Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Структурно-метаболические статус и функциональные особенности мононуклеаров периферической крови при инфекционном мононуклеозе

На правах рукописи

РГБ ОД

2 О НЮН ¿002

Наследникова Ирина Олеговна

СТРУКТУРНО-МЕТАБОЛИЧЕСКИЙ СТАТУС И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МОНОНУКЛЕАРОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ИНФЕКЦИОННОМ МОНОНУКЛЕОЗЕ

14.00.16 - патологическая физиология 14.00.10 - инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск - 2002

Работа выполнена в Сибирском государственном медицинском университете МЗ РФ и в научно-исследовательском институте фармакологии ТНЦ СО РАМН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ

Новицкий В В.

кандидат медицинских наук

Уразова О. И.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Агафонов В.И. Степовая Е.А.

Ведущая организация: Новосибирская государственная медицинская академия

заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН по адресу: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3. .

С диссертацией можно ознакомиться библиотеке НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3).

Автореферат разослан « » ¡Х^Лг^^- 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

МЗРФ

Защита диссертации состоится <(

»

2002 г. в_часов на

кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

' ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Несмотря на несомненные успехи, достигнутые в борьбе с инфекционными болезнями, значимость инфекционного фактора в патологии не только не снижается, но и проявляет тенденцию к нарастанию [Imai S., 1990; Покровский В.И., Малеев В.В.,1999].

В частности, в последние годы все большее внимание исследователей привлекает инфекционный мононуклеоз (ИМ), что обусловлено ростом заболеваемости данной инфекцией и своеобразным полиморфизмом ее симптоматики, часто приводящим к диагностическим ошибкам [Нисевич Н.И. и соавт., 1975; Рахманова А.Г. и соавт., 1995; Палеева М.П., 1996; Knowles D.M. е. а., 1995; Cozard J., 1996; Покровский В.И. и соавт., 2000].

К настоящему времени установлено, что возбудителем ИМ в большинстве случаев является относящийся к семейству герпесвирусов вирус Эпштейна-Барр (ЭБВ). Синдром мононуклеоза могут вызывать также вирусы цитомегалии, простого герпеса, краснухи, гриппа, в редких случаях - вирус гепатита В, аденовирусы, Toxoplasma gondii [Carney W.P., Hirch M.S. e. a., 1981; Evans A.S., 1978; Гаспарян M.O., 1979; Imai S., 1990; Lewin N. e.a., 1990; Баринский И.Ф., 1994; Мазурина M.A. и соавт., 1996; Каракас Н.В., 1998; Исаков В.А. и соавт., 1999].

За последние годы накоплены факты, свидетельствующие о том, что наиболее достоверным диагностическим критерием ИМ является картина крови. Программированное изучение формулы белой крови у детей, больных ИМ, позволяет считать наиболее характерным признаком данного заболевания следующую триаду симптомов: умеренный лейкоцитоз, мононуклеоз и наличие «атипичных мононуклеаров» (AM) [Кассирский И.А., 1971; Гаспарян М.О., 1975; Lewin N. e.a., 1990; Ронин B.C., 1992; Поляков В.Е. и соавт., 1998; Учайкин В.Ф., 1999].

Своеобразным маркером ИМ служат так называемые «атипичные мононуклеа-ры», представляющие собой трансформированные под действием антигена клетки крови, вопрос о происхождении которых до настоящего времени остается открытым. Установлено, что возбудитель ИМ способен поражать не только В-лимфоциты, служащие «резервуаром инфекции», но и Т-лимфоциты, моноциты, нейтрофилы [Evans A.S., 1978; Любезная Е.Б., 1991; Ронин B.C., 1992, Cozard J., 1994; Wong K.F., 1994]. Интерес к изучению AM возрос, когда при ИМ были выявлены повышенная продукция иммуноглобулинов и цитохимические изменения, свидетельствующие о своеобразии данных элементов в сравнении с лимфоцитами и моноцитами у здоровых лиц [Чирешктш Н.М., 1973; Козинец Г.И., 1978J.

Стимулированная возбудителем ИМ пролиферация лимфоидных элементов, а также появление в крови AM ведут к выраженным сдвигам в системе белой крови. В мононуклеарах происходят глубокие изменения метаболических процессов, отражающихся на структурно-функциональных свойствах клеток [Положенцев С.Д., 1992; Perez-Bias М. е.а., 1992; Phatak P.D. е. а., 1998; Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999].

Одной из актуальных проблем изучения ИМ является установление среди отдельных патогенетических звеньев ведущего механизма, определяющего исход заболевания. Поскольку для ИМ характерна внутриклеточная локализация возбудителя, то дальнейшие достижения в терапии заболевания возможны только на основе изучения клеточных механизмов иммунопатогенеза ИМ. Однако необходимо отметить, что данные литературы о структурно-функциональных свойствах клеток крови

при ИМ крайне немногочисленны и носят, как правило, сугубо описательный характер. Данные же, касающиеся изменений в системе крови при ИМ в динамике течения заболевания, в доступной литературе нами обнаружены не были. Вместе с этим, изучение особенностей структуры, метаболизма и функционального состояния клеток крови при ИМ в динамике течения и в отдаленные сроки после болезни несомненно расширит представление о патогенезе заболевания и, возможно, послужит основой для разработки более эффективных методов диагностики и коррекции нарушений в системе крови при данной патологии.

Цель исследования: Установить структурно-метаболические и функциональные особенности мононуклеаров периферической крови у детей, страдающих ин-. фекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в динамике течения и в отдаленном периоде после заболевания.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать количественные показатели белой крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные сроки течения заболевания и в отдаленном периоде после болезни.

2. Дать характеристику структурно-метаболического статуса и функциональных особенностей мононуклеаров периферической крови у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в динамике течения и в отдаленном периоде после болезни.

3. Установить особенности и оценить степень изменений структурно-метаболического и функционального состояния мононуклеаров периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии в зависимости от возраста и сроков обследования больных.

4. Оценить показатели структурно-метаболического и функционального состояния «атипичных мононуклеаров» в сравнении с аналогичными показателями в лимфоцитах и моноцитах у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, страдающих инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в динамике течения и в отдаленном периоде после заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Изменения структурно-метаболического статуса лимфоцитов и моноцитов периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии имеют максимальную степень выраженности в острую фазу заболевания и сохраняются в отдаленные сроки (через 16-18 месяцев) после болезни. К характерным изменениям структурно-метаболических свойств лимфо- и моноцитарных клеток относятся увеличение содержания нуклеиновых кислот и липидов, а также повышение дегидрогеназной активности.

2. У детей в возрасте 7-14 лет, страдающих инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии изменения структурно-метаболических и функциональных свойств мо-

нонуклеаров периферической крови носят более выраженный характер, чем у пациентов в возрасте 3-6 лет.

3. «Атипичные мононуклеары», выявляемые в периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии, в динамике течения и в отдаленном периоде после болезни по показателям структурно-метаболического статуса соответствуют лимфоцитарным клеткам.

Научная новизна полученных результатов. С использованием широкого комплекса современных методов изучения структурно-метаболического и функционального статуса мононуклеаров периферической крови впервые дана комплексная оценка качественного состояния лимфоцитов, моноцитов и «атипичных мононуклеаров» у детей, страдающих инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии в различные сроки течения заболевания и в отдаленном периоде после болезни. Установлено, что у детей, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии регистрируются выраженные изменения структурно-метаболического и функционального состояния мононуклеаров. Указанные изменения сохраняются в фазу клинического выздоровления и через 16-18 месяцев после перенесенного инфекционного мононуклеоза. В результате цитохимического изучения мононуклеаров периферической крови установлено, что у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, страдающих инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии «атипичные мононуклеары» по показателям структурно-метаболического статуса соответствуют лимфоцитам.

Область применения. Полученные знания фундаментального характера, касающиеся структурно-метаболического статуса и функционального состояния мо-нонуклеарных клеток при инфекционном мононуклеозе в различные сроки течения и в отдаленном периоде после болезни, могут служить не только основой для дальнейшего изучения патогенетических механизмов инфекционного мононуклеоза, но и для разработки новых способов коррекции изменений в системе крови при данной патологии.

Реализация и апробация работы. Основные положения диссертации докладывались и обсуждались на 1У-й межвузовской конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Наука и образование» (Томск, 2000 г.), на УШ-й конференции общества гастроэнтерологов (Томск, 2000 г.), на 1-м и Н-м конгрессах молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» (Томск, 2000, 2001 гг.) и на научных семинарах кафедры патологической физиологии Сибирского государственного медицинского университета (2000-2002 гг.).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 3 статьи в центральных реферируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 247 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы, включающего 340 источников, из которых 241 отечественных и 99 иностранных. Диссертация иллюстрирована 13 таблицами и 36 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе обобщены и проанализированы результаты изучения структурно-метаболического статуса и функциональных особенностей мононуклеаров периферической крови у 119 детей в возрасте от 3 до 14 лет, больных инфекционным мо-нонуклеозом. Больные были госпитализированы в инфекционное отделение 3-й городской больницы и детскую инфекционную больницу им. Г.Е. Сибирцева г. Томска. Диагноз ИМ устанавливали по клинико-гематологической картине заболевания в соответствии с классификацией A.A. Колтыпина. Идентификацию возбудителя ИМ проводили с помощью серологических методов: реакции непрямой иммуноф-люоресценции, методом иммуноферментного анализа, а также методом полимераз-ной цепной реакции.

Дети, больные ИМ, в крови которых были обнаружены маркеры ЭБВ-инфекции, были включены в группу больных ИМ, вызванным ЭБВ (ИМ ЭБВ) - 55 детей (код В27.0 МКБ-10), больные ИМ, вызванным цитомегаловирусом (3 ребенка), вирусом простого герпеса (4 ребенка), и ИМ неуточненной этиологии (57 детей) - в группу больных ИМ другой этиологии (ДИМ) - 64 ребенка (код В27.8 МКБ-10). Исследование структурно-метаболического статуса и функциональных особенностей мононуклеаров периферической крови проводили у больных ИМ средней степени тяжести с острым началом развития инфекционного процесса и гладким (неосложненным) течением. Больные были обследованы в острый период болезни, в период реконвалесценции и в отдаленный период после перенесенного заболевания (через 16-18 месяцев).

Контрольную группу составили 56 условно здоровых детей (группа здоровья НА). Из них 19 детей - в возрасте 3-6 лет и 37 детей - в возрасте 7-14 лет.

Определение общего количества лейкоцитов, абсолютного и относительного числа их отдельных морфологических форм проводили общепринятыми гематологическими методами. Мазки для подсчета гемограмм готовили из лейкоконцентрата венозной крови (метод с трилоном Б) [Меньшиков В.В., 1987].

Измерение среднего диаметра и содержания плотных веществ в лимфоцитах и моноцитах периферической крови проводили методом однородного интерференционного поля при длине волны монохроматического света 546 нм [Козинец Г.И., 1977].

Исследование поверхностной архитектоники лимфоцитов и моноцитов проводили методом сканирующей электронной микроскопии [Козинец Г.И., 1977].

Определение содержания ДНК в ядрах лимфоцитов, моноцитов и AM осуществляли методом фотометрии реакции Фельгена [Козинец Г.И., 1986]. Выявление РНК-содержащих структур ядрышек мононуклеаров проводили с использованием 0,25% раствора метиленового синего [Козинец Г.И., 1978]. Определение содержания гликогена осуществляли в ШИК-реакции по McManus, липидов - по методу Sheehan, Storey. Активность кислой фосфатазы (КФ) в мононуклеарах оценивали методом одновременного азосочетания по Goldberg, Barka, неспецифической эстера-зы (НЭ) - по методу Hayhoe, Qaglino. Активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и а-глицерофосфатдегидрогеназы (ГФДГ) в лимфоцитах, моноцитах и AM выявляли с помощью экспозиции клеток с соответствующим субстратом в присутствии пара-нитротетразолия фиолетового. Для количественного выражения результатов рассчитывали средний цитохимический коэффициент [Хэйхоу Дж., Кваглино Д., 1983].

Определение СЗ- и Fc-рецепторов моноцитов периферической крови проводили в суточной культуре моноцитов с использованием метода ЕАС- и ЕА-розеткообразования [Фрейндлин И.С., 1984; Земсков В.М., 1985]. Фагоцитарную активность моноцитов периферической крови определяли по поглощению частиц нейтрального красного [Михеенко Т.В. и соавт., 1990].

Субпопуляции лимфоцитарных клеток периферической крови определяли в лимфоцитотоксическом тесте с помощью моноклональных антител [Петров Р.В. и соавт., 1992].

Культуральную суспензию для теста бласттрансформации лимфоцитов готовили по методу Е.Д. Гольдберга и соавт. [1992]. В суспензию вносили фитогемагглютинин (ФГА), липополисахарид (ЛПС) Escherichia coli (0,01 мг/мл культуры) или туберкулин (0,05 мг/мл культуры). Результаты теста выражали количеством бластных форм лимфоцитов (%) [Козинец Г.И., 1973].

Для всех имеющихся выборок данных проверяли гипотезу нормальности распределения (по критерию Колмогорова-Смирнова). Для каждой выборки вычисляли средневыборочные характеристики. При соответствии нормальному закону распределения признака в исследуемых выборках проверку гипотезы о равенстве средних выборочных величин проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Для оценки достоверности различий выборок, не подчиняющихся критерию нормального распределения, использовали непараметрические критерии Манна-Уитни и Вилкоксона. Различия считались достоверными при уровне значимости р<0,05 [Бронштейн И.Н., 1986; Лакин A.B., 1989].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Во всех случаях заболевания инфекционным мононуклеозом регистрировалось увеличение лимфатических узлов, поражение носо- и ротоглотки, гепато- и сплено-мегалия.

Кроме того, у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, в острый период заболевания регистрировалось повышение общего количества лейкоцитов, содержания лимфоцитов, моноцитов, «атипичных мо-нонуклеаров» и палочкоядерных нейтрофилов на фоне снижения содержания сег-ментоядерных нейтрофилов. В период клинического выздоровления у больных инфекционным мононуклеозом, вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиологии, содержание лимфоцитов и «атипичных мононук-леаров» оставалось повышенным по сравнению с нормой. Данные изменения сохранялись и через 16-18 месяцев после болезни.

Проведенное нами изучение планиметрических величин мононуклеаров периферической крови дало возможность выявить у 3-6 и 7-14-летних детей, больных ИМ, в период развернутой клинико-гематологической картины заболевания увеличение среднего диаметра лимфоцитов по сравнению с контролем. Средний диаметр лимфоцитарных клеток у этих пациентов сохранялся высоким (по сравнению с нормой) в фазу клинического выздоровления и в отдаленном периоде после перенесенного заболевания. Возможно, причиной этого является преобладание в популяции лимфоцитов как пролиферирующих форм клеток, обнаруживаемых в периферической крови больных при ИМ, так и присутствием AM, которые, как известно, обладают более крупными, чем нормальные лимфоциты, размерами [Lewin N. е. а.,

1990]. Кроме того, у детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, страдающих ДИМ, в остры] период заболевания средний диаметр моноцитарных клеток также превышал кон трольные значения, что могло быть обусловлено активацией клеток, эффекторно] ролью которых является фагоцитоз инфицированных возбудителем ИМ элементо [Положенцев С.Д. и соавт., 1992]. Нормализация планиметрических величин моно цитов у перенесших ДИМ обеих возрастных групп регистрировалась лишь через 16 18 месяцев после болезни.

Интерферометрическое изучение мононуклеаров периферической крови пока зало однонаправленные изменения их сухой массы у больных ИМ различной этис логии. В динамике течения заболевания и через 16-18 месяцев после болезни у стра дающих ИМ ЭБВ и ДИМ обеих возрастных групп содержание плотных веществ лимфоцитах и в моноцитах оказалось выше, чем у здоровых детей. Эти измененш по-видимому, объясняются тем, что после внедрения и диссеминации по организм возбудитель ИМ вызывает, в силу своих лимфотропных и лимфопролиферативны свойств, избирательную гиперплазию лимфоидной и ретикулярной ткани [Ье\ут N е. а., 1990]. В свою очередь, известно, что клетки, активно синтезирующие ДНК : иммуноглобулины отличаются более высокими показателями сухой массы [Степа нова Е.И., 1982; Гольдберг Е.Д, и соавт., 1983]. Увеличение содержания сухих ве ществ в моноцитах, вероятно, могло быть вызвано их активацией и выполнение; роли «мусорщика», эффективно элиминирующего антиген [Исаков В.А.,1999].

В результате электронномикроскопического исследования лимфоцитов пери ферической крови у больных ИМ в возрасте 3-6 лет в период развернутой клинике гематологической картины заболевания было установлено увеличение содержани гладких форм лимфоцитов и абсолютного числа клеток с ворсинчатой поверхне стью по сравнению с контролем. Напротив, сниженным у этих пациентов оказалос процентное содержание ламиллярных лимфоцитов и относительное количеств лимфоцитарных клеток с ворсинчатым типом поверхностного микрорельефа.

У страдающих ИМ различной этиологии в возрасте 7-14 лет в фазу разгара бс лезни было зарегистрировано повышенное (по сравнению с нормальными показате лями) содержание негладких форм лимфоцитов (ламиллярных и ворсинчатых Кроме того, у 7-14-летних больных ИМ ЭБВ абсолютное число лимфоцитарны клеток с пузырями на поверхности оказалось на 164% выше, чем у здоровых детей.

В период реконвалесценции у пациентов в возрасте 3-6 лет, больных ИМ ЭБЕ относительное количество ворсинчатых форм лимфоцитов оставалось сниженный однако достигало уровня контроля через 16-18 месяцев после болезни. У больны ДИМ младшей возрастной группы содержание гладких лимфоцитов в фазу клини ческого выздоровления сохранялось более высоким, чем у здоровых детей. В отдг ленном периоде после болезни процентное распределение лимфоцитарных клеток зависимости от рельефа поверхности у этих пациентов соответствовало таковому контроле.

У страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет в фазу реконвалесценции было зг регистрировано повышение содержания негладких форм лимфоцитов (ламилляр ных, лимфоцитов с пузырями и клеток с углублениями) относительно контроля. Сс держание ворсинчатых форм лимфоцитов у этих больных было, напротив, снижен ным по сравнению с нормой. У больных ДИМ в возрасте 7-14 лет отмечалось уве личение (на 275%) абсолютного количества лимфоцитарных клеток с углублениям на поверхности по сравнению с контрольными значениями.

Через 16-18 месяцев после болезни у детей в возрасте 7-14 лет, пренесших [М ЭБВ, содержание лимфоцитов с ламиллярным типом поверхности оказалось ыше, чем у здоровых детей, при этом относительное содержание ворсинчатых имфоцитарных клеток сохранялось сниженным (ниже нормы). У переболевших [ИМ в возрасте 7-14 лет на фоне снижения содержания гладких форм лимфоцитов трактически в 2 раза) количество клеток с ламиллярным типом поверхностного икрорельефа значительно превышало уровень контроля.

При помощи сканирующей электронной микроскопии моноцитов у больных [М обеих возрастных групп были выявлены однонаправленные изменения: увели-ение абсолютного содержания гладких, ворсинчатых и ламиллярных форм клеток о сравнению с контролем. Кроме того, у страдающих ДИМ в возрасте 3-6 и -14 лет абсолютное количество моноцитов с пузырями на поверхности оказалось ыше, чем у здоровых детей (соответственно в 6 и 2 раза).

В период реконвалесценции у больных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет было уста-овлено снижение (относительно нормы) содержания ворсинчатых моноцитов и гсеток с углублениями на поверхности. У страдающих ДИМ обеих возрастных эупп обращало на себя внимание увеличение содержания гладких форм моноцитов клеток с углублениями. Наряду с этим у детей в возрасте 3-6 лет, больных ДИМ, зсолютное число моноцитарных клеток с ламиллярным типом поверхностного икрорельефа было на 175%, а ворсинчатых моноцитов - на 54% выше, чем в кон-золе.

В отдаленный период после болезни у перенесших ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет зсолютное содержание гладких форм моноцитов сохранялось более низким, чем у юровых детей. У переболевших ДИМ в возрасте 7-14 лет относительное число мо-эцитарных клеток с углублениями на поверхности по-прежнему превышало нор-альные значения. Относительное количество гладких моноцитов у детей в возрасте ■6 лет после перенесенного ДИМ также оставалось более высоким, чем в контроле.

По мнению М.В. Робинсона [1986], лимфоцитарные и моноцитарные клетки меют гладкую поверхность, находясь в покое, а при активации образуют множест-:нные ворсинки. Считается, что ворсинки выполняют роль «распознавателя» антиков и иммунокомпетентных клеток [Крымский Л.Д., 1976; Антонова Т.В. и соавт., >99]. Выявленные нами изменения поверхностной архитектоники мононуклеаров у ;тей, больных ИМ, вероятно, являются отражением гетерогенности популяции шфоцитов и моноцитов в отношении функциональной активности.

Кроме того, нами было проведено цитофотометрическое исследование моно-/клеароп периферической крови, позволившее установить, что у больных ИМ ЭБВ возрасте 3-6 и 7-14 лет в острый период заболевания содержание ДНК в лимфоци-х соответствовало нормальным значениям (рис. 1). Однако у детей, страдающих ИМ, уровень ДНК в лимфоцитах, напротив, оказался ниже нормы. Можно предложить, что большая часть обнаруженных крупных пролиферирующих клеток в фиферической крови больных была отнесена в разряд АМ.

В период реконвалесценции содержание ДНК в лимфоцитах у детей в возрасте 6 лет, больных ИМ ЭБВ, оказалось выше, чем у здоровых детей (на 30%) и в ост-1Й период болезни (на 43%). Через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ ЭБВ у тей обеих возрастных групп содержание ДНК в лимфоцитах превышало кон-ольные значения (рис. 1). Данные изменения можно связать, на наш взгляд, во-рвых, - со встраиванием вирусной ДНК в геном лимфоцитов и его репро-

дукцией в инфицированных клетках, поскольку ЭБВ обладает выраженным тро пизмом к лимфоцитам [Купчинский P.A., 1994]; во-вторых, - с усилением ДНК репаративпых процессов в инфицированных лимфоцитарных клетках, при которьп содержание ядерной ДНК, как таковое, не увеличивается, а повышается интенсив ность связывания деконденсированного хроматина с реактивом Шифф; [Козинец Г.И., 1987].

200 150 -¡00 -50 0

%

Дети в возрасте З-б лет

Г'Т1

ЛИМФОЦИТЫ

моноциты

200 150 100 -50

0

Дети в возрасте 7-14 лет

моноциты

ЛИМФОЦИТЫ □ здоровые дети

Ш дети, больные ИМ ЭБВ в острый период заболевания ШП дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценцин И дети через 16-18 мес после перенесенного ИМ ЭБВ Ш дети, больные ДИМ в острый период заболевания В дети, больные ДИМ в период реконвалесценцин ЕЗ дети через 16-18 мес после перенесенного ДИМ

Рис. 1. Содержание ДНК (усл. ед.) в лимфоцитах и моноцитах периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

В острую фазу заболевания у пациентов в возрасте 3-6 и 7-14 лет, страдающи ИМ различной этиологии, уровень ДНК в моноцитах достоверно превышал норм} В период реконвалесценцин и через 16-18 месяцев после болезни нормализации с< держания ДНК в моноцитах у больных ИМ ЭБВ и ДИМ не наблюдалось, оно пс прежнему оставалось выше, чем у здоровых детей (рис. 1). Известно, что при нага чии в организме воспалительньгх очагов, несомненно, имеющих место при ИМ, о< новным источником макрофагов становятся моноциты периферической крови, част из которых проявляет способность к пролиферации [Фрейндлин И.С., Рудакова Т.Л 1977].

Содержание ДНК в атипичных клетках у больных ИМ в возрасте 3-6 и 7-14 лс в фазу разгара заболевания, как показали результаты наших исследований, о кап; лось значительно выше, чем в лимфоцитах. В то же время у пациентов в возраст 3-6 лет уровень ДНК в АМ на 33% превышал таковой в моноцитах. При этом ур< вень ДНК в АМ у страдающих ДИМ в возрасте 3-6 лет оказался на 23% ниже, чем

больных ИМ ЭБВ аналогичного возраста. Как считает Г.И. Козииец и соавт. [1987], в периферической крови больных ИМ пролиферируют преимущественно атипичные клетки. То, что AM являются ДНК-синтезирующими клетками было показано и в другой работе Г.И. Козинца [1986]. Более высокое содержание ДНК в атипичных клетках у больных ИМ ЭБВ, по мнению автора, может быть связано со способностью ЭБВ встраиваться в геном инфицированных клеток.

У больных ИМ ЭБВ в фазу клинического выздоровления уровень ДНК в AM по-прежнему превышал таковой в лимфоцитах, но оказался ниже, чем в моноцитах. В то же время у пациентов, страдающих ДИМ, содержание ДНК в атипичных клетках было выше аналогичных показателей в лимфоцитах. В отдаленный период после болезни у перенесших ИМ различной этиологии уровень ДНК в AM оставался более высоким, чем в лимфоцитах. Возможно, это объясняется тем, что возбудитель ИМ способен длительное время иерсистировать в организме и оказывать трансформирующее влияние на вновь инфицированные клетки [Sinister V. е. а., 1995].

ЛИМФОЦИТЫ МОНОЦ1ПЫ

□ здоровые дети

Ш дети, больные ИМ ЭБВ в острый перпод заболевания Ш дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценцпп И дети через 16-18 мес после перенесенного ИМ ЭБВ Шдетц, больные ДИМ в острый период заболевания В дети, больные ДИМ в период реконвалесценцш ЕЗ дети через 16-18 мес после перенесенного ДИМ

Рис. 2. Нуклеолярный коэффициент в лимфоцитах и моноцитах периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

При оценке функционального состояния нуклеолярного аппарата лимфоцитов у больных ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет в острый период заболевания регистрировалось снижение (на 70% относительно нормы) нуклеолярного коэффициента (НК) в лимфоцитах. У страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет и ДИМ обеих возрастных групп уровень РНК в лимфоцитах, напротив, превышал уровень контроля. В период клинического выздоровления величина НК в лимфоцитах у больных ИМ ЭБВ обеих возрастных групп достигала нормальных значений. Однако у страдающих ДИМ в

возрасте 3-6 и 7-14 лет уровень РНК-синтеза в лимфоцитах по-прежнему превышал контрольный уровень и его нормализация наблюдалась лишь в отдаленном периоде после перенесенной болезни (рис. 2). Как следует из работы Г.И.Козинца [1978], лимфоциты у больных ИМ характеризуются более высоким содержанием РНК по сравнению с нормой. Однако другие литературные источники свидетельствуют о незначительном увеличении НК у больных ИМ по сравнению с таковым у здоровых детей [Модестова A.B., 1988].

Величина НК в моноцитах у больных ИМ различной этиологии обеих возрастных групп в фазу разгара заболевания превышала контроль. В период реконвалес-ценции уровень РНК в моноцитарных клетках у этих больных нормализовался. Однако в отдаленном периоде после болезни у пациентов, перенесших ДИМ, в возрасте 7-14 лет величина НК в моноцитах оказалась ниже, чем у здоровых детей и у переболевших ИМ ЭБВ аналогичного возраста (рис.2). Выявленные изменения находят подтверждение в работе И.С. Фрейндлин и Т.Л. Рудаковой [1977]. По мнению авторов, при вирусных инфекциях в зрелых моноцитах и макрофагах продолжается активное образование РНК, которое связано с участием этих клеток в иммуногенезе.

У больных ЯМ ЭБВ и ДИМ обеих возрастных групп величина НК в атипичных клетках оказалась выше, чем в лимфоцитах и, напротив, ниже, чем в моноцитах во все периоды исследования. Установлено, что интенсивность РНК-синтетических процессов в AM в 10 раз активнее, чем в обычных лимфоцитарных клетках [Кози-нец Г.И., 1970]. Высокое содержание РНК в ядрышках клеток крови имеет непосредственное отношение к пролиферативным и синтетическим возможностям этих клеток [Хэйхоу Дж., Кваглино Д., 1983].

Проведенное нами цитохимическое исследование лимфоцитов периферической крови у больных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лег в острый период заболевания показало увеличение содержания липидов (на 71%) в лимфоцитарных клетках по сравнению с контролем (рис. 3). Известно, что при активации лимфоцитов в результате их взаимодействия с антигенами увеличивается интенсивность клеточного метаболизма [Соколов В.В. и соавт., 1975]. У детей в возрасте 3-6 лет, страдающих ДИМ, регистрировалось повышение активности СДГ и ГФДГ в лимфоцитах, что указывает на высокую интенсивность процессов дыхания и гликолиза в лимфоцитарных клетках, активированных возбудителем ИМ [Фролова O.E., 1998].

В фазу реконвалесценции у больных ИМ ЭБВ младшего возраста в лимфоцитах наблюдалось увеличение содержания липидов (по сравнению с контролем и с острым периодом болезни) и активности НЭ (по сравнению с фазой разгара заболевания) на фоне снижения уровня КФ (по сравнению с нормой). У реконвалесцентов с ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет содержание липидов и активность СДГ и ГФДГ в лимфоцитах превышали значения нормы. У ДИМ-реконвалесцентов в возрасте 3-6 лет регистрировалось увеличение содержания гликогена и липидов в лимфоцитах (по сравнению с контролем и с острым периодом болезни). У больных ДИМ в возрасте 7-14 лет на стадии выздоровления содержание липидов (на 129%) и активность НЭ (на 38%) в лимфоцитарных клетках оказались выше, чем у здоровых детей, однакс уровень ГФДГ был заметно снижен (рис. 3). Выявленные изменения свидетельствуют о продолжающейся в период реконвалесценции активации лимфоцитов у больных ИМ.

Дети в возрасте 3-6 лет

липидьг.

СУКЦИНАТ-ДЕГИДРОГЕНАЗА

ГЛИЦЕРОФОСФАТ-ДЬГИДРОГЕНАЗА

КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА

НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ЭСТЕРАЗА

ЛЛЛ % ГТотт^ '.1 ПЛ1ПОГТР Т_ 1 /1 ггст

ГЛИКОГЕН ЛИПИДЫ СУКЦИНАТ-ДЕГИДРОГЕНАЗА ГЛИЦЕРОФОСФАТ- КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ

ДЕГИДРОГЕНАЗА ЭСТЕРАЗА

□ здоровые дети

В депги, больные ИМ ЭБВ в острый период заболевания П дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценции И дети через 16-18 мес после перенесенного ИМ ЭБВ ЕЗдети, больные ДИМ в острый период заболевания В дети, больные ДИМ в период реконвалесценции Ндети через 16-18 мес после перенесенного ДИМ

Рис. 3. Ферментативная активность и содержание гликогена и липидов в лимфоцитах периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

ГЛИКОГЕН

Дети в возрасте 3-6 лет

липиды

СУКЦИНАТ-ДЕГИДРОГЕНАЗА

ГЛИЦЕРОФОСФАТ-ДЕГИДРОГЕНАЗА

КИСЛАЯ ФОСФ АТАЗА

НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ ЭСТЕР АЗА

ГЛИКОГЕН ЛИПИДЬ! СУКЦИНАТ-ДЕГИДРОГЕНАЗА ГЛИЦЕРОФОСФАТ- КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ

ДЕГИДРОГЕНАЗА ЭСТЕРАЗА

□ здоровые дети

0 дети, больные ИМ ЭБВ в острый период заболевания О дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценцин И дети через 16-18 мес после перенесенного ИМ ЭБВ Ш дети, больные ДИМ в острый период заболевания Э дети, больные ДИМ в период реконвалесценцин ЕЯ дети через 16-18 мес после перенесенного ДИМ

Рис. 4. Ферментативная активность и содержание гликогена и липидов в моноцитах периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

В отдаленный период после болезни у детей, пренесших ИМ различной этиологии, отмечались сходные изменения цитохимического статуса лимфоцитов. У пере-эолевших ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет было зафиксировано снижение содержания гликогена и активности КФ в лимфоцитах по сравнению с нормой. Содержание чипидов в лимфоцитарных клетках у детей обеих возрастных групп также оказалось зиже, чем в контроле. Кроме того, у перенесших ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет уро-зень ГФДГ в лимфоцитах был на 197% ниже такового в период реконвалесценции. В то же время, у этих пациентов активность СДГ в лимфоцитарных клетках оставаясь более высокой, чем у здоровых детей. У пациентов в возрасте 3-6 и 7-14 лет по-:ле перенесенного ДИМ отмечалось снижение содержания гликогена и липидов в шмфоцитах по сравнению с аналогичными значениями в период клинического выздоровления. Активность КФ в лимфоцитарных клетках оказалась ниже, чем в контроле. На фоне этого, в лимфоцитах у переболевших ДИМ в возрасте 7-14 лет активность ГФДГ была на 88% выше, а уровень НЭ - на 50% ниже, чем в фазу реконвалесценции. Обращало на себя внимание более высокое содержание липидов в шмфоцитарных клетках у переболевших ДИМ в возрасте 7-14 лет, чем у детей ана-югичного возраста, перенесших ИМ ЭБВ (на 72%) (рис. 3). Полученные данные збъясняются, возможно, снижением интенсивности метаболических процессов в шмфоцитах вследствие установления латентной инфекции [Баринский И.Ф., Шуб-вдзеА.К., 1980].

Исследование цитохимического статуса моноцитов у больных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет показало снижение (на 44% по сравнению с нормой и на 87% по ¡равнению с больными ДИМ аналогичного возраста) активности СДГ в моноцитар-шх клетках в острый период болезни. Однако у страдающих ДИМ в возрасте 1-6 лет уровень СДГ и ГФДГ в моноцитах, напротив, оказался выше, чем в контроле рис. 4). Высокая активность дегидрогеназ свидетельствует об интенсивных процес-ах гликолиза и клеточного дыхания, необходимых для осуществления фагоцитар-юй функции [Фролова O.E., 1998]. Снижение уровня СДГ в моноцитах, вероятно, |бъясняется ферментативным дефектом, вызванным непосредственным воздействи-м ЭБВ на клетки.

В фазу реконвалесценции у больных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет активность ^ДГ и ГФДГ значительно превышала таковую у здоровых детей и в период разгара олезни (рис. 4), что могло быть связано с увеличением функциональной активности [оноцитов, выполняющих роль основных эффекторных клеток клеточно-посредованного иммунного ответа [Фрейндлин И.С., 1998]. У больных ДИМ в озрасте 3-6 лет наблюдалось снижение содержания гликогена (на 19%) и уровня 1Э (на 23%) по сравнению с предыдущим периодом исследования. У страдающих IM ЭБВ в возрасте 7-14 лет в период клинического выздоровления регистрирова-ось более высокое, чем у детей в возрасте 3-6 лет, содержание гликогена (на 34%) и ипидов (на 35%), а также повышенная активность СДГ (в 2,7 раз) и ГФДГ з 2,2 раз) в моноцитах (рис. 4).

У страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет в фазу реконвалесценции наблюда-ось более низкое содержание гликогена в моноцитарных клетках, чем у больных [ИМ аналогичного возраста (на 27%). В то же время, у детей в возрасте 7-14 лет, ольных ИМ ЭБВ, уровень липидов и активность ГФДГ оказались выше, чем у градающих ДИМ (на 31% и на 239% соответственно) (рис. 4).

Через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ у детей обеих возрастных групп отмечалось снижение содержания липидов и гликогена в моноцитах (рис. 4). Это, возможно, могло быть обусловлено истощением гликогенсинтезируемых ресурсов моноцитов, поскольку известно, что этот метаболит активно используется как энергетический материал в процессе фагоцитирования и переваривания вирусов, а также в ходе репродукции вирусных частиц [Изакова Л.П., 1966]. Кроме того, в настоящее время установлено, что практически все инфекционные заболевания сопровождаются изменениями липидного метаболизма клеток [Голубева М.В., 1995]. Снижение активности ГФДГ в моноцитарных клетках у пациентов в возрасте 7-14 лет, перенесших ИМ ЭБВ, по сравнению с периодом реконвалесценции, сопровождалось нормализацией показателя, а уровень СДГ в моноцитах оставался более высоким, чем у здоровых детей (рис. 4). Выявленные изменения, вероятно, объясняются гетерогенностью популяции моноцитов в отношении функциональной и метаболической активности [Положенцев С.Д. и соавт., 1992].

У детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, переболевших ДИМ, нормализации активности КФ в моноцитарных клетках, несмотря на снижение уровня фермента по сравнению с фазой клинического выздоровления, не наблюдалось (рис. 4). Известно, что КФ является маркером лизосом моноцитов, а повышенный уровень данного фермента свидетельствует о высокой функциональной активности этих клеток [Фролова O.E., 1998].

У детей, переболевших ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет, содержание липидов (в 1,5 раза) и гликогена (в 1,8 раза), а также активность СДГ (в 3,8 раза), КФ (в 1,4 раза) и НЭ (в 1,8 раза) оказались выше, чем у пациентов с ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет. Кроме того, у 7-14-летних детей после перенесенного ИМ ЭБВ были зарегистрировано более высокое, чем у пациентов аналогичного возраста, перенесших ДИМ, содержание гликогена и активность СДГ, НЭ и КФ в моноцитах (рис. 4). Выявленные у детей старшей возрастной группы, перенесших ИМ ЭБВ, изменения цитохимического статуса моноцитов свидетельствуют, на наш взгляд, о сохраняющейся активации этих эффекторных клеток и, возможно, являются необходимым условием поддержания клеточного иммунитета, направленного на элиминацию ЭБВ из организма.

Исследование цитохимических особенностей AM у больных ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет в период реконвалесценции показало снижение концентрации гликогена и активности КФ по сравнению с таковыми в острый период болезни. У ДИМ-реконвалесцентов в возрасте 3-6 лет активность НЭ в атипичных клетках также оказалась ниже, чем в фазу разгара болезни. Истощение запасов гликогена в AM, вероятно, объясняется использованием этого вещества в качестве энергетического материала в процессе репродукции ЭБВ [Павлов Б.А., 1960]. Снижение активности КФ и НЭ может быть связано с разрушением лизосом под действием возбудителя ИМ [МодестоваЕ.В., 1980].

В то же время, у страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет в период клинического выздоровления регистрировался более высокий уровень СДГ и ГФДГ в AM, чем в фазу развернутой клинико-гематологической картины заболевания, у детей в возрасте 3-6 лет и у больных ДИМ в возрасте 7-14 лет. Данные изменения могут свидетельствовать о высокой функциональной и метаболической активности атипичных клеток у больных ИМ ЭБВ старшей возрастной группы и, возможно, подтверждают лимфоцитарную природу AM, поскольку, по мнению Дж. Хэйхоу и

Кваглино [1983], повышенная дегидрогеназная активность обнаруживается в рансформированных лимфоцитарных клетках.

В отдаленный период после перенесенного ИМ ЭБВ у детей старшей возрас-ной фуппы на фоне увеличения содержания гликогена, активности КФ и НЭ отме-алось снижение уровня ГФДГ в атипичных клетках по сравнению с периодом кли-ического выздоровления. Полученные нами данные указывают на сохраняющуюся ысокой функциональную активность АМ, трансформированных ЭБВ, и отражают зменение их метаболического статуса в сторону усиления протекающих в них об-енных процессов.

У детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, переболевших ДИМ, регистрировалось синение (по сравнению с фазой реконвалесценции) концентрации гликогена и липи-эв в АМ. Активность ГФДГ в атипичных клетках у пренесших ДИМ в возрасте •14 лет оказалась выше, чем в предыдущий период исследования. Снижение со-зржания липидов и гликогена в АМ у детей после перенесенного ДИМ может сви-зтельствовать о снижении уровня метаболических процессов в клетке на данном :апе заболевания.

В отдаленный период после заболевания ИМ были выявлены возрастные осо-гнности цитохимического статуса атипичных клеток. Так, у пренесших ИМ ЭБВ в эзрасте 7-14 лет содержание липидов и гликогена, а также активность КФ и НЭ в М оказались выше, а уровень ГФДГ, напротив, ниже, чем у детей в возрасте 6 лет. Кроме того, у переболевших ДИМ в возрасте 7-14 лет концентрация глико-:на и активность ГФДГ в АМ были выше, чем у пациентов младшей возрастной |уппы. Полученные данные указывают, возможно, на более высокую функцио-шьную активность атипичных клеток у детей старшей возрастной группы.

При сравнении показателей цитохимической активности АМ у больных ИМ □личной этиологии через 16-18 месяцев после болезни отмечались следующие из-шения: у детей в возрасте 7-14 лет, переболевших ДИМ, содержание липидов, ак-[вность НЭ и КФ в атипичных клетках были ниже, чем у перенесших ИМ ЭБВ [алогичного возраста. Более высокая функциональная активность АМ у больных VI ЭБВ, по-видимому, может быть связана со специфическим воздействием ЭБВ, продуцирующегося внутри трансформированных им клеток.

Кроме того, нами была проведена сравнительная оценка цитохимической ак-вности атипичных клеток по сравнению с таковой в лимфоцитах и моноцитах, шные литературы о генезе АМ являются весьма противоречивыми. «Атипичные шонуклеары» по своим морфологическим и цитохимическим признакам весьма однородны и вопрос о природе этих клеток требует подробного изучения.

В результате проведенных нами исследований было установлено, что в острый риод болезни у страдающих ИМ различной этиологии старшей и младшей возрас-ых групп показатели цитохимической активности в атипичных клетках соответ-зовали таковым как в лимфоцитах, так в моноцитах. В период клинического вы-эровления АМ у больных ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 и 7-14 лет по характеру внутри-еточного метаболизма были наиболее близки к лимфоцитарным клеткам. В то же емя, цитохимическая характеристика АМ у страдающих ДИМ обеих возрастных >шп в период клинического выздоровления соответствовала таковой как для лим-цитов, так и для моноцитов. Показатели цитохимической активности в атипич-!х клетках у больных ИМ ЭБВ старшей и младшей возрастных групп через 16-18 сяцев после болезни соответствовали таковым как в лимфоцитах, так и в моноци-

тах. Однако цитохимический статус AM у перенесших ДИМ в возрасте 3-6 и 7-лет был ближе в большей степени цитохимическому статусу лимфоцитов.

Применение реакций интибиции активности КФ и НЭ в мононуклеарах пер ферической крови у больных ИМ позволило дополнить сравнительную оцен лимфоцитов, моноцитов и атипичных клеток и получить достоверные данные о i незе AM.

У больных ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет в острый период болезни AM были ( лее тартраторезистентными, чем моноциты. У страдающих ИМ ЭБВ в возрас 7-14 лет атипичные клетки оказались более тартраторезистентными, чем моноци и менее, чем лимфоциты. У пациентов младшей и старшей возрастных групп пох жительная реакция на НЭ в AM блокировалась фторидом натрия слабее, чем в ы ноцитах, У страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 и 7-14 лет в фазу реконвалесценц степень ингибиции активности КФ и НЭ в атипичных клетках оставалась ниже, ч> в моноцитах, как и в предыдущий период исследования. Выявленные изменения с хранялись и через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ ЭБВ. Во все периоды i следования у детей обеих возрастных групп, больных ДИМ, степень блокирован положительной реакции на КФ и НЭ в атипичных клетках оказалась значитель ниже, чем в моноцитах. Таким образом, результаты проведенных тестов с ингиб цией положительной активности КФ и НЭ позволяют сделать предположение о то что атипичные клетки у больных ИМ различной этиологии наиболее близки по св ей природе к лимфоцитам.

Моноциты являются ключевыми клетками в регуляции и инициации иммунн го ответа, в реализации неспецифической резистентности организма, а также в per ляции гемопоэза [Фролова O.E., 1998]. Установлено, что зараженные вирусаи клетки интенсивно захватываются моноцитами. Однако, вирусы в цитоплазме м ноцитов, как правило, не утрачивают своей жизнеспособности, проявляя высок} устойчивость к микробицидным факторам, лизосомным протеазам и другим фе ментам моноцитарных клеток [Адаменко Г.П., 1992; Фрейндлин И.С., 1998]. Спо ным до сегодняшнего дня остается вопрос о возможности внутриклеточного ра множения вирусов в моноцитах [Любезная Е.Б., 1991]. Высокая функциональная а тивность моноцитарных клеток обеспечивает противовирусную защиту организма.

Проведенное нами исследование функционального статуса моноцитов у бол ных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет в период разгара болезни позволило установи-увеличение относительного числа Fc-рецепторнееущих клеток и снижение фагоц тарной активности моноцитов по сравнению с таковой у детей с ИМ ЭБВ в возрас 3-6 лет (рис. 5). Известно, что филогенетически более ранними являются F рецепторы поверхностной плазматической мембраны моноцитарных клеток [Луго екая С.А., 1997; Тотолян. A.A., Фрейндлин И.С., 1999]. Таким образом, можно пре, положить, что в кровотоке больных ИМ ЭБВ в острый период болезни преобладак моноциты со сниженной фагоцитарной активностью, экспрессирующие преимущ ственно Fc-рецепторы.

У страдающих ДИМ в возрасте 3-6 лет в фазу развернутой клиник! гематологической картины заболевания отмечалось снижение процентного соде] жания моноцитов, несущих СЗ-рецепторы, относительно контроля. В то же время, детей в возрасте 7-14 лет, больных ДИМ, относительное количест! Рс+-мо1К)Цитарных клеток оказалось также ниже, чем у здоровых детей. Возможн

возбудитель ИМ способен оказывать угнетающее влияние на экспрессию рецепторов на поверхностной плазматической мембране моноцитов.

В период реконвалесценции у страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 3-6 лет регистрировалось увеличение относительного количества Fe t -моиоцитоп по сравнению с их числом в фазу развернутой клинико-гематологической картоны заболевания. Данный факт свидетельствует об увеличении функциональной активности моноцитов у больных ИМ ЭБВ, направленной на подавление вирусной агрессии [Торубаро-ва H.A. и соавт., 1998].

150 -1 100 -

Дети в возрасте З-б лег

Дети в возрасте 7-14 лет

□ здоровые дети

Ш дети, больные ИМ ЭБВ в острый период заболеваши

Ш дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценщш

0 дети через 16-18 ыес после перенесенного ИМ ЭБВ

¡3 дети, больные ДИМ в острый период заболевания

Щ дети, больные ДИМ в период реконвалесценщш

!Э дети через 16-18 мес после перенесенного ДИМ

Рис. 5. Фагоцитарная активность (опт. ед.) моноцитов периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

У больных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет. напротив, наблюдалось снижение абсолютного числа Рс-рецепторнесущих моноцитарных клеток и абсолютного и относительного содержания СЗ-рецепторпозитивных моноцитов относительно контроля. Кроме того, у этих пациентов абсолютное количество СЗ+-моноцитов (в 6 раз), абсолютное содержание Рс-рецепторнесущих клеток (в 3 раза) и фагоцитарная активность моноцитарных клеток оказались ниже, чем у пациентов в возрасте 3-6 лет (рис. 5). У страдающих ДИМ в возрасте 7-14 лег отмечалось снижение абсолютного и относительного числа СЗ+-моноцитов относительно нормальных значений. Одной из возможных причин, объясняющих снижение содержания СЗ- и Рс-рецепторнесущих моноцитов в кровотоке у больных ИМ, может являться, на наш взгляд, угнетающее влияние на экспрессию рецепторов кортикостероидов, которые достаточно широко применяются в терапии заболевания [Фрейндлин И.С., 1998]. Кроме того, ингибирующее воздействие на экспрессию поверхностных рецепторов моноцитарных клеток может оказывать и непосредственно возбудитель ИМ.

Следует указать также, чго у детей с ДИМ в возрасте 3-6 лет в период клинического выздоровления фагоцитарная активность моноцитарных клеток оказалась выше, чем у детей, больных ИМ ЭБВ. При этом у реконвалесцентов с ДИМ в возрасте

7-14 лет активность фагоцитоза красителя моноцитарными клетками была выше, г относительное содержание моноцитов, несущих СЗ-рецепторы, напротив, ниже, чеь у пациентов с ИМ ЭБВ аналогичного возраста (рис. 5).

В период реконвапесценции у больных ДИМ в возрасте 7-14 лет фагоцитарна? активность моноцитарных клеток оказалась выше, а абсолютное и относительно« содержание СЗ-рецепторнесущих моноцитов - ниже, чем у пациентов в возрасте 3-6 лет (рис. 5). Выявленные у больных ДИМ изменения, возможно, были связаны с избирательной утратой части СЗ-рецепторов и компенсаторной активацией процессе фагоцитоза через Fc-рецепторы [Фрейндлин И.С., 1977; Чередеева А.Н., 1995].

У детей, перенесших ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет, сохранялось сниженные (относительно нормы) абсолютное и относительное содержание СЗ-рецепторнесущих моноцитов. Полученные данные, вероятно, объясняются продолжавшимся ингибирующим действием ЭБВ на экспрессию СЗ-рецепторов иммунной адгезии моноцитов.

Через 16-18 месяцев после перенесенного ДИМ у детей в возрасте 7-14 лег регистрировалось более высокое относительное количество моноцитарных клеток, несущих Fc-рецепторы, чем у переболевших ДИМ в возрасте 3-6 лет. По мнению В.И Покровского и соавт. [1994], Fc-рецепторы имеют наибольшую активность протиЕ возбудителей инфекционных заболеваний, а их наличие определяет способность моноцитов к усиленному фагоцитозу и обусловливает благоприятный исход болезни.

Исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови позволило выявить у больных ИМ обеих возрастных групп в фазу разгара заболевания увеличение содержания CD8+-, CD16+- и С072+-клеток по сравнению с контролем (рис, 6). Как свидетельствуют данные литературы, результатом воздействия возбудителя ИМ является поликлональная активация B-лимфоцитов (CD72+). Вирус, обладая лимфотропным и лимфопролиферативным потенциалом, вызывает пролиферацию B-клеток [Naher Н., Petzoldt D., 1992; Покровский В.И. и соавт., 1994]. Однако малигнизации процесса препятствуют цитотоксические Т-лимфоциты (CD8+) и НК-клетки (CD 16+), содержание которых у больных ИМ в острый период увеличивается с целью предотвращения безудержной пролиферации инфицированных B-клеток [Lewin N. е. а., 1990; Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я., 1999].

При анализе количественных соотношений субпопуляций лимфоцитарных клеток при ИМ различной этиологии нами было обнаружено, что относительное содержание С072+-лимфоцитов у детей, страдающих ДИМ, в возрасте 3-6 лет, а также относительное количество С016+-клеток у больных ДИМ в возрасте 7-14 лет оказалось ниже, чем у больных ИМ ЭБВ аналогичного возраста (рис. 6). Выявленные изменения, вероятно, свидетельствуют о способности ЭБВ более интенсивно активировать иммунную систему.

В период клинического выздоровления у больных ИМ ЭБВ и ДИМ в возрасте 3-6 лет абсолютное содержание С08+-лимфоцитов сохранялось повышенным относительно контроля. У ДИМ-реконвалесцентов в возрасте 3-6 лет на фоне снижения абсолютного числа С016+-клеток (на 36% по сравнению с острой фазой болезни) содержание С072+-лимфоцитой оставалось также более высоким, чем в норме. При этом у детей в возрасте 7-14 лет, больных ДИМ, абсолютное количество CD16+- и CD72+-KneTOK, по-прежнему, превышало уровень контроля, а относительное число

□ здоровые дети

В дети, больные ИМ ЭБВ в острый период заболевания П дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценции И дети через 16-18 мес после перенесенного ИМ ЭБВ 0 дети, больные ДИМ в острый период заболевания В дети, больные ДИМ в период реконвалесценции О дети через 16-18 мес после перенесенного ДИМ

Рис. 5. Относительное содержание (%) субпопуляций лимфоцитов периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

С08+-лимфоцитов оказалось выше такового в период клинического выздоровлени (рис. 6).

В отдаленный период после перенесенного ИМ ЭБВ у пациентов в возрасте 3-лет абсолютное и относительное содержание С08+-лимфоцитов сохранялось повы шенным относительно контроля. У переболевших ДИМ сходного возраст абсолютное число С072+-клеток также оставалось более высоким, чем у здоровы детей (в 2,2 раза). У пациентов в возрасте 7-14 лет, перенесших ИМ ЭБВ и ДИМ, ре гистрировалось увеличение содержания CD3+- и С072+-лимфоцитов по сравненю с нормальными значениями. Кроме того, у переболевших ИМ ЭБВ старшей возрас тной группы абсолютное число С016+-клеток было также выше, чем у здоровых де тей. Через 16-18 месяцев после перенесенного ДИМ у детей в возрасте 7-14 лет от мечалось повышение относительного количества С08+-лимфоцитов (на 66% п сравнению с таковым в контроле и на 80% - в период реконвалесценции) и абсолют ного и относительного содержания CD 16+-клеток (соответственно на 70% и на 72°/ по сравнению с фазой клинического выздоровления) С08+-лимфоцитов оказалос выше такового в период клинического выздоровления (рис. 6). Сохранявшийся дис баланс в иммунной системе, возможно, объясняется тем, что возбудитель ИМ имее собственные механизмы защиты от действия иммунокомпетентных клеток. Виру может угнетать экспрессию собственных антигенных маркеров на поверхности ин фицированной клетки. Своеобразная антигенная мимикрия способствует развита! толерантности и персистенции вируса. Кроме того, внутриклеточное расположени возбудителя ИМ может быть фактором, защищающим его от действия клеток им мунной системы [Gratama J.W. е. а., 1994; Исаков В.А. и соавт., 1999].

Исследование пролиферативной активности лимфоцитов позволило установит у больных ИМ различной этиологии в возрасте 3-6 лет в фазу разгара заболевали увеличение числа ЛПС-стимулированных бласттрансформированных клеток п сравнению с контролем. В то же время, у страдающих ИМ ЭБВ младшей возрастно; группы стимулированная туберкулином реакция бласттрансформации лимфоцито оказалась ниже, чем у здоровых детей. Следует отметить, что способность лимфе цитарных клеток к бластной трансформации при действии ФГА у больных ДИ1\ старшей возрастной группы также была ниже, чем в контроле. Увеличение числ бластных форм лимфоцитов при специфической митогенной стимуляции свидетель ствует в пользу высокой функциональной активности B-клеточного звена иммуни тета, поскольку именно B-лимфоциты являются мишенью возбудителя ИМ и пер выми реагируют на попадание вируса в организм. Сниженная пролиферативна способность лимфоцитарных клеток в ответ на стимуляцию ФГА, по всей видимо сти, связана с начальной степенью активации Т-звена иммунной системы в острьп период болезни (рис. 7) [De Paoli Р. е. а., 1990].

В период клинического выздоровления у страдающих ИМ ЭБВ в возрасте 3-i лет отмечалось снижение содержания бласттрансформированных лимфоцитог стимулированных ФГА (по сравнению с фазой разгара болезни) и туберкулином (п сравнению с контролем). У больных ДИМ в возрасте 3-6 лет реакция бласттранс формации лимфоцитов при действии ЛПС была на 81% выше, а стимулированна туберкулином - на 33% ниже, чем у здоровых детей. При этом у страдающих ДИМ возрасте 7-14 лет отмечалось увеличение количества ЛПС-стимулированных бласт ных форм лимфоцитарных клеток (по сравнению с нормой и с острым периодом за болевания). Снижение функциональной активности Т-системы иммунитета у боль

к ИМ ЭБВ может быть связано, гю-первых; - с прямым действием репродукции В на функциональную полноценность лимфоцитов (снижение или полная ее ут 1ата); во-вторых; - с угнетающим воздействием растворимых факторов вирусного 1 клеточного происхождения, освобождающихся из поврежденных клеток iovvles D.M. е. а.. 1995; Исаков В.А. и соавт., 1999]. Причиной увеличения функ-эналыюй активности B-лимфоцитов у страдающих ДИМ, возможно, является должающаяся персистенция возбудителя инфекции в организме.

Дети в возрасте 3-6 лет

mmonomicAXAPiui

ТУБЕРКУЛИН

ФИТОГЕМАГТЛЮТ7ЛСШ □ здоровые дети

Ш дети, бальные ИМ ЭБВ в острый период заболевания Ш дети, больные ИМ ЭБВ в период реконвалесценщш Идети через 16-18 мес после перенесенного ИМ ЭБВ И дети, больные ДИМ в острый период заболевания @ дети, больные ДИМ в период реконвалесценции Ш дети через 16-18 нес после перенесенного ДИМ

1С. 7. Пролиферативная активность (% бластных форм) лимфоцитов периферической крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом (по оси ординат - % от контрольных значений)

У больных ИМ ЭБВ в возрасте 7-14 лет в фазу реконвалесценции обращал себя внимание более высокий уровень бласттрансформации лимфоцитов, стиму-рованных ФГА и ЛПС, чем у детей в возрасте З-б лет. В то же время, у 7-14-них страдающих ДИМ способность лимфоцитов к бластной трансформации при }сгвии туберкулином оказалась выше, чем у пациентов в возрасте З-б лет (рис. 7). роягно, у больных ИМ в возрасте 7-14 лет системы Т- н В-клсточного иммуните-

та, играющие решающую роль в противовирусной защите, находились в более реа тивном состоянии, чем у детей младшей возрастной группы.

Через 16-18 месяцев после перенесенного ИМ ЭБВ и ДИМ у детей в возрас 3-6 лет наблюдалось увеличение содержания властных форм лимфоцитов, стимул рованных ЛПС (по сравнению с контролем) и туберкулином (по сравнению с пери дом клинического выздоровления) (рис. 7). Выявленные изменения, возможно, ук зывали на высокую функциональную активность В-лимфоцитов у детей младш< возрастной группы, перенесших ИМ, что может свидетельствовать о способное: персистирующего возбудителя длительно активировать иммунную систему пос: перенесенного заболевания [Покровский В.И. и соавт., 1993]. В то же время, у пер болевших ДИМ в возрасте 7-14 лет при культивировании лимфоцитов с ЛПС отм чалось снижение числа бластных форм клеток, отражающее низкую функционал ную активность В-клеточного звена, вызванную угнетающим воздействием ли( самого ЭБВ, либо продуктами его жизнедеятельности.

Таким образом, проведенное нами исследование свидетельствует о дезорган: зации структурно-метаболического и функционального статуса лимфоцитов и м> ноцитов периферической крови при ИМ, вызванном ЭБВ, и ИМ другой (герпесв: русной и неуточненной) этиологии. Выявленные изменения более значимы в фа: манифестации заболевания и сохраняются как в период реконвалесценции, так и отдаленные сроки после перенесенной болезни, предопределяя тем самым развит! длительной персистенции возбудителя ИМ в организме.

ВЫВОДЫ

1. У детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозо] вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой эти< логии в острый период заболевания отмечаются однонаправленные изменения к личественных показателей белой крови; повышение (по сравнению с контроле! общего количества лейкоцитов, увеличение содержания лимфоцитов, моноцито «атипичных мононуклеаров» и палочкоядерных нейтрофилов на фоне снижения & держания сегментоядерных форм нейтрофилов.

2. В фазу клинического выздоровления и через 16-18 месяцев после перенесе] ного инфекционного мононуклеоза содержание лимфоцитов и «атипичных мот нуклеаров» остается выше нормальных значений.

3. У детей в возрасте 3-6 и 7-14 лет, больных инфекционным мононуклеозо! вызванным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой эти< логии регистрируются выраженные изменения структурно-метаболического статус лимфоцитов и моноцитов периферической крови в динамике течения заболевания в отдаленном периоде после болезни. К характерным изменениям структур» метаболических свойств лимфо- и моноцитарных клеток относятся увеличение с< держания нуклеиновых кислот и липидов, а также повышение дегидрогеназной а] тивности.

4. Изменения структурно-метаболического и функционального состояния мот нуклеаров периферической крови при инфекционном мононуклеозе, вызванном в! русом Эпштейна-Барр, и инфекционном мононуклеозе другой этиологии имен максимальную степень выраженности в острую фазу заболевания. В период реко] валесценции и через 16-18 месяцев после перенесенного инфекционного монону]

i3a полной нормализации качественных характеристик мононуклеаров перифери-кой крови не происходит.

¡. У детей в возрасте 7-14 лет, страдающих инфекционным мононуклеозом, вы-нным вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционным мононуклеозом другой этиоло-[ изменения структурно-метаболических и функциональных свойств мононуклеа-i периферической крови носят более выраженный характер, чем у пациентов в расте 3-6 лет.

I. «Атипичные мононуклеары», выявляемые в периферической крови при ин-сционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна-Барр, и инфекционном юнуклеозе другой этиологии в динамике течения заболевания и в отдаленном 1Иоде после болезни по показателям структурно-метаболического статуса соот-ствуют лимфоцитарным клеткам.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Реакции системы крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом // сложение № 1 к журналу «Гастробюллетень»: Материалы 2-ой Объединенной российской и Всеармейской научной конференции «Санкт-Петербург - Гастро-0» (Санкт-Петербург, 20-22 сентября 2000 г.). - 2000. - № 1-2. - С. 94 (совместно .И. Уразовой, А.П. Помогаевой, Л.С. Литвиновой).

Реакции системы крови у детей, больных инфекционным мононуклеозом // гериалы Всероссийиской научно-практической конференции «Новые технологии ¡рапии и профилактике инфекционных заболеваний у детей» (Санкт-Петербург, 23 ноября 2000 г.). - Санкт-Петербург, 2000. - С.61-62 (совместно с О.И. Уразо-, А.П. Помогаевой, A.B. Горбачевой).

Функциональная активность моноцитов периферической крови у больных ин-ционным мононуклеозом в различные периоды течения болезни // В сб. статей результатам 60-ой юбилейной студенческой конференции им. Н.И. Пирогова мск, 23-25 апреля 2001 г.). - Томск, 2001. - С. 30-31 (совместно с О.И. Уразовой, . Ширшовой).

Структурно-функциональная характеристика лимфоцитов периферической ви при инфекционном мононуклеозе и мононуклеозоподобном синдроме у детей ш же. - С. 70-72 (совместно с О.И. Уразовой, Л.В. Сюсиной).

Функциональная активность моноцитов при инфекционном мононуклеозе // ■ериалы Второго конгресса молодых ученых и специалистов «Науки о человеке» лек, 17-18 мая 2001 г.). - Томск, 2001. - С. 219-220 (совместно с О.И. Уразовой, Ширшовой).

Содержание ДНК в лимфоцитах периферической крови при инфекционном онуклеозе // Материалы II Российской конференции молодых ученых «Фунда-гальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 24-28 апреля [ г.). - Москва, 2001. - Т. 1. - С. 115 (совместно с О.И. Уразовой, В.Н. Ильиной).

Нуклеолярный аппарат мононуклеаров периферической крови при инфекци-эм мононуклеозе // Там же. — С. 115-116 (совместно с О.И. Уразовой).

Морфология апоптоза лимфоидных клеток при инфекционном мононуклеозе эиложение 1 к журналу «Бюллетень экспериментальной биологии и медицины» Э01 г. - 2001. - С. 69-71 (совместно с В.В. Новицким, О.И. Уразовой, А.П. Помо-ой, М.Р. Карповой, Л.С. Литвиновой, А.Н. Андреевым).

9. Особенности течения у детей инфекции, вызванной вирусом Эпштейна-Бар Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2001. - № 4. - С. 57-58. (совмести О.И. Уразовой, А.П. Помогаевой, В.В. Новицким, JI.JI. Катанаховой, JI.C. Литви вой).

10. Структурно-метаболический статус мононуклеаров периферической кр при инфекционном мононуклеозе // Бюллетень экспериментальной биологии и дицины. - 2001. - Том 131. - № 5. - С. 571-573 (совместно с В.В. Новицк О.И. Уразовой, А.П. Помогаевой, A.B. Горбачевой).

Автор выражает глубокую признательность ректору Сибирского государств ного университета, заслуженному деятелю науки РФ, член-корресонденту РАГ\ д.м.н., профессору Новицкому В.В. и к.м.н. Уразовой О.И. за научно-методичес руководство исследованиями, постоянную заботу и внимание. Выражаю приз тельность заведующему ЦНИЛ СГМУ, д.м.н., прфессору Байкову А.Н., заведую] му отделом гематологии, д.м.н. Козлову Ю.А., с.н.с. отдела гематологии, к.и Шевцовой Н.М., заведующему отделом иммунологии, к.м.н. Петровскому Ф с.н.с. отдела иммунологии к.м.н. Перевозчиковой Т.В. за консультативную и ме дическую помощь, а также моей семье и коллегам по работе за поддержку и сове

Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СГМУ Заказ Na Тираж fet? -жз.