Автореферат и диссертация по медицине (14.00.17) на тему:Структурно-функциональная характеристика клеток периферической крови людей, подвергшихся воздействию факторов радиационной аварии

РГ6 о*

& ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕЛ1ИЯ

На правах рукописи

ЛЕСНИЧИЙ Валерий Владимирович

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЛЮДЕЙ, ПОДВЕРГШИХСЯ ВОЗДЕЙСТВИЮ ФАКТОРОВ РАДИАЦИОННОЙ АВАРИИ

14.00.17 — нормальная физиология 14.00.16 — патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1993

Работа выполнена в Восшю-мсдицииской академии.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук В. Н. Цыган.

Официальные оппоненты:

— член-корреспондент РАМП профессор Н. Р. Дсряпа;

— доктор биологических наук Ю. А. Мазинг.

Ведущее учреждение — Российский научпо-нсследовательскнн институт гематологии и трансфузиологии МЗ и МП.

Защита диссертации состоится ^\ 1996 года

в .СХ^ часов на заседании диссертащ/оиного совета Д 106.03.01 Во-

епно-медиципскон академии (194175, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Воснпо-медицппской академии.

Автореферат разослан

совета

доктор биологических наук

А. Т. МАРЬЯНОВИЧ

Подписано в печать 28.02.1996

Формат бОхЭО1/«.

Объем 1 '/г уч.-изд. л.

За к. 1610. Тип. МАЛ. 1996

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. После аварии на Чернобыльской АЭС воздействию ионизирующих излучений (ИИ) малой интенсивности подверглись и подвергаются миллионы людей. Это поставило перед радиобиологической наукой не только общенаучные,, но и социальные проблемы.

Влияние последствий радиационной аварии на различные аспекты жизнедеятельности человека как и биологические эффекты длительного проживания на радиоактивно загрязненной территории (РЗТ) к настоящему времени довольно широко описаны и во многом оценены (Москалев КЗ.И., 1991; Никифоров A.M.., 1993; Новиков B.C., Смирнов B.C.., 1995; Casarett G.W, 1980).

Доказано наличие взаимосвязи неспецифической реактивности организма с его радиочувствительностью (Григорьев А.КЗ., 1984; Сушкевич Г.И. и соавт., 1992). Однако, положение о там, что определяющим фактором индивидуальной радиочувствительности являются системы регуляции гомеостаза (Горизонтов П.Д. и соазт., 1966; 1968; Мазинг Ю.А., 1995), не получило окончательной практической реализации. В частности, слабо раскрыты молекулярные к ультраструктурные характеристики феномена адаптационной стабилизации структур, особенно в системе клеток крови. В то дв время, на ключевую роль этого приспособительного процесса в кдетках у;называет то, что благодаря ему обретают реальность на системном (ор-ганизменном) уровне такие феномены как перекрастнан адаптация, адаптивный ответ, а также феномен гормезиса (Новиков B.C., Деря-паН.Р., 1991; Кузин A.M., 1991; Меерсон S.3, Малылев И.Ю., 1993; Wolff S. et al., 1989).

Многочисленные данные литературы об уведкченкн заболеваемости населения на РЗТ и о глубоких изменениях в биологическом возрасте участников ликвидации последствий аварии такие подтверждают необходимость изучения механизмов биологических -последствий воздействия факторов радиационной аварии на клеточном уровне (Логачев В.А. и соавт., 1993; Ншагфоров А..... и соавт., 1995). Обобщение выше перечисленных фактов и мнений позволяет прийти к следующему заключению:

1. Наиболее перспективным направлением работ по спэнке биологических последствий влияния на организм Ий низкой интенсивности является раскрытие проблемы радиочувствительности с позиций изучения механизмов изменения общей реактивности организма.

2. В качестве модельной системы, объединяющей в ~ебе су-

ществущие в организме механизмы регуляции гомеостаза, может быть использована система крови.

3. Поиск и идентификация структурного следа в клетках системы крови позволит расширить представления о механизмах приспособления организма к хроническому действию ионизирующего излучения малой интенсивности.

Дель исследования. Дать структурно-функциональную характеристику клеток периферической крови людей, подвергающихся длительному действию факторов радиационной аварии на Чернобыльской АЭС, и оценить патогенетическую роль выявленных изменений.

Задачи исследования:

1. Разработать метод системного анализа структурных изменений в клетках крови у людей, длительно проживающих на РЗТ.

2. Выявить наиболее информативные ультраструктурные критерии оценки влияния длительного воздействия факторов РЗТ на организм по состоянию клеток крови.

3. Оценить значение выявленных клеточно-тканевых нарушений крови в изменениях реактивности организма и росте общей заболеваемости.

Научная новизна. В диссертации впервые на основе разработанного методического подхода к системной оценке гомеостатичес-кой функции системы крови установлены закономерности, позволяющие адекватно подойти к оценке оптимальных индивидуальных границ реактивности как системы крови, так и организма человека в изучаемых условиях. На основе предлагаемого подхода обосновываются объективные и достаточно простые критерии для оценки и формирования групп риска ладей при длительном проживании на РЗТ. Полученные в ходе настоящего исследования результаты содержат новые факты о биологических последствиях для человека воздействия комплекса факторов аварии на ЧАЗС. Установлен ряд значимо изменяющихся ультраструктурных признаков в циркулирующих клетках крови при длительном (более пяти лет) проливании людей на радиоактивно загрязненных территориях.

Практическая аначимость работы. Предложенные подходы к системному ангтизу гомеостагической фукции системы крови позволяют всесторонне оценивать внутри- и над клеточные механизмы структурно-функциональной организации механизмов регуляции гомеостаза при адаптации человека к длительному действию радиационных фак-

торов низкой интенсивности.

Учитывая высокую чувствительность системы крови и ее циркулирующих клеток к самым различным экстремальным и не экстремальным факторам, предложенные в работе подходы и метод могут быть использованы при оценке системных адаптационных процессов и на других моделях, то есть при действии других факторов на организм человека.

На основе предлагаемого подхода к анализу реактивности системы клеток крови обоснованы критерии оценки индивидуальных оптимальных границ нормы реакции.

Реализация работы. В результате апробации метода при использовании клинического материала предложены карты ультраструктурных морфометрических параметров циркулирующих клеток крови, которые использовались для разработки автоматизированных диагностических комплексов, оценивающих как состояние организма, так и прогнозирующих адекватность выполняемых профилактических и лечебных мероприятий.

По данному разделу работы поданы заявки на два изобретения :

1.Устройство для медицинских обследований. Регистрационный номер ВНШГПЭ СПБ N 3968 от 15 ноября 1995 г. (Соавт. Будко

A.A., Липатова Е.А., Макеев Б.Л., Сухонос Ю.А, Цыган В.Н.).

2. Способ оценки адаптационных резервов организма. Регистрационный номер ВНИИГПЭ СПБ N 4003 от 28 ноября 1995 г. (Соавт. Будко A.A., Липатова Е.А., Макеев Б.Л., Сухонос Ю.А, Цыган

B.Н.).

Результаты исследования использованы при выполнении НИР в рамках "Единой Государственной программы по защите населения Российской Федерации от воздействия последствий чернобыльской катастрофы" на 1993 - 1995 гг, в частности плановой темы НИР ВМедА на 1994-1995 гг., (N госрегистрации 16000026).-

Основные положения выносимые на задкту:

1. В основу метода системного анализа структурно-функциональных изменений в клетках крови у людей, длительно проживавших на радиоактивно загрязненных территориях, кокет быть пагсган установленный в работе факт ведущей сиотвкоформируогдей гг самоорга-иизукщей роли абсапэтногэ содерзания щаркулшрупчйгс кавт-г-с.

2. К наиболее нвформгхпзЕШ иныененкзм клеток крсг:: у гэ-

дей, длительно проживающих на радиоактивно загрязненных территориях, относятся ультраструктурные качественные и количественные изменения в лимфоцитах и нейтрофилах.

3. Сопряженный характер выявленных ультраструктурных и функциональных изменений в циркулирующих клетках крови тесно связан с индивидуальными особенностями механизмов регуляции клеточной дифференцировки и пролиферации и с продолжительностью проживания на РЗТ. При этом весь комплекс структурно-функциональных изменений в циркулирующих клетках крови можно трактовать как процесс формирования адекватного структурного следа адаптации к комплексу факторов радиационной аварии.

Апробация. Результаты исследования доложены на V Всесоюзном симпозиуме: "Взаимодействие нервной и иммунной систем" (Оренбург, 1990), на научной конференции молодых ученых Военно-медицинской академии (Ленинград, 1990), на Всеармейской научной конференции "Актуальные вопросы современной диагностики и лечения пострадавших в районах массовых бедствий" (Ленинград, 1991), на научной конференции "Проблемы оценки и прогнозирования здоровья военнослужащих в условиях современной военной реформы" (Санкт-Петербург, 1995), на научной конференции, посвященной памяти профессора А.А.Клишова "Патогенез и регенерация тканей", (Санкт-Петербург, 1995), Всероссийской конференции на базе института физиологии им. И.П.Павлова "Артериальная гипертензия: экспериментальные и клинические аспекты" (Санкт-Петербург, 1995).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.

. Объем и структура диссертации. Текст диссертации излажен на 255 листах (из них машинописного текста 149 листов), иллюстративный материал включает 25 таблиц и 55 рисунков, в том числе 50 злектроннограмы. Работа состоит из введения, 5 глав, выводов, практических рекомендаций и приложения. Библиографический указатель литературы содержит 173 источника отечественных и 104 источника зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объем к метода исследования В ходе работы обследовано 317 человек, из которых 139 че-

ТАБЛИЦА 1

ЭТАПЫ РАБОТЫ И ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА

1 1 I 1 |ГРУППЫ 1 КОЛИЧЕСТВО ОБСЛЕДОВАНЫХ| |

1 N 1 | ЭТАПЫ РАБОТЫ ЛЮДЕЙ (I) 1 1 | КЛЕТОК (П)| 1 |

1 1 1 | 2 1 1 1 1 | 1 | 2 | 1 1 1

1 1 1 1 | МЕТОДИЧЕСКИЙ I 1 1 1,2 1 1 43,?3| 23 1 1 I 1 1 | 2530|2310 | 1 1 1 I 1 1

1 | АНАЛИЗ 1 | СОСТОЯНИЯ 1 1 з 1 1 45 | 15 1 1 1 1 | ЗОЮ 11650 | 1 II 1 1 1

1 1 1 | КЛЕТОК | КРОВИ 1 4 1 1 33 | 10 1 1 1 1 1 1 1 1 | 2400 I1100. | 1 1 1

1 | У ЗДОРОВЫХ 1 | ЛЮДЕЙ I 1 5 1 1 69 | 10 1 1 1 1 II 1 | 1120 Ц050 | 1 1 1 1 1 1

1 з 1 | АНАЛИЗ | СОСТОЯНИЯ I КЛЕТОК | КРОВИ | У БОЛЬНЫХ I ЛЮДЕЙ 1 1. 6,7 | 1 I 26,68| 9 1 1 1 1 1 >1 | 2380 | 810 | 1 1 1 1 I 1

1 В 1 СЕГО ИССЛЕДОВАНО: --------- .. ........ 1 317 | 67 I 1 1 1 111440 | 6920 | л--.т. л

1:1- комплексные исследования; 2 - электронномикроскопические

исследования;

II: ультраструктурный анализ:1-качественное исследование клеток; 2 - морфометрический анализ клеток;

ловек составили группу, длительно (5-7 лет) проживающих на радиоактивно загрязненных территориях Белоруссии (Гомельская и Витебская области). Этапы работы и характеристика материала представлены в табл.1.

На первом этапе проводилась разработка и апробация возможных принципов и подходов к системной оценке гомеостатической функции системы крови по параметрам формулы крови и индивидуально-типологическим особенностям ультраструктурной организации циркулирующих клеток крови у практически здоровых людей на "чистых" (радиоактивно не загрязненных) территориях. Разработка и оценка принципов системного подхода к анализу параметров формулы крови проводилась на группе из 76 мужчин (группы 1 и 2), а соответственная отработка системного подхода к анализу ультраструктурной организации циркулирующих клеток крови проведена на группе из 33 человек (2-я группа).

На втором этапе, используя предлагаемый методический подход, сравнивалось исходное морфофункциональное состояние клеток крови практически здоровых людей, проживающих на F3T (3-я или основная группа из 45 человек) и не проживающих на РЗТ (4-я группа, 33 человека-или региональный контроль Витебская область Белоруссии, и 5-я группа, 69 человек или не региональный контроль Ленинградская область). Всего на данном этапе проанализированы данные, полученные при обследовании 147 человек.

На третьем этапе работы обследованы жители населенного пункта Хойники (Гомельская область), который, согласно применяемой в работе градации радиационно-гигиенической характеристики месности проживания, отнесен к районам со средней радиационной загрязненностью местности. Всего обследовано 94 человека, в том числе 26 практически здоровых (6-я группа) и 68 больных (7-я группа). В числе обследованных было 32% (3D человек) мужчин и 63Z (64 человека) - -женщин.

Учитывав данные о росте содержания на радиоактивно загрязненных территориях очагоБЫх инфекций ЛОР-органов, патологии щитовидной келевы и ЕСТ (Никифоров A.M. и соавт., 1993), при формировании групп отбирались хюди именно с этими нозологиями. Доля больных с патологией ЛОР-органов ( острые и хронические тонзил-лзлгы, еаглоточные абсцессы, острые отиты, гаймориты ) составила 332; доля больных с различной патологией щитовидной железы (уа-

ловой и диффузно-узловой зоб,, тиреоидит и диффузный токсический зоб с аутоиммунным компонентом, тиреотоксикоз и тиреотоксическое ~=чдце,) составила 42%; доля лиц с различной патологией желудочно-кишечного тракта (хронические гастриты, язвенная болезнь, колиты, холециститы и полипоз кишечника) - составила 12%; на другие заболевания пришлось 10%. Также , в связи с необходимостью учета длительности влияния радиации на организм, все обследуемые разделены на группу "аборигенов" и группу, так называемых "мигрантов". К последним отнесены люди, прибывшие в данный населенный пункт на постоянное проживание после аврии на ЧАЭС. "Аборигены" составили 84% (79 человек), а "мигранты" - 16% (15 человек) . При этом выявлено, что распределение в этих группах людей по состоянию здоровья (здоровые-больные) имеет существенную разницу. Доля практически здоровых среди "аборигенов" .составляла 31.6%, тогда как среди "мигрантов" - только 6.7%, то есть почти е пять раз меньше. На данном этапе, как и на втором этапе,.проводилась индивидуальная дозиметрия с помощью счетчика импульсов человека по содержанию радиоактивного цезия. Среднее содержание 137Cs составило 0.08+0.006 мкКи/кг.

Всего в основной группе, то есть в группе людей проживавших на РЗТ, выделено три подгруппы по уровню загрязненности территорий 137Cs и 90Sr - от 0.1 до 64 Ku/км2, соответствующих мощностей экспозиционной дозы от гамма-излучения - от 13 до 260 мкР/ч. Средне-индивидуальные значения эквивалентных доз облучения от внешнего излучения в подгруппах составили 0.05, 0.15 и более 3 бэр в год, а от внутреннего облучения (при. содержании радиоцезия в организме обследуемых от 0.1 до 0.34 мкКи/кг) 0.007, 0.03 и 1.32 бэра соответственно.

Наиболее точным являлся метод прямого измерения содержания 137Cs в теле обследуемых. В нашей работе он осуществлялся -с помощью гамма-спектрометрии счетчиком импульсов человека РУПО - 1 - пб в поликлинических условиях.

Яри оценке функционального состояния иммунной системы и факторов неспецифической защиты подбор методов и методик был стандартным.

Состояние клеточного звена иммунитета изучали с помощью реакции двойного розеткообразования (Гришина Т.И., 5йзллер С., 1978). По содержания сывороточных иммуноглобулинов классов A,M,G и D, а также циркулирующих шлмунных комплексов (ЦИК) оцэнивалось

гуморальное звено иммунитета (Mancini G., Carbonaza А.О., Here-mans J.F., 1965; Барановский П.В., Данилишина B.C., 1983). Гуморальные факторы неспецифической защиты оценивались по состоянию комплемента и лизоцима. Содержание СЗ-компонента комплемента, а также острофазовых белков (преальбумина, aZ-макроглобулина, трансферрина, церулоплазмина и орозомукоида) исследовали в сыео-ротке крови методом радиальной иммунодиффузии в агаре с помощью моноспецифических антисывороток (Mancini G., Carbonaza А.0., He-remans J.F., 1965). Активность лизоцима сыворотки определяли турбодиметрическим методом (Грант Х.Я., Яводковский Л.И., Блум-берг И.А., 1973). Клеточное звено неспецифической резистентности оценивали по спонтанному и стимулированному (с использованием в качестве стимулятора частиц латекса) НСТ-тесту (Пигаревскш

B.Е., МазингЮ.А., 1981; Нагоев Б'.С., Шубин М.Г., 1981). Оценку фагоцитарной активности нейтрофидов проводили с помощью определения фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа с использованием инертных частиц латекса (Пахомычев А.И., 1960; Потапова

C.Г. и соавт., 1977). Клинический анализ периферической крови проводили по относительным и абсолютным величинам, а также с привлечением целого ряда расчетных коэффициентов и индексов (Аронов Г.Е., Иванова Н.И., 1987).

Забор и подготовка материала (клеток крови) были стандартными во всех группах обследуемых. 10 мл гепаринизированной венозной крови сразу после забора центрифугировали 8-10 минут при 1000 об/мин. Полученный в результате этого лейкоконцентрат обрабатывали в дальнейшем по методу Ватанабе (Watsnabe J., Donahue S., Hoggat N., 1970). Проводка, заливка, резка и контрастирование материала проводились по общепринятым методикам (Уикли Б.В., 1975). Просмотр и фотографирование срезов клеток крови осуществлялся на трансмиссивном электронном микроскопе JEM-100S (Япония). При этом проводилось тщательное протоколирование изображений по стандартизованному алгоритму с первичной регистрацией счетных плотностей удьтраструктурных признаков клеток.

Кроме того, в последующем как с помощью авторской установки (соавт. Лянгувов д.Ю, 1990), так и с помощью системы анализа изображений ИЗОТ 1073 (Болгария) в интерактивном режиме, на базе Института цитологии РАН, проводились измерения площадных характеристик среза клетки, цитоплазш и ядра, ядерно-цитоплазмати-ческое отношение, периметра среза ядра и среза клетки, козффици-

ентов формы ядра и цитоплазмы, объемной плотности зухроматина и удельной плотности микровыростов наружной клеточной мембраны. Р "ервом- случае ввод изображения осуществлялся с электронного планшета с посмощыо электронного карандаша в компьютер типа "Apple" и анализировался по разработанной программе. Ввод изображений в анализатор во втором случае осуществлялся с негативов с помощью телевизионной камеры.

Статистическая обработка материала проведена с использованием пакета прикладных программ "Statgraphics" на ПЭВМ, методов вариационной статистики, одно- и дЕухфакторного дисперсионного анализа, корреляционного анализа и пошагового регрессионного анализа. Достоверность отличий оценивалась по критерию Стьюдента и критерию Фишера (Афифи А., Эйзен С.,.1982; Ким Дж. - 0., Мыол-лер Ч.У., КлеккаУ.Р., 1989; Григорьев С.Г. и соавт., 1992).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Разработка интегрального ультастуктурного метода оценки системного структурного следа адаптации.в клетках периферической крови людей, подвергшихся воздействию факторов радиационной аварии •

Наибольшие сложности методического плана вызывали проблемы адекватного анализа гомеостатической функции системы крови по параметрам ее формулы и адекватного "структурного сопровождения" морфофункционального анализа клеток крови.

Разработка этих методических проблем позволила решить целый ряд вопросов, касающихся объективизации оценки биологических эффектов длительного комбинированного действия ионизирующего излучения малой интенсивности по морфофункциональным характеристикам клеток крови.

Решение первой методической проблемы опиралось на разработку объективных градаций физиологической нормы реакции систеш крови.

Для объективной и интегральной оценки функционального состояния организма и эффективности механизмов регуляции в формирующихся функциональных системах, давно используются критерии оценки их функциональных резервов. Учитывая особуа чувствительность механизмов нейрозядокринного контроля геыодкназжки в уело-

виях длительного действия факторов аварии на человеческий организм (Ковалева Л.И., Любченко П.Н., Басакова Т.Б., 1992; Harris М.С., 1988) и, в то же время, их довольно жесткую наследственно-детерминированную устойчивость, в качестве метода выбора для поиска физиологических границ нормы реакции системы кроЕИ мы остановились на необходимости сопоставления параметров центральной гемодинамики с характеристиками формулы крови.

При этом в качестве универсального критерия определения наследственно-детерминированных границ нормы реакции системы крови по параметрам ее формулы использоезлись прогрессивные воззрения H.H. Савицкого и его школы об объективном существовании трех типов кровообращения и их нейрогуморальной регуляции (Савицкий H.H., 1935; 1974; и другие). Типы нейрогуморальной регуляции определялись на основе общепринятых градаций коэффициента резерва МОК, характерных для гипо-, эу- и гиперкинетического типа кровообращения. Минутный объем кровообращения, при этом, рассматривался как основной гемодинамичекий и энергетический показатель адаптации человека.

Использование такого подхода при анализе данных 1-ой и 2-ой групп позволило установить, что:

- абсолютное содержание циркулирующих клеток крови прямо пропорционально характеристикам типа кровообращения;

- наибольшую диагностическую ценность в соответствии между типом кровообращения и численным составом циркулирующих клеток, имеет содержание гранулоцитоЕ, то есть оно детерминировано более жестко.

Несколько расширить представления о механизмах реализации выявленных закономерностей удалось, используя рассмотрение корреляционных взаимосвязей параметров формулы крови с гемодинамичес-кими характеристиками, а также изучая особенности морфометричес-ких характеристик циркулирующих клеток крови у людей с различными типами кровообращения.

В результате такой работы установлено, что:

- фактические величины МОХ коррелируют с уровнем содержания клеток белой крови - лейкоцитами, тогда как должные величины -с уровней сздердавия эритроцитов;

- возысгиши коэффициент резерва системы крови вполне может быть оценен по параметрам формулы крови и, прегзде всего, связан с соотношением клеток белого п красного ростка.

Итогом такой работы явились изобретения способа определения адаптационных резервов организма и устройства для медицинских обследований, упомянутые во введении.

В основу такого способа положено вычисление предложенного нами коэффициента резерва системы крови (КРСК):

Моноциты X Сегментоядерные Нф X (Плазмоциты+1)

КРСК =----------------------------------------------

Эритроциты

На основании данной работы сделан вывод об идентичности системы нейроэндокринного контроля гемодинамики механизмам контроля численности клеточной популяции циркулирующих клеток крови, то есть контроля за интенсивностью продукции и разрушения клеток крови. Данная закономерность определена в качестве системоформи-рующего элемента регуляции гомеостаза в системе крови.

В основу решения второй методической проблемы положена идея, что только морфометрический ультраструктурный анализ состояния клеток крови, построенный на основе существующих структурных принципов обеспечения надежности функционирования организма, может адекватно иллюстрировать системные механизмы обеспечения гомеостаза в изучаемых условиях.

При разработке морфометрического и системного анализа состояния клеток периферической крови мы исходили из того, что разрешить проблему адекватной оценки механизмов гомеостатирования в организме по состоянию клеток крови возможно только на основании количественного сравнения усредненных картин ультраструктурной организации циркулирующих клеток крови (ЦКК) как с параметрами формулы крови, так и с показателями функциональной активности клеток.

Отсутствие описаний интегрального (качественного и количественного) стандартизированного подхода к ультргструктурному анализу гомеостатической функции клеток периферической крови в доступной методической литературе поставило нас перед необходимостью обосновать принципы и разработать алгоритм такого метода.

На основании поиска внутриклеточных признаков по ультраструктурному морфометрическсму анализу клеток различных органов и тканей первоначальна был сформирован перечень кз 54 признаков, позволяющий количественно оценивать проявления системного струк-

- 12 -

турного следа адаптации на внутриклеточном уровне.

В последующем этот перечень был сведен до £6-и морфометри-ческих признаков, составляющих стандартизированную карту морфо-метрического анализа ультраструктурной организации клеток крови (табл. 2).

Таблица 2

Стандартизованный перечень ультраструктурных признаков клеток крови используемый в алгоритме их морфометрического анализа

Контакты клеток (1) Специфические гранулы клеток

Ядра и их фрагменты (2) Для нейтрофилов:

Ядрышки (3) - первичные; (13)

Ядерные поры (4) - вторичные; (14)

Микровыросты наружной (5) - аномальные; (15)

клеточной мембраны Для естественных киллеров:

Фаголизосомы (6) - осмиофильные; (16)

Пиносомы (7) - мультивезикулярные тельца; (17)

Микровезикулы. (8) - параллельные трубчатые (18)

Лизосомы (9) структуры.

Митоходндрии: Для базофилов и эозинофилов

- общее количество; (10) - типичные; (19)

- вакуализированные; (11) - с кристаллоидами; (20)

- с уплотненным - деструктированные; (21)

матриксом; (12)

Полуколичественным способом оценивалась степень представленности в клетках эндоплазматического ретикулума (22), пластинчатого комплекса (23), гранул гликогена (24), рибосом (25), а такие равмеры клеток (26). При этом степень содержания этих признаков в клетке оценивалась в баллах от О до 4-х единиц.

Использование предложенного перечня и подхода к ультраст-рукгуркок оценке состояния ЦКК позволили подтвердить значимость выявленных закономерностей сопряжения типов нейрогуморальной регуляции функционирования различных систем организма и на внутриклеточном уровне. Установлено наличие достоверных отличий во внутриклеточной организации циркулирующих клеток крови в зависимости от Т1Ш& нейрогуморальной регуляции кровообращения. При этом в качестве наиболее инфориатизных внутриклеточных признаков

для клеток миелоцитарной специализации определен уровень,содержания ядерных пор, тогда как для клеток лимфоидной специализации - уровень содержания специфических гранул, то есть1 признаков отражающих состояние дифференцировки циркулирующих клеток.

Таким образом, предлагаемый в работе методический" подход позволяет объективно оценивать формирование системного структурного следа приспособления организма по состоянию циркулирующих клеток крови, учитывая наследственно-детерминированные особенности механизмов регуляции гомеостаза.

2. Состояние клеток периферической крови и системы "организм-среда" при хроническом радиационном воздействии на человека

Сравнение показателей периферической крови практически здоровых людей, проживающих на РЗТ (3-я группа), проведено с per.'" нальным (4-я группа) и не региональным (5-я группа) контролем.

В результате сравнения с помощью однофакторного дисперсионного анализа параметров формулы крови у практически здоровых людей, длительно проживающих на РЗТ, и у лиц 4-ой группы выявлено существенное снижение индекса сдвига нейтрофилов за счет резкого уменьшения содержания палочкоядерных нейтрофилов в 2.5 раза по сравнению с контролем и роста содержания сегментоядерных нейтрофилов в 1.14 раза. При этом некоторая лейкопения сопровождается более низким содержанием лимфоцитов по сравнению с группой контроля, что отражается на понижении лимфоцитарно-сегментоядерного отношения в 1.3 раза. Во второй группе сравнения (с не региональным контролем) характер наиболее общих изменений в системе крови имеет схожие черты. На первом месте по информативности также находится резкое (в 2 раза) снижение индекса сдвига нейтрофилов за счет снижения содержания палочкоядерных и увеличения сегментоядерных нейтрофилов. Вместе с тем, обнаружено значимое отличие этих групп по содержанию моноцитов. Уровень содернапия моноцитов у людей, ярсживаэщих на FST, з 1.4 раза гкге, чем з группе сравнения. Отмечается увеличение содеркаяпз еюноцитов прп росте содержанка 137Cs. Соответственно градациям содержания в организме 137Cs (до 0.05, до 0.10 и более о.Ю еЖи/кг) уровень содержания моноцитов it) составил 6.4± 0.7, б.7± 0,4 л 8.8± 0.3 соответственно. Более того, выявлены пряше корр&айцконние- связи между содержанием в организме Cs и HS (г=0,93) и обратные агжду

Cs и ЛФ (г= - 0,93), при выраженной положительной корреляции уровня содержания моноцитов с сегментоядерно-лимфоцитарным отношением (г=0,85 р<0,001). Среди людей, длительно поживающих на РЗТ, резко снижена доля лиц с реакцией переактивации (в 12 раз) и реакцией повышенной активации (в 1.33 раза), и преобладают реакции тренировки, спокойной активации и активации (Гаркави Л.Х. и соавт., 1990). С помощью однофакторного дисперсионного анализа данных общей группы лиц, проживающих на РЗТ и не проживающих, установлено достоверное снижение содержания и эритроцитов, и гемоглобина в основной группе: эритроциты - 4.31±0.03 к 4.56±0.03 и гемоглобин - 139.0±1.39 к 149.8±0.51. При этом, если уровень содержания эритроцитов положительно коррелирует с уровнем содержания палочкоядерных нейтрофилов (г = +0.85 р=0.032) и, соответственно, с индексом сдвига нейтрофилов (г = +0.89 р=0.017), то уровень содержания гемоглобина положительно корреллирует с уровнем содержания моноцитов, лимфоцитов и эозинофилов (ri = 0.93, гг = 0.96, и гз = 0.96, соответственно, при р<0.01).

На наш взгляд, выявленные изменения ео взаимоотношениях системы фагоцитирующих клеток (моноцитов/макрофагов и нейтрофилов) с одной стороны и эритрона с другой не случайны и, вероятно, отражают переход системы на другой уровень реактивности, что может являть собой биологическую основу перехода в целом всего организма на новай уровень фукционирования в неблагоприятных для него условиях. 0 правомочности такого заключения свидетельствуют данные целой группы исследователей (Громыхина Н.Ю. и соавт., 1993; Дешевой Ю.Б. и соавт., 1995). Все это позволяет предположить, что миелоцитарная система (моноциты и нейтрофилы) может служить в изучаемых условиях среды одной из естественно-биологических платформ приспособления или установления ноеого равновесия организма с измененной окружающей средой. Кроме того, выявленное достоверное (р< 0.05) увеличение вышеприведенного критерия оценки состояния системы крови в виде КРСК у людей, проживающих на РЗТ, по сравнению с его величиной у людей проживающих на "чистых" территориях в 1.4 раза (144.7+ 12.4 при N=94 к 102.9+ 4.8 при N=43 соответсвенно), также свидетельствует о мобилизации механизмов регуляции лейкообмена в изучаемых условиях.

0 перспективности предлагаемого подхода к анализу наследственно-детерминированных (нестохастических) закономерностей сис-темофорыирования по многоуровневым компенсаторно-приспособитель-

- 15 - -

ным изменениям б системе крови свидетельствуют результаты оценки состояния здоровья популяции людей, проливающих в Хойникском районе Гомельской области.

Интегральные качественные признаки состояния здоровья популяции представлены характером распределения обследуемых по типу регуляции как вне зависимости от состояния здоровья, так и в зависимости от него. Кроме того, согласно ряду данных, у людей подвергшихся воздействию факторов радиационной аварии отмечается значительное ускорение старения организма (Никифоров A.M. и со-авт., 1995). В этой связи с помощью разработанного подхода оценивалось также состояние популяции по характеру распределения возрастных индексов, то есть признаков, характеризующих влияние проживания на РЗТ на биологический возраст обследуемых (рис. 1)'. 80

60 40 20 0 -20 -40

1 i \

i J; 1! я

1 J в ш я

а и Я Я щ ш

1

ЖЕНЩИНЫ МУЖЧИНЫ ЗДОРОВЫЕ БОЛЬНЫЕ ВИ *10 (1)ВИ *10 (2)

гмпотил ШЭУТИЛ Щ ГИЛЕРТИП

Рис. 1. Распределение обследуемых 6-ой и 7-ой групп по ти-г, пам нейрогуморальной регуляции (%) и возрастным индексам (ВИ 1 и ВИ 2, усл. ед.) в зависимости от пола и состояния здоровья.

Согласно данным рис. 1 максимальный процент здоровых людей свойственен лицам с гипертипом нейрогуморальной регуляции, тогда среди больных наиболее часто наблюдается лица с г:азо и зутипсм регуляции. Более того, установлено, что лица с гипертипом характеризуются преобладанием среднего биологического возраста в

группе над средним паспортным и наименьшим отклонением их абсолютных значений друг от друга, то есть близостью второго воз-, растного индекса к единице.

Резюмируя вышеизложенное можно заключить, что: :' 1. Достоверное. увеличение содержания сегментоядерных нейтрофилов у лиц; длительно проживающих на РЗТ, наряду с.отмеченным выше увеличением содержания моноцитов свидетельствует об усиле-' нии значимости фагоцитирующей системы в формировании механизмов резистентности в изучаемых условиях.

2. Наименее приспособляемы к изучаемым условиям яеляются лица с гипо - и ■ эутипом нейрогуморальной регуляции, наиболее приспосабливаемыми - лица с гипертипом регуляции.

3. Внутрисистемные взаимосвязи между уровнкли циркулирующих эритроцитов и клеток белой крови, сопровождаемые изменениями в эритро- и дейкообмене у людей, проживающих на РЗТ, способствуют отклонению механизмов гомеостатирования от "оптимальной нормы", что сопряжено с ростом биологического возраста и ускоренным старением организма.

3. Качественная ультраструктурная характеристика клеток крови

На существенные изменения в качественном состоянии ЦКК у людей, длительнее время проживающих на РЗТ, свидетельствует более частое выявление юных или более молодых клеточных форм, и, прежде всего, клеточных форм эритроидного и мегакариоцитарного ростков, в частности не редкое выявление в циркуляции мегатром-боцитов и ретикулоцитов. В крови людей, длительное время проживающих на РЗТ, нередко наблюдаются признаки анизо и пойкиоцитоза эритроцитов. Отмечены также признаки изменения равномерности содержания гемоглобина в клетках и присутствие ретикулоцитов, что свидетельствует о глубоких изменениях в эритрообмене, признаках анемии, а также явлениях раздражения эритроидного ростка костного мозга. Нередки признаки взаимодействия циркулирующих эритроцитов с лимфоцитами и естественными киллерами или большими гранулярными лимфоцитами (БГЛ). О мобилизации приспособительной роли ЕГЛ в изучаемых условиях особенно наглядно свидетельствует более частое их выявление в крови. Более того, усредненные качественные характеристики ультраструктурной организации (УСО) БГЛ у ладей, длительное время проживающих на РЗТ, имеют ряд от-

личий от таковых в контрольных условиях. ' Если в контрольных группах среди БГЛ довольно часто встречаются клетки,- ' - содержащие параллельные трубчатые структуры (ПТС),•а также наблюдаются взаимосвязи (контакты) БГЛ с нейтрофилами и эритроцитами, что сви-' детельствует о хорошей функции в этих условиях механизмов естественной резистентности,'связанных с антигелозависимой клеточной цитотоксичностью (АЗКЦ), а также нередко обнаруживаются как в циркулирующих лимфоцитах, так и БГЛ явления блеббйнга или пу-зкрения наружной клеточной мембраны (НКМ), то в основной группе явления блеббйнга НКМ лимфоцитов и БГЛ практически не наблюдались, а преобладали, то есть встречались значительно чаще, чем в контрольных группах, микроформы лимфоцитов с резкоуплотненными ядрами. Кроме того, в рассматриваемых.условиях БГЛ характеризуются более широкой палитрой спецгранул в цитоплазме, а такж~ встречаются признаки аномальной структурой спецгранул в том ч:сс ле и ПТС.

4. Анализ системных взаимосвязей выявленных информативных ультраструктурных изменений

Проведенная нами работа по выяснению возможной биологической сущности выявленных качественных характеистик циркулирующих димфоцитов с привлечением морфометрических параметров их УСО позволила констатировать, что:

- явления блеббйнга НКМ во многом связаны с механизмами саморегуляции размеров лимфоцитов и БГЛ. Интейсткзность этих процессов прямо пропорциональна росту размеров клеток, а также связанных с этим механизмов мобилизации общего обмена веществ и защитных функций лимфоцитов. В тоже время, существуют убедительные доказательства того, что морфологическими признаками алоптоЗа клеток является именно блеббинг цитоплазматичесхой - мембраны, конденсация нуклео- и цитоплазмы, и деградация ДНК хромосом .На межнуклеосомальные фрагменты (Wyllie А.Н., 1S81); .

- в свое очередь снижение содержания я нарушение структуры ПТС в БГЛ людей, длительно проживающих на F3T, подчеркивает реальность изменений механизмов дифференцировки БГЛ, а сторону ограничения механизмов естественной резистентности, связеяннх с АЗКЦ (Payne С.М., Slasser L., 1981).

Об изменении естественных ыеханиамов антителогенеза в нзу-

чаемых условиях свидетельствуют также признаки более частого выявления среди циркулирующих клеток крови плазматических клеток, а также изменении их типичной УСО в сторону преобладания более юных форм.

Кроме, того, обнаружение глубоких изменений в обобщенной качественной картине состояния циркулирующих моноцитов, по сравнению с контрольными условиями,, касающееся, прежде всего, снижения уровня их зрелости' и повышенного содержания вакуолизировнных митохондрий, также подчеркивает возможные пути ослабления типичных механизмов клеточной защиты, связанных с антигенпредставляющей функцией моноцитов (макрофагов), столь необходимой для нормального иммуногенеза в организме.

Не менее принципиальные изменения выявлены в качественной УСО циркулирующих гранулоцитов.

При сравнении нейтрофилов основной (3-ей) группы с контрольной (5-ой), хорошо видно ключевое отличие в их УСО, касающееся состояния первичных (лизосомальных) гранул нейтрофилов. У людей основной группы они по большей части выглядят опустошенными или содержащими осмиофильные фрагменты по типу вторичных телец, то есть выглядят как микроаутофаголизосомы, в результате чего они получили название аномальных гранул. Состояние других клеток гранулоцитарного ряда также свидетельствует о повышенной дегрануляции их до сравнению с контрольными условиями.

Результаты сравнительной оценки функциональных параметров нейтрофилов и лимфоцитов по НСТ-тесту, фагоцитарной активности, содержанию ЦИК и 1{Г приведенны в табл.3.

Наиболее типичные отклонения функционального состояния клеток периферической крови у людей при длительном их проживании на территориях, загрязненных радионуклидами после аварии на-Чернобыльской АЭС, ■свидетельстуют о высокой чувствительности системы крови к воздействию комплекса факторов радиационной аварии.

Эти данные подтверждают высказанное мнение о признаках внутриклеточных и системных нарушений антителогенеза у людей, длительно проживающих- на РЗТ изучаемых условиях. Уровень НСТ-теста спонтанного и стимулированного, содержание преальбуми-на, В-лимфоцитов, фагоцитарный индекс нейтрофилов у людей в рассматриваемых условиях достоверно повышаются, тогда как достоверно снижено содержание ЦИК, Т-лимфоцитов, й и 1% й.

Таблица 3

Иерархия и характеристики клеточных и гуморальных параметров состояния системы крови значимо отличающие людей,

проливающих на РЗТ

1 1 |Показатели I 1 1 Параметры показателей и группы 1 Направ- | | Степень| влияния| фактора| % 1

1 Контрольная | (п=1?) t | Хойники (п=18) ление изменений

1 |нет - стим. 10.85 ± ] 0.97| 33.. 9 ± 3.94 - 56 |

j НСТ - спон. 5.36 ± 0.531 25.0 ¿3.70 53 |

j Преальбумин 0.33 ± 0.031 0.57 ± 0.02 1 51 |

| В - лф 7.0 ± 1.86| 25.0 ± 2.72 1 47 !

|Фаг.Индекс 36.06 ± 4.27| 69.31 ± 8.16 1 34 |

| ЦИК 21.5? ± 3.241 34.61 ± 2.84 20 |

| Т - лф 46.2 ± 3.531 24.7 ± 3.35 1! 30 |

I teG 14.11 ± 0.76| 9.58 ±0.47 S 21 |

|Эозинофилы 5.0 ± 0.991 2.39 ± 0.64 . 1 18 |

1 Is D. 1 0.31 ± 0.031 ..... !. 0.23 ± 0.01 V 14 I .......... 1

О подобных же изменениях свидетельствует и проведенный сравнительный морфометрический анализ состояния ЦКК по вышеописанной методике. Результаты такого анализа представлены на рпс.2.

Полученные данные позволяют отметить, что:

- подавляющее большинство морфометрических ультргструктур-ных признаков лимфоцитов (ЛФ) и моноцитов (МОН) людей, прсяиваю-щих на РЗТ, достоверно ниже контрольных значений*,

- при этом, согласно степени влияния фактора щхжяваиия на F3T, наиболее информативными являются признаки уменьшения размеров ЛФ, содержания в нгсс спецгранул, ьгакровевикул и сущего количества митохондрий. Все это ма-гао трактовать как омоложение выходящих в циркуляцию ЛФ и снижение- .--уровня :sc д::ффэренцлразки, отражающее соотвётствуюцё§ снижение общего обмена Еег;естз з ЛФ;

- у циркулирующих мояоцатсв преимущественные изменения касаются статуса митохондрий - ограничения содержания энергизиро-еенных форм митохондрий, а таюэ их общего содержания. '

- so -

Рис. 2. Количественные ультраструктурные признаки циркулирующих лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов в 3-ей - основной (ОТ) и 5-ой - контрольной (КГ) группах. Различия достоверны (р< 0.05)

Соответственно изменениям в митохондриях наблюдаются признаки снижениея потенциала ЗМТ (эндосомального мембранного транспорта) и представленности элементов комплекса Гольджи;

Совершенно обратные явления выявлены при сравнительном ана-. лизе состояния циркулирующих нейтрофилов. Большинство значимо измененных у них морфометрических признаков в изучаемых условиях достоверно выше контрольных значений. При этом прежде всего увеличены признаки, связанные с отражением ЭМТ, аэробного энергообмена и репаративного белкового синтеза. Кроме того, существенно увеличено содержание аномальных гранул, в ущерб содержания первичных ¿тасст&шт. гранул.

Срай®еа«ё ша^АИ^тщчестх отличий состояния циркулирующих клеток крэдн у яраетичееки здоровых и бааьнйх аадей, проживающих на РЗТ, позволяло определить достоверные отличия влияния факторов радиационной ааарки на зтн клетки. Для здоровых людей наибо-

лее характерным является приоритет изменений морфометрических параметров ядра (или хроматина клеток), для больных же людей типичен приоритет изменений параметров цитоплазмы. Кроме того, выявлена универсальность реципрокных взаимоизменений параметров состояния наружной клеточной мембраны и состояния зухроматина, ослабление которых также является неспецифическим маркером патогенетических изменений в клетках больных людей. Обе последние закономерности могут быть отнесены к ультраструктурным неспецифическим критериям, позволяющим достоверно диагносцировать отличия пато и саногенетических процессов или состояний в системе (организме). При этом установлена взаимосвязь между уровнем зрелости (и дифференцировки) циркулирующих клеток крови и уровнем содержания радионуклидов (Cs137) в организме в рассматриваемых низких диапазонах доз. Оптимальным для сохранения здоровья состоянием системы клеток крови у людей, длительно проживающих PST, признано состояние, отражающее низкую степень зрелости и активности циркулирующих моноцитов и базофилов, при более высокой степени зрелости ВГЛ, НФ и зозинофилов. При увеличении длительности проживания на РЗТ или линейном росте содержания в организме радиоактивного цезия, выявляется целенаправленное снижение реактивности основных клеток неспецифической резистентности - нейтрофилов и естественных киллеров. Подобные тенденции могут рассматриваться как' проявления патогенетического влияния комплекса факторов радиационной аварии на неспецифическую основу им-муннобиологической защиты организма, что способствует, в частности, росту воспалительных заболеваний ЛОР органов и заболеваний щитовидной железы.

ВЫВОДЫ

1. Предлагаемый методический подход к структурно-функциональной оценке гомеостатической функции циркулирующих клеток крови позволяет выявлять формирование системного структурного следа приспособления организма на различных этапах его адаптации к комплексу факторов радиационной аварии.

2. У людей, длительно проживающих на радиоактивно загрязненных территориях, выявлены ультраструктурные изменения в клетках крови всех линий дифференцировки. В циркулирующих нейтрофи-лах существенно увеличивается содержание аномальных первичных

гранул, & в мояонугагеарах происходит-существенный рост содержания деструктированных митохондрий. В клетках зритроцитарного и тромбоцитарного ростков наблюдаются яиления анизо- и пойкилоци-тоза, наличие ретикулоцитов и мегатромбоцитов, увеличение содержания .вакуолей в тромбоцитах. Эти изменения свидетельствуют о поляризации интенсивности эндосомального мембранного транстпорта в сторону угнетения его в мононуклеарах и мобилизации в полинук-леарах, а также о раздражении и напряжении механизмов регуляции лейко-, зритро- и тромбоцитопозза.

3. Комплекс сопряженных структурно-функциональных изменений *в циркулирующих клетках крови людей отражает процесс формирования адекватного структурного следа адаптации к факторам радиационной аварии и, в частности, свидетельствует об особенностях перестройки реактивности системы клеток иммунно-биологического надзора.

4. Среди личного состава и населения, находящихся на радиоактивно загрязненных территориях, увеличивается до 80% доля лиц с полярными типами регуляции .содержания циркулирующих клеток крови, тогда как при нормальном распределении она не превышает 50%. Происходящие в системе крови изменения у людей подвергающихся воздействию факторов радиационной аварии, имеют патогенетическое значение в развитии хронических воспалительных заболеваний ЛОР органов и заболеваний щитовидной железы.

. 5. Наименьшими адаптивными возможностями к комплексу воздействующих факторов радиационной аварии обладают лица с детер-минированно низким или средним уровнями содержания лейкоцитов в крови. Такие люди формируют группу риска при длительном проживании в изучаемых районах.-

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У людей, длительное время проживающих на радиоактивно загрязненных территориях, необходим постоянный мониторинг за состоянием системы крови и иммунной системы. Морфофункциональные изменения клеток периферической крови у них подтвержагат целесообразность включения в общепринятые комплексные схемы лечебно-профилактических мероприятий иммунокоррегирующей, мембранол-рстектЕЗНок и знергссопркгазщей терапи«.

2. Вычисление коэффициента резерва системы кров;;, с по-

мощью отобранных тканеЕО-клеточных и внутриклеточных параметров, целесообразно использовать как для целей практической диагностики адаптационных резервов и различных состояний гомеостаза конкретного организма, так и для теоретической интерпретации внутриклеточных приспособительных, процессов'в рамках оценки их стохастических и нестохастических последствий для организма человека и популяции.

3. Предлагаемые методы оценки структурно-функционального состояния клеток периферической крови необходимо использовать при проведении комплексных научно-исследовательских работ, посвященных многоуровневой оценке адаптационных процессов в организме при биоэкологическом мониторинге неблагоприятных воздействий факторов экологических катастроф и оценке эффективности лечебно-профилактических мероприятий в данных условиях.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.0 механизмах возникновения вторичных иммунодефицитов в процессе хронического зколого-профессионального перенапряжения // Взаимодействие нервной и иммунной систем. - Л.; Р/нД., 1990.

- С. 53. (Соавт.: Новицкий A.A., Успенская О.Н.)

2. Автоматизация морфометрического анализа ультраструктурной организации клеток // Актуальные проблемы теории и практики военно-медицинской информатики: Материалы науч. кокф. / Воен. -мед. акад. - Л., 1990. - С. 28. (Соавт. Лянгузов А.Ю.).

3. Морфофункциональные параллели изменений нейтрофильных лейкоцитов при адаптации человека к экстремальным зколого-профессиональным условиям // Тез.докл.науч.конфер.молодых ученых и специалистов академии. - Л.: ЕМедА, 1991. - С. 5. (Соавт.: Алек-санинС.С.).

4. Диагностическое значение морфофункциональных изменений некоторых клеток периферической крови у лиц молодого Еозраста в экстремальных условиях // Актуальные вопросы совершенствования диагностики и лечения пострадавших в районах кассовых бедствий.

- Л.: ВМедА, 1991. - С. 56-5?. (Соавт. Симоненкова В.А., Успенская О.Н., Алексанин С.С.).

5. Ультраструктурные изменения клеток крови у военнослужащих в условиях Афганистана // Опыт советской медицины в Афганистане. - Б.и., 1992. - С. 100-101.

6. Морфофункциональные характеристики клеток крови у людей поживающих на загрязненных, после аварии на Чернобыльской АЭС, территориях // Стендовое сообщение на научной конференции "гистогенез и регенерация тканей"/ СПб.: ВМедА, 1995. (СсаЕТ. Комаров С. А., НшМаВ.К., Новицкий A.A.).

7. ВзйЗШЗсВЯЭЬ показателей формулы крови и центральной гемодинамики при Пограничной артериальной гипертензии // Артериальная гийертензия: экспериментальные и клинические аспекты. СПб.: Б.и., 1995. - С.36. (Соавт. Пугачев А.И.).

8. Критерии оценки состояния здоровья военнослужащих в экстремальных условиях // Тез.докл.науч.конф. "Проблемы оценки и прогнозирования здоровья военнослужащих в условиях современной военной реформы". - СПб.: ВМедА, 1995. - С.25. (Соавт. Алексанин С.С,, Успенская О.Н.)

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Устройство для медицинских обследований. Регистрационный номер ВШЕИГПЭ СПВ N 3968 от 15 ноября 1995 г. (Соавт. Будко A.A.,, Липатова Е. А., Макеев Б.Л., Сухонос Ю.А, Цыган В.Н.).

2. Способ оценки адаптационных резервов организма. Регистрационный, номер ВНИИГПЭ СПБ N 4003 от 28 ноября 1995 г. (Соавт. Будко A.A., Липатова Е.А., Макеев Б.Л., Сухонос Ю.А., Цыган

в.но.