Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сывороточный уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы при вирусных гепатитах B, C и G
- Ученая степень
- кандидата биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.36
Оглавление диссертации Птицына, Юлия Сергеевна :: 2003 :: Нижний Новгород
ВВЕДЕНИЕ.
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Растворимые формы дифференцировочных антигенов.
1.2. Характеристика CD38 антигена.
1.3. Характеристика CD50 антигена.
1.4. CD95 (Fas) антиген, опосредующий апоптоз.
1.5. Комплекс HLA I класса-Р2-микроглобулин.
1.6. Иммунный ответ при вирусных инфекциях.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Исследуемые образцы и объем наблюдений.
2.2. Используемые моноклональные антитела.
2.3. Получение козьих поликпональных антител, специфичных к поверхностным антигенам мононуклеарных клеток крови человека.
2.4. Перийодатный метод синтеза конъюгата.
2.5. Иммуноферментные методы определения растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы.
2.6. Реакция непрямой иммунофлуоресценции.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Разработка и апробация иммуноферментного метода для выявления растворимых форм дифференцировочных антигенов: CD38, CD50 и CD95.
3.2. Исследование содержания растворимых форм мембранных антигенов в сыворотке крови больных вирусным гепатитом В.
3.3. Сывороточное содержание растворимых форм поверхностных антигенов клеток иммунной системы при вирусном гепатите С.
3.4. Уровень растворимых форм мембранных антигенов при смешанной гепатитной инфекции.
3.5. Содержание растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы в сыворотке крови носителей маркеров вирусного гепатита G.
Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Птицына, Юлия Сергеевна, автореферат
Актуальность проблемы
В основе иммунного ответа лежат межклеточные и межмолекулярные взаимодействия, важную роль в реализации которых играют мембранные белки клеток иммунной системы. Известно, что мембранные белки могут иметь растворимые изоформы, образующиеся за счет шеддинга или альтернативного сплайсинга матричной РНК. Растворимые формы поверхностных протеинов клеток иммунной системы обладают иммунорегуляторными свойствами. Получены данные о том, что они могут выполнять функции ограничителей иммунных реакций или же выступать в роли активаторов иммунологических процессов, участвуя в передаче активационных сигналов. Кроме того, при ряде заболеваний сывороточный уровень отдельных мембранных рецепторов является мониторинговым показателем течения патологического процесса [19, 81]. В настоящее время идентифицировано более 240 дифферен-цировочных антигенов, большинство которых является мембранными белками клеток иммунной системы. Информация о наличии и функциональной роли растворимых форм дифференцировочных антигенов получена лишь для немногих из них. Таким образом, исследование количественного содержания растворимых форм (s-форм) мембранных белков клеток иммунной системы имеет как практическое, так и теоретическое значение.
Вирусные гепатиты продолжают оставаться одной из главных проблем здравоохранения как в нашей стране, так и в большинстве стран мира. Ежегодно от патологии, связанной с вирусными гепатитами, включая цирроз печени и первичную клеточную карциному, умирают более 1 млн. человек. В мире насчитывается свыше 150 млн. носителей вирусного гепатита С [26]. Широкая распространенность вирусных гепатитов с парентеральным путем передачи обусловливает актуальность детального исследования молекулярных механизмов иммунного ответа при данных социально-значимых вирусных заболеваниях. Это относится и к изучению роли растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы в патогенезе вирусных гепатитов.
Цель исследования
Определить содержание растворимых форм CD38, CD50, CD95 антигенов и растворимых антигенов HLA I класса в сыворотке крови больных вирусными гепатитами с парентеральным механизмом передачи.
Задачи
1. Разработать иммуноферментные методы определения растворимых форм антигенов CD38, CD50 и CD95, мембранные изоформы которых принадлежат к различным функциональным группам поверхностных белков клеток иммунной системы.
2. Определить сывороточный уровень растворимых молекул HLA I класса, растворимых CD38, CD50, CD95 антигенов при остром и хроническом вирусном гепатите В.
3. Исследовать сывороточное содержание этих протеинов при остром и хроническом гепатите С.
4. Проанализировать связь между сывороточным уровнем растворимых форм исследуемых белков и особенностями течения вирусных гепатитов В и С.
5. Оценить характер изменения сывороточного содержания молекул HLA I класса, растворимых форм CD38, CD50 и CD95 антигенов у носителей моле-кулярно-генетических и иммунологических маркеров вирусного гепатита G.
Положения, выносимые на защиту
1. Разработаны иммуноферментные методы определения относительного содержания растворимых форм мембранных антигенов CD38, CD50, CD95 в сыворотке крови.
2. При вирусных гепатитах В, С и G выявлен дисбаланс сывороточного уровня растворимых форм CD38, CD50, CD95 антигенов и HLA I класса.
3. Каждая форма вирусного гепатита (В, С, G и микст-формы) характеризуется своей, индивидуальной картиной изменения сывороточных уровней растворимых форм исследованных антигенов.
Научная новизна
Впервые исследован уровень SCD38 и sCD50 антигенов при вирусных гепатитах В и С. Показано, что концентрация sCD38 возрастает как при вирусном гепатите В, так и при вирусом гепатите С, тогда как статистически достоверно повышенный уровень SCD50 ассоциирован только с хроническим течением вирусного гепатита С. Обнаружено достоверное увеличение уровней всех четырех исследованных антигенов при одновременном инфицировании организма вирусами гепатитов В и С. Проведено комплексное изучение сывороточного содержания sCD38, sCD50, sCD95 и sHLA-l антигенов при HGV-инфекции. Установлено, что при инфицировании организма вирусом гепатита G повышается сывороточный уровень растворимых форм CD38, CD50 и CD95 антигенов. Содержание SCD38 и sCD95 антигенов постепенно нормализуется в процессе освобождения организма от вируса.
При вирусных гепатитах В и С осуществлена сравнительная оценка экспрессии мембранных изоформ CD38, CD50 и CD95 антигенов и сывороточного содержания их растворимых аналогов.
Как в сыворотке крови здоровых доноров, так и в сыворотке больных вирусными гепатитами, обнаружено присутствие предположительно олиго-мерной формы sCD95 антигенов. Характер изменения уровня олигомерного sCD95 антигена при вирусных гепатитах В и С отличается от характера изменения сывороточного содержания суммарного sCD95 антигена. Максимально высокие концентрации суммарного sCD95 антигена обнаружены у больных гепатитом С, имеющих сывороточные антитела класса IgM, направленные против core антигена HCV. У больных острым гепатитом В повышенные уровни олигомерного SCD95 антигена связаны с наличием в крови HBeAg.
В отличие от больных хроническим вирусным гепатитом С, не употреблявших наркотики, и имевших высокое содержание олигомерного sCD95 антигена, наркозависимые больные гепатитом С характеризуются нормальным сывороточным уровнем олигомерного SCD95 антигена.
Продемонстрировано, что сывороточная концентрация sCD38 антигена при хроническом гепатите С возрастает у больных, положительных по РНК HCV, и коррелирует с уровнем АЛТ. Больные, отрицательные по РНК HCV, имеют высокие сывороточные концентрации sHLA-l. При вирусном гепатите В наибольший уровень sHLA-l обнаружен в сыворотке крови крови больных, характеризующихся повышенным уровнем активности АЛТ и положительных по HBeAg.
Как у здоровых доноров, так и у больных вирусными гепатитами В и С, обнаружена корреляционная взаимосвязь между сывороточным содержанием олигомерного sCD95 и sCD50 антигенов. Полученные данные расширяют знания о роли растворимых форм мембранных антигенов в реализации иммунного ответа при вирусных инфекциях.
Практическая значимость работы
С использованием моноклональных и поликлональных антител разработаны иммуноферментные методы определения антигенов CD38, CD50 и CD95 (суммарной и олигомерной формы) в биологических жидкостях. Методы применимы для изучения роли этих белков в молекулярных механизмах иммунных реакций, а также для определения прогностической значимости уровня растворимых форм данных антигенов при различных заболеваниях. На основе метода определения растворимой формы CD95 антигена совместно с Нижегородским НИИ травматологии и ортопедии разработан способ определения функционального состояния клеточного звена иммунной системы у пациентов с термической травмой. На данный способ получен патент № 2176795.
Показана принципиальная возможность использования сывороточного уровня растворимых форм CD38, CD95 антигенов и sHLA-l в качестве прогностических показателей течения вирусных гепатитов. Предполагается применение разработанных тестов для контроля эффективности интерферонотера-пии больных вирусным гепатитом С.
Апробация работы
Результаты работы представлены на IV и VI Нижегородской сессии молодых ученых (Н.Новгород, 1999, 2001); III и IV Российской научно-практической конференции с международным участием «Гепатит В, С и D -проблемы диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 1999, 2001); II Съезде иммунологов России (Сочи, 1999); III Съезде иммунологов и аллергологов стран СНГ (Москва, 2000); Научно-практической международной конференции, посвященной памяти академика РАМН и РАМТН И.Н. Блохиной «Фундаментальные и прикладные проблемы медицинской биотехнологии» (Москва, 2000); Научной конференции «Естественные факторы защиты в профилактике и лечении экологически обусловленных заболеваний» (Н. Новгород, 2000); Научно-практической конференции «Гепатит С (Российский консенсус)» (Москва, 2000); ll(IV) Конгрессе специалистов клинической лабораторной диагностики (Москва, 2000); 8-й Международной конференции "СПИД, рак и родственные проблемы" (С.-Петербург, 2000); VIII Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002).
По теме диссертации опубликовано 19 печатных работ.
Апробация диссертации состоялась на расширенной межлабораторной конференции Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной 15 октября 2002 года.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа в объеме 164 листов состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 27 рисунками и 22 таблицами. Библиографический указатель включает 191 источник литературы (36 отечественных и 155 иностранных авторов).
Заключение диссертационного исследования на тему "Сывороточный уровень растворимых форм мембранных антигенов клеток иммунной системы при вирусных гепатитах B, C и G"
144 ВЫВОДЫ
1. Разработаны иммуноферментные методы определения растворимых форм CD38, CD50 антигенов, а также суммарной и олигомерной форм CD95 антигена.
2. Показано, что при остром и хроническом гепатите В наблюдается повышение сывороточных уровней растворимых форм CD38 антигена, суммарного CD95 антигена и молекул HLA I класса. Высокие концентрации sHLA-l обнаружены в сыворотке крови больных острым гепатитом В, положительных по HBeAg и имеющих повышенный уровень аланин-аминотрансферазы.
3. Выявлено, что при остром и хроническом гепатите С повышена концентрация SCD38 антигена. Сывороточные уровни sCD50, sHLA-l и sCD95 антигенов статистически достоверно возрастали только при хронической форме инфекции.
4. Установлено, что при хронической форме гепатита С высокий уровень sCD38 антигена коррелирует с увеличением активности АПТ и присутствием в сыворотке крови РНК HCV. Повышенные концентрации sHLA-l у таких больных, напротив, связаны с отсутствием РНК HCV и снижением количества лейкоцитов в периферической крови.
5. Показано, что CD95 антиген может присутствовать в сыворотке крови как в мономерной, так и, предположительно, в олигомерной форме. Повышенный уровень олигомерной формы SCD95 антигена зарегистрирован у больных вирусным гепатитом В, положительных по HBeAg. Уровень суммарного sCD95 антигена был наиболее высок у больных гепатитом С, имеющих антитела класса IgM к core протеину HCV.
6. Обнаружено, что при смешанной форме инфицирования вирусами гепатитов В и С, сывороточная концентрация растворимых форм всех исследованных антигенов достоверно увеличивается не только по сравнению с нормой, но и в сравнении с моноинфицированием.
7. Продемонстрировано, что течение HGV-инфекции сопровождается повышением концентрации сывороточных форм растворимых антигенов
CD38, CD50, CD95 (как суммарной, так и олигомерной формы). Период санации характеризуется нормализацией уровней sCD38 и sCD95 антигенов.
146
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Глобальная иммунологическая сеть включает в себя антитела и анти-идиотипические антитела, цитокины, Т- и В-клеточные рецепторы, множество других мембранных белков, осуществляющих и регулирующих межклеточные взаимодействия, а также их растворимые формы, которые образуются как путем шеддинга, так и за счет альтернативного сплайсинга матричной РНК. Растворимые формы мембранных белков клеток иммунной системы осуществляют чаще всего многофункциональное воздействие. Нарушение их равновесного содержания приводит к блокаде межклеточных мембранных взаимодействий и ограничению иммунного ответа [23]. В настоящей работе мы исследовали содержание растворимых форм четырех мембранных антигенов клеток иммунной системы, относящихся к разным функциональным группам белков в сыворотке крови больных вирусными гепатитами с парентеральным механизмом передачи. В качестве представителя растворимого белка адгезии мы выбрали ранее не исследованную при вирусных гепатитах растворимую форму CD50 антигена (молекула ICAM-3). Поскольку в механизмах реализации иммунного ответа на вирусные инфекции важную роль играют молекулы гистосовместимости I класса, мы оценили уровень растворимой формы антигенов гистосовместимости I класса. Среди активационных антигенов был выбран также ранее не исследованный при вирусных гепатитах растворимый CD38 антиген. И, наконец, представителем четвертой функциональной группы белков был выбран CD95 антиген, через который инициируется Fas-зэвисимый путь апоптоза [29]. Определялся суммарный пул SCD95 антигена и содержание его олигомерной формы.
С применением монокпональных и поликпональных антител разработано три новых метода определения растворимых изоформ мембранных белков клеток иммунной системы: растворимого CD38 антигена, CD50 антигена, растворимого CD95 антигена (суммарная фракция). В работе также использован разработанный ранее Е.С. Вязьминой метод определения растворимого растворимых молекул HLA I класса.
Зарубежными исследователями было продемонстрировано, что Fas-антиген (CD95) локализуется на мембране в виде функционально активного тримера. Видимо, его растворимые изоформы сохраняют способность к образованию белковых комплексов [185]. Путем модификации метода определения суммарного sCD95 антигена впервые показано существование в сыворотке крови , предположительно, олигомерной формы sCD95 антигена. Для определения функциональной роли комплексов (олигомеров) и количества мономеров, входящих в их состав, требуются дальнейшие исследования.
В процессе работы были исследованы изменения сывороточной концентрации растворимого sCD50 антигена при различных вирусных гепатитах с парентеральным механизмом заражения (HBV, HCV и HGV). Мембранная форма CD50 антигена, экспрессируемая на поверхности лейкоцитов, играет важную роль в инициации иммунного ответа. Этот антиген переходит в свободную растворимую форму в результате шеддинга мембранной формы. Известно, что растворимый CD50 антиген образуется за счет схода с мембран трех основных типов клеток: активированных нейтрофилов, макрофагов и активированных Т-лимфоцитов. CD50 антиген, наряду с широко известной молекулой ICAM-1 (CD54), является лигандом LFA-1 антигена. Но, в отличие от ICAM-1, мембранная экспрессия которого индуцируется при воздействии многих факторов и, в первую очередь при воспалении, CD50 антиген характеризуется конституитивной экспрессией. Уровень экспрессии этого антигена не чувствителен к медиаторам воспаления [46].
У больных вирусным гепатитом В концентрация sCD50 антигена в сыворотке периферической крови повышалась в среднем в два раза. Это происходило как при острой форме инфекции, так и при хроническом течении заболевания. Однако различия с нормой были статистически недостоверны. Причиной явилась выраженная гетерогенность тестируемых групп больных по данному показателю.
В группе больных острой формой гепатита В была проведена оценка относительного содержания мононуклеарных клеток периферической крови, экспрессирующих CD50 антиген. Снижение относительного количества CD50-положительных клеток и повышение в два раза сывороточного уровня sCD50 при остром вирусном гепатите В, можно рассматривать как результат шеддинга молекулы CD50 с мембран мононуклеарных клеток.
Изучение сывороточного уровня SCD50 антигена у больных острой формой вирусного гепатита С на протяжении всего курса лечения также не выявило достоверных отличий от нормы. И в этом случае вирусная инфекция сопровождалась широким разбросом индивидуальных значений sCD50 антигена. Относительное содержание CD50+ положительных мононуклеарных клеток периферической крови при HCV-инфекции не менялось и соответствовало нормальному донорскому уровню. У больных хронической формой вирусного гепатита С было зарегистрировано достоверное увеличение уровня SCD50 антигена. Однако, уровень мононуклеарных клеток, экспрессирующих мембранную форму CD50 антигена, не менялся. При хронической форме вирусного гепатита С выявлена положительная корреляция между уровнем сывороточного sCD50 антигена и показателями тимоловой пробы. Повышение показателей тимоловой пробы регистрируется, как правило, при хроническом активном гепатите и свидетельствует о нарушении белково-синтетической функции печени. Повышенный шеддинг с мембраны нейтрофилов CD50 антигена возможен в очагах воспаления, формирующихся при хроническом активном гепатите. Этот процесс может быть причиной значительного увеличения содержания SCD50 в крови больных [149]. Полученные данные позволяют предположить, что при хронической форме вирусного гепатита С изменение концентрации sCD50 антигена отражает интенсивность воспалительных процессов в печени.
При одновременном инфицировании организма человека вирусами гепатитов В и С уровень исследуемого антигена в сыворотке крови был существенно повышен по сравнению с нормой и соответствовал концентрации sCD50 у больных хронической формой гепатита С.
Несколько иная картина наблюдалась при HGV-инфекции. Установлено, что лица инфицированные HGV, а также лица, имеющие в крови антитела против Е2-пртеина HGV, характеризовались повышенным уровнем SCD50 в сравнении со здоровыми донорами, отрицательными по антителам к Е2-протеину. Возможно, высокий уровень sCD50 антигена в биологических жидкостях способствует длительной персистенции вируса гепатита G. Он может тормозить иммунный ответ еще на начальных этапах инфекционного процесса. Несмотря на то, что HGV-инфекцию ассоциируют с поражением печени, показатели активности сывороточных трансаминаз находятся в пределах нормы и обширных очагов воспаления в печени не формируется. Предполагается, что гепатотропизм вируса HGV вторичен. Обладая лимфотропностью, HGV может инфицировать гепатоциты при попадании лимфоцитов в печень [56]. Вероятно, инфицирование лимфоцитов вирусом гепатита G способствует продукции растворимых форм таких поверхностных лимфоцитарных антигенов как CD50 антиген. Если наряду с РНК HGV организм был инфицирован вирусами С и/или В, содержание SCD50 сохранялось на том же уровне, что и при моноинфицировании HGV.
Центральная роль в презентации антигена и формировании иммунного синапса принадлежит молекулам гистосовместимости I класса. Обнаружено, что растворимая форма антигена также активно участвует в регуляции иммунного ответа. Нами показано, что концентрация сывороточного sHLA-l возрастала при вирусном гепатите В. При острой форме инфекции повышенный в 1,6-1,8 раза уровень sHLA-l сохранялся в течение всего периода лечения в стационаре. В группе больных хроническим гепатитом В сывороточная концентрация sHLA-l также была повышена. У больных острой формой гепатита В в разгар заболевания была выявлена положительная корреляция между уровнем sHLA-l и количественным содержанием аланин-аминотрансферазы. Больные, у которых в сыворотке крови присутствовал НВе антиген, характеризовались существенным увеличением сывороточного уровня sHLA-l. Те пациенты, у которых НВеАд не выявлялся, но присутствовали антитела к НВе антигену, имели нормальный уровень sHLA-l. Как известно, наличие в крови НВеАд характеризует высокую репликативную активность вируса гепатита В. Таким образом, увеличение концентрации sHLA-l в сыворотке крови больных острым гепатитом В в разгар заболевания связано с высокой репликативной активностью вируса и повышением уровня АЛТ.
При острой форме гепатита С уровень sHLA-l возрастал к моменту завершения курса лечения в стационаре. При хроническом течении заболевания тоже зарегистрировано повышенное содержание sHLA-l в сыворотке крови. У больных, положительных по РНК HCV, уровень sHLA-l соответствовал норме. Отсутствие РНК HCV, напротив, сопровождалось существенным повышением концентрации растворимой формы исследуемого антигена. Кроме того, у больных хронической формой гепатита С увеличение концентрации sHLA-l сопровождалось снижением концентрации лейкоцитов периферической крови. На основании полученных данных можно предположить, что высокий уровень sHLA-l у больных хронической формой вирусного гепатита С связан со снижением вирусной активности и падением интенсивности воспалительных процессов.
Коинфицирование вирусами гепатитов В и С, приводило к росту содержания sHLA-l по сравнению не только с нормой, но и с моноинфицированием HCV и HBV. Представляется вероятным, что существенное увеличение концентрации sHLA-l связано с активным противовирусным ответом организма, который выражен особенно явно в связи с кумулятивным эффектом.
Оценка сывороточного уровня sHLA-l у лиц, положительных по РНК HGV, не выявила каких-либо изменений в содержании данного антигена по сравнению с нормой. При одновременном присутствии РНК HGV и антител к Е2-протеину концентрация sHLA-l в сыворотке крови несколько понижалась по сравнению со здоровыми донорами. У носителей антител к Е2-протеину вируса гепатита G, уровень sHLA-l достоверно от нормального не отличался. В то же время, коинфицирование вирусами гепатитов G, В и/или С приводило к статистически достоверному повышению содержания sHLA-l по сравнению с контрольной группой. Это явление закономерно, так как представленные выше данные свидетельствуют об увеличении содержания sHLA-l у больных гепатитами В и С. Полученные результаты демонстрируют, что уровень sHLA-I в сыворотке крови HGV-инфицированных лиц чутко реагирует на развитие таких вирусных инфекций как гепатиты В и С.
При исследовании сывороточного уровня sCD38 антигена было установлено, что у больных острой формой вирусного гепатита В концентрация данного антигена была повышена на протяжении всего курса лечения в стационаре. К моменту выхода из стационара обнаруживалась лишь тенденция к снижению уровня sCD38 антигена. В то же время, у больных возрастало относительное количество активированных С038-положительных мононуклеарных клеток в периферической крови. Существует общепринятое мнение, что именно шеддинг мембранного CD38 антигена обусловливает появление в сыворотке крови растворимых форм антигена [83]. Источником sCD38 антигена, наряду с активированными лимфоцитами, могут быть моноциты/макрофаги. Показано, что CD38 антиген может сходить с мембран моноцитов во время миграции клеток в очаг поражения [131]. В соответствии с этими результатами находятся наши данные о наличии у больных острым гепатитом В отрицательной корреляции между содержанием sCD38 и количеством моноцитов в периферической крови.
Увеличение содержания sCD38 антигена наблюдалось также при хронической форме течения вирусного гепатита В. Высокий уровень сывороточного sCD38 антигена, вероятно, является отражением активации иммунной системы организма в ответ на вирусную инфекцию. При хронической форме гепатита В свой вклад в повышение уровня сывороточного sCD38 антигена могут вносить также аутоиммунные процессы [31].
При вирусном гепатите С также было зафиксировано достоверное повышение содержания sCD38 антигена в сыворотке крови. Однако как при острой, так и при хронической форме заболевания уровень sCD38 был ниже, чем у больных гепатитом В. Это объясняется иным характером иммунных реакций на вирус гепатита С, чем при HBV-инфекции. Высокая генетическая изменчивость вируса ведет к разфокусированности иммунного ответа и снижает его активность [30]. В то же время, у больных острым и хроническим гепатитом С зарегистрировано повышение относительного количество мононуклеарных клеток периферической крови, положительных по CD38 антигену. Таким образом, активированные мононуклеарные клетки могут быть источником растворимой формы CD38 антигена. Было показано, что больные хроническим гепатитом С, у которых ПЦР-анализ выявил присутствие РНК HCV в сыворотке крови, имели значительно повышенный уровень sCD38 антигена. Те пациенты, у которых РНК HCV зарегистрировано не было, характеризовались нормальными значениями sCD38. Кроме того, у больных хронической формой гепатита С концентрация sCD38 антигена коррелировала с сывороточным содержанием АЛТ. Закономерно, что персистенция вируса стимулирует иммунный ответ и приводит к увеличению числа активированных мононуклеарных клеток периферической крови.
Показано, что при коинфицировании HBV+HCV концентрация sCD38 антигена превышала нормальные значения. Уровень сывороточного SCD38 в исследуемой группе соответствовал его содержанию у больных ОГВ и превосходил средние показатели в группе больных хроническим гепатитом С. Выявлена положительная корреляция между уровнем сывороточного sCD38 и содержанием АЛТ. Это характерно и для больных с моноинфекцией (хронический гепатит С). Известно, что при реализации ответа на вирусную инфекцию основная роль отводится клеточному звену иммунитета. Возрастает количество активированных иммунокомпетентных клеток, экспрессирующих CD38 антиген. По-видимому, при вирусном гепатите С, они и являются источником растворимой формы CD38 антигена, выполняющего ограничительную функцию, контролируя миграцию активированных клеток в очаг поражения.
Содержание sCD38 возрастает и в ответ на инфицирование вирусом гепатита G. Определение концентрации sCD38 антигена в образцах сыворотки крови, показало, что лица, положительные по РНК HGV, имели наиболее высокий уровень SCD38 по сравнению с остальными группами (лица, несущие маркеры, свидетельствующие о встрече с вирусом гепатита G). Однако при одновременном наличии РНК HGV и антител к Е2-белку HGV концентрация сывороточного sCD38 антигена соответствовала норме. Если инфицирование вирусом гепатита G регистрировалось на фоне HCV-инфекции, то содержание SCD38 было несколько ниже, чем при моноинфицировании HGV. Когда HGV-инфекция сопровождалась HBV или HBV+HCV концентрация SCD38 от нормальной донорской не отличалась. Полученные данные показывают, что иммунная система реагирует на присутствие в организме вируса гепатита G, однако особенности иммунного ответа при этой форме инфекции требуют дальнейшего изучения.
Известно, что экспрессия Fas-молекулы существенно повышается на мембране гепатоцитов, инфицированных вирусами В и С [79]. Апоптоз является одним из основных механизмов удаления инфицированных вирусом клеток. Растворимая форма CD95, напротив, способна блокировать реализацию этого процесса. Исследование группы больных вирусным гепатитом В показало, что содержание sCD95 антигена у больных острой формой гепатита повышено по сравнению с нормой и снижается только к моменту окончания курса лечения в стационаре. Концентрация sCD95 антигена превышала нормальные донорские значения и при хронической форме инфекции. Относительное содержание мононуклеарных клеток, экспрессирующих CD95 антиген, при этом не менялось. Т-лимфоциты способны продуцировать растворимую форму CD95 протеина за счет альтернативного сплайсинга мРНК. Однако не только лимфоцитарные клетки, но и гепатоциты обладают способностью к продукции растворимого CD95 антигена. Показано, что продукция sCD95 увеличивается при патологии печени [52, 176].
Мы предполагаем, что sCD95 антиген присутствует в сыворотке крови как в мономерной, так и в олигомерной форме. Результаты тестирования олигомерной формы sCD95 антигена отличались от результатов оценки суммарного sCD95. У больных вирусным гепатитом В несмотря на тенденцию к увеличению содержания олигомерной формы sCD95, не было выявлено статистически достоверных отличий от нормы ни при острой, ни при хронической форме заболевания. Дальнейший анализ результатов показал, что наиболее высокие уровни олигомерного sCD95 были зарегистрированы у больных, положительных по HBeAg. Группа больных, отрицательных по НВеАд, но положительных по антителам к НВеАд, напротив, характеризовалась нормальными сывороточными концентрациями олигомерной формы sCD95. Предполагается, что НВеАд, секретируемый в кровоток, ингибирует способность организма к сильному цитотоксическому ответу. Причины подобного ин-гибирования до конца не выяснены [125]. Возможно, что присутствие НВеАд связано с изначально высоким уровнем продукции олигомерной формы sCD95 антигена, блокирующего запуск апоптоза.
Иначе менялся уровень sCD95 антигена при вирусном гепатите С. У больных острым гепатитом С при поступлении в стационар концентрация суммарного sCD95 соответствовала норме. Практически не менялась она и к моменту окончания лечения в стационаре. При хронической форме заболевания уровень sCD95 антигена статистически достоверно увеличивался по сравнению с нормой и острой формой гепатита С. Анализ относительного содержания С095-положительных лимфоцитов в периферической крови не выявил каких-либо отличий от нормы как при острой, так и при хронической форме заболевания. При определении олигомерной формы sCD95 антигена регистрировался широкий разброс индивидуальных показателей. Однако тенденция к повышению олигомерного sCD95 прослеживалась при острой и хронической формах гепатита С весь период лечения. Установлено, что присутствие в крови антител класса IgM против соге-протеина HCV сочеталось с более высокими концентрациями суммарного sCD95 антигена. Это было характерно как для острой, так и для хронической форы инфекции. У больных хроническим гепатитом С содержание как суммарного, так и олигомерного sCD95 коррелировало с показателями тимоловой пробы, повышенные значения которой характерны для хронического активного гепатита. Таким образом, как при гепатите В, так и при гепатите С наиболее высокие концентрации sCD95 регистрировались при активной репликации вируса.
У больных хроническим гепатитом С были выявлены значительные различия в содержании растворимого олигомера CD95 антигена среди больных, употреблявших и не употреблявших наркотики. Больные хроническим гепатитом С, не употреблявшие наркотики, характеризуются повышенным сывороточным уровнем олигомерного SCD95 антигена, в отличие от наркозависимых больных, у которых содержание данного антигена было близким к норме.
Еще более возрастал уровень как суммарной, так и олигомерной формы sCD95 антигена при коинфицировании вирусами гепатитов В и С. Содержание sCD95 антигена в этом случае превосходило не только средние донорские значения, но и показатели, выявляемые при моноинфекциях. Полученные результаты свидетельствуют о том, что поражение организма человека двумя вирусами (HCV и HBV), несомненно, влияет на уровень растворимой формы антигена апоптоза в сыворотке периферической крови.
Установлено, что в период персистенции в организме вируса гепатита G резко возрастал уровень сывороточного sCD95. При одновременном наличии антител к Е2-протеину концентрация антигена снижалась до нормальных значений. Она сохранялась в пределах нормы и после освобождения организма от вируса гепатита G. Аналогичная тенденция наблюдалась при изучении олигомерной формы sCD95 антигена. По-видимому, повышенный уровень растворимого CD95 антигена у HGV-инфицированных лиц приводит к блокаде взаимодействий между лигандом CD95 антигена на цитотоксических Т-лимфоцитах и мембранным CD95 антигеном, экспрессируемым гепатоцитами. В результате повреждение клеток печени цитотоксическими Т-лимфоцитами оказывается незначительным. Этим можно объяснить умеренное повышение активности сывороточных трансаминаз при остром гепатите G и мягкий характер клинического течения хронического гепатита G. Анализ уровня растворимой формы антигена апоптоза не выявил достоверных различий между больными с моноинфекцией HGV и теми пациентами, у которых HGV-инфекция протекала на фоне гепатитов В и/или С. Это касается как суммарной так олигомерной формы антигена.
Полученные данные позволяют рассматривать растворимые формы мембранных антигенов в качестве маркеров, характеризующих особенности иммунных процессов. Корреляционные соотношения между рядом клинических показателей и уровнями растворимых форм таких антигенов как CD38, CD95, HLA-I свидетельствуют об их связи с интенсивностью клеточного звена иммунного ответа. Изменение содержания растворимых форм одного или целого ряда мембранных антигенов в сыворотке крови не может быть специфическим маркером той или иной вирусной инфекции. Однако они являются показателями активности иммунного ответа организма и могут быть использованы в прогнозировании течения вирусных инфекций.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Птицына, Юлия Сергеевна
1. Аббасова С.Г., Липкин В.М., Трапезников Н.Н. и др. Система FAS FASL в норме и патологии. // Вопр. биол., мед., фарм. химии. - 1999. - № 3. - С. 317.
2. Алясова А.В., Королева В.В., Крыжанова М.А. Исследование содержания растворимых антигенов CD38, CD25, CD18 у больных лимфогранулематозом. // Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - № 9. - С. 40.
3. Алясова А.В., Королева В.В., Крыжанова М.А. Растворимая форма CD38 антигена в иммунологическом мониторинге лимфогранулематоза. // Аллергология и иммунология: Тез. докл. Ill съезда иммунологов и аллергологов СНГ. 2000. - Т. 1. - № 2. - С. 167-168.
4. Балаян М.С., Михайлов М.И. Энциклопедический словарь вирусные гепатиты. - М.: Амипресс. - 1999. - 302 с.
5. Барышников А.Ю., Тоневицкий А.Г. Моноклональные антитела в лаборатории и клинике. М.: Медицина. - 1997. -212 с.
6. Воробьев В.Г., Новиков В.В., Лебедева А.И. Иммунодиагностика острых лейкозов. Нижний Новгород: Изд-во НГМА. - 1998. - С. 8.
7. Вязьмина Е.С. Особенности иммунного ответа организма на Treponema Pallidum. Автореф. канд. дисс. - Москва. - 2002. - 22 с.
8. Вязьмина Е.С., Фриго Н.В., Комарова В.Д. и др. Сравнительное исследование уровня растворимых форм CD50 и CD95 антигенов в сыворотке крови больных сифилисом. // Материалы XII конференции "Ферменты микроорганизмов". Казань. - 2001. - С. 73-74.
9. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика. - 1999. -450 с.
10. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. и др. Теория и практика имму-ноферментного анализа. М.: Высшая школа. - 1991. - 288 с.
11. Лебедев М.Ю., Крыжанова М.А., Кораблев С.Б. и др. Растворимый CD38 антиген информативный показатель состояния иммунной системы при ожоговой болезни. // Нижегородский медицинский журнал. - 2000. - № 2. - С. 1014.
12. Меньшиков В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М. -1987. - С. 179.
13. Михайлов М.И. Гепатит G проблемы изучения. // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. - 1997. - № 1. - С. 3-11.
14. Никонова М.Ф., Литвина М.М., Варфоломеева М.И. и др. Апоптоз и пролиферация как альтернативные формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию. // Иммунология. 1999. - № 2. - С. 20-23.
15. Новиков В.В. Диагностическая значимость при вирусных инфекциях мембранных и растворимых форм дифференцировочных антигенов клеток иммунной системы. // Гематология и трансфузиология. 1996. - № 6. - С. 40-43.
16. Новиков В.В. Характеристика и биотехнология моноклональных антител против лимфоцитарных антигенов. Автореф. докт. дисс. - М. - 1994. - 48 с.
17. Новиков В.В., Алясова А.В., Варшавская Л.В. и др. Прогностическое значение уровня растворимого CD38 антигена при раке молочной железы. // Аллергология и иммунология. М. - 2001. - Т. 2. - № 2. - С. 116.
18. Новиков В.В., Барышников А.Ю. Растворимые формы мембранных белков клеток иммунной системы как компоненты глобальной иммунологической сети. // Тезисы научн. докладов III Съезда биохимического общества. -С.-Пб. 2002. - С. 196-197.
19. Новиков В.В., Трофимова М.Н., Андреев А.В. и др. Очистка моноклональных антител с помощью стафилококкового реагента, содержащего белок А. //Лабораторное дело. 1987. - № 6. - С. 606-610.
20. Новиков В.В., Трофимова М.Н., Жильцова М.А. и др. Сравнение действия иристана и неполного адъюванта Фрейнда на формирование асцита мышей-носителей гибридомных клеток. // Антибиотики и химиотерапия.1988. №7. - С. 530-532.
21. Онищенко Г.Г. Материалы к докладу на VIII Всероссийском съезде эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. // Мир вирусных гепатитов. -2002. -№ 14.-С. 2-4.
22. Полак Д., Норден С.В. Введение в иммуноцитохимию: современные методы и проблемы. М.: Мир. - 1987. - С. 23-27.
23. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М.: Мир. - 2000. - 592 с.
24. Рыжов С.В., Новиков В.В., Молекулярные механизмы апоптоза. // Российский биотерапевтический журнал. 2002. - № 3. - С. 27-33.
25. Семененко Т.А. Клеточный иммунный ответ при гепатите С. И Вирусные гепатиты: Достижения и перспективы. 2000. - № 1. - С. 3-10.
26. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты. С.-Пб.: ТЕЗА. - 1997. - 306 с.
27. Фримель Г. Иммунологические методы. М.: Медицина. - 1987. - 472 с.
28. Хаитов P.M., Алексеев Л.П. Физиологическая роль главного комплекса гистосовместимости человека. // Иммунология. 2001. - № 3. - С. 4-12.
29. Хлопова И.Н., Быченко Д.В., Самохвалов Е.И. Влияние вируса гепатита G на течение острого гепатита В и С. // Вопросы вирусологии. 1999. - № 2. - С. 265-268.
30. Abrignahi S. Cellular immune reactions against hepatitis С core antigen in chronic hepatitis C. // Gastroenterology. 1995. - Vol. 108. - № 6. - P. 19571958.
31. Acevedo A., del Pozo M.A., Arroyo A.G. et al. Distribution of ICAM-3 beaming cells in normal human tissues. Expression of a novel counter-receptor for LFA-1 in epidermal Langerhans cells. // Am. J. Pathol. 1993. - Vol. 143. - P. 774-783.
32. Ahmed R., Gray D. Immunological memory and protective immunity: understanding their relation. // Science. 1996. - Vol. 272. - P. 54-60.
33. Al-Maini M.H., Mountz J.D., Al-Mohri H.A. et al. Serum levels of soluble Fas correlate with indices of organ damage in systemic lupus erythematosus. // Lupus. -2000. Vol. 9. - № 2. - P. 132-139.
34. Alter M.J., Gallaher M., Morris T. et al. Acute non-A-E hepatitis in the United States and the role hepatitis G virus infection. // New Engl. J. of Medicine. -1997.-Vol. 336.-P. 741-746.
35. Antonaci S., Jirillo E., Schiraldi O. Soluble HLA class I antigens in chronic hepatitis C: a disease-associated manifestation or molecules modulating immu-noresponsiveness? II Immunopharmacol. Immunotoxicol. 1999. - Vol. 21. - № 4. - P. 727-738.
36. Baldwin R.L., Tran H., Karlan B.Y. Primary ovarian cancer cultures are resistant to Fas-mediated apoptosis. // Gynecol. Oncol. -1999. Vol. 74. - № 2. -P. 265-271.
37. Bell H., Simmonds P., Helium K. et. al. Treatment of infection with hepatitis G virus/GBV-C with interferon alfa. // J. of Hepatology. 1997. - Vol. 1. - № 26. -P. 203.
38. Bijl M., Lopik Т., Limburg P.C. et al. Do elevated levels of serum-soluble fas contribute to the persistence of activated lymphocytes in systemic lupus erythematosus? // J. Autoimmun. 1998. - Vol. 11. - № 5. - P. 457-463.
39. Bleijs D.A., Geijtenbeek T.B., Figdor C.G. et al. DC-SIGN and LFA-1: a battle for ligand. // TRENDS in Immunology. 2001. - Vol. 22. - № 8. - P. 457-463.
40. Boni CM Bertoletti A., Penna A. et al. Lamivudine treatment can restore T cell responsiveness in chronic hepatitis B. // J. Clin. Invest. 1998. - Vol. 102. - P. 968-975.
41. Bresciani A., Pirozzi G., Spera M. et. al. Increased level of serum HLA class I antigens in patients with systemic lupus erythematosus. Correlation with disease activity. // Tissue Antigens. 1998. - Vol. 52 - № 1. - P. 44-50.
42. Brieva J.A., Villar L.M., Leoro G. et al. Soluble HLA class I antigen secretion by normal lymphocytes: relationship with cell activation and effect of interferon-gamma. // Clin. Exp. Immunol. 1990. - Vol. 82. - № 2. - P. 390-395.
43. Bromley S.K., Burack W.R., Johnson K.G. et al. The immunological synapse. // Annu. Rev. Immunol. 2001. - Vol. 19. - P. 375-396.
44. Carbone E., Terrazzano G., Colonna M. et al. Natural killer clones recognize specific soluble HLA class I molecules. // Eur. J. Immunol. 1996. - Vol. 26. - № 3. - P. 683-689.
45. Cascino I., Fiucci G., Papoff G. et al. Three functional soluble forms of the human apoptosis-inducing Fas molecule are produced by alternative splicing. // The Journal of Immunology. 1995. - Vol. 154. - P. 2706-2713.
46. Chang K.M., Rehermann В., Chisari F.V. Immunopathology of hepatitis C. // Springer Semin. Immunopathol. 1997. - Vol. 19. - P. 57-68.
47. Charles A., Janeway Jr., Travers P. et. al. Immunobiology. London: Current Biology Ltd. - 1994. - P. 222 - 227.
48. Chemin J., Vermot-Desroches C., Baginski I. et al. Selective detection of human hepatitis В virus surface and core antigens in peripheral blood mononuclear cell subsets by flow cytometry. // J. of Viral Hepatitis. 1994. - Vol. 2. - № 2. -P. 91-97.
49. Colombatto P., Randone A., Civico G. et al. Hepatitis G virus RNA in the serum of patients with elevated gamma glutamyl transpeptidase and alkaline phosphatase: a specific liver disease. II J. of Viral Hepatitis. 1996. - Vol. 3. -P. 301-306.
50. Contini P., Ghio M., Merlo A. et al. Soluble HLA class I/CD8 ligation triggers apoptosis in EBV CD8(+) cytotoxic T lymphocytes by Fas/Fas-ligand interaction. II Hum. Immunol. 2000. - Vol. 61. - № 12. - P. 1347-1351.
51. Cooper S., Erickson A., Adams E. et al. Analysis of a successful immune response against hepatitis С virus. // Immunity. 1999. - Vol. 10. - P. 439-449.
52. Cramp M.E., Carucci P., Rossol A. et al. Hepatitis С virus (HCV) specific immune response in anti-HCV positive patients without hepatitis С viraemia. // Gut.- 1999. Vol. 44. - P. 424-429.
53. Crespo J., Rivero M., Mayorga M. et al. Involvement of the fas system in hepatitis С virus recurrence after liver transplantation. // Liver Transpl. 2000. -Vol. 6. - № 5. - P. 562-569.
54. Deaglio S., Dianzani U., Horenstein A.L. et al. Human CD38 ligand. A 120-KDA protein predominantly expressed on endothelial cells. // J. Immunol. -1996.-Vol. 156.-P. 727-734.
55. Deaglio S., Mehta K., Malavasi F. Human CD38: a (r)evolutionary story of enzymes and receptors. // Leukemia Research. 2001. - Vol. 25.- P. 1-12.
56. Deaglio S., Morra M., Mallone R. et al. Human CD38 (ADP ribosyl cyclase) is a counter-receptor of CD31, an Ig superfemily member. II J. Immunol. 1998. -Vol. 160.-№ 1.-P. 395-402.
57. Diepolder H.M., Zachoval R., Hoffmann R.M. et al. The role of hepatitis С virus specific CD4+ T lymphocytes in acute and chronic hepatitis C. // J. Mol. Med.- 1996. Vol. 74. - P. 583-588.
58. Duran 1., Martinez-Caceres E.M., Rio J. et al. Immunological profile of patients with primary progressive multiple sclerosis. // Brain. 1999. - Vol. 122. -P. 2297-2307.
59. Faubion W.A., Gores G.J. Death receptor in liver biology and pathobiology. // Hepatology. 1999. - Vol. 29. - P. 1-4.
60. Filaci G., Contini P., Brenci S. et al. Soluble HLA class I and class II molecule levels in serum and cerebrospinal fluids of multiple sclerosis patients. // Hum. Immunol. 1997. - Vol. 54. - № 1. - P. 54-62.
61. Flora A., Franco L., Guida L. et al. Ectocellular CD38-catalysed synthesis and intracellular Ca(2+)-mobilizing activiity of cyclic ADF-ribose. // Cell Biochem. Biophys. 1998. - Vol. 28. - № 1. - P. 45-62.
62. Funaro A., Horenstein A.L., Calosso L. et al. Identification and characterization of an active soluble form of human CD38 in normal and pathological fluids. // International Immunology. 1996. - Vol. 8. - № 11. - P. 1643-1650.
63. Funaro A., Morra M., Calosso L. et al. Role of the human CD38 molecule in В cell activation and proliferation. // Tissue Antigens. 1997. - Vol. 49. - P. 715.
64. Fushimi M., Furukawa F., Tokura Y. et al. Membranous and soluble forms of Fas antigen in cutaneous lupus erythematosus. //J. Dermatol. 1998. - Vol. 25. - № 5. - P. 302-308.
65. Ghio M., Contini P., Mazzei C. et al. Soluble HLA class I, HLA class II, and Fas Ligand in blood components: a possible key to explain the immunomodulatory effects of allogeneic blood transfusions. // Blood. 1999. - Vol. 93. - № 5. -P. 1770-1777.
66. Giacomelli R., Passacantando A., Parzanese I. et al. Serum levels of soluble CD30 are increased in ulcerative colitis (UC) but not in Cronhn s disease (CD). // Clin. Exp. Immunol.-1998.-Vol. 111. № 3. - P. 532-535.
67. Griffitths C.E., Boffa M.J., Gallatin W.M. et al. Elevated levels of circulating intercellular adhesion molecule-3 (clCAM-3) in Psoriasis. // Acta Derm. Venereol. 1996. - Vol. 76. - № 1. - P. 2-5.
68. Grimaldi H. M., Bazan J.С., Lund J. et al. Formation and hydrolysis of cyclic ADP-ribose catalyzed by lymphocyte antigen CD38. // Science. 1993. - Vol. 262.-P. 1056.
69. Gruner N.H., Gerlach T.J., Jung M.C. et al. Association of hepatitis С virus-specific CD8+ T cells with viral clearance in acute hepatitis C. // J. Infect. Dis. -2000. Vol. 181. - № 5. - P. 1528-1536.
70. Guidotti L.G., Rochford R., Chung J. et al. Viral clearance without destruction of infected cells during acute HBV infection. // Science. 1999. - Vol. 284. - P. 825-829.
71. Hagihara M., Shimura Т., Takebe K. et al. Serum concentrations of soluble HLA class I and CD8 forms in patients with viral hepatic disoders. // J. Gastroenterol. - 1997. - Vol. 32. - № 3. - P. 338-343.
72. Hayashi N., Mita E. Fas system and apoptosis in viral hepatitis. // J. Gastroenterol. Hepatol. 1997. - Vol. 12. - P. 223-226.
73. Haydon G.H., Jarvis L., Simpson K.J. et al. The clinical significance of the detection of hepatitis GBV-C RNA in the serum of patients with fulminant, presumed viral hepatitis. // J. Viral. Hepatit. 1997. - Vol. 4. - P. 45-49.
74. Heaney M.L., Golde D.W. Soluble cytokine receptors. // Blood. 1996. - Vol. 87. - № 3. - P. 847-857.
75. Hoffmann J.C., Bahr M.J., Tietge U.F. et al. Detection of a soluble form of the human adhesion receptor lymphocyte function-associated-antigen-3 (LFA-3) in patients with chronic liver desease. // J. Hepatol. 1996. - Vol. 25. - P. 465-473.
76. Horenstein A.L., Stockinger H., Imnof B.A. et al. CD38 binding to human myeloid cells is mediated by mouse and human CD31. // Biochem. J. 1998. -Vol. 330.-P. 1129-1135.
77. Hosaka N., Oyaizu N., Than S. et al. Correlation of loss of CD4 T cells with plasma levels of both soluble form Fas (CD95) Fas ligand (FasL) in HIV-infected infants. // Clin. Immunol. 2000. - Vol. 95. - № 1. - P. 20-25.
78. Hosaka S., Shah M.R., Pope R.M. et al. Soluble forms of P-selectin and intercellular adhesion molecule-3 in synovial fluids. // Clin. Immunol. Immunopa-thol. 1996. - Vol. 78. - № 3. - P. 276-282.
79. Inchauspe G. Protection and defence mechanisms in HCV infection. // Nephrol. Dial. Transpl.-1996.-Vol. 11.-P. 6-8.
80. Inostroza J., Ferrada J., Navarrete C. et al. Soluble histocompatibility class I antigens and beta 2-microglobulin in pregnant females and cord blood samples. // Hum. Immunol. 1997. - Vol. 54. - № 1. - P. 63-68.
81. Inostroza J., Munoz P., Espinoza R. et al. Quantitation of soluble HLA class I heterodimers and beta 2-microglobulin in patients with active pulmonary tuberculosis. // Hum. Immunol. 1994. - Vol. 40. - № 3. - P. 179-182.
82. Inoue S., Kontani K., Tsujimoto N. et al. Protein-tyrosine phosphorylation by lgG1 subclass CD38 monoclonal antibodies is mediated through stimulation of the Fcyll receptors in human myeloid cell lines. //J. Immunol. 1997. - Vol. 159. - P. 5226-5232.
83. Jackson D.G., Bell J.I. Isolation of a cDNA encoding the human CD38 (T10) molecule, a cell surface glycoprotein with an unusual discontinuous pattern of expression during lymphocyte differentiation. // J. Imunol. 1990. - Vol. 144. -P. 2811.
84. Jodo S., Kobayashi S., Nakajima Y. et al. Elevated serum levels of soluble Fas/APO-1 (CD95) in patients with hepatocellular carcinoma. // Clin. Exp. Immunol. -1998.-Vol. 112.-№2.-P. 166-171.
85. Kaplanski G., Farnarier К., Payan M. et al. Increased levels of soluble adhesion molecules in the serum of patients with hepatitis C. // Digestive and Sciences. 1997. - Vol. 42. - № 11. - P. 2277-2284.
86. Khoo K.M., Chang C.F. Characterisation and localization of CD38 in the vertebrate eye. // Brain Res. 1999. - Vol. 821. - P. 17-25.
87. Kitanaka A., Suzuki Т., Ito C. et al. CD38-mediated signaling events in murine pro-B cells expressing human CD38 with or without its cytoplasmic domain. //J. Immunol.-1999.-Vol. 162.-P. 1952-1958.
88. Kleinman S. Hepatitis G virus biology, epidemiology, and clinical manifestations: Implications for blood safety. // Transfus. Med. Rev. 2001. -Vol. 15.-№ 3.-P. 201-212.
89. Knipping E., Debatin K.-M., Striker K. et al. Identification of soluble APO-1in supernatans of human Band T-cell lines and increased serum levels in B- and T-cell leukemias. // Blood. 1995. - Vol. 85. - P. 1562-1569.
90. Knolle P.A., Eckardt A.J., Protzer-Knolle U. et al. Circulating ICAM-1(sCD54) and LFA-3 (sCD58) in chronic hepatitis В A longitudinal study in patients treated with interferon-alpha. // Z. Gastroenterol. - 1997. - Vol. 35. - № 6. - P. 459-467.
91. Koelman C.A., Ensink W., Mulder A. et al. Anti-HLA antibodies interfere in the detection of soluble HLA class I molecules. // Hum. Immunol. 1999. - Vol. 60. -№ 5.-P. 414-423.
92. Koziel M.G., Walker B.D. Characteristics of the intrahepatic cytotoxic T lymphocyte response in chronic hepatitis С virus infection. // Springer Semin. Im-munopathol. 1997. - Vol. 19. - P. 69-83.
93. Krams S.M., Fox S.K., Beatty P.R. et. al. Human hepatocytes produce an isoform of FAS that inhibits apoptosis. // Transplantation. 1998. - Vol. 65. - P. 713-721.
94. Laemmly U.K. Cleavage of structural protein during the assembly of the head of bacteriophage T4. // Nature. 1970. - Vol. 227. - № 4258. - P. 680-685.
95. Lefrere J.J., Mariotti M., Lerable J. et al. Long-term persistence of hepatitis G virus in immunocompetent patients. // The Lanset. 1996. - Vol. 348. - P. 427428.
96. Levacher M., Hulstaer F., Tallet S. et al. The significance of activation markers on CD8 lymphocytes in human immunodeficiency syndrom: staining and prognostic value. // Clin. Exp. Immunol. 1992. - Vol. 90. - P. 376.
97. Liem L.M., Koelman C.A., Doxiadis I.I. et al. Elevated serum HLA class I levels coincide with acute and chronic graft-versus-host desease. // Bone Marrow Transplant. 1997. - Vol. 20. - № 3. - P. 227-234.
98. Lim M.V., Fry K., Yun A. et al. Sequence variation and phylogenetic analysis of envelope glycoprotein of hepatitis G virus // J. Gen. Virol. 1997. - Vol. 78. -P. 2771-2777.
99. Linnen J., Wages J., Zhang-Keck Z. et al. Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: A transfusion-transmissible agent. // Science. -1996.-Vol. 271.-P. 505-508.
100. Lund F.E., Cockayne D.A., Randall T.D. et al. CD38: a new paradigm in lymphocyte activation and sigmal trunsduction. // Immunol. Rev. 1998. - Vol. 161. - P. 79-93.
101. Lund F.E., Yu N., Kim K.M. et al. Signaling through CD38 augments В cell antigen receptor (BCR) responses and is dependent on BCR expression. // J. Immunol. 1996. - Vol. 157. - P. 1455-1467.
102. Maini M.K., Bertoletti A. How can the cellular immune response control hepatitis В virus replication? // Journal of Viral Hepatitis. 2000. - Vol. 7. - № 5. -P. 321.
103. Maini M.K., Boni C., Ogg G.S. et al. Direct ex vivo analysis of hepatitis В virus-specific CD8(+) T cells associated with the control of infection. // Gastroenterology. 1999.-Vol. 117.-№6-P. 1386-1396.
104. Malaguamera M., Restuccia S., Di Fazio I. et al. Serum p2 microglobulin in chronic hepatitis C. // Dig. Dis. Sci. - 1997. - Vol. 42. - № 4. - P. 762-766.
105. Malavasi F., Funaro A., Rogerro S. et al. Human CD38: a glycoprotein in search of a function. // Immunol. Today. 1994. - Vol. 15. - P. 95-97.
106. Mallone R., Ferrua S.( Morra M. et al. Characterization of a CD38-like 78-kilodalton soluble protein released from В cell lines derived from patients with X-linked agammaglobulinemia. // J. Clin. Invest. 1998. - Vol. 101. - № 12. - P. 2821-2830.
107. Martin S., Rieckmann P. et al. Circulating forms of ICAM-3 (clCAM-3). Elevated levels in autoimmune diseases and lack of association with clCAM-1. // J. Immunol. 1995. - Vol. 154. - №4.- P. 1951-1955.
108. Mastroianni C.M., Lichtner M. et al. Changes in circulating levels of soluble cell adhesion molecules following highly active antiretroviral treatment of HIV-1-infected patients. //Clin. Immunol. -2000. Vol. 95. - № 3. - P. 212-217.
109. Matsuura H., Jimbo S., Miyamura M. et al. A study of the association between HLA phenotype and serum concentration of soluble HLA class I. // Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi. 1997. - Vol. 2. - P. 102-107.
110. McMillan R.W., Gelder F.B., Zibari G.B. et al. Soluble fraction of class I human histocompatibility leukocyte antigens in the serum of liver transplant recipient. // Clin. Transplant. 1997. - Vol. 11. - № 2. - P. 98-103.
111. Mehta K., Malavasi F. Human CD38 and related molecules. Basel: Karger. -2000.-P. 99-116.
112. Migliaresi S., Bresciani A., Ambrosone L. et al. Increased serum concentrations of soluble HLA- class I antigens in hepatitis С virus related mixed cryo-globulinaemia. // Ann. Rheum. Dis. 2000. - Vol. 59. - № 1. - P. 20-25.
113. Milich D.R., Chen M.K., Hughes J.L. et al. The secreted hepatitis В precore antigen can modulate the immune response to the nucleocapsid: a mechanism for persistence. //J. Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 2013-2021.
114. Minguela A., Torho A., Marhn L. et al. Implication of soluble and membrane HLA class I and serum IL-10 in liver graft acceptance. // Hum. Immunol. 1999. -Vol. 60. - № 6. - P.500-509.
115. Mondelli M.U. Is there a role for immune response in the pathogenesis of hepatitis C? // J. Hepatology. 1996. - Vol. 25. - P. 232-281.
116. Moore C., Ehlayel M., Inostrosa J. et al. Elevated levels of soluble HLA class I (sHLA-l) in children with sever atopic dermatitis. // Ann. Allergy Asthma Immunol. 1997. - Vol. 79. - № 2. - P. 113-118.
117. Morra M., Zubiaur M., Terhorst C., Sancho J. et al. CD38 is functionally dependent on the TCR/CD3 complex in human T cells. // FASEB J. 1998. - Vol. 12. -№7.-P. 581-592.
118. Munker R., Younes A., Cabanillas F. et al. Soluble CD95 in the serum of patients with low and intermediate grade malignant lymphomas: absence of prognostic correlations. // Leuk. Lymphoma. 1997. - Vol. 21.- № 5-6. - P. 517-521.
119. Musso Т., Deaglio S.( Franco L., et al. CD38 expression and functional activities are upregulated by IFN- on human monocytes and monocytic cell lines. //J. Leukoc. Biol.-2001.-Vol. 69. P. 605-612.
120. Nakatsuji YM Wai-Kuo S.J., Tanaka J. et al. Prevalence and disease associated of hepatitis G virus infection in Japan. // J. of Hepatology. 1996. - Vol. 3. -P. 307-316.
121. Naoumov N.V., Eddleston A.L. Host immune response and variations in the virus genom: Pathogenesis of the liver damage caused by hepatitis В virus. // Gut. 1994. - Vol. 35. - № 8. - P. 1013-1017.
122. Nelson D.R., Marousis C.G., Davis G.L. The role of hepatitis С virus-specific cytotoxic T lymphocytes in chronic hepatitis. // J. Immunol. 1997. - Vol.158. -P. 1473-1481.
123. Niitsu N., Sasaki K., Umeda M. A. High serum soluble Fas/APO-1 level is associated with a poor outcome of aggressive non-Hodgkin's lymphoma. // Leukemia. 1999. - Vol. 13. - № 9. - P. 1434-1440.
124. Nocito M., Montalban C., Gonzalez-Porque P. et al. Increased soluble serum HLA class I antigens in patients with lymphoma. // Hum. Immunol. 1997. - Vol. 58.- №2.-P. 106-111.
125. Okuyama M., Yamaguchi S., Nozari N. et al. Serum levels of soluble forms of Fas molecule in patients with congestive heart failure. // Amer. J. Cardiol. -1997.-Vol. 79.-№ 12.-P. 1698-1701.
126. Ott M.( Seidl С., Westhoff U. et al. Soluble HLA class I and class II antigens in patients with multiple sclerosis. // Tissue Antigens. 1998. - Vol. 51. - № 3. -P. 301-304.
127. Papoff G., Cascino I., Eramo A. et al. An terminal domain shared by Fas/Apo-1 (CD95) soluble variant prevents cell death in vitro. // The Journal of Immunology. 1996. - Vol. 25. - P. 4625-4630.
128. Pasqinelli C., Shoenberger J.M., Chung J. et al. Hepatitis С virus core and E2 protein expression in transgenic mice. // Hepatology. 1997. - Vol. 25. - № 3. -P. 719-728.
129. Peter M.E., Krammer P.H. Mechanisms of CD95 (APO-1/Fas)-mediated apoptosis. // Current Opinion in Immunology. 1998. - Vol. 10. - P. 545-551.
130. Pfister M., Ogilvie A., Silva C.P. et al. NAD degradation and regulation of CD38 expression by human monocytes/macrophages. // European Journal of Biochemistry. 2001. - Vol. 268. - № 21. - P. 5601-5611.
131. Piazzolla G., Tortorella C., Fiore G. et al. Immunoresponsiveness in chronic hepatitis patients: correlation between tissue and serum findings. // Immuno-pharmacol. Immunotoxicol. 1998. - Vol. 20. - № 3. - P. 337-354.
132. Pinkoski M.J., Brunner Т., Green D. R. et al. Fas and Fas ligand in gut and liver. // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2000. - Vol. 278. - P. 354366.
133. Plaeger S., Bass H.Z., Nishanian P. et al. The prognostic significance in HIV infection of immune activation represented by cell surface antigen and plasma activation marker changes. // Clin. Immunol. 1999. - Vol. 90. - № 2. - P. 238246.
134. Ploegh H.L. Viral strategies of immune evasion. // Science. 1998. - Vol. 280. - P. 248-253.
135. Pouletty P., Ferrone S., Amesland F. et al. Summary report from the fist international workshop on soluble HLA antigens. // Tissue Antigens. 1993. - Vol. 42. -№1. -P. 45-54.
136. Pozo M.A., Pulido R., Munoz C. et al. Regulation of ICAM-3 (CD50) membrane expression on human neutrophils through a proteolytic shedding mechanism. // Eur. J. Immunol. 1994. - Vol. 24. - P. 2586-2594.
137. Puppo F., Brenci S., Lanza L. et al. Increased level of serum HLA class I antigens in HIV infection. Correlation with disease progression. // Hum. Immunol. -1994. Vol. 40. - № 4. - P. 259-266.
138. Puppo F., Contini P., Ghio M. et al. Soluble human MHC class I molecules induce soluble Fas ligand secretion and trigger apoptosis in activated CD8+ Fas (CD95)+T lymphocytes. // International Immunology. 2000. - Vol. 12. - № 2. -P. 195-203.
139. Puppo F., Picciotto A., Brenci S. et al. Behavior of soluble HLA class I antigens in patients with chronic hepatitis С during interferon therapy: an early predictor marker of response? // J. Clin. Immunol. 1995. - Vol. 15. - № 4. - P. 179-184.
140. Rambusch E.G., Wedemeyer H., Tillmann H.L. et al. Significance of coinfection with hepatitis G virus for chronic hepatitis С a review of the literature. //Z. Gastroenterol. - 1998. - Vol. 36. - № 1. - P. 41-53.
141. Rehermann В., Lau D., Hoofnagle J.H. et al. Cytotoxic T lymphocyte responsiveness after resolution of chronic hepatitis В virus infection. // J. Clin. Invest. 1996. - Vol. 97. - P. 1655-1665.
142. Rhynes V.K., McDonald J.C., Gelder F.B. et. al. Soluble HLA class I in the serum of transplant recipients. // Ann. Surg. 1993. - Vol. 217. - № 5. - P. 485489.
143. Rieux-Laucat F., Deist F.L., Hivroz C. et al. Mutations in Fas associated with human lymphoproliferative syndrom and autoimmunity. // Science. 1995. -Vol. 268.-P. 1347-1349.
144. Rokita E., Menzel E.J. Characteristics of CD14 shedding from human monocytes. Evidence for the competition of soluble CD14 (sCD14) with CD14receptors for lipopolysaccharide (LPS) binding. 11 APMIS. 1997. - Vol. 105. -№ 7.-P. 510-518.
145. Romano L., Tanzi E., Chisotti D. et al. HEV and GBV-C infection in acute non A-C hepatitis in Italy. // Hepatology. 1997. - Vol. 26. - P. 192.
146. Ryo K., Kamogawa Y., Ikeda I. et al. Significance of Fas antigen-mediated apoptosis in human fulminant hepatic failure. // Am. J. Gastroenterol. 2000. -Vol. 95. - № 8. - P. 2047-2055.
147. Sacco R., Leuci D., Tortorella C. et al. Transforming growth factor betal and soluble Fas serum levels in hepatocellular carcinoma. // Cytokine. 2000. - Vol. 12.-№ 6.-P. 811-814.
148. Sagnelli E., Coppola N., Scolastico C. et al. Virologic and clinical expressions of reciprocal inhibitori effect of hepatitis В, С and delta viruses in patients with chronic hepatitis. II Hepatology. 2000. - Vol. 32. - № 5. - P. 1106-1110.
149. Sallie R., Shew J., Mtimer D. GBV-C virus and fulminant hepatic failure. // Lancet. 1996. - Vol. 347. - P. 1552-1555.
150. Sano H., Asano K., Minatoguchi S. et al. Plasma soluble fas and soluble fas ligand in chronic glomerulonephritis. // Nephron. 1998. - Vol. 80. - № 2. - P. 153-161.
151. Savarino A., Pugliese A., Martini C. et al. Investigation of the potential role of membrane CD38 in protection against cell death induced by HIV-1. // J. Biol. Regul. Homeost. Agents. 1996. - Vol. 10. - № 1. - P. 13-18.
152. Sayegh M.H., Carpenter C.B. Role of indirect allorecognition in allograft rejection. II Int. Rev. Immunol. 1996. - Vol. 13. - P. 221-222.
153. Sconocchia G., Titus J.A., Mazzoni A. et al. CD38 triggers cytotoxic responses in activated human natural killer cells. // Blood. 1999. - Vol. 94. - P. 3864-3871.
154. Seeger C., Mason W. S. Hepatitis В Virus Biology. // Microbiology and Molecular Biology Reviews. 2000. - Vol. 64. - № 1. - P. 51-68.
155. Shih C.M., Lo S.J., Miyamura T. et al. Supression of hepatitis В virus expression and replication by hepatitis С virus core protein in HuH-7 cells. // J. Virol. -1993. Vol. 6. - № 10. - P. 5823-5832.
156. Shimaoka Y.t Hidaka YM Okumura M. et al. Serum concentrations of soluble Fas in patients with autoimmune thyroid diseases. // Thyroid. 1998. - Vol. 8. -№ 1. - P. 43-47.
157. Skubitz K.M., Khalil A. Campbell K.D. et al. CD50 (ICAM-3) is phosphorylated on tyrosine and is associated with tyrosyne kinase activity in human neutrophils. //J. Immunol.- 1995.-Vol. 154.-P. 2888-2895.
158. Suda Т., Hashimoto H., Tanaka M. et al. Membrane Fas ligand kills human peripheral blood T lymphocytes, and soluble Fas-ligand blocks the killing. // J. Exp. Med. 1997. - Vol. 186. - P. 2045-2050.
159. Sun L., Adebanjo O.A., Moonga B.S. et al. CD38/ADP-ribosyl cyclase: A new role in the regulation of osteoclastic bone resorption. // J. Cell. Biol. 1999. - Vol. 146.-P. 1161-1172.
160. Tokano Y., Miyake S., Kayagaki N. et al. Soluble Fas in patients with systemic Lupus Erythematosus. //J. Clin. Immunol. 1996. - Vol. 16. - P. 261-265.
161. Tortorella C„ Sac со R., Orlando P. et al. slCAM-1, sCD95 and sCD95L levels in chronic liver diseases of different etiology. // Immunopharmacol. Immuno-toxicol. 2000. - Vol. 22. - № 1. - P. 19-33.
162. Toyoda M., Kakizaki S., Horiguchi N. et al. Role of serum soluble Fas/soluble Fas ligand and TNF-alpha on response to interferon-alpha therapy in chronic hepatitis C. // Liver. 2000. - Vol. 20. - № 4. - P. 305-311.
163. Toyozaki Т., Hiroe M., Saito T. et al. Levels of soluble Fas in patients with myocarditis, heart failure of unknown origin, and in healthy volunteers. // Am. J. Cardiol. 1998. - Vol. 81. - № 6. - P. 798-800.
164. Tsai S.L., Liaw Y.F., Yeh C.T. et al. Cellular immune response in patients with dual infection of hepatitis В and С viruses: dominant role of hepatitis С virus. // Hepatology. 1995. - Vol. 21. - № 4. - P. 908-912.
165. Turowski G., Gociski I., Gieracka D. et al. Soluble class HLA antigens in serum of patients with brain tumors. II Pol. Merkuriusz. Lek. 1996. - Vol. 1. - № 6.-P. 410-411.
166. Ueno Т., Toi M., Tominaga T. et al. Circulating soluble Fas concentration in breast cancer patients. // Clin. Cancer Res. 1999. - Vol. 5. - № 11. - P. 35293533.
167. Umar S., Malavasi F., Mehta K. Post-translational modification of CD38 pro-teininto a high molecular weight form alters its catalytic propeties. // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 15922-15927.
168. Van Lopik Т., Bijl M., Hart M. et al. Patients with systemic lupus erythematosus with high plasma levels of sFas risk relapse. // J. Rheumatol. 1999. - Vol. 26. - № 1. - P. 60-67.
169. Volpes R., Van den Oord J.J., Desmet V.J. Vascular adhesion molecules in acute and chronic liver inflammation. // Hepatology. 1992. - Vol. 15. - P. 269275.
170. Walczak H., Krammer P. The CD95 (АРО-1/Fas) and the TRAIL (APO-2L) Apoptosis Systems. // Experimental Cell Research. 2000. - Vol. 256. - P. 5866.
171. Wolf R.E., Adamashvili I.M., Gelder F.B. et al. Soluble HLA-I in rheumatic diseases. // Hum. Immunol. 1998. - Vol. 59. - № 10. - P. 644-649.
172. Woska J.R., Morelock M.M. Durham D.J. et al. Molecular comparison of soluble intercellular adhesion molecule (slCAM)-1 and slCAM-3 binding to Lymphocyte Function-associated Antigen-1. // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - № 8. - P. 4725-4733.
173. Yashina T.L., Favorov M.O., Khudyakov Y.E. et al. Detection of hepatitis G Virus (HGV) RNA: Clinical characteristics of acute HGV infection. II J. of Infec. Dis. 1997. - Vol. 175. - P. 1302-1307.
174. Yoshioka К., Kakumu С., Hayashi H. et al. Anti-hepatitis С antibodies in patients with chronic non-A, non-B hepatitis: relation to desease progression and effect of interferon alpha. // Am. J. Gastroenerol. 1991. - Vol. 86. - P. 14951499.
175. Zavazava N. Soluble HLA class I molecules: biological significance and clinical implications. // Mol. Med. Today. 1998. - Vol. 4. - № 3. - P. 116-121.
176. Zavazava N., Kronke M. Soluble HLA class I molecules induce apoptosis in alloreactive cytotoxic T lymphocytes. // Nature Med. 1996. - Vol. 2. - P. 10051007.