Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток: функциональная роль в иммунном ответе, иммуноаллергодиагностическое значение при некоторых видах патологии

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КИЕВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. акад. А. А. БОГОМОЛЬЦА

СТАБИЛЬНОСТЬ ЛИЗОСОМНЫХ МЕМБРАН ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТСК: ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ В ИММУННОМ ОТВЕТЕ, ИММУНОАЛЛЕРГОДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ПРИ НЕКОТОРЫХ ВИДАХ ПАТОЛОГИИ

На правах рукописи

УДК: 612.112.3:576.311.344.2:612.017.1

/9УУ

Шаронов Анатолий Степанович

14.00.36 — аллергология, иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Киев — 1989

Работа выполнена во Владивостокском государственном медицинском институте на кафедре микробиологии

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук, профессор Г. Н. Дранник

Доктор медицинских наук, профессор И. И. Долгушин

Доктор медицинских наук В. А. Малыжев

Ведущее учреждение—Институт иммунологии МЗ СССР

Заседание состоится 19 г. в 13 часов 30 ми-

пут на заседании Специализированного Совета Д 088.13.06 при Киевском Ордена Трудового Красного Знамени имени академика А. А. Богомольца (Киев-4, ул. Репина, 23, аудитория кафедры пропедевтики детских болезней).

Отзывы на автореферат высылать по адресу: 252057, г. Ки-ев-57, пр. Победы, 34, санитарно-гигиенический корпус.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (Киев-57, ул. Зоологическая, 1).

Автореферат разослан « » 19 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета, доктор медицинских паук В. Г. Бордонос

ОБДАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Разносторонние подхода к изучения мо-конуклеарных фагоцитов как по методическим приемам, так а по уровню исследования дают зозмогность5 уточнить известные функции и изучить их механизмы, раскрыть новые свойства этих хлебок, обладающих широким спектром функциональных возможностей и играющих уникальную роль б разнообразных формах проявления заадты организма. В настоящее время не вызывает сомнения особое значение мононуллеариых фагоцитов в процессинге антигенов, кооперативном взаимодействии с Т- и 3-лимфоцитами в процессе реализации антигенной информации, в создании дополнительного сигнала в виде интерлейкина-1 для стимуляции лимфоцитов в неспецкфической резистентности макрофагов /Мечников й.И.,1954; Петров Р.В., 1969; Петров Р.В., Хаитов P.M., Аттаулахаяов Р.И.Д933; Кульберг А.Я., 1985: Петров Р.Б. .с соавт., 19В7/.

Вааную роль в реализации иммунокошетентных свойств мононукле-аршп фагоцитов кграпт их лизооош и лизосомкые ферменты, от активности которых зависят многие функциональные проявления этих клеток, в том числе результат внутриклеточного процессинга антигенов /Учитель К.Я., 1973; Фрейдлин И.С., 19Ö4; Медуницын Н.В., 1957/. йри этом проявление активности лизесомньос ферментов определено строго во-времени и пространстве, что связано с компартменталлзацией лизссом п определяется функциональным состоянием лизосомных мембран /11окроз-ский.А.А., Тутельян В.А., 1976/, в частности, таких их функций, как проницаемость и стабильность.

Проведенные глубокие биохимические исследования роли стабильности лгэосоиных мембран в функционировании лизосом и г целом клеток показали возможность регуляции этой функции лизосом гормонами, г?'--• медиаторами опосредовано через циклические нуклеотиды /Коровкзл ,'' 19В2; Панин J1.E., Ыаднская H.H., 1987;Isnnrro L. , 1974; ffelln

1934/i зависимость процесса лабилизадаи лизосомных мембран от акаизации лизосомных фосфодипаз /Ее Wo if к. е. а, , 1977/,

Стиечено, что лабилизация лизосомных меибран фагоцитирующих клеток является необходимой в процессе слияния первичных лизосои с (|ахчзсомами / Boiognani ь. е. а. ,Х982 / и,в связи с этим,важна для проявления фагоцитарной активности клеток. Вероятно результата иммунофизиологичеокЕХ исследований, свидетельствующий о возможности регулирования силы тамунного ответа на начальных атахгах иммуногенеза на уровне макрофага, посредством веществ, в том тесле гормонов, Г-юющих точку ирилозенчя к циклическим нуклеотидам /Денисенко Я.П. с соавг., 1979; Ясрнева ¿¡.А., 1979, 1982; Лазарева с соает., 19 b 5/, другие функциональные проявления фагоцз-тируюцих клеток могут бить тшг э связаны с изменением стабильности лизосомных ыембрая фагоцитирутацих клеток.

Однако, целенаправленного изучения этого вопросе до настоящего времени не проводилось. Не известны закономерности изменения стабильности лизосомных мембран фагоцитируй .их клеток при фагоцитозе, в динамике иммунного ответа, влияние антигенов, поглощенных фзгоцптаот, на стабильность лизосомных мембран последних, влияние окрунавдих макрофаги клеток, в первую очередь лимфоцитов, на со-столгае их лизосомных кеыбран, зависимость силы иммунного ответа с? изменения стабильности лигосомлых мамбрал мононуклеараых фагоцитов, перерабатывавших антигены, особенности изменения стабильности дазосомных мэмбран и связанные о пина ш._ушзняя фун.»сщр. фагоцитирующих и»еток при заболевания«. Умеете с тем, вахне -ь исследования поставлены^ вопросов счезкдка k?j: и теороти«еоксм, так и в практическом откоиешш. '; >.

Usjf, ксследовлгая. Эксперпи:нталх-но выявить закономерности изменения стабильности лизосошш изибран фагощтирущих клеток р процесао их функционального п'Жзлр.нул, определить на &той

основе возможность целенаправленной регуляции функций фагоцитирующих клеток, разработки вопросов н.муноаллергоди агностики, скрининга мембраяотрошшх и радиопротектавннх препаратов.

Задачи исследования.

1. Выявить возможность изучения лизосомомембранотропного действия различных факторов - веществ, антигенов, физическта воздействий, первичного отбора радиопротекторов на модели оценки стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток.

2. Определить характер изменения стабильности лизосожшх мембран фагоцитирующих клеток в зависимости от фагоцитарного процесса.

3. Изучить степень зависимости состояния стабильности лизо-сошшх мембран фагоцитирующих клеток от присутствия других клеток, в частности, лимфоцитов, составляющих микроокрухение.

4. Провести изучение зависимости стабильности лизосомных мембран фагоцитирущих клеток от процесса активации фагоцитируй щих клеток, перераспределения клеток при введении антигенов в какрооргаяизм.

о. Оценить стабильность лизосошшх кеибран иононуклеарных фагоцитов в процессе иммунной перестройка кзкроорганизш ин вило в эксперименте с учетов влияния антигена на стабильность лизосом-ннх мембран мононуклеарных фагоцитов, дифференциально проанализировать роль ранних и поздних изменений стабильности лизооомкых мембран фагоцитирующих клеток и их связь о силой иммунного ответа.

С. Экспериментально показать возможность модулировать функциональную активность мононуклеарных фагоцитов и изменять силу иммунного ответа путем коррекции стабильности лизосомлых мембран этих клеток.

7. Показать клиническую значимость оценки изменения ставя/а» ности лизосомннх мембран моноцитов крова при некоторых заболеш> птях.

В. На оснозе полученного экспериментального материала разработать гипотезу о ролл и механизме изменения состсянчя стабильности лизосомпых мембран йагоцптлруетгих клэток ь функциональном проявлении последних.

Научная новизна. Зцзрачз проведено всестороннее изучение ролл стабильности лизоосмных мембран .¡фагоцитирующих клеток, показавшее, что стабильность лизосомныу мембран этих клеток динамичный процесс, отражающий соьокугаость действия разнонаправленных факторов: фагоцитарного процесса, поглощенных антигене», микроокруже-пг-я, активации СЗ компонента кемплзмента. Обнаружено стабилизирующее и лабилизирующее в отношении лизосоккых мембран фагоцитирующих клеток действие фагоцитируемте антигенов.

Показана взаимосвязь изменений показателя стабильности ;п:зо-сомных мембран /НСЛ!Ц/ фагоцитирующих клеток, дифференцированных на рашше и поздние изменения, с динамикой нарастания антител в эксперименте при иммунизации крыс и у больных гриппом, зависящая от стабилизирующих- и лабилкзирующих свойсте антигенов. Вняв лена более тесная связь ранних изменений ПСЛМ фагоцитирующих клетог: ври введении ангпгеноз, определяемых актглацкей фагощтрующах клеток, с уровнем антптелообразова-ия. Отмечено, что суаествечным признаком поздних кзкенегптй ЮМ фагоцитирующих клзток в процессе жлуниза-ции является проявление специфической лабилизации ллзссскшх мембран ахпх клеток при повторно": встрече с антигеном. Выявлена возможность изменять Загоцятариую актпвнеоть и сил!' крупного ответа ■путам коррекц/и стабильности лизосомпяс мембран.

Усоверкекспаован методический подход г.ммун югпчесгсх п вирусологических исследоаапгй: раьоьботан новий алгерх'олокпеекпл метод, основанный на оценке 1ЯЖ кулуглшреваккых со спзцЕфпчеста: аллергеном и без аллергена фагоцитирующих меток / *дое?овпренпс чн отрасяевое рац.прецлокечле ? 0-2738 от ИЗ.II.85/, $сталовлзна

его диагностическая значимость дри туберг-сулезе, крабовой аллергии, подтвержденная в экспериментах: на крысах. Создан сдособ выделандл /Авторское свидетельство на изобретение :Ь 1341773 от и

получен препарат аллергена из крабов, поп&я^зоианЕнЯ б спецпЬгчес-кой диагностике кребовоЗ аллеогеп в методе рпэндд Д ДСЛГЛ 2 других общеприняты:: методах. Утвердяез как изобретете "Сдспоб получения то:.<злекса SAC 1,4,2 для количественного опредэлечня ^садгсдальн:* актявпоетт: СЗ ураксти кодалемевта" /Авторслое с.-?дде?5.1СТЗо кд изобретение .« 1077277 от 15.06.¿4, Яалл. ч?,/, псподмсеаяги?. д," изучения рели 03 ксдаонеята ло:я1ле.'.;ентг. з ;'2:,:екепнн стабильности лззеоокша кембра.ч Лагоцгггруюевп клеток у бельки^ с дзучендоГ. га-тологпе;':. Впорвне для определения здрусоз иепользезана as егэссб-ность лзбилиэировать лдзосокдге гск, что завидено ав-

торским свидетельством я« изобретение 1I2023I от 15.12.е4,Бглл. .'г V.;,

Те о пе т :пп с кая з на чиг.о от ь. э результате проделанной работд была выявлена возмозаость доК^ргнцпровять антигена по епсосбнос-ги лабилпзировать пли стабллгзпрсвать .тазоссмтае фагзцг-и-

руетдос клзто.ч при их эндоцптозг и внутриклеточном процесоанге.чгс г.ю:\яо расценивать как новое свойство антигеноь. Разребогап метедг-. чески;! подход для оцекгся этого свойства антигенов.

Показана прднцпгкал^ная зоз::о.т;-'ость perj.rjpoFaTb уровень ак-тктелообразевания путем целенаправленно? коррекд-ч стгбв.тьдэотн япосоиптс мембран л^гоцитируиг-и л.-вток в раяниЗ гергод аяду-ктдз'.ю' ,}азн гммуногереза о учетом лягоосмомемЗргзотроашпс свойств елтпгзчов,

Ваяв «па ота<5ллпзчру»дая а етлосёнпг гэоехшад даибрак Sa.ro-пптнрутлд клзток ау.т;элссть ддуосчгюв, особенно S-гоззжсз^» и рассчитана степень этого ».тяги« через коэ^5лп»нт стабютэацдл..

ha основании ."рогеден:ткх 5>г.сзэудгмн?альных геаг-здеваздй м-

сказана гипотеза об изменении количества "якорей" для лизосомнкх фэрмеятов при активации фагоцлтирущих клеток, что определяет стабилизацию ели лабилизацшо ех лезосомных мембран.

Цоак-гпческая значимость. Разработанный способ определения показателя стабильности лизосомчых мембран фагоцптиоуздих клеток, утвержденный как отраслевое рацпредложение, был положен в основу утвержденных Ъ.04.Н9г. ¡¡В СССР методических рекомендаций "Оценка изменений стабильности лизосомнкх мембран мояснуклзаркых Ьагоцитов как метод Пфцгноаллергодкагностики и скрининга иембранотропных и радиопротективных препаратов", Ьти методические рекомендации могут быть полезны при изучении стабилизирующей к лабилязирутзеЗ лизосо--мкке мембрана актавностя различных '5акторов /физических, химических, биолох'ических/, улучшают диагностику инфекционных /грипп, ОРВИ, туберкулез/ и аллергических /крабовая аллергия/ заболеваниЗ.

Методические материала диссертации вокли в каппоаннуо б соавторстве с Н.С.МотавгошоЯ и Б.".Ковалевы:,: монографию "Микромегэдн в иммунологии" /Владивосток, издательство дальневосточного ïнивер-смета, 1937/.

Полученный широко апробированный препарат аллергена из крабов позволял разработать специфическую диагностику крабово" аллергии с использованием выявленных его лизосомомембранотропннх.свойств.

Результат« исследования воили во внедренные fia региональном уровне создашше в 1Э87 г. "Рекомендации по профилактике, лечению, диагностике крабовой аллергии и енойначковых »аболчвангЯ у рыба -sob", использование которых создает э:соном>.чес:суя ь^Лективкость 107244,2 рублей в год при применении на 4 плавзаводах Управления прсизводствекш»ш флотилиями "Дальиорепродукт".

Материалы по совэризнстЕОзагаы мзтодгчеокогс подхода к опенке СЗ хоапокента комплемента экспонировались гя 2ССГ в И82г.

и используются в практическом здравоохранении.

В практику научных исследований и практического здравоохранения внедрены созданные в процессе выполнения диссертации 3 рац. предложения отраслевого и 4 местного значения.

Совокупность представленных материалов предполагает перспективность исследования нового направления на основе разработанной методологии х оценке функционирования фагоцитируицих клеток во взаимосвязи с состоянием стабильности их лпзоссмных мембран в плане создания подхода к регуляции иммунного и патологического процесса з организме через ллзосомомембранотропнке средства, скрининга безвредных для организма одноназравлзнно действующих лпзосо-момембранотрспяых факторов, дальнейшего совершенствования нмыуьо-аллзргодаагностики различных заболеваний.

Апообачг-я катепеалов диссертации. Еатериала диссертации Ска представлены па: Всесоюзно:.; симпозиуме, посвященном АОО-дзткп создания К.11. Мечниковым фагоцитарной теории иммунитета "^агонитос и иммунитет" / Москва, 1983/; 17 Всесоюзной конференции "Мировой Океан" /Владивосток, 1983/; Юбилейной научной конференции владивостокского Государственного медицинского института /Владивосток, 1984/; УШ, П Зональных научных конференциях "Факторы клэточ-. кого и гуморального иммунитета при различная физиологических и патологических состояниях" /Челябинск, 1584, 1986, 1988/; научно-техничсской конференции "Совершенствование средств и метсдоз ох-ра!ш здоровья работников водного транспорта" /Ленинград, 1985/; кокисся»« по морской медицине Бассейновой секции "Тихий Океан" ¿£0 АН СССР /Владивосток, 1Э65/; заседании Приморского отделения Всесопзного общества -яки?пологов /Владивосток, 1Э86, 1908/; Зо-налъж ?. конференции "Актуальные проблем иммунологии: иммупэдефй-цитн и еллукокоррекцил" /лладюзоеток, И87/; Всесоюзной яочфегюи-цпи "|Летед;.лсгия, организация и итоги массовых И£мунолоппескк:

обследований" /Ангарск, 1987/; Всесоюзной конференции "Система комплемента, ¡¿ехакизмы активации и регуляции. Значение в биологии г ыедЕцине. /КироЕ, 1987/; Зональной научной конференции "Медико-ссцвельные аспекты проблемы Человек-Океан" /Владивосток, 1988/; коареренцЕг "Экспериментальная и клиническая иммунология на Востоке страны" /Красноярск, 1986/; сешии Ш /молекулярная иммунология/ Ученого Совета Института Иммунологии Ь!3 СССР /15 октября 1937 г./; Л! акгдуЕародноц симпозиуме по пищевой аллергии /Авигнон, Франция, 1983/.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 28 работ / J монография, в журналах и деюнирозано в ВИК'.ТИ - 7 , описания хзобретенпй - 1 , проспект ЗДКХ СССР - I, методические рекомендации - 2, в сборниках - I.

Объем и структура диссертации. 1.!атериал диссертации изложен ка J72 страницах маляшописк, из них текст занимает 233 страниц, диссертация состоит из введения, 7 глаЕ, заключения, выводов, списка литература, включагс;его 333 работ / из них 143 отечественных и 190 иностранных/. Лллвстративний материал представлен Б8 рисунками í 18 таблицами.

Оановнне положения, вциоси-.'ые та зациту:

1. Состояние стабильности лизоесмных мембран фагоцитирующих г-лоток определяется влиянием «икроокрукения, гормонов и нейромс-диатороЕ, СЗ компонента комплемента, изменяется при реализации фагоцитарной активности и при активации зтих клеток.

2. Антигены дафференцкруотся по способности стабилизировать zjz хаоапгаврок&гь лазос-'^аые мембраны фагоцитирующих клеток, сто свойотьо антигенов реализуется при асс/низаща в ранний период индуктивной фазы иммуногенеза г. ьюгет быть использовано для целе-вагр&БЖКЕОЙ регуляции антителообразовакия.

3. Исследование ПСЛМ фагоцитирующие клеток является основной нового подхода в иммуноаллергодяагностике инфекционных /грипп, ОЕВИ, туберкулез/ я аллергических заболеваний /крабовая аллергия/ и при скрининге мембранотпепных и радиопротективных препаратов.

г.

, СОДЕРЖАНИЕ РАБОМ

Материал и методы исследования для выполнения поставленных в работе задач было проведено шюгостороннее экспериментальное исследование на 427 лабораторных животных -крысах,куриных эмбрионах /650/, .использованных для получения и оценки активности вирусов в предварительных, опытах й клини-ко-лабораторное исследование крови зДорозых /150 человек/ и больных /200 человек/ лвдей.

Возможность выявления лпзссомомембранотрбпнбго действий ве-аеств, физических воздействий, первичного отбора радиопротекторов на модели оценки стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток была определена в 30 сериях проведенных зксперйм°нтов на 37 беспородных крысах и II крысах Вистар , включающих выполнение 1540 клеточных проб, и 14 сериях экспериментов С Кровью 22 здоровых людей, включающих проведзние 441 клеточных проб. На этой se ¡.:атериале проведена оценка характера изменения стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток в зависимости от фагоцитарного процесса. Было также поставлено 4 серии экспериментов /259 клеточных проб/ на 27 крысах Вистар и 27 крысах Август а 262 клеточные пробы с кровью здоровых людей с целью выявления действия лимфоцитов, составляющих постоянное микроокружение для фагоцитирующих клеток, ни стабильность лизосомных мембран последних.

Анализ зависимости изменения стабильности лизосомных мембршт фтгоцитирутсда клеток от процесса их активации и перераспределен;:;!

íр? 9£ - 9 -

клеток при введении антигенов в макроорганизм сделан по результатам 6 серий проведенных экспериментов на 26 крысах Вистар прч выполнении 146 клеточных проб.

На материале, подученном в ¿3 сериях экспериментов на 123 беспородных крысах и 32 крысах Вистар /2422 клеточных проб/, дана оценка характера изменения показателя стабильности лизосом-ных мембран кононуклэарных фагоцитоз крови и пэритонеатьного экссудата крыс в процессе иммунной перестройки макроорганизма ин зиво при иммунизации антигенами с различной лизосомомембрано-тропной ак-твностью /эритроциты морской свинки, зимозан, крабовый аллерген/, установленной в предварительных опытах, проанализирована роль ранних и поздних изменений стабильности лззосомных мембран фагоцитирующих клеток и г.: связь с силой иммунного ответа.

В 5 сериях экспериментов /230 клеточных проб/ на Ь крысах Зистар показана возможность модулировать фагоцитарную активность мононуклегрнш: .сагопдтсв. Способность изменять силу иммунного ответа путем коррекции стабильности лизосоь лх мембран фагоцяти-рутащх клеток определена в 6 сериях экспериментов на 191 крысе Вистар.

Клиникс-лабораторнос исследование для установления значимости оценки изменения стабильности лизосомнкх мембран ноноцитов крови при заболэваниях проведено с кровью здорсЕых и больных различными -формами патологии ладей. Аля этого изучены больные аллергическими /крабовая аллергия, бронхиальная ас л- а/, инфекционными /грипп» ОРЗй, хронический бронхит/ и анфзкциошшми с аллерг/лес-ким компонентом /туберкулез/ заболеваниями, Общая структура обследованных отражена в табл. 1.

Среда больных крабовой аллергией были обследованы больные с аллергическим де^матитоа /20 человек/ а с аллергические брон-

ТаОшпа i.-

Общая структура обследованных лвдей

Количество обследованных Вед патологии лвдей

Крабовая аллергия г 51

Бронхиальная астка 12

Хронический бронхит 18

Туберкулез легких 21

Грипп Ь7

ОРВИ ' 41

Всего: 200

Примечание: Все пробы с кровью обследованных выполнялись троекратно.

хитом /30 человек/ - наиболее частыми формами этого заболевания /Дубняк U.C., 1987/.

Больные гриппом и 0Р5И обсждоьаны г динамике двух-, трехкратно в период двух эпвдемй гриша в 1986 г. в г.Владивостоке.

Кровь 1С5 здоровых лпдей исследовалась для контроля параллельно изучению крови больных людей / 358 клеточных проб/.

Проведенные исследования предполагали использование 25 катодов, которые отражены в табл. 2.

Таблица 2.

Направление, объем, методы исследования

И Направление Методы Объем

1 _ 2 3 4

1 - Накопление и 1.Накопление ьирусов на модели 20 серий

титрование куриного эмбриона /Соколов

вирусов. «.»'.., 1965/

2.Титрование вирусов в реакции 20 серий

гег/дгглютинации / Тес Р.,

1S8I/.

1

2

3

4

.11. Получение кра- З.Спосо<5 выделения аллергена 3 серии

бового аллер- /Шаронов А.С.,Дубняк B.C., гена Шимчик ¿'.А.,Пьянова P.E.,

Сыч Г.С., 1987/.

Ш. Получение ш~ монокомпетентных клеток.

4.Баделение мононуклеаров кро- 523 пробы ви по А. зоуци /1963/ в описании А.Н.Чередеева /1Э76/. 5 .Выделение гранулоцитов крови 21 проба методом, описаншы Г.Срак и З.Прейспер.

6.Получение перитонеальных клеток 291 проба катодом, описанным Р.Б.Петровым, 1.В,Ксвальчуком, Е.З.Соколовой

/1977/.

7.Разделан: Т- и В-лимфоцитов Ь4 пробы методом b.Morette, M^Fervari -

ei, К.L.Durante, M. С. Mingari

/1975/.___

Ii.Оценка стабильности лизосом-ннх мембран, активности лизосо-мных ферментов.

8,Оценка стабильности лизосо- 90 опреде-

ыных мембран методом, вписан- . леяий ным А.А.Покровским,В.А,Тутель-яном, Л.В.Кравченко /1975/,A.A. Докрозским, Ü.А.Тутельялом /1976/.

9. Определение стабильности лкзо- ЬбСО опреде-сомных мембран лрклипаэдих лений

ю.г.туноко'.летентных клеток по А.с.шаронову /те/.

Ю.Мпкрометсд определения лизсци- J2749 опре-ма /Мотавкина Н.С. .Ковалев Ь.М. делений Шаронов A.C., 1979/.

II.Ме-тед определения кислой фос- Ь1 с..реде-фагази согласно инструкции из пений стандартных набороз реактивов для определения фосфатаз с учетом методических рекомеадаяиЗ А.А.Покровского с соавт.,197ь.

1

2

3

4

12.Определение катепсина по Anson SO спределе-

/1235/ в описании И.а.Учитель /1978/ ний 13.Определение белка но Лоури Л951/ 141 определе-

ние

400 определений

472 определения

372 определения

33 определз-Z, ний

У.Методачес- 14.Иммунизация яивотннх различными 3 схемы

кие подходи антигенами по разработанная наш к иммунизации схемам с использованием реко\хдда-и оценке ш- ций по иммунизации, описанным P.A. цунной пере- Аверкиной '/1973/. стройки. 15.Выявление, антител в реакции гем-

агглютинации /РТА/, описанной О.В. Бухариным и А.П.Луда /1972/.

16. Микрометод реакции потребления комплемента /UiapoHOB A.C.,Дубняк К. С.,1987/.

17. Титрование антител в реакции радиального гемолиза /РРГ/,описанной H.A.Чайка /1985/.

18.Тсст непрямой дегракуляции тучных ,UieTOK ПрЫС ПО МЗТОДУ 3.SchwarT K.Vardinon /1966/ в модификации Л.М.Ишимовой и Л.И.Зели-ченко /1957/ с расчетом показателя, дегрануляции тучных клеток /ПДТУУ по В.А.Фрадкину, Е.Н.Лавренчик, С.< Радунской /1977/.

19.Постановка пробы Манту обще приняты;.« способом

20.Мнкромгтод определения функциональной активности Со фракции гсом-племеьта /И!ароноз A.C.,Потапов 13.Й.,

______;___1*84/.______.

\У1."етодичес- 21.Микрсметод определения .'«поди- 210 о преде к -■ ки'1 подход тарной ?ктквности макрофагов- /Мо- ний к изучения тагкина И.С..Шаронов A.C.,Самойл»к фагоците <>яэй 0,-;.,1%7/.

актавнестя и 22,Определение количества лизосом 82 определения

21 проба

245 определений

а-

- IJ -

I 2 3 4

количества методом, описанным Дл.Дингл /1980/'

лизосом.

Я1.Статиста- 23.1.'.етсд вариационной статистики в Bes показате-

ческая сбра- описании II. Ф.Ракитского /1934/. ли просчитаны

ботка мате- 24.Определение коэффициента керре- на ЭВМ марки

риала. ляцеи по И.Е.Азмарину и á.A.ücpo- EC-I022 с ис-

бьеву /1962/. пользованием

25.Определение коэффициента вариа- программы на

ции мзтедом, описанным П.В.Тере- языке "Форт-

нтьевым и Н.С.Ростовой /1377/. ран"

РЕЗУЛЬТАТУ КССЛЕйОВАНКЙ

I. Состояние стабильности лизосомных мембран фагоцитир.тояих перитонеальных клеток крыс я мононуклеаокых фагоцитоз крови крыс и людей при модуляции пх овейотв воздействующими факторами ин вит ро

I. ¡Действие_на с таб и ль I юс ть_;т з о с омггых мембран тагоцшэдэугс-врсс пегатонеа%;шх_Елеток крыс_л_монок2клеарных с^агоцртов крови крыс_и_;щцей_ф2зическ1к и И1шческих_«][)акто£ов.

Исследование проводили в направлении оценки действия на стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток физических /лучевое воздействие/ и химических /гормоны, найромедцаторы, антибиотики, растворимые полисахариды, митогены/ факторов, процесса фагоцитоза различных объектов /эритроцитов морской свинки, частиц зимоэаяа/, лимфоцитов и их Т- п В-посуляций, составляющих постолгаое микроокрукзние для фагоцитирующих клеток, сочетать: различных факторов. Предполагалось проверить возможность оценки лнзосомомембранотропной активности различных ¡факторов на модели разработанного нами способа, уточнить степень влияния их на

- !<♦ -

.стабильность лизоссмных мембран фагоцитирующих клеток за тем, чтобы ъ последующей работе иметь возможность объяснять механизм и модулировать изменения стабильность лизссомных мембран фагоцитирующих клеток при выполнении различных модельных экспериментов, решапдих поставленные в диссертации задачи.

Проведенные исследования позволили подтвердить стабилизирующее действие гидрокортизона, адреналина гздрохлори^а, лабилизи-рувщее - ацетилхолина хлористого, выявить лабилязирущий эффект возрастающих дез пенициллина, цепорина, гепарина, фГА, отметить отсутствие непосредственного лизосомомембракотропного действия стрептошщйиа. -ак. ПСЛМ фагоцитирующих клеток при действии 5 ед/мл пенициллина и 10 :.зт/мл цепорина составляли 45 ± 3,2 /о и 45 ± 3,1>/£, что соответствовало контрольному уровни без воздействия антибиотика - 46,3 - 2,б>'5. ПС'Лг^ фагоцитирующих клеток возрастал при воздействии 50, 60и и 5000 ед/мл пенициллина /соответственно НСЛЦ равен Ь2,Э 1 2,5;;; 77,5 X 3,8£; 73,6 1 2,®/ и 100, юио, 10000 мхг/мл цепорина /11СЛМ был равен 50 ± 54,4±4,7/^

и 67,5 г 4,Э«/. Заметнее л&бялпгирупзаз действие гепарина проявлялось в дозе 50 и 500 ед/мл: ЛСЛМ бил равен 96,2 ± 2,4 2 и 91,^ 1 что значительно превышало контрольный уровень данного показателя / Р<"0,05/. ФГА проявлял свое ллбилизпрующее действие в дозах 1, 40, 400 вдг/мл при культивировании клеток в течение 12-15 '¡ас'.®,!, 2, 4 суток, з то врем г,, как ПОЛ* культивированных г. теленке -¡асов моьокуклеариых {«агоцитсв послз воздействия &тчя доз -.ГА значительно не отличались от контроля /р^С,С5,''

Оцеакп луч'Т^го когдоСсгг.чя на стабильность лизосошшх мем-' ('■ран моченуклеирних Фагоцитов крови долей позволила отметить ста-Оялкягруял*« деЗстак?. лучей в исследоианннх дозах 200, 700, 1500 езнтгар: по отпоетешт к контрольна^ уровню /57,9- 4,6%/ ПСЛМ в оп.;те снижался, составляя соответственно 33,.2т2,45%; 28,5-1,67$; 23

- Ь -

Подученные на данном этаде результаты дозволили убедиться в адекватности разработанного метода, уточнить степень влияния изучаемых веществ на стабильность лизосоуных мембран фагоцитирующих клеток.

1:. Измене низ ста0илъности_уизоежш1х мембда:: йаго^.1ТЕ2утаор:_ пе£итонеадьных_кл9Ток кркс_и_моно!12клеапнах ¿¡агодктов крози крыс_.

Для изучения изменения стабильности тазосомнах мзмбран фагоцитирующих клеток в процессе реализация фагоцитарной активности были разработаны 3 схемы исследования с использованием в качестве фагоцитируемых объектов эритроцитов морской свшпси и частиц зимозана. Б соответствии со схемой .'I I, предполагавшей суммарную оценку злияши фагоцитарного процесса та стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток фагоцитируешь объекты /0,1$ эритроциты и О,СТА частицы зимозана/'вяаамодзЙотвуюг с кл&ткями в течение всего периода культивирования последних, составляющего 12-15 часов. Яослз этого производили оценку ЗСЛМ.

Вторая схема включала проведете фагоцитоза перитокеальными фагоцитирующими клетками эритроцитов морской свинки или соответственно частиц зимозана, взятых в той же концентрации, в течение 20, 40, 60 мго:. с последующей оценкой 11СЛМ. Условиями схемы а 2 создавали возможность дифференциальной оценки особенностей изменения ЛСЛМ на различных стадиях фагоцитоза. Схема й 3 предполагала возможность оценки характера'изменения ИСУМ фагоцитирующих клеток в процессе прикрепления к поверхности отекла иди пластика, что расценивается как "феномен неосуществленного фагоцитоза" /ноггь и. , 1968/.

В результате проведенных исследований была выявлена лабюш-зация тазссомкшс мембран фагоцитируют клеток на ранних этапах

фагоцитарного процесса, в период взаимодействия с прикрепляемой поверхностью, адсорбции и знтерналкзацяи фзхоцитиругшх объектов. а период переваривания поглощенных объектов на характерные изменения ПСЛИ фагоцитирующих клеток сказывается природа фагоцитируемых объектов. Так, эритроциты морской свинки в этот период и суммарно определяют стабилизирующий эффект, частицы эимозана - лаби-лизирувдий. Это позволило разделить фагоцитируемые объекты по суммарному эффекту измепепиг I3CJ2/5 фагоцптлрущк.': клеток на стабилизирующие / эритроциты/ и лабилизирувшие /частицы зимозана/. ü связи с тем, что исследованные в качестве фагоцитируемых объектов эритроциты морской свинки и частицы зимозана представляют собой антигены, выявленные лизосоиомембранотропнне свойства могут быть отнесены к ним, как к антигенам.

В дополнительно проведенных экспериментах была проверена возможность диф{>еренцировать различные антигены по этому признаку. Было выявлено, что к стабилизирующим антигенам помимо эритроцитов относятся туберкулин с твином, аллерген из кальмар-.в /получен по разработанному нами способу, защищенному A.C. £ Í341773 от 1.06. 87/. К антигенам с лабилизирувэеЕ активностью были отнесены зимо-зановый, вирусные /вирусы болезни Ньюкасла, везикулярного стоматита, гриппа/'. Очищенный туберкулин i LT,1;, аллергены из крабов и куку-марии, ■ такл:<? полученные пями вышеуказанпш.: способом, проявляют слабую лияоеокомекбранотрппнуя активность и поэтому очределзин в TOTTI.« группу как антигены, но визаваивде резких отклонений уровня 'i(iCá от контрольного.

Стл^ильгюс1ь_л];э?гш1тих мембдал мзноду^л£ад11ш_фэгоц2тов__ л», чей и H^j2STO¿oa;.X!íuxjín-f2>>¿arot, крыс^^.я_контактном мо^Дотгт ¿оцитиг;:^

¡íixr>jиоь ъ достояна яд окружении лт*; oip'toi. и непосредственном взаимоотношении о нем, но;? опухл? арни<? фагоциты изменяв? свое функ-

циональное состояние, в частности, наблюдается изменение стабильности лизосомяых мембран при культивировании фагоцитирующих клеток в присутствии лимфоцитов. Аутогенные лимфоциты человека, добавленные а культивируемым моноцитам, приводят к снижению ШУИ, что свидетельствует о стабилизации лизосомных мембран моноцитов: ДСЛМ моеоцитов в контроле составлял 56,9 - 2,0 %, в опыте - 46,8? 1,%. Ещё более выраженный эффект стабилизации наблюдается при воздействии аллогенных лимфоцитов /0.СШ составляет 44.3 ^ 2,0/2 /.

Углубленный экспериментальный анализ генетической рестрикции

стабилизирующего эффекта лямЬоцитов с использованием крыс йлстар

и Август , определение преимущественной роли Т- или В-популяции

лимфоцитов в проявлении этого действия позволил выявить интересные

закономерности. Оказалось, что наиболее выраженное стабилизирующее

действие на лизссомные мембраны ыоюнуклеарных фагоцитов оказывают

как сингенные, так а нзеингенше В-лимфоциты. В присутствии син-

генкых В-лишюцитоз происходит снижение ШИШ мононуклеарных фаго-крыо.Вистар

вдтов^с 6"У,й5 £ 2,3 % г контроле до54,5 - 1,3 % в опыте /р< 0,05/ и с 68,9 ± 1,8% до 62,2 ± 1,75 / р< 0,05/ у крыс Август . Не-скнгенные В-лда.^сциты заметно снижают ПОЛ'.' мононуклеарных фагоцитов как крыс Вистар /63,9 г 1,9 %/, так и крас Август /63,7 - 1^8 %/, Об;цая популяция синге.пшх и песингекши лимфоци-юв такте приводит к стабилизации лизосомных мембран мононуклеарных фагсцитОЕ крыс Вистар и Август.

Проведенные расчеты зависимости снилсенпя ЛСЛМ фагоцитирующих клеток от воздействия введенных лимфоцитов показали, что величина cim5eH7.fi. ПСЛМ в опыте /с лимфэщт&ми/ определяется коз И^цгетпом снижения или стабилизация, равным С,С8 ~ 0,01, Взаимосвязь ыезду 11Ш'. контроля /без лимфоцитов/ и опита /с лимфоцятщш/ через коэффициент стабилизации была ркраяена уравнением: ПСИ 1Г х /I - к / = ПСЛ1ЛГ

4. 01£н^_сотетаетого_действпя ка_фагод£ТЕР2Щие клеткн_ оазнонапдавленных в отношении изменения стабильности_их лизосомных мембран ¿акторов^ Выявив самостоятельное действие различных факторов на стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток, нами было проверено сочетаяное их действие с оценкой изменения функции клеток. В частности, было проведено исследование действия гидрокортизона, адреналина гидрохлорида и ацетилхолика хлористого на фагоцитоз частиц зимозана и эритроцитов морской свинки - фагоцитируемых объектов с разнонаправленной лизосомомембранотропной активностью. При этом оценивалась поглотительная способность фагоцитов с расчетом фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя.

Было выявлено стимулирующее влияние на фагоциты как эритроцитов, так и зимозана, ацетилхолина хлористого и угнетавшее - адреналина гидрохлорида; фагоцитарное число по сравнению-с контрольным /1,78 - 0,06 для эритроцитов и 3,89 - 0,05 для зимозана/ при дополнительном воздействии ацетилхолина хлористого в дозе 4,4x10""® И увеличивается в отношении эритроцитов до 2,92 ± 0,09, частиц зимозана - до 8,0 - 0,05; при воздействии адреналина гидрохлорида в той же дозе уменьшается в отношении эритроцитов до 1,25 - 0,06, в отношении частиц зимозана до 3,3 - 0,06. Фагоцитарный показатель по сравнению с контролышм /20,6 £ 0,7,2 для эритроцитов и 69,4 £ - О.ЬС % для зимозана/ при воздействии ацетилхолина хлористого увеличивается в отпоион-.лт эритроцитов до 31,4 £ 1,1%, в отношении зкчозапа до 80 - 0,?;1, при воздействии адреналина гидр, хлорида уменьшается в отношении '..ритроцчтон до 11,4 £ 0,5^, в отношении частиц зимозана до г>7,8 - С,

Ггдрокортизон, облладльи? также стабилизирующим действием, аналогично адренглтгу гидрохлэриду приводит к снижению фагоцитарной активности макрофагов: фагоцитарное число в отношении эритро-

цитов сшкено до 1,08 ± 0,05, в отношении зппозана до 1,97*0,05; фагоцитарный показатель снижен в отношении эритроцитов до 9,7 -г О.Ьй, в отношении зимозана до 43,3 - 1,3 %.

Другим направлением оценки сочетанного действия разнонаправленных факторов было изучение 11Д2Ы (фагоцитирующих клеток, взаимодействующих с частицами зимозана в условиях одновременного лучевого воздействия. £ыло отмечено, что частицы зимозана, обладал лаби-лизирувдиы действием /ПОЛЫ под воздействием зимозана увеличивается от ЬЗ £ в контроле до 65,7 ± 4,2% /, снимают стабилизирующий эффект облучения /ЛСК. облученных дозой '¿00 сантиГр клеток, составляя 33,2 ± 2,45;"., повышался до Ь4 £ 3,5% при действии 0,01/4 взвеси части; зимозана/.

Полученные результаты'оценки сочетанного действия факторов с разнонаправленной лизосомомембранотропной активностью свидетельствуют о возможности регулировать эту функцию лязосомных мембран, что определяет практическое использование получении^ данных.

11. Оценка стабильности лизооомннх мембран 'загоцитируэдих ператонеалышх клеток и мононуклея-рннх фагоцитов крови крыс при иммунизации разлгчними антлгенами.

1. ¿штика_ишлеие,ния_11С)и ¿яго^тлдутащх^пергтонеадькых клеток, г_монон^иеарнух йагодитозз кров» крыс_п£и_11м».1у1!гзш;ии_ £азда'чгем1_антиге:юмл.

При введении крысам антигенов, обладающих разной лизосомсмеи-бранотропной активность», наблюдаются особенности в динамике изменения НОШ фагоцптирущлх клеток 1шмуниз;гровак:шх мзотних, исследованных на 3-;>, 7-й, 10-й, 15-й ден;. от начала иммунизации, Цри зтом, дяка:;нка изменения ИСЛМ фагоцитирующих т--петок крыс, иммунизированных зшоз?лот:л антигеном характеризуете.? вкра-лснк-гм сни;-:е-

кг.е:.! показателя на 3-л2 день после введения антигена /дС£! льрн-тонеальных .{агоцитд^удаих клеток раЕен 31,G - при контрольном значении показателя о2,3 - 3.6Í, мононукл?арных фагоцитоз - 40 -~ 2,9$ по сравнению г, контрольным показателем э7,5 * 2,55 / и последующи;.! постепенным i-юзтанозлением к 15-му дне. Дрн иммунизодли эритроцитами морской свинки наблзгдетоя тенденция к лодье.му /резня ilCJII.5 перитонеальнях .Ьагоцитируатнх клеток з мснокуклеарных гаго'-д:-тов крови са 3-ий день после введения антигенов /со ответственно У5 - 2,сД а 53,6 £ 3% / с последузцям снияекием нззэ ксятрс.тьзогэ уровня на '.'-ой /соответственно 78,3 i 2,-íí'S z 43 £ 1,5* / а особенно на 10-ый день /74 £ 2,9;- и 44 i 2,2% /. л 15-му днз происходи? восстановление значениЗ îiCJLÎ.î пермонзальяых ^агогддтгруюсзх ллеток /80 £ / к мононуклеарных 'фагоцитов кров и крыс /51 £ 1,5л /.

'Лспервнентально оыла дроазализгровапа зоз^сднсоть азаезензя ЦСЛМ .{агоцатярузсвх клеток з данзшкз умьунгзатн: за счет пер.-раз-пределе нпя клеток. Ныло выявлено в и.онослое дрддддащгх клеток у некл-унпзированнта крыс 19,в - 2,0S макро^агоз, 20,2 - 1,7? моноцитов, 16,3 £ 2,3?¿ гранулоцятов к 44,5 £ 2лпг.:^о:д:?оз. ¿опсдни-тельно проведенные эксперименты с они екнн.'-г.: популяциями клето* позволили внлзить индивидуальное ÍIC-S!, составлящпе для мсисгдтод 63 - 2,5'л, для грдпулоютов - Ü5,I - 1,G%. для макрор-гсв - >4,5-£ 2,ft», для лимрсцитоз ~ 0. Однако, люфцстк оказывает влдярпе на суммарны.1 11СЛМ плеточной популяция через коэ'<рпг.:еят сгай?дазг-ц;л К = -а , где - члсло дпм$оютоп, сосглБДКйг.ге разницу Г2к.ду чиолом опри^еляемцх в одктной пробе лтн-эосглоз и 1 -

- 1,5 • Ю1* - дисло,«! npHoy?orsy»T;;:s ? контроле; -

- кооф'пцпент стяЗп.тпзадп.' I лду^одитн, лазите лънз рзвнп." 0,-30,*Су.д-л»ч>й ПС/Й дю/^счатадгия по :

íis n J^JLstJÜJrj- х /I - X /,

н

где Ни?. - удельный ПСЛМ макрофагов, представляющий произведение ЦСЛН ьакроЬагов на пх состазляпцун часть б монослое прилипающих кхгток 2 соотноаеншг с моноцитами и гракулоцитами; П кн и П гр -удельные 2С.И соответственно моноцитов и гранулоцптов, рассчитываемые гдалоггчвэ П ик; ч - сумма частей, составлявших отношение удельянх голгчеегь фагоцитирующих клеток - моноцитов, макрофагов, граяулоцитов; К - коэффициент стабилизации лимфоцитов.

в динамике зиууппзации крыс зритроцгтарным к зикозановым антигенами было выявлено изменение соотношения среди прилипающих г_".сток. Ь соответствии с представление;! формулой расчета суммарного ^Си сылх определены расчетные показатели стабильности лизосом-кых мембран прилипаюсих клеток в разные дни иммунизации, которые на 3-ий депь от введения антигенов значительно отличались от экс-г'римент&дько полученных: для меток адукЕЗГрованных эритроцитами крыс расчетный ПСЛ.' Сил равен 79,1 - 1,СК, фактический экспериментально полученный - 85 для клеток кмму;:кзированких зи-кс гаком е;,ыс расчетный Е2Л13 составил с2,У - 2,7фактический -- 1 3,С£. Расчетные и фахтгческие суммарные ИСЯ.Ч $агоцЕТир7&-пих платок гь^ункзироьакн^х крыс, выявленное на 7-ой, 10-ый, д«еь пс.гуыгзацги достоверно не отличались /р>0,0£/. ото позволило сде;ить ьыьод с более вааной роли перераспределения клеток ь кэмевеяэд сук?'арного ПС1.£ на 7-ой, 10-и?., 15-ый день иммунизации, ¿олее слзешй цехакгзм изменения IiC.1V клеток кжеет место а первые 3 дай от вачала . иммунизации, по-вилииояу, связанный с непосредственна: изменение* стабильности лизосомных мембран фагошихрукет: клеток. На основали: зтого были выделена ранние / ь периые 3 дня.-' г поздг:кз ¡гаегензд ЕСЛ*.

2, Аналг:: ьаЕЕсгаостг Езмен^киг ¿^с^т^^уто^ вьрхтон^--ь^щх.^гт^ ДИДЬ^-Д ¿У^кгазгх'.прк йнтг^^ет.^-м

Специально проведенное исследование, состояния активности фагоцитирующих клеток з разные дне от начала иимунгзгдгд с использованием общепринятых критериев / об::ее количество клеток, количество лцзосом, активность лизосемных ферментов/ позволило отметить, наличие актизал?"' фагоцитирующее клеток, особенно зкрэгезнэ2 на 3-ьй день от введенлл эритроцитарного и. зимозакоэого антигзкоз. Проведенный корреляционный анализ ззал.юсвязс изменений ПИТ-! фагоцитирующих клеток с показателями активации позволил отметить, что среди исследованных показателей активации клеток два имел» наиболее постоянную по направленности взаимосвязь с изменением ПОЛЛ, что не зависало от природы ачтзвгруяцах факторов. Зтзая показате-ляки активащщ ^агоцатнруюдкх клеток является количества лаз&со-йых .ферментов /лязоцима, кислей фэсфэтазн/ в одной клетке. Зылв-лвКЕая корреляционная связь была обратной средней п седьмой степени выраженности; коэффициент корреляции ПСИ и лазлцгча ь одно» фагощтируюцей клетке иммунизированных эритроцитама крас составил г = - 0,63 при г'вка * 0,25, ПСИ и кислой фссфатазы в одной метке - г - г-С,43 при =0,35. У клеток крыс, иагзгнязнроваяэкх зилозаном, яа&Ьйгцяеат корреляции ПСИ г. лпзоцпма на одну клетку был равен г = -С ,75 при г^,^ =0,22, ЕСДМ и кислой фоефатазк на одчу клетку - г» " -0,,при гв1к =0,21. Это лаходгтея з соответствия с гипотезой А.Д.Искрсьсггсгс с ссавт./1576/ о г.ннзи стабильности лизосомних мембран клеток с прочностью прикрепления ферме н-. тов в /лзоеомах за счет так называя.ш "якорей" / ЗА*^ J., Ь'77/.

' Вячо еде тзнэ яредполозенне об измзнеЕС/ количества лгзосомгаг "ясорвЗ" для .¡чрыентев при актгмда фагоц^тируь^их клеток. ЕреЗ-лохепнн! метеддчелкчй подход для косвенного Е^двлегслл золпчесг-;?. "яхорой" для лпзоквга а -.«'слог |ссфятазк аут^м окгаде.тгии сса-чеотва ьюлзкул лваогзмн:« $ер:дзн??э и одной лзоаай пса^ол^

SKcr.eригектально подтвердить высказанное' предположение. Так, было отягчено, что количество колекул лпзоагаа «: кислой фсс^атази в одно 2 лгзосоке /контрольные уровни для клеток неиииугшзироьанных крыс соответственно равны 4,5 - 0,2 хЮ" и 1С i 0.7 >:10° / ь разное zkz ткгунзгзадак изгоняется. У крыс, иялунизирсванаых оритроик-'.а;г. морской свнякг, на З-кЕ. дзнь эти показатели соответственно сс;т!вглг по лгзоасг.? 2,5 - 0,07 х106, по кислой 1юсратазе -- Л Î О.Ь х10£, на V—оЛ день - II,Ь X о,2 хЮ6 и 73 ± 4 х10С. Г ЕХ.'укизирсьанны;: зимозаном крыс на 3-ий день показатели б^ли

35,С г 1,4 xic': 1! 245 t 40 xIC5, кг 7-о2 день - 29,1,1х :.ÎCV д. 152 - 12 xIÇv. Прсьедешзй порредклонний анализ позволил • ыяьить сильной степени вырггекгюста обратнув ьзалыосвязь пз;.:с:.г-r.zz iiZ.'J- z числа молекул ли поддул г к?слой фос-Ьатазы в одно s лкзо-для показателей •^агоцктгрущг.х клеток ювдикзкровакзи згжт-крыс ко;.;-е ляпе:: бал;: ссстветствелно равна

г - -0,s7 при г*;.-. =0,01 к г = -0,77 при Гв-п= 0,18, для показателя клгтск и^.у::из;грсЕаsv.-nx зп^озало;.: к^ыс - г = -0,Ь при rsl» =0,55 и г = ~j,c'3 при г г.: л =0,1с.

3. Ьаасмосзязь гзкенекгй ПС^.'^.'^гог^игг^их кл£Ток_

с 2?дьнек аатктело^бь&^ойакия. àjk 2«аьльккй ьзгозгз связи изменений • ,'агсцг?П1<укзгх клзг-тсп с уровней антителообрагов^кия парс.-->2ль<:.-, гсследоеангг, дика-ли-s£ изменения uc&i вотиеэедоызшх крыс ь сыасрот.» "j/ок; -определяла кслгчезтвэ антител к приводили кбрродякис.икыГ: анализ sccîîciovoc-те Есличесгьбккых *гмскеяз2 двух гсследо--ан:пгх па^ктр-те.

подученные ддкгы? наличие .обратной избад'.-сья--:' о':/ "

дгку^кк кзхедонзд J!C«L\' яда г ох с -...кс.цл.гачи щятя-

»о»?птр: з.тарк^х актгтвл /жеду уроья&м гета.гилБти^пс.ь и с<>-ргтскеальил ¿аго^ггруидас метек г = - С,с; дри г m;n= С,с;3, а ¿¡CI* UOEOKJEX^apEia ÎSiTOtSTCB Кр-ОЕК г » -0,3 при гкзп» 0,27;

между уровнем кошлементсЕязывалдах антител и ¡1СЛМ ператонсзальннх фагоцитирующих клеток г = -0,6 при rain = 0,54, ЗСЛ1: »сконук.«арных фагоцитов крови г = -0,5 лрп г^а - 0,45/ и пр&.'с£ - с накоплением прсиаоззмозановых антител /кежду уровь_и номилЕ-ке'ДТ-связававдих противозимозанозчх антител и UCJüú сеситснеальгых фагоцитирующих клеток г =.0,4 при гвщ ~0,35, UCSá щконузлеаргых фагоцитов крови г. =0,7. при iain =л 0,о/.

Белее ваяннм было выявление взаимосвязи ранних- гз:акегса,3 ПСЛМ фагоцитирующих клеток с уровнем аятитедоэбразозания. Показано, что между ранними изменениями JJC3U 'фагоцпгзруязих зерптоьреальных клеток и уровнем спетздфзческих антятех при глинизации. г.сыс эритроцитарным антигеном имеется сальная прямая взаимосвязь / г = 0,8, rain =0,35/, при иммунизации зимозаногт агТ£ген;м -- сильная обратная взаимосвязь / г =-0,33, г^^д -0,22/. /:ндтагду».'л>нЛ анализ зависимости количества специфических антител от ранних изменений ПОЛЛ фагоцитирукчих клеток подтвердил ваял денные закономерности,

Таким образом, выявлена противоположная зависимость уровня актителообразозания от ранних изменений üCl'J фагоцаткругеах мэ-ток в отношении антигенов с разной лизосопоме'йранотроцноа активностью» Это явилось предпосылкой для обоснования зозмотяостз регуляции иммунного ответа путем влияния на стабильность лззоссмннх мембран клеток з раннвэ .фазу иммуногенез?, п её экснериыеягальксЗ проверки.

4.Повылйкна татра антител при гсглуниза^рт ¿тюзачом и эритроцитами морской ra^ocowsx

кембпал пегатг ;еалымх_фа1,ощтпр£Кй5^ S^-íSt' . Для коррекции стабильности ль.,оссиоия üeaípas фзгодстзруяда клетокприменяли адреналхв, гздрехторид, ацегллхолЕй хдоргстнХ, гидрокортизон - вещестзэ, сблэдакцие в "зкроэрганжме жотпобрэзъея

действия. Однако, адекватность использования их определяется, ьс—nepiüi, точно установленной направленность») ин виво' и кн к-.-??: влкять на стабильность. д..зосл>мных мембран клеток; во-вгорзх, рааее выязлеюяы корргтируииим через ц-А!8? ¿; ц-Пй дейст-ьгеи па иктенстаассть иммунных реакций /Денисенко П.П. с с.оаЕТ., 1572; лорнекз ¿.A. f 19й2/, что имеет непосредственное отношение к изнекеягг. стабильности лкзосокных мембран иммунококлетентнкх •клеток; в-третых, зозмоеностьв параллельного исследован ля ь зкс-геримзггс вх действия на коррекцгз икмуннг.го ответа в отношении азтггезав с прот;з осслокгп&я лизосомомсм5ранотрэяны:.:;1 свойствами.

Пс.5г%нчя0 зсказ&Яь, что зссделние сдновьелннно с ая-

ткг г-нs перяс.д проявления хаб&звзацвг от процесса $агоцотозд едрочалгк ткдрэхлорид /доза l.lxlü"^'».:/ и адотилхслпн хлористый /д с? 2,2x10"".у/ ирльсдят нг зависимо ст л::зо0шо:се^р&го1'роп1-их c3-í.cri cjrti'j-eHtB к соответственно turaste к понп.тлпкк уровня актгтеязсбр&зоэдккя: уровень протизогрятроцитарпц:: и аротайоашо-зíkié'jt якггтзя составлял в контроле; соответственно' L:/IC8± 19/ г!,с i 0,1'/ гем.е.чА'л, и у2ел1П^2рется по;: параллельном введении адречалжа гхяроыорвад, составлял 1:/1£00 ¿22;i,C/ г £,?.5i 0,95 ге^ц/иг, и уьеньллется при вгедеплг. ацст;«лголика хлористого до 1:/100 i 22/ я 0,7с 1 О.'/й гг«.ед/мл.

Ирг вавдегпп ягг7 вхзеств г той т.г дезе шерез 1 после пиуатзагвл аш'ктгнамн е г-аалоггчко;': дэ-е -кгЛлэдаатся. результат, а0ъд:я»2гё особе-.'ростлггг: лгостаюкгме^гк-огровгяи свойств аоггации: адрьваяа ггдроглоред термозит йЗрьюьакге прэт^ойритроцитармых лнт?т? л /тгге I: (64 i b,V и стг.'^глпруст синтез прот^гогц-.^пчансг::«?-. /3,9 2 С.?. шкггясолгЕ хд-зрееты*, напротив, сиххл-гт

титр грстя»сз:ви>э ввозах /0,5 i 0,25 геи.ед/ид/ и увелк'Ш'агт - про-даоэрстроЗЕтарлгх до I :/I54 ~ 1Ь,€/ при контрольном у;.овке 1: Д1э,В i 10/.

Выявленные ззлояокврности была подтверждены при ж&унгзагд'/' крыс эгирецэтаки барана з дозе, экзиБалчнтноЯ эрстрслграч корс..-:с>Л свяжи: татр в контроле составил I:/?o3 i 36/, пг- одг-.озрем?.кзом введении адреналина гздрсослоркда и антзгеяа - l:/J53o ± 2с0/, введении адреналина гадрохлорида чэрез I час после гл:.7л:г-- I: /255 ± 28/.

Гвдрокортизоа, облааагадай аналогично адреьалгну стабилизирующим действием' такае гормозил синтез аротгБоэратроцггарйзх л стн-:гулиоовал образование противозимозанозых антител: по с резне тал с контрольным уровнем антител, составлявшим 1: /126,25 t 35,5/ хгл протявоэритроцятарных и 1,3 - 0,17 гем.ед/кд для прокээзгагозаао-вых антител, у опнтнюс чрнс при дополнительном введзчга 10 мг/крксу гидрокортизона заявлено снижение до 1:/43 - 17/ просавозрнтрогуг-тарпнх и увеличение до 2,43 % 0,6 геи.ед/кл протпзозтаозаяозвйс антител.

Результат антигелообразоэаяпя при сочетанием ззедекпд аатлге-нов зависит также от лизосомомчмбраяотролкнт сзойств последках. Так, при совместном введении эритроцитов морскоД сеикк-: п частиц зимозана происходит двухстороннее увеличение татра как прэтигоэрат-роцитарких, так и протгвозмозаковых антител. Пса этал спткыглышм для стимуляции антителообразовшшя является взеден:;е эрквроцптгр-ного антигена и далее через 2 часа зимозаногого. В этом сдучзз яаблвдазтся увеличение уровня прстгэсзрптроцптарных алтиел до I:/II00,8 г 222,7/ при оценке на 5-иЛ день по сразивши) а контролем, составлявшим I:/T.26,2 i 35,5/, и до I-./3IC' ~ 322,5." при оценке на 18-ый день, что выей контрольного титра б этот период, разного I:/92,6 i 9,6/. Уос-ве нь прот^озиноаааовнх антител tasae кз 5-Iii; /4,3 - 1,С4 гем.едЛ'л при контрольно:.: титре 1,4 + 0,6-1 гзм. ед/мд/ и IS-uä г"нь от начале. тлукпзацЛл /14,3 ± 3,Э гви.вд/$и при лонтролъноч титре 4,"? £ С,о гем.ед/мл/ возрастает.

При одновременно!: введении двух эритроцитарных антигенов -Ердтродитов морской свинки и барана наблюдается сникенке анхитело-оЗразсваньк. Tai:, если у крыс, иммунизированных эритроцитами морской сьицкк титр антител составляет I:/I58 i 19/, У крыс, иммунизп-рсвакяшс чритроЕИташ! барана - I:/7CS t 147,8/, тс у крыс, иммуки-згрзьаянж однсгрегх-нко эритроцитами морской свинки в барана титр гзтьтел гротиь эритроцитов морской свинки равен 1:/й5,5 i 28,2/, таг: ге и протпЕ зритроцитоь барана - 1:/544 £ ИЗ/.

Подученные данные свидетельствуют о возмо^ност*: регулирова-пг.~ силы иммунного ответа путем коррекции стабильности лпзосомных кембрак фагоцитирующих клеток.

5. изменений ДСЛ.'Л_монон^клеарныу Фагоцитов

при повтор-HvM к^деЕе^ки специфических антигенов j^fiP--

Поздние измене кия суммарного ПСЛ.'.! фагоцитирующих клеток, определяю «cß'в оолзеЗ степени перераспределением клеток, могут значит ель ж/ образом коде £идпроваться при повторной встрече клеток со специфическим антигеном за счят специфической лабклязацик кх лнзосо.м2ых мембран. Этот ьывсд был сделан после исследования пери-тонеалькнх ф&гокгтгруиких кжток к мононуклеаршх фагоцитов крови юьчгозЕрсвашогх различных;: антигенами /зпмозаковый, оритроцитар-зый, крабовый/ крыс при дополнительном культивировании клеток ин ~витрэ со специфическими антигенами с последующей сцепкой i/CXJ.

Так, эритроцгтар'Шл ачтиген," оСгадаяаий стабилизируйте действием, при культивировании с фе^щетгрукьюа.' клеткаж контролиас неииуЕЕЗлфоваюшх крыс српводит к .сшаензи • i'Cffi' перхтонеалышх фагэцггаруьлях клеток от те - 2,7;; до Ь3,4 ± 2,8^, а «оаопуклеар-них фагоцитов ov 82,6 ± 3,4S до bÖ,4 - '¿,8%. Яри культивировании врзтрознгарзсто аетсеча с фегсцгткруадккг • клетками зсдузгезкрован-' ззх крыс происходит увеличение licia от Ы,г ± 3,с£ до 91,2*3,2£

- ¿о -

и от vi,9 ± г;ти до «7,5 £ 3,2£ соотзеггтазздс дердтокддьзх: f&-гоцитирувцих клеток и гагганут.леарных í'joxítos, взятых на 7-ой день у иамуназировазних ::рыс, п от ö2,5 i до ¿0,9 i 3,33 y перитокеапьных фагоцитирующих клеток , к от 75 £ 2,75 до «6,3 + £ 2,4% у мононуклеарпсс фагоцж»ов, взятых на iO-irí дедь у zcçraa-зировашшх крыс.

Ьфт;екг специфической лабилазацуи. в отношении . абалазаруа^егс зимозанового антигена проявляется при культивпроззнил с зигжмапс..: и без антигена в бо.лее варахенном повыгенгд VCZ1 jai-оцптдруаддг клеток доунязнрованных крыс не ср-звнеиаг с клеткалш ааи.грниаррс-ванянх крыс. Кроме того, особе-ностьа спецг.'л.чесноЗ лабилазацея в отноаении данного антигена является более раннее ее прэнглен^е. Так, узе на 3-ай деги. от начала юшуютагсд: наблюдается развитие специфической лабютзащг? : при культявирсвакил перито&еадьня: фз-гоииткрухцих клеток кммут-'дзировалных к г но. о злчозпесвыу антигеном к без антигена UCUW угелячдаается от оС,2 £ 2,5?. до 75,9 £ 3,С?, мононуклеарша 'фагоцитов - от Ы,3 £ 2,55 до 70,3 3,5;í, В то зе 'вреач увеличение ЛСЛМ кле-.'оа контрольна* крыс iwaee зырегопо: or 73,4 ? 2,ОД до ö7,5 £ 2,52 у перитспеалзных клеток и от 7S,<Ä?,C:? до 35,4 - "2,2Я у монокуклеарних $агс.цат<Л> кроии,

Крабовый антиген, относящийся к группе обладайте гллбоЗ лгэо ° сомсмембракотропноЗ ахтидностьЕ пдтдггнов, vase, слогобек выьыэатл спецсфичесь. п лабилизгт"» лнабсмезсг хзчбр&п ¡агодгткрукгда клят*. . гаауназцроваккнх нрыс. Этот »Д^дт с отковенак д«.«мго выявляется ; клеток та .кчздровднннх крыс, аз^тых на 7-oí и Содн день. Tai-:, при культявпреэаюя в кре.'о а антггг.-т а бзэ него ¡repv.-тонеалъных фаго^'гкрут^их vetoK, _зятнх на 7-oíi день о? .лчала иммунизации, происходит возрастаггаб ПС Г* о? С3,& ~ 3,9? до 6. ,9 -

£ 1,7?ь, шненукл .рных JaroicroB с. öl,5 £ до 93,8

- ?? -

Ш. "СтаОЕльн^сть лизсоомнах кембрач модонуклезрных фагопятов кропи лзде? дрг некоторых заболеваниях,

1. ЛСВ'_аоно12йлеарянх батогртов крови людей к динамика

его изменения при гриппе,. ОРВИ^ Ка при*кре Еерусных инфекций были подтверждены выявленные б отношении лабилЕзирувдю антигенов закономерности изменения стабильности лизссокннх мембран фагоцитирующих клеток: выявлено снижение ЛСШ мононуглеарных фагоцитов крови больных в динамике заболевания с восстановлением его значения при выздоровлении /з первую неделе заболевания Í1CIM был равен 39 - I,3S®, во вторую -- 34 1 1,2?, в третьи - 44 £ l,i%, у здоровых лвдей - b7,3±6,e¿ /, обнаружена np.i'-ая корреляционная связь между динамикой изменения i нарастгниек противовирусных антител / т = 0,43 при Гт5п -= 0,4/, обратная корреляция ранних изменений ДС1Ш мононук-леаркых фагоцитов крови больных и уровнем противовирусных антитез/ т= -0,4£ при rm<r, -0,41/, что подтверждено анализом гза-амосйязи идазЕДУалыш. докачбгелей ранних изменений ИСЗИ и титра протквовкруся1гс антител у больнкх гриппом.

Индивиду а иььые особенности клинического течения гоилг.а у в сл. чах лзздеЕ в совокупности с ; собенкостями изменения ИСЛ1/ моно-йукле&ркнх фагоцитов и антикелообр^з^ьанил позволили выделить три ьаркакга течения заболевания - гиперс-ргичеокиЗ, нормэргичесст^, гилгргкческЕЙ, ггрогнозпрОЕать течение заболевания. Незначительное енстесте мэтоЕуклеар'пд фагоцитов у больных в 1 - 3 день с: цсследугееЕ.■ динамикой к вос^'аногсениь сопровождается быстры.* ыгадеревленпеа сольных ¡ Флсзвол.тег расцегссагь прогноз благопри-«tHsCí,.Ъарсхгнпос снижение üCJH.' на 5 - 7 день иги последующей тек-.гензт s ere воссганоЕлеюш на 1С- 12 дань кабладается при удлк-.Ееюа: сроков заболевания до 2 недель. Прогноз заболевания расце-кзаетсд относительно Ст.агопрпяпзгк. При вирагеиком длительном

сличении ЛСЛМ прогноз заболевания неблагоприятный. У та.~хх больных наблвдаются осложнения заболеваяля, чаче ш.-езмспде5.

2. Стабкдаяость_лизооотих ^ембпач ^онокузт!еа;ззнх_ ¿эго^лтсв кссвп розных £>1ле£ггче¿к^п_заболеватК^_2_заболева--¡гаями с алтз^гэтеским ^"¿Р.^ё.4!0^' Исследования, проведенные с кровью 6олье-и брокзгзлькоЗ астмой г хрогапескям бронхгто.м, позволили ог'знгть лпль сбютз закономерности поздних изкеазняЗ ПСЛГТ ^агоытзрутсцах плэток. Сдзако, на этом татериале было показано участис Со ко.'иокогта -сэтле^чт*: з модуляцта • состояния стабильности лязосскт-я :&кб?аа ижснуклеар-ных фагоцитов: между изменением ПСЛУ п СЗ у больных йрок-галааоЗ астмой :* хроническим бронхитам г период обострен::,-. .-аболезз.кея выявлена обратная средней степени вчра--;кясстп корреляция /ссот-ветствеяно г =-0,39 при тр1п ,3-3 и г = -0,37 прч

Проведенные исследования с клеткаул крозл больных к:аооьс2 аллергией и туберкулезом лепоте позволили оценить аллзргодчагнос-тическую значимость поздгах изменена ДСЛИ и, в частности, ^еао-:.:зна специфической лабилизацга, выявленной в эксперименте на крысах.

Было показано, что при •"ультлзлрозан^;! онолуилеарн^г фзго-, цитов крови больных прабозой аллергией о крабовым адлергппси з без него проис.тодчт значительное увеличение ПГЛМ от 57,7*- I; 5? до 77,4 * в обцеЗ группе больных, от 56,3 ? 1,8? до '70 ? ~ 2,?% - у больных аллесгаческям брентжто» от 57,3 г 1,7^ до 74 £ - у больше аллергическим депматитоа. В то зреы? • ку.тьтадирсванле клеток нрози эд.рсых лхдеЗ с лрабпвкм а'тэргеком пз даат г.едобшгй результат /ИСЛМ метоп гг... .ь тиьгрогагтт-гх с кр-бо-вым а.: .ергеном, гчшзн 57 х без аллергена - .57,5 *

Разница ¿езду ПСЛ'Л хг&тся., ру,.ты-ит.доэззя5НХ о аллергеном а без аллергена, яа.»яшаяоя критерием спецк^гчвс*»!-ла&иагадявг.-.

- У. -

была обозначена как А ПСЛМ!. Дальнейшее изучение этого показателя позбсаело подтвердить ех'о аллергодиагностическое значение.

Так, была показано у больных крабовой аллергией к туберкулезом легких разной степени сенсабклизащш, установленной в реакции .-.еграгтул? лги тучных клеток при расчёте ПДТК и при поножи внут'рикож-кой пробы /БКП/, Д ПСИ находится в прямой зависимости "от степени сзнгибихизсщик. В частности, у больных крабовой аллергией со слабой /ПДТК до 0,15/, средне?. /0,15 - 0,38/ и сильно.*. /0,4 и более/ степекьи сенсибилизации а ПСИ был соответственно 7,3^-1,2~,1, 20,3 - 2,0а, 1а,3 2 2,1% / у здоровых людей - Ь,3 2 !,£>%/. У вольных туберкулезом легких разной степени сенсибилизации, установлен-;;'Л грг- поглгг ЦТ.?;:, дИСЛМ сил е. порядке увеличения степени сен-скбижгал^ состретстзекно равен 5,7' 2 2,0&; 8,0 ±1,2^; 12,3^2,^ /угдсря&ах лг,дьГ - 1,0 2 1,0£/. У больных туберкулез о:.: легких-с 222 до 7 им, 7-2 ¿ж, 10 и более к.-. д ПСЕЛ был соответственно равен 5,7 2 1.2Й; 11,7 1 1,5,1 и 10,Ь 2 1,5:1.

Сравнительное изучение метода оц-эг-пс' ПСЛ.« с другиг.тп ал— лергодкагностичесто; меюдачх, т-чка?«;:, - как кетоды определения Ц£ГК и ППН /ио2С£га.тель вогр^лдеикя нейтрон лов/, показало его больпгую чувствительность и тот-, сть.

В 11 2 О Л и

1, Из»%.-енке стабильности ллзсюмных .мембран фагоцитируюцих плето:-, ссирял^но с их фуякдгоюфоььлкеи и яьляется динамичным процессом, опрегеляекшг совокулностьь действия раэнообдазних фахгорот-зцдсгетаэто и гкзссеккого проксховденкл; гормонов, аейромедкаторог. С? кааонепт-з■ кокцлекента, ж.с^сцптов, лекарствеша.'х препаратов, сСг.гчыяя, х других.

2. 3 процессе реализации фагоцитоза существенное значение тыл лаСглзз&см. лгзссгашаг кекбрак фагоцкпгрувдгх клеток и в

связи с этим фактора, её определявшие, стимулирувт фагоцитарную активность этих клеток.

3. Лимфоциты и особенно их В-популяция оказывают стабилизирующее действие на лкзосомные мембрану фагоцитирующих клеток, что определяется коэффициентом стабилизации.

4. По способности влиять на стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток /лизосомомембранотрояность/ антигены разделяется на три группы: стабилизирующие, примером которых является эритроциту антиген из кальмаров, туберкулин с твином; лабилизи-рупщие - зг.мозановый антиген, вирусы; антигены без выраженного действ:-.! на стабильность лизосомных мембран фагоцитирующих клеток - очищенный туберкулин 1Ш.Ц, антиген из крабов, антиген из кукушрпи.

Ь. При ЕБедении антигенов в организм происходят зависимые от лпзосокомембранотропяых свойств антигенов изменения суммарного ПСЛТЛ фагоцитирующих клеток, дифференцированные па ранние и позднее изменения. Ранние изменения суммарного ИСЛ'Л определяются изменением стабильности лизосомных мембран фагоцитирующих клеток и солряхепы с активацией этих клеток. Поздние изменения суммарпо-го 11СЛМ в большей степени связаны с перераспределением клеток я могут ш;лч::телъно модифицироваться при повторном воздействии антигенов за счет спе:шф;;ческо,"; лабплизации лпзосомлых мембран фагоци-Т]фуг";:;;х клеток.

6. аежо' раиниии изменениями 11СЛЛ фагоцитирующих клеток при пммуупзациа к у|.ои;:«л антитслообряг-оваимя имеется тесная связь, мьжнкяя от люм;сшмикбргтот]»>кшх свойств антигенов: в отношении стпбилизпругс.его лк:'Осалк:е иемлрате клеток дрктроцктарного лнти.гем- - екдышк а отношении лчбклкзвруюз-их зпмозаноно-

го и .-/руснах аптигеноъ - сильная обратная корреляционная связь.

- Я. -

7. целенаправленна! коррекция стабильности лизоси.яых мембран $&гссптгруиц»х клаток с учетов лабклгзяруивего эКекта фагоцитоза и г»осотиембранотрог.шв: свойств антигенов в ранкгй период индуктивной иммуногенеза дазт возисеность регулировать уровень ангителэоПразсЕакпя •

6. Псздяде Еза-ненця НСДМ ^агояптирукдах клеток, зозшжашп» ь результате специфической лабилизацн;' лизосоыных мембран этих глетэп при повторяем воздействии антигена, яввготся дпаглостнчес-пззг критериев сенсибилизации организма, пслэт.скы в оснсЕу аллерго-:диагностики ян Еитро кра'овой аллергии и туберкулеза и могут быть нспо.тьззг.ацы для аллергоднагностнки при другга згсолесслия?..

S. Бцр&гениой длительное снижение ¿CZi ЯагоаитЕрутепас клеток больных грггпок в деяакике :аСолеьа;з:5 является критерием "вторичного" ¡г_;.»уьсд5 р;:цитг, сочетается с тягесты-j заболевания к в связи с этик иогет сыть пепользоьано для прогнозировг.гия хлкгическэго -теченил Солегin:.

iO. fkiBCxyaKOOTb полученных ¡¿и-ср:-ллоз\ позволяет вгроко рекс-«ндсьать радраСотанкий кетод ¡¿роцпт:: гущин меток

иккуьсаллзргедпа:нс-ст;:;:;:, сг.р.пгпига ддзссомокеибранзгропкыл и радпопротективныг ьесеств. откетит:- перспективность да.'.ьиоГа',-?:: изучеклк регуля:ки ^ушдзй ¡¿эгодетиругскх клеток опосредованно через Целакапраалелкус коррекцию стабильности лизоссетых ;.;ембр;ш стих меток, r.trccna (5езт.редиа для организма препаратов с однона-ер&мрнпой лизоссклзаекбраяотрозиой активноегьр с целью их использования в качестве инструмента коррекции исследованной ^учкаид xzsvoaz&x «-забрая.

' - ¡ч -

, СПИСОК ОЛУБЕЦКЖАШМ ПО ТЕМЕ ДИС.ЯРТАцИ;; РАБОТ

1. Микрометод количественного определения жзоцзда //Хай. дело.- 1979.-.? 12,- С.722-724 ( в соазт. о Я.С.^отавглноЯ, Б. а. Ковалевым ).

2. ;&крс;летод определения коьзлементаряоЛ активности г саво-ротхах крови п других биологических звдчсстях.// .Наб.дело.-1МС.-.'I 7.-С.-133—134. (в ссавт. с Н.С.МотэьклноЗ, Б,л.Ковалевым ).

•. 3. 'Зарусная ."одулпцгя некоторых гункций яернтонеальках аазс-рофэгсв,// Тезисы доклгдоз I/ научней коАререяцшс молодых ученых.-Владивосток,1932.-С.1о6. ^ в соавт. с О.З.Самойлзком ).

4. Резорбтивноз действие варуссв на е.«учзко?.ле котика метни - .механизм вирусной нэспзциб^тескоЗ инглунождуляааиУ/Иатерлллн и Всесоюзной конференции "Мировой Океан', 14 с?кцгх.-8ладизостоз, 1-83.-0.128-129.

5, Фагоцитарная активность казсроДагов в тслорл.тх вирусного воздействия а антзтелообразовазие у ярые.// Фагоцитоз л шыунятат: тезисы докладов Всесоюзного симпозауаа, посвященного 100-летет создания К.!'..Мечниковым ¿агоггзтарноЗ теории ¡г.^унитята.- Мое.чу2., 14-13 ноября 1983.-С.241-242 (в соавт. с О.З.Самогтг-кся ).

5. К Еоаросу изучения резервного и гндуцгрсвалкогз лазэцм*а ыоноцптаряо-макрефагальных элементов.// 4аю?о?ц клеточного» я гунс-рального иммунитета при различных физиологических г натологжчьских состояниях, зып.9.- Челябинск, 1931,- 0.150.

7» Секреция лазоцша у кахрофагев в уелгша гадокадо гзздзг-отзия.// Материалы вс1глейпо£: паутноИ ЬГХ-!.- -¡даиивос-

ток, изд. Дольнейсото'-гноге уяязерегтета, 19в4„-С.оИ-35. (а сстшт. с О.й.иалгсй.таком, й.Е.ОстроакцсьоЗ ).

Н. Способ чолучеьт,^ ксмллёк^а. ¿ДО 1,1,2 для кй-угастаграаго 0гт.едл.лей7л .;-ункциэнальЕо2 алгзз'госги 03 .*т«всза гсчзлездэта,'// Оппсаяие изобрэгэ-пл к авторе:-:сг.у сзг^гтсл^стзу 5 ¿097377 к.--

- УУ -

15.02.84. (в соавт. с В.Н.Потаповым ).

9. Способ определения вируса везикулярного стоматита.// Описание изобретения к авторскому свидетельству № 1I2923I от 15.08.84 г.

10. Уровень юмупшх комплексов и комплемента у больных ."грабовой аллергией.// Совершенствование средств и методов охрана здоровья работников водного транспорта: тезисы научно-технической конференции.- Ленинград, I9B5.- С,136-138 ( в соаът. с М.З. ^отазгвшо;" , К.С.Дубняк ),

11. Изменение стабильности мембран перитскеадышх мааро^&гос крас по лизецжу в процессз Готоикгозн.// Факторы клеточного гуморального иммунитета при разлачнпх •йктояогсческах ;; т-иьхет:-чоских состояниях: тезис« доклад*«} ЛИ штютктутской научной конференции,- Челябинск, 1985.- C.I67-LC3.

12.Изучение стабильности лизосошнх мембран «оноцзгов и макрофагов крыс по лвзоцшду в процесса иммунного ответа.// Владивосток, гос.мпд.та-т,- Владивосток, 1986,- Юс.-Деп. ъ ВЯЖЛ ХЛ CGC? II,TI.8G, .ï 7GS8-B.

13. Рекомендации по профилактике, лечению, диагностике краоо-кой аллергии a гнойптчкоБЫХ заболеваний у рыбаков.-Владивосток. Г937,- IQo. (в соант. с Н.О/'отавкиной, Р.Е.Ньяповой, H.C.j;y6'iKK, Н.В.КлагогзоЛ и др.).

_4. Стабильность мембран перитонеальинх макрофагов крыс по лизоциму и её изменчивость в процессе фагоцитоза,// Владивосток, гос. мед.ии-т.-Владило сток, ISSG -Юс.~ Деп. в BMBlTii ЛАМ CCCV II.11.86, 7697-В.

15. Примеьени« микрометодов исследования 4J3 фращш когшле-мекта и показателя стабильности лизосоыааыг-лс мечйраа ,:онояитов крови у больных бронхиальной астмой и хронически« бронхитом.// Уетодолои'л, организация и итоги лссозых пшфмолдоодсзгх обследований: тезисы Всесоюзной конференция.- Москва- Ангарск,198?,

- к> - '

-С.198-199. (в соавт. о В.Н.Потаповым, Ал.С.бароновым

16. Микрометода в иммунологии.- Владивосток, изд-во Дальневосточного университета, 1937,- 184с. (в соавт. с Н.С.Метавкиной, Е.М.Ковалевым ).

17. Регуляция очлы иммунного ответа у крыс путем коррекции стабильности лиг-осомрльжх мембран перпточеаяькчх макройагоа.// Актуальные проблем имгдаологии. Иилукодефициты л иммунокоррекция: тезисы зональной научной конференции.- Владпвэстог 1987,-С.224.

18. Стабильность лазосомалыш. мепбраа перятонеальннх макрофагов крыс по лпзоцаиу в процессе иммунотерапии.// Актуальные проблемы иммунологии. Иммуночзфяпггы и Еммутокоррекциа: тезисы зональной научной конференции.- Владивосток, 1387.- С.176 (в соавт. с З.В.Чеботаревым, В.И.Чумаковым ).

19. Способ выделения аллергена.// Описание изобретения, а авторскому свидетельству $ 1341773 от Г.06.87 г. (з соззт. с И.О. Дубкяк, 5,А.Иимчиком, Р.^.ПьянсеоЧ, Г.С.Сыч ).

20.' Оценка, специфичности показателя стабильности льзосомяых мембран моноцитов и макрофагов го лгзоцику.// Ямм7яэлргия. .-1553.

5. - С. 96.

21. Сиоссо' получения комплекса ЕАС11,4,2.// Проспект ЬДЩС.-Влядивссток, 1933 (в соавт. с В.И.Потаповым, Н,С,Дубкяк ).

22.. Диаиюстачесяая ценность оценки ПСЛЛ у больакх с аллергией к морепродуктам.// Факторы клеточного я гуыорашгого двдуЕа?еч:а при различных физиологических г аатслогэтескгх состояниях: .твзкел докладов I}. йохзтнО'Гпт^ .око;! каучаоЯ конферез.*кпа.-*1ол«блнся,15е8 С.142-143 ,'в соавт. с л.М. 1'аро• "овог' .С.Дуоьяк, 2.3.£яасогс{г ).

23. Способ оце>гкп стабильности лззосчгашис иеиЗр&а по лпзос«у.// Ашлтпроаакг-ий указате.-г изобрзтеккй, узтедачегкзх разработок и рз^аонажхзгто^сглч ррзгдог»: кий. еотругтдкеп Йдгадягсс-

токскогс государственного медицинского шституга.- Владивосток.

10"зэ п о? ор

А. «Ли 4 — V « ** ( »

24. Оценка свойств крабового аллергена по изменение стабильности прикрепления лизоцяма к лизосомальнш,: мембрана'.; макрофагов. /Айдкко-социалькке аспекты проблемы "Человек-Океан": тезпсы докладов зональной вгучно-практЕческой конференции.- Владивосток, 1233.- С.2С7-2Е8 (в соавт. с Н.С.дубняк, Е.Л.'ймчкком ).

25. Крабозие аллерген^ к их влияние ка организм человека.// издккс-социальные аспекты проблемы "Человек-Океан": тезисы докладов зоЕалько.1 научно-практической конференции.- Владивосток,

0.233-2=4 (в соавт. с .'..С.^иняк, Р.Е.Ньяновой, Г.С.Сыч

.. \ ¿^р. /.

2й. Зядякпе алтнбиотдксЕ па оекрецго и процент выхода лизо-шэ.й из коноцитсе крови человека.// Антибиотик:: и химиотерапия.-1983.- X '?.- С.515-318.

27 . Стаолльность л'.зосомных мембран перитоньяльных макро^агог гаэно? (¡уикииян&дьиой ькгквности у крыс.// Ьсядстень Сиоирского • отделения АЯН С^СР. - 1?сс.. ~ $ Ь. - С. 70-72.

2Ь. Оценка и»кенений ста.о.-.хьноотй -хизосоиных исиоран моионуж-ге&.рш>х уйгоцктог ке:с кетод гиисргоикчунодиегностики и скрининга кекоранахропнах к - радкопротектквны). препаратов. // кетэ дичее кие рекомендации, .уТЕ'. рлденныь МЗ СССР. - Москва. - 1929. - 16 с.

-Зс-

M ош Sa;< qm^f^o d

И^уи ^ Á^ Г ТС 6 'Z^O

/¿Г2>

ОТ