатов. Применение ингибитора биосинтеза ПГ-индометацина внедрено в практику лечения больных сальмонеллезом в клиниках и больницах г.Москвы и различных регионах страны. Моделирование септических состояний предложенным способом используется в экспериментальных лабораториях ММА им.И.М.Сеченова. Полученные научные результаты используются в учебном процессе ММА им. И.М.Сеченова. Аминофталгидрозид широко используется как антитоксическое антидиарейное средство во многих совхозах РФ.

Апробация диссертации.

Результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на семинарах и конференциях ММА им.И.М.Сеченова, медицинском факультете КБГУ, в фармацевтическом концерне "С1Ьа Gagi" (Швейцария), а также на: Всероссийском съезде инфекционистов (Ташкент, 1985 г.), Всесоюзном семинаре "Колонизационная резистентность, химиотерапевтические и антибактериальные препараты" (Москва, 1988 г.), Всесоюзном съезде инфекционистов (Москва-Смоленск, 1989 г.), Международной конференции (Латвия, 1989 г.). XV Всероссийской конференции (Краснодар, 1991 г.).

По теме диссертации опубликованы 38 статей, из них поданы 3 заявки на изобретение в НИГП:

1. Средство для купирования эндотоксинемии р/н 4487832/14 от 28.09.88 г.

2. Способ моделирования граммположительного сепсиса р/н 93009395/14 от 20.02.90 г.

3. Способ моделирования граммотрицательнош сепсиса р/н 93009421/14 ог 20.02.90 г.

Новое лекарственное средство запатентовано в Швейцарии и странах „ Европейского Сообщества N 530/93-2 и N 5331/93-3.

Основные положения диссертации обсуждены на Всесоюзных, республиканских съездах и конференциях, международных симпозиумах, в центральных журналах. Диссертация апробирована на совместном заседании в лаборатории патохимии обмена веществ ММА им И.М.Сеченова.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа включает в себя экспериментальную и клиничесхую части.

Эксперименты проводились на мышах, крысах, кроликах породы "шиншилла" и "калифорнийская". Преклинические испытания аминофталгидрозида проводили на поросятах-сосунках, молодых поросятах и новорожденных телятах (см.табл.1)

Габчици 1

РАЗДЕЛ РАБОТЫ ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ

породы кроликов Mini ДВА: 57 крысы "Внстар" племекн. телята поросята сосунки больные е ски

иинеилла К1ЛИфОрНМЯСК1Я

1. Роль иакрсфагсв к патогенезе токсического синдрома. 35

2. •унхцисжальная метаболическая активность гранулоцитов при эндотоксинами ях. 57 127

3. Регуляция метаболической активности клеток кропи. 32 57 10 {доноры)

4. Моделирование сепсиса. 132 U2 60

5. Прииенение лекарственны! препаратов для купирования интоксикации. <9 «6 60 1В 123

ИТОГО: 305 1(2 57 60 *6 60 И 260

Клинические особенности наблюдавшихся больных (250 человек), их распределение по полу, возрасту, стадии патологического процесс!, типу течения заболевания и т.д. приводятся ниже в результатах исследований.

Традиционные методы исследования включали следующее:

1. Клиническое изучение статуса обследуемых больных.

2. Анализы крови и мочи, посевы испражнений на культуральные среды.

3. Цитохимические методы исследования включали:

а) Катионный белок, для определения которого применяли метод М.Г.Шубича (1974) в модификации Б.С.Нагоева (1980) с использованием красителя бромфенолового синего при pH 8,2.

б) Активность миелопероксидазы. Исследование осуществлялось по методу Sato (1925) в модификации Б.С.Нагоева (1982).

в) Активность НСТ-теста. Определение проводилось по методике Smart с соавт.(1975> в модификации Б.С.Нагоева (1983). При этом применяли 0,1%-ый раствор нитросинего тетразолия. Центрифугирование проводилось 15 минуг при 1000 об/мин.

4. Гематологические (традиционные).

5. Биохимические:

а) Определение эластазно-ингибиторной активности проводили по методу Е.Н.Коржихина (1975).

б) Определение ФНО проводили радиоиммунологическим методом через 1 час, 3 часа и спустя 24 часа от начала эксперимента. Контролем служили 10 лнтактных животных.

в) Из имеющихся в настоящее время методов определения циклических нуклеотидов мы выбрали наибслее распространенный радиоиммунологический надежный метод с использованием коммерческих наборов фирмы "Амершам".

7. Бактериологическое исследование органов и тканей, а также выделений с использованием различных культурных сред.

8. Морфологическое исследование органов и тканей экспериментальных животных.

Коррекция токсического синдрома в эксперименте и в клинике осуществлялась при помощи нестероидных лекарственных препаратов, противовоспалительных средств, солевых растворов, а также производных аминофталгидрозида, разработанного совместно с лабораторией' ММА им.И.М.Сеченова (завлабораторией - доктор медицинских наук А.П.Хохлов).

Экспериментальную кишечную инфекцию воспроизводили путем введения в желудок с помощью тонкого резинового зонда микробной взвеси Е Coli и Salmonella typhimurium. Эксперименты проводили на базе фармконцерна "Ciba Gagi" (Швейцария).

Для отработки дозы препарата животным предварительно вводили в желудок микробную взвесь Е. Coli (4x1 о"). Затем в момент появления клинических симптомов заболевания (16 часов после введения микробных тел) животным в разных дозировках внутримышечно однократно вводили раствор 5-аминофталгидразида.

Забор крови осуществляли через 30, 60, 180 минут и 24 часа эксперимента.

При моделировании септических состояний предварительно экспериментальным животным вводили 5-аминофталгидразид з дозе 100 мг/кг массы тела с целью кратковременного подавления активности лейкоцитоз. Спустя 20 минут кроликам одной группы водили PER OS, другим внутривенно микробную суточную хультуру сальмонелл и стафилококка в разных концентрациях. Цитохимические исследовгкиЕ кровн проводили до начала эксперимента, спустя 20 минут, 60 минут, 180 кинут, 24 часа, 72 часа и на 5-6 сутки эксперимента.

Математическая обработха цифрового материала произведена на ЭВМ ЕС 1020 с использованием основных законов и положений статистики в вычислительном центре ММА им. И.М.Сеченова.

РОЛЬ МАКРОФАГОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ТОКСИЧЕСКОГО СИНДРОМА, ВЫЗВАННОГО ВВЕДЕНИЕМ ЭНДОТОКСИНА. ЗНАЧЕНИЕ НАКОПЛЕНИЯ ФНО, ОКИСЛОВ АЗОТА И цШФ-СИНТЕТАЗНОЙ РЕАКЦИИ

По современным представлениям макрофаги являются езжкым звеном естественной резистентности и иммунорегуляцик организма. Такое положение макрофагов закреплено функционально и эволюциснно. Основной причиной, определяющей фундаментальную роль макрофагов з защитной системе организма, является их ключевое положение я тканевом гомеостазе. Занимая это положение, макрофаг первым из всех защитных элементов сталкивается с трансформированной клеткой, которая нарушает нормальные межклеточные связя.

Эндотохсины являются классическими стимуляторами функции макрофагов. 3 результате ответной реакции они могут выделить десятки биологически . ахтнвных соединений, существенно меняющих течение физиологических процессов (Beutler et al, 1987), из них до 1 % белка, выделенного макрофагами, составляет ФНО, который рассматривается хех центральный медиатор действия бактериального эндотоксина.

Прозеденные нами исследования показали за жну го роль ФНО в возникновении тохсического синдрома.

Кликичесхи, спустя 1 час после введения эндотоксина у животных повысилась температура в среднем на 1-2 градуса, доявилась адилзмиа, отказ от пищи и годы, тахикардия, тахипное и диарее. Хлитачесхиг симптомы кнтохсикещш а этой группе животных были максимально вырахеньг к трем часам эксперимента. При определении уровня ФНО у экспериментальных

животных было отмечено ею двукратное (14,2+ З.Зп/моль/л) увеличение го сравнению с нормальными физиологическими показателями (7,4+2,3 п/моль/л). К трем часам исследования отмечено максимальное повышение Уровне ФИО (29,9+8,0 п/моль/л) по сравнению с предыдущим сроком исследования. К концу эксперимента, параллельно с угасанием основных клинических симптомов инюксикации было выявлено снижение содержания ФНО в плазме крови оксперименгальных животных до 11,9+2,2 п/моль/л.

Таким образом, продемонстрировано, что динамические изменения уровней ФНО коррелировали с выраженностью клинических симптомов интохсихации.

Другим важнейшим биологически активным метаболитом, выделенным активированными макрофагами, является окись азота (N0).

Посредством секреции этого фактора макрофаги приобретают способность регулировать содержание цГМФ в тканях.

В последние годы появились данные, раскрывающие механизм высвобождения циклических нуклеотидов (ЦН) под влиянием макрофагов. Лктиваци& последних приводит к усилению образования окислов азота (N0, N02, образующихся путем окисления гуанидиновой группы, аргинина,

которые активируют цГМФ-синтетазу в тканях. Процесс является настолько специфичным, что в настоящее время о степени накопления в биожидкостях N0 судят по количеству цинической ГМФ.

В экспериментах продемонстрирована способность N0 вызывать снижение тонуса сосудов, вследствие чего метаболит получил название "фактора расслабления сосудов" (ФРС). В более поздних стадиях патологического процесса образования окислов азота, помимо макрофагов, осуществляется эпителиальными клетками и поврежденными энтероцитами. Потеря тонуса артериол под действием ФРС приводит к микроциркуляторным нарушениям с изменением проницаемости стекки сосудов, стазом, гипоксии и развитием ДБС-синдрома. Одновременное повреждение эндотелиальных клеток под действием ФНО в свою очередь, возможно, будет способствовать усилению * образования ФРС и гиперактивности макрофагального звена с формированием порочного круга.

Б то же время, несмотря . на очевидность участия ФРС в патогенезе ОКИ, работ в этом направлении в доступной нам литературе мы не обнаружили.

Маркером накопления N0 в тканях является цГМФ, роль которой в патогенезе токсического синдрома также изучена недостаточно.

При экспериментальной эндотоксинемии было выявлено повышена уровня цГМФ. в ткани кишечника (табл.2). Максимальные цифры

зарегистрированы к 3 часам эксперимента, при этом уровень внутриклеточного гормона в 5-7 раз превышал исходные значения. Специфичность изменения цГМФ-синтетазной реакции на введение токсина подгперждает тот факт, что уровень другого нухлеотида цАМФ после кратковременного подъема вернулась к исходному уровню, несмотря на нарастание выраженности клиннчесхих симптомов интоксикации.

Таблица 2

Динамика ЦН в слизистой тонкой хишки экспериментальных животных при введении эндотоксина Salmonella typhi.

И1учаоми1 И|Т|р*1А Эгвгты КССАв-АОВАНИЯ- Да введения эндотоксин« Лисдв гведения зндетсксянв

"«рв! 30 иин Чврв! 60 ИМИ 4eDel 180 нин

п

UAM«, n/MOAfc/Г 29 248.6*24,8 430,2*30,6 288,5^16.1 279,Ci2?,4

цГМ», П/ИОАЬ/Г 28 31,2* 5.6 М.1* 8.0 122,0-19,0 lS6,0tl6,5

цГМ/цАМ 0.13 0,20 0,43 0.56

в

Исходя из этого, можно предположить, что активация лейкоцитов под действием токсинов приводит х образованию охмслов азота, образующихся путем окисления гуанидиновой группы, аргинина, который активирует аГМФ-синтетазу з тканях. Отсюда можно сделать зывод, что наибольшую "ответственность" за диарейный синдром при интохсикапиях несет не столько цАМФ, как утверждают многие авторы, а скорее цГМФ, опосредствовано, через образование макрофагами нитросоединений.

Таким образом, удалось установить сходные динамические изменения уровней двук основных факторов продуцируемых активированными макрофагами (под действием эндотоксина) - ФНО и ФРС, которые коррелировали с выраженностью симптомов интоксикации.

Одновременно проведенные морфологические исследования. четко продемонстрировали, что появление макрофагов в стенках тонкого хишсчника имело место на ранних стадиях патологического процесса. Уже к концу первого часа после зведения эндотохсика отмечалось усиление миграции лейкоцитоз з тзсанк. При этом, наряду с нейтрофильными гракулошпами были зьгявлены скопления макрофагоз в очаге воспаления. К 3-м часам эксперимента количество макрофагов, обнаруженных в исследуемом материал?, заметно увеличилось. При этом к ! часу отмечалось значительное уменьшение глубины хрипт, соответственно, и высоты ворсинок. А ках следствие этих изменений - снижение толщины слизистой оболочки. В собственной пласптс

была выражена клеточная инфильтрация, состоящая из плазмоцитов, фибробластов и макрофагов. В эпителиальном пласте ворсинок отмечается наличие активированных лейкоцитоз. К 180 минутам эксперимента отмечались дальнейшие углубления морфологических изменений тонкого кишечника в виде снижения толщины оболочки, увеличения инфильтрата, расширения сосудов, отечности мембраны.

Таким образом, проведенные исследования продемонстрировали важную роль макрофагов в возникновении синдрома интоксикации.

ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ ПРИ ЭНДОТОКСИНЕМИЯХ В КЛИНИКЕ И В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Исследование цитохимических показателей нейтрофильных граиулоцитов при введении эндотоксина Salmonella typhi в дозе 0,5 мг/кг массы тела показало угнетение всех интралейкоцитарных компонентов микробицидной системы во все сроки исследования. При этом, если минимальные значения уровней катонных белков были выявлены спустя 30 минут от начала эксперимента, наиболее низкий пик активности миелопероксидазы и НСТ-тесга зафиксированы к 1 часу эксперимента (табл.3).

Таблица 3

. Цитохимические показатели нейтрофильных граиулоцитов при введении эндотоксина сальмонелл в дозе 0,5 мг/кг (в усл.ед.)

Враня исглвдования Количество животных, п KS ИЛ НСТ-твст

20 ник. 7 89,3*2,4 87,2-3,1 19,3-1,2

60 мин. 7 120,1*3,2 37,8*2,8 10,2*1,2

180 нин. 7 157,613,6 49,3t2,2 22,В-1,4

24 ч«с* 6 190,4*2,7 62,3*3,6 43,4*1,3

Контроль 7 210,¿3,2 162,3-3,8 49,*il,2

Одновременно выявлена . зависимость выраженности симптомов интоксикации от активности показателей интралейкоцитарных компонентов нейтрофильных граиулоцитов.

В группе животных, которым вводили липополисахарид ЗЬ.Боппе в дозе 0,5 мг/кг массы тела, была отмечена мягко выраженная по сравнению с сальмонеллезной эндотоксинемией интоксикация. При этом, если уровни КБ и активность НСТ-тсста были снижены в первые часы исследования, то к концу

эксперимента эти показателе не отличались от нормальных физиологических значений (Р>0,05), в то время как уровни МП оставались сниженными во все сроки исследования.

Внутривенное введение животным ЛПС Sh.Sonne в дозе 1 мг/кг веса тела приводило к развитию симптомов интоксикации спустя 10-15 м.ш. Причем, клинические симптомы были более выражены, чем в прсдытущих сериях опытов.

Исследования микробицидной системы гранулоцитов показало более глубокое угнетение показателей во все сроки исследования (табл.4).

Таблица 4

Цитохимические показатели гранулоцитов при внутривенном введении ЛПС Sh.Sonne в дозе ! мг/кг экспериментальным животным (в усл.ед.)

Время «следования Количество ЖИВОТНЫХ. Л КБ m ИСТ-тест

30 ими. 7 61,JÎ2,0 62,2*2.3 9.4*0,2.

fO Mit». 7 73,2*3,2 52,1*2,8 8,2-0,9

1вО мин. 7 120,3-2,6 41,4*2,5 5.7ll,2

24 часа 5 174,6^3,3 112,6*2,2 35,5ÎO,5

Контроль 7 210,4*3,2 162,ï4,S 42,4Ï1,2

Подавление микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов было прямо пропорционально тяжести клинических проявлений шигелезной интоксикации.

Таким образом, проведенные исследования показали, что интралейкоцнтарнне компоненты микробчцидной системы изменились параллельно тяжести и выраженности клинических симптомов интоксикации. Сравнительное изучение действия шигеллезного и сальмонеллезного эндотоксинов показало, что клинические симптомы интохсикации появились быстрее и были более выражены при введении эндотоксина Salmonella typhi. Таким образом, последнюю модель целесообразно использовать для изучения патогенеза токсического синдрома в эксперименте.

При исследовании микробицидной системы у больных с ОКИ полученные результаты в эксперименте частично были подтверждены.

Для проведения сравнительных характеристик токсического синдрома в эксперименте и в клинике мы решили провести цитохимические исследования неитрофильных гранулоцитов у больных острыми кишечными инфекциями. Под

наблюдением находилось 127 больных ОКИ средней степени тяжести. Более половины больных поступили в клинику в течение первых суток заболевания.

Выявлено снижение уровня миелоперсксидазы и катионных белков в остром периоде заболевания. В период угасания клинических симптомов происходило повышение уровня интралемкоцитарных компонентов. Исключение составили больные с более выраженными симптомами интохсикации. У них отмечено более медленное восстановление интралейкоцктарных компонентов микробицидиой системы гранулоцитов.

Таким образом, выявлены однонаправленные динамические изменения компонентов микробицидиой системы (КБ и МП) в клинике и в эксперименте, что дает основание рекомендовать перечисленные тесты для объективизации клинических симптомов интоксикации при ОКИ. Параллельное проведение определения активности НСТ-теста продемонстрировало существенное повышение показателя в период разгара заболевания. При динамическом наблюдении была выявлена зависимость активности НСТ-теста от типа

возбудителя. В период угасания клинических симптомов интоксикации происходило снижение активности НСТ-теста.

В зависимости от типа возбудителя активация микробицидиой системы нейтрофильных гранулоцитов может быть осуществлена либо по супероксидному пути, либо по эластазному. Оба компонента сильно реакционноспособнь; и могут повреждать эндотелии сосудов при чрезмерном их высвобождении.

Отсутствие данных литературы по данному вопросу побудило нас проследить степень участия этих систем в развитии токсического синдрома при экспериментальной эндотоксипемии.

Было выявлено, что введение эндотоксина Salmonella typhi в дозе 1 мг/кг массы приводило к достоверному увеличению уровня эластазы к 60 минутам эксперимента, в то время как ее ингибитор ai - антитрипсин имел обратную динамику. К трем часам эксперимента и в течение суток с увеличением активности ai-антитрипсина происходило достоверное снижение уровня эластазы в плазме крови по сравнению с первым сроком исследования.

Отсюда можно сделать вывод о том, что активация лейкоцитов при токсическом синдроме приводит к высвобождению реакционно способной эластазы и метаболитов кислорода, способствующих деструкции мембран и стимуляции ПОЛ.

.Проведенные исследования показали, что течение, соответственно, и исход токсического синдрома зависит не столько от дозы токсина (хотя и это важно), сколько от состояния и степени активности лейкоцитарно-макрофагальной системы. Важно подчеркнуть, что при токсическом синдроме,

вызванном граммотрицательными бактериями или их токсинами, активация микробицидной системы кейтрофильных гранулоцитсш осуществляется преимущественно по супероксидному пути.

РЕГУЛЯЦИЯ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК КРОВИ in vivo и in vitro

Полученные результаты о важной роли клетох крови в патогенезе токсического синдрома и диареи при ОКИ ставят вопрос о создании нового поколения лекарственных средств, ограничивающих гиперахтигацию x-títok крови при различных латолог-ческих состояниях. Особенность течения инфекционного процесса - быстрое развертывание и спад клинических симптомов интоксикации, необходимость сохранения иммунной защиты я активации- резистентности индивидуума требует создания принципиально новых лекарственных средств.

Используя пернтонеальные макрофаги в качестве экспериментальной модели, проводили скрининг различных лекарственных средств, изменяющих функциональную активность клетох.

Наиболее эффективным оказался 5-аминофталгидрозид. Реагент, тирохо используемый з медицине и биологии для хемилюминксцентных исследований. Для выяснения механизма действия препарата мы ксследоЕалм осьовкьге биохимические показатели, характеризующие функциональную ахтивность макрофагоз - скорость синтеза белка РНК ДНК, а также степень потребления кислорода клетками хрови. Последний похазатель особенно важен, так хак хорошо известно, что энергетические потребности перитонгальных макрофагов обеспечийаются гликолизом, и расход кислорода полностью обеспечивается активностью мембраносвязанных НАДФН-оксидазой.

С этой целью в качеств донора макрофагов использовал:* мышей ДВА/ 57 весом 18-20 г. Использовали 1 группы макрофагов - нерекругированные (вызванные внутрибрюшным введением физраствора) и рекрутированные (инициируемые 6% пептоном) (рис.1). Жизнеспособность клеток устанавливали применением трипанового синего. Во всех случаях она была более 23%.

0—-1-1-1-1-1-1-1-1- ^

0 25 50 75 100 125 150 175 200 -

Содержание аминофталгидрозида (мкг/мл) Рис. 1. Синтез белка резидентными макрофагами после инкубации in vitro с препаратом в течение 3-х часов.

Данные изучения скорости синтеза протеина как у резидентных, так и у пыггон-рекрутированных макрофагов после инкубации in vitro с различными количествами 5-аминофгалгодрозида представлены на рис.1. Можно заметить, что в обоих случаях имеет место торможение синтеза макромолекул при -концентрации аминофталгидрозида в пробах в интервале 25-125 мкг/мл. Необходимо отметит^ что несмотря на сходные результаты непараметрической статистики для обеих групп (резидентные и рекрутированные макрофага) т торможение синтеза белка более выражено при использовании резидентных макрофагов (до 89-90% в отдельных случаях).

Содержание аминофталгидрозида (мкг/мл) Рис. 2. Синтез РНК резидентными макрофагами после инкубации in vitro с препаратом в течение 3-х часов.

Схожую тенденцию наблюдали в эксперименте пэ изучению синтеза РНК (рис.2). Схорость включения метки в макромолекулах тормозится при содержании фталгидрозида в пробах от 25-125 мкг/мл хак для резидентных макрофагов, так sf для рекрутированных. В отдельных экспериментах степень утилизации 14С -уридина была снижена до 20-25% от уровня контрольной группы. Анализ результатов по включению ^Н-тмпдчил подтвердил выявленные закономерности. Как в случае использования резидентных п рехрутированных макрофагов этот процесс под злиянием аминофталгидрозида

также ингибиросался; отличие заключалось в том, что этот эффект выражен в более широком диапазоне.

Выраженное действие препарат оказывал также и на степень потребления кислорода клетками.

. При инкубации макрофагов (МФ) с различными концентрациями аминофталгидрозида выявили, что препарат влияет как на индуцированную ФМА, так и зимозаном респираторную активность клеток (рис.3). Выявлены следующие закономерности: кратковременная преинкубация МФ с аминофтслгидрозидом в количестве от 1 до 100 мкг/мл - аминофталгидрозид пе оказывал влияния на спонтанную респираторную активность; при увеличении концентрации препарата до 200 мкг/мл зарегистрирован рост потребления кислорода на респираторный взрыв, индуцированных ФМА (Р < 0,01) или зимозаном.

Результаты, полученные при введении аминофталгидрозида (50мг/кг) ех vivo позволили сделать важный вывод по поводу механизма действия препарата (рис.3, 4).

2—

1

о

3

2-

1—

0—1--------:---

ЛВС

Рис. 3, 4. Степень потребления кислорода клетками крови: А - контроль (п - 24); В - препарат, 50 мг/кг, 1 час после введения (п - 16); С - препарат, 50 мг/кг, 4 часа после введения (п - 12) Р 0,001

Если в контрольной группе, где животным вводили 2% раствор бикарбоната натриу, скорость потребления кислорода макрофагами существенно не отличалась от контрольных значений in vi tro, то после введения препарата отметили существенное снижение активности. Для МФ, выделенных через 1-4 часа после введения препарата, составляет 67,3% и 52,7% по отношению к контролю.

Таким образом, подводя итоги, можно утверждать, ".то 5-аминофталгидрозид ингибирует функциональную активность перитонвальных макрофагов через депрессию биосинтктических процессов. Время ингибироваиия (опыты ex vivo) 4 б часов, после чего наблюдЕет:я постепенная нормализация процесса.

Исследование супероксидобразующей функции лейкоцитов проводили на животных. Использовали животных с септическими ранами кожи и ыггактных животных. Результаты представлены в табл.5.

Таблица 5

Изменение супероксидобразующей функции нейтрофилов в крови крыс с ранами.

Объект исследования Групщ СупероьсидобраАупмя ♦уысциш н«Итро*и»о§ (нмоль 02/0.1 на кроен)

«он 3 ч 1 лань 5 день 10 день 15 день

Паоскм инфицированные раны Опытная Контроль 54,4*1,5 5J,6Í1,9 129*1,1 б7*а,г 60,9*5,6 63,7*4,9 62,0 ÍJ.0 73,0*2,7 63,7*3,9 72,0* а,4 74,9*5,6

Из таблицы видно, что резко увеличивается количество образования кислорода после введения препарата. Уже через 3 часа количество к исто рода увеличивается с 54,4*1,5 до 129*1,1 н/моль/мл. Механизм этого явления остается неясным, однако не исключено, что препарат оказывает мембранотропное действие, что отчетливо проявляется при внутривенном введении. Введение аминофталгидрозада в дозе 20 мг/кг веса приводит к кратковременному достоверному снижению количества лейкоцитов в периферической крови.

Таким образом, препарат оказывал че1кое воздейсгвие на адгезивные свойства лейкоцитов, уменьшая количество циркулирующих белых кровяных тел (по всей видимости, за счет изменения конформационных структур мембран клеток крови) и увеличивая маргинальные.

Наиболее интересные результаты были получены при исследовании влияния препарата на фагоцитарную активность. Для этого использовали

цельную кровь от 10 здоровых доноров. В качестве фагоцитируемых частиц использовали латекс с Д-1,43 ним; аминофталгидрозид использовали в дозе от 1 до 20 . При подсчете количества нейтрофилов, фагоцитировавших частицы латекса (фагоцитарное число), было выявлено, что препарат в дозах 1, 5, 10^ йа 1x10^ клеток заметно увеличивает количестве нейтрофильных лейкоцитов, фагоцитировавших частицы латекса; контроль - 55%, опыт - 75%.

Таким образом, исходи из механизма действия препарата, можно считать, что парантеральное введение оказывает существенное воздействие на течение воспалительного процесса.

1. При введении внутримышечно препарат усиливает хемотаксис; фагоцитарную супероксидобразующую активность нейтрофилов.

2. Временно подавляет активность макрофагов в очаге воспаления, снижая тем самым уровень ФИО.

Доказательство последнего положения представляет особое значение, так как -предполагалось и было доказано другими исследователями, что симптомы интоксикации, как лихорадка, вегетативные расстройства, нарушения тонуса, проницаемости сосудов и др. могут быть обусловлены усилением выброса ФНО к ИН-1 макрофагами под действием эндотоксина. Для этого была проведеиа серия экспериментов по изучению содержания ФНО в плазме крови на фоне зндотоксинемии при применении аминофгалгидрозида (табл. 6).

Таблица б

Уровень фактора некроза опухолей (ФНО) в крови при экспериментальной зндотоксинемии при применении аминофталгидрозида

Группы хмаотнм Время поел« аадоыия токсин«

(кролик*) п-18 1 ч*с 3 ЧАСА 24 час«

5с| дечания и, ¿0,5 11,9*2,2

После мвдаимя пршмрт г.Иг.г Г,Й, 0

Р > 0,1 Р < 0,5 Р < 0,01 Р < 0.05

Выявлено, что если в контроле максимальные цифры уровня ФНО приходятся к 3 часу, то при введении препарата в опытной группе было зарегистрировано двукратное достоверное снижение этих показателей. В то же гремя нами отмечено снижение симптомов интоксикации. К концу эксперимента содержание ФНО в опытной группе достоверно ниже - контрольных и не отличалось от фоновых значений.

Клинически, спустя 1 час после введения препарата, отмечено улучшение общего состояния экспериментальных животных. К 3 часам эксперимента у животных прекратилась диарея, восстановилось физиологическое число сердечных сокращений и дыхания.

Таким образом, в проведенных экспериментах была четко продемонстрирована взаимосвязь между содержанием ФИО а плазме крови и клиническими симптомами интоксикации.

В то же время в условиях интоксикации продемонстрировано влияние препарата на активность мнкробицидной системы вейтрофнльных гранулоцитов.

Особенно быстро под влиянием аминофталгндрозида восстанавливалась супероксидобразующая функция лейкоцитов (НСТ-тест). Этот показатель увеличивался в 9 раз у обработанных токсином жнвотних уже через 3 часа от начала введения препарата и к концу эксперимента не отличался от контрольных значений (табл.7).

Другие показатели КБ и МП выдерживали аналогичную динамику. Однако, при этом цифровые значения были менее выражены. На фоне лекарственного препарата отмечено повышение показателей мнкробицидной системы во все сроки исследования по сравнению с контрольной.

Наиболее эффективный препарат, используемый в настоящее время для снятия симптомов интоксикация у больных сальмонеллезом ингибитор биосинтеза ПГ-индометацин также достоверно воздействовал на активность клеток крови. В связи с этим возникло предположение, что, возможно, механизм действия индометацнаа заключается не только в ингибировании синтеза ПГ, но в в первичном влиянии на активность клеток крови.

Таблица 7

Цитохимические показателя гранулоцитов при введении эндотоксина сальмонелл в дозе 1 мг/кг на фоне введения аминофталгндрозида

Время исслвлоыимя Объект «ссдадомкмя и (}ча.«А.) НП (уол.«Л.) НСТ-тяст

^ролики 50 ним. олит. КОНТРОЛЬ 32,1*2,2 32,2-2,2 19,3*2,6 19,3*2,6 4,3*1,0 4,3*1,0

60 нии. ольгт. контроль 49,3*2,0 42,3-3,4 24,8*1,9 15,0*3,0 22,4*0,7 3,9^1,2

180 НИН. опыт, контроль 78.353,0 64,5*2,0 86,6*2,2 10,2*2,2 36,1*1,2 4,0*2,0

24 чяс4 опит, контроль 110,2*2,6 101,1*2,1 140,0*1,8 4»,2?2,8 48,(1*1,1 31,2*1,3

Контроль 210,4*3,2 162,3*3,8 49,4*1,2

В отдельной серии опытов было выявлено, что в плане купирования симптомов интоксикации индометацин оказался менее эффективным, чем аминофталгидрозид. Через 2-3 часа после введения индометацина в дозе 10 мг/кг массы тела отметили снижение симптомов интоксикации. Однако, только через 4-6 часов появились четкие признаки проявления терапевтического эффекта индометашша.

Анализ цитохимических показателей микробицидной системы показал, что активность НСТ-теста не восстановилась к концу эксперимента. В то же время содержание КБ резко увеличилось, хотя не достигло фонозого уровня к этому сроку исследования.

Интересные результаты, подтверждающие возможность прямого действия индометацина на клетки крови, были получены при исследовании уровня цГМФ в слизистой тонкого кишечника на фоне сальмонеллезной эндотоксинемии. Препарат достоверно ограничивал рост уровня цГМФ, уменьшая при этом интенсивность диарейного синдрома.

Не исключено, что подобный эффект (наряду с ингибицией синтеза ПГ) объясняется снижением активности макрофагов с последующим уменьшением синтеза нитросоединений, активизирующих цГМФ-синтетазную реакцию.

МОДЕЛИРОВАНИЕ СЕПСИСА

Всестороннее изучение свойств препарата показало, что интервал терапевтического действия находится в пределах 10-50 мг/кг. При увеличении дозы препарата наблюдали парадоксальный эффект, а именно, подавление супероксидобразующей активности и нарушение адгезивных свойств лейкоцитов. Таким образом, организм под действием больших доз препарата терял звено "первичной защиты". На короткий период времени оказывалась подавленной лейкоцитарная система. Этот феномен представляет собой не только теоретический интерес, но и был использован для моделирования септических состояний.

Проведенные эксперименты показали, что внутривенное введение аминофталгидрозида в дозе 100-150 мкг/кг массы тела приводит к кратковременному уменьшению активности неитрофильных гранулоцитов и макрофагов. В частности, было выявлено, что спустя 20 мин. после введения препарата показатели миелопероксидазы и активности НСТ-теста снижал ц:ь в 5-7 раз. Менее выраженные, но достоверные изменения отметили в отношении катионных белков.

Теоретически, если в этих условиях ввести экспериментальным животным * небольшое количество микробных тел, мы должны наблюдать генерализацию

инфекционного процесса. Результаты показали, что доза 100» 5CÓ млн. микробных тел является оптимальной для сослан;! я модели сепсиса сальмонеллезной этиологии. Предлагаемый способ позволяег получить модель граммогрицательного сепсиса с развернутой клинической картиной заболевания через несколько часов от начала эксперимента.

Подобные результаты были получены при создании фаммположт ельною сепсиса, вызванною Slaphil.aureus. Как и в предыдущих экспериментах препарат вводили внутривенно животным предварительно в дозе 150 Mr/i:i веса тела. Количество микробных тел варьировало от 100 млн. до 1,5 млрд Результаты представлены в табл.8. Оптимальное количество микробных тел определялось цифрой 100-700 млн.

Таблица 8

Отработка оптимального количества микробных тел для моделирования сепсиса

п Количество ми»р.те* Stef. «ureuc Бактериологическое исследование органов не 3 сутки Кгреологическое исследование органов не 5 сутки Клинические признаки

7 1 HAH. - - -

7 10 иди. - -

7 NAM. - - -

7 HAH. легкие, печень* высев; кревь-стерильна начальные признаки адинамии

8 100 HAH. почки, лимфатические умы, печель - высев ВО)буДиТСАЯ начальны« признаки адинамия,отква от пици,темпера-тура - 39-40о

9 500 млн. во всех случаях высев возбудителя; кровь стерильна признаки сепсиса выражены адинамия, отка» от ги*и и гады, повыи* нив теиперетуры, изменение характере стуле

7 1 НАРД, и ei*e быстрей гибель животных признаки сепсиса вцшкены адинамия, отка» от РН81И и воды, повьем-кие температуры, изменение характере стула

Бактериологические исследования органов животных были позитивны при использовании количества микробных тел от 100 млн. и выше. Морфологические исследования, проведенные на . 5 сутки, подтвердили результаты, доказывающие генерализацию инфекционного процесса.

В то же время в контрольной группе без введения препарата, но с применением аналогичных доз микробных тел клиническими, морфологическими и бактериологическими методами, не выявили признаков генерализации инфекции.

Введение микробной взвеси через 6 часов после введения препарата (150 мг/кг) привело к отрицательному результату. Воспроизвести генерализованный инфекционный процесс не удалось.

Полученные резулыаты позволяют сделать заключение, что введение различных доз аминофталгидрозида позволяет регулировать' активность лейкоцитарной системы. В терапевтических дозах препарат стимулировал микробицидную систему гранулоцитов, усиливая резистентность организма.

При применении в больших количествах препарат временно подавляет неспецифическую защиту, способствуя генерализации инфекционного процесса.

Таким образом, предложенная нами модель септических состояний является адекватной, легко воспроизводимой и дает возможность получить септический процесс разной степени тяжести, что выгодно отличагт от существующих в настоящее время экспериментальных моделей сепсиса.

АПРОБАЦИЯ 5-АМИНОФТАЛГИДРОЗИДА НА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

ЖИВОТНЫХ.

Проблема устранения интоксикации и диареи у сельскохозяйственных животных, в частности, свиней и телят, актуальна на сегодняшний день. Трудности заключаются как в отсутствии эффективных и нетоксичных лекарственных средств, так и в анатомофизиологических особенностях молодого организма.

Общепризнана нецелесообразность применения у новорожденных животных антибиотиков в связи не только с токсичностью, но и развитием дисбактериоза и бактерионосительства.

Исходя из теоретических предпосылок, использование эффективных антивоспалительных средств (5-аминофтаиидрозида) с коротким периодом полужизни в тканях представляет большой практических интерес.

В связи с этим испытания препарата проведены на 18 трехмесячных поросятах весом 30 кг белой породы, родившихся в зимне-весенний период. Эксперименты проведены на базе фармфирмы Ciba - Gagi, Швейцария. Характер диареи оценивали но 4-х бальной системе.

Спустя 2-4 часа после введения экспериментальным животным суточной культуры сальмонелл зарегистрировали появление первых симптомов интоксикации. Изменилось поведение животных, появились признаки адинамии, снизился аппетит. Через несколько часов зафиксировано появление жидкого без примесей помета.

В да"'нейшем симптомы интоксикации нарастали. Животные стали менее подвижны, отказывались от пищи и воды, температура тела повышалась в среднем на 2 градуса. К концу первых суток у всех подопытных животных

бактериологические показатели фекалий были позитивны. На всех питательных средах был отмечен рост, характерный для сальмонелл. Биохимические характеристики соответствовали свойствам возбудителя.

Через 12 часов от начала эксперимента животным был введен 5-аминофталгидрозид внутримышечно в дозе 15 мг/кг массы тела (в 5 мл стерильного физраствора).

Первые признаки смягчения клинических симптомов заболевания отмечены через 3-4 часа. В последующие сроки наблюдения (6-9 часор) отмечено дальнейшее улучшение состояния, появился аппетит, прекратилась диарея (табл.9), хотя температура тела животных оставалась повышенной в среднем на 1-1,25 градуса. Однако выраженная адинамия у 3-х животных из 8 побудила сделать повторную инъекцию этим животным. Признаки полного устранения интоксикации зарегистрировали при зтом через 30-60 минут. Бактериологические анализы, проведенные на 3-4 сутки эксперимента, были негативными.

В контрольной группе, несмотря на применение гентамицина в терапевтической дозе 2-3-кратно, снижение симптомов интоксикации и устранение диареи зафиксировали лишь в трех случаях.

Для полного устранения симптоматики понадобилось 3-4-дневное применение антибиотика.

Проведенные исследования показали высокую эффективность аминофталгидрозида для лечения диареи у молодых порося г.

Таблица 9

Динамика купирования диареи у экспериментальных животных на фоне лечения аминофталгидрозида и без него при введении per os Salmonella typhimurium 9x10"^

Объект МССАС* доеания Группе животных Продолттвккность диареи .

2 часа 4 часа 8 час. 25 час. A3 час. 72 чес.

Поросята бедой породы Вас 3IH3 чг Опытая группе Контрольная группа t.eio.z 1,0*0,4 2,ßi0,2 норма 2,6t0,3 норма 2,5t0,5 норма 2,4*0.4 . норма 2.1*0.7

Причем в большинстве случаев препарат вводится однократно. Лишь в некоторых случаях требуется повторное введение препарата.

Таким образом, отпадает необходимость многократного применения больших доз антибиотиков и химиопрепаратов для лечения диареи у животных. Одновременно удалось предотвратить бактерионосительство.

Следовательно, испытание препарата показало высокую эффективность . дли лечения молодых поросят, инфицированных граммотрицательными бактериями, в частности, Salmonella typhimurium.

В другой серии животных вводили микробную взвесь E.Coli. Как было отмечено, во все сроки исследования оставались выраженными симптомы интоксикации, отмечались тахикардия и тахипное, диарея, потеря веса. Животные были вялы, малоподвижны, плохо сосали молоко свиноматки, кокные покровы бледные, шерсть взъерошенная, хвост опущен.

В опытной группе животных, спустя 2 часа с момента введения препарата отмечено улучшение общего состояния, появление аппетита, полное исчезновение адинамии к концу эксперимента. У всех животных прекратилась диарея (табл.10). После 24 часов число сердечных сокращений и дыхания не отличались от здоровых.

Таблица 10

Динамика купирования диареи на фоне применения аминофталгидрозида (инфицированные per os E.Coli 4x10"®)

Объект исследованим

Групп*

Продолжительность диареи

SHBOTHUU 1 «утки 2 сутки 3 сутки

Контрольная группе г,9*0,г 2,6*0,1 2,^0,3

Огшнля группе 1,0*0,? 0,2*0,1 норме

Применение антибиотиков 2,3*0,2 2,0l0,2 1,Й0,2

Поросата-сссукки Вес 1,8-2,0

Бактериологическое обследование животных, инфицированных E.Coli, 4x10'°, per os

Таблица 11

Объект исследования Группа хивотнш Бактериологическое исследование

16 часов 18 часов 24 часа 72 часе

Иопрахнения поросят-сосунков бес 1.8-2,0 Контрольная группа Опытмая группа рост бактерий рост бактерий рост • бактериЧ рост бактерий рост бактерий слабый ро-.т бактерий рост бактерий нет росте бактерий

.Проведенные эксперименты показали, что препарат в дозе 50 мг/кг веса тела проявил выраженный терапевтический эффект для лечения экспериментальной ишерихиозной инфекции у новорожденных поросят. Препарат рекомендован для широкого применения в сельском хозяйстве.

Испытание, препарчта проводилось также в подмосковных совхозах с использованием большого количества животных.

Объектами исследования явились племенные телята (п=34) с диагнозом диспепсия, дисбахтериоз, а также поросята с острыми кишечными заболеваниями (л-12). Результаты исследования показали, что 19 телятам было достаточно одной дозы в 200 мг для прекращения диареи. Позторно вводили препарат 5 телятам и только одному теленку понадобилась третья инъекция. Поросятам препарат вводили 15-30 мг/кг веся; з 11 случаях из 12 нами отмечено купирование диареи в течение 24 часов. Таким обргзом, результаты исследования показали, что устранение симптомов интоксикации и диареи происходило в короткие сроки. Попытка проводить профилактическое лечение диспепсии поросят также закончились успешно.

Таким образом, результаты экспериментов и апробация препарата на сельскохозяйственных животных с ОКИ различной этиологии похазали высокую эффективность препарата. При 1-2-кратном применения аминофталгидрозид не только снижал симптомы интоксикации и диарею, способствуя тем самым быстрому привесу животных, но и предотвращению бактерионосительства. При применении препарата отпадала необходимость применения антибиотиков и химиопрепаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на успехи теоретической медицины, точки приложения токсинов граммотрицательных бактерий Shigell, Salmonella typhlmurium не установлены и вызывают споры з научной литературе. Токсины оказычамт многогранные действия • на организм, активируя клетки крози, процессы ПОЛ, хипин-коллекреииовую систему, запуская каскад арахидоковой кислоты и т.д. Взаимодействие токсинов с лейкоцитарно-макрофагальной системой в литературе оезещено поверхностно, и интимные' механизмы этого взаимодействия остаются вопросом дискуссии.

Все это не позволяет на современном этапе выявить механизм развития токсического синдрома, и, соответственно, разработать эффективные меры борьбы с патологическим процессом. '

Новые методические подходы на молекулярном уровне в этей области не только способствовали вскрытию патогенеза заболевания, но и выдвинули новые концепции терапевтических мероприятий борьбы с токсичесхим синдромом.

В последние годы большое внимание уделяется изучешпо интралейкоцитарных компонентов в развитии токсического синдрома

(Б.С.Нагоев, 1985-1992; М.Т.Абидов, 1987-1992; Пап et al.,1989; и мн.др.). Авторы показали, чго под действием эндотоксинов происходит угнетение всех компонентов микробицидиой системы нейтрофильных гранулоцитов. Эндотоксины, поступающие в цнркуляторное русло, вступают в контакт с ПЯЛ, вызывая активацию функциональных систем (В.Н.Галанкин и соавт.,1987; М.Ю.Яковлев, 1987-1989; Wilson, 1985). Макрофаги, являясь "клетками тревоги", вступают в процесс интоксикации на раннем этапе токсического синдрома (Н.Д.Маянский; Ferreire,1980; E.Lied,1989). Было установлено, что под влиянием эндотоксинов граммотрицательных бактерий макрофаги высвобождают ФИО и ИЛ-1, которые ответственны за клинические симптомы интоксикации (Deutler, Betol, 1988; Malkowsky, Metal,1988; Jiriv et al.,1989; Damini e; al., 1989' M.Plant, 1989; Sironin et al., 1989).

В последние годы выяснили, что ФИО ответственен за увеличение;

- мнкробицйдносги гранулоцитов,

- продукции Н2О нейтрофилами,

- хемотаксис нейтрофилоч,

- адгезии гранулоцитов,

- образование Т-киллеров,

- цчтотоксичности к четок,

- синтеза прокоагулянтного фактора,

- разрастание тромба на поверхности эндотелия,

- усиление синтеза различных острофазных белков,

■ продукции АКТГ,

- продукции ПГ.

Одновременно фактор тормозит активность липопротеинлипазы и некоторых других ферментов, приводя к нарушению жировою обмена и нарушению детоксикации организма. Важнейшей точкой приложения фактора является его способность повреждать эндотелии капилляров с последующим нарушением процессов микроциркуляции в тканях.

Таким образом, вырабатываемые макрофагами под действием токсинов

макроорганкзм.

Другой важнейший показатель гиперактивности макрофагов N0 (окиси азота) называют "веществом века". Функция нитросоединений в настоящее время изучается во всем мире. Доказано, что соединение имеет 2 точки приложения:

1. Рассчабляет тонус сосудов (в больших количествах вызывает шок).

количестве фактор оказывает токсическое действие на

2. Запускает цГМФ синтетазную реакцию, меняя соотношение в тканях двух важнейших внутриклеточных месенджероо (цАМФ и цГМФ), обеспечивающих функциональную стабильность клетки.

Исходя из вышеизложенного, можно предположить, что основные клинические симптомы при острых кишечных инфекциях обусловлены избыточным высвобождением этих соединений из гинерактивированних макрофагов.

Поэтому для устранения симптомов патологического процесса необходимо снизить уровень этих соединений. Однако, классические препараты, ингибирующие активность макрофагов, например, препараты золота и другие, в данном случае для снятия симптомов интоксикаций использовать нецелесообразно по причине выраженного пролонгированного места действия. Хотя подобная терапия уместна и широко применяется при аутоиммунных заболеваниях, этого нельзя допустить при острых кишечных инфекциях.

Обнаруженное нами бифункциональное свойство группы аминофталгидрозидов позволило разработать препарат нового поколения для лечения токсических и септических состояний. С одной стороны, препарат in vivo и in vitro временно подавлял активность макрофагов, снижая содержание ФНО и нитросоединений, а с другой - увеличивал активность микробицидной системы нейтрофильных гранулоцитов.

В эксперименте с введением животным эндотоксина сальмонелл было четко продемонстрировано, что при введении 5-аминофталгидразида на фоне интоксикации достоверно снижалось содержание ФНО в плазме хрови. При этом снижение содержания ФНО происходило параллельно с угасанием хлинических симптомов интоксикации.

Одновременно в опытах in vitro нами впервые было продемонстрировано: препарат в терапевтических дозах обратим о ингиб.чрозал белковый синтез, образование ДНК н РНК в макрофагах, с одновременным подавлением их дыхательной активности. Одновременно при этом происходит восстановление микробицидной системы гранулоцитов.

В динамике заболевания ОКИ нами выявлены закономерные изменения основных показателей микробицидной системы лейкоцитов, зависящие от стадии, степени тяжести, а также типа возбудителя заболевания. Сам по себе интересен факт разнонаправленных динамических изменений кислородзависимых микробицидных систем в клинике и в эксперименте. Многие исследователи объясняют это истощением систем неспецифической защиты под действием токсина. На наш взгляд, при экспериментальной эндотоксинемин внутривенное введение "ударных" доз токсина приводит к изменению текучести мембран циркулирующих лейкоцитов (процесс

происходит в сосудистом русле). Изменение текучести автоматически приводит к резкому снижению генерации кислородзависимых систем. Поэтому, в эксперименте ми наблюдали очень низкие цифры уровня МП и резкое (почти 10-кратное) сьижение активности НСТ-тесга. При бактериальных инфекциях токсин поступает в кровь небольшими дозами, и происходит активация циркулирующих лейкоцитов, проявляющаяся увеличением активности НСТ-теста и уменьшением содержания МП за счет вовлечения их в генерацию вторичных метаболитов кислорода.

В опытах in vitro, как было выявлено камл, препарат существенно менял оупероксидобразующую функцию лейкоцитов. Резкая активация генерации свободных радикалов кислорода была отмечена на моделях чистых и гнойных ран. Действие препарата, по-видимому, обуслочлено мембранотрзпным эффектом.

Испытание на животных (также сельскохозяйственных животных) показало, что наряду с устранением симптомов интоксихации одновременно увеличивалась фагоцитарная активность, что приводило к быстрому устранению бактерионосительства.

Доклинические испытания препарата показа™ отсутствие токсичности, эмбристоксичности, тератогеняости и т.д., в связи с чем препарат рекомендован для клинического использования.

Обобщая полученные результаты, можно сформулировать концепцию развития токсического синдрома при острых кишечных заболеваниях. На ранних этапах развития патологического процесса токсин, попавший в кровяное русло, захватывается "дежурными" макрофагами неспецифического действия, а также В-лимфоцитами, связывающимися со специфическими рецепторами типа антител на их поверхности.

Внутри макрофагов и В-лимфоцитов токсин расщепляется, а образующиеся пептиды переносятся на поверхность клеток белками главного' комплекса гистосопмествмости (белки переносят пептиды на клеточную поверхность и представляют прехиллерам и киллерам).

Макрофаги одновременно активируют Т-лимфоциты, стимулируя деление и образование активных хелперов. Последние, в свою очередь, стимулируют В-лимфоциты х делению и секреция больших количеств специфических антител. Свободно циркулирующие в хровг антитела связывают токсин и нейтрализуют его.

Избыток .ненейтрализованного токсина приводит к гиперактивации махрофагов с подавлением микробнцидной системы нейтрофильных гранулоцитов. Биологически актирные соединения, вырабатываемые макрофагами, вызывают метаболические нарушения клеток в очаге

воспаления, микроциркуляторные нарушения, а также усиление агрегации тромбоцитов с последующим развитием ДВС-синдрома.

Следствием этих изменений является гипоксия пораженных тканей, усиление в них процессов ПОЛ ~ активации фасфолнпаз - высвобождение арахидон1вой кислоты - запуск каскада синтеза ПГ и инозитолфосфатного цикла, накопление в клетках Са+ и цГМФ- изменение проницаемости мембран клетки. Продукты распада деструкции клеток поступают в хровь и на фоне подавления детоксицирующей функции печени (под действием ФКО) усиливают симптомы интоксикации, вызванные избыточным образованием ФИО, ИН-1 и другими острофазкыми белками, Свободные токсины, циркулирующие в крови, оказывают прямое токсическое действие, усиливая агрегацию тромбоцитов, нарушая функцию печени, изменгя текучеегь мембран лейкоцитов (подавление микробицидной системы) и вызывая дальнейшую активацию макрофагального звена.

Тем самым создается порочный круг, обеспечивающий возможность одновременного присутствия в организме микробов, токсинов и гиперактивированных макрофагов. Все это на фоне 1;оданленной микробицидной системы способствует пролонгированию патологического процесса, формированию бактерионосительства.

Исходя из вышеизложенного, развитие токсического синдрома можно разделить на 4 фазы, вытекающие одна из другой.

Первая фаза - активация под действием эндотоксина (токсинов) макрофагов и лейкоцитов, выработка последними биологически активных соединений и хемотрактантов с последующей миграцией в очаг воспаления больших количеств лейкоцитов, обладающих набором многочисленных цитотоксичесхих факторов, дальнейшая гиперстимуляция которых способствует быстрому нарастанию своего деструктивного потенциала (данная фаза купируется препаратами, ингибирующими активность макрофагов н гранулоцитов).

Вторая фаза - повреждение мембран клеток вышеперечисленными факторами, инициация ПОЛ, каскада арахидоновой кислоты, высвобождение ПГ, ЦН, других биологически активных соединений, способствующих микроциркуляюрным, биохимическим, обменным нарушениям в органах и тканях. (Для купирования этих процессов необходимы ингибиторы биосинтеза простагландинов, протеаз, антиоксиданты).

Третья фаза - глубокое угнетение всех систем неспецифической и специфической защиты, недостаточность функциональных, биохимических функций органов и систем, микроциркуляторные и циркуляторные нарушения,

гипоксия н развитие ДВС-синдрома (требует применения комплексной терапии).

Четвертая фаза - шок (токсический, инфекционно-токсический, токсико-септический). Для купирования этой фазы необходим целый набор аитишоховых медикаментозных мероприятий и средств, включающих в себя антиохсидаиты, антипротеазную терапию, антигипоксические и гнтигистаминные препараты, ингибиторы лросгагландинов, тисшовых соединений и т.д.

Проведенные исследования показывают, что течение и исход патологического процесса зависит не столько от количества токсина (хотя и это имеет место), сколько от сдержанного, сбалансированного ответа клеточных систем организма на агрессию микробов и/или их токсинов.

Разработанная нами новая медикаментозная терапия позволяет разорвать порочный круг, устранив избыточную реактивность макрофагов и восстановить при этом функциональную активность лейкоцитарного звена.

Как показали клинические испытания и биологические эксперименты, этим свойством в некоторой степени обладает индометацин, используемый в клинике в настоящее время только как ингибитор циклооксигеназиой реакции.

Таким образом, открытая нами новая закономерность в формировании токсического синдрома и особенности течения патологического процесса при ОКИ открывает широкие перспективы для .создания новых подходов к устранению синдрома интоксикации и диареи. При этом одновременное устранение бактерионосительства является важнейшим показателем перспективности нового научпого направления в области инфекционной патологии.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что ведущее значение в возникновении синдрома. интоксикации принадлежит соединениям, вырабатываемым активированными макрофагами - фактору некроза опухолей, шггросоединеииям: на ранних стадиях патологического процесса и предшествует по времени возникновению симптомов 'интоксикации.

2. Впервые яохазано, что временное подавление активности макрофагов посредством введения специфических лекарственных средств .приводит к снижению содержания этих соединений, и предотвращает развитие симптомов интоксикации.

3. При экспериментальной зндстоксикемии установлено подавление микробицидной системы нейтрофилышх гранулоцитов в зависимости от дозы и вида токсина, что потенцирует течение токсического синдрома.

4. Подавление активности лейкоцитов с помощью новых лекарственных средств было использовано для создания адекватной модели септического процесса. В этих- условиях нам удалось получить в эксперименте генерализацию процесса при введении 500-100 млн. микробных тел.

5. При обследовании больных острыми кишечными инфекциями яыязлень: разнонаправленные динамические изменения отдельных яоказателей интралейкоцитарных компонентов михробицидной системы, указывающих на снижение функциональной активности клеток крови.

6. Применение средств нестероидной терапии в клинике и в эксперименте приводит х снижению симптомов интоксикации и увеличению уровня катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах,

7. Применение аминофталгидрозида в терапевтических дозах лрияодкт к более полному купированию токсического синдрома за счет подавления активности макрофагов, торможения хемотаксиса, ингибирокания цГМФ-синтетазной реакции в энтероцитах и восстановления кислородзависимой микробицидной системы гранулоцитов.

8. В опытах in vivo и in vitro впервые установлено, что препарат в терапевтических дозах снижает скорость синтеза белков, ДНК, РНК, з также потребление кислорода в макрофагах, переводя нз короткое время клетки крови в неактивное состояние.

9. Введение аминофталгидрозида в дозе 10-50 мг/кг массы тела приводит одновременно к активации супероксвдобразующей функции лейкоцитоз, подавляет временно ПОЛ, что в итоге способствует более быстрому заживлению раневого процесса в эксперименте.

10. . Аминофталгидрозид оказался высокоэффективным средством для купирования диарейного синдрома у животных, а прозгденные доклинические фармиспытгния показали возможность использования препарата в клинических условиях.

Схема 1

Общая схема патогенеза развития токсического синдрома и точки приложения" лекарственных препаратов

МИКРОБ-

- антибиотики

аминофтал- » гидрозид

\

ФУНКЦИЯ ЭНТЕРОЦИТА

ТОКСИН

0

1

КЛЕТКИ КРОВИ

?

ИЗМЕНЕНИЕ ГОМЕОСТАЗА ФУНКЦИЯ СОСУДА ДВС-синдром

ЧЕС КИЙ СИНДРОМ ШОК

|—| - нестероидные

противовоспалительные средства

МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ ТКАНЕЙ

О - АР6

Роль клеток в возникновении токсичекого синдрома при ОКИ

Схема 2

Просвет кишечника

ТОКСИН

МИКРОБ.

С^----

- 36 -

По теме исследования опубликованы следующие работы:

1. Абидов М.Т., Жидков ИЛ., Воробьева Н.Т., Князев Р.П. Динамика уровней ЦН в плазме у больных сальмонеллезом в условиях применения ингибитора биосинтеза ПГ-индометацина // Современные представления о диагностике, патогенезе, лечении и профилактике ОКИ // Сб.тр. - М., 1986.-С.И.

2. Абидов М.Т., Жидков ИЛ.. Воробьева Н.Т., Егорова И.А., Ваг В.А. Динамика уровня ЦН при экспериментальной сальмонеллезной интоксикации в условиях применения ингибитора биосинтеза ПГ-индометацина // Современные представления о диагностике, патогенезе, лечении и профилактике ОКИ // Сб.тр. - М., 1986.- С.12-13.

3. Абидов М.Т., Пак С.Г., Винницкий Л.И. Влияние инцометацина на уровни ЦН в плазме крови у больных сальмонеллезом // Сб. научн. тр. -Нальчик, 1988. С. II-13

4. Абидов M.T.j Хохлова Т.О., Далина A.M., Виноградова ИЛ. Влияние антибиотиков и иммунодепрессантов на адгезивные свойства сальмонелл при моделировании септического состояния //Всесоюз. семинар: "Колонизационная резистентноегь и химиотерапия, и антибактериальные препараты. - М., 1988.

5. Абидов М.Т. Циклические нуклеотиды при гастроинтестикальной форме сальмокеллеза в условиях применения ингибитора биосинтеза простагландинов: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М.,

6. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Иванов О.Ф., Ибрагимов Б.М., Суприкин Р.И., Маржохова С.С., Каноког A.A. Метаболическая активность нейтрофилов при моделировании ДВС-синдрома //Матер. Ш-го Всерэс. съезда иЕфеыщонистов, - М.-Смоленск, 1989. - С. 381-383.

7. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Иванов О.Ф., Ибрагимов Б.М., Суприкин Р.И., Маржохова С.С., Канохов A.A. Изменение активности НСТ-теста при экспериментальной сальмонеллезной инфекции.// Матер. Ш-го Все рос. съезда инфекционистов, - М.-Смоленск, 1989. - С. 383-385.

8. Нагоев Б.С., Кансков А.А,.Абидов М.Т. Активация показателей НСТ-теста лейкоцитов с помощью бактериального эндотоксина в процессе шлгеллезяой инфекции // Матер. 2-й Всесоюз. конф. по бактериальным токсинам (27-30 ноября 1989 г.). - М.-Юрмала, 1989. - С. 87.

9. Нагоев Б.С.,.Абидов М.Т., Габрилович Д.И., Гржибовская Л.Н., Табухов З.Ю. Функционально-метаболическая активность лейкоцитов при экспериментальном эндотоксиновом шоке // Матер. 2-й Всесоюз. конф. по бактериальным токсинам <27-30 ноября 1989 г.). - М.-Юрмала, 1989. - С. 88.

10. Абидов М.Т., Гржибовская Л.Н., Домброзская Е.А., Каноков A.A., Нагоев Б.С.,.Табухов З.Ю., Шаожев М.А. Состояние показателей НСТ-теста

лейкоцитов в процессе экспериментальных септических состояний /./ В кн.: Итога работы по основным научным направлениям КБГУ, - Нальчик, 1989. -С. 137-138.

11. Нагаев B.C., Абидов М.Т., Гржибовская Л.Н., Каноков A.A., Значение показателей спонтанного и стимулированного НСТ-теста лейкоцитов для оценки иммунного статуса организма при кишечных инфекциях // В кн.: Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патолотческих состояниях. - Челябинск, 1990. - С. 100101.

12. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Маршанопа Г. Г1. НСТ-тест при экспериментальной эндотохсинемии // Матер. Всесоюз. конф.: Молекулярные механизмы развития инфекционных заболеваний. - Звенигород, 1990. - С. 4-5.

13. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Хохлова Т.О., Рагнмов Ч.С. К патогенезу септических состояний // Матер. Всесоюз. конф.: Молекулярные механизмы развития инфекционных заболеваний. - Звенигород, 1990. - С. 134-135.

14. Абидов М.Т., Габрилович Д.И., Гржибовская JI.H., Ибрагимов Б.М., Нагоев B.C. Состояние внугрилейкоцитарной микробицидной системы при сальмоне.члезе // В кн.: Физиология пищеварения и всасывания / Тез. докл. XV Всесоюз. конф. - Краснодар, 1990. - С. 541-542.

15. Нагоев B.C., Абидов М.Т., Афашагова М.М., Габрилович Д.И., Каноков A.A., Пак С.Г. Влияние индометацина на функционально-метаболическую активность нейтрофнльных гранулоцитов в эксперименте // В кн.: Интенсивная терапия и поликлиническое обслуживание инфекционных больных. - Благовещенск, 1991. - С. 63-66.

16. Абидов М.Т., Хохлов А.П., Пак С.Г., Рябчикоз Р.П., Афашагова М.М., Гржибовская Л.Н. Зависимость микробицидной системы гранулоцитов от дозы и способа введения // в кн.: Цитохимия лейкоцитов в эксперименте и клинике. - Нальчик, 1991. - С. 3-7.

17. Нагоез Б.С., Абидов М.Тт, Каминская Г.Д., Пак С.Г. К вопросу о роли протеиназ нейтрофильных гранулоцитов при экспериментальной эндотоксинемии // В кн.: Цитохимия лейкоцитов в эксперименте и хлинике. -Нальчик, 1991. - С. 7-12.

18. Подлевский A.M., Абидов М.Т., Габрилович И.М., Маршанова Г.А., Афашагова М.М. Метаболическая активность гранулоцитов при экспериментальной эндотоксинемии и сальмонеллезной инфекции // В кн.: Актуальные вопросы этиологии, эпидемиологии, патогенеза, клиники и лечения заразных болезней человека. - Владикавказ, 1991. - С. 65-69.

. - 38 -

19. Абидов М.Т., Хохлов А.П., Пак С.Г., Турьянов М.Х., Гржибовская Л.Н. Влияние лекарственных препаратов на микробицидную систему гранулоцитов при эндотоксиновом шоке в эксперименте // В кн.: Актуальные вопросы инфекционной патологии / Сб. науч. тр. - Пальчик, 1993. - С. 3-6.

20. Абидов М.Т., Нагоев Б.С., Афашагова М.М. Состояние внутриклеточной микробицидной системы у бальных ПТИ // Тер. архив,

1992. с г-ю

21. Абидов М.Т., Нагоев B.C. Изучение активности нейтрофнл гранулоцитов при экспериментальной эндотоксинемии // Лабораторное дело. - 1992. С. 6 Ь

22. Абидов М.Т., Хохлов А.П., Пак С.Г., Нагоев B.C., Аляутдин Р.Н., Турьянова Г.М. Елияние лекарственных препаратов на микробицидную систему гранулоцитов при сальмонеллезном эндотоксиновом шоке // Акт. вопросы инфекц. забол. - 1992. С tf

23. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Турьянов М.Х., Хохлов А.П. Значение фтллгидрозидов в купировании экспериментального сальмонеллезного эндотоксина // Акт. вопросы инфекц. забол. - 1992. C K '624. Абидов М.Т., Пак С.Г., Нагоев B.C., Маршанова Г.П. Изменение

активности НСТ-теста при экспериментальной эндотоксинемии // Акт. вопросы инфекц. забол. - 1992. С ¡ЬИ-

25. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Турьянов М.Х., Хохлов А.П. К патогенезу ДВС.-синдрома // Акт. вопросы инфекц. забол. - 1992. С .Ц. Ч.

26. Абидов М.Т., Нагоев B.C., Турьянов М.Х., Хохлов А.П., Жигунова И.М. Значение фталгидразида в купировании . экспериментальной сальмонеллеэной эндотоксинемии // В кн.: Актуальные "вопросы инфекционной патологии / Сб. нуч. тр. - Нальчик, 1993. - С. 53-60.

27. Абидов М.Т., Каноков A.A. Использование показателя повреждения агйтрофилов и активности НСТ-теста для оценки иммунного статуса у больных острой дизентерией // Сб.: Вопросы теоретической и клинической медицины / Матер, избил, конф., повящ. 25-летию медицинского факультета. -Нальчик, 1993. - С. 6.

28. Абидов М.Т., Ременник A.C., Иванов О.Ф., Супрккин Р.И., Нагоев Б.С. Активность НСТ-теста в нейтрофяльных гранулоцитах и показатели альфа-токоферола при экспериментальной эндотоксинемии // Сб.:' Вопросы теоретической и клинической медицины / Матер, юбил. конф., повящ. 25-летию медицинского факультета. - Нальчик, 1993. - С. 6-7.

29. Каноков A.A., Абидов М.Т. Состояние функционально-метаболической активности лейкоцитов у больных дизентерией и - при экспериментальной шигеллезной эндотоксинемии // Сб.: Вопросы