Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Типовые реакции мононуклеаров крови у детей при инфекционном мононуклеозе

На правах рукописи

РГБ ОД

1 5 ИЮЛ 2002

Уразова Ольга Ивановна

ТИПОВЫЕ РЕАКЦИИ МОНОНУКЛЕАРОВ КРОВИ У ДЕТЕЙ ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ МОНОНУКЛЕОЗЕ

14.00.16 - патологическая физиология 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

'$0*^1

ТОМСК-2002

Работа выполнена в Сибирском государственном медицинском университете МЗ РФ и в Научно-исследовательском институте фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ Новицкий В.В. доктор медицинских наук, профессор Помогаева А.П.

Официальные оппоненты:

академик РАМН, заслуженный деятель науки РФ Якобсон Г. С. доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН Лишманов Ю.Б. доктор медицинских наук, профессор Логвинов C.B.

Ведущая организация:

Новосибирская государственная медицинская академия МЗ РФ

Защита состоится "_"_2002 г. в_ч на заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН по адресу: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН.

Автореферат разослан 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Действие факторов, нарушающих экологическое равновесие, внедрение в медицинскую практику современных методов лекарственной и лучевой терапии, многие из которых не обладают селективностью действия, пересадка органов и тканей могут, как показывают клинические и экспериментальные исследования последних лет, иметь своим следствием развитие иммунодефицитных состояний, способствующих реактивации бессимптомно персистирующих в организме патогенных и условно-патогенных микроорганизмов [Аджапаридзе О.Г. и соавт., 1984; Цинзерлинг A.B., 1986; Фарбер H.A., 1989; Баринский И.Ф., 1994; Savoie А. е.а, 1994; Ильин С.Ю., 1995; Verdium С.М. е.а., 1995; Бухарин О.В., 1999; Исаков В.А. и соавт, 1999; Ilyinskikh N.N., 1999; Wirnsberger G.Re.a., 1999].

Инфекционный мононуклеоз (ИМ) - одна из типичных персистентных инфекций, возбудителем которой в 90% случаев заболевания является вирус герпеса 4-го типа — вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ). Вместе с этим, синдром мононуклеоза могут вызывать и другие инфекционные агенты как вирусной, так и иной природы (бактерии, простейшие). Наиболее частыми возбудителями «неВЭБ-инфекционного мононуклеоза» являются вирусы простого герпеса 1-го типа, цитомегалии (в 5-7% случаев развития мононуклеарной реакции крови) и Toxoplasma gondii (1-1,2%) [Монасты-рева JI.A. и соавт., 1975; Evans A.S., 1978; ГаспарянМ. О. и соавт., 1979; Фарбер H.A., 1989; de Ory F., Echevarría J.M., 1989; Lewin N. е.а., 1990; Haukenes G. е. a., 1994; Derkay C.S., Bramhall T.C., 1995; Kanegane H. e.a., 1995; Мазурина M. A. и соавт., 1996; Cozad J., 1996; Поляков B.E. и соавт., 1998; Титов Л.П. и соавт., 1999; Васюнин A.B. и соавт., 2000; Родионова О.В. и соавт., 2000].

ВЭБ характеризуется убикваторным распространением и обнаруживается у 90-92% населения всего Земного шара. 60% заболевших ИМ - лица в возрасте от 2 до 20 лет. При этом первичное инфицирование ВЭБ в 90% случаев происходит в раннем возрасте (до 3-х лет) и лишь у 45% инфицированных сопровождается выраженными клинико-гематологическими проявлениями ИМ [Кассирский И.А., 1971; Гаспарян М.О., Сулкченкова А.Д., 1975; Гаспарян М.О., 1977; Павлова М.П. и соавт., 1984; Imai S., 1990; Любезная Е.Б., 1991; Leogrande G., Jirillo E., 1993; Kanegane H. e.a., 1997; Nicolas J.C. e.a., 1997; Поляков B.E. и соавт., 1998; Титов Л.П. и соавт., 1999; Иванова B.B. и соавт., 2001].

Система крови - одна из наиболее чувствительных к повреждающему действию инфекционных агентов систем макроорганизма, клеточным

элементам которой принадлежит основная роль в формировании противоинфекциошюго иммунитета. Характерные гематологические изменения, регистрируемые при ИМ (увеличение в периферической крови количества одноядерных элементов, качественное изменение мононук-леаров), долгое время расценивались как лейкемоидная реакция. В настоящее время патоморфологические изменения в кроветворных органах у этих больных рассматриваются как специфическая ответная реакция иммунной системы организма на внедрение инфекционного возбудителя [Гаспарян М.О. и соавт., 1969, 1974; Лихачев A.A. и соавт., 1974; Козинец Г.И. и соавт., 1982; Павлова М.П. и соавт., 1984;. Маслова А.И., 1985; Tosato G., 1987; Ронин B.C., 1992; Arai T. е.а, 1996; Zuccaro G. e.a., 1997; Богомолов Б.П., 1998; Phatak P.D. e.a., 1998].

Согласно концепции Ф. Бернета [1971], иммунная система осуществляет не только противоинфекционную защиту организма, но и наряду с апоптозом и ДНК-репарационной системой контролирует его генетический гомеостаз, элиминируя мутанггно измененные клетки. В то же время, не вызывает сомнений тот факт, что индуцируемые инфекционными возбудителями повреждения ДНК могут резко изменять течение морфофизиологических процессов в «клетках-мишенях» [Ильинских H.H., 1984, 1986, 1990; Ильинских H.H. и соавт., 1984; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Кудрявцев Д.М., 1992; Softie N., Jeren T., 1993; Купчинский P.A., 1994; ГолубеваМ. В., 1995; Ильинских E.H., 1999; Севастьянова Н.В., 1999].

Вопрос о роли лейкоцитов в патогенезе ИМ в последние годы привлекает повышенное внимание исследователей. Известно, что цитопатические процессы при действии инфекционных возбудителей определяются как свойствами самого инфекционного агента, так и чувствительными к нему клетками. Герпесвирусы, в частности ВЭБ, являются наиболее яркими представителями группы вирусов, способных вызывать латентную инфекцию и длительно персистировать в дифференцированных иммуноцитах, подавляя продукцию вирусспецифических антител и регулируя экспрессию вирусных антигенов инфицированными клеточными элементами с одной стороны, и стимулируя продукцию ими иммуносупрессивных и иммуномодулирующих веществ, тормозящих иммунные реакции организма, с другой [Самохин П.А., 1982; Семенов Б.Ф. и соавт., 1982; Цинзерлинг A.B., 1986; Tosato G., 1987; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Мищенко В.А. и соавт., 1994; Tierney R.J. е.а., 1994; Wagner G.H., 1995; Исаков В.А. и соавт, 1999; Ляшенко В.А. и соавт., 1999; Иванова В.В., 2000; Малашенкова И.К. и соавт., 2000; Носик H.H., 2000; Малышева O.A. и соавт., 2001].

Результаты современных исследований свидетельствуют о том, что «атипичные мононуклеары», обнаруживаемые в периферической крови у больных ИМ, представляют собой морфологически гетерогенную популяцию трансформированных иммунобластов как В-, так и Т-клеточного происхождения [Козипец Г.И. и соавт., 1982; Schmidt С. е.а., 1989; Williams M.L. е.а., 1989; Lewin N. е.а., 1990; Yoneda N. е.а., 1990; Huemer Н.Р. е.а., 1993; Anagnostopoulos I. е.а., 1995; Arai Т. е.а., 1996; Kelleher С.А. е.а., 1996; Серебряная М.Б. и соавт., 1998]. Установлено также, что вирусы герпеса могут вызывать морфофункциональные изменения не только лимфондных клеток, но и нейтрофилов, моноцитов [Rice G.P. е.а., 1984; Braun R.W., Reiser Н.С., 1986; Teng R.J. е.а., 1991; Maciejewski J.P. е.а., 1993; Soderberg С. е.а., 1993; Tierney R.J. е.а., 1994; Anagnostopoulos I. е.а., 1995; Arai Т. е.а., 1996; Kelleher С.А. е.а, 1996; Furukawa S. е.а., 1992; Larohelle В. е.а., 1998].

Уникальность ВЭБ заключается в способности вызывать не разрушение, а поликлональную активацию и иммортализацию зараженных им лимфоцитов путем изменения соотношения ростовых и апоптозных потенций клеток [Room A.J., Reading C.L., 1987; Schmidt С. е.а., 1989; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991; Uehara Т. е.а, 1992; Akbar A.N. е.а., 1993; Tamaru Y. е.а, 1993; Taga К. е.а, 1994; Ohta К. е.а, 1995; Маянский А.Н. и соавт, 1997]. Гиперпролиферация, нарушение механизмов апопггоза лимфоцитов при ИМ обусловливают высокий риск возникновения хромосомных аберраций и злокачественной трансформации клеток [Ameisen J.C, 1994; Magno G, Joris I, 1995; Владимирская Е.Б. и соавт, 1997; Pan H. е.а, 1997; Исаева М.П. и соавт, 1998; Иванчук И.И, 1999; Фильченков A.A., Стойка P.C., 1999].

К настоящему времени доказана этиологическая роль ВЭБ в развитии ряда опухолевых заболеваний у человека: назофарингеальной карциномы, лимфомы Беркитта, Т-клеточных лимфом, болезни Ходжкина, а также тяжелых диссемшшрованных новообразований в лимфоузлах и волосатой лейкоплакии у ВИЧ-инфицированных и др. [Жданов В.М, 1984; Порхова-тый С.Я, 1986; Raab Traub N. е.а, 1987; England J.A, 1988; Imai S. е.а, 1994; Kelleher С.А. е.а, 1996; Shin W.S. е.а, 1996; Fares F. е.а, 1998].

Однако, несмотря на имеющиеся в литературе данные о мутагенных эффектах ВЭБ и других герпесвирусов [Демидова A.C., 1971; Саблина О .В , 1976; Durie B.G е.а, 1985; Kubonishi I. е.а.,1991; Dürfe В.G, 1992; Gutierrez M.I. е.а, 1992; H.J. Delecluse е.а, 1993; Lestou V.S. е.а, 1993; Tien H.F. е.а, 1993; Аравиашвшш Д.Е. и соавт, 1994; Cesarman Е. е.а, 1996; Ohshima К. е.а, 1997; Chou W.C. е.а, 1998; Hui A.B. е.а, 1998], сведения о частоте и характере цитогенетических нарушений при ИМ в зависимости от

функциональной активности систем поддержания генетического гомеостаза организма на клеточном и молекулярном уровнях практически отсутствуют. Особый интерес в обсуждаемом аспекте представляет состояние иммунологической реактивности организма, испытывающей возрастные колебания и тем самым определяющей наличие физиологически обусловленных периодов повышенной чувствительности организма к мутагенным факторам [Ильинских H.H., 1984, 1986, 1990; Ильинских H.H. и соавт., 1987, 1990]. Кроме того, до настоящего времени существует глубокий разрыв между возможностями современной лабораторной диагностики этиологических вариантов ИМ и практическим ее применением в клинико-экспериментальных исследованиях. Вместе с этим, революционные преобразования, произошедшие в области медико-биологических наук в последние годы, усовершенствование методов диагностики герпесвирусных инфекций требуют пересмотра многих сложившихся представлений о характере нарушений в системе крови при ИМ и, что особенно важно, поиска новых подходов к установлению механизмов этих нарушений. Это, несомненно, расширит фундаментальные знания о патогенезе инфекции и, возможно, послужит основой для разработки более эффективных методов диагностики и коррекции развивающихся гематологических нарушений.

Цель исследования: Установить общие закономерности, возрастные особенности и механизмы формирования цитогенетических, структурно-метаболических и функциональных нарушений мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у детей при инфекционном мононуклеозе.

Задачи исследования:

1. Установить общие закономерности цитогенетических, структурно-метаболических и функциональных нарушений мононуклеарных клеток периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии.

2. Выявить особенности цитогенетических, структурно-метаболических и функциональных нарушений мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у детей при инфекционном мононуклеозе в зависимости от этиологического варианта инфекции, возрастных особенностей организма и стадии течения инфекционного процесса.

3. Вскрыть механизмы цитогенетических, структурно-метаболических и функциональных нарушений мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой

ЭТИОЛОГИИ.

4. Дать комплексную оценку щггогенетической, структурно-метаболической и функциональной дезорганизации мононуклеарных клеток периферической крови у детей при инфекционном мононуклеозе, вызвшгаом вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии.

Положения, выносимые па защиту:

1. Течение инфекционного мононуклеоза у детей сопровождается онтогенетической, структурно-метаболической и функциональной дезорганизацией мононуклеарных клеток периферической крови, проявления которой сохраняются на стадии реконвалесценции и в отдаленном периоде после болезни. Степень выраженности указанных расстройств определяется типом возбудителя заболевания и возрастными особенностями организма.

2. Наиболее существенные и продолжительные изменения структурно-метаболических и функциональных свойств клеток лимфоцигарного ряда вызывает вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ), а моноцитов - возбудители "неВЭБ"-мононуклеоза. При этом они более значительны у детей в возрасте 7-14 лет, чем у 3-б-летннх пациентов.

3. Увеличите (по сравнению с нормой) числа лимфощггов с хромосомными нарушениями в периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном ВЭБ и другими возбудителями, обусловливается, наряду с цитоповреждающим действием возбудителя заболевания, угнетением способности лимфоцитарных клеток к апоптозу. Снижение количества лимфоцитов с хромосомными аберрациями на стад>ш ремиссии и в отдаленном периоде после перенесенного заболевания в условиях повышенной (по сравнению с нормой) резистентности лимфоцитарных клеток к апоптозу обеспечивается активацией эксцизионной ДНК-репарации и факторов клеточного иммунитета.

4. В основе структурно-метаболического дисбаланса мононуклеарных лейкоцитов периферической крови при инфекционном мононуклеозе лежат стимуляция В-звена иммунной системы и моноцитов, подавление функциональной активности Т-лимфоцитов.

5. «Атипичные мононуклеары», выявляемые в периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном ВЭБ, и другой этиологии, представляют собой неоднородную в цитохимическом отношении группу клеток лимфо- и монощгтарной природы.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение реакций мононуклеарных лейкоцитов периферической крови у детей разного возраста при различных этиологических вариантах инфекционного мононуклеоза в

динамике течения и в отдаленном периоде после болезни. Получены новые данные, свидетельствующие о том, что явления хромосомной, структурно-метаболической и функциональной дезорганизации мононуклеарных клеток при инфекционном мононуклеозе имеют место не только в фазу клинико-гематологической манифестации болезни, но и сохраняются на стадии реконвалесценции и в отдаленном периоде после перенесенного заболевания. Степень выраженности указанных расстройств определяется типом возбудителя инфекции и возрастными особенностями организма. При этом наиболее существенные и продолжительные изменения структурно-метаболических и функциональных свойств клеток лимфоцигарного ряда вызывает вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ), а моноцитов - возбудители "неВЭБ"-мононуклеоза; они более значительны у детей в возрасте 7-14 лет, нежели у 36-летних пациентов. Установлено, что нарушения структурной организации хромосомного аппарата лимфоцитарных клеток при инфекционном мононуклеозе ВЭБ- и другой этиологии являются однонаправленными и характеризуются увеличением (по сравнению с нормой) общего количества клеток с хромосомными (структурными и численными) аберрациями и количества хромосомных нарушений на клетку, повышением содержания ФГА- и ЛПС-стимулированных лимфощгтов с микроядрами. Обосновано, что увеличение (по сравнению с нормой) числа лимфоцитов с хромосомными нарушениями в периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном ВЭБ и другими возбудителями, обусловливается, наряду с цитоповреждающим действием возбудителя заболевания, угнетением способности лимфоцитарных клеток к апопгозу. Снижение количества лимфоцитов с хромосомными аберрациями при инфекционном мононуклеозе ВЭБ- и другой этиологии на стадии ремиссии и в отдаленном периоде после перенесенного заболевания в условиях повышенной резистентности лимфоцитарных клеток к апоптозу обеспечивается активацией эксцизионной ДНК-репарации и факторов клеточного иммунитета. Показано также, что в основе структурно-метаболического дисбаланса мононуклеарных лейкоцитов периферической крови при инфекционном мононуклеозе лежат стимуляция В-звена иммунитета и моноцитов, подавление функциональной активности Т-лимфоцитов. Кроме того, определено, что «атипичные мононуклеары», выявляемые в периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном ВЭБ, и другой этиологии, представляют собой неоднородную в цитохимическом отношении группу клеток лимфо- и моноцигарной природы.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные расширяют существующие на сегодняшний день представления о роли ДНК-

репарации, апоптоза и иммунной системы при инфекционном процессе н могут служить не только основой для дальнейшего изучения патогенеза инфекционного мононуклеоза, но и для разработки новых подходов к проблеме профилактики и коррекции иммунодефнщггных и мутагенных осложнений заболевания. На основании полученных данных обоснована роль эксцизионной ДНК-репарации и факторов клеточного иммунитета в снижении количества лимфоцитов с хромосомными аберрациями при инфекционном мононуклеозе ВЭБ- и другой (герпесвирусной и неуточненной) этиологии на стадии ремиссии и в отдаленном периоде после перенесенного заболевания, что дает возможность рекомендовать определение показателей их функционального состояния в качестве диагностических и прогностических параметров течения и исходов болезни. Дети в возрасте 7-14 лет составляют группу риска по вероятности развития затяжного, хронического течения инфекционного мононуклеоза, неопластической трансформации заболевания и требуют более длительного врачебного наблюдения в постинфекционном периоде по сравнению с детьми младшего (3-6 лет) возраста.

Реализация и апробация диссертации. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на конференции, посвященной 70-летию заслуженного деятеля науки РФ, профессора А.И. Рыжова (Томск, 1999); на III конгрессе с международным участием «Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении» (Анталия, 2000); на 2-ой Объединенной Всероссийской и Всеармейской научной конференции «Санкт-Петербург -Гастро-2000» (Санкт-Петербург, 2000); на 3-ем международном конгрессе по ингеграгивной антропологии (Харьков-Белгород, 2000); на Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в терапии и профилактике инфекционных заболеваний у детей» (Санкт-Петербург, 2000); на первом и втором международных конгрессах молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2000, 2001); на конференции, посвященной 55-летию педиатрического факультета СГМУ (Томск, 2000); на II Российской конференции молодых ученых «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2001); на конференции, посвященной 75-летию профессора A.C. Зиновьева (Омск, 2001); на 3-ем Российском научном форуме «Санкт-Петербург — Гастро-2001» (Санкт-Петербург, 2001); на межгородской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 2002); на I Всероссийской научной конференции с участием зарубежных специалистов «Актуальные проблемы эволюционной и популяционной физиологии

человека» (Тюмень, 2001); на заседаниях кафедры патофизиологии СГМУ (Томск, 1999-2002) и НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (Томск, 1999-2002).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 26 работ, в том числе 8 в центральных и реферируемых журналах.

Объем и структура работы. Диссертация шложена на 355 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 43 рисунками и 32 таблицами. Библиографический указатель включает 484 источника, из них 258 отечественных и 226 зарубежных.

Материал и методы исследования. Под наблюдением находились 112 детей (74 мальчика и 38 девочек) 3-14-летнего возраста, больных ИМ средней степени тяжести с гладким (неосложненным) течением: 55 детей, больных ИМ, вызванным вирусом Эпштейна-Барр (ИМ-ВЭБ) (код В27.0 МКБ-10), и 57 детей, больных ИМ другой этиологии (ДИМ) (код В27.8 МКБ-10) (5 детей с ИМ, вызванным вирусом цитомегалии (ЦМВ), 9 детей с ИМ, вызванным вирусом простого герпеса (ВПГ) и 43 ребенка с ИМ неуточненной этиологии). Больные были госпитализированы в инфекционное отделение 3-й городской больницы (главный врач — кандидат медицинских наук А.Н. Орешин) и детскую инфекционную больницу им. Г.Е. Сибирцева (главный врач - кандидат медицинских наук В.Д. Бекетова) г.Томска. Диагноз ИМ устанавливали по клинико-гематологической картине в соответствии с классификацией А.А. Колтыпина [Учайкин В.Ф., 1999]. Возбудитель ИМ идетифицировали с помощью серологических методов: с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) (Ig А, М, G к вирусному капищному антигену (VCA) и Ig G к раннему антигену (ЕА) ВЭБ), реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) (антитела к Yersinia pseudotuberculosis); методом иммуноферментного анализа (ИФА) (Ig М, G к ЕА, VCA, Ig G к ядерному антигену ВЭБ, Ig М, G к ЦМВ, ВПГ, суммарные антитела к Toxoplazma gondii, к Chlamydia); а также методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (ДНК ВЭБ, ЦМВ, ВПГ). Для дифференциальной диагностики ИМ с дифтерией использовали РПГА (антитела к экзотоксину Corynebacteri-um diphtheriae), с вирусными гепатитами - ИФА (HbsAg (поверхностный антиген вируса гепатита В), Ig М, G к HbcorAg (к ядерному антигену вируса гепатита В) и к вирусу гепатита С). Кроме того, всем без исключения больным ИМ проводилась серодиагностика сифилиса (реакция Вассермана, реакция микропреципитации) и ВИЧ-инфекции (ИФА, иммуноблот).

Больные были обследованы в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания, в период реконвалесценции и через

16-18 месяцев после болезни.

Группу контроля составили 56 относительно здоровых детей (38 мальчиков и 18 девочек): 19 детей в возрасте 3-6 лет и 37 детей в возрасте 7-14 лет.

Материалом исследования являлась периферическая кровь.

Для подсчета лейкоцитарной формулы применяли метод лейкоконцент-рации крови (с тритоном Б) [Меньшиков В В., 1987]. Для идентификации "атипичных мононуклеаров" (AM) использовали цитопатологические критерии, предложешше Э.И. Терентьевой, Н.М. Чирешкиной [1971] и В.Р. Кара-бановым, Е.К. Тринус [1991]. Выделение лимфоцитов из крови проводили на градиенте плотности Ficoll-Paque ("Pharmacia", Швеция) (1,077 г/см3), моноцитов - на градиенте плотности фиколл-урографина (1,082 г/см3) [Новиков А.К., Новикова В.И., 1979]. Посев клеточных культур для хромосомного анализа лимфоцитов осуществляли по методу Е.Д. Гольдберга и соавт. [1992], обработку культур и приготовление препаратов - по методу Moorhead P.S. е.а. [1960]. У каждого обследуемого анализировали не менее 100 метафазных пластинок. Учитывали общее количество клеток с хромосомными нарушениями, количество аберраций хромосом (на клетку), количество клеток с изменением числа (гипер- и полиплоидные клетки) и нарушениями структуры хромосом, а также типы структурных аберраций хромосом: хромосомные и хроматидные разрывы (одиночные и парные фрагменты), хроматидные ("кресты") и хромосомные (дицентрические и кольцевые хромосомы) обмены [Бочков Н.П., 1971]. Для проведения микроядерного анализа лимфоцитов в культуру клеток вносили фито-гемагглютинин (ФГА) ("Difko", Германия) (0,01 мг/мл) или липополисахарид (ЛПС) Escherichia coli ("Sigma", США) (0,01 мг/мл). Результаты анализа выражали количеством клеток, содержащих микроядра (%) [Ильинских H.H. и соавт., 1992]. Исследование активности эксцизионной ДНК-репарации в лимфоидных клетках проводили методом сцинтилляционной радиометрии, в качестве мутагена использовали 4-нитрохинолиноксид. Для выражения результатов рассчитывали индекс стимуляции (ИС) репаративного синтеза [Засухина Г.Д., 1975]. Апоптоз лимфоцитов индуцировали в условиях in vitro с использованием солевого раствора Дульбекко, не содержащего Ca** ("Sigma", США) [Jiang С., 1993]. Электрофорез ДНК проводили в 1,5% агарозном геле с добавлением 1 мкг/мл бромистого этидия при напряжении 20 В/см в течение 30 мин [Marmur J., 1961]. Содержание ДНК оценивали дифениламиновым методом [Серебров В.Ю., 1999]. Для оценки морфологии апоптотических изменений лимфоцитов использовали цитопатологические

критерии, предложенные S.G. Martin е.а. [Маянский А.Н., 1997]. Субпопуляции лимфоидных клеток периферической крови определяли с помощью моноклональных антител (НПО "Сорбент", г. Москва) в лимфо-цитотоксическом тесте [Петров Р.В. и соавт., 1992]. Функциональную активность Т- и B-клеток исследовали в реакции бластной "трансформации лимфоцитов (РБТЛ) с ФГА (0,01 мг/мл), ЛПС Escherichia coli (0,01 мг/мл) и туберкулином (0,01 мл на пробу). Результаты теста выражали количеством бластных клеточных форм (%) [Самойлина Н.Л., 1970]. Определение Сзь-рецепторов моноцитов проводили методом ЕАС-розеткообразования [Фрейдлин И.С., 1984], Fcy-рецепторов - методом ЕА-розеткообразования [Земсков В.М. и соавт., 1985]. Изучение фагоцитоза моноцитами частиц нейтрального красного осуществляли с помощью фотоколориметра КФК-2 при длине волны 540 нм. Результаты выражали в единицах оптической плотности (опт.ед.) [Михеенко Т.В. и соавт., 1990]. Количество лизосом в моноцитах определяли методом J.H. Khavkina., I.S. Freidlin [1977]. Исследование проводили с помощью микроскопа МБИ-15-2 в люминесцентном режиме. Вычисляли суммарный показатель люминесценции (%). Исследование поверхностной архитектоники лимфоцитов и моноцитов проводили методом сканирующей электронной микроскопии. Препараты готовили по методике Г.И. Козинца и соавт. [1979]. Высушенные препараты напыляли медью в вакуумной камере JEE-4B ("ЛЮЬ", Япония) при давлении 10"5 атм в течение 2-3 мин. Исследование препаратов производили с помощью электронного микроскопа «JEM-100CX II» с растровой приставкой ASED-4D ("ЛЮЬ", Япония) при напряжении 20 кВ под углом наклона 0-30°. Измерение содержания плотных веществ в мононуклеарах периферической крови осуществляли с помощью поляризационно-интерференционного микроскопа Biolar PJ фирмы PZO (ПНР) методом однородного интерференционного поля с большим раздвоением изображения при длине волны монохроматического света 546 нм. Диаметр клеток измеряли с помощью измерительного окуляра с микрометрической линейкой (цена одного деления 1,75 мкм) [Гольдберг Е.Д. и соавт., 1983]. Цитохимическое определение содержания ДНК в ядрах лимфоцитов, моноцитов и AM проводили методом фотометрии реакции Фельгена [Козинец Г.И. и соавт., 1986]. Измерения производили на люминесцентном микроскопе «ЛЮМАМ-И2» фирмы ЛОМО с фотометрической насадкой ФМЭЛ-1А одноволновым методом при длине волны монохроматического света 546 нм, зонд 0,5. Результаты выражали в относительных единицах оптической плотности (отн.ед.). РНК-содержащие структуры ядрышек мононуклеарных клеток выявляли по методу Г.И. Козинца и соавт.

[1978]. Рассчитывали иуклеолярный коэффициент (НК). Исследование активности кислой фосфатазы в лимфоцитах, моноцитах и AM осуществляли по Goldberg, Barka; активности а-нафтилацетатэстеразы, сукцинат- и а-глицерофосфатдегидрогеназы - по Hayhoe, Quaglino; содержания липидов -по Sheehan, Storey, гликогена - по McManus [Хейхоу Дж.Ф.Г, Кваглино Д, 1983]. Для выражения результатов рассчитывали средний цитохимический коэффициент.

Для математического анализа полученных данных использовали методы статистического описания и проверки статистических гипотез [Боровиков В, 2001]. Проверку нормальности выборок проводили с помощью оценок коэффициентов асимметрии и эксцесса, а также критериев Хи-квадрат и Колмогорова-Смирнова. При нормальном распределении переменных проверку гипотезы о равенстве выборочных средних выполняли с использованием t-критерия Стьюдента для зависимых и независимых выборок. В случае отсутствия согласия данных с нормальным распределением для оценки различий между зависимыми и независимыми выборками применяли непараметрические критерии Вилкоксона и U Манна-Уитни соответственно. Различия считали достоверными при р-уровне<0,05. Степень зависимости между различными параметрами внутри исследуемых групп оценивали с помощью ранговой корреляции Спирмена. Корреляцию считали значимой при р-уровне<0,05.

Результаты исследований и их обсуждение. Полученные нами данные указывают на то, что течение ИМ сопровождается явлениями выраженной генетической нестабильности. Так, у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, страдающих ИМ-ВЭБ и ДИМ, в период выраженных клинико-гематологических проявлений заболевания регистрировались повышение (по сравнению с нормой) общего количества лимфоцитов с хромосомными аберрациями (соответственно в 2,8 и 4,4 раза при ИМ-ВЭБ и в 2,6 и 3,6 раза при ДИМ), в основном, за счет клеток с нарушениями структуры хромосом, а также увеличение числа хромосомных нарушений на клетку. Нарушения структурной организации хромосомного аппарата лимфоцитов сохранялись, несмотря на снижение их выраженности сравнительно с острым периодом болезни, как в фазу реконвалесценции, так и через 16-18 мес после болезни. При этом у детей в возрасте 3-6 лет, страдающих ВЭБ-мононуклеозом и ДИМ, отмечалось повышенное (по сравнению с контролем) содержание хроматидных нарушений, в то время как у пациентов в возрасте 7-14 лет фиксировалось увеличение числа как хроматидных, так и хромосомных типов структурных аберраций относительно контрольных значений (рис. 1).

1300 1200 1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0

1100 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 0

% Здесь и на рис. 2-8:

□ здоровые дети 3-6 лет

-I □ здоровые дети 7-14 лет

Пдети 3-6 лет, больные ИМ (острый период болезни) -I □ дети 3-6 лет, больные ИМ (период реконвалесценции)

□ дети 3-6 лет через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ - Пдети 7-14 лет, больные ИМ (острый период болезни)

а Пдети 7-14 лет, больные ИМ (период реконвалесценции)

^ □ дети 7-14 лет через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ

ОС

сн

=н

П

ш*

т

т

Инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Барр

I

й

К

Общее количество клеток с хромосомными нарушениями (%)

Число хромосомных нарушений на клетку

%

Клетки с нарушениями структуры хромосом (%)

Хромосомные обмены (%)

Хромосомные разрывы (%)

Хроматидные обмены (%)

Хроматидные разрывы (%)

1ш

1%,

й

А

Г т П

Икй:

ЁУ

Инфекционный мононуклеоз другой этиологии

кй

Общее количество Число хромосомных Клетки с Хромосомные Хромосомные Хроматидные Хроматидные

клеток с нарушений на клетку нарушениями обмены (%) разрывы (%) обмены (%) разрывы (%)

хромосомными структуры хромосом

нарушениями (%) , (%)

Рис. 1. Хромосомные нарушения в лимфоцитах периферической крови (% от нормы) у детей, больных инфекционным мононуклеозом (ИМ)

При анализе спектра хромосомных нарушений в лимфоцитах периферической крови у детей, больных ИМ, помимо структурных аберраций хромосом нами были обнаружены клетки с измененным числом хромосом, содержание которых было максимальным в острую фазу заболевания. В структуре данных клеток при ИМ-ВЭБ преобладали полиплоидные лимфоциты, при ДИМ - клетки с гиперплоидным набором хромосом.

Микроядерный тест лимфоцитарных клеток у детей, страдающих ИМ, позволил выявить повышение (по сравнению с контролем) количества ФГА-и ЛПС-стимулированных лимфоцитов с микроядрами. Между тем, у пациентов с ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет в острый период болезни число микроядросодержащих лимфоидных клеток, активированных ЛПС, достоверно превышало таковое у больных ИМ-ВЭБ младшего возраста.

Присутствие у больных ИМ повышенного (сравнительно с нормой) числа микроядросодержащих клеток в лейкоцитарных культурах, обработанных ФГА и ЛПС, является одним из дополнительных доказательств цитогенетической нестабильности при данной инфекции. Известно, что микроядра есть не что иное, как ядерный материал. Образование микроядер происходит в поздней телофазе из ацентрических фрагментов и целых, отставших при расхождении хромосом, то есть может быть результатом как структурных, так и численных хромосомных аберраций [Schmid W., 1975; Ильинских H.H. исоавт., 1991; ДышеваН.М., 1992].

Сравнительное статистическое изучение показателей хромосомных нарушений в лимфоцитарных клетках при ИМ в зависимости от этиологического варианта инфекции показало, что у детей в возрасте 3-6 лет, страдающих ДИМ, в острый период заболевания количество хроматидных обменов в лимфоцитах достоверно (в 2,4 раза) превышало данный показатель у детей, больных ИМ-ВЭБ, соответствующего возраста. У пациентов же старшей возрастной группы, больных ДИМ, в фазу разгара инфекции оказалось существенно выше, чем у детей аналогичного возраста при ИМ-ВЭБ, количество ЛПС-активированных микроядросодержащих клеток. Наряду с этим, у пациентов с ДИМ восстановление до уровня нормы числа ФГА- и ЛПС-активированных лимфоцитарных клеток с микроядрами и исчезновение из периферической крови лимфоцитов с измененным количеством хромосом отмечалось в более ранние сроки наблюдения, нежели при ВЭБ-мононуклеозе. Кроме того, у детей в возрасте 7-14 лет, переболевших ИМ-ВЭБ, через 16-18 мес после болезни число хромосомных разрывов в 7,5 раза превосходило их "нормальное" содержание у соответствующей группы пациентов с ДИМ.

Вероятно, указанные шменения обусловлены, с одной стороны, более "мягким" повреждающим действием ВЭБ на "лимфоциты-мишени", с другой - наличием у ВЭБ более широкого спектра механизмов "ускользания" от защитных факторов организма по сравнению с другими вирусами, в частности герпесвирусами (ЦМВ и ВПГ) [Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991], что определяет возможность персистенции и продолжительного повреждающего действия возбудителя на хромосомный аппарат "клеток-мишеней" с возникновением хромосомных аберраций как на стадии активного вирусного воспроизводства, так и в отдаленном периоде после болезни.

Имеются также данные [Ауэрбах ILL, 1978; Дубинин Н.П., 1978] о том, что накопление генетически измененных клеток в организме может быть обусловлено подавлением активности ДНК-репаративных клеточных систем. В настоящее время доказана способность различных представителей группы вирусов герпеса блокировать отдельные этапы ДНК-репарации, кодируя гены, детерминирующие синтез соответствующих ферментов [Засухина Г.Д., Синелыцикова Т.А., 1993]. Однако проведенная нами оценка интенсивности ДНК-репаративного синтеза в лимфоцитах периферической крови, напротив, позволила выявить у детей в возрасте 3-6 лет, больных ИМ-ВЭБ, повышение (в 1,6 раза) индекса стимуляции (ИС) репарационной активности клеток по сравнению с таковой у здоровых детей соответствующего возраста. В то же время у детей в возрасте 7-14 лет, страдающих ИМ-ВЭБ, и у пациентов обеих возрастных групп с ДИМ отмечалось увеличение (сравнительно с контролем) частоты определения ИС от 1 до 2. Обнаруженные изменения сохранялись в период клинической реабилитации и через 16-18 мес после перенесенного ИМ.

Чрезвычайно важную роль в патогенезе вирусных инфекций, в том числе ИМ, играет апоптоз - «физиологическая» форма клеточной смерти, которая реализуется посредством заложенных в генотипе клетки механизмов самоуничтожения и морфологически характеризуется уменьшением размеров клетки, уплотнением и фрагментацией хроматина.

В ходе проведенного исследования при ИМ-ВЭБ и ДИМ было зарегистрировано угнетение способности лимфоцитов периферической крови к ало птозу в условиях in vitro.

У детей обеих возрастных групп, страдающих ИМ, вне зависимости от типа возбудителя инфекции, содержание фрагментированной ДНК в лимфоцитарных клетках в острый период болезни оказалось сниженным относительно нормы. Данные изменения сохранялись в фазу

реконвалесценции. Кроме того, в период клинического выздоровления у больных ИМ в возрасте 7-14 лет отмечалось снижение числа апоптозных клеток по сравнению с таковым у здоровых детей аналогичного возраста. У детей, переболевших ИМ, через 16-18 мес после болезни показатели апоптоза лимфоцитов (за исключением содержания фрагментированной ДНК у пациентов в возрасте 3-6 лет, перенесших ДИМ) нормализовались (рис. 2).

Инфгкционный мононуклсаз, □ыаазнный % оирусом Зпштойна-Бзрр

Инфзкципнный ианпму:ш2аэ другой этиологии

Фрагментироэзнная Алоптозные клетки ДНК (%) (%)

Фрашешировэнная Апото5ные клетки ДНК(%) (%)

Рис. 2. Апоптотическая активность лимфоцитов периферической кров-и (% от нормы) у детей, больных инфекционным монокуклеозом

Известно, что наряду с системой ДНК-репарации и апоптозом, в организме существуют и другие механизмы и системы поддержания цитогенетической нормы, в частности, как было указано ранее, иммунная система. В литературе имеются сведения о тесной взаимосвязи между иммуносупрессорной активностью вирусов и их повреждающим влиянием на хромосомный аппарат клеток организма-хозяина [Ильинских H.H., 1984, 1986; Ильинских И.Н, 1988]. В связи с тем, что иммунологическая неадекватность является первым и необходимым условием развития неоплазий [Семенов Б.Ф, 1976], нами было проведено исследование структурно-метаболического и функционального статуса мононуклеаров периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет при ИМ-ВЭБ и ДИМ.

Так, изучение количественных показателей белой крови позволило выявить у больных ИМ в острую фазу заболевания повышение (по сравнению с нормой) общего количества лейкоцитов (OKJI), абсолютный лимфоцитоз, увеличение процентного и абсолютного содержания AM и палочкоядерных нейтрофилов на фоне снижения относительного числа сегментоядерных гранулоцитов (у детей обеих возрастных групп), абсолютный моноцитоз (у детей в возрасте 7-14 лет). При сравнительном анализе указанных показателей в зависимости от этиологии инфекции статистически значимых

различий обнаружено не было. Вместе с тем, в период клинического выздоровления у пациентов в возрасте 7-14 лет с ИМ-ВЭБ относительное количество лимфоцитов оказалось существенно выше, а относительное и абсолютное число моноцитарных клеток, напротив, достоверно ниже (соответственно в 2,6 и 3,2 раза) их "нормальных" значений у ДИМ-реконвалесцентов аналогичного возраста. Кроме того, у пациентов младшего возраста, больных ДИМ, на стадии клинической реабилитации содержание АМ в среднем в 1,8 раза превосходило их количество у соответствующей группы детей с ИМ-ВЭБ. Через 16-18 мес после перенесенного заболевания у 7-14-летних пациентов с ДИМ абсолютное число АМ также оставалось более высоким (в 1,7 раза) по сравнению с таковым у детей того же возраста с ВЭБ-мононуклеозом.

Изменения лейкоцитарной формулы периферической крови при ИМ согласовывались с результатами анализа субпопуляционного состава циркулирующих лимфоцитов. Так, у детей, страдающих ИМ-ВЭБ и ДИМ, вне зависимости от возрастных особенностей организма, в период разгара заболевания отмечалось увеличение (по сравнению с нормой) абсолютного числа С072+-В-клеток (рис. 3). Кроме того, у пациентов обеих возрастных

% Инфекционный шнануклеог, 6001 вызванный

500 -400 •

300 • 200 100 о

вируса,-л Зпштейна-Барр

Т

Т]"

]гр

Г1

L-Li

CD3+ (Г/л)

¥г

iiti

iJ3_1.

CD 16+ t Г/л)

т..

u

j

C072+ (Г/л)

%

Бoo Инфекционный мвнамунпеаз

50U-iOD-30Q 200 -1000

ЙРУГСИ ЭТИОЛОГИЯ

ггйт1>П tfjllml пзТ

1 1 ,

СОЗ+(Г/л) CD8+ (Г/л) CD 16+ (Г/л) CD72+(Г/л)

Рис 3 Субпопупяцмонный состав лимфоцитов периферический крови

(% от нормы) у детей, больны*, инфекционным мононуклеоэом

групп, больных ИМ-ВЭБ, и у детей в возрасте 3-6 лет с ДИМ в данный период наблюдения было зафиксировано увеличение абсолютного содержания лимфоцитов, несущих CD8- и С016-антигены, относительно

такового у здоровых детей соответствующего возраста (рис. 3).

В период ремиссии у пациентов младшей возрастной группы с ИМ-ВЭБ и ДИМ абсолютное количество С016+-клеток по-прежнему превышало норму. Абсолютное же число С08+-лимфоцитов (у пациентов в возрасте 3-6 лет с ИМ-ВЭБ и ДИМ) и С072+-В-клеток (у детей обеих возрастных групп с ИМ-ВЭБ и ДИМ) оставалось выше контрольных значений как в фазу клинического выздоровления, так и в отдаленном периоде после болезни. При этом у реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ младшей возрастной группы абсолютное содержание С072+-лимфоцитов оказалось достоверно ниже (в 1,6 раза) такового у 3-6-летних ДИМ-реконвалесцентов (рис. 3).

Через 16-18 мес после перенесенного ИМ-ВЭБ и ДИМ у пациентов в возрасте 7-14 лет регистрировалось увеличение (относительно нормы) абсолютного количества лимфоцитарных клеток, экспрессирующих CD3-антиген (рис. 3).

Увеличение численности лимфоцитов с фенотипом CD8+ и CD 16+ у детей, страдающих ИМ-ВЭБ и ДИМ, служит благоприятным прогностическим признаком заболевания, поскольку известно, что CD8+- и NK-клетки участвуют в распознавании вирусопределяющих эпитопов на поверхности инфицированных B-лимфоцитов и в регуляции роста трансформированных вирусом клеток, препятствуя тем самым малигнизации лимфопроли-феративного процесса [De PaoliP. е.а., 1990; MiyawakiT. е.а., 1991; NakataM. е.а., 1992; Gratama J.W. е.а., 1994; Pierard I. е.а., 1996; Wilson A.D. е.а., 1998; Серебряная H.A. и соавт., 1998; Малышева O.A. и соавт., 2001]. При этом с помощью сравнительной статистической оценки количественного соотношения различных CD-фракций лимфоцитов при ИМ-ВЭБ и ДИМ, было обнаружено, что у детей в возрасте 7-14 лет, больных ВЭБ-мононук-леозом, в период выраженной клинико-гематологической симптоматики заболевания абсолютное число С01б+-несущих клеток в 2,9 раза превосходило их "нормальное" содержание у пациентов с ДИМ аналогичного возраста.

Исследование реакции бласттрансформации лимфоцитов периферической крови (РБТЛ) на митогенное (ФГА, ЛПС) и антигенное (туберкулин) воздействие позволило выявить у 3-6-летних детей, больных ИМ-ВЭБ и ДИМ, в острый период заболевания повышение интенсивности ЛПС-стимулированной пролиферации клеток по сравнению с таковой в контроле. Кроме того, у детей старшей возрастной группы в фазу разгара ИМ-ВЭБ степень ЛПС-активированной бласттрансформации лимфоцитарных клеток, несмотря на соответствие норме, оказалась статистически значимо выше

"нормальной" величины аналогичного показателя у 7-14-летних пациентов с ДИМ (рис. 4).

На стадии клинического выздоровления у детей в возрасте 3-6 лет с ВЭБ-мононуклеозом уровень РБТЛ, индуцированной ЛПС, нормализовался. В отдаленном же периоде после ИМ-ВЭБ трансформационная активность лимфоцитарных клеток при воздействии ЛПС у пациентов данной группы наблюдения опять-таки превышала контрольный уровень. Интенсивность ЛПС-стимулированной пролиферации лимфоцитов у пациентов обеих возрастных групп с ДИМ превышала норму как в фазу реконвалесценции, так и через 16-18 мес после болезни (рис. 4).

%

250 200 150 100 ■ 50 -

Инфекционный мононуклгоа, оызэанный вирусом Эпштсйна-Бсрр

ЗТ*-

При стимуляции ФГА (%) При стимуляции ЛПС (%)

%

250 200 • 150 100 50

0

При стимуляции туберкулином (%)

Инфекционный шнонуклаоз другой этиологии

-и

д.

При стимуляции ФГА (%) При стимуляции ЛПС (%) При стимуляции

туберкулином (%)

Рис. 4 Реакция бласттрансформации лимфоцитов периферической кроеи <% от нормы) у детей, больных инфекционным мононуклеозом

На фоне увеличения активности ЛПС-РБТЛ (относительно контрольных значений) у больных вышеуказанных групп наблюдения в острый период ИМ нами было зарегистрировано снижение интенсивности бласттрансформации Т-клеток, стимулированной туберкулином (у детей в возрасте 3-6 лет с ИМ-ВЭБ) и ФГА (у детей в возрасте 7-14 лет с ИМ-ВЭБ и ДИМ) (рис. 4).

Угнетение при ИМ ФГА-активированной бластной модификации лимфоцитов, по-видимому, может быть обусловлено способностью герпесвирусов избирательно подавлять функциональную активность Т-клеток, контролирующих пролиферативную фазу В-клеточного ответа на вирусное воздействие [Чередеев А.Н., 1989; Йегер Л., 1990].

На стадии клинического выздоровления у детей в возрасте 7-14 лет с ИМ-ВЭБ и у пациентов обеих возрастных групп с ДИМ уровень РБТЛ, индуцированной ФГА, восстанавливался до нормы. Вместе с тем, пролиферативная реакция лимфоцитов на воздействие туберкулином у 3-6-летних реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ была менее выраженной, чем в контроле (рис. 4).

Согласно И.Н. Ильинских [1988], снижение интенсивности реакции бласттрансформации Т-лимфоцитов при вирусном заражении может быть связано с увеличением в этих клетках таких цигогенетических нарушений, как разрывы хромосом и моносомия. Это мнение согласуется с предположением W.W. Niçois [1970] о резистентности аберрантных лимфоцитов к митотическим стимулам.

К настоящему моменту времени доказано также, что некоторые вирусы, в том числе вирусы группы герпеса, способны изменять (усиливать или подавлять) реакцию Т- и B-лимфоцитов на митогены и антигены, действуя на клетки моноцитарно-макрофагальной системы [Roberts N.J., Steigbigel R.T, 1978; Loon A.M. e.a, 1979].

Учитывая то, что моноциты являются ключевыми клетками в инициации и регуляции иммунного ответа при инфекционном процессе, в частности при ИМ, осуществляют "захват" и инактивацию возбудителя [Исаков В.А. и соавт, 1999], нами была изучена способность моноцитарных клеток к фагоцитозу.

В острый период ИМ-ВЭБ отмечалось увеличение количества лизосом в моноцитах у детей в возрасте 7-14 лет и, напротив, снижение их числа у детей младшей возраста относительно таковых в контроле. У больных ДИМ в данный период наблюдения фиксировалось пониженное (по сравнению с нормой) процентное содержание Сзь+-моноцитов (у пациентов 3-6 лет) и клеток, экспрессирующих F^-рецепторы (у 7-14-летних пациентов) (рис. 5). В период клинического выздоровления содержание лизосомных гранул в моноцитах (у детей обеих возрастных групп с ИМ-ВЭБ) и относительное число Сзь- и Fe-,-позитивпых клеток (соответственно у 3-6- и 7-14-летних пациентов с ДИМ) нормализовались. Количество лизосом в моноцитах у ДИМ-реконвалесцентов старшей возрастной группы повышалось по сравнению с контрольными значениями. Однако относительное и абсолютное содержание моноцитов, экспрессирующих С3ь-рецепторы (у 7-14-летних пациентов при ИМ-ВЭБ и ДИМ), и абсолютное количество Р^-клеток (у ИМ-ВЭБ-реконвалесцентов старшего возраста) снижались ниже нормы (рис. 5).

203 -150 -100 -50

□ънпамный □к.руеом Эпипейю-Барр

гЕт^

п

¡-Зг f! J

Я 1

пЕ-

X

гМт

Ом

<уо С3+-клетки (%) Fe+-клетки (%)

250 I Мифгкцивнный мононухлеоэ

200 ■ 150 -100 50

другой этиологии

X

Лизосомы (%)

bWi г*

JL

С3+-клетки (%) Fc+-KJieTKn (%) Лизосомы (%)

Рис 5 Фагоцитарная активность моноцитов периферической крови (% от нормы) у детей, больных инфекционным мононуклеозом

Увеличение числа лизосомных гранул в моноцитах при ИМ-ВЭБ и ДИМ связано, надо думать, с активизацией клеток. Между тем, снижение при ИМ числа Сзв- и F^-несущих моноцитов в периферической крови, по-видимому, может обусловливаться, во-первых, компенсаторным поступлением в периферический кровоток незрелых клеточных элементов, не экспрес-сирующих указанные рецепторы на поверхностной мембране; во-вторых, способностью инфекционных возбудителей, в частности герпесвирусов, ингибировать синтез и экспрессию, а также блокировать рецепторы иммунокомпетентных клеток, необходимые для реализации их иммунных функций [Carney W.P., Hirsch M.S., 1981; Букринская А.Г., Жданов В.М., 1991].

В отдаленном периоде после перенесенного ИМ-ВЭБ относительное и абсолютное число С3ь+-моноцитов у 7-14-летних детей оставалось по-прежнему сниженным по сравнению с нормой. Процентное же содержание Fсу-позитивных моноцитарных клеток у пациентов указанной группы наблюдения и количество лизосом в моноцитах у 3-6-летних детей, перенесших ВЭБ-инфекцию, были достоверно выше аналогичных значений у пациентов соответствующего возраста, переболевших ДИМ (рис. 5).

Функциональная активность иммунокомпетентных клеток, как известно,

тесно связана с особенностями их морфоструктуры [De Haren Е. е.а., 1973; Polliak А. е.а., 1973].

Результаты проведенного анализа поверхностной архитектоники мононуклеаров периферической крови свидетельствуют о том, что в фазу развернутой клшшко-гематологической картины ИМ-ВЭБ и ДИМ отмечались однонаправленные изменения: увеличение количества гладких форм лимфоцитов при одновременном снижении числа клеток с нитевидными и ламеллярными выростами на мембране (у детей в возрасте 3-6 лет) по сравнению с нормой; появление в крови лимфоцитов с переходным типом поверхностного микрорельефа (у детей обеих возрастных групп).

На стадии клинического выздоровления у детей младшего возраста с ИМ-ВЭБ количество гладких и ламеллярных форм лимфоцитарных клеток нормализовалось, количество лимфоцитов с нитевидными образованиями оставалось сниженным по сравнению с контрольными значениями. Вместе с этим, у реконвалесцентов в возрасте 7-14 лет с ИМ-ВЭБ на фоне снижения числа ворсинчатых клеток отмечалось увеличение числа лимфоцитов с ламеллярными выростами, пузырями и углублениями на мембране относительно таковых у здоровых детей аналогичного возраста. У ДИМ-реконвалесцентов младшей возрастной группы содержание лимфоцитов с гладкой поверхностью по-прежнему сохранялось выше нормы, количество клеток с выростами (ворсинками, складками и раффлами) повышалось до уровня контроля. Переходные формы лимфоцитарных клеток выявлялись у детей обеих возрастных групп с ИМ-ВЭБ и ДИМ как в фазу реконватесценции, так и через 16-18 мес после болезни. Кроме того, у детей в возрасте 7-14 лет в отдаленном периоде после перенесенного ИМ ВЭБ- и другой этиологии содержание ламеллярных лимфоцитов все еще превышало норму. Количество же гладких форм клеток у детей старшей возрастной группы, переболевших ДИМ, напротив, оказалось сниженным по сравнению с контролем.

Обнаруженные изменения поверхностной архитектоники лимфоцитарных клеток при ИМ могут быть обусловлены, с одной стороны, увеличением в популяции лимфоцитов количества Т-клеток, для которых гладкий тип поверхностной мембраны является дифференциальным признаком [Polliack А. е.а, 1973; Крымский Л.Д., 1976], с другой (что наиболее вероятно) - понижением функциональной активности инфицированных лимфоцитов. Одной из причин пониженного содержания в крови у детей младшей возрастной группы в острый период ИМ-ВЭБ и ДИМ количества лимфоцитов с нитевидными и ламеллярными мембранными образованиями,

очевидно, могла быть трансформация зараженных вирусом В-лимфоцитов (для которых данные типы поверхностной архитектоники более характерны, нежели для Т-лимфоцитов) в атипичные клетки, что подтверждается результатами корреляционного анализа. Так, например, при ИМ-ВЭБ в острый период заболевания отмечалась отрицательная корреляция между абсолютным количеством АМ и процентным содержанием лимфоцитов с ламеллярной поверхностью (г=-0,44; р<0,05). Кроме того, наше предположение согласуется со сведениями О.В. Волковой и соавт. [1987] о том, что вирусы способны оказывать дезорганизующее влияние на системы цитоскелета, вызывая, тем самым, укорочение и снижение числа ворсинок на клеточной поверхности. В частности, у ИМ-ВЭБ-реконвалесцентов относительное и абсолютное количество атипичных клеток оказалось положительно коррелированным с числом гладких форм лимфоцитов (соответственно г=0,61; р<0,05 и г=0,56; р<0,05).

Вопрос об особенностях поверхностной ультраструктуры АМ до настоящего времени остается спорным. Обнаруженные нами в крови у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ лимфоциты с переходной конфигурацией поверхностного микрорельефа, шаровидная часть которых была покрыта микроворсинками, вытянутая - складками (в норме данные клетки не выявлялись), вероятно, также могут быть идентифицированы как АМ. Так, например, у пациентов с ИМ-ВЭБ в период клинического выздоровления регистрировалась положительная связь между содержанием переходных форм лимфоцитарных клеток и абсолютным количеством АМ (г=0,55; р<0,05).

Изучение поверхностной ультрасгрукгуры моноцитов периферической крови позволило выявить на стадии разгара ИМ-ВЭБ снижение числа моноцитов с ворсинками (у детей в возрасте 3-6 лет) и пузырями (у детей в возрасте 7-14 лет) при одновременном повышении содержания моноцитар-ных клеток с гладкой мембраной (у пациентов обеих возрастных групп) относительно таковых у здоровых детей соответствующего возраста. У пациентов старшей возрастной группы с ДИМ в данный период наблюдения количество моноцитов с углублениями на поверхности также оказалось выше контрольных значений.

В фазу клинической ремиссии на фоне повышенного (по сравнению с нормой) содержания гладких форм моноцитов (у детей в возрасте 7-14 лет с ИМ-ВЭБ и у 3-6-летних детей с ДИМ) количество клеток с микроворсинками (у детей обеих возрастных групп с ВЭБ-мононуклеозом и у детей младшего возраста с ДИМ) было сниженным (ниже фоновых значений), а число

моноцитов с углублениями на мембране (у детей старшего возраста при ИМ-ВЭБ и ДИМ), напротив, превосходило контрольный уровень. У реконвалесцентов в возрасте 3-6 лет с ИМ-ВЭБ также повышалось (выше нормы) количество складчатых и раффлированных моноцитарных клеток.

В отдаленном периоде после перенесенного ВЭБ-мононуклеоза распределение моноцитов по характеру поверхностного рельефа соответствовало таковому у здоровых детей. У детей, переболевших ДИМ, содержание гладких клеток (у пациентов младшего возраста) и моноцитов с углублениями на мембране (у пациентов старшей возрастной группы) по-прежнему превышало уровень контроля.

Наряду с методом электронно-микроскопической идентификации и функциональной оценки Т- и В-клеток, существует и до сих пор применяется менее сложный в методическом плане и более доступный в техническом отношении способ систематизации лимфоцитов на светооптическом уровне, основой которого является диаметр клетки и ядра.

Так, при ИМ-ВЭБ (у детей в возрасте 3-6 лет) и ДИМ (у детей обеих возрастных групп) в период выраженных клинико-гематологических проявлений заболевания устанавливалось увеличите среднего диаметра лимфоцитов и моноцитов, обусловленное повышением количества крупноклеточных форм за счет снижения числа "малых" и "средних" клеток относительно таковых в контроле. При этом у детей старшей возрастной группы, страдающих ДИМ, диаметр моноцитарных клеток статистически значимо превышал "нормальную" величину показателя у пациентов с ИМ-ВЭБ соответствующего возраста.

Поскольку ИМ - лимфопролиферативное заболевание, представляется допустимым предположить, что увеличение среднего диаметра лимфоцитов у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ обусловливается присутствием в периферической крови пролиферирующих форм В-лимфоцитарных клеток и АМ.

Гипертрофия моноцитов при ИМ может определяться так называемой "медленной" (в течение нескольких дней) активацией клеток, эффекторной ролью которых является фагоцитоз вирусинфицированных клеточных элементов [Маянский Д.Н., 1981; Любезная Е.Б., 1991; Фролова О.В., 1998]. В частности в фазу разгара ДИМ регистрировалась положительная корреляция между размером моноцитов и абсолютным количеством Рс,+-клеток (г=0,36; р<0,05).

В период клинического выздоровления диаметр моноцитарных клеток у детей младшего возраста с ИМ-ВЭБ и ДИМ нормализовался, у ДИМ-реконвалесценгов в возрасте 7-14 лет — оставался выше контрольных

значений. Размер клеток лимфоцитарного ряда у пациентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ обеих возрастных групп на стадии реконвалесценции также превышал норму. Между тем, при анализе процентного распределения лимфоцитов и моноцитов по величине диаметра у детей с ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет и у пациентов с ДИМ младшей и старшей возрастных групп на данной стадии течения заболевания прослеживалась тенденция к нормализации числа микро- и макроформ клеток.

Через 16-18 мес после перенесенного ДИМ размер мононуклеарных клеток у пациентов обеих возрастных групп соответствовал таковому у здоровых детей. Однако у детей, переболевших ВЭБ-мононуклеозом, диаметр лимфоцитов все еще превышал норму.

Не вызывает сомнений то, что функциональная активность лимфоцитов и моноцитов определяется их метаболическим статусом.

Проведенное исследование позволило выявить при ИМ ВЭБ- (у детей в возрасте 3-6 лет) и другой этиологии (у детей обеих возрастных групп) в фазу выраженной клинико-гематологической картины заболевания увеличение (по сравнению с нормой) сухой массы лимфоцитов и моноцитов, что определялось повышенным содержанием в крови больных количества "тяжелых" клеточных форм в результате снижения, главным образом, числа "легких" клеток относительно таковых в контроле. При этом величина плотного остатка в моноцитах у детей в возрасте 7-14 лет, больных ДИМ, была значительно выше сухой массы моноцитарных клеток у пациентов с ИМ-ВЭБ аналогичного возраста.

В период реконвалесценции у пациентов с ДИМ обеих возрастных групп и у детей с ИМ-ВЭБ младшего возраста сухая масса лимфоцитов и моноцитов по-прежнему превышала норму, однако, прослеживалась тенденция к нормализации процентного распределения клеток по содержанию плотных веществ. У реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет сухая масса лимфоцигарных и моноцитарных клеток также оказалась повышенной по сравнению с контролем.

Через 16-18 мес после перенесенного ДИМ сухая масса лимфоцитов (у детей обеих возрастных групп) и моноцитов (у детей младшего возраста) восстанавливалась до нормального уровня. Величина же плотного остатка в моноцитах у пациентов в возрасте 7-14 лет, переболевших ДИМ, оставалась выше нормы. У детей с ИМ-ВЭБ в отдаленном периоде после болезни сухая масса мононуклеарных клеток также сохранялась повышенной относительно контрольных значений. Кроме того, количество плотных веществ в лимфоцитах у пациентов старшей возрастной группы, перенесших ВЭБ-

инфекцию, превосходило их "нормальное" содержание у детей с ДИМ соответствующего возраста.

Указанные изменения (увеличение по сравнению с нормой) сухой массы мононуклеарных клеток при ИМ обусловливались, вероятно, вирусостимулированной активацией и пролиферацией В-лимфоцитов. К примеру, Е.Д. Гольдберг и соавт. [1983] отмечают, что В-клетки, обладающие способностью к антителообразованию, имеют более высокое, нежели Т-лимфоцигы, содержание плотных веществ. К тому же авторами показано, что бластная трансформация лимфоцитов (в том числе в АМ) сопровождается значительным повышением их плотного остатка вследствие приобретения клетками способности синтезировать ДНК.

Поскольку сухая масса мононуклеаров периферической крови является интегральным показателем, отражающим общее содержание в клетке белка и нуклеиновых кислот, нами был проведен дифференциальный цитохимический анализ ДНК- и РНК-синтетической активности лимфоцитов, моноцитов и АМ при ИМ.

Инфекционный конвну:шсаз, пытанный спрусогл Эпштсйна-Бгрр

200

150

1С0

50

о

% РНК

(нуклеолярный коэффициент)

т

?г

200 150 100 50 0

ЛИМФОЦИТЫ моноциты Инфекционный мпнанулгоз % другой этиологии

ЛИМФОЦИТЫ

моноциты

1

Ги,

ПИГИОЦИТЫ

моноциты

200 150 100 50

о

%

1?1

Гц

ЛИМФОЦИТЫ

моноциты

Рис. 9. Содержание нуклеиновых кислот в пимфоцитах и моноцитах периферической крови (% от нормы) у детей, больных инфекционным моконукгкзозом

У детей, больных ИМ-ВЭБ, в фазу выраженных клинико-гематологи-ческих проявлений заболевания уровень синтеза РЖ (нуклеолярный

коэффициент - НК) в клетках лимфо- и моноцитарного ряда превышал норму, оптическая плотность (ОП) ядер мононуклеарных лейкоцитов и содержание ДНК в лимфоцитах отвечали контрольным значениям. Однако количество хромофора в моноцитах у детей в возрасте 3-6 лет, страдающих ИМ-ВЭБ, достоверно превышало уровень контроля и "нормальную" величину родственного показателя у 7-14-летних пациентов с ИМ-ВЭБ (рис. 6).

Наряду с этим, в острый период ДИМ ОП ядер (у детей обеих возрастных групп) и содержание ДНК (у детей в возрасте 7-14 лет) в лимфоцитах оказались ниже таковых в норме и у больных ИМ-ВЭБ; ОП ДНК-связанного красителя (у детей в возрасте 3-6 лет) и содержание ДНК (у детей обеих возрастных групп) в моноцитах, напротив, достоверно превышали контрольный уровень и соответствующие показатели у пациентов, страдающих ВЭБ-мононуклеозом. НК лимфоцитарных клеток у детей с ДИМ в данный период наблюдения, также как и при ИМ-ВЭБ, превосходил норму (рис. 6). Тем не менее, при "неВЭБ-ИМ" активность нуклеолярного аппарата лимфоцитов (у детей в возрасте 7-14 лет) и моноцитов (у детей в возрасте 3-6 лет) была существенно ниже аналогичных значений у больных ИМ-ВЭБ того же возраста.

Анализ процентного распределения Фельген-окрашенных мононуклеарных клеток позволил выявить у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ в фазу разгара заболевания увеличение (по сравнению с нормой) в популяции лимфоцитов числа клеток с "низкой" ОП ДНК (менее 0,19 отн.ед.) в результате снижения содержания клеточных форм со "средней" и "высокой" степенью компактизации ядер (от 0,19 до 0,26 отн.ед. и >0,26 отн.ед.); в структуре моноцитов, напротив, регистрировалось увеличение (сравнительно с контролем) количества клеток с "высокой" ОП ДНК (>0,14 отн.ед.). При этом у пациентов с ДИМ данные изменения носили более выраженный характер, нежели у детей, страдающих ИМ-ВЭБ.

Что касается распределения мононуклеаров крови в зависимости от содержа}гая РНК, то в острый период ИМ ВЭБ- и другой этиологии устанавливалось снижение количества гипербазофильных макронуклео-лярных лимфоцитарных клеток на фоне увеличения числа слабобазофильных лимфоцитов с крупными ядрышками относительно таковых у здоровых детей. У пациентов с ИМ-ВЭБ содержание микронуклеолярных слабобазофильных лимфоцитов также превышало их количество в контроле, у детей с ДИМ — соответствовало нормальным значениям. Со стороны моноцитов у 36-летних детей, больных ИМ-ВЭБ, фиксировались обратные изменения: повышение (по сравнению с нормой) содержания гипербазофильных макро-

нуклеолярных клеток при одновременном снижении числа слабобазофильных микронуклеолярных клеточных форм. У детей с ДИМ в возрасте 7-14 лет в фазу разгара заболевания количество слабобазофильных моноцитов с мелкими, плохо различимыми ядрышками, наоборот, оказалось выше нормы.

Сравнительное цитофотометрическое исследование лимфоцитов, моноцитов и АМ показало, что у детей, страдающих ИМ-ВЭБ, в острый период заболевания ОП и содержание ДНК-фуксина в атипичных клетках превосходили соответствующие значения в лимфоцитах и моноцитах; у больных ДИМ - превышали значения, главным образом, в лимфоцигарных клетках. При этом ОП комплекса "ДНК-краситель" в АМ у пациентов с ДИМ варьировала в более узком диапазоне, нежели у больных ИМ-ВЭБ. Кроме того, при ДИМ отмечалась отрицательная связь между ОП ДНК в АМ и уровнем конденсации хроматина в моноцитарных клетках (1=-0,44; р<0,05). Кривая распределения АМ в зависимости от ОП ядер у детей, больных как ИМ-ВЭБ, так и ДИМ, носила многовершинный характер, что, надо думать, определяется различным генезом клеток (В-, Т-лимфоциты, моноциты) и неоднородностью популяции АМ по ДНК-синтетической активности (рис. 7).

Инфекционный глононуклзЕМ, Инфггадианный пенокуклеоэ

аызаанныи прусам Эпштейнз-Бсрр

другой этиологии

—3-6 пет —-7-14 пет

ОТН ЦД

Рис. 7 Распределение "атипичных мононуклеаров" периферической крови по оптической ппотности ДНК-фуксина у детей, больных инфекционным мононуклеозем (острый период болезни)

В период реконвалесценции у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ цитофотометрические показатели моноцитов превышали норму, НК -соответствовал контрольным значениям (рис. 6). Однако у пациентов с ДИМ младшей и старшей возрастных групп НК моноцитарных клеток был существенно выше такового у пациентов с ИМ-ВЭБ (соответственно в 1,3 и 1,2 раза). Содержание РНК (НК) в лимфоцитарных клетках при ИМ-ВЭБ (у детей в возрасте 7-14 лет) и ДИМ (у детей обеих возрастных групп) в фазу

клинической реабилитации сохранялось выше контрольного уровня. Вместе с этим, у 3-6-летних пациентов с ДИМ содержание ДНК в лимфоцитах находилось в пределах нормальных значений и было приблизительно в 1,5 раза ниже такового у пациентов с ИМ-ВЭБ сходного возраста (рис. 6).

Наряду с вышеуказанными изменениями, у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ в период выздоровления отмечалась тенденция к нормализации процентного соотношения лимфоцитарных клеток в зависимости от ОП ядер. Однако в популяции моноцитов у 3-6- и 7-14-летних реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ регистрировалось еще более выраженное (по сравнению с соответствующими значениями в период разгара заболевания и в контроле) увеличение содержания клеток с "высоким" уровнем ОП ДНК-связанного красителя. В структуре процентного распределения лимфоцитарных клеток по содержанию РНК у больных ИМ-ВЭБ и ДИМ в фазу реконвалесценции содержание слабобазофильных макронуклеолярных клеток все еще оставалось выше нормы.

Регистрируемые в фазу разгара ИМ-ВЭБ и ДИМ изменения цитохимических показателей (содержания ДНК и РНК) лимфоцитарных клеток обусловливаются, по-видимому, увеличением количества циркулирующих В-лимфоцитов, поскольку известно, что макро- и микронуклеолярные слабобазофильные клетки и лимфоциты с низкоплотным ядерным хроматином принадлежат исключительно к фракции В-клеток [Курашов Э.М. и соавт., 1980; Робинсон М.В. и соавт., 1986]. С другой стороны, основываясь на том, что по степени базофилии цитоплазмы и структуре ядрышка можно судить не только об уровне РНК-синтеза, но и активности клетки в целом (в частности гипербазофильные макронук-леолярные лимфоциты относят к функционально активным Т-клеткам) [Глузман Д.Ф., 1978; Робинсон М.В. и соавт., 1986; Когак М., 1986], допустимо предположить, что увеличение содержания слабобазофильных лимфоцитов и клеток с микроядрышками при ИМ-ВЭБ и ДИМ свидетельствует об ингибиции РНК-синтетических процессов в Т-лимфоцитах и о нарушении способности Т-клеток к полноценной реализации своих функций. Увеличение же (по сравнению с нормой) НК в моноцитах и количества гипербазофильных макронуклеолярных клеток в период выраженной клинико-гематологической симптоматики ИМ-ВЭБ и ДИМ, по всей видимости, указывает на повышение численности в крови больных активизированных моноцитов с высоким уровнем РНК-синтетических процессов [Фрейдлин И.С., Рудакова Т.Л., 1977; Хейхоу Дж.Ф.Г., Квагли-но Д., 1983]. Подтверждением этого допущения является, в частности,

наличие при ДИМ высокой отрицательной зависимости между уровнем фагоцитоза красителя и относительным количеством моноцитов со слабой базофилией цитоплазмы и мелкими, плохо различимыми ядрышками (г=-0,70; р<0,01).

В АМ у 3-6-летних реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ ОП ядер и содержание ДНК снижались по сравнению с предыдущим периодом исследования, у пациентов с ДИМ аналогичного возраста - напротив, повышались относительно соответствующих показателей в острый период заболевания. Кривая распределения АМ в зависимости от степени компактности ядерного хроматина у детей с ИМ-ВЭБ на стадии клинической ремиссии смещалась в сторону низких значений ОП. Кроме того, у реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ старшего возраста отмечалось увеличение содержания микронуклеолярных АМ со слабой базофилией цитоплазмы по сравнению с таковым на стадии манифестации болезни. Такая перестройка популяции АМ могла быть обусловлена, с одной стороны, увеличением числа трансформированных клеток В-лимфоцитарной природы и элиминацией из организма видоизмененных Т-лимфоцитов, с другой - снижением активности РЖ-синтеза в АМ вследствие установления латентной ВЭБ-инфекции.

По ОП и содержанию ДНК атипичные клетки, выявляемые у больных ИМ-ВЭБ на стадии клинической реабилитации, занимали промежуточное положение между нормальными лимфоцитами и клетками моноцитарного ряда. ОП хроматина в АМ у ДИМ-реконвалесцентов обеих возрастных групп была достоверно выше таковой и в лимфоцитах, и в моноцитах; содержание ДНК по-прежнему превышало аналогичные значения лишь в лимфоцитарных клетках. Вместе с тем, у пациентов перечисленных групп наблюдения отмечалась положительная связь между количеством ДНК-связанного фуксина в АМ и в моноцитах (г=0,53; р<0,05). НК "атипичных мононуклеаров" у реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ как младшего, так и старшего возраста также превышал уровень содержания РНК в лимфоцитах.

Через 16-18 мес после перенесенного ИМ вне зависимости от этиологического варианта инфекции ОП ядер и содержание ДНК в моноцитах все еще оставались выше контрольных значений. ОП ДНК-фуксина в лимфоцитарных клетках у детей обеих возрастных групп, переболевших ИМ-ВЭБ, и у пациентов с ДИМ в возрасте 3-6 лет находилась в пределах контрольного уровня; у детей в возрасте 7-14 лет, перенесших ДИМ -сохранялась ниже нормы. Тем не менее, содержание ДНК в лимфоцитах у пациентов обеих возрастных групп после перенесенного ДИМ отвечало контрольным значениям, в случае ИМ-ВЭБ - превышало норму.

Содержание РНК в моноцитах и лимфоцитах у детей, переболевших ИМ (за исключением детей с ДИМ младшего возраста) нормализовалось.

В структуре процентного распределения лимфоцитарных клеток по содержанию РНК у пациентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ в отдаленном периоде после перенесенного заболевания число слабобазофильных макронуклеолярных клеток по-прежнему оставалось выше нормы, количество же гипер-базофильных лимфоцитов возвращалось к нормальному уровню. У пациентов с ИМ-ВЭБ младшего возраста в отдаленном периоде после заболевания регистрировалось пониженное (по сравнению с контролем) число микро-нуклеолярных моноцитов со слабобазофильной цитоплазмой, у детей, переболевших ДИМ - их полное исчезновение при одновременном повышении (относительно аналогичных значений в период реконвалесценции и у детей, перенесших ИМ-ВЭБ) числа слабобазофильных микро-нуклеолярных АМ.

ОП и содержание ДНК в АМ у детей, перенесших ДИМ, через 16-18 мес' после болезни также снижались относительно таковых в фазу клинического выздоровления; у пациентов с ИМ-ВЭБ - практически не изменялись по сравнению с предыдущим периодом исследования. Кроме того, у пациентов данных групп наблюдения устанавливалось сужение (по сравнению с фазой реконвалесценции) границ вариабельности ОП ДНК-фуксина в АМ. Сравнительное цитохимическое исследование мононуклеарных клеток позволило выявить, что АМ, обнаруживаемые в крови у детей, переболевших ДИМ, по степени конденсации ядерного хроматина соответствовали типичным клеткам лимфоцитарного ряда, однако по содержанию ДНК, как и в предыдущие периоды наблюдения, превосходили лимфоциты; при этом регистрировалась положительная зависимость между количеством ДНК в АМ и моноцитах (г=0,77; р<0,01). Цитофотометрические показатели АМ у пациентов, перенесших ИМ-ВЭБ, также превышали таковые в лимфоцитах. Величина НК в АМ у детей с ИМ-ВЭБ и ДИМ была значительно выше, чем в лимфоцитарных клетках, но ниже, нежели в моноцитах.

Весьма ценную информацию о характере метаболических взаимоотношений вируса и клетки на разных стадиях течения инфекционного процесса предоставляет метод цитохимического выявления таких внутриклеточных ингредиентов, как ферменты, липиды, белки и углеводы.

При ИМ-ВЭБ у детей старшей возрастной группы регистрировалось увеличение содержания липидов в лимфоцитах, у пациентов 3-6-летнего возраста - в моноцитах. Наряду с этим, у детей в возрасте 7-14 лет в острый период ИМ-ВЭБ регистрировалось падение (по сравнению с нормой)

активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) в моноцитах. При ДИМ активность СДГ (в лимфоцитах и моноцитах у детей в возрасте 3-6 лет и в лимфоцитах у 7-14-летних детей) и а-ГФДГ (в лимфоцитах и моноцитах у пациентов в возрасте 3-6 лет), напротив, увеличивалась по сравнению с контролем. Кроме того, содержание СДГ (в лимфоцитах и моноцитах) и а-ГФДГ (в моноцитах) у больных ДИМ старшей возрастной группы статистически значимо превосходило аналогичные показатели у больных ВЭБ-мононуклеозом (соответственно в 2,7; 2,4 и 2,5 раза).

АМ, выявляемые в крови у пациентов, страдающих ИМ ВЭБ- и другой этиологии, в фазу разгара заболевания, по содержанию КФ, СДГ и а-ГФДГ практически не отличались от морфологически неизмененных клеток лимфо-и моноцитарного ряда. В то же время содержание НЭ и гликогена в АМ у пациенггов с ИМ-ВЭБ и ДИМ в данный период наблюдения было выше, нежели в лимфоцитах, но ниже, чем в моноцитах.

Следует заметить, что наиболее достоверной мерой сродства АМ к клеткам лимфоидной или моноцитарной природы является уровень подавления активности КФ и НЭ специфическими ингибиторами (соответствешю тартратом и фтористым натрием).

У больных ИМ-ВЭБ и ДИМ степень тартрат- и КаР-индуцированного угнетения активности КФ и НЭ в атипичных клетках в большей степени соответствовала таковой в лимфоцитах. При этом у больных ДИМ подавление ингибиторами активности КФ (у детей в возрасте 3-6 лет) и НЭ (у детей в возрасте 7-14 лет) в АМ было более выраженным по сравнению с родственными показателями у детей, страдающих ИМ-ВЭБ (рис. 8).

В период клинического выздоровления у детей с ИМ-ВЭБ в возрасте 3-6 лет активность КФ в лимфоцитах снижалась по сравнению с контролем. Содержание липидов в лимфоцитах у реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ обеих возрастных групп находилось выше контрольного уровня. Количество липидов в моноцитах у ДИМ-реконвалесцентов старшего возраста было существенно ниже (в 1,3 раза), чем у пациентов с ВЭБ-мононуклеозом. Однако у детей с ДИМ в возрасте 3-6 лет в период выздоровления определялось повышенное содержание гликогена в лимфоцитах не только по сравнению с таковым у здоровых детей, но и у реконвалесцентов с ИМ-ВЭБ аналогичного возраста (в 1,4 раза).

Помимо вышеописанных изменений, у пациентов с ИМ-ВЭБ в возрасте 7-14 лет в фазу клинической ремиссии отмечалось увеличение (относительно контрольных значений) дегидрогеназной активности нормальных мононук-леарных клеток, в то время как у детей с ДИМ в возрасте 3-6 лет активность

%

150 -140 -

Инфекционный мононуклеоз, вызванный вирусом Эпштейна-Бзрр 140

Инфекционный мононуклеоз другой этиологии

130 % от значений в лимфоцитах

от значении в лимфоцитах

Кислая фосфатаза (%)

Неспецифическая эстераза (%)

Кислая фосфатаза (%)

Неспецифическая эстераза (%)

Рис.8. Уровень ингибиции ферментативной активности в "атипичных мононуклеарах" периферической крови (% от соответствующих значений в лимфоцитах и моноцитах) у детей, больных инфекционным мононуклеозом

СДГ и а-ГФДГ возвращалась к контрольному уровню, а у 7-14-летних ДИМ-реконвалесцентов содержание а-ГФДГ в лимфоцитах (на фоне нормализации активности СДГ) даже снижалось по сравнению с нормой. При этом уровень активности СДГ (в лимфоцитах) и а-ГФДГ (в лимфоцитах и моноцитах) у пациентов с ДИМ старшей возрастной группы был также значительно ниже такового у пациентов с ИМ-ВЭБ аналогичного возраста (соответственно в 1,5; 5,1 и 3,9 раза).

В "атипичных мононуклеарах" у ИМ-ВЭБ-реконвалесцентов активность СДГ и а-ГФДГ повышалась, а содержание НЭ, КФ и гликогена, напротив, снижалось по сравнению с соответствующими показателями в острый период заболевания, что могло обусловливаться перераспределением численного соотношения различных типов клеток в популяции АМ, очевидно, за счет увеличения количества трансформированных форм лимфоцитов на фоне снижения числа АМ моноцигарного происхождения. В частности по активности КФ, НЭ, степени ее ингибиции (рис. 8) и по содержанию липидов и гликогена АМ у детей с ИМ-ВЭБ на стадии клинической реабилитации были более близки к лимфоцитам, по активности дегидрогеназ - не имели существенных различий ни с лимфоцитами, ни с моноцитами. У пациентов с ДИМ цитохимическая активность АМ в большей мере соответствовала метаболическому статусу лимфоцигарных клеток и практически не изменялась по сравнению с таковой в предыдущий период исследования.

Через 16-18 мес после перенесенного ИМ-ВЭБ у 3-6-летних детей активность КФ в лимфоцитах все еще сохранялась ниже нормы. У пациентов обеих возрастных групп, переболевших ИМ другой этиологии, активность КФ в неизмененных мононуклеарных клетках также оказалась сниженной по сравнению с контролем. Между тем, содержание КФ в моноцитах у 7-14-летних пациентов с ДИМ на данном этапе наблюдения оказалось в 1,6 раза ниже "нормальной" его величины у детей с ИМ-ВЭБ того же возраста. Активность а-ГФДГ в лимфоцитах у пациентов с ДИМ старшего возраста в отдаленном периоде после болезни восстанавливалась до контрольного уровня. У детей, перенесших ИМ-ВЭБ, на фоне нормализации содержания а-ГФДГ в лимфоцитах и моноцитах активность СДГ оставалась по-прежнему выше нормы, а также статистически значимо превосходила родственные значения у детей с ДИМ (соответственно в 2,3 и 2,2 раза). Содержание же липидов и гликогена в клетках моноцитарного ряда у детей в возрасте 3-6 лет с ИМ-ВЭБ и ДИМ через 16-18 после болезни оказалось сниженным по сравнению с нормой. У детей старшего возраста, переболевших ДИМ, содержание данных метаболитов и НЭ в моноцитах тоже снижалось

сравнительно с контролем и по сравнению с аналогичными показателями у детей с ИМ-ВЭБ (количество липидов - в 1,3 раза, гликогена - в 1,8 раза, активность НЭ - в 1,7 раза). У пациентов в возрасте 7-14 лет, перенесших ВЭБ-инфекцию, регистрировалось пониженное содержание гликогена в лимфоцитах. Поскольку гликоген и липиды являются "резервуаром" энергии [Павлов Б.А., 1960; СейцИ.Ф., Луганова И.С., 1967; СтяговаВ.Ф., 1974; Кисяяк Н.С., Ленская Р.В., 1978], есть основания полагать, что выявленные изменения в отдаленном периоде после перенесенного ИМ-ВЭБ и ДИМ свидетельствуют об энергетическом истощении клеток вследствие длительного антигенного воздействия, обусловленного персистенцией инфекционного возбудителя в организме.

Активность НЭ и содержание гликогена в атипичных клетках у детей, переболевших ИМ-ВЭБ увеличивались относительно аналогичных значений в предыдущий период исследования; количество же гликогена и липидов в АМ у пациентов с ДИМ оказалось ниже соответствующих значений в фазу реконвалесценции. Кроме того, у детей в возрасте 7-14 лет, перенесших ДИМ, положительная реакция АМ в отношении КФ, липидов и гликогена была существенно слабее (в 1,7; 1,5 и 2,5 раза соответственно), а на а-ГФДГ, наоборот, интенсивнее (в 2,2 раза), чем в АМ у пациентов с ИМ ВЭБ-этиологии. В общем же, по характеру цигоэнзимологической активности, содержанию гликогена и липидов АМ, обнаруживаемые в периферической крови у пациентов с ИМ-ВЭБ и ДИМ через 16-18 мес после болезни, также как и в предыдущие периоды наблюдения, в большей степени соответствовали лимфоцитарным клеткам.

Резюмируя вышеизложенное, можно заключить, что при ИМ ВЭБ- и другой (герпесвирусной и неуточненной) этиологии, регистрируются существенные изменения цитохимического статуса мононуклеаров периферической крови, уровень которых у пациентов в возрасте 7-14 лет значительно превышает таковой у пациентов младшей (3-6 лет) возрастной группы; изменения внутриклеточного метаболизма наиболее значимы в период клинико-гематологаческой манифестации заболевания и сохраняются как в фазу реконвалесценции, так и через 16-18 мес после болезни. Последнее, очевидно, определяется способностью возбудителей ИМ формировать латентную инфекцию и длительно персистировать в организме. При этом у пациентов с ИМ-ВЭБ более высокий уровень цитохимической аномалии (и негативной ее корреляции со структурно-функциональными параметрами клеток) определяется в лимфоцитах, при ДИМ - в моноцитах. «Атипичные мононуклеары», выявляемые в периферической крови у

пациентов в возрасте 3-6 и 7-14 лет с ИМ-ВЭБ и ДИМ, представляют собой весьма неоднородную в цитохимическом отношении популяцию клеток, что, вероятно, объясняется их смешанным (лимфо- и моноцитарным) генезом. Тем не менее, при ИМ-ВЭБ и ДИМ в динамике течения и в отдалешюм периоде после болезни характер цитохимической реакционности АМ в большей степени соответствует таковому в лимфоцитарных клетках, нежели в моноцитах.

Учитывая важную роль систем поддержания генетического гомеостаза организма в патогенезе инфекционных заболеваний, нами был проведен сравнительный анализ взаимосвязей между показателями цитогенетического, структурно-метаболического и функционального статуса мононуклеарных клеток при ИМ-ВЭБ и ДИМ.

У здоровых детей содержание лейкоцитов с хромосомными нарушениями отрицательно коррелировало с относительным числом ворсинчатых форм лимфоцитарных клеток и с содержанием липидов в лимфоцитах (соответственно г=-0,45; р<0,05 и г=-0,68; р<0,001), положительно - с абсолютным количеством клеток лимфоцитарного ряда (г=0,50; р<0,05), численностью их слабобазофильных микронуклеолярных клеточных форм (г=0,49; р<0,05), с уровнем ЛПС-РБТЛ (г=0,47; р<0,05) и концентрацией гликогена и НЭ в моноцитах (соответствешю 1=0,62; р<0,01 и г=0,52; р<0,05).

При ИМ отмечалась иная структура корреляций. Так, у детей, страдающих ИМ-ВЭБ, в острый период заболевания количество аберрантных форм клеток оказалось отрицательно коррелированным с содержанием ДНК в лимфоцитах (г=-0,47; р<0,05), при ДИМ - с относительным числом моноцитов (г=-0,46; р<0,05).

На стадии реконвалесценции у детей с ИМ-ВЭБ отмечалось положительное соотношение процентного содержания генетически аномальных лимфоцитарных клеток с величиной их диаметра (г=0,42; р<0,05), отрицательное - с относительным количеством СОЗ-, СЭ16-ПОЗИТИВ1ШХ лимфоцитов (соответственно г=-0,55; р<0,01 и г=-0,44; р<0,05), с относительным числом лимфоцитов и моноцитов, имеющих углубления на поверхности (соответственно г=-0,65; р<0,01 и г=-0,58; р<0,05) и с содержанием липидов в лимфоцитах (г=-0,46; р<0,05), что, очевидно, свидетельствует об активизации у пациентов данной группы наблюдения Т-клеточного звена иммунитета и факторов неспецифической резистентности. Однако при ДИМ связь между количеством лимфоцитов с хромосомными аберрациями и численностью моноцитов с углублениями поверхностной

мембраны была, напротив, прямо пропорциональной (г=0,49; р<0,05), что, вероятно, является отражением функциональной "несостоятельности" моноцитарных клеток вследствие инфекционного повреждения. Кроме того в период клинической ремиссии ДИМ регистрировалось обратное соотношение между числом генетически измененных лимфоцитов и показателями их ферментативной активности (с содержанием НЭ и сс-ГФДГ - г=-0,52 и г=-0,47; р<0,05).

Через 16-18 мес после перенесенного ИМ-ВЭБ уровнь хромосомных нарушений в лимфоцитах положительно коррелировал с содержанием слабобазофильных микронуклеолярных моноцитов (г=0,49; р<0,05), а также с индексом стимуляции системы репарации ДНК (г=0,51; р<0,05), отрицательно - с общим содержанием циркулирующих лейкоцитов и с абсолютным числом лимфоцитарных клеток (соответственно г=-0,51; р<0,05 и г=-0,56; р<0,01). По всей видимости, данный факт объясняется тем, что у пациентов, переболевших ВЭБ-мононуклеозом, восстановление цитогенетической нормы осуществляется, в основном, с помощью иммунной системы, дефект защитных реакций которой компенсируется количеством ее структурных элементов. В отдаленном периоде после заболевания ДИМ численность клеток с нарушениями структуры хромосом и изменением плоидности хромосомного набора оказалось положительно коррелированной с содержанием ДНК в лимфоцитах (г=0,58; р<0,05) и с количеством их микронуклеолярных гипербазофильных клеточных форм (г=0,56; р<0,05), отрицательно - с относительным количеством лимфоцитов со сфероидными выростами на мембране (г=-0,66; р<0,01).

Таким образом, при ИМ-ВЭБ и ДИМ имеет место изменение числа и характера корреляций между уровнем хромосомных аберраций в лимфоцитарных клетках и параметрами структурно-функциональной организации иммуноцитов, что свидетельствует о наличии иммунологических сдвигов и о более существенной роли иммунной системы (по сравнению с ДНК-репарацией и апоптозом) в обеспечении генетического постоянства организма при ИМ.

ВЫВОДЫ

1. Течение инфекционного мононуклеоза у детей сопровождается цитогенетической, структурно-метаболической и функциональной дезорганизацией мононуклеарных клеток периферической крови, проявления которой сохраняются на стадии реконвалесценции и в отдаленном периоде после болезни. Степень выраженности указанных расстройств определяется типом возбудителя заболевания и возрастными особенностями организма.

2. Наиболее существенные и продолжительные изменения структурно-метаболических н функциональных свойств клеток лимфоцнтарного ряда вызывает вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ), а моноцитов - возбудители "неВЭБ"-мононуклеоза. При этом они более значительны у детей в возрасте 7-14 лет, чем у 3-6-летних пациентов.

3. Структурно-организационные нарушения хромосомного аппарата лимфоцитарных клеток крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном ВЭБ, и другой (герпесвирусной и неуточненной) этиологии носят однонаправленный характер и определяются увеличением (по сравнению с нормой) общего количества клеток с хромосомными аберрациями и числа хромосомных нарушений на клетку (преимущественно хроматндных разрывов), повышением содержания лимфоцитов с аномальным числом (гипер-, полиплоидия) и структурой хромосом, ФГА- и ЛПС-стимулирован-ных клеток с микроядрами.

4. Исчезновение из периферической крови лимфоцитов с измененным числом хромосом и нормализация количества ФГА- и ЛПС-активнрованпых микроядросодержащих клеток при инфекционном мононуклеозе "неВЭБ"-этиологии выявляются на более ранних стадиях течения инфекционного процесса, нежели при ВЭБ-мононуклеозе.

5. Увеличение (по сравнению с нормой) числа лимфоцитов с хромосомными нарушениями в периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном ВЭБ и другими возбудителями, обусловливается, наряду с щггоповреждагощим действием возбудителя заболевания, угнетением способности лимфоцитарных клеток к апоптозу, что проявляется снижением содержания фрагментированной ДНК в клеточных ядрах и количества лимфоцитов с морфологическими признаками апопгтоза при индукции гибели . клеток в условиях in vitro.

6. Снижение числа лимфоцитов с хромосомными аберрациями в периферической крови при инфекционном мононуклеозе ВЭБ- и другой этиологии на стадии ремиссии и в отдаленном периоде после перенесенного заболевания в условиях повышенной резистентности лимфоцитарных клеток к апоптозу обеспечивается активацией экецшионной ДНК-репарации и факторов клеточного иммунитета.

7. В основе структурно-метаболического дисбаланса мононуклеарных лейкоцитов периферической крови при инфекционном мононуклеозе лежат стимуляция В-звена иммунной системы и моноцитов, подавление функциональной активности Т-лимфоцитов.

В. «Атипичные мононуклеары», выявляемые в периферической кровк при

ВЭБ-индуцированном мононуклеозе и инфекционном мононуклеозе другой этнологии, в динамике течения и в отдаленном периоде после болезни, представляют собой неоднородную в цитохимическом отношении группу клеток лимфо- и моношггарной природы.

Перечень работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Особенности поверхностной архитектоники лимфощгтов у больных с инфекционным мононуклеозом // Актуальные вопросы экспериментальной морфологии: Сб. научных трудов, посвященный 70-летию заслуженного деятеля науки РФ, чл.-корр. СО МАН ВШ, профессора А.И. Рыжова. - Томск, 1999. - С. 14-15 (совместно с В.В. Новицким, Н.М. Ангоненко, О.Б. Жуковой).

2. Поверхностная архитектоника моноцитов у детей, больных инфекционным мононуклеозом // Там же. - С. 15-16 (совместно с В.В. Новицким, Н.М. Ангоненко, О.Б. Жуковой).

3. Ультраструктурная характеристика лимфощгтов периферической крови у больных с инфекционным мононуклеозом // Паллиативная медицина и реабилитация. - 2000. - № 1-2. - С. 34 / Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении: Материалы III конгресса, Ангалия, 22-28 апреля 2000 г. (совместно с В.В. Новицким).

4. Реакции системы крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом II Гастробюллетень. - 2000. - Приложение 1. - № 1-2. - С. 94 / Санкт-Петербург - Гастро-2000: Материалы 2-ой Объединенной Всероссийской и Всеармейской научной конференции, Санкт-Петербург, 20-22 сентября 2000 г. (совместно с А.П. Помогаевой, И.О. Наследниковой, JI.C. Литвиновой).

5. Сухая масса мононуклеаров периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологии. - 2000. - Ns 80, 11. - С. 100-101 (совместно с А.П. Помогаевой, И.О. Наследниковой).

6. Исследование нуклеолярного аппарата лимфоцитов у больных с инфекционным мононуклеозом // Научные ведомости БелГУ. - 2000. - № 2 (11). - С. 154-155 / Материалы 3-го Международного конгресса по интегра-тивной антропологии, Харьков-Белгород, 3-6 октября 2000 г. (совместно с В.В. Новицким).

7. Реакции системы крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом // Новые технологии в терапии и профилактике инфекционных заболеваний у детей: Материалы Всероссийской научно-практической конференции, Санкт-

Петербург, 21-23 "ноября 2000 г. - СПб., 2000. - С. 61-62 (совместно с А.П. Помогаевой, И.О. Наследниковой, A.B. Горбачевой).

8. Сухая масса лимфоцитов у больных инфекционным мононуклеозом II Научная молодежь на пороге XXI века: Материалы международного конгресса молодых ученых и специалистов, Томск, 18-19 мая 2000 г. - Томск, 2000. - С. 27-28 (совместно с Л.С. Литвиновой).

9. Ультраструктура мононуклеаров периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом // Сб. научных работ, посвященный 55-летию педиатрического факультета. - Томск, 2000. - С. 74-75 (совместно с В.В. Новицким, А.П. Помогаевой, О.Б. Жуковой).

Ю.Морфология апоптоза лимфоидных клеток при инфекционном мононуклеозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001.

- Приложение 1. - С. 69-71 (совместно с В.В. Новицким, А.П. Помогаевой, М.Р. Карповой, Л.С. Литвиновой, И.О. Наследниковой, А.Н. Андреевым).

11.Гематологические последствия цитостатической болезни в условиях присоединения вирусной инфекции // Там же. - С. 72-74 (совместно с М.Р. Карповой, И.Ф. Зверевой, Т.В. Каштановой, В.В. Новицким).

12.Функциональная активность моноцитов периферической крови при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме II Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2001. - Приложение 3.

- С. 64-66 (совместно с В.В. Новицким, А.П. Помогаевой, И.О. Наследниковой, Е.В. Ширшовой)

13.Функциональная активность монощггов периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом в различные периоды течения болезни // Сб. статей по результатам 60-ой юбилейной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова, Томск, 23-25 апреля 2001 г. - Томск, 2001. - С. 30-31 (совместно с Е.В. Ширшовой, И.О. Наследниковой).

14. Структурно-функциональная характеристика лимфоцитов периферической крови при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме у детей // Там же. - С. 70-72 (совместно с Л.В. Сюсиной, И.О. Наследниковой).

15. Функциональная активность моноцитов при инфекционном мононуклеозе // Науки о человеке: Материалы Второго конгресса молодых ученых и специалистов, Томск, 17-18 мая 2001 г. - Томск, 2001. - С. 219-220 (совместно с И.О. Наследниковой, Е.В. Ширшовой).

16. Содержание ДНК в лимфоцитах периферической крови при инфекционном мононуклеозе (ИМ) // Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины: Материалы II Российской конференции молодых ученых, Москва, 24-28 апреля 2001 г. - М., 2001. - Т. 1. - С. 115 (совместно с

И.О. Наследниковой, В.Н. Ильиной).

17.Нуклсолярный аппарат мононуклеаров периферической крови при инфекционном мононуоеозе // Там же. - С. 115-116 (совместно с И.О. Наследниковой).

18.Клинико-иммунологические проявления инфекционного мононуклеоза у детей // Общие вопросы патологии: Сб. научных трудов, посвященный 75-летию профессора A.C. Зиновьева. - Омск, 2001. - С. 63-66 (совместно с В.В. Новицким, И.О. Наследниковой, JI.JI. Катан аховой).

19.Клинические проявления инфекционного мононуклеоза (ИМ) у детей // Гастробюллетень. - 2001. - № 2-3. - С. 89 I Санкт-Петербург - Гастро-2001: Материалы 3-го Российского научного форума, Санкт-Петербург, 12-14 сентября 2001 г. (совместно с А.П. Помогаевой, JI.JI. Катанаховой).

20.Цитогенетическне нарушения в лимфоцитах периферической крови у больных инфекционным мононуклеозом // Актуальные проблемы эволюционной и популяционной физиологии человека: Материалы 1-ой Всероссийской научной конференции, Тюмень, 18-19 октября 2001 г. -Тюмень, 2001. - С. 91-92 (совместно с Л.С. Литвиновой).

21.Ц|ггогеметнческие нарушения в лимфоцитах периферической крови при инфекционном мононуклеозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - Т. 131. - № 4. - С. 464-465 (совместно с Л.С. Литвиновой, В.В. Новицким, А.П. Помогаевой)..

22. Особенности течения у детей инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Барр И Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2001. - № 4. - С. 57-58 (совместно с А.П. Помогаевой, В.В. Новицким, Л.Л. Катанаховой, Л.С. Литвиновой, И.О. Наследниковой).

23.Структурно-метаболический статус мононуклеаров периферической крови при инфекционном мононуклеозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2001. - Т. 131. - № 5. - С. 571-573 (совместно с В.В. Новицким,

A.П. Помогаевой, И.О. Наследниковой, A.B. Горбачевой).

24.Апоптотическая реакция лимфоидных клеток при инфекционном мононуклеозе И Бюллетень СО РАМН. - 2001. - № 3. - С. 100-102 (совместно с

B.В. Новицким, А.П. Помогаевой, Л.С. Литвиновой, O.A. Козин, И.О. Наследниковой).

25.Морфологический статус мононуклеаров периферической крови при инфекционном мононуклеозе // Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. H.A. Гаврншевой. - СПб., 2002. - С. 98-100 (совместно с Н.В. Рязанцевой, И.О. Наследниковой).

26.Хромосомные нарушения, апоптоз и активность системы репарации ДНК в

лимфоцитах периферической крови при инфекционном мононуклеозе у детей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2002. - № 3. - С. 7880 (совместно с В.В. Новицким, JI.C. Литвиновой, А.П. Помогаевой).

Автор выражает глубокую признательность директору НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, академику РАМН В.П. Пузыреву; заведующему лабораторией цитогенетики того же института, доктору биологических наук С.А. Назаренко; заведующему кафедрой биологии и генетики СГМУ, профессору, доктору медицинских наук H.H. Илышских; доценту той же кафедры, кандидату биологических наук H.H. Плотниковой; заведующему компьютерным классом той же кафедры, кандидату медицинских наук Б.В. Шилову; профессору кафедры микробилогии СГМУ, доктору медицинских наук М.Р. Карповой; ученому секретарю НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, доктору медицинских наук В.В. Жданову; ассистенту кафедры детских инфекционных болезней СГМУ, кандидату медицинских наук Л.Л. Катанаховой; заведующему отделом гематологии Центральной научно-исследовательской лаборатории (ЦНИЛ) СГМУ, доктору медицинских наук Ю.А. Козлову; старшему научному сотруднику отдела гематологии ЦНИЛ, кандидату медицинских наук Н.М. Шевцовой; заведующему отделом молекулярной биологии ЦНИЛ, кандидату медицинских наук И.И. Иванчуку; заведующему отделом иммунологии ЦНИЛ, кандидату медицинских наук Ф.И. Петровскому; старшему научному сотруднику отдела иммунологии ЦНИЛ, кандидату медицинских наухс T.B. Перевозчиковой; заведующей лабораторией онковирусологии НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН, кандидату биологических наук Л.Н. Уразовой; заведующему лабораторией электронной микроскопии ФГУП НПО «Вириои», кандидату физико-математических наук A.A. Миллеру за ценные теоретические и методические рекомендации, а также большую практическую помощь.