Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Стимуляция репаративной регенерации кожи оксиметилурацилом

На правах рукописи

ПЛЕЧЕВА ДИНА ВЛАДИМИРОВНА

СТИМУЛЯЦИЯ РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ ОКСИМЕТИЛУРАЦИЛОМ

14.00.25- фармаколошя, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ»

Научные руководитель: Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Алехин Евгений Константинович доктор фармацевтических наук, профессор Лиходед Виталий Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Валеева Лилия Анваровна доктор медицинских наук Лукманова Клара Абдулловна

Ведущее учреждение: Сибирский государственный медицинский университет.

Защита диссертации состоится «^ЦО»сс?сХл^к^2004 г. в_час.

на заседании диссертационного совета Д.208.006.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ» (450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан

« Ьо» ГМЛШ^Р20041

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Г.Х. Мирсаева

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ОМУ - оксиметилурацил

МУ - метилурацил

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление липидов

МПД - максимально переносимая доза

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ТБК - тиобарбитуровая кислота

СРО - свободно-радикальное окисление

ЭПР - электронный парамагнитный резонанс

АОК - антителообразующие клетки

ФГА - фитогемагглютинин

МФ - макрофаги

ФБ - фибробласты

МНБ - монобласты

РОС НАЦИОНАЛЬНА*! БИБЛИОТЕКА 1

Актуальность исследований.

Несмотря на большое число средств, предложенных для ускорения заживления ран, интерес к этой проблеме не снижается, т.к. существующие препараты не всегда или недостаточно эффективны, а часть из них способна вызывать побочные эффекты. Часто требуется применение одновременно нескольких средств, воздействующих на разные патогенетические механизмы раневого процесса. В связи с выявлением новых патогенетических механизмов последнего появились такие препараты, как анаболики, некоторые цитокины, усиливающие образование оксида азота, антиоксиданты и пр. Механизм стимуляции заживления ран не однотипен, но важным условием регенерации является стимуляция синтеза РНК, ДНК и белка. Поэтому в последние годы большое внимание как стимуляторам репаративных процессов стали уделять анаболикам, в том числе гормону роста и производным андрогенов ( Koller J., et al., 1998, Lal S.O. et al., 2000, Chai I. et al., 2002).

Отмечают благоприятный эффект L-аргинина ( Tsai H.I. et al., 2002), который регулирует не только микроциркуляцию, но и пролиферацию через увеличение образованного из него оксида азота.

В связи с тем, что в регуляции регенераторных процессов установлена роль иммунной системы, некоторые авторы пытаются ускорить регенерацию с помощью цитокинов и стимуляторов иммунитета, особенно макрофагов. Определенное место среди стимуляторов регенерации занимают антиоксиданты.

Наибольший интерес представляют те препараты, ранозаживляющее действие которых обязано нескольким механизмам действия.

Таким поливалентным действием обладают пиримидины (пентоксил, метилурацил). Метилурацил давно успешно применяется как стимулятор регенерации в виде мазей. Препарат обладает несколькими свойствами, которые объясняют его ранозаживляющее действие, - анаболическим, противовоспалительным и иммуностимулирующим.

Другое производное урацила - оксиметилурацил, в 2002 году разрешенный для применения в медицине в качестве стимулятора иммунитета, - активнее метилурацила как иммуностимулятор, анаболик и антифлогистик, обладающий, кроме того, выраженным антиоксидантным действием. Препарат малотоксичен, не обладает аллергизирующим, тератогенным, мутагенным и канцерогенным действием. Указанные свойства косвенно свидетельствуют о наличии у оксиметилурацила ранозаживляющего эффекта.

В доступной литературе имеются лишь единичные сведения, касающиеся данного свойства препарата (Исмагилова Л.Ф. и др., 1998), указывающие на то, что мазь оксиметилурацила в пять раз меньшей концентрации оказывает одинаковое действие с метилурацилом. Улучшение регенерации оценивалось не по скорости заживления в процентах от исходного, а по абсолютному размеру раны.

Оставались неизученными вопросы сравнительного действия препаратов в одинаковых концентрациях, не выяснены оптимальные концентрации мази и характер мазевых основ, возможность воздействия оксиметилурацила на раневой процесс при. энтеральном введении, его фармакокинетика. Большой научный и практический интерес представляет изучение закономерностей заживления ран различного генеза, морфологические особенности репарации, прочность и эластичность образовавшегося рубца. Все вышесказанное во многом предопределило цели и задачи настоящего исследования.

Цель исследования:

Усиление оксиметилурацилом репаративной регенерации кожных ран разного генеза и выявление некоторых новых механизмов ранозаживляющего действия препарата.

Задачи исследования:

. 1.Изучить ранозаживляющее действие оксиметилурацила на резаных (лоскутных, линейных) и ожоговых (термических и химических) ранах по сравнению с метилурацилом.

2.Выяснить оптимальную концентрацию мази, выбрать мазевую основу и определить схему применения оксиметилурацила.

3.Изучить фармакокинетику оксиметилурацила при энтеральном введении.

4.0пределить некоторые механизмы ранозаживляющего действия оксиметилурацила: а) наличие у препарата антиоксидантной активности (изменение содержания МДА); б) влияние на содержание оксида азота при местном и энтеральном введении.

5.Изучить морфологические особенности. регенерации: под влиянием оксиметилурацила.

б.Определить. влияние оксиметилурацила на биомеханические особенности рубца после заживления раны.

Научная новизна исследований::

Впервые проведено комплексное исследование влияния оксиметилурацила на заживление кожных ран различного генеза в сравнении с метилурацилом.

Установлено ускорение заживления кожных ран различного генеза под влиянием мазей с оксиметилурацилом и более выраженный. эффект последнего по сравнению с метилурацилом.

Впервые определены оптимальная концентрация мази и мазевая основа. Изучена фармакокинетика препарата и его присутствие в струпе -раны при: энтеральном < введении. Впервые установлено влияние оксиметилурацила на заживление ран при энтеральном введении. Впервые при применении оксиметилурацила и пиримидинов вообще дана комплексная биомеханическая характеристика рубцов после заживления

ран. Установлены антиоксидантная активность оксиметилурацила на фоне раневого процесса (по степени снижения содержания МДА) и отсутствие влияния препарата на содержание оксида азота.

Гистологическими и гистохимическими исследованиями подтверждено ускорение заживления ран под влиянием оксиметилурацила и нормализация метаболических процессов при лечении мазью с оксиметилурацилом.

Практическое значение работы:

1. Установлено, что ОМУ более активный стимуляторi репаративной регенерации кожи, чем МУ.

2. Уточнены оптимальные мазевые основы, концентрации мазей и схемы применения ОМУ для повышения эффективности препарата.

3. Выявлено, что стимуляция репаративной регенерации мазью с ОМУ позволяет рекомендовать ее для использования в практической медицине (хирургии и дерматологии), причем при ожоговых поражениях кожи целесообразно местное применение препарата сочетать с приемом внутрь.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Мазь с оксиметилурацилом ускоряет репаративную регенерацию кожных ран различного генеза, причем ее эффект превышает действие мази с метилурацилом.

2. Оптимальной концентрацией ОМУ в мазях является 5%, лучшая мазевая основа - гель.

3. При введении ОМУ внутрь препарат обнаруживается в крови, многих органах и струпе ожоговых ран.

4. Энтеральное введение ОМУ усиливает эффект мази, особенно при ожоговых ранах.

5. Антиоксидантный эффект ОМУ проявляется и на фоне раневого процесса.

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертации доложены на VI конгрессе международной ассоциации морфологов в г. Уфе, 2002 г.; Республиканской конференции молодых ученых Республики о Башкортостан "Медицинская наука - 2002", посвященной году здоровья, 70-летию БГМУ и Дню медицинского работника; межвузовской студенческой конференции по проблемам здоровья молодежи, посвященной Году здоровья и 70-летию БГМУ; на Г^ом Всероссийском научном семинаре и молодежной научной школе "Химия и медицина", Уфа, 2003 г.; 69-ой Республиканской итоговой научно-практической конференции- студентов и молодых ученых РБ с международным участием "Вопросы теоретической и практической медицины", 2004 г.; расширенном межкафедральном заседании кафедр фармакологии № 1 и № 2 (Уфа, 2004).

По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 1 монография в соавторстве, имеется патент и 3 положительных решения на выдачу патента. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 131 страницах машинописного текста, иллюстрирована.24 таблицами, 31 рисунком. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения, выводов. Список литературы включает 124 отечественных и 56 иностранных источников.

Основное содержание работы.

Материалы и методы исследования.

Работа выполнена на 532 белых беспородных половозрелых крысах (самцах) массой 180-220 г и 10 кроликах. Животные содержались на стандартном рационе при естественном освещении и средней температуре воздуха 20°+2 °С, вода не ограничивалась. Кожные раны наносились на боковую поверхность тела под легким эфирным наркозом: резаные раны (лоскутные, полнослойные) размером 80-160 мм2, линейные раны 4-6 см.

Ожоговые раны такого же размера вызывали кипящей водой (полый цилиндр плотно прикладывали к коже и заполняли кипящей водой) в течение 10 сек. или концентрированной соляной кислотой.

Перед нанесением ран за сутки удалялся шерстный покров. На следующий день после воспроизведения ран размеры их срисовывали на полиэтиленовую пленку и с помощью миллиметровой бумаги определяли исходную площадь.

В определенные сроки (обычно на 5-10 и 15 сутки) после нанесения ран определяли оставшуюся площадь и выражали в % к исходной. Определялась также скорость заживления ран в днях, подсчитывая среднюю скорость для каждой группы крыс. После заживления ран в одни и те же сроки проверялись рубцы на прочность и брали их или грануляции на гистологическое исследование.

Кровь для определения содержания оксида азота и МДА( малонового диальдегида) брали из ретроорбитального синуса под легким эфирным наркозом.

Оксиметилурацил применяли в виде мазей 1, 5 и 10% на вазелине или-гелевой основе, внутрь вводился препарат в дозе 50 мг/кг в виде взвеси на 1% крахмальной слизи. Контрольные животные получали только 1% крахмальную слизь. Метилурацил применялся в виде 1, 5 и 10% мази на вазелине или гелевой основе.

В последних двух сериях опытов (ожоги соляной кислотой) в мази добавляли 7,5% левомицетин.

О содержании МДА в сыворотке крови крыс судили на основании определения ТБК активных продуктов с помощью набора реактивов фирмы "Агат" по методу, описанному Uchiyama M., Mihara M., (1978,1980).

Содержание оксиметилурацила в тканях определяли методом тонкослойной хроматографии и спектрофотометрии по методу, разработанному В. А. Лихо дедом (2000), совместно с кафедрой фармацевтической технологии.

О содержании оксида азота в крови крыс судили по содержанию нитратов, при этом фотометрическое определение нитритов в крови проводили по реакции - Грисса, используя в качестве цветообразующих компонентов сульфаниламид (белый стрептоцид) и N нафтилэтилендиаминдигидрохлорид (НЭДА) (Емченко НЛ. и соавт.,1994).

Прочность рубца после резаных, ожоговых и линейных (хирургических) ран определялась по методике, описанной Р.Т. Нигматуллиным (1996).

Из тканей при помощи фигурного пресс-ножа изготавливались образцы, имевшие стандартную рабочую часть и усиленные концевые фрагменты. Начальная длина и ширина рабочей части у разных образцов были равны соответствующим измерениям фигурного пресс-ножа, а толщина в каждом случае определялась дополнительно.

Биомеханические свойства рубца испытывались на разрывной машине (испытательная машина прочности) /М-10 при постоянной скорости деформации в лаборатории механики полимеров (Первушин Ю.С.) на кафедре сопротивления материалов УГАТУ.

Определялись следующие параметры: Толщина образца в мм. Удлинение.

Разрушающая нагрузка - в ньютонах (предел прочности).

Подсчитывались следующие показатели:

1. В - относительное удлинение = Д£/ Со

(Со = 20мм-по фигурному ножу)

2. - разрушающая нагрузка ( предел прочности)

3.Модуль упругости (модуль Юнга) = с/с

Для гистологического исследования из зажившей или гранулирующей раны брали кусочек ткани (эпидермис и дерму) размером 1x1 см. Взятый биопсийный материал фиксировали в 10% формалине и после соответствующей гистологической проводки изготовлялись срезы толщиной 7 мкм. Гистологические срезы окрашивались гематоксилин-эозином. Одновременно проводились гистохимические методы исследования: определяли гликозаминогликаны методом Хейла, гликоген - методом Мак-Мануса.

В первой серии гистологических исследований приготовлено 359 микропрепаратов, в том числе 120 гистохимическими методами, во второй серии - 350 препаратов, из них 120 гистохимическими методами.

Количественная оценка гистохимических реакций кожи проводилась по 4-хбалльной системе: интактная, слабая, умеренная, высокая.

Гистологические исследования проводились совместно с Ф.А. Каюмовым.

Все экспериментальные данные обрабатывались статистически с использованием критерия Стьюдента и Различия считали достоверными при уровне вероятности Р< 0,05.

Полученные результаты и их обсуждение.

Установлено, что ОМУ активирует заживление ран разного генеза, причем наилучшей основой для мази является гель, о чем свидетельствуют ускорение сокращения площади ран и среднее время их заживления (Табл. 1).

Таблица 1.

Скорость и средние сроки заживления резаных кожных ран у крыс при применении ОМУ на разных мазевых основах.

№ п/п Условия опыта Число крыс Размеры ран в % от исходных (М + т) Средние сроки заживления в днях

дни

5 10 15

1. Мазь ОМУ на . эмульсии 6 61,0+3,2* 16.3±3,Г 6,0+1,5* 19,7+0,9* Рм<0,05

2. Мазь ОМУ нагеле б 54.8+7,6" 15,045* Рг-4<0,05 2,6+1,0* Р2^<0,01 15,8+1,2* Рм<0,001

3. Эмульсия 6 61,8+8,8* 22,3+3,4* 10,0+2* 19,5+0,9* Рз-4<0,05

4. гель 6 60,5+5,9* 27,6+4* 10,1+1,7* 21,8+0,4*

5. контроль 6 81.8+7,7 33,7+7,2 16,6+3,8 23,2+0,4

Следующая серия опытов проведена на 49 крысах (по 7 животных в группе), у которых ожоговая рана вызывалась концентрированной соляной кислотой. И в этих опытах гель обладал способностью ускорять заживление: площадь ожоговой раны в % от исходной на 10-й день у леченных вазелином была 37,2+9,8%, а при смазывании гелем 13+5,1 (Р< 0,05).

Для выяснения оптимальной концентрации оксиметилурацила и метилурацила в мазях были проведены опыты с нанесением мазей 1%, 5% и 10% концентрации на ожоговые раны, вызванные соляной кислотой.

На гелевой основе достоверного различия скорости заживления в зависимости от концентрации мази не обнаружено, видимо,. в связи с эффективностью самого геля.

На вазелиновой основе 5 и 10% мази с ОМУ были эффективнее 1%

мази.

10% мазь ОМУ больше ускоряла заживление, чем 1% мазь ОМУ и 10% мазь с МУ.

Недостоверность различия в сроках заживления при применении 5 и 10% мазей позволила считать 5% концентрацию препаратов в мазях за оптимальную. 5% мазь с ОМУ стимулирует заживление и линейных ран; среднее время заживления ран под влиянием мази на вазелиновой основе 13,4 + 0,4, а при смазывании вазелином 17,2 ±_0,8 (Р < 0,01). Мазь с ОМУ эффективнее мази с МУ ( Табл. 2).

Таблица 2.

Скорость заживления резаных ран у крыс под влиянием мазей с ОМУ и МУ(на вазелиновой основе)

№ п/п Условия опыта Число крыс Размеры ран в % от исходных Средние: сроки: заживления в днях

дни

9 11

1. 5 % мазь с ОМУ 7 6,0+1,0 0 11,4+0,3

2. 5 % мазь с МУ 7 11,0+4,2 3,2+2,3 15,0+1,0

Ры <0,05 = 0,02 <0,01

В другой серии опытов у крыс с резаными ранами на 14-й день в группе леченных мазью с ОМУ раны зажили у 5-и крыс, у леченных мазью с МУ -1, а при смазывании вазелином - ни у одной. Различие по числу заживших ран по сравнению с леченными вазелином было достоверным лишь для группы крыс, леченных ОМУ (х2 = 4,6; Р < 0,05). На 20-й день различие стало достоверно и для крыс, раны которых смазывались мазью с МУ.

Близкие результаты получены при сравнении эффективности мазей с ОМУ и МУ, приготовленных на гелевой основе. Так, на 10-й день под влиянием 5% мази с ОМУ площадь ран была меньше, чем под

влиянием - 5% мази с МУ (соответственно 4,6+0,9 и 7,8+0,9 % от исходной, Р< 0,05).

10 - % мазь с ОМУ была также эффективнее 10% мази с МУ. Так, сроки заживления при применении мази с ОМУ на вазелине были равны 12 + 0,2, а при применении мази с МУ -15 + 0,8 (Р<0,002).

При лечении термических ожоговых ран ускорение заживления было не всегда достоверно. Было предположено, что образовавшийся на месте ожога грубый струп препятствовал проникновению ОМУ из мази в ткань. Поэтому в следующей серии опытов воздействие мази с ОМУ сопровождалось введением препарата внутрь в дозе 50 мг/кг в этих условиях ОМУ достоверно ускорял заживление термических ожогов (Табл.3), причем средний срок заживления: леченых ОМУ составлял 17+1,0 день, а в контроле - 23,5 + 1,1 (Р<0,001).

Таблица 3.

Скорость заживления термического ожога у крыс.

№ га'п Условия опыта п Размеры ран в% к исходному

дни

6-й 9-й 12-й 16-й

1. 5% мазь с ОМУ и ОМУ внутрь 10 101±10 62+7,9 54+14,5 20+9,2

2. Вазелин и внутрь 2% крахмальной слизи 10 127+24,7 157+2,2 106+19 95+18,5

Р.-2 Р<0,01 Р<0,05 Р<0,05

Введение ОМУ внутрь усиливало эффект мази и при лечении резаных ран. (Рис. 1)

Больший эффект мази, приготовленной на гелевой основе сохранялся и при одновременном введении оксиметилурацила внутрь (Табл.4).

Таблица 4.

Скорость заживления у крыс ожоговых ран, вызваных соляной кислотой.

Размеры ран в % отисходных (М+т)

№ Условия опыта Число крыс. ДНИ

п/п 4 8 10

1. Мазь на вазелине + ОМУ внутрь 6 99,1 ±4,7 65,1+6,5 28,8 + 6,5

2. Мазь на геле + ОМУ внутрь 6 42,0 ±3,4 26,0 ±7,8 4,0 ±0,84.

Р1-2 <0,01 <0,01 <0,001

Фармакокинетика ОМУ при энтеральном введении изучалась на кроликах. Животные получали.внутрь ОМУ в виде суспензии в дозе 250

мг/кг однократно, его содержание в крови определяли каждый час в течение 10 часов. Кровь в количестве 1 мл брали из ушной вены кролика.

Присутствие ОМУ в элюате определяли методом тонкослойной хроматографии и спектрофотометрически на спектрофотометре СФ-46 на кафедре фармацевтической технологии (зав. кафедрой В.Л. Лиходед).

Показано, что ОМУ связывается с белками крови на 60-70% и эритроцитами на 10-20%.

Препарат определяется в крови на 2-ом часу, достигая максимума к 5 часу, а затем содержание его плавно снижается. Следовательно, для поддержания концентрации его на определенном уровне следует вводить его каждые 5 часов.

Установлены основные фармакокинетические параметры для двухкамерной модели со всасыванием: константа скорости абсорбции и элиминации полувыведения, период распределения в фазах ,

кажущийся объем распределения, общий клиренс, площадь под фармакокинетической кривой, максимальная концентрация, а также время

достижения её. Кажущийся объем распределения препарата составляет. 107,81+2,36 и/кг.

Оксиметилурацил медленно всасывается из желудочно-кишечного тракта константа скорости абсорбции^,^ )= 0,635+ 0,015 час,период полуэлиминации; (ti/2,6c)= 1,82+0,05.

Присутствие ОМУ у белых беспородных крыс при введении его внутрь в дозе 250 мг/кг обнаружено в следующих органах: (Табл. 5)

Таблица 5

Обнаружение оксиметилурацила в биологических объектах

№ п/п орган ОМУ обнаружен методом

тех УФ - спектрофотометрии

1. сердце - -

2: почки ++ +

3. печень +++ +++

4. селезенка - -

5. легкие - -

б. кишечник + -

7. мышцы -н- ++

8. мозг + +-

9. сальник - -

10 надпочечник + +

Повышение эффективности мази с ОМУ при одновременном введении препарата внутрь побудили нас к исследованию содержания его в коже и струпе ожоговых ран у крыс при энтеральном введении. Полученные результаты свидетельствуют о наличии ОМУ в струпе ран (Табл. 6).

Таблица б

Обнаружение оксиметилурацила в коже и струпе

№ п/п орган Обнаружен методом

тех УФ- спектрофотометр ия

1. кожа - -

2. струп + +

Таким образом, в ожоговом струпе в отличие от неповрежденной кожи присутствие ОМУ - обнаруживается спектрофотометрически и хроматографически при его введении внутрь. Поэтому энтеральное его введение, особенно при ожоговых ранах, рационально.

В?жно, что под влиянием мази с ОМУ, особенно на гелевой основе, биомеханическая характеристика рубца после заживления ожоговых ран на 30-й день приближается к здоровой коже(Табл. 7).

Таблица 7.

Показатели прочности кожного рубца 5% мазями с оксиметилурацилом (ОМУ) (ожоговые раны на 26-й день)

№ п1 п Условия опыта Число крыс Показатели прочности

Е а Модуль юнга

1. Гель 6 0,48+0,04 Р,¿<0,002 2,12+0,28. Р,.2<0,001 4,46+0,71

2. 5% мазь с ОМУ + гель 6 0,69+0,3 Р<0,002: 4,9+0,22 Р„<0,001 6,4+0,5 РЗ-5<0,05

3. Вазелин; 6 0,31+0,02 1,89+0,06 Р,.2<0,002'. 6,3+0,55

4. 5% мазь с ОМУ + вазелин 6 0,47±2 Рм<0,001 2,03+0,1 Р«<0,05 4,3+0,08 Р4-5<0,01

5. Контроль (нелеченый) 6 0,25+0,03 1,24+0,07 3,3±0,33

6. Контроль без рубца (здоровая кожа) 5 0,7+0,03 Р«*>,5 4,9+0,7 Ри>0,5 7.15+1Д Рм>0,5

Ускорение заживления ран под влиянием ОМУ связано с рядом факторов. ОМУ является анаболиком, не уступающим ретаболилу. Большое значение имеет его стимулирующие влияние на активность макрофагов, противовоспалительный эффект и антиоксидантное действие.

Определение нами МДА в сыворотке крови крыс показало, что ОМУ как при местном применении на раны, так и при введении внутрь снижает его содержание.

Так, до нанесения ран у леченых ОМУ содержание МДА составляло 2,6+0,5 мкмоль/л., а в группе контрольных крыс - 3,64+1,0. На 5-й день после воспроизведения ран МДА соответственно' составляло 3,6+1,0 и -13,2+3,5 (Р<0,05). При введении ОМУ только внутрь (раны не мазали) содержание МДА в среднем составляло у контрольных крыс 5,2+1,4 мкмоль/л., а у леченых 2,6+0,36 (Р<0,05).

ОМУ, по всей вероятности, влияет на содержание МДА не только как антиоксидант. Снижение содержания МДА есть и следствие ускорения под влиянием ОМУ заживления ран, так как уровень МДА зависит от состояния раневого процесса. Так, у тех крыс, площадь ран которых была больше 10 % от исходной содержание - МДА составляла 4,66+1,2 мкмоль/л. , а у тех, площадь ран которых была меньше 10 % от исходной, содержание МДА было равно 2,0+0,5 (Р<0,05).

Учитывая ранозаживляющее действие оксида азота (NO), усиление им синтеза белка и увеличение его при воспалении, представляло интерес выяснить изменение его содержания при применении ОМУ.

Влияние оксиметилурацила на содержание оксида азота, видимо, не имеет значениям механизме ранозаживляющего действия препарата. Как показали наши исследования, лечение ОМУ (местно и внутрь) на 12 и 18 дни после воспроизведения, резаных ран (16 крыс) не изменяло содержание оксида азота в крови крыс. Определение содержание NO в крови крыс с ожоговыми ранами, вызванными соляной кислотой показало, что содержание оксида азота в крови крыс, получавших ОМУ, было достоверно ниже, чем в

контрольных группах, и коррелировало с размерами ран, т.е., видимо, его содержание связано с выраженностью раневого процесса. Это подтверждается опытами на 12-и крысах без ран, 6 из которых получали ОМУ внутрь в дозе 100 мг/кг., а 6 - крахмальную слизь в течении 3-х суток. Различие в содержании N0 в крови крыс указанных групп не было, составляя 46,2+4,9 мкмоль/л. у леченых и 49,6+6,5 мкмоль/л., у контрольных.

Таким образом, проведенные нами исследования не позволяют утверждать, что ОМУ способен увеличивать содержание оксида азота.

Ускорение репаративной - регенерации под влиянием ОМУ подтверждено гистологическими исследованиями.

При лечении ОМУ к 25-му дню наблюдается более полноценная регенерация, как эпидермиса, так и дермы, а также развитие придатков кожи по сравнению с контрольными. У контрольных же регенерация не завершена. Применение ОМУ способствует нормализации метаболического гомеостаза, судя по содержанию гликогена и гликозаминогликанов в заживших ранах по сравнению с контрольными животными.

Таким образом, оксиметилурацил стимулирует заживление кожных ран разного генеза, причем его эффект, как правило, превышает действие метилурацила.

Рационально, особенно при ожоговых ранах, применять ОМУ как местно, так и внутрь, причем усиление ранозаживляющего действия мази с ОМУ одновременным введением его внутрь безусловно является не только следствием попадания препарата в рану, но и результатом его системного действия: стимуляции иммунитета, его противовоспалительной активности, анаболического и антиоксидантного действия. Начинать лечение ОМУ необходимо на 1-3 день, как это было замечено для метилурацила ГЛ.Биличем (1986).Начало лечения на 5-ый день после воспроизведения ран, как показали наши данные не дает эффекта. Видимо,это связано с выраженным влиянием ОМУ на I фазу раневого процесса (противовоспалительное и антиоксидантное действие). Как известно, в

первые 1-3 суток наблюдается максимальное увеличение митотической активности эпителиоцитов эпидермиса(Билич Г.Л., 1986).Ускорение I фазы раневого процесса под влиянием ОМУ во многом зависит от повышения им активности макрофагов, что установлено рядом исследований (Алехин Е.К., 1967.,Плечев В.В.,1974,Лазарева Д.Н.,1967 и др.).Макрофаги участвуют практически во всех процессах, связанных с сохранением постоянства внутренней среды организма и с явлениями репарации (Пинегин Б.В.,2000).

Поэтому большее влияние ОМУ по сравнению с МУ на процессы репарации может быть связано и с более выраженными чем у МУ способностями, стимулировать. активность макрофагов. Безусловно, ускорение заживления ран под влиянием ОМУ связано с его анаболическим и антикатаболическим действием—усиление синтеза белка, РНК и ДНК.

Таким образом, оксиметилурацил обладает, как. и метилурацил, способностью ускорять репаративную регенерацию кожи. Но его активность белее выражена, чем у МУ.

Видимо, это связано с его большей способностью стимулировать активность макрофагов, анаболической и антиоксидантной активностью, что ускоряет течение 1-й фазы раневого процесса, оказывая мембраностабилизирующее и противовоспалительное действие.

Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать мазь ОМУ, особенно на гелевой основе, а также прием его внутрь для ускорения заживления ран любого генеза.

22

Выводы

1. На ранах кожи различного генеза (лоскутных, линейных, ожоговых) установлено ранозаживляющее действие мазей с оксиметилурацилом.

2. Ускорение заживления ран более выражено при применении мази с оксиметилурацилом на гелевой основе. Оптимальная концентрация мази 5%. Ранозаживляющее действие 5% мази с оксиметилурацилом превосходит эффект 5% мази с метилурацилом.

3. Оксиметилурацил при энтеральном введении в коже не обнаруживается, но в небольших концентрациях препарат присутствует в струпе - ожоговых ран. Введение оксиметилурацила внутрь усиливает эффект мази.

4. При применении мази с оксиметилурацилом, особенно на гелевой основе, биомеханические- свойства рубца больше, чем в контроле, приближаются к таковым здоровой кожи.

5. Оксиметилурацил понижает концентрацию малонового диальдегида и не изменяет содержание оксида азота в сыворотке крови крыс.

6. Стимуляция заживления ран под влиянием оксиметилурацила подтверждена гистологическими и гистохимическими исследованиями.

Список работ:

1. Плечева Д.В. Влияние мази с ОМУ на регенерацию кожных ран у крыс /Д.В. Плечева, Л.М.Чудновец,, Ю.В.Шикова // материалы Республиканской конференции молодых ученых РБ «Медицинская наука- 2002», посвященный году здоровья, 70-летию БГМУ и Дню мед. работников.- Уфа ,2002.- С. 67.

2. Влияние оксиметилурацила на репаративные процессы в коже крыс/ Д.В. Плечева, ФАКаюмов, Е.К Алехин., В.В.Плечев, Ю.В Шикова //Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология»- 2002.- №2-3.- С. 124.- №399. С-Петербург.- изд. «Эскулап».

3. Влияние оксиметилурацила на содержание глюкозаминогликанов и гликогенов при регенерации в эксперименте / Д.В. Плечева, Ф.А.Каюмов, Е.К Алехин., В.В.Плечев, Ю.В Шикова // Научно-теоретический медицинский журнал «Морфология».- 2002.- №2-3.-С. 125.-№400, С-Петербург.- изд. «Эскулап».

4. Плечева Д.В. Эффективный способ применения оксиметилурацила для стимуляции - заживления кожных ран и антиоксидантное действие препарата при раневом процессе / Д.В. Плечева, Ю.В. Шикова // Материалы межвузовской студенческой конференции по проблеме здоровья молодежи, посвященная году здоровья и 70-летия БГМУ. «Здравоохранение Башкортостана» БГМУ 70 лет. Спецвыпуск.- №3.- 2002.-С. 94-95.

5. Плечева» Д.В. Фармакологические свойства иммуностимулятора оксиметилурацила / Д.В. Плечева, Е.К Алехин., Д.Н. Лазарева Проблемы создания новых лекарственных средству/ Издательство «Гилем».- Уфа .2003.-С.12-13.

6. Плечева Д.В. Стимуляция репаративной регенерации кожи крыс оксиметилурацилом / Д.В. Плечева, Е.К. Алехин //Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2004.- Т.67.-№4.- С.55-57.

7. Плечева Д.В. Оксиметилурацил - стимулятор репаративной регенерации кожи // Рациональное использование лекарств.: Матер. Российской научно-практической конференции.- Пермь,2004.-11 ч.-С.35-36.

8. Плечева Д.В. Влияние оксиметилурацила на репаративную регенерацию ожоговых ран //Материалы 69-й Республиканской итоговой научно-практической конференции- студентов и молодых ученых.- Уфа, 2004.-С.32-33.

9. Иммурег / Д.Н. Лазарева, Е.К.Алехин, В.В.Плечев, В.М.Тимербулатов, Д.В.Плечева//Уфа, 2004.- издат. «Башкортостан».-монография.-103 с.

Патенты и изобретения:

1. Стоматологический гель для лечения воспалительных заболеваний полости рта / Ю.В.Шикова, В.А.Лиходед, В.В. Плечев, Д.В. Плечева, А.А. Голубь и др.// Патент на изобретение № 2226383 от 10.02.04.

2. Средство для ускорения заживления ран / Ю.В.Шикова, Д.В. Плечева, В.А.Лиходед,В.В. Плечев, А.А. Голубь и др.//Решение о выдаче патента № 200311388/15 от 22.04.04.

3. Средство для лечения заболеваний глаз с метронидазолом и оксиметилурацилом / Ю.В.Шикова, Д.В. Плечева, ВАЛиходед, В.В. Плечев, А.А. Голубь и дрУ/ Решение о выдаче патента № 2003109909/15 от 14.05.2004.

4. Способ определения оксиметилурацила в крови / В.ВПлечев, ВА Лиходед, Ж.М. Головастикова, Г.В. Аюпова, Ю.В. Шикова, Л.Г. Чудновец, Д.В. Плечева и др.// приоритетная справка № 99119220 от 13.09.1999.

ПЛЕЧЕВА ДИНА ВЛАДИМИРОВНА

СТИМУЛЯЦИЯ РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ ОКСИМЕТИЛУРАЦИЛОМ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 23.07.2004. Формат 60x90, Заказ № 146. Тираж 100 Отпечатано в типографии ООО «Штайм» Лицензия № 227 от 3 ноября 2000 г. 450005, г. Уфа, ул.8 Марта, 12/1

»17035

Актуальность исследования.

Несмотря на большое число средств, предложенных для ускорения заживления ран, интерес к этой проблеме не снижается, т.к. существующие препараты не всегда или недостаточно эффективны, а часть из них способна вызывать побочные эффекты. Часто требуется применение одновременно нескольких средств, воздействующих на разные патогенетические механизмы раневого процесса.

В связи с выявлением новых патогенетических механизмов последнего появились такие препараты, как анаболики, некоторые цитокины, усиливающие образование оксида азота, антиоксиданты и пр. Механизм стимуляции заживления ран не однотипен, но важным условием регенерации является стимуляция синтеза РНК, ДНК и белка. Поэтому в последние годы большое внимание как стимуляторам репаративных процессов стали уделять анаболикам, в том числе гормону роста и производным андрогенов ( Koller J., et al., 1998, Lai S.O. et al., 2000, Chai I. et al., 2002).

Отмечают благоприятный эффект L-аргинина ( Tsai H.I. et al., 2002),-который регулирует не только микроциркуляцию, но и пролиферацию через увеличение образованного из него оксида азота.

В связи с тем, что в регуляции регенераторных процессов установлена роль иммунной системы, есть попытки ускорить регенерацию с помощью цитокинов и стимуляторов иммунитета. Определенное место среди стимуляторов регенерации занимают антиоксиданты.

Наибольший интерес представляют те препараты, ранозаживляющее действие которых обязано нескольким механизмам действия.

Таким поливалентным действием обладают пиримидины (пентоксил, МУ). МУ давно успешно применяется как стимулятор регенерации в виде мазей. Препарат обладает несколькими свойствами, которые объясняют его ранозаживляющее действие, - анаболическое, противовоспалительное и иммуностимулирующее.

Другое производное урацила - оксиметилурацил , в 2002' году разрешенный для применения в> медицине в качестве стимулятора иммунитета, - активнее МУ как иммуностимулятор, анаболик и антифлогистик, обладающий, кроме того, выраженным антиоксидантным действием. Препарат малотоксичен, не обладает аллергизирующим; тератогенным, мутагенным и канцерогенным действием. Указанные свойства косвенно свидетельствуют о возможности ранозаживляющего эффекта ОМУ.

В доступной литературе имеются лишь* единичные сведения, касающиеся данного свойства препарата (Исмагилова А.Ф. и др., 1998), указывающие на то, что мазь ОМУ bv пять раз меньшей концентрации оказывает одинаковое действие сМУ. Улучшение регенерации оценивалось не по скорости заживления в процентах от исходного, а по абсолютному размеру раны.

Оставались неизученными вопросы, касающиеся, сравнительного действия препаратов в одинаковых концентрациях, не выяснены» оптимальные концентрации мази и характер мазевых основ, возможность воздействия- ОМУ на раневой процесс при энтеральном введении,. его„ фармакокинетика. Большой научный и практический интерес представляло изучение закономерностей заживления ран различного1 генеза, морфологических особенностей репарации, прочности и эластичности образовавшегося рубца. Все вышесказанное во многом предопределило цели и задачи настоящего исследования.

Цель исследования:

Усиление ОМУ репаративной регенерации кожных ран разного генеза и выявление некоторых новых механизмов ранозаживляющего действия препарата.

Задачи исследования:

1.Изучить ранозаживляющее действие ОМУ на резаных (лоскутных, линейных) и ожоговых (термических и химических) ранах по сравнению с ё

2.Выяснить оптимальную концентрацию мази, выбрать мазевую основу и определить схему применения ОМУ.

3.Изучить фармакокинетику ОМУ при энтеральном введении.

4.0пределить некоторые механизмы ранозаживляющего действия

ОМУ: а) наличие у препарата антиоксидантной активности (изменение содержания МДА); б) влияние на содержание оксида азота при местном и энтеральном введении.

5.Изучить морфологические особенности регенерации под влиянием

ОМУ. б.Определить влияние ОМУ на биомеханические особенности рубца после заживления раны. S

Научная новизна исследований:

Впервые проведено комплексное исследование влияния ОМУ на заживление кожных ран различного генеза в сравнении с метилурацилом.

Установлено ускорение заживления кожных ран различного генеза под влиянием мазей с ОМУ и более выраженный эффект последнего по сравнению с метилурацилом.

Впервые определены оптимальная концентрация мази и мазевая основа. Изучена фармакокинетика препарата и его присутствие в струпе -раны при энтеральном введении. Впервые установлено влияние ОМУ на заживление ран при энтеральном введении. Впервые при применении ОМУ и пиримидинов вообще дана комплексная биомеханическая характеристика рубцов после заживления ран. Установлены антиоксидантная активность ОМУ на фоне раневого процесса (по степени снижения содержания МДА) и отсутствие влияния препарата на содержание оксида азота.

Гистологическими и гистохимическими исследованиями подтверждено ускорение заживления ран под влиянием- ОМУ формирования рубца: и нормализации метаболических процессов при лечении мазью с ОМУ.

Практическое значение работы:

1. Установлено, что ОМУ более активный стимулятор репаративной регенерации кожи, чем МУ.

2. Уточнены оптимальные мазевые основы, концентрации мазей и схемы применения ОМУ для повышения эффективности препарата.

3. Выявлено, что стимуляция репаративной регенерации мазью с ОМУ позволяет рекомендовать ее для использования в практической медицине (хирургии? и дерматологии), причем при ожоговых: поражениях кожи целесообразно местное применение препарата сочетать с приемом внутрь.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Мазь с ОМУ ускоряет репаративную регенерацию кожных ран различного генеза, причем ее эффект превышает действие мази с МУ.

2. Оптимальной концентрацией' ОМУ в мазях является 5%, лучшая-мазевая основа-гель. .

3. При введении ОМУ внутрь препарат обнаруживается в крови, многих органах и струпе ожоговых ран. •

4. Энтеральное введение ОМУ усиливает эффект мази, особенно при ожоговых ранах.

5. Антиоксидантный эффект ОМУ проявляется и на фоне раневого процесса.

Апробация работы и публикации.

Основные положения диссертации: доложены на VI конгрессе международной ассоциации морфологов в г. Уфе, 2002 г.; Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан "Медицинская наука - 2002", посвященной году здоровья, 70-летию БГМУ и Дню медицинского работника; Межвузовской студенческой конференции по проблемам здоровья молодежи, посвященной Году здоровья и 70-летию БГМУ; на IV-ом Всероссийском научном семинаре и молодежной научной школе "Химия и медицина", Уфа, 2003 г.; 69-ой Республиканской итоговой научно-практической конференции студентов и молодых ученых РБ с международным участием "Вопросы теоретической и практической медицины", 2004 г.; расширенном межкафедральном заседании кафедр фармакологии № 1 и № 2 (БГМУ, 2004).

По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 1 монография в соавторстве, имеется 1 патент , 2 положительных решения на выдачу патента и приоритетная справка.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, -иллюстрирована 24 таблицами, 31 рисунком. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения, выводов. Список литературы включает 124 отечественных и 56 иностранных источников.

Выводы

1. На ранах кожи различного генеза (лоскутных, линейных, ожоговых) установлено ранозаживляющее действие мазей с оксиметилурацилом.

2. Ускорение заживления ран более выражено при применении мази с оксиметилурацилом на гелевой основе. Оптимальная концентрация мази 5%. Ранозаживляющее действие 5% мази с оксиметилурацилом превосходит эффект 5% мази с метилурацилом.

3. Оксиметилурацила при энтеральном введении в коже не обнаруживается, но в небольших концентрациях препарат присутствует в струпе ожоговых ран. Введение оксиметилурацила внутрь усиливает эффект мази.

4. При применении мази с оксиметилурацилом, особенно на гелевой основе, биомеханические свойства рубца больше, чем в контроле, приближаются к таковым здоровой кожи.

5. Оксиметилурацил понижает концентрацию малонового диальдегида и не изменяет содержание оксида азота в сыворотке крови крыс.

6. Стимуляция заживления ран под влиянием оксиметилурацила подтверждена гистологическими и гистохимическими исследованиями.

ГЛАВА 9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для ускорения заживления ран в настоящее время предложено и применяется много различных по структуре и происхождению лекарственных препаратов, чаще местно в виде мазей, линиментов, аэрозолей. Лишь немногие средства, как это уже изложено в обзоре литературы, используются для резорбтивного действия. Механизм стимуляции заживления ран не однотипен, но важным условием для регенерации является стимуляция синтеза РНК, ДНК и белка, поэтому в последние годы большое внимание как стимуляторам репаративных процессов стали уделять анаболикам, в том числе гормону роста и производным андрогенов.

В связи с тем, что в регуляции регенеративных процессов установлена роль иммунной системы (Бабаева А.Г., 1972 и др.) , ускорить репарацию можно с помощью цитокинов и стимуляторов иммунитета, особенно макрофагов, от функции которых как инициаторов иммунного ответа и одной из первых линий защиты зависит успех репарации. Именно макрофаги способны убивать микробы, продуцировать цитокины, стимулировать активность фибробластов, гистиоцитов и др. элементов соединительной ткани.

Поэтому Hong R. (1997), один из видных американских клинических иммунологов, назвал макрофаги клетками "на все случаи жизни".

Определенное место среди стимуляторов регенерации занимают антиоксиданты, роль которых заключается в основном во влиянии на процессы альтерации и особенно - воспаления (ускорение 1-ой фазы раневого процесса).

В связи с тем, что, как правило, отдельные препараты обладают лишь некоторыми указанными свойствами, создавались и создаются для стимуляции репарации комбинированные средства, состоящие из нескольких препаратов.

В связи с этим большой интерес представляют производные пиримидинов - соединения с поливалентным действием, что связано с их влиянием на синтез нуклеиновых кислот. Они обладают анаболическим, противовоспалительным и иммуностимулирующим ' действием, и их влияние на процессы регенерации было показано многими исследователями (Бандман A.JL, 1957; Грех И.Ф.,Самойлов Н.И. 1963; Русаков В.И., 1971; Горбунов С.М. и др., 1978; Билич Г.Л., Колла В.Э., 1982).

Но особое внимание как стимулятор регенерации привлекает производное МУ - ОМУ, превосходящий МУ по способности повышать поглотительную способность макрофагов (Алехин Е.К., 1967; Лазарева Д.Н., и др. 1967; Плечев В.В.,1974).

ОМУ обладает помимо других свойств, присущих пиримидинам, еще и выраженным антиоксидантным действием, что позволило ожидать больший ранозаживляющий эффект этого препарата. Это предположение оправдалось.

ОМУ оказался эффективным в мази в 5 раз меньшей концентрации, чем МУ (Исмагилова А.Ф. и др., 1998) при заживлении кожных ран, в том числе инфицированных ран у крыс, особенно при комбинации с синтомициновой эмульсией. Авторы судили о большем эффекте препарата не по скорости заживления, а по одинаковому эффекту препаратов, взятых в разных концентрациях. Кроме того, эффект учитывался не по скорости заживления в % от исходного размера раны, а по абсолютному размеру раны, а исходный размер всегда варьирует. Для утверждения о большей эффективности ОМУ по сравнению с МУ нужен был иной методический подход: нужно было сравнить действие препаратов в одинаковых концентрациях и выяснить оптимальную концентрацию этих препаратов, а так же выбрать наилучшую мазевую основу, выяснить некоторые механизмы стимулирующего действия ОМУ на регенерацию и рациональные схемы применения препарата.

В опытах на крысах с резаными ранами было установлено, что лучшей .мазевой основой является гелевая; по; сравнению с вазелином и эмульсией. Это было достоверно как при сравнении средних сроков заживления^ так и по скорости сокращения площади .раны. Та же закономерность наблюдалась и в опытах с ожоговыми ранами.

Следует отметить, что гель; сам, как. и эмульсия, но не вазелин, обладает ранозаживляющим действием.

Проведенные опыты. на крысах показали, что оптимальной концентрацией ОМУ в мазях как для лечения ожоговых, так и резаных ран является 5%, т.к. достоверного различия; в действии 5 и 10% не было. Мазь с ОМУ на гелевой основе не всегда; была более эффективна, чем МУ-ая. Видимо, имела значение (установлена нами) стимуляция заживления самим гелем: Сравнение мазей с ОМУ и МУ (на вазелиновой основе) на резаных и ожоговых ранах свидетельствует о большей эффективности мази с ОМУ и по средним срокам заживления и по скорости заживления, а на гелевой основе различия,., как и в опытах с. резаными ранами, были не всегда - лишь на 10-й день площадь оставшихся. ран у крыс, леченных мазью с ОМУ, была достоверно меньше, чем при лечении МУовой, а в одной серии опытов на 7-й день мазь с ОМУ на геле была достоверно эффективнее геля.

При термическом ожоге мазь с ОМУ лишь на 12 день вызывает тенденцию к сокращению площади раны по сравнению с вазелиновой основой. Было сделано; предположение, что образовавшийся грубый; струп на месте ожога препятствовал проникновению ОМУ из мази в рану. Введение одновременно со смазыванием ОМУ внутрь в дозе 50 мг/кг . вызвало достоверное ускорение заживления по сравнению с контролем.

Повышение ранозаживляющего эффекта мази с ОМУ введением его внутрь было основанием для предположения^ что ОМУ при введении внутрь, оказывая резорбтивное действие, попадает в рану. Фармакокинетика производных пиримидина была изучена совместно с

Ж.М. Головастиковой. Нами были определены основные фармакокинетические параметры, а позднее, совместно с Ю.В. Шиковой, было выяснено, что ОМУ попадает в струп раны, но в коже не определяется.

Поэтому при грубых струпах (ожоговых ранах) рационально вводить его и внутрь.

Повторение опытов с введением ОМУ внутрь одновременно со смазыванием показало его большую эффективность и при резаных ранах, чем только при применении его местно. Усиление ранозаживляющего действия мази с ОМУ с одновременным введением его внутрь безусловно является не только следствием попадания препарата в рану, но результатом его системного действия: стимуляции иммунитета противовоспалительной активности, анаболического и антиоксидантного действия.

Таким образом, рационально, особенно при ожоговых ранах, применять ОМУ в качестве ранозаживляющего средства как местно, так и внутрь, причем прием ОМУ внутрь обеспечит устранение иммунодефицита, развивающегося при ожоговой болезни, и анаболический эффект, что очень важно при ожогах. Начинать лечение необходимо на 1-3 день, как это было замечено для МУ Г.Л. Биличем (1986). Начало лечения на 5 день после воспроизведения ран, как показали наши опыты, не дает эффекта. Видимо, это связано с выраженным влиянием ОМУ на I фазу раневого процесса (противовоспалительное и антиоксидантное действие). Как известно, в первые 1-3 суток наблюдается максимальное увеличение митотической активности эпителиоцитов эпидермиса (Билич Г.Л.,1986).

Ускорение I фазы раневого процесса под влиянием ОМУ во многом зависит и от повышения активности макрофагов, что установлено многими исследованиями (Алехин Е.К., 1967; Лазарева Д.Н., 1967; Плечев В.В.,1974, и др.). Известно, что- заживление любой* раны, трофической язвы, абсцесса, очагов распада в значительной' степени зависит от функциональной активности клеток моноцитарно-макрофагальной системы, от их способности-убивать микробы, продуцировать цитокины, стимулирующие активность фибробластов, гистиоцитов и других элементов соединительной ткани. Макрофаги участвуют практически во всех процессах, связанных с сохранением постоянства^ внутренней среды организма и с явлениями репарации (Пинегин Б: В., 2000).

Поэтому большее влияние ОМУ по сравнению с МУ на процессы репарации может быть связано и с более выраженными у ОМУ способностями, чем у МУ, стимулировать активность макрофагов.

Каков же механизм ускорения заживления ран под влиянием ОМУ ?

Безусловно, большое значение имеют анаболическое и антикатаболическое действие препарата - усиление синтеза белка, РНК и ДНК (о чем сообщалось в обзоре литературы). Наличие у ОМУ антиоксидантного и . противовоспалительного . действия; .;а. таюке. стимуляция им активности макрофагов приводят, как уже указывалось, к ограничению I фазы раневого процесса.

Влияние на I фазу раневого процесса; оказывают все противовоспалительные средства, многие из которых ускоряют заживление ран.

Так, ускоряет заживление послеоперационных ран мефенаминат: натрия (Калинина Р.Г., 1997), который применяется; в стоматологии в качестве стимулятора регенерации (Машковский М.Д., 2000). Поэтому, надо полагать, что противовоспалительный эффект ОМУ играет определенную роль в ускорении заживления ран. Важно, что, как правило, все антифлогистики - антиоксиданты (Насыров Х.М., 1986).

Антиоксидантная активность ОМУ установлена и изучена В.А. Мышкиным (1985, 1986, 1995, 1996). .

В проведенных нами исследованиях на крысах с ранами различного генеза показано также влияние ОМУ на содержание ТБК - активных продуктов.

ОМУ снижал степень повышения МДА в крови крыс после нанесения ран (на 3 и 5 день). В более поздние сроки - 12 и 16 дни, когда у многих животных раны зажили, различия в содержании МДА отсутствовали. Сопоставление степени заживления ран и содержания в крови МДА показало, что на содержание МДА в крови влияет и состояние раневого процесса.

Поэтому снижение МДА в крови под влиянием ОМУ связано не только с его антиоксидантным действием, но и ускорением заживления ран, хотя антиоксидантный эффект ОМУ безусловно имеет значение в ускорении регенерации (влияние прежде всего на I фазу раневого процесса).

Снижение ПОЛ при ожогах под влиянием антиоксидантов отмечено и другими авторами. Как и в наших опытах с введением ОМУ, другой- антиоксидант - эмоксипин снижал содержание МДА в крови собак с ожогами (Беляев А.Н. и др., 2003). Подобный эффект оказывал антиоксидант - мексидол: препарат снижал содержание ДК( диеновые конъюгаты ) и МДА у больных с ингаляционной травмой (Смирнов С.В. и др., 2003).

Фитопрепарат - салсоколлин, обладающий антиоксидантным и цитопротекторным действием, одновременно с ускорением регенерации кожи снижал повышенный после ожога уровень ПОЛ (Исмаилов Ж.К. и др., 2003).

Надо полагать, что антиоксидантное действие ОМУ при раневом процессе имеет определенное значение в механизме ранозаживляющего действия.

Имеет ли значение в ускорении заживления ран изменение под влиянием ОМУ синтеза оксида азота ?

Оксид азота (NO) является свободнорадикальной молекулой, играющей роль молекулы-мессенджера в регуляции клеточного и тканевого метаболизма (Манухина Е.Б. и др., 1988; Уразаев А.Х., Зефиров A. JL, 1999; Ванин А.Ф., 2001; Chabrier Р.Е. et al., 1992).

При самых разнообразных патологических процессах (стресс, травма, ожог, воспаление, интоксикация и пр.) количество оксида азота повышается (Голиков П.П., Голиков А.П., 1999; Меерсон Ф.З. и др., 1994; Смирин В.В. и др., 2000; Chen L.W. et al., 1999).

Как уже приводилось в обзоре литературы, экзогенный оксид азота ускоряет заживление ран (Шехтер А.Б., и др., 1998; Кабисов Р.К. и др., 2000; Гундарова Р.А., и др., 2001), как и обогащение пищи аргинином -источником образования NO (Chen X.L. et al., 1999).

Кроме того, NO, обладая антиоксидантными свойствами, может оказывать противовоспалительное действие (Меньшикова Е.Б. и др., 2000; Kanner и др., 1991).

Активируя гуанилатциклазный и другие клеточные механизмы, NOb норме и, особенно, в условиях патологии обуславливает вазодилатацию, ингибирует агрегацию тромбоцитов, активирует активность макрофагов и нейтрофилов, пролиферацию фибробластов. Учитывая ранозаживляющее действие NO, а также его увеличение при воспалении и усилении синтеза белка (индукция LNOS-индуцибельной синтазы NO), можно было предположить изменение его содержания при применении ОМУ в качестве ранозаживляющего средства.

Влияние ОМУ на содержание оксида азота представляло интерес и для выяснения механизма спазмолитического действия ОМУ (сосуды, кишечник).

По нашим данным, изменений в содержании оксида азота у крыс на 12 и 18 день после воспроизведения ран не было.

Однако в более ранние сроки - на 3 сутки - наблюдалась тенденция к увеличению содержания оксида азота в крови животных, получавших внутрь ОМУ в дозе 50 мг/кг.

Увеличение оксида азота в этой серии опытов совпадало с уменьшением МДА. Это согласуется с данными, приведенными в литературе об уменьшении оксидом азота СРО за счет активации антиоксидантных ферментов (Kanner и др., 1991) и как антиоксидант-перехватчик радикалов (Kanner и др., 1991; Меньшикова Е.Б., и др., 2000).

Но причина снижения МДА в эти сроки, скорее всего, связана с антиоксидантными свойствами ОМУ, а повышение содержания NO в ранние сроки - следствие раневого процесса.

При введении же ОМУ внутрь в 2 раза большей дозе (100 мг/кг в сутки и местно в виде мази) в эти же сроки содержание оксида азота достоверно снижалось лишь в группе крыс, где местно применялась мазь с ОМУ на гелевой основе, т.е. у тех крыс с ожоговыми ранами, у которых шлаболее быстрая репарация ран. У леченых крыс (ОМУ внутрь и мазью на гелевой основе) содержание оксида азота составляло 22,32+1,67, а у контрольных (смазывали гелем) - 36,2+3,6. Разница в скорости заживления ран у леченых ОМУ и гелем была статистически достоверной (Р<0,01).

Таким образом, приведенные нами исследования не позволяют утверждать, что ОМУ способен увеличивать содержание оксида азота.

Определение его содержания в разные сроки после воспроизведения ран не выявило достоверных изменений, лишь в ранние сроки, где шла быстрее регенерация, содержания NO было ниже. У животных же без ран ОМУ в эти же сроки не вызвало изменений в его содержании.

Ускорение репаративных процессов под влиянием ОМУ подтверждаются результатами изучения влияния ОМУ на прочность рубца после заживления ран.

Мази с ОМУ не влияли на прочность рубца на 15-22 день после нанесения резаных и линейных ран.

Однако в более поздние сроки - на 26-30 день после ожога -биомеханические свойства рубца под влиянием ОМУ приближались к таковым здоровой кожи, особенно это было выражено при применении мази на гелевой основе.

Имело, видимо, значение одновременно со смазыванием введение в этих сериях ОМУ внутрь. Увеличение показателя 8 (относительное удлинение), видимо, надо расценивать, как повышение эластичности кожи.

Ускорение репаративной регенерации под влиянием ОМУ подтверждено гистологическими исследованиями.

При лечении ОМУ к 25 дню наблюдается более полноценная по сравнению с контрольными' животными регенерация, как эпидермиса, так и дермы, а так же развитие придатков кожи; у контрольных же регенерация не завершена.

Применение ОМУ способствует нормализации метаболического гомеостаза, судя по содержанию в заживших ранах, по сравнению с контрольными животными, гликогена и гликозоаминогликанов.

Следует отметить, что под влиянием ОМУ формируется более нежный рубец.

Таким образом, ОМУ обладает, как и МУ, способностью ускорять репаративную регенерацию кожи. Но его активность белее выражена, чем уМУ.

Видимо, это связано с его большей способностью стимулировать активность макрофагов, анаболической и антиоксидантной активностью, что ускоряет течение 1-й фазы раневого процесса, оказывая мембраностабилизирующее и противовоспалительное действие.

Результаты проведенного исследования позволяют рекомендовать мазь ОМУ, особенно на гелевой основе, а также прием его внутрь для ускорения заживления ран любого генеза.