Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Связь наследственной отягощенности и полиморфизма некоторых генов-кандидатов с сердечно-сосудистыми заболеваниями, сосудистыми заболеваниями и их факторами риска в городской популяции Западной Сибири

Максимов Владимир Николаевич

На правах рукописи

ии^и574ЭЭ

СВЯЗЬ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ОТЯГОЩЕННОСТИ И ПОЛИМОРФИЗМА НЕКОТОРЫХ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ С СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ И ИХ ФАКТОРАМИ РИСКА В ГОРОДСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ

14.00 06 - кардиология 03 00 15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Новосибирск - 2007

003057499

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательский институт терапии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (г Новосибирск)

Научные консультанты: академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Никитин Юрий Петрович

Воевода Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Куимов Андрей Дмитриевич

Николаева Алевтина Андреевна

Пузырев Валерий Павлович

Ведущая организация:

Государственное учреждение Научно-исследовательский Институт кардиологии Томского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Защита состоится » 2007 г в 14 часов на заседании

Диссертационного совета Д001 029 01 при ГУ НИИ терапии СО РАМН по адресу 630089, г Новосибирск, ул Бориса Богаткова, 175/1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного учреждения Научно-исследовательский институт терапии СО РАМН

Автореферат разослан « 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

узнецов А А

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Сердечно-сосудистые заболевания по-прежнему остаются одной из основных причин инвалидности и смертности среди наиболее трудоспособной части населения (Константинов В В и др, 1994, Алмазов В Л , Шляхто Е В , 2000, Липовецкий Б M , 2004) В г Новосибирске распространенность ССЗ особенно высока (Никитин Ю П , и др , 1996, MONICA, 2003) В связи с этим, остро стоит проблема их профилактики, как на популяционном, так и на индивидуальном уровнях (Оганов Р Г 199) Без простых и доступных критериев формирования групп повышенного риска, стоимость ее оказывается значительной (Field К, и др , 1999) Использование семейного анамнеза как одного из основных критериев для формирования групп повышенного риска при построении стратегии первичной профилактики позволило бы сделать ее экономически более эффективной (Williams RR и др , 1988, Allen RA, и др, 2001) Однако прогностическая значимость семейного анамнеза Д1Я заболеваемости ССЗ в разных исследованиях оценивается неоднозначно (Conroy RM и др , 1985, Roncaghom MC и др , 1992, Panagiotakos DB и др, 2002, Ranjith N и др, 2002, Taira К и др, 2002) Для расчета индивидуального прогноза и создания, основанных на нем рекомендаций необходимо учитывать особенности конкретной популяции А это невозможно без опоры на генно-кандидатный подход Однако в случае заболеваний, относящихся к категории мультифакториальных, знание продукта гена, влияния полиморфизма этого гена на функциональные свойства белка дает сугубо теоретическое представление о возможных последствиях носительства отдельных генотипов Многое определяется, как ближайшим окружением гена, так и свойствами функциональной системы, в которой он работает, что в свою очередь, в значительной мере зависит от популяции (ее генофонда) и условий жизни данной популяции Генотип «полезный» в одном генном окружении, может быть «вреден» - в другом То же самое касается и внешних условий генотип, «хороший» в одних условиях, может быть «плох» - в других Часто подобным образом изменяется функциональное значение генотипов в течение жизни индивидуума Следовательно, для каждой популяции будет «свой» набор генов-кандидатов по заболеваниям, в том числе и сердечно-сосудистым Проспективные исследования, при всей их дороговизне и трудоемкости дают наиболее объективную информацию, которая отвечает всем требованиям доказательной медицины Поэтому проверка прогностического значения полиморфизма целого ряда генов-кандидатов, наследственной отягощенности и других факторов риска для Заболеваемости и смертности от ССЗ в открытой сибирской городской популяции на основе проспективного исследования является актуальной

Цель исследования

Изучение прогностического значения и ассоциаций полиморфизма геноз-кандидатов, наследственной отягощенности с эндогенными показателями,

факторами риска и ССЗ в открытой сибирской городской популяции на основе

одномоментного и проспективного исследований

Задачи исследования

1 Изучить частоты генотипов и аллелей генов-кандидатов ССЗ в открытой сибирской городской популяции в возрастном интервале 25-64 года

2 Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний с наследственной отягощенностью по ССЗ

3 Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний с эндогенными показателями и факторами риска ССЗ

4 Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов ССЗ с ИБС и АГ (по эпидемиологическим критериям) по данным одномоментного исследования

5 Изучить полиморфизм генов-кандидатов, у лиц перенесших инфаркт миокарда или инсульт, а также ИБС или ЦВБ на протяжении 10-летноего периода наблюдения

6 Оценить риск развития ИБС, инфаркта миокарда, церебро-васкулярной болезни и инсульта на протяжении 10-летноего периода наблюдения, у носителей отдельных генотипов генов-кандидатов

Научная новизна

1. Впервые у мужчин европеоидной популяции Западной Сибири выполнено исследование ассоциации ряда полиморфизмов генов-кандидатов ССЗ с факторами риска ССЗ, с ИБС, артериальной гипертензией, инсультом

2 Впервые у мужчин европеоидной популяции России исследование вышеперечисленных ассоциаций проводилось, как на материале одномоментного скрининга выборки, сформированной согласно международным критериям, принятым для эпидемиологических исследований, так и на материале, полученном в ходе проспективного наблюдения за этой выборкой

3 Впервые в мире показана ассоциация полиморфизмов генов ADRA2B (I/D), АРОЕ (-A49IT), SP4 (А80807Т), KIR6 2 (Е23К), с-fms (ТС—СА) с наследственной отягощенностью по ССЗ

4 Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что уровень общего холестерина значимо отличается у носителей разных генотипов по полиморфизмам генов АСЕ, CCR5, TNF-a, CD14

5 Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что индекс массы тела достоверно различается у носителей разных генотипов по полиморфизмам генов АСЕ, ADRJB1, TNF-a

6 Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что уровень артериального давления достоверно различается у носителей разных генотипов по полиморфизмам генов ADRA2B, KIR6.2, MTHFR, CCR5

7 Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что с ИБС (по эпидемиологическим критериям) по данным одномоментного исследования ассоциированы - АСЕ (I/D), ADRA2B (I/D), Аро Е (-А491Т), TNF-a (-G308A) С артериальной гипертензией ассоциированы ADRA2B (I/D), KIR6 2 (Е23К), MTHFR (С677Т), CCR5 (I/D)

8 Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что с инфарктом миокарда (по данным проспективного наблюдения) ассоциирован полиморфизм С677Т гена MTHFR Тогда как с ИБС при проспективном наблюдении ассоциированы АСЕ (I/D), Аро Е (е2/еЗ/е4), TNF-a (-G308A)

9 Впервые в мире по данным проспективного наблюдения показано, что с инфарктом миокарда и ИБС ассоциирован полиморфизм -А491Т гена Аро Е

10 Впервые в мире показано, что полиморфизм гена c-fms (ТС—>СА) ассоциирован 1) с уровнем общего холестерина, 2) с артериальной гипертензией, по данным одномоментного исследования, 3) с инсультом и инфарктом миокарда, по данным проспективного наблюдения

11 Впервые в мире показано, что I/D полиморфизм гена c-fms ассоциирован 1) с уровнем общего холестерина, 2) с ИБС, по данным проспективного наблюдения

Положения, выносимые на защиту

1 Частоты генотипов и аллелей изученных генов-кандидатов ССЗ в открытой сибирской городской популяции в возрастном интервале 25-64 года значимо не отличаются от частот в других европеоидных популяциях

2 С наследственной отягощенностью по ССЗ ассоциированы - АСЕ (I/D), ADRB1 (A145G), ADRA2B (I/D), SP4 (А80807Т), Gp Ilb/IIIa (А1/А2), Аро Е (-А491Т), Аро Е (е2/еЗ/е4), TNF-a (-G308A), KIR6 2 (Е23К), MTHFR (С677Т), CCR5 (I/D), c-fms (TC—CA)

3 Полиморфизмы генов-кандидатов ССЗ ассоциированы с эндогенными показателями артериальное давление, индекс массы тела, общий холестерин, холестерин ЛПВП, глюкоза, а также с факторами риска ССЗ -избыточная масса тела, ожирение, дислипопротеидемия

4. По данным одномоментного исследования с АГ в мужской популяции ассоциированы - ADRA2B (I/D), KIR6 2 (Е23К), Аро Е (е2/еЗ/е4), MTHFR (С677Т), CCR5 (I/D), c-fms (ТС-+СА)

5. По данным одномоментного исследования с ИБС в мужской популяции ассоциированы - АСЕ (I/D), ADRA2B (I/D), Аро Е (-А491Т), TNF-a (-G308A), а при проспективном наблюдении - АСЕ (I/D), Аро Е (е2/еЗ/е4), Аро Е (-А491Т), TNF-a (-G308A), c-fms (I/D)

6 При проспективном наблюдении с инфарктом миокарда ассоциированы -Аро Е (-А491Т), MTHFR (С677Т), c-fms (ТС-*СА), с инсультом - c-fms (ТС—СА)

Практическая значимость

По результатам эпидемиологического исследования выявлены наиболее прогностически значимые показатели семейного анамнеза, свидетельствующие о наличии предрасположенности к ССЗ, которые могут служить основой для формирования групп повышенного риска этого заболевания в деятельности практических врачей Для лиц с определенным по данным семейного анамнеза повышенным риском развития ИБС представляется целесообразным проведение ранних профилактических мероприятий, индивидуализированных с

учетом профиля корригируемых факторов риска, а в дальнейшем, возможно, и с учетом данных генотипирования по ряду ОНП генов-кандидатов Выявленные ассоциации ОНП генов-кандидатов с эндогенными показателями, факторами риска и семейным анамнезом подчеркивают необходимость объединить данные генотипирования с семейным анамнезом и использовать семью как объект для вмешательства в профилактических программах Внедрение-

Материалы диссертации, ее выводы и рекомендации используются в учебном процессе на циклах усовершенствования и семинарских занятиях в ГУ НИИ терапии СО РАМН, на кафедре медицинской генетики ГОУ ВПО Новосибирского медицинского университета

Результаты диссертации явились фрагментом плановой темы НИИ терапии СО РАМН 2002-2004 гг и одним из разделов текущей госбюджетной темы "Молекулярно-геиетические и молекулярно-биологические механизмы формирования липидных факторов риска заболеваний терапевтического профиля в Сибири"

Апробация работы проведена 24 октября 2006 г на межлабораторном семинаре ГУ НИИ терапии СО РАМН

Основные положения диссертации были доложены на Российской научно-практической конференции "Медико-генетическое консультирование в профилактике наследственных болезней" (Москва, 1997), на конкурсе молодых ученых, проходившем в рамках V Российского национального конгресса "Человек и лекарство" (Москва, 1998), на 1-ом съезде геронтологов и гериатров Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 2000), на 1-ом Международном рабочем совещании «Биоразнообразие и динамика экосистем Северной Евразии- информационные технологии и моделирование» (Новосибирск, 2001), на Сибирском конкурсе молодых ученых «Терапия и фундаментальные науки - перспективы содружества в новом тысячелетии» (Новосибирск, 2001), на 1-ой научно-практической конференции «Медицина будущего» (Сочи, 2002), на Сибирской научно-практической конференции «Наследственные болезни и патология человека» (Новосибирск, 2003), на 4-ой международной конференции по проблемам внезапной смерти (Санкт-Петербург, 2003), на конференции «Современные проблемы сердечно-сосудистой патологии на Крайнем Севере» (Якутск, 2004), на У-ом съезде Российского общества медицинских генетиков (Уфа, 2005), на 1-ом Всероссийском съезде аритмологов (Москва, 2005), на 1-ом Съезде терапевтов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 2005), на научной сессии НИИ кардиологии ТНЦ (Томск, 2005), на научной сессии НИИ Терапии СО РАМН (Новосибирск, 2000), на Российской научной конференции с международным участием «АГ от Короткова до наших дней» (С-Петербург, 2005), на Российском национальном конгрессе кардиологов «Перспективы Российской кардиологии» (Москва,

2005), на Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск,

2006), на 3-й международной конференции «Геномика, протеомика, биоинформатика и нанотехнологии в медицине» (Новосибирск, 2006), на

международном конгрессе по приполярной медицине (Новосибирск, 2006)

Публикации

Опубликовано 55 работ по теме диссертации

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 200 печатных страницах, содержит 140 таблиц и 4 рисунка Работа состоит из введения, трех глав, представляющих обзор литературы, материалы и методы, результаты исследования и их обсуждение, заключения, выводов и рекомендаций Список использованной литературы включает 347 отечественных и зарубежных источников

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проводилось на материале крупномасштабного эпидемиологического исмедования, выполненного в г Новосибирске Институтом терапии СО РАМН в ходе работы по международной кооперативной программе по изучению тенденций заболеваемости и смертности от сердечно-сосудистых заболеваний и определяющих их факторов, (программа ВОЗ "MONICA"), в рамках которой было проведено 3 одномоментных обследования (принципиальный исследователь в Новосибирске — акад РАМН Никитин Ю П, координатор скрининга - проф Малютина CK) Материалы последнего скрининга выполненного в 1994-1995 гг в Октябрьском районе г Новосибирска и стали основой настоящего исследования Отклик на III скрининге для мужчин составил - 72,3 %

Выбранный для исследования район города, с общей численностью населения около 150 000 человек, по национальному составу, занятости населения, наличию крупных промышленных предприятий, учебных заведений, научных учреждений и культурных центров являются типичными для г Новосибирска и для большинства других крупных промышленных центров Сибири Миграция населения в районе относительно невысока и соответствует среднегородской Для проведения скрининга на основе избирательных списков районного Совета с помощью таблицы случайных чисел были сформированы репрезентативные выборки Каждая выборка включала около 800 мужчин и 800 женщин в возрасте 25-64 года Каждая возрастная декада (25-34 г, 35-44 г, 4554 г, 55-64 г) включала около 200 человек Объем выборки из генеральной совокупности определялся протоколом ВОЗ программы "MONICA", исходя из размера генеральной совокупности, демографической структуры центра и количества коронарных событий, случающихся ежегодно в отчетных единицах В настоящее исследование включены только мужчины

Таблица 1

Возрастная структура выборки

Возраст Количество обследованных

25-34 г 198

35-44 г 200

45-54 г 205

55-64 г 228

Всего 831

Основные скрининги по проекту MONICA проводились стандартными эпидемиологическими и дополнительными методами выявления ССЗ и факторов риска (Rose G, Blackburn Н., 1984, MONICA Manual 1985, 1992) измерение артериального давления (АД), антропометрия (рост, вес), социально-демографические характеристики, опрос о курении, потреблении алкоголя (частота и типичная доза), уровне физической активности (ФА), оценка липидного профиля (общий холестерин, ОХС, триглицериды, ТГ, и холестерин липопротеидов высокой плотности, ХС-ЛВП), опрос на выявление стенокардии напряжения (Rose), ЭКГ покоя в 12-ти отведениях с оценкой по Миннесотскому коду (МК), выделение образцов ДНК с генотипированием полиморфизма генов-кандидатов

Методики базового обследования были стандартизованы и соответствовали требованиям протоколов (MONICA Manual, 1992, Staessen J et al, 2002, Kuznetsova T. et al, 2005) Измерение АД по проекту MONICA проводили ртутным сфигмоманометром с точностью до 2 мм рт ст на правой руке дважды с интервалом 5 минут, использовали среднее из двух измерений За артериальную гипертензию принимались систолическое АД > 140 мм рт ст, диастолическое АД > 90 мм рт ст. или любые цифры АД на фоне приема гипотензивных препаратов Индекс массы тела (ИМТ, Кетле-П) вычисляли по формуле ИМТ (кг/м2)= вес(кг)/рост2 (м2) (Халтаев Н Г., 1983, Pyorala К et al, 1994) Масса тела считалась избыточной при превышении ИМТ 25 кг/м:, ожирение -ИМТ>=30 кг/м2

Опрос о курении проводили по стандартизованному опроснику, регулярным курильщиком считали обследуемого, выкуривающего хотя бы одну сигарету в день Использовали эпидемиологические критерии ИБС на основе кодирования ЭКГ изменений по Миннесотскому коду (Pnneas R et al, 1982), опросника Rose и документированного инфаркта миокарда в анамнезе (в проекте MONICA) (Rose G, Blackburn H , 1984)

1 Определенный инфаркт миокарда (M К 1-1-1-2-7)

2 Стенокардия напряжения по стандартному опроснику ВОЗ

3 Безболевая форма ИБС, отличная от определенного инфаркта миокарда и стенокардии напряжения (М К 4-1, 4-2, 5-1, 5-2 при отсутствии 3-1,3-3)

Перечисленные формы входили в категорию "Определенная ИБС" Категория "Возможная ИБС" включала следующие группы

1. Возможный инфаркт миокарда (М К 1-2-8 - 1-3)

2 Возможная ишемия (М К 4-3,5-3)

3 Аритмическая форма ИБС (М К 6-1, 6-2, 7-1, 8-3 при отсутствии порока сердца и тиреотоксикоза для кода 8-3)

4 Ишемия в сочетании с гипертрофией левого желудочка (МК 4-1, 4-2, 5-1, 5-2 в присутствии 3-1,3-3)

Анкета «семейный анамнез» заполнялась кардиологом со слов обследуемого, при этом уточнялось живы ли родители, их возраст на момент обследования или смерти и ее причина, был ли у родителей инфаркт миокарда

А также наличие у родственников первой степени родства (отца, матери, братьев, сестер, детей) следующих состояний сердечный приступ или стенокардия до 60 лет, повышенное кровяное давление или гипертоническая болезнь, кровоизлияние в мозг или инсульт, повышенный холестерин, триглицериды, липиды, сахарный диабет, расстройство кровообращения ног, кроме варикозного расширения вен Наследственность обследуемого считалась отягощенной по ИБС, если имелся хотя бы один признак из перечисленных -инфаркт миокарда у одного из родителей, смерть от сердечного приступа отца или матери, сердечный приступ (стенокардия) хотя бы у одного из следующих родственников первой степени родства

Кровь брали путем венепункции после 12-часового голодания Сыворотку хранили в низкотемпературной камере (~70°С) до выполнения анализов (1-3 месяца) Концентрацию ОХС, ТГ, ХС-ЛВП и глюкозы определяли энзиматическим методом, уровень ХС-ЛНП рассчитывали по формуле Fridewald (Braunwald Е et al, 2001) Исследования выполняли на автоанализаторе "Labsystem" (Finland) в лаборатории биохимии Института терапии СО РАМН (отв исполнитель - Иванова MB)

Экстракция ДНК из крови проводилась методом фенол-хлороформной экстракции (Смит К, 1990) Генотипирование на материале проекта MONICA выполняли в объединенной лаборатории молекулярной генетики ИЦИГ РАН и НИИ терапии СО РАМН (зав лаб - чл -корр РАМН Воевода МИ) Полиморфизм генов тестировали с помощью опубликованных и оригинальных методик, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР) Исследовались полиморфизмы генов ангиотензин-превращающего фермента (АСЕ, I/D), аполипопротеина Е (АРОЕ, е2/еЗ/е4 и -А491Т), Р1 -адренорецептора (ADRB1, A145G), поверхностного гликопротеина тромбоцитов (GPIIb/TIIa, PLA1/A2), транскрипционного фактора SP4 (rsl011168, А80807Т), а2В-адренорецептора (ADRA2B, I/D 12Glu9), рецептора макрофаг-колоние-стимулирующего фактора c-fms (ТС—"СА и I/D), фактора некроза опухолей a (TNF-a, -G308A), субъединицы калиевых каналов KIR6 2 (Е23К), метилен-тетра-гидро-фолат-редуктазы (MTHFR, С677Т), хемокиновых рецепторов CCR5 (I/D), рецепторов моноцитов CD14 (-С260Т)

Проспективное изучение вклада наследственной отягощенности по ССЗ, других факторов риска ССЗ, в том числе и полиморфизма генов-кандидатов в риск смерти от ИБС цереброваскулярной болезни (ЦВБ), инфаркта миокарда и инсульта, в развитие нефатальных случаев инфаркта миокарда и инсульта проведено по материалам наблюдения за участниками одномоментного обследования с помощью регистров инфаркта миокарда, инсульта и общей смертности в рамках программы ВОЗ MONICA Срок последующего наблюдения составил 10 лет Конечными точками проспективного наблюдения были инфаркт, инсульт, факт смерти Острый инфаркт миокарда (ИМ) и мозговой инсульт (МИ) определяли по данным регистров острого инфаркта миокарда и мозгового инсульта согласно критериям проекта ВОЗ MONICA (MONICA Manual, 1985, 1992) (руководители регистра ИМ - проф Гафаров В В , регистра МИ - проф Фейгин В Л, к м н Шишкин С В) Сбор

информации о смертности проводили по данным регистра общей смертности (руководитель - проф Симонова Г И) Выборка случаев ИМ, МИ и смерти была произведена за период 1994-2004 гг

Всего за это время произошло 49 инфарктов и 17 инсультов Из них умерло от инфаркта миокарда 14 человек и 7 человек от инсульта Всего же от ИБС по данным регистра общей смертности умер 31 мужчина К ИБС относили те случаи, где причиной смерти, закодированной согласно рекомендациям ВОЗ (руководство по МКБ-IX и МКБ-Х), были диагнозы из рубрик 410-414 и 120125 Таким образом, в целом по выборке за 10 лет наблюдения у 65 человек зарегистрирована ИБС (нефатальный и фатальный ИМ, другие фатальные формы ИБС) Всего от цереброваскулярных болезней умерло 13 человек К смерти от ЦВБ отнесены случаи, закодированные в рубриках 430-438 (МКБ-1Х) и 160-169 (МКБ-Х) А всего зафиксировано 23 случая ЦВБ

Статистическую обработку данных проводили на персональном компьютере типа "IBM PC" с использованием пакета программ "SPSS-11 5" Первым этапом определяли частоты генотипов и аллелей изучаемых генов-кандидатов в мужской популяции Новосибирска Оценку соответствия частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга проводили с использованием критерия хи-квадрат Потом оценивалась возрастная динамика частот генотипов и аллелей изучаемых генов-кандидатов На следующем шаге анализировалась ассоциация полиморфизмов изучаемых генов-кандидатов с эндогенными признаками и факторами риска ССЗ в мужской популяции Новосибирска (по данным одномоментного исследования) Сравнение уровня таких показателей, как рост, масса тела, индекс массы тела, артериальное давление (систолическое, диасточическое, пульсовое), частота сердечных сокращений, общий холестерин, холестерин липопротеидов низкой плотности, холестерин липопротеидов высокой плотности, триглицериды, индекс атерогенности, глюкоза крови, у носителей разных генотипов проводили после проверки нормальности распределения этих признаков по тесту Колмогорова-Смирнова Если признак отвечал критериям нормального распределения, то использовали однофакторный дисперсионный анализ и многоранговый тест Дункана Достоверность различий между двумя генотипическими классами дополнительно проверяли с помощью t-теста для двух независимых выборок В случае, если изучаемый признак не удовлетворял критериям нормального распределения, сравнение уровня этого признака у носителей разных генотипов проводилось с помощью теста Крускала-Уоллиса, достоверность различий между двумя генотипическими классами дополнительно проверяли с помощью теста Манна-Уитни для двух независимых выборок Ассоциация ОНП с факторами риска проверялась с помощью таблиц сопряженности с использованием критерия хи-квадрат по Пирсону В случае четырехпольных таблиц сравнение выборок по частотам генотипов и аллелей применяли точный двусторонний критерий Фишера Относительный риск (OR - odds ratio) заболевания по конкретному аллелю или генотипу вычисляли как отношение шансов [Bland J М, Altman D G, 2000] Следующий этап - изучение ассоциации полиморфизмов генов-кандидатов с ССЗ (ИБС, АГ) в мужской

популяции Новосибирска (по данным одномоментного исследования) проводилось с помощью таблиц сопряженности с использованием критерия хи-квадрат по Пирсону

Анализировали также связи между различными формами ИБС (возможная и определенная ИБС, нефатальный ИМ, смерть от ИБС) и рядом факторов наследственная отягощенность различного характера, полиморфизм генов-кандидатов, наличие ИБС в момент обследования, систолическое и диастолическое АД, общий холестерин плазмы, уровень ТГ, ХС ЛПВП, индекс атерогенности, ИМТ, факт курения, количество сигарет в день, образование Этот анализ выполнялся с учетом характера переменных по вышеописанному алгоритму

Последним этапом анализа было изучение ассоциации ОНП и других показателей с инфарктом миокарда и инсультом, которые произошли в течение 10 лет после одномоментного скрининга (в анализ включались как первые случаи поставленного диагноза, так и повторные) Проспективное наблюдение за выборкой и валидизация диагнозов осуществлялась регистрами инфаркта миокарда и инсульта Кроме того, для анализа использовались и данные регистра общей смертности, описанные выше

Автор выражает благодарность сотрудникам ГУ НИИ терапии СО РАМН д м н , профессору Малютиной С К , д м н , профессору Гафарову В В , д м и , профессору Симоновой Г И , к м н Куликову ИВ, к м н Шахтшнейдер Е В , к м н Шишкину С В , н с Ивановой М В , а также сотрудникам Института цитологии и генетики СО РАН зав лаборатории молекулярных основ генетики животных, к б н Ромащенко А Г , к б н Юдину Н С , к б и Кузнецовой Т Н

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Инсерционно-делеционный полиморфизм гена АСЕ

Частоты генотипов 1ЛЭ полиморфизма гена АСЕ в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (II - 21 4%, ГО - 52,4%, ОБ - 26 2%, п=618) На первом этапе анализа статистически значимей возрастной динамики частот генотипов и аллелей 1Т> полиморфизма гена АСЕ в популяционной выборке не выявлено Только при разделении популяции на младшую (до 50 лет) и старшую (50 лет и старше) подгруппы стансится явным накопление в старшей подгруппе носителей гомозиготного генотипа БО, по сравнению с младшей Кроме того, если сравнить отношение шансов носителей генотипов II и ОБ перешагнуть 50-летний рубеж, то у носителей генотипа ОВ он оказывается в 1 63 раза выше, р=0 042 (95 % доверительный интервал 1 022 62) Однако стоит отметить, что один из важных критериев функциональной значимости генотипа - это его частота у долгожителей У геронтов Новосибирска частота генотипа ОЭ гена АСЕ составляет менее 6 % (Шабалин А В , 2003) Но в других популяциях, в частности в китайской, высокая частота генотипа БЭ сохраняется и у геронтов (У/иШег М, 2004)

При разделении исследуемой группы по уровню общего холестерина до 200 мг/дл и 200 мг/дл и выше, оказалось, что у носителей аллеля О отношение

шансов иметь ОХС>= 200 мг/дл в 1,3 раза выше, чем у носителей аллеля I (табл 2) Чем объясняется выявленная ассоциация неизвестно В доступной литературе обоснованные гипотезы возможной ассоциации ОХС с полиморфизмом гена АСЕ отсутствуют В то же время есть исследования, в которых такая ассоциация отвергнута (Ward AJ и др , 1996, Di Pasquale Р и др , 2005], в других подтверждена (Alsaeid М и др , 2004)

Таблица 2

Общий ХС < 200 Общий ХС>= 200

Генотипы п % п %

II 64 23,3 61 18,7

ГО 152 55,3 166 50,8

ЭО 59 21,5 100 30,6

Достоверность различий 0,033

Аллели

I 50,9 44,0

О 49,1 56,0

Двустор тест Фишера 0,018

Отношение шансов 1,3

95 % ДИ ОШ 1,1-1,7

п % п %

Носители генотипа ЭЭ 59 21,5 100 30,6

Носители других генотипов 216 78,5 227 69,4

Двустор тест Фишера 0,012

Отношение шансов 1,6

95 % ДИ ОШ 1,1-2,3

У носителей генотипа II по данным одномоментного исследования реже выявляется ИБС, а у носителей аллеля О несколько чаще Достоверность различий по таблицам сопряженности по критерию хи-квадрат составила р=0 039 Отношение шансов у гомозигот по I аллелю по сравнению с носителями двух других генотипов заболеть ИБС меньше в 2 5 раза (95% ДИ 1 2-5 1, р=0 010). Различия частот аллелей в популяции и в группе с ИБС по данным одномоментного исследования достигают уровня статистической значимости (р=0,030) И соответственно оказывается достоверным протективный эффект аллеля I - отношение шансов у его носителей попасть в группу с ИБС по сравнению с носителями аллеля О в 1,5 раза ниже

При дальнейшем анализе сравнили частоты генотипов в группе 50 лет и старше с частотами среди умерших от разных форм ИБС в этом возрасте в ходе проспективного наблюдения Отношение шансов у носителей гетерозиготного генотипа умереть от ИБС в возрасте 50-64 года по сравнению с носителями двух других генотипов составило 3,9 (95 % ДИ 1,3-12,3, р=0,032) В Греции сравнили частоты ГО полиморфизма гена АСЕ среди выживших после ИМ и умерших от ИМ и пришли к выводу об отсутствии ассоциации (Andrlkopou!os вК, 2005) Но это исследование не было проспективным по дизайну Тогда как на итальянской популяции по данным 6-летнего наблюдения обнаружили повышение частоты носителей генотипа ОО, среди лиц с ИБС (01 Разяиа1е Р, 2005) В Роттердаме на популяционном проспективном материале показали, что

у курящих мужчин-носителей генотипа DD в возрасте до 68 лет риск смерти от кардиоваскулярных заболеваний в 5 раз выше, чем у носителей генотипа II (Sayed-Tabatabaei FA, 2005)

В свое время картирование и клонирование гена представлялось тем узким местом, пройдя через которое, можно выйти на широкое поле биомедицинских приложений, включая понимание физиологических механизмов болезни, диагностику, терапию и превентивную медицину (Пузырев ВП, 1997) Но сейчас понятно, что до надежно обоснованного практического применения этих знаний предстоит достаточно длительный процесс накопления информации и опыта С одной стороны, ID полиморфизм гена АСЕ является одним из самых изученных, с другой - до сколько-нибудь полного понимания подавляющего большинства последствий носительства того или генотипа еще очень далеко Тем более, если иметь в виду последствия для каждого конкретного человека с учетом действующих внешних факторов и остального генома индивидуума Так, по мнению немецких авторов, чтобы рекомендовать общее генетическое тестирование перед началом терапии воздействующей на состояние ренин-ангитензин-альдостероновой системы необходимо преодолеть имеющиеся противоречия путем проведения большого мультицентрового исследования (Dimopoulos-Xicki L, 2005) А ведь это может стать решением только одного вопроса

Полиморфизм A145G гена ß-1 адренорецептора

Частоты генотипов полиморфизма A145G гена ß-1 адренорецептора в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (А/А - 71,4 %, A/G - 24 8 %, G/G - 3 9 %, п=412) При анализе возрастной динамики частот генотипов и аллелей полиморфизма A145G гена ß-1 адренорецептора в популяции мужчин г Новосибирска были обнаружены следующие различия между группами 25-34 г и 35-44 г по частотам А145/А145 и A145/G145 генотипов, между группами 25-34 г и 45-54 г (р=0 0001), между группами 35-44 г и 45-54 г (р=0 008), между группами 45-54 г и 55-64 г (р=0 008) (рис 1)

При анализе ассоциаций генотипов полиморфизма A145G с уровнем целого ряда факторов выявлены некоторые тенденции 1) Более низкие цифры глюкозы у гомозигот G/G, 2) Более высокие цифры систолического и пульсового АД у гомозигот G/G, 3) увеличение уровня общего холестерина и триглицеридов в ряду генотипов А/А, A/G, G/G, 4) ИМТ выше у гомозигот G/G по сравнению с гомозиготами А/А (р=0,05) 5) ЧСС меньше у носителей генотипа G/G В Швеции на 760 женщинах было показано, что у носительниц аллеля G ИМТ достоверно выше, чем у носительниц аллеля A (Linne Y, 2005) Кроме того, оказалось, что у носителей генотипа А/А достоверно чаще встречается гипоальфахолестеринемия, чем у носителей других генотипов, ОШ=3,3 (р=0,046) Носители генотипа A/G реже имеют гипоальфахолестеринемию 0111=0,24 (р=0,036) Ассоциации полиморфизма A145G гена ß-1 адренорецептора с семейным анамнезом, холестерином, триглицеридами, глюкозой, ИБС, инсультом в других исследованиях не

изучались Связь с АГ показана для Arg389Gly, 110 не для Ser49Gly (Bengtsson К, 2001)

—♦—А145А —D-A145G -A-G145G

Возрастные группы

Рис 1 Возрастная динамика частот генотипов полиморфизма A145G гена ADRB1 в популяции мужчин г Новосибирска

Основные усилия исследователей направлены на изучение реакции носителей разных генотипов и аллелей на ß-блокаторы при разных заболеваниях, физическую нагрузку Так бельгийские авторы нашли, что гомозиготы G/G в начальном тесте (до цикла тренировок) показывают аэробную мощность больше, чем носители других генотипов Но в ходе тренировок повышение аэробной мощности не зависело от генотипа (Defoor J, 2006) Исследование проводилось с целью подбора программы реабилитации после ИМ с учетом генотипов У пациентов с сердечной недостаточностью с генотипом Arg389Arg и аллелем Gly49 заметно лучше происходит ремоделирование левого желудочка под влиянием терапии ß-блокаторами (Terra SG, 2005) Magnusson Y и соавторы (2005) считают, что у пациентов с сердечной недостаточностью исход и эффект от терапии ß-блокаторами больше связан с кодоном 49, чем с кодоном 389 А у наиболее распространенного генотипа А/А эффект от препаратов ниже, что может быть мотивацией к генотипированию с целью назначения адекватной дозы препарата, для более быстрого получения лучшего эффекта Другие исследователи также считают, что использование генотипирования ОНП может быть эффективным фармако-генетическим инструментом антигипертензивной терапии (Kurland L, 2004)

Инсерционно-делеционный полиморфизм гена а2в-адренорецептора

Частоты генотипов I/D полиморфизма гена а2в-адренорецептора в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (II - 35 1 %, ID - 50,8 %, DD - 14 1 %, п=362) Частоты генотипов и аллелей в нашей выборке в возрасте 25-34 г практически совпали с данными, полученными на японской популяции (Suzuki N, 2003) Но отличались от частот в финской популяции - 28 %, 51 % и 21 % (Snapir А, 2001) В возрастном интервале 25-54 года имеется тенденция к снижению инсерционного аплеля Между группой 25-34 г и группой 45-54 года различие в доле гомозигот по инсерции статистически значимо 44,3 % и 26,2 % соответственно (р=0,028)

Мужчины, имеющие в семейном анамнезе СП у отца в 2,7 раза чаще оказываются носителями генотипа гомозиготного по делеции (95 % ДИ 1,2-5,8, р=0,012) Отношение шансов обнаружить среди лиц с СП у брата носителей аплеля D в 3,2 раза выше, чем в группе без СП у брата (95 % ДИ 1,4-7,5, р=0,010), а носителей генотипа DD в 4,7 раза выше (95 % ДИ 1,4-15,5, р=0,017) В группе мужчин, имеющих в семейном анамнезе инсульт у магепи носителей генотипа II в 2 раза меньше (16 %), чем в группе без инсульта у матери (36 %), различие статистически достоверно (р = 0,049) При анализе ассоциаций I/D полиморфизма гена а2в-адренорецептора с инсультом в семейном анамнезе в целом, получено достоверное повышение доли гомозигот DD в группе с инсультом в CA ОШ=2,2 (95 % ДИ 1,1-4,4, р=0,04)

Уровень диастолического АД выше у гетерозигот, по сравнени'о с гомозиготами обеих видов, р = 0,024, по непараметрическому тесту Манна-Уитни По таблицам сопряженности повышение диастолического давления чаще встречается у гетерозигот ОШ=1,6 (95 % ДИ 1,1-2,5, р=0,046), а у гомозигот по инсерции - наоборот реже 0111=0,61 (95 % ДИ 0,38-0,98, р=0,049) В исследовании на финской популяции показана связь I/D полиморфизма гена а2в-адренорецептора с АГ (160/90 мм ртст) (Snapir А, 2003) На нашей выборке эги данные подтверждаются гетерозиготы имеют повышенный риск развития АГ ОШ=1,6 (95 % ДИ 1,1-2,4, р=0,034), а гомозиготы по инсерции -пониженный 0111=0,62 (95 % ДИ 0,40-0,97, р=0,045) Что, как было показано выше, связано с уровнем диастолического АД Однако на китайской популяции получены другие результаты с аллелем I связано повышение АД (Zhing Н, 2005) По данным тех же авторов у гомозигот II были ниже масса тела, ИМТ, отношение талия/бедра, концентрация сывороточного инсулина, резистентность к инсулину В эксперименте на мышах повышенная вазоконстрикция наблюдается у гомозигот по делеции (Talke Р, 2005) Но при исследованиях на добровольцах не выявили различий в реакции сосудов носителей разных генотипов (Muszkat М, 2005, Talke Р, 2005) Шьедскне исследователи нашли, что DD генотип связан с повышенным АД (Von Wowem F,2004)

Если исследуемую группу разделить по уровню холестерина, то с его увеличением в группе снижается доля гомозигот по делеции (рис 2)

Общий холестерин (мг/дл)

Рис 2 Допя носителей генотипов I/O полиморфизма гена ADRA2B в группах с разным уровнем общего холестерина

В группе с общим холестерином 250 мг/дл и более гомозигот по делеции в 3 раза меньше (р=0,038), чем в группе с общим холестерином до 250 мг/дл

При разделении исследуемой группы по наличию ИБС по эпидемиологическим критериям по данным одномоментного исследования получается накопление носителей делеционного аллеля при определенной ИБС Кроме того имеется достоверный протективный эффект гомозиготного инсерционного генотипа Публикаций результатов исследований, выполненных на выборках сопоставимых с нашей - нет Что результат определяется во многом материалом исследования - факт общеизвестный Финские авторы на трех разных выборках исследовали связь I/D полиморфизма гена а2в-адренорецептора с инфарктом миокарда В первом случае в анализ были взяты случаи острых коронарных событий в популяционной выборке мужчин 46-64 года, наступивших в течение 4,5 лет наблюдения Авторы пришли к заключению, генотип DD новый генетический фактор риска острых коронарных событий, но не АГ Во втором случае они сравнили лиц, умерших от ВСС или ИМ, с умершими от других причин и обнаружили, что генотип DD повышает риск ВСС и ИМ, особенно в возрасте до 55 лет (Snapir А, 2003) В третий раз они сравнивали членов семей с сахарным диабетом 2-го типа без ИБС с перенесшими ИМ - различий не получили (Snapir А, 2003) На новосибирской популяции по результатам проспективного наблюдения имеется тенденция к накоплению генотипа DD среди перенесших ИМ, но достоверной связи I/D полиморфизма гена а2в-адренорецептора с ИБС или ЦВБ на проспективном материале не выявлено Хотя по данным одномоментного исследования она имеется (табл 3)

Таблица 3

Частоты гснотнпои и аллелей 1/0 полиморфизма гена А1ЖА2В и ИБС по данным _одномоментного исследования_

Нет ИБС Есть ИБС

Генотипы п % п %

11 112 38,5 15 21,1

Ю 141 48,5 43 60,6

ОР 38 13,' 13 18,3

Достоверность различий 0,022

Аллелн

I 62,7 51,4

0 37,3 48,6

Двустор тест Фишера 0,017

Отношение шансов 1,6

95 % ДИ ОШ 1,1-2,3

п % п %

Носители генотипа II 112 38,5 15 21,1

Носители других генотипов 179 61,5 56 78,9

Двустор тест Фишера 0,006

Отношение шансов 0,43

95 % ДИ ОШ 0,23-0,79

Полиморфизм А80807Т гена транскрипционного фактора ЭР4

Частоты генотипов А80807Т полиморфизма гена транскрипционного фактора БР4 в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (А/А - 35,9 %, А/Т - 47,3 %, Т/Т - 16,7 %; п=245)

Среди мужчин имеющих в семейном анамнезе инсульт у родителей или смерть отца от инсульта достоверно чаще встречаются носители гетерозиготного генотипа (табл 4) Достоверность различий сохраняется и при сравнении частот носителей гетерозиготного генотипа в группе с инсультом в С А в целом с группой без инсульта в С А (ОШ 2,1, 95% ДИ 1,1-4,2, р=0,029)

Таблица 4

Частоты генотипов полиморфизма А80807Т гена 5Р4 и семейный анамнез

Смерть отца от инсульта Инсульт у родителей

Нет Есть Нет Есть

п % п % п % п %

Носители генотипа А/Т 88 44,4 11 73,3 82 43,4 25 61,0

Носители других генотипов 110 55,6 4 26,7 107 56,6 16 39,0

Двустор тест Фишера 0,035 0,05

Отношение шзнсов 3,4 2,0

95 % ДИ ОШ 1,1-11,1 1,02-4,1

Из всех показателей анализируемых на ассоциацию с полиморфизмом А80807Т гена БР4 достоверные различия найдены по уровню глюкозы между генотипами А/А (5,3 ммоль/л) и А/Т (6,2 ммоль/л) в тесте Манна-Уьтни (р=0,035), АЛ' и Т/Т (4,9 ммоль/л) (р=0,046) Кроме того, у гомозигот Т/Т меньше ЧСС по сравнению с носителями других генотипов (66 и 70 уд/мин, соответственно)

Несмотря на небольшой размер группы с возможной ИБС, обнаружено значимое накопление гомозигот А/А среди лиц с возможной ИБС, по сравнению с мужчинами без ИБС ОШ=3,2 (95 % ДИ 1,1-9,2, р=0,032)

Результатов исследований полиморфизма А80807Т гена SP4 с изучаемыми в настоящей работе показателями в доступной литературе не обнаружено

Полиморфизм PIA1/A2 гена гликопротеина GPIIb/llla

Частоты аллелей в популяции (87 7% и 12 3 %, п=476) почти не отличаются от данных полученных на финской популяции (85 % и 15 %) (Mikkelsson J, 2000) Финские авторы показали, что мужчины с фатальным острым коронарным тромбозом в 3 4 раза чаще являются носителями А2 аллеля, чем мужчины умершие ВСС без коронарного тромбоза Кроме того, мужчины с ИМ с тромбозом в 3 6 раза чаще являлись носителями А2 аллеля, чем мужчины с ИМ, но без тромбоза Зависимость была выше в возрасте до 60 лет Риск ВСС у финнов А2 аллель повышает в возрасте до 50 лет Авторы полагают, что ассоциация полиморфизма гена GP Ilb/IIIa с ИМ, чаще подтверждается в исследованиях, выполненных на молодых мужчинах, особенно курильщиках с трансмуральным, Q-положительным ИМ в острой стадии. Если же исследование проводится на выживших после инфаркта, то, как правило, ассоциация отсутствует (Mtkkelsson J, 2000)

Среди мужчин, имеющих в семейном анамнезе СП у матери, частота гомозигот А2/А2 почти в 4 раза выше, чем среди мужчин без СП у матери (95 %ДИ 1,3-12,0, р=0,021)

У носителей гетерозиготного генотипа несколько чаще встречается сахарный диабет у матери 31 % и 17 %, соответственно Исследований связи семейного анамнеза с PIA1/A2 полиморфизмом гена гликопротеина GPIIb/IIIa в доступной литературе найти не удалось В Германии обнаружили связь этого полиморфизма не только с ИБС, верифицированной коронарографически, но и с сахарным диабетом 2-го типа (Tschoepe D, 200] В то же время в Австрии на основании данных, полученных в ходе достаточно большого исследования, отвергли связь PIA1/A2 полиморфизма с СД 2-го типа, метаболизмом глюкозы, ангиографически подтвержденной ИБС и ИМ (Marz W, 2004)

Доля носителей аллеля А2 меньше среди мужчин с ожирением - 13,2 %, по сравнению с 22,7 % при ИМТ меньше 30 Но ИАТЕР у носителей генотипа А2/А2 несколько выше (3,9), чем у носителей двух других генотипов (3,1) Последнее, вероятно, обусловлено повышением общего холестерина у носителей генотипа А2/А2 - 222 мг/дл и 208 мг/дл и повышением доли лиц с гипоальфахолестеринемией 0111=3,9 (95 % ДИ 1,0-14,5, р=0,066)

При исследовании связи уровня систолического и диастолического артериального давления, как интервальных переменных, с генотипами и аллелями PIA1/A2 полиморфизма гена гликопротеина GPIIb/IIIa - достоверных различий не получено Однако при разделении исследуемой группы по уровню систолического артериального давления до 165 мм рт ст, и 165 мм рт ст и выше, обнаружены значимые отличия (табл 5) Наследственная отягощенность

по АГ в целом в 2,8 раза чаще встречается у носителей генотипа А2/А2 (р=0,05)

Таблица 5

Частоты генотипов и аллелей Р1Л1/Л2 полиморфизма генл ОРПЬ/Ша и систозичсское

Систолическое АД < 165 мм рт ст Систолическое АД >= 165 мм рт. ст

Генотипы п % п %

А1/А1 336 80,2 37 67,3

А1/А2 72 17,2 14 25,5

А2/А2 11 2,6 4 7,3

Достоверность различии 0,045

Аллели

А1 88,8 80,0

А2 И,2 20,0

Двустор тест Фишера 0,013

Отношение шансов 2,0

95 % ДИ ОШ 1,2-3,3

п % п %

Носители генотипа А1/А 1 336 80,2 37 67,3

Носители других генотипов 83 19,8 18 32,7

Двустор тест Фишера 0,035

Отношение шансов 0,5

95 % ДИ ОШ 0,3-0,9

Вероятно за счет вышеописанного повышения систолического АД у носителей генотипа А2/А2 повышено и пульсовое АД по сравнению с носителями других генотипов 58 мм рт ст и 48 мм рт ст, соответственно (р=0,025) Хотя итальянские исследователи не обнаружили связи PIA1/A2 полиморфизма гена гликопротеина GPIIb/IIIa с АГ и ИБС (Pucci L, 2003) В работе американских авторов отрицается связь этого полиморфизма с ИМ, инсультом и венозным тромбозом (Ridker РМ, 1997) По данным большого мета-анализа, включавшего 66 155 больных ИБС и 91 307 человек в контроле связь с ИБС не подтвердилась (Ye Z, 2006) Однако по результатам, полученным на русской популяции риск развития ИБС на фоне гиперхолестеринемии был выше у редких гомозигот А2/А2, по сравнению с частыми (Meshkov AN, 2005)

Полиморфизм кодирующей части гена аполипопротеина Е

У мужчин в популяции в целом наблюдалось статистически значимое отклонение от равновесия Харди-Вайнберга (табл 6) Наиболее вероятная причина этого - отличие в частотах генотипов между возрастными группами вследствие различного уровня смертности носителей разных генотипов

Статистически значимой возрастной динамики генотипов в популяции не обнаружено Отклонение от равновесия Харди-Вайнберга имеется только в старшей возрастной группе Частота аллеля е2 в 2 2 раза выше в 55-64 года, чем в 35-44 г (р=0,012)

Из фактов семейного анамнеза достоверная ассоциация выявлена с АГ у матери, р = 0,013 Отношение шансов обнаружить аллель е2 у мужчин, чьи

матери страдали АГ - 0,485 (95 % ДИ 0,246-0,955) Для аллеля е4 ОШ=0,474 (95 %ДИ 0,271-0,828)

Таблица 6

Частоты генотипов и аллелей полиморфизма кодирующей части гена АРОЕ в

Генотипы п %

24 13 3,0

32 49 11,2

33 295 67,7

34 68 15,6

44 11 2,5

Аллели

2 7,1

3 81,1

4 11,8

Соответствие ХВ Х2 = 13 7367, сЫ^ 05 = 7 815

Однако, если сравнить группу мужчин, имеющих в семейном анамнезе АГ у отца, с теми, чьи отцы не болели АГ, то оказывается, что у первых частота генотипа 4/4 выше в 6 раз, р=0,021 (95 % ДИ 1,5-24,9) Среди лиц с наследственной отягощенностыо в целом по АГ чаще встречались носители генотипа 3/3 ОШ=1,7 (95 % ДИ 1,1-2,6,0,013)

Имеется тенденция к снижению частоты носительства аллеля е2 среди мужчин, чьи отцы умерли от сердечного приступа или у матерей или у отцов был инсульт Среди лиц с наследственной отягощенностью в целом по ИБС носители аллеля е2 и генотипа 3/2 встречались достоверно реже (табл 7)

Таблица 7

Частота аллелей и генотипов полиморфизма кодирующей части геиа АРОЕ и _наследственная отягощснность ИБС_

Наследственная отягощепность ИБС

Нет Есть

п % п %

Носители аллеля е2 47 17,0 15 9,7

Носители других аллелей 230 83,0 140 90,3

Двустор тест Фишера 0,045

Отношение шансов 0,524

95 % ДИ ОШ 0,283-0,973

п % п %

Носители генотипа 3/2 38 13,7 11 7,1

Носители других генотипов 239 86,3 144 92,9

Двустор тест Фишера 0,04

Отношение шансов 0,480

95 % ДИ ОШ 0,238-0,970

Очевидно, что у носителей аллеля е4 средний уровень глюкозы ниже, чем у лиц без этого аллеля (табл 8) Поскольку при проверке нормальности распределения по тесту Колмогорова-Смирнова, оказалось что уровень глюкозы крови не отвечает критериям нормального распределения, было проведено исследование достоверности различий уровня глюкозы у носителей аллеля е4 и лиц без этого аллеля с помощью непараметрического теста Манна-

Уитни - р=0,022 Согласно результатам испанского исследования у носителей аллеля е4 с АГ гиперинсулинемия после теста толерантности к глюкозе была выше чем, у лиц без этого аллеля (Stiefel Р, 2001)

Таблица 8

Средний уровень глюкозы крови у носителей разных генотипов по полиморфизму

Генотипы N Глюкоза (ммоль/л) Станд отклон Ст ошибка среднего 95 % довер инте ительный звал

24 6 4,46 0,81 0,33 3,62 5,30

32 18 5,33 1,50 0,35 4,59 6,08

33 100 5,44 1,93 0,19 5,06 5,82

34 29 4,81 1,17 0,22 4,36 5,25

44 5 4,92 1,97 0,88 2,47 7,37

У носителей аллеля еЗ в 3 раза реже встречается гипо-альфа-холестеринемия 0111=0,3 (95 % ДИ 0,1-0,9, р=0,05) С помощью процедуры GLM показана ассоциация уровня ХС ЛПВП с качестве ковариаты) Достоверность ассоциации ИАТЕР с полиморфизмом гена АРОЕ р=0,043

При разделении исследуемой популяции на две группы по уровню индекса атерогенности до 3,0 и 3,0 и более - выявлено различие частот генотипов (р=0,044) и аллелей (р=0,013) между этими группами

При сравнении шансов носителей аллеля е4 иметь ИАТЕР>= 3,0 с носителями других аллелей они оказались достоверно выше (табл 9) А у носителей аллеля е2 наоборот - ниже, особенно с генотипом 32 Сходные метаболические изменения, ассоциированные с полиморфизмом гена АРОЕ обнаружены и в других популяциях и расах (Yang SL, 2004, Baroni MG, 2003, Isbir T, 2003) Отчасти повышение индекса атерогенности может быть связано с тем, что у носителей генотипа 4/4 гипоальфахолестеринемия встречается в 3,5 раза чаще, чем у носителей других генотипов (различие не достигает статистической достоверности вероятно из-за небольшого количества носителей этого генотипа в выборке)

Таблица 9

Отношение шансов у носителей разных генотипов и аллелей полиморфизма кодирующей части гена АРОЕ попасть в группу с повышенным индексом __атерогенности (ИАТЕР>=?)_

Генотипы Двустор тест Фишера Отношение шансов 95 % ДИ ОШ

24 0,780 1,288 0,425-3,900

32 0,018 0,440 0,227-0,851

33 0,755 0,932 0,619-1,403

34 0,063 1,654 0,974-2,807

44 0,365 1,951 0,562-6,766

Аллели

2 0,049 0,559 0,315-0,990

3 0,301 0,635 0,276-1,465

4 0,025 1,7 1,1-2,8

При анализе с помощью процедуры ОЬМ ассоциации пульсового АД с полиморфизмом кодирующей части гена АРОЕ с возрастом в качестве ковариаты и попарных сравнениях с введением поправки Бонферрони на

множественные сравнения показана достоверная разница в уровне пульсового АД между генотипами 44 и 34 (р=0,044), 44 и 33 (р=0,05)

Связь полиморфизма гена АРОЕ с артериальным давлением была показана ранее на китайской популяции Носители генотипов 3/4 и 4/4 имели значимое повышение систолического АД, по сравнению с носителями генотипов 2/3 и 3/3 (Li X, 2003} С этим хорошо согласуется описанное выше накопление носителей генотипа 4/4 среди лиц с АГ у отца и снижение доли носителей аллеля е2 среди лиц с АГ у матери Кроме того, в нашей выборке обнаружена выраженная ассоциация генотипа 4/4 с АГ 0111=4,2 (95 % ДИ 1,314,0, р=0,022) Что обусловлено выраженной ассоциацией генотипа 4/4 с систолическим АД (160 мм рт ст и выше) ОШ=7,3 (95 % ДИ 2,2-25,0, р=0,004) Мужчины-носители аллеля е4 в 2,6 раза чаще имели систолическое АД 160 мм рт ст. и выше, чем носители других аллелей р=0,003 (95 % ДИ 1,44,8) При сравнении группы мужчин, имеющих диастолическое артериальное давление 90 мм рт ст и выше с теми, у кого диастолическое артериальное давление меньше 90 мм рт ст, обнаружено снижение частоты носительства генотипа 32 - 7,0 % и 13,5 % соответственно, ОШ=0,48 (95 % 0,23-0,99, 0,05)

В 2001 году турецкие исследователи доказали, что носители аллеля е4 с АГ чаще имеют гипертрофию левого желудочка, расширение левого предсердия, ретинопатию, по сравнению не носителями аллеля е4 (Yilmaz Н, 2001)

Среди носителей аллеля е2 за период наблюдения не было случаев фатальной ИБС При включении в анализ всех случаев проспективной ИБС получили следующие результаты, подтверждающие протективное влияние аллеля е2 относительно ИБС ОШ=0,15 (р=0,028) Что согласуется с данными других исследований (Yang SL, 2004) Высокий риск развития ИМ до 52 лет у мужчин ассоциирован с аллелем е4 Комбинация его с курением в логистической регрессионной модели, включающей стандартные факторы риска, повышает отношение шансов до 25 (Inbal А, 1999) В итальянском проспективном исследовании из 11 ОНП только Аро В Xba 1 и Аро е4 оказались ассоциированы с ИБС (Inbal А, 1999)

Количество случаев проспективной церебро-васкулярной болезни (ЦВБ) среди носителей аллеля е2 меньше, чем среди носителей двух других аллелей, но это различие не достигает уровня статистической значимости, вероятно из-за небольшого количества случаев проспективной ЦВБ С повышенным же риском возникновения и тяжестью инсульта ассоциирован аллель е4 (de Leeuw FE, 2004, Luthra К, 2002) Считается, что это вызвано как АГ, чаще сопровождающей носительство этого аллеля, так и меньшей способностью к восстановлению нервной ткани у носителей этого аллеля (de Leeuw FE, 2004)

Полиморфизм -А491Т промотора гена аполипопротеина Е

Частоты генотипов полиморфизма -А491Т промотора гена аполипопротеина Е в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (А/А - 60 5 %, А/Т - 35 0, 'Г/Т - 4 5 %, п=177) В

популяции Норвегии частота аллеля Т несколько ниже - 15,5 % (Kumar Т, 2002)

Встречаемость в семейном анамнезе СП у брата у носителей разных генотипов -А491Т полиморфизма промотора гена аполипопротеина Е имеет значимые различия, р= 0,03 СП у брата у носителей генотипа Т491/Т491 встречается в 7,7 раза чаще по сравнению с носителями двух других генотипов, р= 0,049 (95 % ДИ 1,3-45,3) В группе с НО по ИБС в целом частота гомозигот Т/Т существенно выше, ОШ - 6,4 (табл 10) В доступной литературе исследований связи полиморфизма промотора гена АРОЕ с семейным анамнезом ССЗ пока нет.

Таблица 10

Частоты гснотнпоп н аллелей -A49IT полиморфизма промотора гена АРОЕ н

наследственна« отяготеииость в целом по ИБС в популяции

Наследственная отягощеиность по ИБС

Пег Есть

Генотипы п % п %

А491/А491 76 65,0 31 51,7

А491/Т491 39 33,3 23 38,3

Т491/Т491 2 1,7 6 10,0

Достоверность различий 0,024

Аллели

А 81,6 70,8

Т 18,4 29,2

Двустор тест Фишера 0,03

Отношение шансов 1,8

95 % ДИ ОШ 1,1-3,1

п % п %

Носители генотипа Т491 (Т491 2 1,7 6 10,0

Носители других генотипов 115 98,3 54 90,0

Двустор Тест Фишера 0,019

Отношение шансов 6,4

95 % ДИ ОШ 1,3-32,7

При разделении исследуемой группы по уровню ИМТ- ИМТ < 25 и ИМТ >= 25 обнаружено, что повышенный ИМТ носители генотипов А491/Т491 и Т491/Т491 по сравнению с носителями генотипа А491/А491 имеют в 2 раза чаще (95 % ДИ 1,1-3,7, р=0,032) Достоверность различий уровня глюкозы у носителей разных генотипов была проверена с помощью непараметрического теста Крускала-Уоллиса- р=0,047 По тесту Манна-Уитни при попарных сравнениях различия достоверны между носителями генотипов А/А и Т/Т (р=0,008) и А/Т и Т/Т (р=0,021)

Отношение шансов иметь определенную ИБС (по данным скрининга) у носителей аллеля Т по сравнению с гомозиготами А/А в 3,1 раза выше (95 % ДИ 1,1-8,2, р=0,027) Значимые отличия частот генотипов и аллелей -А491Т полиморфизма промотора гена АРОЕ получены и для проспективной ИБС (табл 11) Отношение шансов иметь инфаркт миокарда (по данным проспективного наблюдения) у носителей аллеля Т по сравнению носителями аллеля А в 2,1 раза выше (95 % ДИ 1,1-3,9, р=0,001) Для проспективных

случаев фатальной ИБС ОШ = 5,4 для носителей генотипа Т491/Т491 р=0,048 (95 % ДИ 1,2-24,4)

Таблица 11

Частоты гспотнпов и аллелей -А491Т полиморфизма промотора гена АРОЕ в группе с _проспективной ИБС _

Нет ИБС Проспективная ИБС

Генотипы п % п %

А491/А491 88 63,8 19 48,7

А491/Т491 48 34,8 14 35,9

Т491/Т491 2 1,4 6 15,4

Достоверность различий 0,001

Аллели

А 81,2 66,7

Т 18,8 33,3

Двустор тест Фишера 0,008

Отношение шансов 2,2

95 % ДИ ОШ 1,2-3,8

п % п %

Носители генотипа Т491/Т491 2 1,4 6 15,4

Носители других генотипов 136 98,6 33 84,6

Двустор Тест Фишера 0,002

Отношение шансов 12,4

95 % ДИ ОШ 2,4-64,0

Таким образом, результаты этого исследования оказались противоречащими данным, полученным на материале ECTIM исследования, в котором анализировали связь с ИМ трех ОНП в промоторе гена АРОЕ (-491 AT, -427СТ, -219GT) Значимые различия были найдены только для аллеля -219Т (Lambert J-C, 2000) Согласно исследованию, проведенному в Японии у носителей генотипа А/А уровень базального диастолического АД выше, чем у носителей генотипа А/Т (Katsuya Т, 2000) На нашей выборке имеется только тенденция к повышению диастолического АД у носителей генотипа Т/Т Других исследований связи ССЗ и их факторов риска с полиморфизмом -491АТ в промоторе гена АРОЕ пока нет

Полиморфизм Е23К гена KIR6.2

Частоты генотипов полиморфизма Е23К гена KIR6 2 в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (Е/Е - 38 8 %, Е/К - 47 8 %, К/К - 13 4 %, п=134) Частоты генотипов и аллелей не отличаются от опубликованных данных (Shaat N, 2005, Ezenwaka С, 2005, Xiong С, 2006)

Гомозиготы Е23Е достоверно реже имеют в семейном анамнезе смерть отца от СП ОШ=0,3 (95 % ДИ 0,1-0,9, р=0,033)

Отношение шансов обнаружить среди носителей гетерозиготного генотипа лиц с АГ у родителей в семейном анамнезе в 2,4 раза больше, чем у носителей двух других генотипов (р = 0,046, 95 % ДИ 1,1-5,4) Достоверной ассоциации изучаемого ОНП с семейным анамнезом сахарного диабета не выявлено Исследований ассоциаций этого ОНП с другими фактами семейного анамнеза нет Связь полиморфизма Е23К гена KIR6 2 с ИБС изучалась в

единственном недавнем китайском исследовании, в котором авторы обнаружили значимую ассоциацию (Хюпц С, 2006) На нашей выборке достоверных различий по частотам генотипов и аллелей между контролем и группами с ИБС, как по данным одномоментного исследования, так и проспективного наблюдения - выявить не удалось

Отношение шансов у носителей генотипа К23К иметь ОХС 250 мг/дл и выше в 3,5 раза больше, чем у носителей других генотипов (95 % ДИ 1,2-10,1, р=0,044) Количество исследований этого ОНП не превышает двух десятков, соответственно круг параметров, с которыми изучена ассоциация, тоже невелик И сами исследования выполнены на уровне пилотных, например в одном из них, где не обнаружили связи с антропометрическими и биохимическими показателями, было всего 85 участников исследования (46 больных и 39 контроль) (Е2еп\¥ака С, 2005) Однако связь полиморфизма Е23К гена КШ6 2 с секрецией инсулина подтверждается в нескольких исследованиях (Погег ЛС, 2004, Егеп\уака С, 2005)

Таблица 12

Средние урошш некоторых показателей у носителей разных генотипов полиморфизма

Е23К гена КШ6 2

Генотипы N Среднее Станд отклон Ст ошибка среднего 95 % доверительный интервал

АДС Е23Е 52 143,54 26,061 3,614 136,28 150,79

Е23К 64 141,17 25,826 3,228 134,72 147,62

К23К 18 155,33 28,019 6,604 141,40 169,27

ПАД Е23Е 52 55,12 21,774 3,020 49,05 61,18

Е23К 64 51,80 18,709 2,339 47,12 56,47

К23К. 18 62,72 19,988 4,711 52,78 72,66

ХС Е23Е 52 209,35 48,646 6,746 195,80 222,89

Е23К 64 211,91 38,573 4,822 202,27 221,54

К23К 18 222,83 45,633 10,756 200,14 245,53

ТГ Е23Е 50 115,72 57,198 8,089 99,46 131,98

Е23К 63 116,03 64,308 8,102 99,84 132,23

К23К 18 152,89 116,970 27,570 94,72 211,06

ХС ЛПН П Е23Е 50 130,3160 44,95182 6,35715 117,5408 143,0912

Е23К 64 132,6938 37,76771 4,72096 123,2597 142,1278

К23К 17 138,1412 47,02360 11,40490 113,9639 162,3185

Глю коза Е23Е 8 4,4550 1,22319 ,43246 3,4324 5,4776

Е23К. 15 6,6500 2,66222 ,68738 5,1757 8,1243

К23К. 4 6,7150 1,62861 ,81430 4,1235 9,3065

Среди лиц с АГ (АД 140/90 и выше) доля носителей генотипа К23К в 3 раза выше, чем у мужчин без АГ, р = 0,050 В тесте Дункана у носителей генотипов Е23К и К23К различались уровни пульсового АД и триглицеридов Уровень триглицеридов значимо отличался и у носителей Е23Е и К23К В тесте Манна-Уитни у носителей генотипов Е23К и К23К достоверно различался уровень систолического и пульсового АД, р = 0,05 Вполне вероятно, что при увеличении размеров выборки, с выполненным тестом толерантности к глюкозе и включении в анализ ОНП в гене SURI, мы получим столь же существенное повышение относительного риска развития сахарного диабета у носителей

определенных гаплотипов, которое получилось на финской популяции (Laukkanen О, 2004)

Полиморфизм С677Т гена метилен-тетра-гидро-фолат-редуктазы MTHFR

Частоты генотипов С677Т полиморфизма гена MTHFR в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (С/С 46 9 %, С/Т - 45 7 %, Т/Т - 7 4 %, п=256)

В тесте Манна-Уитни носители гетерозиготного генотипа статистически значимо отличались от носителей двух других генотипов по уровню пульсового артериального давления (р = 0,037) По уровню систолического артериального давления статистически значимо отличались носители генотипов С/Т и Т/Т Кроме того, имеется тенденция к повышению уровня общего холестерина, триглицеридов у редких гомозигот по сравнению с частыми, хотя эти различия и не достигают уровня статистической значимости Но вот в другом исследовании они достоверно отличались (Kerkern М, 2006)

При разделении исследуемой группы по наличию/отсутствию такого заболевания, как артериальная гипертензия по современному определению (АД>= 140/90) статистически достоверных различий в частотах генотипов и аллелей - не выявлено Но если группу разделить по уровню диастолического давления до 90 мм рт ст и 90 мм рт ст и более, то отношение шансов у носителей генотипа Т/Т иметь повышение диастолического АД повышено в 3,7 раза (95 % ДИ 1,4-9,8, р=0,010) Заметно повышена доля гомозигот Т677Т среди мужчин с АД 160/95 мм рт ст и выше Отношение шансов найти носителей этого генотипа среди лиц с АД 160/95 мм рт ст и выше, по сравнению с группой мужчин, у которых АД меньше 160/95 мм рт. ст составляет 4 1 (95 % ДИ 1,6-10,6, р=0,006) В литературе нет прямых указаний на связь полиморфизма С677Т с артериальным давлением Только в 2005 году китайскими авторами показано, что носители гаплотипа 677С-1298С имели более низкое систолическое и диастолическое АД в ответ на лечение ингибитором АПФ (Jiang S, 2005)

Носители генотипа С677С чаще встречаются среди мужчин без ИМ у родителей ОШ=1,9 (95 % ДИ 1,1-3,5, р=0,05)

Среди лиц, перенесших ИМ по данным проспективного наблюдения частоты генотипов достоверно отличаются от группы без ИМ Гетерозиготный генотип оказывается протективным в плане развития ИМ Носители редкою гомозиготного генотипа чаще встречаются в группе с ИМ, хотя различие статистически недостоверно (табл 13) У французских исследователей риск развития ИМ у носителей этого генотипа оказался достоверно выше, также как и у компаундного генотипа Т677Т/А1298А (Falchi А, 2005) Очень сходные с Новосибирском результаты получены, на арабах Туниса (49%, 35% и 16% -ИБС, 48 3%, 45 8% и 5 8% - здоровые) (Kerkern М, 2006) Другое исследование было выполнено в США для мужчин с генотипом Т/Т по полиморфизму С1420Т гена cSHMT отношение шансов развития ССЗ при сочетании с

генотипом С/Т по полиморфизму С677Т гена MTHFR было 3 6 (95% ДИ, 1 77 8) и 10 6 (95% ДИ, 2 5-46 0) при сочетании с Т/Т генотипом (Lim U, 2005)

Таблица 13

Частоты генотипов полиморфизма С677Т гена MTHFR и проспективный ИМ

Нет ИМ Проспективный ИМ

Генотипы п % п %

С677С 100 45,2 20 57,1

С677Т 107 48,4 10 28,6

Т677Т 14 6,3 5 14,3

Достоверность различи» 0,048

п % N %

Носители генотипа С677Т 107 48,4 10 28,6

Носители других генотипов 114 51,6 25 71,4

Двустор тест Фишера 0,030

Отношение шансов 0,426

95 % ДИ ОШ 0,195-0,929

Инсерционно-делеционный полиморфизм гена хемокиновых рецепторов СС(*5

Частоты генотипов 1/Е> полиморфизма гена ССЯ5 в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (II - 78 3 %, ГО - 21 3 %, ОВ -04%, п=263) Частоты генотипов и аллелей, полученные в настоящем исследовании не отличаются от опубликованных ранее (УисЬп N 8 ,1998)

Таблица 14

Частоты генотипов 1/D полиморфизма гена CCR5 и семейный анамнез

Нет АГ у матери Есть АГ у матери

Генотипы п % п %

11 104 86,7 55 75,3

ID 15 12,5 18 24,7

DD 1 0,8 0 0

Достоверность различий 0,073

Аллели

I 92,9 87,7

D 7,1 12,3

Двустор тест Фишера 0,100

Отношение шансов 1,9

95 % ДИ ОШ 0,9-3,7

п % п %

Носители генотипа 11 104 86,7 55 75,3

Носители других генотипов 16 13,3 18 24,7

Двустор тест Фишера 0,05

Отношение шансов 0,47

95 % ДИ ОШ 0,22-0,99

п % п %

Носители генотипа 1D 15 12,5 18 24,7

Носители других генотипов 105 87,5 55 75,3

Двустор тест Фишера 0,047

Отношение шансов 2,3

95 % ДИ ОШ 1,1-4,9

Среди мужчин с АГ (160/95) носители аллеля D встречаются в 2 раза реже, чем в группе без АГ (95 % ДИ 1,1-4,3, р=0,050) То есть аллель D выполняет протективную роль в отношении развития АГ По данным итальянских авторов имеется значимая связь этого полиморфизма с АГ (Mettimano М, 2003) В то же время результаты исследования выполненного в США отвергают связь между I/D полиморфизмом гена CCR5 и гипертензией (Zhang М, 2006) Среди мужчин с АГ у матери носители генотипа ID встречаются в 2 раза чаще, чем в группе без АГ у матери (табл 14)

Среди мужчин с общим холестерином >= 200 мг/дл носители аллеля D встречаются чаще, чем в группе с более низким уровнем общего холестерина (р=0,05) В непараметрическом тесте Манна-Уитни значимо различались средние уровни пульсового АД (р=0,050), общего холестерина (р=0,045), глюкозы (р=0,034), у носителей II и ID генотипов (табл 15)

Таблица 15

Средние уровни некоторых показателен у носителей разных генотипов I/D

полиморфизма гена CCR5

Генотипы N Среднее Станд отклон Ст ошибка среднего 95 % доверительный интервал

АДС II 206 141,80 25,102 1,749 138,35 145,24

ID 56 134,96 21 464 2,868 129,22 140,71

ПАД II 206 54,33 17,818 1,241 51,89 56,78

ID 56 48,98 14,469 1,934 45,11 52,86

ХС II 206 206,80 48,656 3,390 200,12 213,48

ID 56 218,70 40,620 5,428 207,82 229,57

АХС II 204 52,64 15,586 1,091 50,49 54,79

ID 54 56,04 16,472 2,242 51,54 60,53

ХС ЛПНП II 202 130,6069 45,34948 3,19078 124,3152 136,8986

ID 53 138,0868 42,36000 5,81859 126,4109 149,7627

Глюкоза 11 50 5,7712 2,02095 ,28581 5,1969 6,3455

ID 17 4,6182 1,16553 ,28268 4,0190 5,2175

Экспериментальные работы по изучению роли хемокиновых рецепторов и их полиморфизма в развитии атеросклероза начались еще в 90-е годы и продолжаются до сих пор (РоПеаих Б, 2006) Японские авторы полагают, что антиатерогенный эффект питавастатина может отчасти быть связан с воздействием на хемокиновые рецепторы ССЯ2/ССК5 (Рщню М, 2006) Но исследований связи 1/0 полиморфизма гена ССЯ5 с уровнем липидов и углеводов пока нет.

Полиморфизм З'итя (34293 и 34294 ТС-»СА) гена с^тэ

У мужчин в популяции в целом наблюдалось статистически значимое отклонение от равновесия Харди-Вайнберга (рр - 62 0 %, ря - 29 3 %, яц - 8 7 %, п=461,Х2= 15.127)

Как видно из данных таблицы 16 имеет место колебание частоты редкого аллеля и частот генотипов в различных возрастных группах, и, хотя эти изменения статистически недостоверны, дефицит гетерозигот в группе 45-54 года дает отклонение от равновесия Х-В

Среди мужчин с артериальной гипертензией у отца в семейном анамнезе чаще встречаются носители аллеля q (ОШ=1,9, р=0,008) и редкого гомозиготного генотипа (ОШ=3,3, р~0,01) Кроме того, доля носителей редкого гомозиготного генотипа повышена среди мужчин с инсультом у отца (ОШ=3,3; р=0,011)

Таблица 16

Возрастная динамика частот генотипов н аллелей полиморфизма ЗЧГГК (34293 и 34294 _ТС—»СА) гена с-Гт*; в популяции мужчин г Новосибирска_

Возраст 25-34 г 35-44 г 45-54 г. 55-64 г

Генотипы п % п % п % п %

РР 63 67,7 55 63,2, 81 61,8 85 57,4

РЧ 24 25,8 25 28,7 35 26,7 51 34,5

чч 6 6,5 7 8,0 15 11,5 12 8,1

Аллели

Р 80,6 77,6 75,2 74,7

Ч 19,4 22,4 24,8 25,3

Соответствие ХВ Х2 = 2 794 Х2 = 2 628 Х2= 10 557 Х2 =1 178

Среди мужчин с семейным анамнезом отягощенным по сахарному диабету также чаще встречаются носители редкого гомозиготного генотипа ОШ=2,7, р=0,04)

У мужчин, имевших возможную ИБС по данным скрининга, повышена частота гетерозиготного генотипа, по сравнению с лицами без ИБС и с определенной ИБС (р=0,02)

Отношение шансов иметь избыточную массу тела (ИМТ >= 25) у носителей редкого гомозиготного генотипа в 2,5 раза выше, чем у носителей двух других генотипов (табл 17)

Таблица 17

Частоты генотипов и аллелей полиморфизма ЗЧЛГК (34293 и 34294 ТС—»СА) гена с-Гпи

и индекс массы тела

ИМТ <25 ИМТ >=25

Генотипы п % п %

РР 142 66,4 142 58,0

РЧ 61 28,5 74 30,2

чч 11 5,1 29 11,8

Достоверность различий 0,026

Аллели

Р 80,6 73,1

Ч 19,4 26,9

Двустор тест Фишера 0,008

Отношение шансов 1,5

95 % ДИ ОШ 1,1-2,1

п % п %

Носители генотипа яч 11 5,1 29 11,8

Носители других генотипов 203 94,9 216 88,2

Двустор тест Фишера 0,013

Отношение шансов 2,5

95 % ДИ ОШ 1,2-5,1

Отношение шансов иметь повышение индекса атерогенности у носителей гетерозиготного генотипа в 1,7 раза выше, чем у носителей двух других

генотипов Носители же частого гомозиготного генотипа наоборот достоверно чаще имеют нормальный индекс атерогенности (табл 18)

Таблица 18

Частоты генотипов и аллелей полиморфизма З'ИТК (34293 и 34294 ТС—>СА) гена с-Гпк

ИАТЕР < 3,0 ИАТЕР >= 3,0

Генотипы п % п %

Рр 161 68,8 118 54,9

Рр 56 23,9 76 35,3

ОР 17 7,3 21 9,8

Достоверность различии 0,010

Аллели

Р 80,8 72,6

О 19,2 27,4

Двустор тест Фишера 0,004

Отношение шансов 1,6

95 % ДИ 0111 1,2-2,2

п % п %

Носители генотипа рр 161 68,8 118 54,9

Носители других генотипов 73 31,2 97 45,1

Двустор тест Фишера 0,003

Отношение шансов 0,552

95 % ДИ ОШ 0,375-0,811

п % п %

Носители генотипа ря 56 23,9 76 35,3

Носители других генотипов 178 76,1 139 64,7

Двустор тест Фишера 0,009

Отношение шансов 1,7

95 % ДИ ОШ 1,2-2,6

Отношение шансов иметь повышение глюкозы у носителей редкого гомозиготного генотипа в 3,6 раза выше, чем у носителей двух других генотипов (р=0,038)

Среди мужчин с систолическим АД 160 мм рт ст и выше носители редкого гомозиготного генотипа встречаются в 2 раза чаще, чем среди мужчин с систолическим АД меньше 160 мм рт ст (14,9 % и 7,7 % соответственно, р=0,05)

При однофакторном дисперсионном анализе (One-Way ANOVA) значимые различия получены для носителей разных генотипов по АХС и ИАТЕР (р=0,020 и р=0,028) При апостериорных множественных сравнениях в тесте Дункана достоверно различались по ИАТЕР носители гомозиготных генотипов (рр и qq), по уровню глюкозы гомозиготы qq по сравнению с носителями двух других генотипов (табл 19) В доступной литературе исследования ассоциации полиморфизма 3'UTR (34293 и 34294 ТС—>СА) гена c-fms с изученными в настоящей работе показателями и заболеваниями отсутствуют Предложить стройную обоснованную гипотезу, объясняющую причинно-следственные связи, которые дают обнаруженные ассоциации, пока не представляется возможным

Таблица 19

Значимость различий по ряду показателен межд) носителями разных генотипов полиморфизма 3'UTR (34293 и 34294 ТС—>СЛ) гена c-fms по нснараметрнческому тесту Манна-Унтни _ ____

Сравниваемые генотипы ИМТ AXC ИНДАТЕР ХСЛПНП ТГ Глюкоза

РР qq ,036 ,004 ,059

РР pq 0,020 0,036 0,007

РЧ qq 0,027 0,017

РР pqи qq 0,024 0,002 0,039 0,058

pq pp Hqq 0,017 0,054 0,006

qq pp и pq 0,060 0,009

При анализе частот аллелей и генотипов изучаемого полиморфизма обнаружено значимое повышение доли аллеля q (ОШ=2,5, р=0,031) и редких гомозигот qq (ОШ=5,1, р=0,02) в группе мужчин перенесших инсульт по данным проспективного наблюдения

У мужчин, перенесших инфаркт миокарда по данным проспективного наблюдения, повышена частота гетерозиготного генотипа, по сравнению с лицами без ИБС (табл 20)

Таблица 20

Частоты генотипов и аллелей полиморфизма 3'1ЛГК (34293 и 34294 ТС—>СА) гена с-Гшэ

и проспективный инфаркт мнокз ада

Нет ИМ Проспективный ИМ

п % п %

Носители генотипа ря 120 28,i 15 44,1

Носители других генотипов 307 71,9 19 55,9

Двустор тест Фишера 0,076

Отношение шансов 2,02

95 % ДИ ОШ 0,99-4,10

Инсерционно-делеционный полиморфизм гена с-Лпв

Частоты генотипов 1/0 полиморфизма гена с-йтю в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (II - 78 3 %, ГО - 20 4 %, ОЭ - 1 3 %, п=226)

У носителей гомозиготного инсерционного генотипа реже встречается общий холестерин выше 250 мг/дл (0111=0,42, р=0,029), а у носителей гетерозиготного генотипа, наоборот чаще в 2 7 раза (р=0,022), по сравнению с носителями двух других генотипов

При разделении исследуемой группы по уровню общего холестерина на три подгруппы оказывается, что частота носительства гетерозиготного генотипа нарастает от одной подгруппы к другой с увеличением уровня холестерина (рис 3) При однофакторном дисперсионном анализе (Опе-\Уау АЫОУА) значимые различия получены для носителей разных генотипов по уровню ХС стандартизованного по возрасту (р=0,047) Значимость различий по ХС между гомозиготами по инсерции и гетерозиготами по непараметрическому тесту Манна-Уитни р = 0,039

ID

40 c 35 h 30

I»

u 20

о 15 S Ю

« ç

36,1

14,7

до 200 200-250 250 и более

Общий холестерин

Рис 3 Доля носителей генотипа I/D гена c-fms и общий холестерин

В доступной литературе исследований ассоциации I/D полиморфизма гена c-fms с ИБС и холестерином отсутствуют Каким образом реализуется влияние этого полиморфизма на уровень холестерина и развитие ИБС неизвестно

Отношение шансов обнаружить среди умерших от ИБС по данным проспективного наблюдения носителей делеционного аллеля в 3,1 раза выше, чем в группе без ИБС (р=0,030)

Полиморфизм -G308A гена фактора некроза опухоли TNF-a

Частоты генотипов -G308A полиморфизма гена фактора некроза опухоли TNF-a в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (G/G - 79 1, G/A - 19 0, А/А - 1 9 %, п=258)

Среди мужчин с наследственной отягощенностью по ИБС в целом отношение шансов обнаружить носителя аллеля -308А в 1,9 раза выше, чем в группе без отягощенного семейного анамнеза (р=0,03)

Отношение шансов у носителей аллеля -308А иметь избыточную массу тела в 2,1 раза выше, чем у носителей аллеля -308G (р=0,012) Носительство генотипа G/G наоборот является протективным в отношении избыточной массы тела, ОШ 0,5 (р=0,046) В 2005 году был опубликован мета-анализ связи -G308A полиморфизма гена фактора некроза опухоли TNF-a с фенотипами ассоциированными с метаболическим синдромом (Sookoian SC, 2005) Авторы получили повышенный риск развития ожирения у носителей аллеля -308А В настоящем исследовании достоверной разницы в артериальном давлении не получено, тогда как по данным мета-анализа есть ассоциация с АД и уровнем

инсулина плазмы Но на корейской выборке связи этого полиморфизма с ИМТ, холестерином не найдено (Um JY, 2004)

Отношение шансов у носителей аллеля -308А иметь индекс атерогенности >= 3,0 в 2 раза выше, чем у носителей аллеля -308G (р=0,017) А носительство генотипа G/G наоборот является протективным в отношении повышения индекса атерогенности, ОШ=0,5 (р=0,03) Кроме того, оказалось, что у носителей генотипа А/А достоверно чаще встречается гипоальфахолестеринемия, чем у носителей других генотипов (0111=11,3, р=0,033)

Таблица 21

Средние урошш некоторых показателен у поен гелей разных генотипов полиморфизма -

Генотипы N Среднее Станд отклон Ст ошибка среднего 95 % доверительный интервал

Вес G/G 204 72,921 12,8337 ,8985 71,149 74,692

G/A 49 74,663 13,4886 1,9269 70,789 78,538

А/А 5 87,020 11,1956 5,0068 73,119 100,921

ИМ Т G/G 204 25,21078 4,137142 ,289658 24,63966 25,78191

G/A 49 25,40204 3,749527 ,535647 24,32505 26,47903

А/А 5 30,44000 2,829841 1,265543 26,92629 33,95371

А/А 5 63,00 27,368 12,239 29,02 96,98

ХС G/G 204 204,84 44,429 3,111 198,71 210,98

G/A 49 214,06 43,456 6,208 201,58 226,54

А/А 5 272,40 121,467 54,322 121,58 423,22

АХС G/G 203 55,18 16,540 1,161 52,89 57,47

G/A 48 53,58 16,178 2,335 48,89 58,28

А/А 5 40,40 6,804 3,043 31,95 48,85

ИАТ ЕР G/G 203 3,0055 1,49409 ,10486 2,7988 3,2123

G/A 48 3,2951 1,43829 ,20760 2,8775 3,7127

А/А 5 6,1900 4,24048 1,89640 ,9247 11,4552

ХС ЛПН П G/G 202 126,7218 41,11368 2,89275 121,0178 132,4258

G/A 46 137,0348 39,99154 5,89643 125,1588 148,9108

А/А 5 200,3200 122,1277 54,61720 48,6783 351,9617

Достоверные различия при однофакторном дисперсионном анализе (Опе-Way ANOVA) получены для носителей разных генотипов по ОХС (р=0,004) и ХС ЛПНП (р=0,001) В связи с тем, что большинство изучаемых показателей не являются нормально распределенными, было проведено их сравнение с помощью теста Крускала-Уоллиса вес (р=0,037), ИМТ (р=0,018) АХС (р=0,047), ИНДАТЕР (р=0,021), а потом попарные с помощью теста Манна-Уитни (табл 22)

Снижение уровня АХС (ХС ЛПВП) у гомозигот А/А, по сравнению с гомозиготами G/G было обнаружено также австралийскими исследователями (Dalziel В, 2002)

У носителей редкого гомозиготного генотипа отношение шансов иметь определенную ИБС в 6 раз выше, чем у носителей двух других генотипов (р=0,05) Генотип G/G оказывается протективным по отношению к

определенной ИБС по данным одномоментного скрининга (0111=0,375, р=0,049), так же как и гетерозиготный генотип, 0111=0,15 (р=0,002)

Таблица 22

Значимость различий по ряду показателей меаду носителями разных генотипов

Сравниваемые генотипы Вес ИМТ АХС ИВДАТЕР ХСЛПНП

G/G А/А 0,017 0,005 0,016 0,025

G/G G/A+ А/А 0,026 0,041

А/А G/G+ G/A 0,017 0,005 0,019 0,027

У носителей редкого гомозиготного генотипа отношение шансов умереть от ИБС в В раз выше, чем у носителей двух других генотипов (р=0,05) Для носителей аллеля -308А отношение шансов 2,3 (р=0,043) Согласно исследованию выполненному в Швейцарии аллель -308А ассоциирован с повышенным уровнем С-реактивного белка, что, по мнению авторов, может быть фактором, ускоряющим развитие атеросклероза и ИБС (Jeanmonod Р, 2004) Но в Англии при сравнении частот генотипов и аллелей в группах с 1) ангиографически подтвержденной окклюзией одной коронарной артерии, 2) нескольких, 3) с нормальными коронарными артериями, 4) добровольцах без клинической ИБС - не нашли значимых отличий (Allen RA, 2001) В Бразилии нашли повышенный риск развития ИМ ассоциированный с ожирением, но он оказался еще более высоким у носителей аллеля -308А (Padovani JC, 2000) Они полагают, что взаимодействие -G308A полиморфизма гена TNF-a с основными факторами риска ИБС необходимо проверить на больших выборках

Полиморфизм -С260Т гена рецепторов моноцитов CD14

Частоты генотипов -С260Т полиморфизма геча CD 14 в популяции мужчин г Новосибирска находятся в равновесия Харди-Вайнберга (С/С -26 9 %, С/Т - 48 9 %, Т/Т - 24 2 %, п= 223)

При разделении исследуемой группы по уровню общего холестерина до 250 мг/дл и 250 мг/дл и более, частоты генотипов существенно отличаются (р=0,029) У носителей аллеля Т общий холестерин выше 250 мг/дл выявляется в 2 раза чаще, чем у носителей аллеля С (р=0,016) Для носителей генотипа С/С отношение шансов иметь ОХС>= 250 мг/дл в 5,8 раза меньше, чем у носителей двух других генотипов (р=0,007) В тесте Манна-Уитни у носителей гомозиготного генотипа С260С уровень общего холестерина статистически значимо меньше по сравнению с носителями двух других генотипов по (р = 0,044) По данным полученным на корейской популяции у носителей С/С генотипа выше уровень триглицеридов и индекс массы тела, по сравнению с носителями Т/Т генотипа (Shin HD, 2006) На нашей выборке статистически значимых различий между носителями разных генотипов по этим показателям не получено Хотя имеется тенденция к повышению ИМТу носителей генотипа С/С Но вот среди лиц с гипертриглицеридемией прослеживается тенденция к накоплению гомозигот Т/Т

Отношение шансов иметь сердечный приступ у брата в семейном анамнезе у носителей генотипа С260С в 3,4 раза выше, чем у носителей двух других генотипов (р=0,008) Носители гетерозиготного генотипа чаще, по сравнению с носителями других генотипов имеют артериальную гипертензию у детей (р=0,031) Носители гетерозиготного генотипа в 2 раза чаще курят (р=0,022) Сначала этот факт был отнесен к разряду случайных находок, но оказалось, что чешские исследователи в 2002 году находили ассоциацию полиморфизма С159Т гена CD 14 с курением (Hubacek J, 2002) А англичане доказали связь этого ОНП с атеросклерозом сонных артерий у курильщиков (Risley Р, 2003) Kondo Т и соазторы (2003) полагают, что полиморфизм промотора гена CD14 связан с ИМ при незначительном атеросклерозе коронарных артерий (Kondo Т, 2003) Вполне возможно, что это реализуется при наличии дополнительных факторов риска, например вышеупомянутое курение или инфекция Chlamydia pneumoniae, как полагают китайские исследователи (Eng HL, 2003) Оки показали ассоциацию полиморфизма -С260Т с инфекцией Chlamydia pneumoniae Японские авторы получили ассоциацию полиморфизма -С260Т с ИМ (Hohda S, 2003), подтвердив таким образом результаты более раннего исследования (Shimada К, 2000) Кроме того в работе опубликованной в 2003 году японцы показали, что связь этого ОНП с ИМ больше выражена у женщин и у пациентов с относительно низким индексом массы тела (Hohda S, 2003) Что еще раз указывает на значительные сложности в поиске ассоциаций ОНП с какими-либо признаками, будь то патологические или нормальные Крайне сложно учесть даже основные факторы, которые могут модифицировать влияние каждого конкретного ОНП на признак Согласно результатам исследования выполненного во Франции риск развития ИМ у носителей Т аллеля значительно выше при высоком уровне в плазме IL-6 (Morange РЕ, 2005)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вышеизложенное дает основания полагать, что стратегия профилактики ССЗ, базирующаяся на семейном анамнезе, как одном из критериев формирования групп повышенного риска будет эффективной, как в плане достижения конечного результата (поскольку является первичной профилактикой, которая намного эффективней вторичной), так и в экономическом смысле (поскольку затраты несравнимо ниже, чем при других стратегиях) Но в каждой отдельной семье, чтобы получить должный эффект от профилактики требуется определить ведущие факторы риска, из них выделить, поддающиеся коррекции, и воздействовать на них Только в этом случае можно рассчитывать на максимальный эффект при минимальных усилиях Повышение эффективности профилактики основанное на индивидуальном подходе может быть достигнуто в рамках стратегии генов-кандидатов Знание генных полиморфизмов ассоциированных с повышенным риском заболевания дает возможность рекомендовать их носителям меры профилактики задолго до появления первых симптомов заболевания и, таким образом, предотвратить его развитие, существенно отодвинуть срок его начала или, по крайней мере,

уменьшить тяжесть клинических проявлений Такой подход представляется еще более обоснованным, если исходить из представлений о синтропных болезнях и синтропных генах (Пузырев В П, 2004) Синтропия, то есть сочетание болезней у одного человека или полипатия, в основе, которой вероятно лежат одинаковые гены-кандидаты или синтропные гены и соответственно общие механизмы развития Дильман В П (1987) называл такие болезни - «нормальными» болезнями, болезнями гомеостаза или болезнями адаптации, считая их неизбежным следствием онтогенеза Позднее сформировались представления о сердечно-сосудистом континууме или непрерывном развитии сердечно-сосудистых заболевании от факторов риска до фатального исхода (Белснков Ю Н, 2002) Благодаря развитию биоинформатики углубляются и расширяются представления о компонентах и тонкостях работы различных генных сетей, в том числе генных сетей липидного обмена (Колчанов Н А , 2000) Наличие общих механизмов развития и общих генов (генных полиморфизмов), теоретически создает предпосылки к разработке программ ранней индивидуальной специфической профилактики болезней сердечно-сосудистого континуума, основанной на знании генных полиморфизмов у каждого человека Постепенное внедрение генетического паспорта может стать реальным шагом на этом пути Постепенное, потому что еще не до конца ясно, какие гены и их полиморфизмы включать в этот паспорт, поскольку риск развития заболевания ассоциированный с ними значимо отличается в разных популяциях Что диктует необходимость проведения исследований такого рода в каждой популяции

По мнению, руководителя программы "Геном человека" доктора Френсиса Коллинса термин "геномная медицина" у многих не специалистов, вызывает в воображении образы космической эры - микрочипы, биоинформатика, разработка лекарств и они думают, что такие высоко технологичные методы уже стали самыми важными инструментами здравоохранения Однако, как часто случается в медицине, новые знания не затмевают проверенный метод, вместо этого, они дают ему новое значение и возможности Большинство болезней - результат взаимодействий многих генов и факторов окружающей среды Хотя эти взаимодействия сложны, почти каждый пациент сегодня имеет доступ к свободному, хорошо доказанному, персонифицированному геномному инструменту, который захватывает многие из этих взаимодействий и может служить краеугольным камнем для индивидуализированной профилактики болезни Этот ценный инструмент -семейный анамнез Хотя успешное завершение международной исследовательской программы «Геном человека» добавило новые важные геномные методы в арсенал современной медицины, семейный анамнез остаётся очень важным методом помогающим предсказать риск развития целого ряда заболеваний, таких как ИБС, разные формы рака, остеопороз, бронхиальная астма, сахарный диабета 2-типа и многих других (ОиНтасЬег АЕ, 2004) И все же многие пациенты и врачи недооценивают значимости знания семейного анамнеза для целенаправленной заботы о своем здоровье Семейный анамнез долгое время расценивался как важный элемент для

пациентов имеющих повышенный риск развития моногенных заболеваний Знание того, что здоровый, спортивный мужчина средних лет имеет в семейном анамнезе ИБС, может вести к акценту на вмешательство, включая изменение диеты, образа жизни, раннее исследование метаболизма липидов и, при необходимости, агрессивному использованию статинов То же самое можно сказать об инсульте в семейном анамнезе Знание, что пациент имеет в семейном анамнезе диабет 2-го типа, может вести в профилактических мероприятиях к акценту на контроль веса и уровня глюкозы в крови

Когда-нибудь семейный анамнез станет пережитком медицинской практики. Но это вряд ли произойдет в ближайшие десятилетия Даже если полное секвенирование генома станет доступно каждому пациенту Много лет пройдет прежде, чем мы полностью поймем роль определенных генетических факторов и их взаимодействия с экологическими факторами в здоровье и болезни По крайней мере, до того времени, будет наиболее эффективно объединить данные генотипирования с семейным анамнезом, чтобы предложить более эффективные пути индивидуальной профилактики (Guttmacher АЕ и др , 2004)

На основании исследований, выполненных на неорганизованной мужской популяции Новосибирска, можно сделать вывод, что наследственная отягощенность по ССЗ является фактором риска развития АГ и ИБС и, благодаря значительной распространенности и простоте выявления, может использоваться как один из критериев для формирования групп повышенного риска с целью проведения первичной профилактики, прежде всего, в этих группах Начало может быть положено, например, путем анкетирования школьников Так Williams RR и соавторы (1988) в течение 1980-1986 годов составили 24332 родословных в Техасе и Утахе и считают, что это удобный и экономически эффективный инструмент для поиска семей высокого риска Несмотря на достижения современной генетики, в том числе расшифровку генома человека семейный анамнез остается важным фактором, который необходимо принимать во внимание при оценке индивидуального риска развития ИБС (Kardia SL и др, 2003) Семейный анамнез представляет собой некий итог взаимодействия уникальных геномных и экологических факторов Учитывая эту особенность мультифакториальных заболеваний, по мнению Kardia SL и соавторов (2003) семейный анамнез может быть лучшим индикатором индивидуального риска Они полагают, что выбор семьи, как объекта для вмешательства в профилактических программах дает особые преимущества, по сравнению со стратегиями, основанными на индивидуальном риске Значительные успехи достигнуты в последние 20 лет в первичной профилактике ССЗ, но еще больших достижений можно добиться, если сосредоточить на семье все усилия по профилактике А для этого нужно и врачам и населению напомнить важность знания собственной семейной истории Например, в США ввели День истории семьи, совпадающий с их национальным праздником Днем благодарения, а для облегчения сбора и анализа семейного анамнеза создали общедоступную компьютерную программу (www hhs gov/ramilyhistoryl И это несмотря на широкие

возможности применения последних достижений высоких технологий в

медицине в США

ВЫВОДЫ

1. Средний уровень общего холестерина выше у носителей генотипа DD гена АСЕ, чем у носителей двух других генотипов В группе с общим холестерином выше 200 мг/дл носители генотипа DD встречались в 1,6 раза чаще, чем в группе с ОХС< 200 мг/дл Носители генотипа DD гена АСЕ имели средний ИМТ выше, чем носители двух других генотипов Отношение шансов обнаружить у носителей генотипа DD избыточную массу тела (ИМТ>=25 0) в 2 раза выше, чем у носителей двух других генотипов Отношение шансов у гомозигот по I аплелю гена АСЕ по сравнению с носителями двух других генотипов заболеть ИБС в 2 5 раза меньше (по данным одномоментного исследования) Отношение шансов у носителей гетерозиготного генотипа гена АСЕ умереть от ИБС в возрасте 50-64 года (по данным проспективного наблюдения) по сравнению с носителями двух других генотипов составило 3,9 (95 % ДИ 1,3-12,3) У носителей генотипа DD гена АСЕ систолическое АД>=140 мм рт ст выявлялось в 1 5 раза чаще, чем у носителей двух других генотипов

2 Средний индекс массы тела выше у гомозигот G/G по сравнению с гомозиготами А/А гена Р-1 адренорецептора Отношение шансов у носителей генотипов G/G и A/G иметь гипоальфахолестеринемию (АХС<35 мг/дл) в 3 раза меньше, чем у гомозигот А/А гена р-1 адренорецептора

3 В группе с общим холестерином 250 мг/дл и более гомозигот по делеции гена ADRA2B в 3 раза меньше, чем в группе с общим холестерином до 250 мг/дл Среди гомозигот по делеции гена ADRA2B в 2,7 раза чаще встречается сердечный приступ у отца в семейном анамнезе, в 4,7 раза чаще сердечный приступ у брата и в 2,2 раза чаще инсульт в семейном анамнезе, чем у носителей двух других генотипов Отношение шансов у носителей аллеля D гена ADRA2B иметь ИБС (по данным одномоментного исследования) в 1 6 раза выше, чем у носителей аллеля I Носительство аллеля I в гомозиготном состоянии дает протективный эффект в отношении развития ИБС OR=0 4 (95 % ДИ 0 2-0 8) Генотип II гена ADRA2B обладает протективчым эффектом в отношении развития артериальной гипертензии OR=Û 6 (95 % ДИ 0 4-0 9) А генотип ID ассоциирован с повышенным риском развития АГ OR=I 6 (95 % ДИ 1.1-2 4) Ассоциация наблюдается с уровнем диастолического АД

4 У гетерозигот по полиморфизму А80807Т гена транскрипционного фактора SP4 инсульт в семейном анамнезе встречается в 2 1 раза чаще (95% ДИ 1,14,2) чем у носителей двух других генотипов

5 Сердечный приступ у матери в семейном анамнезе в 3 9 раза чаще выявлялся у носителей генотипа А2/А2 гена GPIIb/IIIa (95 % ДИ 1 3-12 0), чем у носителей двух других генотипов Гипоальфахолестеринемия в 3 9 раза чаще выявлялась у носителей генотипа А2/А2 гена GPIIb/IIIa (95 % ДИ 1 0-14 6), чем у носителей двух других генотипов Доля носителей генотипов А1/А1 и

А1/А2 гена GPIIb/IIIa в 2 раза выше среди лиц с систолическим АД больше 160 мм ртст (95 % ДИ 1 1-3 6), чем в группе с меньшим уровнем систолического АД

6 Уровень глюкозы у носителей аллеля е4 гена АРОЕ ниже, чем у носителей других аллелей (р=0 022) Аллель еЗ гена Апое Е является протективным в отношении развития гипо-альфа-холестеринемии OR 0 3 (95 % ДИ 0 1-0 9) Носители генотипа 2/3 гена АРОЕ в два раза реже имеют повышение диастолического АД>90 мм рт ст (OR 0 5, 95 % ДИ 0 2-0 9), чем носители других генотипов Носители аллеля е2 (OR 0 6, 95 % ДИ 0 3-0 9) и генотипа 2/3 (OR 0 4, 95 % ДИ 0 2-0 9) гена Апое Е реже имеют повышенный индекс атерогенности (ИАТЕР>=3) Тогда как носители аллеля е4 чаще имеют повышенный индекс атерогенности (OR 17, 95 % ДИ 1 1-2 8) Уровень пульсового артериального давления выше у носителей генотипа 4/4 гена АРОЕ, по сравнению с носителями генотипов 3/3 и 3/4 Отношение шансов у носителей генотипа 4/4 гена АРОЕ иметь артериальную гипертензию в 4,2 раза выше, чем у носителей других генотипов (95 % ДИ 13-14 0), что обусловлено более сильной ассоциацией генотипа 4/4 с систолическим АД Среди лиц с наследственной отягощеннсстыо в целом по ИБС носители аллеля е2 гена АРОЕ встречались достоверно реже, также как и носители генотипа 3/2, OR 0 5 (95 % ДИ 0 2-0 9) ИБС по данным проспективного наблюдения реже развивается у носителей аллеля е2 гена АРОЕ OR=0 15, р=0 028

7 В группе с наследственной отягощенностью по ИБС частота гомозигот Т/Т полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ существенно выше, OR=6,4 (95 % ДИ 1,3-32,7) Избыточную массу тела (ИМТ>25) носители генотипов А491/Т491 и Т491/Т491 имеют в 2 раза чаще, по сравнению с носителями генотипа А491/А491 (95 % ДИ 1 1-3 7) Средний уровень глюкозы крови у носителей разных генотипов полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ достоверно различается Отношение шансов у носителей генотипов А/Т и Т/Т полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ заболеть ИБС в 26 раза выше (95 % ДИ 1 1-6 0), чем у гомозигот А/А (по данным одномоментного исследования) ИБС и инфаркт миокарда по данным проспективного наблюдения у носителей генотипа Т/Т полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ развивается в 10 раз чаще, чем у носителей двух других генотипов Учитывая относительно небольшое количество конечных точек, эти данные нуждаются в проверке на большой выборке

8 Гомозиготы Е23Е по гену KIR6 2 в 3 2 раза реже имеют в семейном анамнезе смерть отца от сердечного приступа (95 % ДИ 1 0-9 7), чем носители других генотипов Отношение шансов обнаружить среди носителей гетерозиготного генотипа по гену KIR6 2 лиц с АГ у родителей в семейном анамнезе в 2 4 раза больше, чем у носителей двух других генотипов (95 % ДИ 1.1-5 4) Отношение шансов у носителей генотипа К23К по гену KIR6 2 иметь ОХС 250 мг/дл и выше в 3,5 раза больше (95 % ДИ 1 2-10 1), чем у носителей других генотипов Полиморфизм Е23К гена KIR6 2 ассоциирован с уровнем триглицеридов, систолического и пульсового АД

9 Полиморфизм С677Т гена МТНРИ. ассоциирован с систолическим, диастолическим и пульсовым АД Отношение шансов иметь диастолическое АД>90 мм рт ст в 3 7 раза выше у носителей генотипа Т/Т (95 % ДИ 1 4-9 8) Носители генотипа С677С в 1 9 раза чаще встречаются среди мужчин без ИМ у родителей (95 % ДИ 1.1-3 5) Гетерозиготный генотип С677Т гена МТНРЯ является протективным в отношении развития инфаркта миокарда - О¡1=0 4, 95% ДИ 0 2-0 9 (по данным проспективного наблюдения)

10 Среди мужчин с АГ (160/95) носители аллеля О гена ССЯ5 встречаются в 2 раза реже, чем в группе без АГ (95% ДИ 11-4 3) У носителей II генотипа выше уровень систолического и пульсового АД, глюкозы, чем у носителей генотипа ГО Однако у последних ниже уровень общего холестерина

П.Среди мужчин с семейным анамнезом отягощенным по ССЗ чаще встречаются носители редкого гомозиготного генотипа полиморфизма З'ЦГЯ (34293 и 34294 ТС-»СА) гена с-Стя АГ у отца (ОЯ=3 3), инсульт у отца (ОЯ=3 3), сахарный диабет в семейном анамнезе (ОГ1=2 7) Отношение шансов иметь избыточную массу тела (ИМТ >= 25) у носителей редкого гомозиготного генотипа в 2,5 раза выше, чем у носителей двух других генотипов Отношение шансов иметь повышение глюкозы у носителей редкого гомозиготного генотипа в 3,6 раза выше, чем у носителей двух других генотипов Полиморфизм З'ШИ (34293 и 34294 ТС—>СА) гена с-Апэ ассоциирован с уровнем ХС ЛПВП, ХС ЛПНП, триглицеридов, глюкозы, индексом атерогенности, индексом массы тела У мужчин, перенесших инсульт по данным проспективного наблюдения, повышена частота редкого гомозиготного генотипа (011=5 1, 95 % ДИ 15-17 3), по сравнению с лицами без инсультов

12 И) полиморфизм гена с-Апэ ассоциирован с уровнем общего холестерина У носителей гетерозиготного генотипа общий холестерин выше 250 мг/дл встречается в 2 7 раза чаще, по сравнению с носителями двух других генотипов (95 % ДИ 1 2-5 8) Отношение шансов умереть от ИБС по данным проспективного наблюдения у носителей делеционного аллеля в 3 раза выше, чем у носителей генотипа II

13 Среди мужчин с наследственной отягощенностью по ИБС в целом отношение шансов обнаружить носителя аллеля -308А гена ЮТ-а в 1,8 раза выше, чем в группе без отягощенного семейного анамнеза (95 % ДИ 1 1-3 3) Отношение шансов у носителей аллеля -308А иметь избыточную массу тела и повышение индекса атерогенности в 2 раза выше, чем у носителей генотипа вАЗ Полиморфизм -0308А гена ТОТ-а ассоциирован с индексом массы тела, индексом атерогенности, ХС ЛПВП, ХС ЛПНП У носителей редкого гомозиготного генотипа отношение шансов иметь как определенную ИБС (по эпидемиологическим критериям), так и фатальную ИБС (по данным проспективного наблюдения) в 6 раз выше, чем у носителей двух других генотипов

14 У носителей гомозиготного генотипа С260С по полиморфизму -С260Т гена СО 14 уровень общего холестерина ниже по сравнению с носителями двух других генотипов Носители гетерозиготного генотипа в 2 2 раза чаще курят

(95 % ДИ 11-4 3)

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В открытой мужской городской сибирской популяции по данным одномоментного исследования выявлены наиболее информативные показатели семейного анамнеза, свидетельствующие о наличии у консультирующегося предрасположенности к ССЗ, а соответственно и необходимости проведения профилактических мероприятий. То сеть среди лиц с определенным по данным семейного анамнеза повышенным риском развития ССЗ представляется целесообразным проведение клинического обследования для выявления ведущих факторов риска, с последующей разработкой (с учетом данных обследования) индивидуальных ранних первичных профилактических мероприятий и динамическим наблюдением с целью своевременного выявления ССЗ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Лисиченко О В , Гусева И А , Максимов В Н и др Некоторые генетические аспекты атерогенеза //В кн Диагностика, лечение и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний - Новосибирск, 1996 - С 103-104

2 Максимов В Н, Воевода М И, Лисиченко О В, Малютина С К Сравнение распространённости наследственной отягощённости по сердечно-сосудистым заболеваниям как фактора риска ИБС в открытой мужской популяции г Новосибирска //Сб тез докл седьмой научно-практической конференции врачей «Актуальные вопросы современной медицины» - Новосибирск, 1997 - Т 2 - С 103-104

3 Максимов В Н, Воевода М И, Лисиченко О В , Малютина С К Связь наследственной отягощённости и других факторов риска с ИБС в открытой мужской популяции г Новосибирска //Медико-генетическое консультирование в профилактике наследственных болезнен Тез докл науч -практ конф - Москва, 1997 - С 164

4 Лисиченко О В , Склянова Н А , Максимов В Н и др Генетические аспекты комплексной профилактики неинфекционных заболеваний //Актуальные проблемы профилактики неинфекционных заболеваний Всероссийская конференция Москва 1999 С 126

5 Максимов В Н, Воевода М М , Лисиченко О В , Малютина С К Уровень факторов риска ИБС у пробандов в зависимости от семейного анамнеза //Актуальные проблемы профилактики неинфекционных заболеваний Всероссийская конференция Москва 1999 С 17

6 Максимов В Н, Воевода М М, Лисиченко О В, Малютина С К Распространенность наследственной отягощённости по ИБС в открытой популяции и ее связь с ИБС //Актуальные проблемы профилактики неинфекционных заболеваний Всероссийская конференция Москва 1999 С 18

7 Долгих М М, Кузнецова Т Н, Максимов В Н и др Полиморфизм некоторых генов, ассоциированных с распространенными завоеваниями, у пожилых и долгожителей города Новосибирска //В сб «Первый съезд геронтологов и гериатров Сибири и Дальнего Востока, 2000, С 34-36

8 Никитин Ю П, Воевода М И , Максимов В Н и др Распространенность наследственной отягощённости по ишемической болезни сердца в неорганизованной популяции Новосибирска и ее связь с этим заболеванием Кардиология, 2001,41(4) С 20-22

9 Шабалин АВ, Воевода МИ, Максимов ОН п Др Полиморфизм некоторых генов у пожилых и долгожителей города Новосибирска //Клиническая геронтология, № 8, Т 7,

2001 С 82

10 Шабалин А В , Воевода М И , Максимов В Н ч др Полиморфизм ряда генов у пожилых и долгожителей города Новосибирска //Сибирская кардиология, VI научно-практическая конференция, Красноярск 2001 С 184-185

11 Куликов ИВ, Максимов ВН, Устинов СИ Изучение связи внезапной смерти с полиморфизмом генов наследственной предрасположенности к сердечно-сосудистым заболеваниям //Сибирский конкурс молодых ученых «Терапия и фундаментальные науки - перспективы содружества в новом тысячелетии» (сборник докладов) Новосибирск, 2001, С 82-89

12 Шабалин АВ, Долгих ММ, Максимов ВН, и др Полиморфизм некоторых генов, ассоциированных с распространенными заболеваниями у долгожителей города Новосибирска Тезисы докладов 1-го Международного рабочего совещания «Биоразнообразие и динамика экосистем Северной Евразии информационные технологии и моделирование», 2001, Новосибирск, ИЦиГ, С 111

13 Воевода М И, Шахтшнейдер Е В , Максимов ВН и др Некоторые молекулярно-генетические аспекты атерогекеза в этнических группах Сибири //Труды юбилейной научной сессии НИИ терапии СО РАМН «Актуальные проблемы заболеваний терапевтического профиля в Сибири» -Новосибирск-2001 -С45-50

14 Воевода МИ, Устинов СН, Максимов ВН, и др Связь полиморфизма гепа хемокинового рецептора ССИ2 с инфарктом миокарда //Доклады академии наук, 2002 том 385, №2, С 279-282

15 Шабалин АВ, Воевода МИ, Максимов В Н и др Полиморфизм некоторых га'ов у долгожителей города Новосибирска //Тезисы докл Сибирской научно-практ конференции «Проблемы кардиологии пожилого и стгрческого возраста» - Барнаул -2002-С 138-139

16 Шабалин АВ, Воевода МИ, Максимов ВН и др Окислительная резистентность липопротеидов низкой плотности, концентрация жирорастворимых антиоксидантов у людей старческого возраста и долгожителей г Новосибирска //Тезисы Сибирской научно-практ конференции «Проблемы кардиологии пожилого и старческого возраста» Барнаул,

2002 -С 140-141

17 Шабалин А В , Воевода М И, Максимов В Н и др Полиморфизм генов ангиотензин-превращающего фермента, апочипопротеина Е, и метилен-тетра-гидрофолатредуктазы у долгожителей Новосибирска //Сборник тезисов докладов Сиб науч -практ конференции «Наследственные болезни и патология «еловека» Новосибирск 2003 С 118-123

18 Шабалин АВ, Максимов ВН, Долгих М М, и др Погиморфизм гена ангиотензин-преврахцающего фермента и гена аполипопротеина Е у долгожителей города Новосибирска //Успехи геронтологии -2003 - Вып 12 - С 77-81

19 Болотнова Т В , Логинова Н В, Рупчева И Н , Шабалин А В , Воевода М И , Махсимов Е Н Генетические детерминанты ИБС у долгожителе« Тюмени //И съезд геронтологов и гериатров России - тез докл - Клиническая геронтология -М -2003 -С 5

20 Шахтшнейдер Е В , Юдин Н С, Максимов В Н и др К вопросу об этнических характеристиках ядерного и митохондриального генофонда шорцев //В кн «Генофонд населения Сибири Сборник ьаучных статей» Отв ред В И Коненков, В П Пузырев, М И Воевода, Новосибирск, Изд-во Института археологии и этнографии СО РАН, 2003, С 174-176

21 Кузнецова Т Н, Ромащенко А Г, Максимоч В Н, и др Полиморфизмы экспрессирующихся в макрофагах генов с-Лпя и ССК5 частотные распределения аллелей и генотипов в некоторых этнических гр>ппах Северной Аз1'И //Там же, С 48-53

22 Максимов В Н, Юдин Н С, Куликов ИВ, и др Инсерционно-дслеционный полиморфизм гена АПФ в различных этнических группах Центральной, СевероВосточной Азии и Западной Сибири //Там же, С 80-81

23 Мншакова Т М , Юдин Н С , Максимов В Н , и др Полиморфизм генов дафаминОвого рецептора D4 (DRD4) и дофамин-переносящего Селка (DAT) в популяциях коренных жителей Северной Азии //Там же, С 91-95

24 Шабалин А В, Максимов В Н, Долгих ММ, и др Особенности полиморфизма гена ангиотснзин-превращающего фермента и гена аполипопротеина Е у долгожителей города Новосибирска //II съезд геронтологов и гериатров России, тез докл Клиническая геронтология - М - 2003 - С 23

25 Малютина С К, Воевода М И, Максимов В Н , и др Содержание алкоголя в крови и полиморфизм некоторых генов при неожиданной смерти сердечного генеза //Тезисы докладов 4-ой международной конференции по проблемам внезапной смерти - Санкт-Петербург -2003 -С 17-18

26 Воевода М И , Максимов В Н , Шахтшнейдер ЕВ и др Полиморфизм ангиотензин-превращающего фермента, аполипопротеина Е и метилентетрагидрофолатредугтазы в городской популяции Западной Сибири //Материалы кочф «Сосременные проблемы сердечно-сосудистой патологии на Крайнем Севере» - г Якутск - 2004 - С 46-48

27 Юдин Н С , Губина Л А , Максимов В Н , и др Молекул чрно-генетическое исследование финно-угров Западной Сибири //В кн «Медико-экологические основы формирования, лечения и профилактики заболеваний у коренною населения Ханты-Мансийского автономного округа», под ред В И Хаснулина, Новосибирск, Изд-во СО РАМН, 2004 г, С 118-139

28 Сметанникова М А, Белявская В А, Максимов В Н п др Функциональный полиморфизм генов р53 и CCR5 у долгожителей сибирского региона /Вестник РАМН № 11 2004 С 25-28

29 Максимов В Н , Воевода М И , Ромащенко А Г и др Полиморфизм генов-кандидатов и врожденные пороки сердца //Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков Медицинская генетика № 5,2005 С 222-223

30 Никитин Ю П , Воевода М И, Максимов В Н и др Связь семейного анамнеза и ишемической болезни сердца в популяции города Новосибирска (программа ВОЗ MONICA) /Кардиоваскулярная терапия и профилактика №4,2005 С 37-41

31 Никитин Ю П , ВоеЕода М И , Максимов В Н и др Артериальная гипертензия и ее связь с наследственной отяголенностью в мужской популяции Новосибирска (программа ВОЗ MONICA) //Кардиология -2005 -№ 8 - С 44-45

32 Шабалин А В , Воевода М И Пентегова В А , Максимов В Н Полиморфизм гена аполипопротеина Е у долгожителей и лиц старческого возраста г Новосибирска //Тез докладов городской конф врачей «Актуальные проблемы современной геронточогии и гериатрии» - Новосибирск -2005 -С 63-64

33 Воевода М И, Кузнецов А А, Максимов В Н , и др Ассоциация Бругада-типа и индексов желудочковой реполяризации на электрокардиограмме с полиморфизмом ряда генов //Анналы аритмологии Материалы 1-го Всероссийского съезда аритмологев - Москва, 2005 № 2 - С 24

34 Куликов И В , Максимов В Н, Устинов СИ и др Внезапная сердечная смерть и полиморфизм генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний у мужчин //Сборълк тезисов докладов 1-го Съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока - Новосибирск, 2005 - С - 399-402

35 Воевода М И, Максимов В Н, Шахтшнейдер ЕВ и др Полиморфизм гена аполипопротеина Е в мужской популяции Новосибирска и его ассоциация с инфарктом миокарда, инсультом н внезапной сердечной смертью //Сборник тезисов докладов 1-го Съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока - Новосибирск, 2005 - С - 126-128

36 Воевода М И, Максимов В Н, Шахтшнейдер ЕВ и др Полиморфизм генов ангиотензнн-превращающего фермента, аполипопротеина Е и дофаминового рецептора у больных с постинсультным когнитивным дефицитом //Сборник тезисов докладов 1-го Съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока - Новосибирск, 2005 - С - 128-130

37. Белявская В А, Сметанникова Н А, Максимов В Н и др Поиск генов «прочности» и «бренности» роль полиморфизма некоторых ключевых генов иммунологического гомеостаза в развитии патологий, сокращающих продолжительность жизни //Молекулярная медицина ,2005, № 3, С 55-61

38 Шахтшнейдер Е В , Куликов И В , Максимов В Н и др Полиморфизм промотора гена аполипопротеина Е в популяции г Новосибирска //Сборник тезисов докладов 1-го Съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока — Новосибирск, 2005 — С - 795-797

39 Maksimov V N , Voevoda М I, Malyutma S К , Nikitin Yu P Family history of hypertension is a strong predictor of hypertension morbidity (based on WHO MONICA Project in Novosibirsk) /Тез докл конф «АГ от Короткова до наших дней» - С-Петербург -2005 -С 27

40 Воевода М И , Ромащенко А Г, Максимов В Н. и др Перспективы и проблемы генетики распространенных заболеваний //Всероссийская конференция «Фундаментальные науки - медицине», Новосибирск, 2005 С 63

41 Рябиков А Н, Малютича С К, Максимов В Н идр Исследование «новых» биомаркеров атеросклеротических изменений сосудистой стенки факторы воспаления, гомоцистеин, генетические детерминанты //Тез док Российского национального конгресса кардиологов ^Перспективы Российской кардиологии» - Москва -2005 -С 280-281

42 Воевода М И, Шахтшнейдер Е В, Максимов В Н и др Ассоциация полиморфизма гена аполипопротеина Е с липиднымн показателями и атеросклерозом //В книге «Вопросы атерогенеза» - Новосибирск, Ротапринт СНИИГГиМСа, 2005 - С 35-88

43 Максимов ВН, Нефедова MB, Полякова ИВ и др Полиморфизм гена RFCI и врождённые пороки сердца //Сборник тезисов докладов 1-го Съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока- Новосибирск,2005 -С -436-438

44 Максимов В Н, Нефедова М В, Полякова ИВ и др Гены предрасположенности к развитию врожденных пороков сердца //Материалы Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториалыюй патологии» В 2-х томах Том 1 - Курск КГМУ, 2006 - С 49-53

45 Максимов ВН, Куликов ИВ, Малютина С К и др Полиморфизм А1/А2 гена гликопротеина ИВАНА в популяции Новосибирска //Материалы Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» В 2-х томах Том 1 - Курск КГМУ, 2006 -С 45-49

46 Воевода М И, Юдин Н С , Максимов В Н и др Выявление генов предрасположенности к распространенным сердечно-сосудистым заболеваниям принципы, достижения и перспективы /Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике / Под ред А Б Масленникова -Вып 9 - Новосибирск Альфа Виста, 2006 С 16-23

47 Gngoneva IN, Nikitenko Т М, Maksimov V N at al Gallstone disease and lipid metabolism //The 13th international congress on Circumpolar health, Novosibirsk, 2006 A 130 P 109-110

48 Voevoda MI, Romaschenko A G, Maksimov V N at al Ethnic peculiarities of human pathology in Siberia Genetic background of predisposition to common diseases //The 13th international congress on Circumpolar health, Novosibirsk, 2006 A 332 P 273-274

49 Voevoda M I, Shakhchneider E V, Maksimov V N at a! Apolipoprolein polymorphism in West Siberia Caucasian population and its association with plasma lipid levels //XIV International Symposium on Atherosclerosis, Rome, Italy, 2006 Th-P 1 147 P 78

50 Generozov E V , Pogoda T V , Maksimov V N at a! High-throughput maldi-tof analysis of genomic seguence polymorphisms Large-scale genetic study in Novosibirsk region //3 rd International Conference «Genomics, Protcomics, Bioinformatics and Nanotechnologies for Medicine», Novosibirsk - 2006 -P 29

51 Воевода МИ, Максимов ВН, Куликов ИВ и др Внезапная сердечная смерть и полиморфизм генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний //СМЭ Новосибирск , 2006 -С 23-27

52 Воевода М И , Степанов В А , Ромащенко А Г , Максимов В Н Этногенетические особенности подверженности атеросклерозу в этнических группах Сибири (на примере гена аполипопротеина Е) //Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, 2006, № 2 (120), С 63-72

53 Коненков В И , Ракова И Г, Максимов В Н, Воевода М И Аллельный полиморфизм генов про- и противовоспалительных цитокинов при инфаркте миокарда в европеоидной популяции мужчин //Бюллетень Сибирского отделенит Российской академии медицинских наук, 2006, № 2 (120), С 56-62

54 Шабалин Л В, Воевода М И, Максимов В Н и др Долгожительство - модель изучения процесса старения //Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, 2006, № 4, С 11-21

55 Воевода М И , Максимов В Н , Малютина С К Семейный анамнез и его свчзь с сердечнососудистыми заболеваниями в мужской популяции Новосибирска //Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, 2006, № 4, С 56-63

Актуальность проблемы

ССЗ по-прежнему остаются одной из основных причин инвалидности и смертности среди наиболее трудоспособной части населения [1. 7. 10. 30. ]. В г. Новосибирске распространённость ССЗ особенно высока [19. 211. ]. В связи с этим, остро стоит проблема профилактики ССЗ, как на популяционном, так и на индивидуальном уровнях [20. 22. ]. Без простых и доступных критериев формирования групп повышенного риска, стоимость её оказывается значительной [91. ]. Использование семейного анамнеза как одного из основных критериев для формирования групп повышенного риска при построении стратегии первичной профилактики позволило бы сделать её экономически более эффективной [34. 326. ]. Однако прогностическая значимость семейного анамнеза для заболеваемости ССЗ в разных исследованиях оценивается неоднозначно [62. 230. 241. 251. 295. ]. Для расчёта индивидуального прогноза и создания, основанных на нём рекомендаций необходимо учитывать особенности конкретной популяции. А это невозможно без опоры на генно-кандидатный подход. Однако в случае заболеваний, относящихся к категории мультифакториальных, знание продукта гена, влияния полиморфизма этого гена на функциональные свойства белка даёт сугубо теоретическое представление о возможных последствиях носительства отдельных генотипов. Многое определяется, как ближайшим окружением гена, так и свойствами функциональной системы, в которой он работает. Что в свою очередь, в значительной мере зависит от популяции (её генофонда) и условий жизни данной популяции. Генотип «полезный» в одном генном окружении, может быть «вреден» - в другом. То же самое касается и внешних условий: генотип, «хороший» в одних условиях, может быть «плох» - в других. Часто аналогично изменяется функциональное значение генотипов в течение жизни индивидуума. Следовательно, для каждой популяции будет «свой» набор генов-кандидатов по заболеваниям, в том числе и сердечно-сосудистым. Проспективные исследования, при всей их дороговизне и трудоёмкости дают наиболее объективную информацию, которая отвечает всем требованиям доказательной медицины. Поэтому проверка прогностического значения полиморфизма целого ряда генов-кандидатов, наследственной отягощенности и других факторов риска для заболеваемости и смертности от ССЗ в открытой сибирской городской популяции на основе проспективного исследования является актуальной.

Цель исследования

Изучение прогностического значения и ассоциаций полиморфизма генов-кандидатов, наследственной отягощенности с эндогенными показателями, факторами риска и ССЗ в открытой сибирской городской популяции на основе одномоментного и проспективного исследований.

Задачи исследования

1. Изучить частоты генотипов и аллелей генов-кандидатов ССЗ в открытой сибирской городской популяции в возрастном интервале 25-64 года.

2. Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний с наследственной отягощенностью по ССЗ.

3. Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов сердечно-сосудистых заболеваний с эндогенными показателями и факторами риска ССЗ.

4. Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов ССЗ с ИБС и АГ (по эпидемиологическим критериям) по данным одномоментного исследования.

5. Изучить полиморфизм генов-кандидатов, у лиц перенёсших инфаркт миокарда или инсульт, а также ИБС или ЦВБ на протяжении 10-летноего периода наблюдения.

6. Оценить риск развития ИБС, инфаркта миокарда, ЦВБ и инсульта на протяжении 10-летноего периода наблюдения, у носителей отдельных генотипов генов-кандидатов.

Научная новизна

1. Впервые у мужчин европеоидной популяции Западной Сибири выполнено исследование ассоциации ряда полиморфизмов генов-кандидатов ССЗ с факторами риска ССЗ, с ИБС, артериальной гипертензией, инсультом.

2. Впервые у мужчин европеоидной популяции России исследование вышеперечисленных ассоциаций проводилось, как на материале одномоментного скрининга выборки, сформированной согласно международным критериям, принятым для эпидемиологических исследований, так и на материале, полученном в ходе проспективного наблюдения за этой выборкой.

3. Впервые в мире показана ассоциация полиморфизмов генов ADRA2B (I/O), АРОЕ (-А491Т), SP4 (А80807Т), KIR6.2 (Е23К), c-fms (ТС-*СА) с наследственной отягощенностью по ССЗ.

4. Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что уровень общего холестерина значимо отличается у носителей разных генотипов по полиморфизмам генов: АСЕ, CCR5, TNF-a, CD14.

5. Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что индекс массы тела достоверно различается у носителей разных генотипов по полиморфизмам генов АСЕ, ADRB1, TNF-a.

6. Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что уровень артериального давления достоверно различается у носителей разных генотипов по полиморфизмам генов ADRA2B, KIR6.2, MTHFR, CCR5.

7. Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что с ИБС (по эпидемиологическим критериям) по данным одномоментного исследования ассоциированы - АСЕ (I/D), ADRA2B (I/D), Аро Е (-А491Т), TNF-a (-G308A). С артериальной гипертензией ассоциированы: ADRA2B (I/D), KIR6.2 (Е23К), MTHFR (С677Т), CCR5 (I/D).

8. Впервые у мужчин европеоидной популяции России показано, что с инфарктом миокарда (по данным проспективного наблюдения) ассоциирован полиморфизм С677Т гена MTHFR. Тогда как с ИБС при проспективном наблюдении ассоциированы: АСЕ (I/D), Аро Е (е2/еЗ/е4), TNF-a (-G308A).

9. Впервые в мире по данным проспективного наблюдения показано, что с инфарктом миокарда и ИБС ассоциирован полиморфизм -А491Т гена Аро Е.

10. Впервые в мире показано, что полиморфизм гена с-fms (ТС—»СА) ассоциирован: 1) с уровнем общего холестерина, 2) с артериальной гипертензией, по данным одномоментного исследования, 3) с инсультом и инфарктом миокарда, по данным проспективного наблюдения.

И.Впервые в мире показано, что I/D полиморфизм гена c-fms ассоциирован: 1) с уровнем общего холестерина, 2) с ИБС, по данным проспективного наблюдения.

Практическая ценность работы

По результатам эпидемиологического исследования выявлены наиболее прогностически значимые показатели семейного анамнеза, свидетельствующие о наличии предрасположенности к ССЗ, которые могут служить основой для формирования групп повышенного риска этого заболевания в деятельности практических врачей. Для лиц с определенным по данным семейного анамнеза повышенным риском развития ИБС представляется целесообразным проведение ранних профилактических мероприятий, индивидуализированных с учетом профиля корригируемых факторов риска, а в дальнейшем, возможно, и с учётом данных генотипирования по ряду ОНП генов-кандидатов. Выявленные ассоциации ОНП генов-кандидатов с эндогенными показателями, факторами риска и семейным анамнезом подчёркивают необходимость объединить данные генотипирования с семейным анамнезом и использовать семью как объект для вмешательства в профилактических программах.

Данные настоящего исследования используются при медико-генетическом консультировании в медико-генетическом отделе ГНОКДЦ и в преподавании на кафедре медицинской генетики НГМУ. Положения, выносимые на защиту

1. Частоты генотипов и аллелей изученных генов-кандидатов ССЗ в открытой сибирской городской популяции в возрастном интервале 2564 года значимо не отличаются от частот в других европеоидных популяциях.

2. С наследственной отягощенностью по ССЗ ассоциированы - АСЕ (I/D), Р-1 (A145G), cc2B-adr (I/D), Sp4 (А80807Т), Gp Ilia (A1/A2), Apo E (-A491T), Apo E (e2/e3/e4), TNF-cc (-G308A), KIR6.2 (E23K), MTHFR (C677T), CCR5 (I/D), c-fms (TC->CA).

3. Полиморфизмы генов-кандидатов ССЗ ассоциированы с эндогенными показателями, такими как артериальное давление, индекс массы тела, общий холестерин, холестерин ЛПВП, глюкоза, а также с факторами риска ССЗ - избыточная масса тела, ожирение, дислипопротеидемия.

4. По данным одномоментного исследования с АГ в мужской популяции ассоциированы - cc2b-(I/D), KIR6.2 (Е23К), Apo Е (е2/еЗ/е4), MTHFR (С677Т), CCR5 (I/D), c-fms (ТС->СА).

5. По данным одномоментного исследования с ИБС в мужской популяции ассоциированы - АСЕ (I/D), a2B-adr (I/D), Аро Е (-А491Т), TNF-a (-G308A), а при проспективном наблюдении - АСЕ (I/D), Аро Е (е2/еЗ/е4), Аро Е (-А491Т), TNF-a (-G308A), c-fms (I/D).

6. При проспективном наблюдении с инфарктом миокарда ассоциированы - Аро Е (-А491Т), MTHFR (С677Т), c-fms (ТС-»СА), с инсультом - c-fms (ТС—>СА).

ВЫВОДЫ

1. Средний уровень общего холестерина выше у носителей генотипа DD гена АСЕ, чем у носителей двух других генотипов. В группе с общим холестерином выше 200 мг/дл носители генотипа DD встречались в 1,6 раза чаще, чем в группе с ОХС< 200 мг/дл. Носители генотипа DD гена АСЕ имели средний ИМТ выше, чем носители двух других генотипов. Отношение шансов обнаружить у носителей генотипа DD избыточную массу тела (ИМТ>=25.0) в 2 раза выше, чем у носителей двух других генотипов. Отношение шансов у гомозигот по I аллелю гена АСЕ по сравнению с носителями двух других генотипов заболеть ИБС в 2.5 раза меньше (по данным одномоментного исследования). Отношение шансов у носителей гетерозиготного генотипа гена АСЕ умереть от ИБС в возрасте 50-64 года (по данным проспективного наблюдения) по сравнению с носителями двух других генотипов составило 3,9 (95 % ДИ 1,3-12,3). У носителей генотипа DD гена АСЕ систолическое АД>=140 мм рт. ст. выявлялось в 1.5 раза чаще, чем у носителей двух других генотипов.

2. Средний индекс массы тела выше у гомозигот G/G по сравнению с гомозиготами А/А гена (3-1 адренорецептора. Отношение шансов у носителей генотипов G/G и A/G иметь гипоальфахолестеринемию (АХС<35 мг/дл) в 3 раза меньше, чем у гомозигот А/А гена (3-1 адренорецептора.

3. В группе с общим холестерином 250 мг/дл и более гомозигот по делеции гена а2в-а<1г в 3 раза меньше, чем в группе с общим холестерином до 250 мг/дл. Среди гомозигот по делеции гена а2в-а<1г в 2,7 раза чаще встречается сердечный приступ у отца в семейном анамнезе, в 4,7 раза чаще сердечный приступ у брата и в 2,2 раза чаще инсульт в семейном анамнезе, чем у носителей двух других генотипов. Отношение шансов у носителей аллеля D гена а2в-ас!г иметь ИБС (по данным одномоментного исследования) в 1.6 раза выше, чем у носителей аллеля I. Носительство аллеля I в гомозиготном состоянии даёт протективный эффект в отношении развития ИБС OR=0.4 (95 % ДИ 0.2-0.8). Генотип II гена а2в-а<1г обладает протективным эффектом в отношении развития артериальной гипертензии OR=0.6 (95 % ДИ 0.40.9). А генотип ID ассоциирован с повышенным риском развития АГ OR=1.6 (95 % ДИ 1.1-2.4). Ассоциация наблюдается с уровнем диастолического АД.

4. У гетерозигот по полиморфизму А80807Т гена транскрипционного фактора Sp4 инсульт в семейном анамнезе встречается в 2.1 раза чаще (95% ДИ 1,1-4,2) чем у носителей двух других генотипов.

5. Сердечный приступ у матери в семейном анамнезе в 3.9 раза чаще выявлялся у носителей генотипа А2/А2 гена GPIIb/IIIa (95 % ДИ 1.312.0), чем у носителей двух других генотипов. Гипоальфахолестеринемия в 3.9 раза чаще выявлялась у носителей генотипа А2/А2 гена GPIIb/IIIa (95 % ДИ 1.0-14.6), чем у носителей двух других генотипов. Доля носителей генотипов А1/А1 и А1/А2 гена GPIIb/IIIa в 2 раза выше среди лиц с систолическим АД больше 160 мм рт.ст. (95 % ДИ 1.1-3.6), чем в группе с меньшим уровнем систолического АД.

6. Уровень глюкозы у носителей аллеля е4 гена АРОЕ ниже, чем у носителей других аллелей (р=0.022). Аллель еЗ гена Апое Е является протективным в отношении развития гипо-альфа-холестеринемии OR 0.3 (95 % ДИ 0.1-0.9). Носители генотипа 2/3 гена АРОЕ в два раза реже имеют повышение диастолического АД>90 мм рт ст (OR 0.5, 95 % ДИ 0.2-0.9), чем носители других генотипов. Носители аллеля е2 (OR 0.6, 95 ДИ 0.3-0.9) и генотипа 2/3 (OR 0.4, 95 % ДИ 0.2-0.9) гена Апое Е реже имеют повышенный индекс атерогенности (ИАТЕР>=3). Тогда как носители аллеля е4 чаще имеют повышенный индекс атерогенности (OR 1.7, 95 % ДИ 1.1-2.8). Уровень пульсового артериального давления выше у носителей генотипа 4/4 гена АРОЕ, по сравнению с носителями генотипов 3/3 и 3/4. Отношение шансов у носителей генотипа 4/4 гена АРОЕ иметь артериальную гипертензию в 4,2 раза выше, чем у носителей других генотипов (95 % ДИ 1.3-14.0), что обусловлено более сильной ассоциацией генотипа 4/4 с систолическим АД. Среди лиц с наследственной отягощённостью в целом по ИБС носители аллеля е2 гена АРОЕ встречались достоверно реже, также как и носители генотипа 3/2, OR 0.5 (95 % ДИ 0.2-0.9). ИБС по данным проспективного наблюдения реже развивается у носителей аллеля е2 гена АРОЕ OR=0.15, р=0.028.

7. В группе с наследственной отягощённостью по ИБС частота гомозигот Т/Т полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ существенно выше, OR=6,4 (95 % ДИ 1,3-32,7). Избыточную массу тела (ИМТ>25) носители генотипов А491/Т491 и Т491/Т491 имеют в 2 раза чаще, по сравнению с носителями генотипа А491/А491 (95 % ДИ 1.1-3.7). Средний уровень глюкозы крови у носителей разных генотипов полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ достоверно различается. Отношение шансов у носителей генотипов А/Т и Т/Т полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ заболеть ИБС в 2.6 раза выше (95 % ДИ 1.1-6.0), чем у гомозигот А/А (по данным одномоментного исследования). ИБС и инфаркт миокарда по данным проспективного наблюдения у носителей генотипа Т/Т полиморфизма -А491Т промотора гена АРОЕ развивается в 10 раз чаще, чем у носителей двух других генотипов. Учитывая относительно небольшое количество конечных точек, эти данные нуждаются в проверке на большой выборке.

8. Гомозиготы Е23Е по гену KIR6.2 в 3.2 раза реже имеют в семейном анамнезе смерть отца от сердечного приступа (95 % ДИ 1.0-9.7), чем носители других генотипов. Отношение шансов обнаружить среди носителей гетерозиготного генотипа по гену KIR6.2 лиц с АГ у родителей в семейном анамнезе в 2.4 раза больше, чем у носителей двух других генотипов (95 % ДИ 1.1-5.4). Отношение шансов у носителей генотипа К23К по гену KIR6.2 иметь ОХС 250 мг/дл и выше в 3,5 раза больше (95 % ДИ 1.2-10.1), чем у носителей других генотипов. Полиморфизм Е23К гена KIR6.2 ассоциирован с уровнем триглицеридов, систолического и пульсового АД.

9. Полиморфизм С677Т гена MTHFR ассоциирован с систолическим, диастолическим и пульсовым АД. Отношение шансов иметь диастолическое АД>90 мм рт ст. в 3.7 раза выше у носителей генотипа Т/Т (95 % ДИ 1.4-9.8). Носители генотипа С677С в 1.9 раза чаще встречаются среди мужчин без ИМ у родителей (95 % ДИ 1.1-3.5). Гетерозиготный генотип С677Т гена MTHFR является протективным в отношении развития инфаркта миокарда - OR=0.4, 95% ДИ 0.2-0.9 (по данным проспективного наблюдения).

Ю.Среди мужчин с АГ (160/95) носители аллеля D гена CCR5 встречаются в 2 раза реже, чем в группе без АГ (95% ДИ 1.1-4.3). У носителей II генотипа выше уровень систолического и пульсового АД, глюкозы, чем у носителей генотипа ID. Однако у последних ниже уровень общего холестерина.

11. Среди мужчин с семейным анамнезом отягощенным по ССЗ чаще встречаются носители редкого гомозиготного генотипа полиморфизма 3'UTR (34293 и 34294 ТС-+СА) гена c-fins: АГ у отца (OR=3.3), инсульт у отца (OR=3.3), сахарный диабет в семейном анамнезе (OR=2.7).

Отношение шансов иметь избыточную массу тела (ИМТ >= 25) у носителей редкого гомозиготного генотипа в 2,5 раза выше, чем у носителей двух других генотипов. Отношение шансов иметь повышение глюкозы у носителей редкого гомозиготного генотипа в 3,6 раза выше, чем у носителей двух других генотипов. Полиморфизм 3'UTR (34293 и 34294 ТС—>СА) гена c-fms ассоциирован с уровнем ХС ЛПВП, ХС ЛПНП, триглицеридов, глюкозы, индексом атерогенности, индексом массы тела. У мужчин, перенёсших инсульт по данным проспективного наблюдения, повышена частота редкого гомозиготного генотипа (OR=5.1, 95 % ДИ 1.5-17.3), по сравнению с лицами без инсультов.

12.1/D полиморфизм гена c-fms ассоциирован с уровнем общего холестерина. У носителей гетерозиготного генотипа общий холестерин выше 250 мг/дл встречается в 2.7 раза чаще, по сравнению с носителями двух других генотипов (95 % ДИ 1.2-5.8). Отношение шансов умереть от ИБС по данным проспективного наблюдения у носителей делеционного аллеля в 3 раза выше, чем у носителей генотипа II.

13.Среди мужчин с наследственной отягощенностью по ИБС в целом отношение шансов обнаружить носителя аллеля -308А гена TNF-a в 1,8 раза выше, чем в группе без отягощённого семейного анамнеза (95 % ДИ 1.1-3.3). Отношение шансов у носителей аллеля -308А иметь избыточную массу тела и повышение индекса атерогенности в 2 раза выше, чем у носителей генотипа G/G. Полиморфизм -G308A гена TNF-a ассоциирован с индексом массы тела, индексом атерогенности, ХС ЛПВП, ХС ЛПНП. У носителей редкого гомозиготного генотипа отношение шансов иметь как определённую ИБС (по эпидемиологическим критериям), так и фатальную ИБС (по данным проспективного наблюдения) в 6 раз выше, чем у носителей двух других генотипов.

14. У носителей гомозиготного генотипа С260С по полиморфизму -С260Т гена CD 14 уровень общего холестерина ниже по сравнению с носителями двух других генотипов. Носители гетерозиготного генотипа в 2.2 раза чаще курят (95 % ДИ 1.1-4.3).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В открытой мужской городской сибирской популяции по данным одномоментного исследования выявлены наиболее информативные показатели семейного анамнеза, свидетельствующие о наличии у консультирующегося предрасположенности к ССЗ, а соответственно и необходимости проведения профилактических мероприятий. То сеть среди лиц с определенным по данным семейного анамнеза повышенным риском развития ССЗ представляется целесообразным проведение клинического обследования для выявления ведущих факторов риска, с последующей разработкой (с учётом данных обследования) индивидуальных ранних первичных профилактических мероприятий и динамическим наблюдением с целью своевременного выявления ССЗ.