Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Свободнорадикальные реакции и аутоантитела к фактору роста нервов при рассеянном склерозе

На правах рукописи

РГБ ОД

2 С СЕН 1393

Переседова Анастасия Вячеславовна

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ РЕАКЦИИ И АУТОАНТИТЕЛА К ФАКТОРУ РОСТА НЕРВОВ ПРИ РАССЕЯННОМ СКЛЕРОЗЕ

14.00.13 - нервные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1999

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте неврологии Российской Академии медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор И.А.Завалишин

Научный консультант:

доктор медицинских наук Юпошник Т.П.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Бархатова В.П. доктор медицинских наук, профессор Деконенко Е.П.

Ведущая организация:

Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова

Защита состоится ¿¿¡7"//¿¿У/Л 1999 г. в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д 001.06.01 при Научно-исследовательском институте неврологии Российской Академии медицинских наук по адресу: 123367, Москва, Волоколамское шоссе, 80.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ неврологии

РАМН.

Автореферат разосл

мая 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

С.Н.Иллариошкин

С/Ь о

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В последние годы достигнут определенный прогресс в понимании патогенеза рассеянного склероза (PC) и разработке новых терапевтических подходов, однако механизмы развития демиелинизирующего процесса продолжают оставаться во многом невыясненными. Важное значение имеет дальнейшее изучение взаимосвязи иммунологических и биохимических нарушений, приводящих к гибели миелина и олигодендроглии.

Одними из первых событий в патогенезе PC являются активация аутореактивных Т-клеток и распознавание ими своих антигенов-мишеней. Для этого необходимо образование тримолекулярного комплекса, включающего расщепленный пептид антигена, молекулу II класса главного комплекса гистосовместимости на антигенпрезентирующей клетке (макрофаге, астроците, микроглии) и молекулу Т-клеточного рецептора на С04+Т-лимфоците (Steinman L, et al., 1995; Hohlfeld R., 1997). Формирование такого комплекса приводит к сенсибилизации С04+Т-лимфоцитов к различным антигенам миелина: основному белку миелина, протеолипидному протеину, миелин-ассоциированному гликопротеину, миелин-олигодендроцитарному гликопротеи-ну (Kerlero de Rosbo N. et al., 1993; Zhang F. et al., 1994), их миграции в очаг поражения, выделению цитокинов провоспалительного характера, в том числе интерферона-у (ИФН-у) и фактора некроза опухоли-а (ФНО-а), нарушению проницаемости гематоэнцефалического барьера (Демина T.JI. с соавт., 1997, Hohlfeld R., 1997).

В процесс также включаются В-лимфоциты, антитела, система комплемента. Следует отметить, что антитела синтезируются не только к антигенам олигодендроглии и миелина, но и к другим антигенным детерминантам (Hansen B.L. et al., 1983; Tanaka J.L. et al., 1989; Bakhiet M., 1998). Также происходит активация макрофагов, выделяющих большое количество биологически активных субстанций. В результате развивающегося каскада иммунопатологических и патохимических реакций происходит разрушение миелина и олигодендроцитов.

Одним га механизмов повреждающего действия провоспалительных цитокинов (ИФН-у и ФНО-а) при PC является индукция образования активных метаболитов кислорода (АМК) в астроцитах, микроглии, а также макрофагах (MacMicking, 1992; Vartanian Т., 1997). Образующиеся свободные радикалы кислорода вызывают повреждение различных клеточных структур, в том числе и инициируют процессы

перекисного окисления липидов (ПОЛ) - одного из наиболее распространенных механизмов деструкции мембран, субстратом которого являются полиненасыщенные жирные кислоты липидов.

Хотя в литературе в последние годы опубликован ряд теоретических и экспериментальных работ, рассматривающих участие свободнорадикальных реакций в развитии демиелинизирующего процесса (MacMicking J.D. et al., 1992; Cooper R.L., 1997; Hohlfeld R., 1997; Knight J.A., 1997), при PC имеются лишь единичные сообщения о повышении содержания АМК в цитоплазме макрофагов и микроглии при PC, а данные по изучению ПОЛ довольно разноречивы (Роговина Н.И., Хохлов А.П., 1980; Назаренко В.Г. с соавт., 1990; Ширалиева Р.Д., 1995; Bagastra О. et al., 1995).

Как известно, параллельно с демиелинизацией при PC наблюдаются и процессы регенерации, в частности, восстановление миелина. Предполагается, что макрофагами/микроглией или другими клетками синтезируются факторы роста, влияющие на процесс пролиферации и дифференцировки олигодендроцитов и, следовательно, процесс ремиелиштации (Loughlin A. et al., 1994; Cuzner M.L., 1997). В-связи с этим в последнее время активно изучается роль одного из семейств факторов роста - нейротрофинов. Интерес к данному семейству и, прежде всего, к наиболее-изученному из них фактору роста нервов (ФРН) при PC объясняется их разнообразными защитными эффектами. Так, показано влияние ФРН на олигодендроциты человека (Ladiwala U. et al., 1998), клетки иммунной и эндокринной систем (Otten U. et al., 1979; Brodie С., Gelfand E.W., 1994; Levi-Montalcini R. et al., 1996). Кроме этого, обсуждается антиоксидантное влияние ФРН (Mattson М.Р., 1993; Kamata Н., 1996).

В литературе имеются лишь единичные сообщения об изучении уровня ФРН при PC. Показано как значительное повышение уровня ФРН в спинномозговой жидкости (СМЖ) больных PC при обострении заболевания в сравнении с заметным снижением при ремиссии (Laudiero L.B. et al., 1992), так и его отсутствие (Massaro A.R. et al., 1994).

Следует отметить, что одной из возможных причин нарушений функций ФРН считается связывание с антителами (Aloe L. et al., 1994; Levi-Montalcini R. et al., 1996). Присутствие аутоантител к ФРН показано как в сыворотке крови здоровых людей (Кяюшник Т.П. с соавт., 1998), так и при ряде аутоиммунных заболеваний (Dicou Е. et al., 1993). В то же время, несмотря на предполагаемое участие ФРН в патогенезе PC, детальное изучение антител к данному нейротрофину при этом заболевании отсутствует.

Таким образом, изучение свободнорадикальных реакций, участвующих в деструкции мембран олигодендроглии и , миелина, а также анализ синтеза аутоантител к ФРН при РС представлялись важными и актуальными, что и определило цель и задачи настоящей работы.

Цель работы: изучение роли нарушений иммуно-биохимических взаимодействий в патогенезе рассеянного склероза на основании анализа свободнорадикальных реакций и синтеза аутоантител к фактору роста нервов у больных рассеянным склерозом. ,

Задачи работы:

1. Изучить генерацию активных метаболитов кислорода - супероксид-анион радикала 02* и пероксида водорода Н2О2, нейтрофилами крови, а также содержание основного конечного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида, в биологических жидкостях больных рассеянным склерозом.

2. Исследовать уровень аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови и • спинномозговой жидкости больных рассеянным склерозом.

3. Провести корреляции иммунологических и биохимических нарушений со - стадией активности, характером течения и длительностью патологического процесса.

4. На основании полученных данных уточнить патогенетические механизмы РС, а также обосновать подходы к возможной коррегирующей терапии.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение свободнорадикальных реакций, а также уровня аутоантител к фактору роста нервов в биологических жидкостях больных рассеянным склерозом. Установлен различный характер изменений уровня аутоантител к фактору роста нервов и показателей генерации активных метаболитов кислорода нейтрофилами крови у исследованных больных в зависимости от стадии активности и характера течения заболевания, что отражает этапы демиелинизирующего процесса при РС.

В острой стадии РС (дебют и обострение) на начальных этапах выявлена активация не только иммунопатологических, но, в определенной мере, . и патохимических реакций; на более поздних этапах острой стадии и в период ремиссии, напротив, отмечено уменьшение интенсивности синтеза аутоантител к фактору роста нервов, в то время как генерация активных метаболитов кислорода возрастала. При прогредиентном течении РС установлены как повышение уровня аутоантител к

фактору роста нервов, так и активация свободнорадикальных реакций, причем отмечена большая выраженность макрофагальной активации при вторично-прогредиентном течении болезни. - - .

Теоретическое значение работы. Полученные данные свидетельствуют об участии свободнорадикальных реакций и аутоантител к фактору роста нервов в патогенезе РС. Выявлена связь интенсивности изученных патохимических и иммунопатологических реакций со стадией активности демиелинизирующего процесса. Показано, что в механизмах развития острой стадии РС (дебют и обострение) на начальных ее этапах большее значение имеют иммунные нарушения, отражением которых служат высокие уровни аутоантител к фактору роста нервов. На более поздних этапах острой стадии и в период ремиссии интенсивность иммунопатологических реакций снижается, а преимущественное значение имеет интенсивная макрофагальная активация. Снижение интенсивности антителообразования к фактору роста нервов в стадии ремиссии может отражать возможность реализации его нейротрофического эффекта за счет участия в процессе регенерации. Напротив, высокие титры аутоантител -к фактору роста нервов при острых и прогредиентных формах РС могут служить показателем недостаточности репаративных процессов в центральной нервной системе. -

Практическое значение работы. Получешше данные по исследованию интенсивности свободнорадикальных реакций и уровня аутоантител к фактору роста нервов в биологических жидкостях больных рассеянным склерозом могут являться дополнительным критерием в оценке степени активности демиелинизирующего процесса. Преобладание иммунопатологических или патохимических реакций на различных этапах патологического процесса может быть использовано как критерий дифференцированного подхода к лечению больных РС.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В патогенезе рассеянного склероза участвуют как свободнорадикальные реакции с образованием активных метаболитов кислорода и инициацией перекисного окисления липидов, так и иммунопатологические реакции с индукцией гуморального ответа не только к антигенам миелина и олигодендроглии, но и к другим антигенным детерминантам, в частности, к фактору роста! нервов.

2. При активации демиелинизирующего процесса в острой стадии рассеянного склероза на начальных ее этапах большее значение имеет инициация иммунологических реакций, в том числе н синтеза антител, в то время как

макрофагальная активация преобладает на более поздних этапах и при последующей ремиссии.

3.Интенсивность антителообразования к фактору роста нервов может служить маркером активности репаративных процессов в центральной нервной системе.

Апробация работы. Результаты настоящего исследования доложены на 14th Congress of the European Committee for. Treatment and Research in Multiple Sclerosis, Stockholm, Sweden, . 1998, и Third Congress of the European Federation of Neurological Societies, Seville, Spain, 1998. Работа апробирована и рекомендована к защите 29 апреля 1999 г. на совместном заседании сотрудников III сосудистого, нейроинфекционного и реанимационного отделений, лабораторий патологической анатомии, экспериментальной патологии нервной системы, биохимии, отдела лучевой диагностики НИИ неврологии РАМН.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 работ, 1 - в печати.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора - литературы, характеристики материала и методов исследования, результатов биохимических и иммунологических исследований, обсуждения результатов, выводов и . практических рекомендаций. Работа изложена на 148 страницах машинописного текста, иллюстрирована 17 таблицами и 12 рисунками. Библиографический указатель содержит 259 источников: 35 отечественных и 224 зарубежных.

Характеристика материала и методов исследования

В настоящей работе представлены результаты исследования генерации АМК -супероксид-анион радикала 02' и пероксида водорода Н202, нейтрофилами крови, определения основного конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА), и уровня аутоантител (ААТ) к ФРН в сыворотке крови и СМЖ 247 больных с достоверным диагнозом рассеянного склероза, согласно критериям Poser С.M. с соавт. (1983). Контрольную группу составили 78 здоровых доноров крови и 20 больных с острой хирургической патологией, у которых СМЖ была получена при проведении спинномозговой анестезии. В группу сравнения были включены 62 больных боковым амиотрофическим склерозом (БАС).

Клиническое обследование больных проводилось в нейроинфекциошюм отделении НИИ неврологии РАМН. У всех больных проводили детальное изучение клинической картины заболевания с использованием данных анамнеза,

неврологического и соматического статуса, а также результатов нейроофтальмологического и отоневрологического исследования. Кроме того, применялись биохимические, иммунологические, электрофизиологические и рентгенологические методы исследования, включая компьютерную томографию (КТ) и магнитно-резонансную томографию (МРТ) головного и спинного мозга.

Помимо больных с ремитгирующим течением, также выделялась группа больных с постепенным прогрессированием заболевания. В данной работе диагноз прогредиентного течения PC ставился при прогрессировавши симптоматики в течение 12 месяцев, в соответствии с мнением О.А.Хондкариана с соавт. (1987). При прогрессирующем течении заболевания выделялось первично- и вторично-прогредиентное течение PC. Суммарная оценка неврологического дефицита проводилась по расширенной шкале инвалидизации (Neurological assessment Kurtzke expanded disability status scale, EDSS).

Среди больных PC отмечалось незначительное преобладание женщин: соотношение мужчины/женщины составило 1:1,4 (103:144). Возраст больных колебался-от 16 до 58 лет, составляя в среднем 33,1±9,2 года. Больных моложе 20 лет было 28 человек, старше 50 лет - 5 человек. Преобладали больные в возрасте от 21 до 40 лет-(68,4% случаев), что соответствует и данным литературы (Kurtzke J.F., 1983). У большинства больных (209 чел, » 85%) отмечена цереброспинальная форма заболевания, церебральная и спинальная выявлены, соответственно, у 35 (14%) и 3 (1%) пациентов.

Все больные были разделены на группы в зависимости от характера течения заболевания и стадии активности патологического процесса. Примерно у половины больных (49,8%) отмечалось ремиттирующее течение PC. Обострение заболевания, характеризующееся появлением новой неврологической симптоматики и связанное с развитием нового очага демиелшшзации, реже - активацией старого, наблюдалось у 76 больных (30,8%). На момент обследования продолжительность периода обострения колебалась от нескольких дней до 2-х месяцев. Состояние ремиссии, характеризующееся полным или частичным стойким регрессом неврологической симптоматики, отмечено у 47 человек (19%). Продолжительность периода ремиссии у больных на момент обследования колебалась от 3-х месяцев до 2 лет.

У 94 человек (38,1%) диагностировано прогрессирование заболевания, при этом первично-прогредиентное течение выявлено у 46 больных (18,6%), вторично-

прогредиентное - у 48 больных (19,5%).

Отдельную группу составили 30 больных с дебютом РС (12,1%), у которых неврологическая симптоматика была отмечена впервые, а продолжительность заболевания на момент обследования составляла от нескольких дней до 2-х месяцев.

Иммунологические и биохимические исследования проводились в лаборатории молекулярной биохимии Научного центра психического здоровья РАМН.

Исследование генерации АМК - супероксид-анион радикала (02") и пероксида водорода (Н2О2), нейтрофилами крови проведено у 44 больных РС (18 мужчин и 26 женщин). Средний возраст больных РС в данной группе составил 31,9±8,9 года, средняя продолжительность болезни - 5,9+5,4 года. Дебют заболевания диагностирован у 8 человек, ремитирующее течение - у 20 (обострение -у 12, ремиссия - у 8), прогредиентное течение - у 16 (первично-прогрессирующее - у 9, вторично-прогрессирующее - у 7) человек.

Содержание основного конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА), изучалось в сыворотке крови 145 больных (62 мужчин и 83 женщин) и СМЖ 62 больных РС. Средний возраст больных РС составил 33,7±9,4 года, средняя продолжительность болезни - 5,7±5,5 года. Дебют заболевания диагностирован у 20 человек, ремиттирующее течение - у 66 (обострение -у 46, ремиссия - у 20), прогредиентное течение - у 59 (первично-прогрессирующее - у 31, вторично-прогрессирующее - у 28) человек.

В контрольную группу были включены 50 здоровых доноров крови и 20 больных с острой хирургической патологией, у которых СМЖ была получена при проведении спинномозговой анестезии.

Содержание ААТ к ФРН исследовано в сыворотке крови у 148 больных (58 мужчин и 90 женщин) и в СМЖ 66 больных РС. Средний возраст больных РС в данной группе составил 32,1±9,1 года, средняя продолжительность болезни - 5,1±5,1 года. Дебют заболевания диагностирован у 20 человек, ремиттарующее течение - у 78 (обострение -у 45, ремиссия - у 33), прогредиентное течение - у 50 (первично-прогрессирующее - у 25, вторично-прогрессирующее - у 25) человек.

Контрольную группу составили 28 здоровых доноров крови, сопоставимых с больными РС по возрасту и полу. В группу сравнения были включены 62 больных БАС.

Биохимические и иммунологические методы исследования

1. Выделение нейтрофилов из крови проводилось по стандартной методике Boyum А. (1968).

2. Генерацию супероксид-анион радикала 02" нейтрофилами крови оценивали с помощью восстановления цитохрома С, согласно методике Bochner R.Z., Nathon D.G. (1980) (цитируется по Cohen H.J., 1986). Генерация 02* выражалась в нмоль 02° / мин /106 клеток.

3. Генерацию пероксида водорода Н202 нейтрофилами крови определяли методом опосредованного пероксидазой окисления фенолового красного, в соответствие с методом Pick. J. (1980). Генерация Н202 выражалась в нмоль Н202 / мин /106 клеток.

4. Определение малонового диальдегида (МДА) в плазме крови и СМЖ проводилось по методу Гаврилова В.Б. с соавт. (1987), в основе которого лежит реакция МДА с тиобарбитуровой кислотой. Концентрация МДА выражалась в нмоль/мл.

5. Определение уровня аутоантител (ААТ) к фактору роста нервов (ФРН) в сыворотке крови и СМЖ проводили с использованием оригинального метода" твердофазного иммуноферментного анализа, разработанного и предложенного Т.П.Клюшник (1995). Уровень ААТ к ФРН оценивался в единицах оптической" плотности (D).

Статистические методы анализа данных

Статистический анализ данных проводился в лаборатории медицинской информатики НИИ неврологии РАМН с использованием коммерческого пакета программ STATISTICA 4.3 (StatSoft Inc., USA).

Распределения признаков описывались средними значениями и средне-квадратическими отклонениями (M±SD). В случае нормальных распределений и выполнения условия равенства дисперсий для сравнения средних значений в группах использовался Т-критерий Стьюдента. В случае распределений, отличных от нормальных, для сопоставлений групп использовался U- критерий Манна-Уитни.

Анализ частот встречаемости признаков после проведения их категоризации проводился с использованием критерия Хи-квадрат и точного критерия Фишера.

Результаты биохимических и иммунологических исследований и их

обсуждение

1. Изучение свободнорадикальных реакций у больных рассеянный склерозом В результате проведенного исследования установлено, что в целом по группе I больных РС по сравнению с контрольной группой выявлено статистически достоверное повышение продукции 02* (0,099±0,031 и 0,076±0,015 нмоль О/ /мин /106 клеток соответственно, р<0,001) и Н202 нейтрофилами крови (0,036±0,02 и 0,021±0,003 нмоль Н2О2 /мин /106 клеток соответственно, р<0,001), а также повышение уровня МДА в сыворотке крови (1,10±1,08 и 0,89+0,17 нмоль/мл соответственно, р<0,02) и СМЖ (0,94±0,83 и 0,18±0,08 нмоль/мл соответственно, р<0,02).

Выявленное повьппение генерации АМК нейтрофилами крови и уровня МДА в биологических жидкостях больных РС подтверждает участие свободнорадикальных реакций в патогенезе этого заболевания, что отмечается также и другими авторами (Назаренко В.Г. с соавт., 1990; Ширалиева Р.Д. 1995; 1оукк А. й а1., 1997).

Однако, при проведении частотного анализа генерации АМК нейтрофилами крови и уровня МДА в биологических жидкостях была выявлена биохимическая гетерогенность больных РС. Так, показатели генерации О2" и Н2О2 были как ниже нормы (<>]), так и находились в пределах нормальных величин (N=N1130), однако в преобладающем количестве случаев превышали их (>1М). При этом, количество больных, у которых отмечены повышенные показатели генерации Ог", было достоверно выше, чем больных с пониженными показателями (р<0,05). В то же время, повьппение генерации Н202 зарегистрировано у достоверно большего количества больных, чем понижение или даже нормальные значения данного показателя (р<0,05). При проведении частотного анализа уровня МДА в биологических жидкостях больных РС у большинства больных (66,9%) в сыворотке крови данный показатель был или в пределах нормы, или ниже нормальных величин, в то время как достоверно большее количество больных (72,5%) имело повышенное содержание МДА в СМЖ (р<0,001) (таблица 1).

Таблица 1

Частотны» анализ генерации АМК нейтрофилами крови

и уровня МДА в биологических жидкостях больных РС, чел (%)

Исследуемый I группа И группа III группа

показатель N > N

о2- 4(10%) 13 (32%) 23 (57%)*

н202 5 (13,9%) 6 (16,7%) 25 (69,4%)**

МДА сыворотка 69 (47,6%) 28(19,3%) 48 (33,1%)***

крови

МДА СМЖ 13 (21%) 4 (6,5%) 45 (72,5%)***

Достоверность отличий между группами:

* р III-I <0,05 ** р III -1, III - II < 0,05 ***р(1 + II) -III <0,001 Выявленная при частотном анализе гетерогенность генерации АМК и концентрации МДА в сыворотке крови и СМЖ при РС может быть обусловлена различной степенью интенсивности свободнорадикальных реакций в зависимости от характера течения демиелинизирующего процесса. Для подтверждения данного предположения больные РС были подразделены на подгруппы в зависимости от течения заболевания (ремиттирующего или прогредиентного). Отдельную подгруппу составили больные с дебютом РС. При этом при частотном анализе при дебюте и * прогрессирующем течении РС у достоверно большего количества больных отмечена повышенная генерация пероксида водорода, а также зарегистрирована статистическая тенденция к преобладанию повышенной продукции супероксид-анион радикала (рисунок 1).

Рисунок 1

Частотный анализ генерации АМК нейтрофилами крови в зависимости от характера течения патологического процесса

100%.

50%!

0%

:и<ы, N

р<0,05

А

р=0,08

О/ Н202 02* Н202 02' Н202

Дебют Ремиттирующее течение Прогредиентное течение

Аналогичные результаты были получены и при сопоставлении показателей генерации АМК в абсолютных числах. При этом группа больных с ремиттирующим течением была разделена также на две подгруппы в зависимости от стадии активности патологического процесса (обострения или ремиссии). Суммируя полученные данные, можно отметить, что повышение генерации АМК (как супероксид-анион радикала, так и пероксида водорода) по сравнению с контрольной группой отмечено при дебюте заболевания и при прогредиентном его течении, а также зарегистрировано достоверное повышение продукции Н202 и статистическая тенденция к нарастанию продукции 02* в стадии ремиссии при ремиттирующем течении РС (рисунок 2).

Рисунок 2

Генерация АМК нейтрофилами крови в зависимости от

0,12 0,1 0,08 0,06 0,04 0,02 0

стадии и течения PC (нмоль /мин / 10 клеток) *

А

□ Супероксцц-анион радикал

□ Пероксид водорода

д

о

п

N

* р<0,05 А р=0,07

Д - дебют, О - обострение, Р - ремиссия, П - прогредиентное течение, N - контрольная группа

На основании сходства продукции супероксид-анион радикала нейтрофилами крови и микроглией, доказанного в исследовании Colton С.А. и Gilbert D.L. (1987), можно заключить, что выявленные в нашей работе колебания интенсивности генерации АМК нейтрофилами крови отражают различия фагоцитарной активности микроглии в центральной нервной системе (ЦНС) в зависимости от стадии и характера течения заболевания.

Содержание МДА - основного стабильного продукта ПОЛ, инициируемого АМК, также изучалась в зависимости от стадии и течения демиелинизирующего процесса при PC. Если в СМЖ уровень МДА достоверно превышал контрольные значения, то в сыворотке крови содержание МДА не отличалось от нормальных величин независимо от стадии и характера течения PC (таблица 2).

Содержание МДА в биологических жидкостях больных РС в зависимости от стадии и течения заболевания (нмоль/мл)

Стадия и течение РС МДА кровь МДА СМЖ

Дебют 1,15±1,24 1,00±1,02*

Обострение 1,11±1,23 0,70±0,61*

Ремиссия 0,83±0,54

Прогредиентное 1,17±1,04 1,15±0,90*

Контрольная группа 0,8910,17 0,18±0,08

* - р < 0,05 (достоверность отличия от контрольной группы) Отсутствие четкой зависимости уровня МДА в биологических жидкостях больных РС от особенностей клинического течения заболевания подтверждается также и результатами частотного анализа: независимо от характера течения в сыворотке крови больных РС преобладали нормальные или низкие значения уровня МДА, а в СМЖ у большинства больных уровень МДА превышал контрольные показатели (р<0,05).

Как видно из приведенных выше результатов, при двух острых стадиях РС (дебюте и обострении), клинически похожих, характеризующихся нарастанием неврологической симптоматики, получены различные данные по генерации АМК: так, при дебюте продукция супероксид-анион радикала и пероксида водорода достоверно превышала контрольные показатели, в то время как при обострении не отличалась от последних. В то же время, при ремиссии, при которой наблюдается улучшение состояния, отмечена статистическая тенденция к повышению продукция супероксид-анион радикала, а генерация пероксида водорода была достоверно повышена по сравнению с донорами.

Кажущееся противоречие стало более объяснимым при сопоставлении длительности дебюта и обострения, составивших в среднем 44,9±18,2 и 29,3±16,6 дня (6,4±2,6 и 4,2±2,4 недели соответственно). При этом отмечена статистическая тенденция к большей длительности дебюта (достоверность отличий р=0,06). В то же время стадия ремиссии диагностировалась у больных, у которых период стабилизации неврологической симптоматики составил более 12 недель. Исходя из этого, можно предположить, что генерация АМК нейтрофилами крови зависит от сроков от момента начала клинического ухудшения состояния.

Для подтверждения взаимосвязи генерации АМК с длительностью клинического ухудшения состояния результаты, полученные при дебюте РС и ремитгирующем его течении, были рассмотрены с учетом длительности дебюта, обострения и ремиссии в целом. Были выделены 2 подгруппы больных: с временным интервалом от начала острой стадии болезни до момента обследования < 35 дней (< 5 недель) и > 35 дней (> 5 недель).

При проведении частотного анализа продукции АМК в зависимости от сроков от момента начала дебюта или обострения заболевания выявлено, что количество больных с повышенной и нормальной/пониженной генерацией 02* было приблизительно одинаковым независимо от длительности атаки РС, в то время как повышение генерации пероксида водорода после 5 недель от момента начала активной стадии РС отмечено у достоверно большего количества больных, чем понижение или нормальные величины продукции Н2О2 (р<0,05) (рисунок 3).

Рисунок 3

Частотный анализ генерации АМК нейтрофилами крови в зависимости от длительности дебюта и ремитгирующего течения РС

(V н2о2 (V н2о2

<35 дней > 35 дней

При проведении частотного анализа уровня МДА независимо от сроков от момента начала последней атаки РС в сыворотке крови преобладали нормальные или пониженные концентрации МДА, в то время как в СМЖ у достоверно большего количества больных отмечено повышение уровня МДА (таблица 3).

Частотный анализ содержания МДА в биологических жидкостях больных РС в зависимости от длительности дебюта и ремиттирующего течения РС, чел (%)

Длительность £ 35 дней > 35 дней

Показатель I группа II группа Ш группа IV группа

>Ы >Ы

МДА сыворотки крови 23 (72%)* 9 (28%) 37 (69%)** 17(31%)

МДА СМЖ 7 (33%) 14 (67%)* 5 (29%) 12(71%)**

Достоверность отличий между группами:

* р I - II < 0,05 ** - р П1 - IV <0,05

Преобладание повышенных уровней МДА в СМЖ независимо от сроков клинического ухудшения состояния отражает постоянно текущие процессы ПОЛ в ЦНС.

Выявленная зависимость генерации пероксида водорода при РС от сроков от момента клинического ухудшения состояния, вероятнее всего, связана с тем, что на начальных этапах активации демиелинизирующего процесса вовлекаются иммунопатологические реакции специфического распознавания антигенов миелина и • олигодендроцитов аутореактивными Т-клетками и/или антителами. Иммунопатологические реакции, в свою очередь запускают сложный воспалительный -каскад, на поздних этапах которого наиболее важное значение приобретают макрофаги и глиальные клетки, особенно микроглия, продуцирующие большое количество биологически активных субстанций, включая АМК (Репу \'.Н., е1 а1., 1993).

Генерируемые АМК обладают высокой реакционной способностью, что делает их высокотоксичными для тканей, в том числе и ЦНС. Повреждающее действие АМК связано с гидроксшшрованием оснований ДНК, ее фрагментацией и развитием различных мутаций, блоком БН-групп ферментов, индуцированием реакций белков с другими компонентами клетки (Завалишин И.А., Захарова М.Н., 1996). При этом, помимо прямой химической модификации белков, изменяется их конформационная активность в результате нарушения физико-химических свойств липидного бислоя при активации ПОЛ. Подтверждением этому в нашем исследовании явилось повышение содержания основного конечного продукта ПОЛ - МДА, в биологических жидкостях больных РС.

В последнее время в литературе широко обсуждается вопрос об участии аксонального повреждения в патогенезе РС, как возможной причине стойкого необратимого неврологического дефицита. Выявление максимального аксонального

повреждения в зонах активно протекающей демиелинизации и воспаления позволило предположить, что демиелинизированные аксоны становятся уязвимыми для протеолитических ферментов, цитокинов, продуктов окисления, свободных радикалов, продуцируемых активными иммунными и глиальными клетками и макрофагами (Ferguson В. et al., 1997; Trapp B.D. et al., 1998). В то же время на культуре клеток было показано, что нейротоксический эффект макрофагов связан именно с генерацией АМК, а именно пероксида водорода, который в свою очередь является источником образования гидроксильного радикала - наиболее реакционноспособного из АМК (Thery С. et al., 1991).

Учитывая приведенные данные, можно предположить, что выявленное в нашем исследовании повышение генерации АМК, в частности, пероксида водорода нейтрофилами крови, позволяющее косвенно судить и о нарастании активности макрофагов/микроглии в ЦНС, является одной из причин аксонального повреждения в очагах демиелинизации при PC.

АМК помимо повреждения миелина и, возможно, аксона, могут также способствовать и нарушениям микроциркуляции, поскольку свободнорадикальные формы кислорода выполняют функцию вторичных мессенджеров, участвующих в поддержании вазоконстрикгорно-вазодилататорного баланса (Болдырев A.A., 1995).

Особый интерес при PC представляют патогенетические механизмы прогрессирования заболевания. При сопоставлении показателей генерации супероксид-анион радикала и пероксида водорода нейтрофилами крови, а также уровня МДА в биологических жидкостях больных PC при двух типах прогрессирования достоверных отличий выявлено не было (таблица 4).

Таблица 4

Генерация АМК нейтрофилами крови и уровень МДА в биологических жидкостях

больных PC при первично- и вторично-прогредиентном течении PC

Показатель Первично-прогредиентное течение Вторично-прогреднентное течение

Ог' (нмоль /мин /106 клеток) 0,094±0,020 0,108+0,016

Н2О2 (нмоль /мин /10" клеток) 0,030±0,013 0,037±0,024

МДА сыворотка крови (нмоль/мл) 0,95±0,86 1,42±0,17

МДА СМЖ (нмоль/мл) 0,91±0,81 1,48±0,95

При этом, независимо от характера прогрессирования (первичного или вторичного) продукция супероксид-анион радикала и уровень МДА в СМЖ превышали

контрольные величины (р<0,05). При проведении частотного анализа как при первичном, так и при вторичном прогрессировал™ РС у большинства больных также зарегистрировано повышение уровня МДА в СМЖ. В то же время повышенная генерация супероксид-анион радикала преобладала при вторично-прогредиентном РС (рисунок 4).

Рисунок 4

Частотный анализ генерации АМК нейтрофилами крови и уровня МДА в СМЖ при первично- и вторично-прогредиентном течении РС

пп вп

пп вп

пп вп

□ >м

жм N

р<0,05

J

02* Н202 МДА СМЖ

Полученные данные свидетельствуют об интенсивности макрофагальной

активации при вторичном прогрессировании РС, что согласуется и с другими результатами сопоставления двух форм прогрессирующего течения заболевания при морфологическом исследовании (Леуезг Т. е{ а!., 1994) и при МРТ головного мозга, в том числе и с контрастным усилением, (ТотрБоп АЛ., е1 а1., 1991), при которых более выраженные воспалительные изменения отмечены именно при вторично-прогредиентном течении РС.

Продукция АМК и уровень МДА анализировались также в зависимости от степени неврологического дефицита (по шкале КиПгке), однако достоверных отличий между группами больных с легкой или умеренной и тяжелой степенью инвалидизации выявлено не было.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют, что свободно-радикальные процессы с образованием АМК и инициацией ПОЛ действительно участвуют в патогенезе РС. Также выявлена взаимосвязь интенсивности окислительных реакций со стадией активности и характером течения заболевания. Кроме этого, при дебюте и ремиттирующем течении РС зарегистрированы динамические изменения генерации пероксида водорода нейтрофилами крови в зависимости от сроков от момента начала клинического ухудшения состояния, включая и последующую

ремиссию, что позволяет косвенно судить о преобладании фагоцитарной активности микроглии на поздних этапах активации демиелинизирующего процесса. Выявленное при вторично-прогредиентном течении, в отличие от первично-прогредиентного, преобладание повышенной генерации супероксид-анион радикала свидетельствует об интенсивности макрофагальной активации при данном типе прогрессирования заболевания.

2. Исследование содержания аутоантител к фактору роста нервов в биологических жидкостях больных рассеянным склерозом В целом по группе больных PC выявлено статистически достоверное повышение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой (1,08+0,27 D и 0,83+0,23 D соответственно, р<0,001), а также в СМЖ относительно группы больных БАС (0,58±0,41 D и 0,28±0,16 D соответственно, р<0,001).

Выявленное повышение содержания ААТ к ФРН является, вероятнее всего, проявлением аутоиммунного процесса, лежащего в основе данного иммунопатологического заболевания, при котором антитела выявляются не только к антигенам миелина и олигодендроглии, но и к другим антигенным детерминантам. Это, по мнению ряда авторов, может свидетельствовать о неспецифической гиперактивности В-клеток, вызванной нарушением иммунной регуляции при PC (Trotter J.L. et al., 1989).

Однако при проведении частотного анализа была выявлена иммунологическая гетерогенность больных PC. Так, у 57% больных уровень ААТ к ФРН находился в пределах нормальных величин (N=M±SD), в то время как у 43% превышал контрольные показатели. Учитывая выявленную гетерогенность, уровень ААТ к ФРН был также проанализирован с учетом стадийности и характера течения патологического процесса при PC. Повышение уровня ААТ х ФРН в сыворотке крови и СМЖ по сравнению с группами контроля и сравнения зарегистрировано независимо от стадии (обострения и ремиссии) при ремиттирующем течении и характера прогрессирования (первичного или вторичного) при прогредиентном течении заболевания (р<0,001). В подгруппе больных с дебютом PC уровень ААТ к ФРН также был достоверно повышен как в сыворотке крови, так и СМЖ (р<0,001) (таблица 5).

Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови и СМЖ в зависимости от стадии и течения РС (Р)

Стадии/течение РС ААТ к ФРН сыворотка крови ААТ к ФРН СМЖ

Дебют 1,12+0,28* 0,6610,35**

Обострение 1,1310,28* 0,63Ю,53**

Ремиссия 0,96Ю,23*

Первично-прогредиентное течение 1,0810,28* 0,4710,15**

Вторично-прогредиентное течение 1,110,29* 0,4410,17**

Группы контроля и сравнения 0,8310,23 0,2810,16

Достоверность отличий: *р<0,005-от контрольной группы; **р<0,05-от группы сравнения.

Из приведенных результатов следует, что активация гуморального иммунитета отмечается независимо от особенностей клинического течения РС, что подтверждается также результатами .иммуноцитохимических исследований, выявивших клетки, содержащие ^ й, как в активных очагах демиелинизации, так и в хронических неактивных бляшках (ТатоЫо В.Р., 1975; Ебш М.М., 1977). Такая стабильность активации гуморального иммунитета предполагает, что стимулы, инициирующие этот процесс, присутствуют уже с самого начала заболевания с последующим персистированием и постоянной стимуляцией интратекального синтеза О (Ра1у Э.\У. е1а1., 1998).

В то же время при сопоставлении выделенных подгрупп между собой выявлено достоверное повышение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови при дебюте, обострении и прогредаентном течении РС по сравнению с ремиссией (р<0,05) (рисунок 5).

Рисунок 5

Уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови больных РС в зависимости от стадии и характера течения заболевания (Б)

1,12

1.13

1,15 1,1 1,05 1

0,95 0,9 0,85

1.09

И

. 0,96

р<0,05

Д

п

Д - дебют, О - обострение, П - прогредиентное течение, Р - ремиссия

Также была выявлена статистическая тенденция к повышению уровня ААТ к ФРН в СМЖ при активных стадиях болезни (дебюте и обострении) по сравнению с прогредиентным течением заболевания (0,64+0,48 Э и 0,46±0,16 О соответственно, р=0,09).

Полученные результаты свидетельствуют о различной интенсивности иммунопатологических реакций в зависимости от стадии и течения РС: максимальной при острой атаке заболевания - дебюте и обострении, минимальной при ремиссии; прогрессирующее же течение занимает промежуточное положение.

Выявленная в данной работе взаимосвязь уровня ААТ к ФРН с особенностями клинического течения РС согласуется с существующим мнением, что иммунопатологический процесс при РС характеризуется динамичностью, и в ходе его развития происходит последовательное изменение показателей иммунитета (Гусев Е.И. с соавт., 1997).

Преобладание низких значений ААТ к ФРН в сыворотке крови при ремиссии заболевания по сравнению с активными стадиями выявлено и при частотном анализе. Так, при ремиссии РС у достоверно большего количества больных (73%) данный показатель находился в пределах нормальных величин (Ы), в то время как при дебюте и обострении число больных с повышенными (>Ы) и нормальными значениями исследуемого показателя было примерно одинаковым (таблица 6).

Таблица 6

Частотный аналнз уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови

при дебюте и ремиттируюшем течении РС, чел (%)_

Стадии РС I группа (N) II группа (>N)

Дебют 11 (55%) 9 (45%)

Обострение 19 (42%) 26 (58%)

Ремиссия | 24 (73%)* 9 (27%)

Достоверность отличий между группами * р I -11 <0,001

Выявленная одинаковая частота повышенных и нормальных уровней ААТ к ФРН при острых стадиях заболевания может быть связана с динамическими изменениями гуморального ответа в разные сроки клинического ухудшения состояния. Для подтверждения данного предположения уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови при дебюте и обострении был проанализирован в зависимости от сроков от момента начала клинического ухудшения.

В острой стадии РС (дебют и обострение) уровень ААТ к ФРН в сыворотке

крови на ранних этапах клинического ухудшения состояния (< 35 дней) достоверно превышал аналогичный показатель на более поздних сроках (> 35 дней) (1,21±0,30 О и 1,04±0,24 Э соответственно, р<0,05). Аналогичные результаты были получены и при частотном анализе уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови. В острой стадии заболевания (дебют и обострение) на ранних этапах клинического ухудшения состояния (< 35 дней) в сыворотке крови достоверно преобладало повышенное содержание ААТ к ФРН, а на более поздних сроках исследуемый показатель у большинства больных находился в пределах нормальных величин (р<0,05) (рисунок 6).

Рисунок 6

Частотный анализ уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови при острых стадиях РС (дебюте и обострении) в зависимости от их длительности

Полученные данные свидетельствуют о преобладании иммунологических нарушений на начальных этапах острой стадии PC, что согласуется с данными литературы (Гусев Е.И. с соавт., 1997; Хайдаров Б.Т., 1998; Репу V.H. et al., 1993).

Следует отметить, что колебания уровня ААТ к ФРН, выявленное в нашем исследовании, совпадает с последовательными изменениями концентрации самого ФРН в СМЖ больных PC, описанными в работе Laudiero L.B. et al. (1992): повышением при обострении по сравнению с заметным его снижением при ремиссии, что было расценено как характерная черта воспалительного ответа при данном заболевании.

Так, ФРН высвобождается из ненейрональных клеток под влиянием таких участвующих в воспалительных и иммунных реакциях цитокинов, как интерлейкин-1(3, интерлейкин-6, ФНО-а, ТРФ-Р (Satoh Т. et al., 1988; Lu X., Richardson P.M., 1991; Yoshida K., Gage F.H., 1992; Hattori A. et al., 1994). Кроме этого, CD4+ Т-клетки, активированные после взаимодействия с антигеном и антиген-презентирующей клеткой могут синтезировать и выделять биологически активный ФРН (Ehrhard Р.В. et

100,00%-80,00% 60,00% 40,00% 20,00%; 0,00% I

* р<0,05

E3N m>N

< 35 дней

> 35 дней

al., 1993). ФРН, в свою очередь, влияет на пролиферацию Т- и В-лимфоцитов, является аутокринным факторов выживания для клеток памяти, модулирует продукцию иммуноглобулинов (Otten U., 1994; Torcia М. et al., 1996), оказывает хемотактическое действие на лейкоциты in vivo и in vitro (Gee A.P. et al., 1983; Boyle M.D.P. et al, 1985). Кроме этого, ФРН оказывает мощное противовоспалительное действие (Banks В.Е. et al., 1984), стимулируя гипоталамо-гапофизарно-надпочечниковую систему и увеличивая секрецию адренокортикотропного гормона и концентрацию в плазме глкжокортикоидов (Otten U. et al., 1979). Таким образом, ФРН и другие цитокины, такие как ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-6, ФНО-а, рассматриваются как медиаторы взаимодействия нервной, иммунной и эндокринной систем (R. Levi-Montalcini et al., 1996).

Обсуждая участие ФРН в патогенезе PC, необходимо также учитывать, что, по мнению ряда авторов, при взаимодействии с низкоаффинным рецептором ФРН может участвовать в предотвращении апоптоза олигодендроглии человека (Ladiwala U. et al., 1998). Кроме этого, учитывая противоречивые данные по экспрессии высокоаффинного * рецептора на олигодендроцитах человека, нельзя полностью исключить эффекты ФРН, реализуемые при связывании с этим типом рецептора, а именно предотвращение " избыточного образования свободных радикалов и поступления ионов кальция в клетку (Kaplan D.R. et al., 1991; Mattson M.P. et al, 1993; Dikic I. et al., 1995; Dugan L.L. et al., 1997).

Помимо результатов изучения разнообразных эффектов самого ФРН, в последние годы в литературе опубликован ряд работ по влиянию антител к данному фактору роста на его трофические и сигнальные функции. На основании полученных результатов высказывается мнение, что воздействие антител к ФРН в постнатальном периоде, возможно, инактивирует эндогенный ФРН в нейроэндокринных структурах, приводя к выраженному синдрому нейро-эндокринно-иммунного дефицита (R. Levi-Montalcini et al., 1996).

Учитывая приведенные данные, можно предположить, что выявленное при PC повышение содержания ААТ к ФРН является негативным фактором, так как данные антитела, вероятнее всего, блокируют или ослабляют его влияши на клетки-мишени, а также нарушают опосредованные ФРН взаимодействия нервной, иммунной и эндокринной системы.

Следует отметить, что если в острой стадии PC высокие уровни ААТ к ФРН, по-видимому, ведут к невозможности реализации его нейротрофического эффекта, то в

период ремиссии эта возможность появляется, поскольку снижается интенсивность иммунопатологических реакций в целом, в том числе и антителообразования к ФРН.

Как уже отмечалось, в последнее время в литературе обсуждается вопрос об особенностях патогенеза при прогрессировании заболевания и проводится сравнение двух его типов - первичного и вторичного. При сопоставлении уровня ААТ к ФРН в биологических жидкостях больных РС в зависимости от характера прогрессирования достоверных отличий выявлено не было. При частотном анализе при первично-прогредиентном течении выявлена статистическая тенденция (р=0,08), а при вторично-прогредиентном - достоверное преобладание больных с нормальными показателями уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови (таблица 7).

Таблица 7

Частотный анализ уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови при прогредиентном

течении РС в зависимости от характера прогрессирования, чел (%)

Уровень ААТ к ФРН I группа II группа

Характер прогрессирования N

РС

Первичный 16 (60%)л 10 (40%)

Вторичный 16 (64%)* 9 (36%)

Достоверность отличий между группами л р I - II = 0,08 * р I - II < 0,05

Выявленное в данной работе повышение уровня ААТ к ФРН в биологических жидкостях больных РС как при первичном, так и при вторичном прогрессировании заболевания при отсутствии достоверных отличий между данными подгруппами свидетельствует, вероятнее всего, о постоянной стимуляции гуморального ответа при данных типах течения РС. При этом, нейтрализуя нейротрофический эффект ФРН, аутоантитела к нему, вероятно, имеют определенное отношение к формированию неуклонно прогрессирующего характера патологического процесса у этих больных.

Учитывая тот факт, что выраженность иммунологических нарушений может определять тяжесть заболевания, представлялось целесообразным проведение сопоставления иммунопатологических реакций со степенью неврологических нарушений при РС (по шкале КиПгке), однако достоверных отличий уровня ААТ к ФРН у больных с легкой или умеренной и тяжелой степенью инвалидизации выявлено не было.

Таким образом, при изучении уровня ААТ к ФРН в биологических жидкостях больных РС выявлено повышение данного показателя как в сыворотке крови, так и в СМЖ по сравнению с группой здоровых доноров и группой больных БАС, что

свидетельствует о поликлональной активации гуморального ответа при данном заболевании. Выявлена взаимосвязь интенсивности антителообразования к ФРН со стадией и характером течения заболевания, что отражает возможность реализации регенеративных механизмов на различных этапах PC. Кроме этого, при дебюте и обострении PC зарегистрированы динамические изменения уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови, что позволяет предполагать большее значение данных иммунологических нарушений на ранних этапах активации демиелинизирующего процесса.

Выявленное в данной работе преобладание иммунологических нарушений на начальных этапах патологического процесса и макрофагальной активации на более поздних сроках согласуется и с результатами гистологических исследований. Так, Gay F.W. с соавт. (1997) на основе мультифакторного кластерного анализа выделили в динамике существенно отличающиеся друг от друга типы повреждения.

На самых ранних стадиях повреждения - ^ 5 недель от момента начала последней * атаки заболевания очаги демиелшшзации характеризовались активацией гуморального иммунитета, а также только начальными стадиями фагоцитоза миелина. В нашем наблюдении в указанные сроки также зарегистрирована активация гуморального ответа (повышение ААТ к ФРН в сыворотке крови), в то время как количество больных с повышенными и пониженными/нормальными показателями генерации АМК было примерно одинаковым.

В случаях с промежуточной продолжительностью - от б до 20 недель от момента начала последней атаки PC выявлялась наибольшая степень общей активности с максимальным количеством клеток, среди которых преобладали макрофаги, содержащие включения, свидетельствующие о фагоцитозе миелина и эстерификации, в то время как активация гуморального иммунитета была выражена в меньшей степени. Аналогичное соотношение отмечено и в настоящей работе: на фоне снижения уровня ААТ к ФРН выявлено преобладание повышенной генерации пероксида водорода.

Аналогичная стадийность патологического процесса отмечена и при хроническом экспериментальном аллергическом энцефаломиелите (Lassmann Н., 1997).

Учитывая данные, полученные в настоящей работе, а также результаты других исследований, представляется возможным условно выделить две стадии развития патологического процесса при дебюте и ремиттирующем течении PC. Первая стадия (острая) - иммунопатологическая, обуславливает начальную активацию

демиелинизирующего процесса как клеточными, так и гуморальными факторами. При этом в результате поликлональной активации B-лимфоцитов и синтеза соответствующих антител блокируется действие эндогенных трофических веществ, в частности ФРН, что не позволяет реализоваться , регенеративным механизмам. На второй, стадии макрофагалыюй активации, большее значение имеет макрофаги и глия, которые I

продуцируют биологически активные субстанции и медиаторы; фагоцитируют | фрагменты миелина и. синтезируют факторы роста, в том числе и ФРН, которые в условиях снижения интенсивности иммунопатологических реакций получают возможность реализовать, свое нейротрофическое действие за счет влияния на пролиферацию и дифференцировку олигодендроцитов и, следовательно, процессы миелинизации и ремиелинизации.

Отмеченная в нашей, работе и в других исследованиях динамичность и стадийность патологического процесса при PC с преобладанием иммунологических нарушений на начальных, этапах и активацией макрофагов/микроглии в более поздние сроки, а также наличие не только демиелинизирующего, но и аксонального повреждения-в ЦНС открывает новые возможные направления в плане терапевтических подходов при этом заболевании. Высказываются предположения, что на стадии активации микроглии-и развития уже демиелшшзации, возможно, более успешными будут терапевтические стратегии, направленные не на ингибирование Т-клеточных или других иммунных реакций, а на угнетение макрофагальной активности, как, например, ингибиторы протеиназ (Gay F.W. et al., 1997), a учитывая аксональную заинтересованность, обсуждается вопрос о развитии нейропротективной терапии (Trapp B.D. et al., 1998).

Выводы

1. Впервые проведенное комплексное изучение свободнорадикальных реакций и аутоантител к фактору роста нервов в сыворотке крови и спинномозговой жидкости больных рассеянным склерозом выявило повышение генерации активных метаболитов кислорода нейтрофилами крови, увеличение содержания МДА и уровня аутоантител к фактору роста нервов в биологических жидкостях больных PC.

2. Показана связь интенсивности изученных иммунопатологических и патохимических реакций со стадией и характером течения заболевания. В острой стадии (дебют и обострение) в ранние сроки клинического ухудшения состояния больных (<5 недель) отмечена большая выраженность иммунологических нарушений (достоверное

повышение уровня ААТ к ФРН в сыворотке крови); в более поздние сроки (> 5 недель) острой стадии, а также при последующей ремиссии уровень ААТ к ФРН в сыворотке крови пациентов снижался, и преобладала повышенная продукция пероксида водорода в результате активации макрофагов.

3. При прогредиентном течении заболевания независимо от типа прогрессирования выявлено повышение уровня ААТ к ФРН в биологических жидкостях больных РС и активация свободнорадикальных реакций (повышение генерации супероксид-анион радикала нейтрофилами крови и уровня МДА в СМЖ); причем при вторично-прогредиентном течении РС, в отличие от первично-прогредиентного, отмечено преобладание повышенной генерации супероксид-анион радикала, что свидетельствует об интенсивности макрофагальной активации при данном типе прогрессирования РС.

4. Интенсивность синтеза аутоантител к фактору роста нервов у больных РС может отражать возможность реализации его нейротрофического эффекта за счет

.участия в процессе регенерации: в острой стадии и при прогредиентных формах болезни высокий уровень нейтрализующих антител, по-видимому, служит показателем - недостаточности репаративных процессов в нервной системе. Напротив, низкие уровни аутоантител к ФРН в стадии ремиссии свидетельствуют о возможности реализации этих механизмов.

5. Патологический процесс при рассеянном склерозе является постоянно текущим, его характер в виде преобладания иммунопатологических или свободнорадикальных реакций на различных этапах болезни является основанием дня выделения и диагностики этих этапов в развитии РС и, соответственно, для дифференцированного подхода к выбору коррегирующей терапии.

Практические рекомендации

1. Высокие уровни аутоантител к фактору роста нервов у больных рассеянным склерозом могут являться дополнительным лабораторным критерием активного течения болезни, при котором показана иммуносупрессивная терапия.

2. Снижение содержания аутоанител к фактору роста нервов при высоком уровне макрофагальной активации может служить показателем уменьшения интенсивности демиелинизирующего процесса.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Завалишин И.А., Захарова М.Н., Клюшник Т.П., Даниловская Е.В., Переседова A.B., Жилова Л.Б. Исследование антител к фактору роста нервов у больных с рассеянным склерозом: и - нейродегенеративными заболеваниями. II Всероссийская конференция с международным участием "Клиническая и экспериментальная психонейроиммунология". Томск, 1997, стр. 48.

2. Захарова М.Н., Переседова A.B., Брусов О.С., Ватолкина O.E., Павлова O.A. Свободно-радикальные реакции в патогенезе рассеянного склероза и возможные пути их коррекции. V Российский Национальный Конгресс "Человек и лекарство". Москва, 1998. Тезисы докладов, стр. 78.

3. Переседова A.B., Попова Л.М., Пирадов М.А. Нарушение витальных функций при рассеянном склерозе и их лечение. V Российский Национальный Конгресс "Человек и лекарство". Москва, 1998. Тезисы докладов, стр. 165.

4. Захарова М.Н., Переседова A.B., Брусов О.С., Павлова O.A., Завалишин И.А. Свободно-радикальные механизмы в патогенезе рассеянного склероза. Актуальные вопросы неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики. Материалы конференции. Уфа, 1998, стр. 91-92.

5. Переседова A.B., Захарова М.Н., Клюшник Т.П., Завалишин И.А. Роль аутоантител к фактору роста нервов и активных метаболитов кислорода в патогенезе рассеянного склероза. Западная и восточная медицина - реальная помощь. Материалы конференции. Санкт-Петербург, 1998, стр. 47.

6. Peressedova A.V., Zakharova M.N., Klushnik Т.P., Zavalishin I.A. The role of antinerve growth factor antibodies in multiple sclerosis. Multiple sclerosis, 1998, Vol. 4, N. 4, August, p. 342 (P2035).

7. Zakharova M.N., Zavalishin I.A., Peresedova A.V. Reactive oxygen species in the pathogenesis of multiple sclerosis and amyotrophic lateral sclerosis. European Journal of Neurology, 1998. Vol. 5, Supplement 3, September. S123.

8. Завалишин И.А., Переседова A.B., Жученко Т.Д. От патогенеза к лечению рассеянного склероза. Материалы к республиканскому рабочему совещанию "Вопросы диагностики и лечения демиелинизирующих заболеваний нервной системы". Ступино, 1999 г. Стр. 28-38.

9. Демина Т.Л., Гусев Е.И., Завалишин И.А., Яхно H.H., Шмидт Т.Е., Адарчева Л.С., Ниязбекова A.C., Переседова A.B., Захарова М.Н., Жученко Т.Д. Первый опыт применения препарата Копаксон при лечении ремиттирующей формы рассеянного склероза в России. Материалы к республиканскому рабочему совещанию "Вопросы диагностики и лечения демиелинизирующих заболеваний нервной системы". Ступино, 1999 г. Стр. 127-129.

10. Завалишин И.А., Жученко Т.Д., Переседова A.B. "Сегодня и завтра" в лечении рассеянного склероза. Материалы VI Российского национального конгресса "Человек и лекарство" Москва, 1999, стр. 92.

11.Переседова A.B., Захарова М.Н., Клюшник Т.П., Завалишин И.А. Роль антител к фактору роста нервов в патогенезе рассеянного склероза. Конференция "Нейроиммунопатология", Москва, октябрь 1999 г. (в печати).

Условные сокращения

ААТ - аутоантитела

АМК - активные метаболиты кислорода

БАС - боковой амиотрофический склероз

ИФН-у - интерферон у

МДА - малоновый диальдегид

Н2О2 - пероксид водорода

02* - супероксид-анион радикал

ПОЛ - перекисное окисление липидов

РС - рассеянный склероз

СМЖ - спинномозговая жидкость

ФИО а - фактор некроза опухоли а

ФРН - фактор роста нервов

ЦНС - центральная нервная система

О - единица оптической плотности