Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Структурные изменения почек в условиях развития экспериментального оксалатного нефролитиаза

11-4

1573

На правах рукописи

Мотина Наталья Владимировна

СТРУКТУРНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПОЧЕК В УСЛОВИЯХ РАЗВИТИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОКСАЛАТНОГО НЕФРОЛИТИАЗА

14.03.02 - патологическая анатомия 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2011

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте региональной патологии и патоморфологии Сибирского отделения РАМН (Новосибирск) и в ГОУ ВПО Алтайском государственном медицинском университете Минздравсоцразвития РФ (Барнаул).

Научные руководители:

доктор медицинских наук,

профессор Лепилов Александр Васильевич

доктор медицинских наук Талалаев Сергей Владимирович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Бакарев Максим Александрович

доктор медицинских наук,

профессор Склянов Юрий Иванович

Ведущая организация:

ФГУ Новосибирский научно-исследовательский институт патологии кровообращения имени академика Е.Н.Мешалкина Минздравсоцразвития РФ.

Защита диссертации состоится «_» _2011 г.

в _ час. на заседании диссертационного совета Д 001.037.01

в НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2).

Автореферат диссертации разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.037.01 доктор биологических наук,

профессор Молодых Ольга Павловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время от 5 до 10% населения экономически развитых стран мира страдает мочекаменной болезнью, отмечается продолжающийся рост заболеваемости (Тиктинский O.JL, 2000; Сое F.L., 2005; Daudon М., 2005). Одна из причин этого заключается в отсутствии эффективного воздействия на этиологические и патогенетические факторы образования и роста камней. Высокая распространенность мочекаменной болезни обусловливает актуальность исследований, связанных с выявлением отдельных звеньев ее этиопатогенеза, лечения и профилактики.

Установлено, что кристаллы солей кальция являются субстанцией, способной индуцировать тканевые реакции в эпителии дистальных почечных канальцев и собирательных трубок. Воспалительные изменения, возникающие в них, являются результатом повреждающего воздействия кристаллов кальция оксалата и кальция фосфата. Морфологическая перестройка тканей почки усугубляется оксидативным повреждением, стимулятором которого могут быть кальциевые депозиты (Selvan R., 2002; Rashed Т., 2004).

Гипероксалурия является необходимым условием образования и выпадения кристаллов, которые непосредственно взаимодействуют с эпителием почечных канальцев. Данное взаимодействие индуцирует свободно-радикальное окисление и генерирует активные формы кислорода. Образующиеся свободные радикалы оказывают прямое воздействие на мембраны клеток канальцев, вызывая их повреждение и инициируя воспалительную инфильтрацию.

Так возникают условия для адгезии кристаллов солей и формирования очага кристаллизации с последующей активизацией процессов агрегации и образования депозита (Thamilselvan S. et al., 1997; Khan S.R., 2004). Продолжение роста и увеличение камня продолжается уже в просвете чашечно-лоханочной системы вплоть до клинически значимых размеров.

В то же время, остаются недостаточно изученными вопросы морфологической перестройки эпителиоцитов почечных канальцев и собирательных трубок, трансформации интерстициальных элементов почки на начальных стадиях нефролитиаза в связи с процессами оксидативного повреждения. Вопросы патоморфоло-гического доказательства эффективности антиоксидантной терапии

также недостаточно освещены. Это обосновывает целесообразность вышеуказанных "направлений в исследовании проблемы экспериментального оксалатного нефролитиаза.

Цель исследования - выявить особенности структурной перестройки почек и оценить процессы оксидативного повреждения в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза.

Задачи исследования.

1. Изучить общие и частные закономерности морфологических изменений в почках на различных сроках развития экспериментального нефролитиаза.

2. Выявить гисто-топографические особенности образования кальциевых микролитов и динамику их дальнейших превращений в тканях почки на различных сроках развития экспериментального нефролитиаза.

3. Определить особенности экспрессии маркеров оксидативного повреждения и антиоксидантной защиты в тканях почки и изменение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса почек в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза.

4. Изучить морфологические особенности экспериментального оксалатного нефролитиаза в условиях применения а-токоферола.

Научная новизна. Впервые на основании комплексного морфологического, иммуногистохимического и биохимического исследования установлены закономерности и особенности структурных изменений почек в условиях развития экспериментального оксалатного нефролитиаза. Выявлены особенности распределения соединений кальция на 21 и 42 сутки эксперимента в тканях почки и последующие структурные преобразования эпителия канальцев нефрона и собирательных трубок с изменением их функциональной активности.

Впервые изучены структурно-метаболические проявления оксидативного повреждения тканевых элементов почки. Доказано усиление процессов оксидативного повреждения в органе и ослабление функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты, наиболее выраженные в зонах максимальной патогистоло-гической перестройки почки, что соответствует зонам интенсивного литогенеза.

Впервые проведен анализ эффективности применения а-токоферола при экспериментальном оксалатном нефролитиазе. Показано снижение выраженности структурной перестройки почки, обра-

тимость морфологических изменений мозгового вещества почки, уменьшение размеров и числа соединений кальция, ослабление оксидативного повреждения тканей и клеток и сохранение системы ферментной антиоксидантной защиты.

Практическая значимость работы. Морфологическое и им-муногистохимическое исследования тканей почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе способствует выявлению определенных структурно-метаболических особенностей перестройки органа на начальных стадиях мочекаменной болезни. Выявление оксидативного повреждения позволит оценить его роль при начальном развитии оксалатного нефролитиаза. В связи с тем, что при оксалатном экспериментальном нефролитиазе происходит активация свободно-радикального окисления с угнетением ферментных систем антиоксидантной защиты, целесообразно использовать а-токоферол для ослабления оксидативного повреждения.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза превалируют дистрофические изменения эпителия канальцев неф-ронов и собирательных трубок по типу гиалиново-капельной и гид-ропической дистрофии, происходит расширение просвета канальцев и собирательных трубок, отмечается мононуклеарная инфильтрация интерстиция, разрастание соединительной ткани и формирование перитубулярного и периваскулярного фиброза.

2. При моделировании оксалатного нефролитиаза в зависимости от сроков эксперимента отмечаются гистотопографические особенности отложения соединений кальция, что проявляется перераспределением формирующихся кальциевых микролитов из области основания и средней трети почечного сосочка в область средней трети и вершины сосочка.

3. В условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза происходит активация свободно-радикального окисления и ослабление функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты в зонах интенсивного литогенеза.

4. В условиях применения а-токоферола наблюдается ослабление проявлений оксидативного повреждения почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе.

Апробация работы. Результаты работы доложены на Второй международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2009), на Всероссийской конференции с между-

народным участием, посвященной 100-летию Российского общества патологоанатомов (Санкт-Петербург, 2009), на XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009), на III международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург, 2009), на XI научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь - Барнаулу» (Барнаул, 2009), на VI Международной научно-практической конференции «Окружающая среда и здоровье» (Пенза, 2009), на III съезде нефрологов юга России «Актуальные проблемы региональной нефрологии» (Ростов-на-Дону, 2010), на VII съезде научного общества нефрологов России (Москва, 2010), на межлабораторной научной конференции в НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН (Новосибирск, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 научных работ, в том числе 7 статей в ведущих рецензируемых журналах по списку ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 118 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, трех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций. Диссертация иллюстрирована 7 таблицами, 55 рисунками. Список используемой литературы включает в себя 177 работ, в том числе 50 источников на русском языке и 127 на иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материал исследования. В основу работы положены результаты экспериментального исследования по моделированию этиленгликолевого оксалатного нефролитиаза, выполненные на 80 взрослых самцах крыс линии Wistar массой 200-280 г. Объектом для гистологического исследования служила почка крысы. Объектом для биохимического исследования послужил гомогенат почки животных.

Все животные были разделены на четыре группы по 20 крыс в каждой. Крысы первой группы находились в индивидуальных клетках при температуре 22±2°С на общевиварном рационе, получали

в качестве питья водопроводную воду, мочекаменная болезнь не инициировалась. Данная группа оставалась интактной и использовалась в качестве контрольной.

Животные второй группы на фоне стандартной диеты в течение 21 дня получали в качестве питья 1% водный раствор этиленгли-коля в свободном доступе, что индуцировало развитие оксалатного экспериментального нефролитиаза.

Животные третьей группы находились в условиях стандартной диеты в течение 42 дней и получали для питья 1% раствор этилен-гликоля, что вело к развитию оксалатного нефролитиаза.

Животные четвертой группы после 3-недельного потребления этиленгликоля на протяжении последующих 3 недель получали с пшцей а-токоферол в дозе 300 мг/кг. При этом животные продолжали потреблять этиленгликоль.

Методы исследования. Для светооптического изучения использовали образцы левых почек животных, полученные путём поперечного рассечения центрально расположенных участков в области лоханки. Гистологическую обработку тканей проводили по общепринятой методике, срезы толщиной 4-6 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, по MSB-методу, по ван Гизону, по Гор-дону-Свиту, по методу Яцковского А.Н., ставили ШИК-реакцию. Оценивали ядерно-цитоплазматические отношения (ЯЦО) в эпителии собирательных трубок. Для выявления отложений соединений кальция использовали импрегнацию серебром по методу Косса, с контролем реакции 0,1%-ным раствором соляной кислоты.

Для определения экспрессии митохондриальной супероксид-дисмутазы (СОД-2) и малонового диальдегида (МДА) проводили непрямой двухшаговый стрептавидин-биотиновый метод с контролем специфичности реакции. В качестве первичных антител использовали антитела к СОД-2 (G-20: sc-18504), 1:100 и антитела к МДА (F-25: sc-130087), 1:30 фирмы Santa Cruz (USA). Продукт реакции визуализировали с помощью системы Goat ABC Staining system: sc-2023 (Santa Cruz) и диаминобензидина (ДАБ).

Биохимическими методами изучали состояние оксидантной и антиоксидантной систем в гомогенате коркового вещества почки. В оксидантном статусе оценивали общую прооксидантную активность, концентрацию малонового диальдегида, и других тиобарбитурат-реактивных продуктов окисления жирных кислот. В антиоксидантной системе исследовали общую антиоксидантную

активность и активность ферментов - каталазы, супероксидцисму-тазы и глутатионпероксидазы.

Морфометрические исследования проводили с использованием графических пакетов ImageJ 1.43 (AbramofF, M.D. et al., 2004) и AxioVision 3.4LE (Carl Zeiss, Germany). Степень экспрессии малонового диальдегида и супероксиддисмутазы (в баллах - 1+, 2+, 3+) оценивали по интенсивности окрашивания ДАБ с применением программы анализа изображений ImageJ 1.43. Помимо этого, для удобства интерпретации результатов полученные данные рассчитывали по формуле:

100 xD

£% = 100-

256

где Е% - процент экспрессии, 256 - максимум интенсивности окраски, Dx - интенсивность окрашивания ДАБ.

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием пакета R версии 2.12 (лицензия GNU General Public License) для Microsoft Windows®. Результаты работы представлены в виде значений X (средняя арифметическая) ± SD (стандартное отклонение).

Оценку межгрупповых различий проводили по критерию Дан-на и Даннетта, сравнение качественных признаков — с помощью критерия хи-квадрат (х2). За статистически значимые различия показателей принимали значение р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В группе интактных животных наблюдалось нормальное гистологическое строение почки (Хэм А., 1983). Эпителиоциты почечных канальцев были сохранены на всем своем протяжении. В мозговом веществе собирательные трубки характеризовались равномерным просветом, их диаметр на вершине и по ходу почечного сосочка составлял в среднем 15,50±0,53 мкм (табл. 1), что соответствовало литературным данным (Наточин Ю.В., 1982; Грин Н., 1990). Кальциевые депозиты у крыс интакгной группы гистохимически не верифицированы. ЯЦО эпителиоцитов собирательных трубок у интактных животных составило 0,34±0,17.

При моделировании экспериментального оксалатного нефроли-тиаза отмечались дистрофические изменения эпителия канальцевой системы и собирательных трубок, формирование воспалительных

Таблица 1. Морфометрические показатели внутренней зоны мозгового вещества почки крыс (Х± ББ^

Морфометрические показатели Контроль Нефролитиаз Нефролитиаз на фоне применения а-токоферола

21 сут 42 сут

Размер просвета собирательных трубок, мкм 15,50±0,53 19,30±0,4Г 24,90±0,62* 16,40±1,56

Ядерно-цитоплазма-тическое отношение эпителиоцитов собирательных трубок 0,34±0,17 0,35±0,07 0,38±0,08* 0,34±0,07

Функциональная активность эпителиоцитов собирательных трубок (в %) 90,20±4,10 34,1(^7,08* 25,50±4,75* 7б,20±2,0Г

Примечание:' - р<0,05, статистическая значимость различий (по критерию Данна).

инфильтратов и развитие интерстициального фиброза. Выраженность патоморфологической перестройки обуславливалась длительностью эксперимента. Проведенное морфологическое исследование почек крыс с этиленгликолевой моделью оксалатного нефролитиаза позволило выявить в динамике характер распределения отложений кальция в мозговом веществе и связанные с этим особенности гистологической перестройки тканей почки.

В условиях моделирования оксалатного нефролитиаза в течение 21 суток в тканях почек отмечались патоморфологические изменения: в корковом веществе наблюдалась деформация почечных телец, расширение просвета капсулы почечного тельца. В эпителиоцитах извитых канальцев нефронов коры почки преобладали изменения по типу гиалиново-капельной дистрофии. В наружной зоне мозгового вещества почки наблюдались повреждение зпителиоцитов канальцев по типу гидропической и гиалиново-капельной дистрофии, слущивание эпителия и расширение просвета канальцевой системы. В эпителиоцитах собирательных трубок внутренней зоны мозгового вещества в области основания и средней трети почечного сосочка наблюдались сочетанные признаки гиалиново-капельной и

гидропической дистрофии, уплощение эпителиоцитов, расширение просвета собирательных трубок до 19,30±0,41 мкм с локализацией в нем слущенных эпителиоцитов и белковых цилиндров. Наблюдалось резкое снижение функциональной активности эпителиоцитов собирательных трубок, функционально активными оставались 34,10±7,08% клеток. ЯЦО эпителиоцитов собирательных трубок у животных на третьей неделе моделирования экспериментального оксалатного нефролитиаза составило 0,35±0,07 (см. табл.1). В отдельных случаях в области вершины почечного сосочка просвет собирательных трубок был резко расширен (до 43,8 мкм), в эпителии преобладали признаки повреждения по типу гиалиново-капельной дистрофии. В переходном эпителии чашечно-лоханочной системы прослеживалось уплощение, слущивание эпителия и обнажение клеток базального слоя. В области вершины и средней трети почечного сосочка субэпителиально и в интерстиции откладывались ШИК-позитивные соединения. Определялась очаговая интерстициальная и субэпителиальная лимфогистиоцитарная инфильтрация мозгового вещества почки, что опосредованно свидетельствовало о наличии местных условий для развития нефролитиаза.

Это подтверждается гистохимическим обнаружением в тканях почки отложений кальция, которые определялись в составе эпителия канальцев и собирательных трубок, в интерстиции мозгового вещества, в просветах собирательных трубок в составе белковых цилиндров. Характерной являлась локализация соединений кальция - преимущественно в области основания и средней трети почечного сосочка. В составе эпителия на вершине почечного сосочка количество микролитов было незначительным. В поле зрения определялись умеренные количества кальциевых депозитов (17,10±2,00), средним размером 9,20±0,43 мкм (табл. 2). Выявлялась инкрустация эпителия собирательных трубок соединениями кальция. В 10% наблюдений обнаруживались довольно крупные соединения кальция (размером до 3 8,5 мкм) с обтурацией просвета собирательных трубок, в этих случаях определялось еще большее снижение функциональной активности до 24,10±10,63%. Данные факты соответствуют литературным данным, согласно которым агрегаты кристаллов кальция вначале фиксируются на апикальных мембранах поврежденных эпителиальных клеток, затем транспортируются в интерстиций и концентрируются в основном на поверхности почечного сосочка, где и происходиг последующее камнеобразование (Khan S.R., 1995;

Таблица 2. Морфометрические характеристики процесса литогенеза у крыс с экспериментальной моделью оксалатного иефролитиаза (Х± вО)

Морфометрические показатели Контроль Нефролитиаз Нефролитиаз на фоне применения а-токоферола

21 сут 42 сут

Количество микролитов в поле зрения 17,10±2,00 27,40±3,22* 17,60±2,39

Размер кальциевых депозитов, мкм 9,20±0,43* 11,80±0,62* 5,40±0,28*

Примечание: * -р<0,05, статистическая значимость различий (по критерию Данна).

Evan А.Р., 2003, 2004). В областях отложения кальция выявлялись разрастания соединительной ткани с формированием перитубу-лярного и периваскулярного фиброза, преимущественно за счет коллагеновых волокон.

При моделировании оксалатного этиленгликолевого нефроли-тиаза в течение 42 суток в почках выявлялись более выраженные токсические изменения с поражением коркового и мозгового вещества, выраженными дистрофическими и некробиотическими изменениями эпителия канальцев и собирательных трубок.

В корковом веществе определялась деформация почечных телец с расширением просвета капсулы почечного тельца. Капиллярный клубочек имел дольчатое строение, наблюдалось полнокровие и пролиферация мезангиальных клеток. Наружный листок капсулы почечного тельца был утолщен, за счет увеличения количества коллагеновых волокон и отложения ШИК-положительных соединений. Отмечалось расширение проксимальных и дистальных канальцев со скоплениями белковых цилиндров в просвете. В клетках эпителия проксимальных канальцев выявлялось разрушение оксифильной щеточной каемки. В эпителиоцитах проксимальных и дистальных канальцев, а также собирательных трубках наружной зоны мозгового вещества наблюдались выраженные признаки сочетанных дистрофических изменений по типу гиалиново-капельной и гидро-пической дистрофии, что свидетельствовало о более выраженных патогистологических изменениях.

В эпителии собирательных трубок, прямых дистальных канальцев внутренней зоны мозгового вещества почки преимущественно отмечались признаки гидропической дистрофии. Наблюдалась десквамация эпителия. Определялось расширение просвета собирательных трубок до 24,90±0,62 мкм. В случае наличия крупных кальциевых камней просвет отдельных собирательных трубок был резко расширен (до 66,7 мкм). Функционально активными оставались 25,50±4,75% эпителиоцитов собирательных трубок. ЯЦО в клетках эпителия собирательных трубок у животных на шестой неделе моделирования экспериментального оксалатного нефроли-тиаза составило 0,38±0,08 (см. табл. 1).

Отложения кальция определялись в больших количествах, в среднем 27,40±3,22 в поле зрения, располагались на всем протяжении почечного сосочка и реже в канальцах коркового вещества. Обнаруживаемые кальциевые депозиты были сравнительно крупными, в среднем составляя 11,80±0,62 мкм (см. табл. 2). Характерна выраженная инкрустация эпителия тонких канальцев нефрона и собирательных трубок, что соответствовало обычной локализации кристаллов оксалата у человека и экспериментальных животных (Khan S.R., 1985,1997; de Water R„ 1996; Yamaguchi S„ 2005). Крупные соединения кальция (размером до 57,4 мкм), обтурирующие просвет собирательных трубок, обнаруживались в 40% случаев, при этом функциональную активность сохраняли лишь 15,20±2,04% эпителиоцитов собирательных трубок. Мононуклеарная инфильтрация почечного интерстиция носила более выраженный характер. В областях отложения кальция определялись более значительные разрастания соединительной ткани с увеличением количества кол-лагеновых волокон и формированием перитубулярного и перивас-кулярного фиброза. Под переходным эпителием почечного сосочка, интерстициально и в просвете собирательных трубок в составе белковых цилиндров определялось отложение ШИК-позитивных соединений с максимальной концентрацией в области вершины и средней трети почечного сосочка.

Морфологические изменения клеток, интерпретируемые как дистрофические, могут отражать как повреждение структур и нарушение их функций, так и интенсивную деятельность клетки, ее повышенную метаболическую активность. Описанные изменения, свидетельствующие о прогрессировании нефролитиаза и изменении функционального состояния клеток, ожидаемо усиливали оксидативный стресс.

Иммуногистохимическое исследование в группе интактных животных показало умеренно выраженную экспрессию суперок-сиддисмутазы (СОД-2) в цитоплазме эпителиальных клеток канальцев нефрона. Внутренняя и наружная зоны мозгового вещества характеризовались выраженной экспрессией СОД-2 эпителием собирательных трубок. Состояние оксидантной системы характеризовалось слабо выраженной экспрессией малонового диальдегида (МДА) эпителиоцитами канальцев нефрона, собирательных трубок, переходным эпителием чашечно-лоханочной системы.

В условиях моделирования нефролитиаза в течение 21 суток, при иммуногистохимическом исследовании тканей почек в целом определялось статистически значимое уменьшение экспрессии СОД-2 в эпителиоцитах собирательных трубок. Несмотря на незначительные колебания супероксидцисмутазы, выявляемые в гомогенате тканей почки, морфологически наблюдалось перераспределение участков с измененной экспрессией СОД-2. Так, во внутренней зоне мозгового вещества почки этот показатель оказался существенно сниженным, на 5,3% уступая цифрам интактных почек. А в эпителиоцитах собирательных трубок, обтурированных камнем, снижение экспрессии СОД-2 достигало максимума, и было на 7,5% ниже контрольных показателей. Но в ряде случаев, на некотором удалении от обтури-рующих собирательные трубки камней в эпителиоцитах отмечалось определенное усиление экспрессии СОД-2, что, вероятно, в сумме существенно и не изменило биохимические показатели.

На фоне ослабления экспрессии ферментов антиоксидантной защиты наблюдалось статистически значимое повышение содержания продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Определялась умеренно выраженная экспрессия малонового диальдегида в цитоплазме эпителиоцитов канальцев нефрона, собирательных трубок наружной и внутренней зоны мозгового вещества, переходном эпителии чашечно-лоханочной системы. При этом, в области отложения соединений кальция отмечалось выраженное увеличение экспрессии МДА как в цитоплазме клеток, так и в интерстиции.

Моделирование оксалатного этиленгликолевого нефролитиаза в течение 42 суток выявляло в целом существенное снижение экспрессии маркеров антиоксидантной защиты. В цитоплазме эпителиоцитов собирательных трубок данный показатель уменьшался еще более и статистически значимо отличался от показателей ин-такгной группы на 5,7%. Экспрессия продуктов ПОЛ в тканях почки

статистически значимо превышала показатели интактной группы. В эпителиоцитах канальцев нефрона, собирательных трубок наружной зоны мозгового вещества наблюдалась умеренно выраженная экспрессия малонового диальдегида. Выраженная экспрессия МДА эпителиоцитами собирательных трубок определялась во внутренней зоне мозгового вещества почки, ее значения статистически значимо превышали показатели интактной группы на 3,5%.

Снижение экспрессии митохондриальной супероксиддисмутазы в местах интенсивного литогенеза указывает на возможное исчерпание ферментов системы антиоксидантной защиты. Кроме того, не следует исключать возможность снижения экспрессии митохон-дриальных антиоксидантных ферментов, обусловленного дистрофическими изменениями эпителиоцитов вблизи крупных камней и подавлением их общей функциональной активности. Увеличение в этой ситуации экспрессии тканями почек малонового диальдегида указывает на активацию процессов свободно-радикального окисления и ослабление антиоксидантной защиты в почках в ходе моделирования экспериментального оксалатного нефролитиаза.

Работы, выполненные на клеточных культурах и моделях нефролитиаза у крыс, подтверждают, что образование кристаллов кальция в канальцах нефрона ведет к развитию окислительного стресса, следствием которого является накопление в крови, моче и клетках канальцев продуктов свободно-радикального окислении, перекисного окисления липидов и образующих их ферментов (Muthukumar А., 1997; Huang H.S., 2002; Thamilselvan S., Tungsanga К., 2005; Khan S.R., 2005).

В условиях применения а-токоферола в эксперименте определялась меньшая выраженность патогистологической перестройки структур почки. В корковом веществе наблюдались умеренно выраженные изменения эпителия проксимальных и дистальных канальцев по типу гиалиново-капельной дистрофии. Переходный эпителий чашечно-лоханочной системы был сохранен. В эпителиоцитах собирательных трубок коркового и мозгового вещества также отмечались признаки гиалиново-капельной дистрофии. Просвет собирательных трубок характеризовался относительной равномерностью в различных полях зрения, составляя в среднем 16,40±1,56 мкм (см. табл. 1). В просвете некоторых собирательных трубок располагались одиночные слущенные эпителиоциты, белковые цилиндры. Функциональную активность сохраняли 76,20±2,01%

клеток эпителия собирательных трубок. ЯЦО эпителиоцитов собирательных трубок в условиях применения а-токоферола составило 0,34±0,07. Отмечалась умеренно выраженная лимфогистиоцитарная инфильтрация интерстиция почечного сосочка. Наблюдалось незначительное увеличение интерстициальной соединительной ткани.

В мозговом веществе почки определялось умеренное количество (до 17,60±2,39 в поле зрения) соединений кальция, располагавшихся относительно равномерно по всей площади почечного сосочка, преимущественно в составе эпителия собирательных трубок и в их просвете, среди слущенных эпителиоцитов. Кальциевые депозиты были мелкие, их средний размер составил 5,40±0,28 мкм (см. табл. 2). Крупных соединений кальция, обтурировавших просвет канальцев и собирательных трубок, или инкрустации их эпителия не обнаруживалось.

Иммуногистохимическое исследование почек крыс на фоне применения а-токоферола показало умеренно выраженную экспрессию СОД-2 эпителиоцитами собирательных трубок, сопоставимую с показателями интактной группы. Во внутренней зоне мозгового вещества этот показатель оказался даже существенно выше, на 2,2% превышая показатели интакгных почек. В переходном эпителии, выстилающем почечную лоханку, определялась слабая экспрессия СОД-2. При использовании антиоксиданта (а-токоферола) выраженность экспрессии СОД-2 во всех отделах мозгового вещества статистически значимо (на 12,5%) превышала показатели животных с экспериментальной моделью оксалатного нефролитиаза.

У животных на фоне блокирования процессов оксидативного повреждения а-токоферолом выявлялось снижение содержания продуктов ПОЛ. Несмотря на то, что экспрессия МДА отмечалась в эпителиоцитах канальцев нефрона, собирательных трубок, переходного эпителия чашечно-лоханочной системы, элементах интерстиция, ее выраженность была сопоставима с таковой в интактной группе, и существенно ниже, чем у животных с экспериментальным оксалатным нефролитиазом.

При биохимическом исследовании, обнаруживалось, что в физиологических условиях в эпителиоцитах почечных канальцев и собирательных трубок превалировали показатели оксидантного статуса. Состояние оксидантной системы почек характеризовалось следующими показателями: общая прооксидантная активность составила 54,30±2,36%, а концентрация малонового диальдегида и

других тиобарбитуратреакгивных продуктов (ТБРП) окисления жирных кислот 7,30±0,40 мкМ. В показателях антиоксидантной системы общая антиоксидантная активность составила 20,90±2,69%, активность ферментных систем характеризовалась показателями активности супероксиддисмутазы - 19,60±1,85%, каталазы— 13,20±0,66 и глутатионпероксидазы - 45,20±1,89%. Вероятно, повышенный уровень активных форм кислорода в почках объясняется высоким уровнем метаболизма и прооксидантами, выводимыми с мочой. Известно, что изначально в почках антиоксидантная активность ниже, чем в крови, что и определялось в нашем исследовании.

На фоне моделирования нефролитиаза в течение 21 суток в почках наблюдалась мощная активация свободно-радикального окисления, что проявилось увеличением прооксидантной активности почек на 10% (с 54,30±2,36% до 66,80±1,67%). При этом концентрация малонового диальдегида и других ТБРП перекисного окисления липидов возросла почти в два раза с 7,30±0,40 мкМ до 12,90±0,30 мкМ. Изменения в антиоксидантном статусе заключались в основном в снижении активности глутатионпероксидазы на 33% (с 45,20±1,89% до 30,10+1,85%), хотя общая антиоксидантная активность тканей почки, выявляемая биохимическими методами, существенно не менялась (20,90±2,69% у интактных животных против 18,20±1,73% в группе 2). Снижение уровня глутатионпероксидазы, часто встречающееся изменение среди антиоксидантных ферментов, выявленное в экспериментальных работах и в клинике (ТЬаппвеЬап 8., 1999, 2003; 8е1уап Я, 2002; Тш^апда К., 2005). Вместе с тем наблюдались незначительные колебания показателей каталазы (15,50±1,06%) и супероксиддисмутазы (18,40±1,90%), хотя в ряде экспериментов было показано снижение активности данных ферментов (8е1уап Я., 2002; ТЬатПзеуап 5., 2003).

В группе животных с экспериментальным оксалатным нефро-литиазом, моделируемым в течение 42 суток, в гомогенате тканей почек наблюдалось развитие окислительного стресса. Отмечалось увеличение концентрации малонового диальдегида и других ТБРП (до 24,10±0,62 мкМ), что двукратно превышало показатели группы животных с нефролитиазом, моделируемым в течение 21 суток. Также определялся продолжающийся рост показателей общей прооксидантной активности, который составил 78,20±2,24%. В антиоксидантной системе наблюдались менее существенные изменения. Активность глутатионпероксидазы оставалась на том же

уровне (29,90±2,45%), что и в группе животных с нефролитиазом, моделируемым в течение 21 суток. Несколько снижалась активность каталазы на 11,7% по сравнению с группой 2, более существенно падала активность супероксидисмутазы на 37%, отличаясь от показателей животных группы 2. Параллельно определялось нарастание общей антиоксидантной активности гомогената почек в 2,5 раза (45,50±3,26%).

Применение а-токоферола на фоне экспериментального нефро-литиаза ослабляло процессы свободно-радикального окисления. После проведенного курса отмечалось резкое снижение концентрации малонового диальдегида и других ТБРП до 2,90±0,30 мкМ, что было в 2,5 раза ниже показателей интактных животных. На этом фоне наблюдалось существенное уменьшение общей проок-сидантной активности (54,20±3,89%) по сравнению с животными, получавшими этиленгликоль (группа 2, 3) до уровня показателей интактных животных.

В системе антиоксидантной защиты определялось нарастание значений общей антиоксидантной активности (38,40±4,18%), что в 1,8 раза больше показателей группы контроля. Изменения активности ферментной системы антирадикальной защиты проявлялись в виде снижения показателей глутатионпероксидазы в 2,2 раза, су-пероксиддисмутазы на 20%. Активность каталазы соответствовала значениям группы контроля (11,80±1,05%).

ВЫВОДЫ

1. Перестройка почек при экспериментальном нефролитиазе протекает в виде стереотипных структурно-функциональных реакций, выражающихся развитием дистрофических изменений эпителия канальцев нефронов и собирательных трубок, со снижением их функциональной активности, развитием мононуклеарной инфильтрации и фиброзных изменений интерстиция.

К исходу 21 суток экспериментального оксалатного нефроли-тиаза в эпителиоцитах собирательных трубок и канальцев нефрона наружной зоны мозгового вещества почки, в основании и средней трети почечного сосочка обнаруживаются сочетанные изменения по типу гиалиново-капельной и гидропической дистрофии. На верхушке почечного сосочка преобладают гиалиново-капельная дистрофия,

и отмечается резкое расширение просвета собирательных трубок.

К исходу 42 суток экспериментального оксалатного нефролитиа-за на фоне стереотипных изменений в эпителии канальцев нефронов и собирательных трубок преобладают признаки гидропической дистрофии. Вокруг отложений соединений кальция обнаруживаются значительные разрастания перитубулярного и периваскулярного фиброза.

2. На ранних стадиях (21 сутки) моделирования оксалатного нефролитиаза обнаруживаются мелкие кальциевые микролиты, преимущественно в области основания и средней трети почечного сосочка, в 10% случаев определяются крупные камни, обтурирую-щие просвет собирательных трубок с локализацией в наружной зоне мозгового вещества почки. На 42 сутки эксперимента наблюдается перераспределение депозитов кальция: многочисленные мелкие кальциевые отложения локализуются по всей площади почечного сосочка с преимущественным расположением в области средней трети и вершины сосочка. Крупные соединения кальция, обтури-рующие просвет собирательных трубок, обнаруживаются в 40% случаев в области вершины, средней трети, основания почечного сосочка и в наружной зоне мозгового вещества.

3. При моделировании экспериментального оксалатного нефролитиаза в почках крыс отмечаются морфологические признаки активации процессов оксидативного повреждения тканей и клеток и ослабления функционирования системы ферментной антиок-сидантной защиты. Более всего эти изменения выражены вблизи микролитов, обтурирующих собирательные трубки, что по своему местоположению соответствует зонам максимальной патогистоло-гической перестройки тканей почки.

4. Развитие экспериментального оксалатного нефролитиаза сопровождается активацией свободно-радикального окисления в почках с ослаблением антиоксидантной защиты, обусловленным угнетением активности глутатионпероксидазы.

5. Применение а-токоферола приводит к снижению выраженности структурной перестройки почек, обратимости морфологических изменений мозгового вещества почки, вызывает уменьшение размеров и числа соединений кальция, уменьшает оксидативное повреждение тканей и клеток и сохраняет систему ферментной антиоксидантной защиты в условиях этиленгликолевой модели оксалатного нефролитиаза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При экспериментальном оксалатном нефролитиазе необходимо учитывать, что процесс камнеобразования в почках сопровождается активацией свободно-радикального окисления, угнетением ферментных систем антиоксидантной защиты.

2. При экспериментальном оксалатном нефролитиазе целесообразно использовать а-токоферол для ослабления оксидативного повреждения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Талалаев C.B., Лепилов A.B., Булгаков В.П., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В., Лель Н.В. (Мотина Н.В.), Мотин Ю.Г. Обратимость структурных изменений мозгового вещества почки крыс, вызванных субхроническим приемом этиленгликоля // Нефрология. - 2008. -№1.-С. 53-57.

2. Мотина Н.В., Лепилов A.B., Талалаев C.B., Мотин Ю.Г. Влияние длительного применения препарата Маакии амурской на течение экспериментального нефролитиаза // Материалы Второй международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» / КГМУ, Центрально-Черноземный научный центр РАМН, Общероссийская общественная организация «Российский Союз молодых ученых» / Под ред. проф. В.А. Лазаренко, проф. П.В. Калуцкого. - Курск, 2009. - С.127-129.

3. Мотина Н.В., Лепилов A.B., Талалаев C.B., Мотин Ю.Г. Морфологическая характеристика третьей недели оксалатного нефролитиаза // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. - 2009. - № 4. - С. 639-641.

4. Мотина Н.В., Лепилов A.B. Перестройка почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе // 100-летие Российского общества патологоанатомов: Материалы Всероссийской конференции с международным участием. - СПб: «Типография «Береста», 2009.-С. 220-221.

5. Мотина Н.В., Брюханов В.М., Азарова О.В., Жариков А.Ю., Талалаев C.B., Булгаков В.П., Федореев С.А., Мищенко Н.П., Мотин Ю.Г. Морфологические изменения в почках крыс при эксперимен-

тальном нефролитиазе на фоне длительного применения клеточной культуры Маакии амурской // Нефрология. - 2009. - Т. 13, № 4.

- С. 75-79.

6. Мотина Н.В. Морфологическая перестройка мозгового вещества почки на фоне субхронического воздействия этиленгликоля // Двенадцатая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина». - Санкт-Петербург: Типография Издательства СПбГУ, 2009.-С. 255-256.

7. Мотина Н.В. Характеристика ранних сроков экспериментального нефролитиаза // Санкт-Петербургские научные чтения - 2009: тезисы III международный молодежный медицинский конгресс.

- Санкт-Петербург. - С. 195.

8. Мотина Н.В., Талалаев C.B., Лепилов A.B., Полежаева С.А., Мотин Ю Г. Морфологическая характеристика этиленгликолевого нефролитиаза// VI Международная научно-практическая конференция «Окружающая среда и здоровье». - Пенза, 2009. - С. 87-90.

9. Мотина Н.В., Зверев Я.Ф., Лепилов A.B., Лампатов В.В., Жариков А.Ю., Талалаева О.С. Оксидативное повреждение почек при экспериментальном оксалатном нефролитиазе // Нефрология.

- 2010. - Т. 14, № 1. - С. 68-73.

10. Мотина Н.В., Мотин Ю.Г. Последовательность структурной перестройки почки в ходе моделирования экспериментального нефролитиаза // Научный вестник Ханты-Мансийской государственной медицинской академии. -2010. — № 1-2. - С. 36-37.

11. Жариков А.Ю., Талалаева О.С., Мотина Н.В., Кудинов A.B. К механизму образования кальциевых депозитов при экспериментальном нефролитиазе // «Молодежь - Барнаулу»': материалы XI научно-практической конференции молодых ученых (17-20 ноября 2009 г.): в 2 т./ отв. Ред. Б.А. Черниченко. - Барнаул, 2010. - Т. 2. -С. 118-119.

12. Мотина Н.В., Жариков А.Ю., Талалаева О.С., Мотин Ю.Г. Морфологические и биохимические признаки оксидативного повреждения в условиях развития экспериментального нефролитиаза // Материалы П1 съезда нефрологов юга России «Актуальные проблемы региональной нефрологии». - Ростов-на-Дону, 2010. - С. 111-113.

13. Мотина Н.В., Лепилов A.B., Жариков А.Ю., Мотин Ю.Г. Структурная перестройка почки на ранних сроках эксперименталь-

ного нефролитиаза // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. - 2010. - № 4. - С. 360-362.

14. Брюханов В.М., БулгаковВ.П., Жариков А.Ю., Азарова О.В., Талалаева О.С., Мотина Н.В.,. Григорук Е.В. Влияние культуры клеток Маакии амурской на течение экспериментального нефролитиаза //Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2010. - № 5. - С. 125-133.

15. Жариков А.Ю., Талалаева О.С., Азарова О.В., Кудинов A.B., Мотина Н.В. Фармакологическая коррекция оксидативного стресса при экспериментальном нефролитиазе // VII съезд научного общества нефрологов России. Сборник тезисов. - Москва, 2010. - С.

16. Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лампатов В.В., Жариков А.Ю., Кудинов A.B., Мотина Н.В. Влияние питьевых режимов на движущие силы кристаллизации при экспериментальном нефролитиазе // Урология. - 2011. - № 1. - С. 6-12.

17. Мотин Ю.Г., Жариков А.Ю., Брюханов В.М., Зверев Я.Ф., Лепилов А.В, Лампатов В.В., Мотина Н.В. Оксидативный стресс как один из факторов повреждения на ранних сроках экспериментального нефролитиаза // Морфолот. - 2011. - T.V, № 1. - С. 33-38.

164-166

Соискатель

Н.В. Мотина

Подписано в печать 17.06.2011. Формат 60x84/16. Гарнитура Тайме. Бумага Zoom plus. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 60. Отпечатано в типографии ОАО "НИИ систем" Новосибирск-58, ул. Русская, 39. т. 333-37-39

1 5 227

2011159276

2011159276

-Актуальность темы: В настоящее время мочекаменная болезнь является, одним из социально значимых заболеваний вследствие высокой распространенности, которая составляет 30-45% в составе урологической заболеваемости [18]. В» экономически развитых странах мира от 5 до 10% населения страдает мочекаменной болезнью (МКБ) [43, 69, 71, 122, 134, 161]. В Российской Федерации также отмечается продолжающийся рост заболеваемости во всех возрастных группах, что негативно отражается на качестве жизни больных [3, 32]. Регистрируются высокие показатели заболеваемости мочекаменной болезнью в регионах Дальнего Востока, Восточной Сибири, районах Крайнего Севера [3]. Продолжается увеличение частоты заболеваемости уролитиазом в детском возрасте. По данным Госкомстата в последние пять лет ежегодно выявляется более 1500 новых случаев этого заболевания [16, 29, 32, 48, 152]. У большинства пациентов нефролитиаз выявляется в наиболее трудоспособном возрасте 30-50 лет и имеет выраженнуЮ'Склонность к рецидивированию [31, 43, 44, 45].

Причины и механизмы возникновения МКБ продолжают оставаться актуальными и все еще недостаточно разрешенными проблемами. Многочисленные теории объясняют лишь отдельные звенья в большой цепи факторов, приводящих к нефролитиазу. В настоящее время плохо изучены начальные стадии формирования нефролитиаза, так как у человека данные изменения протекают в большинстве случаев бессимптомно. Несмотря на значительные успехи, полученные в лечении мочекаменной болезни, все они связаны с оперативными вмешательствами, на стадии уже образовавшихся конкрементов, что обусловливает риск осложнений, длительный восстановительный период и не избавляют больных от рецидивов, которые возникают в среднем у 10% в течение одного года, в интервале до пяти лет -у 35%, в пределах десяти лет - у 50% пациентов [87, 138]. Так что, вопросы консервативного лечения, профилактики и метафилактики мочекаменной болезни остаются весьма актуальными, а выявление отдельных звеньев патои морфогенеза является существенным фактором, позволяющим выработать обоснованную тактику консервативного лечения данной патологии. Однако, доклиническое исследование лекарственных препаратов возможно лишь в условиях адекватных экспериментальных моделей. Существуют разнообразные методики, позволяющие воспроизвести начальные стадии нефролитиаза. Наиболее используемой и адекватной является модель этиленгликолевого нефролитиаза, которая позволяет воспроизвести оксалатный нефролитиаз, встречающийся у человека в 70-80% случаев [13, 55,56,88].

Установлено, что оксалат-ионы являются субстанцией, способной индуцировать тканевые реакции в эпителии дистальных отделов нефронов и собирательных трубок. Воспалительные изменения, возникающие в них, вероятно, являются результатом повреждающего воздействия кальция оксалата. Это создает условия для адгезии кристаллов солей и формирования очага кристаллизации с последующей активизацией процессов агрегации и образования депозита. Продолжение роста и увеличение камня отмечается уже в просвете чашечно-лоханочной системы вплоть до значимых размеров, что сопровождается определенной клинической симптоматикой.

Таким образом, по современным представлениям важным фактором формирования мочевых камней является повреждение тканей почек. Весьма вероятно, что такие повреждения, как и отложения солей кальция, должны индуцировать тканевые реакции в эпителии дистальных отделов нефронов и собирательных трубок, в частности - активацию процессов свободно-радикального окисления. В почках первичное отложение кальция происходит в митохондриях и фаголизосомах, обладающих высокой активностью фосфатаз. В интерстиции соли кальция первично выпадают по ходу базальных мембран сосудов и волокнистых структур. При этом неизменно возникает оксидативное повреждение, вероятно, вносящее существенный вклад в процесс формирования кальциевых депозитов. Исходя из вышеизложенного, весьма привлекательной выглядит идея ослабления или предотвращения развития нефролитиаза в условиях подавления реакций свободнорадикального окисления.

-Цель исследования. Выявить особенности структурной перестройки почек в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза с учетом процессов вероятного оксидативного повреждения.

-Задачи исследования.

1. Изучить общие и частные закономерности морфологических изменений в почках на различных сроках развития экспериментального нефролитиаза.

2. Выявить гисто-топографические особенности образования кальциевых микролитов и динамику их дальнейших превращений в тканях почки на различных сроках развития экспериментального нефролитиаза.

3. Определить особенности экспрессии маркеров оксидативного повреждения и антиоксидантной защиты в тканях почки и изменение показателей оксидантного и антиоксидантного статуса почек в условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза.

4. Изучить морфологические особенности экспериментального оксалатного нефролитиаза в условиях антиоксидантной терапии.

-Научная новизна. Показаны специфические структурно-метаболические и морфометрические изменения коркового и мозгового вещества почки при воздействии этиленгликоля, а также в условиях применения витамина Е с учетом особенностей экспрессии маркеров оксидативного повреждения и антиоксидантной защиты.

-Практическая значимость работы.

Морфологическое и иммуногистохимическое исследования тканей почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе способствует выявлению определенных структурно-метаболических особенностей перестройки органа на начальных стадиях мочекаменной болезни. Выявление оксидативного повреждения позволит оценить его роль при начальном развитии оксалатного нефролитиаза. В связи с тем, что при оксалатном экспериментальном нефролитиазе происходит активация свободно-радикального окисления с угнетением ферментных систем антиоксидантной защиты, в лечебной тактике оправдано использовать антиоксидантную терапию для ослабления оксидативного повреждения.

-Положения, выносимые на защиту.

1. В условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза превалируют дистрофические изменения эпителия канальцев нефронов и собирательных трубок по типу гиалиново-капельной и гидропической дистрофии, происходит расширение просвета канальцев и собирательных трубок, отмечается мононуклеарная инфильтрация интерстиция, разрастание соединительной ткани и формирование перитубулярного и периваскулярного фиброза, что создает морфологическую основу для интенсивного литогенеза.

2. При моделировании оксалатного нефролитиаза в зависимости от сроков эксперимента отмечаются гистотопографические особенности отложения соединений кальция, что проявляется перераспределением формирующихся кальциевых микролитов из области основания и средней трети почечного сосочка в область средней трети и вершины сосочка.

3. В условиях экспериментального оксалатного нефролитиаза происходит активация свободно-радикального окисления и ослабление функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты в зонах интенсивного лиогенеза.

4. Ослабление проявлений оксидативного повреждения почки при экспериментальном оксалатном нефролитиазе наблюдается при проведении антиоксидантной терапии.

-Апробация работы. Результаты работы доложены на Второй международной дистанционной научной конференции «Инновации в медицине» (Курск, 2009), на Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 100-летию Российского общества патологоанатомов (Санкт-Петербург, 2009), на XII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2009), на III международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения» (Санкт-Петербург, 2009), на XI научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь - Барнаулу» (Барнаул, 2009), на VI Международной научно-практической конференции «Окружающая среда и здоровье» (Пенза, 2009), на III съезде нефрологов юга России «Актуальные проблемы региональной нефрологии» (Ростов-на-Дону, 2010), на VII съезде научного общества нефрологов России (Москва, 2010).

-Публикации. По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ, в том числе 7 статей в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией.

выводы

1. Перестройка почек при экспериментальном нефролитиазе протекает в виде стереотипных структурно-функциональных реакций, выражающихся дистрофическими изменениями эпителия канальцев нефронов и собирательных трубок, изменением их функциональной активности, развитием мононуклеарной инфильтрации и фиброзных изменений интерстиция.

1.1. К исходу 21 суток экспериментального оксалатного нефролитиаза в эпителиоцитах собирательных трубок и канальцев нефрона наружной зоны мозгового вещества почки, в основании и средней трети почечного сосочка обнаруживаются сочетанные изменения по типу гиалиново-капельной и гидропической дистрофии. На верхушке почечного сосочка преобладают гиалиново-капельная дистрофия с резким расширением просвета собирательных трубок.

1.2. К исходу 42 суток экспериментального оксалатного нефролитиаза на фоне стереотипных изменений в эпителии канальцев нефронов и собирательных трубок преобладают признаки гидропической дистрофии. Вокруг отложений соединений кальция обнаруживаются значительные разрастания перитубулярного и периваскулярного фиброза.

2. На ранних стадиях (21 сутки) моделирования оксалатного нефролитиаза обнаруживаются мелкие кальциевые микролиты, преимущественно в области основания и средней трети почечного сосочка, в 10% случаев определяются крупные камни, обтурирующие просвет собирательных трубок с локализацией в наружной зоне мозгового вещества почки. В динамике (на 42 сутки) происходит перераспределение депозитов кальция: многочисленные мелкие кальциевые отложения локализуются по всей площади почечного сосочка с преимущественным расположением в области средней трети и вершины сосочка. Крупные соединения кальция, обтурирующие просвет собирательных трубок, обнаруживаются в 40% случаев в области вершины, средней трети, основания почечного сосочка и в наружной зоне мозгового вещества.

3. В ходе моделирования экспериментального оксалатного нефролитиаза в почках крыс отмечаются морфологические признаки активации процессов оксидативного повреждения тканей и клеток и ослабления функционирования системы ферментной антиоксидантной защиты. Более всего эти изменения выражены вблизи микролитов, обтурирующих собирательные трубки, что по своему местоположению соответствует зонам максимальной патогистологической перестройки тканей почки.

4. Развитие экспериментального оксалатного нефролитиаза сопровождается активацией свободно-радикального окисления в почках с ослаблением антиоксидантной защиты, обусловленным угнетением активности глутатионпероксидазы.

5. Применение антиоксидантной терапии (а-токоферола) приводит к снижению выраженности структурной перестройки почек, обратимости морфологических изменений мозгового вещества почки, вызывает уменьшение размеров и числа соединений кальция, уменьшает оксидативное повреждение тканей и клеток и сохраняет систему ферментной антиоксидантной защиты в условиях этиленгликолевой модели оксалатного нефролитиаза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При оксалатиом экспериментальном нефролитиазе необходимо учитывать, что процесс камнеобразования в почках сопровождается активацией свободно-радикального окисления, угнетением ферментных систем антиоксидантной защиты.

2. При нефролитиазе рационально использование в комплексе лечебных мероприятий препаратов антиоксидантной направленности, препятствующих развитию оксидативного повреждения.