Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сравнительный анализ иммуногенетических структур популяций европеоидного и монголоидного происхождения, проживающих в сибирском регионе

На правах рукописи

ГОЛОВАНОВА Ольга Валерьевна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИММУНОГЕН£ТИЧЕСКИХ СТРУКТУР ПОПУЛЯЦИЙ ЕВРОПЕОИДНОГО и монголоидного ПРОИСХОЖДЕНИЯ, ПРОЖИВАЮЩИХ В СИБИРСКОМ

РЕГИОНЕ

14.00.36 - аллергология и иммунология.

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новоайирск2002

Работа выполнена в ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

член-корр. РАМН, профессор, В. И. Коненков

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Аутеншлюс А.И.

доктор биологических наук, профессор Фефелова В.В.

Ведущее учреждение:

НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН.

Защита диссертации состоится «_»__ 2002 г. в _часов на

заседании диссертационного совета Д 001.001.01 в ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская 14.

. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ клинической иммунологии СО РАМН, г. Новосибирск.

Автореферат разослан_2002 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета ^у >

кандидат биологических наук ^ — КудаеваО.Т.

В Уччхъ

о

Г % УЬ.ЬЗ.П

Актуальность темы. Главный комплекс гистосовместимости (HLA) является одной из наиболее полиморфных генетических систем человека [Bodmer J.G. et.al., 1999]. Широкий полиморфизм позволяет использовать HLA гены в антропологических, популяционно-генетических исследованиях, â также в исследованиях ассоциативных связей HLA генов и заболеваний. В основе всех трех направлений исследований лежит изучение иммуногенетической структуры той или иной популяции, представленной особым, этнически обусловленным характером распределения частот аллельных вариантов HLA генов, а также их ■комбинаций - гаплотипов, наследуемых совместно благодаря феномену неравновесного сцепления [Зарецкая Ю.М., 1983; Bodmer J.G., 1997; Imanishi T. ét al., 1992a., 1992b],

Особое значение приобретают исследования иммуногенетических структур этнических общностей смешанного происхождения, направленные на оценку их внутреннего генетического разнообразия и генетического своеобразия по сравнению с другими расово-этническими группами (Алексеев В.П., Гохман И.И., 1984; Фефелова В.В., 1991; Гусева И.А. и др., 1998; Fefelova V.V., 1990]. Проведенное исследование посвящено анализу иммуногенетических структур популяций, представляющих пришлое европеоидное и коренное монголоидное население Сибири. Межэтнические контакты с коренными монголоидными народностями края способствовали формированию особого характера генофонда неоднородного по своему составу пришлого европеоидного населения Сибири [Александров В.П., 1964; Бунак В.В., Золотарева И.М., 1973; Люцидарская А. А., 1992]. Коренное монголоидное население Сибири представлено в исследовании группой тувинцев. Тувинцы, относящиеся к центральноазиатскому антропологическому типу монголоидной расы [Богданова В.И., 1986], принадлежат к тюркской группе алтайской языковой семьи. Формирование тувинского генофонда происходило в результате смешения многочисленных тюркских, монгольских, кетоязычных и самоедоязычных родоплеменных групп, на основе генетического субстрата древних индоевропейских племен [СердобовН.А.,1971; АлексеевВ.П., 1984; ПузыревВ.П. и др., 1999].

Известна важная роль HLA антигенов в осуществлении иммунных реакций. Комплекс представлен несколькими полиморфными локусами, кодирующими мембранные протеины, основной функцией которых является презентация антигенного материала рецепторам CD4- и CDs-позитивных Т-лимфоцитов. Распознавание ассоциированных с HLA молекулами пептидов Т-клеточными рецепторами активирует лимфоциты и инициирует развитие адаптационного иммунного ответа [Медуницын Л.В., Алексеев Л.П., 1987; Хаитов P.M., Алексеев Л.П., Î998;' Сартакова М.Л., КоненковВ.И., 1997; КоненковВ.Й:Л999; KaMaiji M, 2000].

Установление ассоциаций генов' HLA комплекса с развитием целого ряда иммунопатологий [Зарецкая Ю.М., 1983; Зарецкая Ю.М., Абрамов В.Ю. ,1986; Tiwari J.L., Terasaki P.I., 1985; Lechler R.,1994;

Bodmer J.G., 1997], а также межиндивидуальных различий в параметрах иммунного статуса у здоровых лиц в отсутствие явных внешних социально-экологических воздействий [Яэдовский В.В. и др., 1998b; Caruso С. et.al., 1996; Lio D. et.al., 1997 и др.] свидетельствуют о возможном влиянии иммуногенетических детерминант на иммунный статус индивида. Этнически обусловленные особенности иммуногенетических структур популяций различного происхождения позволяют предположить наличие межпопу ля ционных различий в характере ассоциаций HLА генов с иммунологическими параметрами. В связи с этим представляется актуальным изучение ассоциативных связей HLA генов с иммунологическими параметрами в популяциях, проживающих в сходных социально-экологических условиях, однако, характеризующихся различным расово-этническим происхождением. Цель исследования: Провести сравнительный анализ современной иммуногенетической структуры популяций монголоидного и европеоидного населения Сибири и их генетических взаимоотношений с расово-этническими группами Европы и Азии; изучить характер ассоциативных связей HLA генов с параметрами иммунного статуса в исследуемых популяциях.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить характер распределения частот аллелей HLA генов I и II классов в популяциях европеоидного и коренного монголоидного населения Сибири.

2. Установить и провести сравнительный анализ параметров неравновесного сцепления мезеду HLA генами I и II классов и частот гаплотипов в исследуемых популяциях.

3. Провести анализ филогенетических взаимоотношений между исследуемыми популяциями и другими расово-этническими группами на основании распределения частот аллелей HLA генов I(HLA-A, -В) и II классов (HLA-DRB1).

4. Изучить этнические особенности в характере взаимосвязей аллелей HLA генов с иммунологическими параметрами, отражающими функциональную активность макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и B-клеточного звеньев системы иммунитета.

Научная новизна. В работе впервые приведены данные о молекулярном полиморфизме HLA генов II класса в популяциях европеоидного населения Сибири и тувинцев, отражающие особенности их иммуногенетических структур, обусловленные сложным генезом данных популяций. Установление частот аллелей HLA генов, двух- и трехлокусных гаплотипов, а также параметров неравновесного сцепления между отдельными аллелями позволило выявить иммуногенетическое своеобразие пришлого европеоидного населения Сибири по сравнению с европеоидным населением западных регионов России.

Филогенетический анализ, проведенный на основании распределения частот аллелей HLA генов I и II классов, впервые

продемонстрировал тенденцию к сокращению генетических дистанций между европеоидным и коренным монголоидным населением Сибири, наряду с сохраняющейся генетической близостью европеоидного населения Сибири и европейских регионов России. На основании иммуногенетических маркеров выявлена наибольшая генетическая близость тувинцев с монгольскими народностями, несколько меньшая степень родства установлена с северо-сибирскими монголоидами.

Впервые установлена ассоциированность ряда аллелей НЬА генов с параметрами иммунного статуса в сибирской популяции монголоидного происхождения, а также установлены межпопуляционные различия в характере ассоциированности аллелей НЬА генов с иммунологическими параметрами, отражающими состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клсточного звеньев системы иммунитета. Теоретическая и практическая значимость работы. Анализ генетического родства исследуемых популяций с популяциями различной географической и расово-этнической принадлежности, проведенный на основании данных о распределении иммуногенетических маркеров, отразил промежуточное положение тувинцев между монголоидными и европеоидными популяциями, а также относительную близость европеоидного населения Сибири и европейских регионов России.

Установление ассоциированности аллельных вариантов НЬА генов с варьированием параметров иммунного статуса в исследуемых популяциях позволяет расширить представления о механизмах иммуногенетической предрасположенности и устойчивости к развитию мультифакториальной патологии.

Полученные данные о распределении генов НЬА I и II классов в значительных группах представителей европеоидов Сибири и тувинцев могут служить в качестве контролей для выявления НЬА маркеров резистентности и предрасположенности к различным заболеваниям иммунопатологической природы. Проведенное исследование позволило значительно дополнить данные о распределении частот НЬА генов в популяции европеоидного населения Сибири сведениями о молекулярном полиморфизме генов НЬА-ОШЗ!, -ОС>А1, -БСЗВ! и -ОРВ1. Полученные данные могут быть использованы для ревизии существующих и разработки новых этнически ориентированных критериев как для раннего индивидуального диагноза и прогноза, так и для оценки общего потенциала здоровья в популяции.

Впервые примененные методы ДНК-типирования позволили выявить различия в распределении аллельных вариантов НЬА-генов среди жителей Сибири различного этнического происхождения и характере их ассоциированности с параметрами оценки состояния системы иммунитета, что может быть использовано для решения практических вопросов трансплантации аллогенных органов и тканей. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Наряду с чертами, характерными для популяций европеоидного происхождения, иммуногенетическая структура европеоидного населения Сибири имеет особенности, выраженные в повышении частот ряда аллелей HLA генов, наиболее характерных для популяций монголоидного происхождения.

2. Распределение частот аллелей и гаплотипов HLA I и И классов среди тувинцев свидетельствует о присутствии европеоидного компонента в генетической структуре данной популяции, что выражается в повышении частот ряда аллелей HLA генов и их ассоциаций, характерных для европеоидов.

3. Характер ассоциированности аллельных вариантов HLA генов с вариабельностью параметров иммунного статуса, отражающих состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клеточного звеньев иммунной системы, различен в исследуемых популяциях европеоидного и монголоидного происхождения, проживающих в Сибирском регионе.

Апробация работы. Основные положения диссертации были доложены на

1. 13th European Histocompatibility Conference (Agliia Pelaghia, Crete, 1999);

2. Ill съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Сочи, Россия, 2000); 3. 5-й отчетной сессии Института клинической иммунологии СО РАМН (Новосибирск, 2000); 4. межлабораторном научном семинаре НИИ клинической иммунологии СО РАМН (Новосибирск, 2002). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных результатов, обсуждения результатов и выводов. Работа изложена на 123 страницах, проиллюстрирована 15 таблицами и 2 рисунками. Библиографический указатель включает 195 источников, из них 137 - зарубежных авторов.

Материалы и методы исследования.

В выборку пришлого европеоидного населения' Сибири вошли жители г. Новосибирска в возрасте от 16 до 60 лет. Иммуногенетическое обследование данной группы включало серологическое типирование HLA локусов I класса у 869 индивидов, 511 исследований молекулярного полиморфизма HLA локусов И класса. Было выполнено иммунологическое обследование 132 здоровых индивидов с известным HLA генотипом, среди них 61 мужчина и 71 женщина.

Исследование иммуногенетической структуры и ее особенностей у коренного населения Республики Тува осуществлялось на основе выборки жителей г. Кызыла тувинской национальности. Всего обследовано 198 человека в возрасте от 18 до 60 лет, из них 100 мужчин и 98 женщин. Все 198 индивидов были подвергнуты и иммунологическому обследованию. Материал для исследования был получен в ходе экспедиции в Республику Тува в 1995 г.

Серологическое типирование HLA локусов А, В и DR проводили с помощью м икро л и м фо цитото ксич ее кого теста [Terasaki P.I. et.al., 1978]. Для анализа молекулярного полиморфизма HLA локусов II класса HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1 и -DPB1 выделение ядерной ДНК проводили стандартным методом [Miller S. et.al., 1988]. Генотипирование локусов HLA-DRB1, -DQA1 и -DQB1 осуществляли методом аллель-специфической амплификации с сиквенс-специфическими праймерами (PCR-mSSP) [Alexseev A. et.al., 1996]. Анализ аллельного полиморфизма гена HLA-DPB1 проводили методом рестриктного анализа нуклеотидной последовательности продуктов амплификации (PCR-RFLP) (Hviid T.V.F et.al., 1992]. Анализ особенностей иммуногенетической структуры исследуемых популяций включал расчет частот аллелей HLA локусов I и И классов, частот и параметров неравновесного сцепления HLA гаплотипов [Mattius P.L.,1970; Excoffíer L„ SlatMn М.,1995]. Парные' сравнения популяционных частот полиморфных генетических маркеров проводили с использованием критерия у~ и точного теста Фишера [Фишер Р. А., 1958). Стандартные генетические расстояния определяли по Нею [Nei М., 1972]. На основе матрицы генетических расстояний с помощью метода "объединения соседних групп" (neighbour-joining) [Saitou N„ Nei M., 1987] строили филогенетическое древо, отображающее генетические взаимоотношения между популяциями.

Иммунологическое обследование европеоидов Сибири и тувинцев включало ряд тестов, в том числе комплекс стандартных тестов 1-го уровня [Кожевников B.C. и др., 1990; Петров Р.В. и др., 1992] Для установления ассоциативных связей аллельных вариантов. HLA генов с вариабельностью параметров иммунного статуса применяли однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA).

Результаты и обсуждение

Сравнительный анализ иммуногенетической структуры европеоидов и монголоидов Сибири. На основании данных серологического типирования установлено, что распределение частот аллелей HLA генов I класса в популяции европеоидов Сибири в целом сходно с соответствующим распределением в других европеоидных популяциях (табл.1), о чем свидетельствуют высокие частоты аллелей HLA-A3, -В7 и -В8. Однако установлены характерные отличия в распределении частот HLA генов I класса среди европеоидного населения Сибири, заключающиеся в тенденции к снижению частот аллелей, кодирующих специфичности HLA-A19, -А28, -В18 и -В22 по сравнению с населением западных регионов России [Яздовский В.В. и др.,1998а], популяциями Восточной и Западной Европы [Imanishi Т. et.al., 1992b; Dyer P., Middleton D.,1993; Sanchez-Mazas A. et.al., 2000]. Характерно, что сходное снижение частот аллелей HLA-A1, -Al9 и -В22 ранее было обнаружено в группах пришлого европеоидного населения северо-восточных регионов России, европейского Севера России, а также в ряде монголоидных популяций

Сибири, Дальнего Востока и Аляски [Рычков Ю.Г..И др., 1985; Фефелова В.В., 1991; Коненков В.И. и др.,1993; Lou H^aj., 1998]. Кроме того, на фоне некоторого снижения частоты аллеля HLA-A1, являющегося маркерным для европеоидов, наблюдается возрастание частоты группы аллелей, кодирующих специфичность HLA-A9, с высокой частотой встречающейся среди монголоидов.

Таблица 1.

Распределение частот генов HLA I класса в популяциях различного этнического

HLA Частота гена

ВзрспвсмдоСИйфИ Тувинцы Японцы Французы

п=669 л=198 п=1023 п=100

А 1 0,119 0,076"* 0,007"*"'"* 0,105

А 2 0,288 0,241 0,244е** 0,240

A3 0,136 0,068°*" 0,006е*"т*** 0,130

А 9 0,157 0,215 е" 0,351 с*"т"* 0,120т*

А10 0,096 0,116 0,109 0,080

А11 0,069 0,082 0,104е*** 0,065

А19 0,040 0,031 0 161С"*Т*" 0,215с*"т"*

А 28 0,024 0 0 *" 0 *" 0,040т*"

А-Ы 0,083 0,183 е*" 0,005с*"т***

В 5 0,078 0,082 Q 0,065

В 7 0,125 0,049е" 0|005°"Т* 0,070

В 8 0,070 0,008е" 0С**Т" 0,11т"

В12 0,104 0,073 0,074 0,16Т*

В13ч 0,067 0,044 0,018е** 0,025

В14 0,025 0,003е* 0,001е** 0,055т**

В15 0,039 0,071 0,094°**т* 0,075

В16 0,048 0,020 0,048 0,040

В17 0,029 0,118е" 0,007с"т" ' 0,015т"

В18 0,044 0,013е* 0е" 0,100е*т**

В21 0,022 0,029 0,015

В22 0,013 0,010 0,108°**T" 0,055°**т*

В27 0,057 0,026е* 0,004е"т" 0,030

В35 0,109 0,124 0,081т" 0,070

В40 0,053 0,248е" 0,163е**т" 0,07т"

Другие* • 0,016 0,000 0,18 0,025

В-Ы • 0,117 0,089 0,013е** 0,025°**т**

Примечание. Здесь и далее: *-р<0,05; " - р<0,01; *** - р<0,001. Верхними индексами отмечены достоверные различия: С-с популяцией европеоидов Сибири, Т-с тувинцами.; АЫ - A blank, ВЫ - В blank; *- единично встречающиеся в популяциях аллели В37, В41, В42, В46, В47, В48, В53, В59, В67, В70.

О гетерогенности структуры генофонда тувинцев свидетельствует распределение частот HLA генов I класса, несущее черты, свойственные как европеоидам, так и монголоидам (табл.1). О наличии монголоидного характера распределения свидетельствуют генные частоты специфичностей HLA-A3, -А9, -All, -В8, -В14, -В18 и -В40, тогда как распределение генных частот специфичностей HLA- А1, -В5, -В7,-В15 и -В35 наиболее характерно европеоидным популяциям. Сопоставление собственных результатов с литературными данными позволило выявить в тувинской популяции 1 отрицательную инверсию суммарной частоты группы аллелей, кодирующих специфичность HLA-B5, с высокой частотой

6

распространенной в популяции бурят, казахов [Коненков В.И. и др.,1993, Яздовский В.В. и др., 1998с], монголов и японцев [Dyer P., Middleton D.,1993], К инверсиям частот HLA аллелей, маркерных для европеоидных популяций следует отнести достоверное повышение частот аллелей HLA-АЗ, -В7, -В8 по сравнению с ориентами, а также повышение частоты аллеля HLA-A1 по сравнению с монголоидами Таймыра и Чукотки [Коненков В.И. и др.,1993]. —

Своеобразие характеру распределения частот HLA генов II класса в популяции европеоидов Сибири придают минорные отличия частот аллелей HLA-DRB1, -DQB1 и -DPB1 локусов по сравнению с популяциями европеоидного происхождения. Распределение частот аллелей HLA-генов II класса среди тувинцев, напротив, значительно отличается от соответствующего распределения в монголоидных популяциях и несет признаки, характерные для европеоидов.

Среди европеоидного населения Сибири выявлена отрицательная инверсия частоты аллеля HLA-DRB1*13 по сравнению, как с европеоидным населением Севоро-Западного региона России [Kapustin S. et.al.r 1999], так и большинством рассматриваемых нами европеоидных популяций, где частота данного аллеля обычно превышала 10% [Dyer Р., Middleton В.,1993](табл.2).

Таблица 2.

Распределение частот аллелей гена ОРВ1 ША II класса в популяциях различного этнического происхождения._'__

HLA-ген Частота аллеля

DRB1 Европеоиды Тувинцы Японцы Французы

Сибири п=198 п=898 п=100

П=232

1 0,151 0,071 ■"** 0,055й** 0,120

2 0,216 0,193 0,182 0,105т*

15 0,144 0,174 0,095

16 0,071 0,008е** 0,010

3 0,118 0,079е* 0,002т*** 0,125

17(301) 0,114 0,002 0,125

18(302) 0,004 0,000 0,000

4 0,144 0,065е*" 0,228е**1*** 0,155т***

5 0,162 0,503е*** 0,096т*** 0,130т***

11 0,144 0,026е" 0,120

12 0,017 0,070е" 0,010

6 0,082 0,015е*** 0,133т*** 0,190т***

13 0,067 0,078 0,135е*

14 0,015 0,055 0,055

7 0,099 0,174е** 0,004т*** 0,130

8 0,013 н.Д 0,133е" 0,040

9 0,006 н.д 0,130е** 0,000

10 0,009 н.Д 0,006 0,005

Примечание. Жирным шрифтом отмечены общие РР специфичности. Генные частоты общих специфичностей представлены суммой генных частот сплитовых специфичностей

Анализ полиморфизма локуса НЬА-ОИ в тувинской популяции проводили с помощью серологического типирования, что ограничило количество тестируемых специфичностей. Особенность данного распределения заключалась в положительной инверсии частоты аллеля НЬА-БК7, на фоне достоверного снижения частоты аллеля -1Ж4 по сравнению с японцами, выбранными в качестве референтной монголоидной популяции (табл.2).

Несмотря на различный этногенез исследуемых популяций, наблюдалось частичное перекрывание спектров наиболее распространенных аллельных вариантов локусов НЬА-ОС)А1, -ОС>В1 и -БРВ1. К особенностям распределения аллелей генов субрегиона НЬА-БО следует отнести отрицательную инверсию частоты аллеля НЬА-йС>А1*0501 в популяции европеоидов Сибири по сравнению с населением европейских регионов России, а также положительную инверсию частоты данного аллеля у тувинцев по сравнению с популяциями ориентов, среди которых данный аллельный вариант редок (табл.3). В тувинской популяции наблюдается снижение частот аллелей НЬА-ВС>В 1*0401/0402, *0б01, наиболее характерных для ориентов, на фоне повышения частоты маркерных для европеоидов аллелей НЬА-ВС)В1*0201,*0301 (табл.4).

Табпица 3.

Распределение частот аллелей гена РОА1 Н1_А II класса в популяциях различного

Н!_А-ген Частота аллеля

ОСЗА1* Ефсгтеода Тувинцы Японцы Французы

Сибири п=169 п=136 п=100

п=80

0101 0,150 0,116 0,182 0,175

0102 0,219 0,180 0,143 0,150

0103 0,100 0,100 0,147 0,080,

0201 0,138 0,089 0,000с"*т" 0,130 1

03 . 0,144' 0,201 0,423с***т** 0,160

0401 0,044 0,044 0,049 0,025

0501 0,200 0,260 0,061 с"*т** 0,265

0601' 0,006 0,009 0,015 0,015

Согласно результатам молекулярного типирования локуса НЬА-БРВ1 в популяции европеоидов Сибири, распределение частот его аллелей соответствовало таковому среди европеоидов Северо-Западного региона России, среди которых также наблюдается повышение частот аллелей ЭРВ 1*0402 и *0301 [КариБЙп Б. е(. а1„ 1999]. Распределение частот аллелей гена < НЬА-ОРВ1 среди тувинцев, напротив, существенно отличается от соответствующего распределения в монголоидных популяциях, на основании достоверного повышения частоты аллеля БРВ 1*0401 по сравнению с популяцией японцев, тогда как наблюдаемая частота аллеля ОРВ 1*0501 в несколько раз ниже, чем у представителей этой популяции IGeng Ь. е1. а1., 1995].

Таблица 4,

Распределение частот аллелей гена 0(2В1 ШАII класса в популяциях различного

HLA-ген Частота аллеля

DQB1* Еврапеода Тувинцы ЯПОНЦЫ Французы

п=169 П=136 п=100

г,=80

0201 0,188 0,130 О.ООО1"*1" 0,250'**

0301 0,206 0,266 0,097°**т" 0,195

0302 0,075 0,044 0,092 0,100

0303 0,025 0,080 0,143е" 0,010Т"

0304 0,006 0,003 0,000 0,000

0401/0402 0,025 0,079 0,209С**Т** 0,040

0501 0,138 0,062 0,109 0,115

0503 0,013 0,030 0,022 0,065

0502/0504 0,063 0,030 0,038 0,005е*

0601 0,006 0,047е* 0,151с"т" 0,005

0602-8 0,263 0,186 0,165 0,215

0609 н-Д 0,041 0,006 0,000

Таблица 5.

Распределение частот аллелей гена ОРВ1 ША II класса в популяциях различного

HLA-ген Частота аллеля

DPB1* Ефспеада Тувинцы Японцы Французы

Сибири п=197 п=200 п=юо

п=119

0101 0,046 0,000е** 0,000е** 0,040'**

0201 0,097 0,267е* 0,182е" 0,110т"

0202 0,008 0,008 0,057 0,010

0301 0,126 0,086е" 0,049е" 0,125

0401 0,391 0,264е** 0,041 е**т" 0,390

0402 0,210 0,140е** 0,117 0,095е**

0501 0,017 0,078 0,400с"т** 0,045

0601 0,017 0,000 0,036т" 0,010

0901 0,008 0,052 0,085е** 0,005т*

1701 0,029 0,034 0,000т* 0,035

Другие" 0,050. 0, 073 0,027 0,135

Примечание. - единично встречающиеся в популяциях аллели DPB1*1001, '1101, *1301, *1401, 4501, *1601, 4 801, -1901, *2001, *2301, *2601, *4101,*4301 или *2801, •4701,-5001

Наряду с распределением частот аллелей НЬА генов, важнейшей иммуногенетической характеристикой популяции является распределение частот гаплотипов и значения параметров неравновесного сцепления между отдельными аллелями НЬА локусов.

Анализ распределения двухлокусных гаплотипов в исследуемых популяциях позволил выявить достоверно сцепленные гаплотипы, встречающиеся в монголоидных (А2-В13, А2-В15), европеоидных популяциях (А1-В17, А2-В12, В7-ОЯ2, В8-.ОЮ), а также ассоциации,

присущие как монголоидам, так и европеоидам (А9-В12, А11-В35). Наиболее распространенные в популяции европеоидов Сибири двухлокусные гаплотипы входили в состав супратипов кавказоидного происхождения: A1-B8-DR3, A2-B7-DR2 и A3-B7-DR2 [Imanishi Т. et.al., 1992b, Amaiz-Villena А. et.al., 1999, 2000]. Наблюдалась тенденция к снижению величин гаметной ассоциации и частот гаплотипов АЗ-В7 и AI-BS по сравнению с европеоидами западных регионов России. Напротив, параметры неравновесного сцепления гаплотипов А9-В12 и А11-В5 возрастали, 'достигая значений, рассчитанных для монголов, бурят и тувинцев-тоджинцев [Imanishi Т. et. al., 1992b; Pospelov L.E. et.al., 1997]. Обнаружение в исследуемой популяции трехлокусных гаплотипов, ранее выявленных в популяциях сибирских монголоидов: DRB 1*14-DQA 1*0401-DQB 1*0503 (чукчи), DRB1*15-DQA1*0101-DQB1*0501 (кеты), DRB1*16-DQA1*030I-DQB 1*0301 (эскимосы), DRB1*09-DQA1*0301-DQB1*0303 (эвенки) [Grahovac В. et.al. ,1998], свидетельствует о возможном вкладе монголоидного компонента в иммуногенетическую структуру европеоидов Сибири.

Доминирующие по частоте гаплотипы А9-В40, А9-В35 и А2-В12 у тувинцев имеют монголоидное происхождение. Высокая -частота гена HLA-A1 среди тувинцев, его преимущественная встречаемость в составе гаплотипа AI-В 17 и достоверно высокая гаметная ассоциация между этими аллелями является характерной чертой всех этносов, отнесенных к центральноазиатскому типу монголоидной расы, и является результатом участия в их этногенезе древних индоевропейских племен [Фефелова В.В., 1991].

Таким образом, характерные особенности распределения частот аллелей HLA генов I и II классов соответствуют представлениям о многокомпоненотном этногенезе тувинцев и позволяют высказать предположение о возможном вкладе в формирование популяции европеоидов Сибири монголоидного компонента.

Филогенетический анализ формирования современного населения Сибири. В составе дендрограммы, построенной на основании массива данных о популяционном распределении частот аллелей локусов HLA-A и -В, европеоидное население Сибири и европейских регионов России оказалось объединено в общий субкластер. Таким образом, минорные отличия в распределении частот аллелей HLA генов среди европеоидов Сибири, оказались недостаточны для того, чтобы данный субкласгер потерял единство. Однако наблюдалась тенденция к снижению стандартных генетических дистанций между популяцией сибирских европеоидов и популяциями монголов и северных монголоидов, по сравнению с европеоидным населением западных регионов России.

Рисунок 1. Дендрограмма, отражающая генетические взаимоотношения между 24 популяциями монголоидного и европеоидного происхождения, построенная на основании частот аллелей генов Н1_А-А й-В.

Тувинцы входили в состав несколько обособленного от остальных монголоидных популяций субкластера наряду с долганами и монгольскими народностями - халха-монголаии и хотонами. Некоторое дистанцирование от популяций сибирских монголоидов может быть объяснено составом исследованной группы тувинцев, представленной потомками переселенцев из Центральной, Западной и Южной зон Республики Тува, характеризующихся накоплением родоплеменных групп монгольского происхождения [Потапов,19691. Сравнительный анализ распределения частот аллелей НЬА генов среди тувинцев позволил

выявить монгольский, тюркский и древний европеоидный компоненты, участвовавшие в формировании тувинского этноса. Несколько менее выраженные взаимосвязи тувинцев были установлены с северосибирскими монголоидами.

Специфические особенности генетической структуры популяций складываются как вследствие участия в их формировании различных этногенегических компонентов, так и под воздействием внешних селективных факторов в результате которого происходит накопление в популяции аллелей НЬА генов, обеспечивающих адекватный данным условиям иммунный статус индивида [Коненков В.И., 1999]. Изучение ассоциированности аллелей генов НЬА комплекса с параметрами оценки иммунной системы европеоидного и монголоидного населения Сибири. В результате анализа проведенного в двух сибирских популяциях различного этнического происхождения установлена взаимосвязь НЬА генов с варьированием иммунологических параметров, отражающих состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клсточного звеньев системы иммунитета.

В группе сибирских европеоидов данные ассоциативные связи были установлены для 12 из исследованных 28 аллелей пяти НЬА локусов. Наибольшее количество взаимосвязей с параметрами иммунного статуса обнаружено для локуса НЬА-ОС>А1, наименьшее - для локуса НЬА-А (ассоциация с единственной специфичностью НЬА-А 10). Среди тувинцев были обнаружены ассоциации с параметрами иммунного статуса для 7 НЬА-специфичн остей, из них 3-специфичности локуса НЬА-В (-В15, -В17, -В40). Характерно, что для каждой популяции были установлены специфичные ассоциативные связи определенных НЬА аллелей с вариабельностью иммунологических параметров. В частности, с интенсивностью респираторно-метаболического взрыва в фагоцитах в группе европеоидов Сибири ассоциирована специфичность НЬА-В40, тогда как среди тувинцев — НЬА-В 15 (табл.6), с количественным содержанием Т-хелперов в группе европеоидов ассоциирована специфичность НЬА-В40, в группе тувинцев—НЬА-В Я4 (табл.7). Были установлены следующие межпопуляционные различия в НЬА-ассоциациях с количественным содержанием иммуноглобулинов (^А, Ш ассоциации с НЬА-В27, РЮ, являлись специфичными для сибирских европеоидов, тогда как ассоциация с НЬА-АЮ—специфичной для тувинской популяции (табл.8). Общей для исследуемых популяций являлась ассоциация аллеля НЬА-0114 с повышенной интенсивностью респираторно-метаболических процессов в фагоцитах. Данный аллель детерминировал у сибирских европеоидов и тувинцев наибольшее число количественных н функциональных иммунологических параметров.

Таблица 6.

Ассоциации аллелей Н1А генов с показателями состояния макрофагально-фагоцитарного звена иммунной системы в популяциях сибирских европеоидов и тувинцев.____________

Параметр | Н(-А-ген | Хо±ЗЕо I Х,±5Е1 | Р I К'

Европеоиды Сибири

ЕА-фагоцитоз (моноциты),% РОА1*0201 60,78±1,35 55,16±1,63 0,029 6,4 %

ЕА-фагоцитоз (гранулоциты),% ООА1*ОЮ1 63,18±1,50 68,50±1,45 0,036 , 5,9 %

йС!АГ0201 66,15±1,24 60,74±2,64 0,042 5.6 %

ПАМ, усл.ед. В40 2,15±0,05 2,53±0,23 0,026 6,3 %

ПАН, усл.ед. 4,99±0,18 6,22±0,70 0,017 со

Тувинцы

ПАН, усл.ед. В15 2,08±0,06 1,7'3±0,09 0,016 3,1 %

ОЯ4 1,99+0,05 2,29+0,17 0,041 2,2 %

Примечание. Здесь и далее: Х,±5Е1 - среднее значение параметра и его ошибка в группе индивидов, в генотипе которых присутствует данный Н1.А ген. X 0±5Е0- то же, для группы индивидов, в генотипе которых данный ША ген отсутствует; Я2 - коэффициент детерминации

Таблица 7.

Ассоцииации аллелей Н1А генов с показателями состояния Т-клеточного звена иммунной системы в популяциях сибирских европеоидов и тувинцев. __

Параметр Н1А-ген | Хо+ЭЕо I Х,±ЭЕ,, |Р I *

Европеоиды Сибири

СОЗ+, Т-лимфоцигы,% В35 62,27±1,26 67,72+2,31 0,043 8,2%

С 04+, Т-лимфоциты,% В40 38,57±1,01 28,67+2,38 0,001 12,3%

С08+;: Т-лимфоциты,% ООА1*0501 27,94±1,06 24,59±1,25 0,049 5,1%

ПЭФ ФГА, усл.ед. ОС2АГОЮ2 2,17±0,15 2,66+0,19 0,044 5,4%

ОС1АГ0301 2,54±0,15 2,00+0,15 0,023 6,7%

ОЯ4 2,73±0.12 1,85±0,09 0,0001 11,0%

Тувинцы

СР4+, Т-лимфоциты,% ОЯ4 28,33±0,34 30,412±1,30 0,043 2,1%

Установлена внутригрупповая сопряженность варьирования иммунологических параметров, ассоциированных с определенным НЬА-маркером. В группе сибирских европеоидов установлена тенденция к развитию недостаточной эффективности функционирования неспецифического иммунитета у НЬ А-БСЗ АI * 0.201-позитивных индивидов, что выражалось в снижении количества фагоцитирующих чоноцитов и гранулоцитов (табл.6). Наличие в генотипе аллеля НЬА-ЭС)А1*0102 было ассоциировано с высоким уровнем клеточных

эффекторных функций у данных индивидов (табл.7). В группе тувинцев однонаправленная НЬА-детерминация нескольких иммунологических параметров, характеризующих гуморальный иммунитет, была установлена для специфичности НЬА-АЮ (табл.8).

Таблица 8.

Ассоцииации аллелей Н1А генов с показателями состояния В-кпеточного звена

иммунной системы в популяциях сибирских европеоидов и тувинцев.

Параметр | HLA-ген | Xo±SEo I X,±SE, | Р | &

Европеоиды Сибири

IgM, г/л В27 2,05±0,09 • 1,53+0,18 0,048 5,2%

IgA, г/л А10 1,25±0,05 1,49±0,11 0,028 6,5%

IgG, г/л DR3 9,61±0,19 10,71 ±0,46 0,025 4,3%

DR4 10,00±0,20 10,46±0,40 0,047 3,4%

ЦИК, усл.ед. DR1 19,11 ±0,72 16,63±0,89 0,036 4,3%

Тувинцы

CD72+ В-лимфоциты,% DR1 9,46±0,34 7,38±0,67 0,022 2,7%

IgM, г/л А10 1,38±0,04 1,21±0,06 0,044 2,09%

ЦИК, усл.ед. А10 42,04±1,3S 35,74±2,80 0,044 2,07%

В17 42,14±1,47 35,98±2,09 0,041 2,13%

В 40 38,59±1,58 43,65±1,98 0,045 2,06%

С целью установления доли вариабельности иммунологических показателей, обусловленной HLA генотипом и оценки степени влияния различных аллельных вариантов HLA генов на данные показатели, нами были рассчитаны коэффициенты детерминации (R2). В популяции европеоидов Сибири значения R2 варьировали в пределах 3,4-12,3%, в популяции тувинцев были рассчитаны меньшие значения R2 (2,07-3,1%).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о существовании ассоциативных связей HLA генов с особенностями иммунного статуса. Этнические особенности распределения частот аллелей HLA генов в популяциях различного происхождения обусловливают межпопуляционные различия в характере HLA ассоциаций с вариабельностью параметров иммунного статуса, аналогично ранее установленным этнически зависимым ассоциациям аллелей HLA генов с заболеваниями.

Выводы.

1. Установлены особенности региональной иммуногенетической структуры европеоидного населения Сибири,заключающиеся в тенденции к снижению частоты аллелей HLA-Al, -DRB1*13, на фоне возрастания частоты аллелей HLA-A9 и -DPB1 *0402,что свидетельствует о возможном вкладе монголоидного компонента. Снижение частот аллелей HLA-A19, -А28, -В18 и -В22 возможно свидетельствует о влиянии как внешних климатогеографических, так и внутренних этногенетических факторов.

2. Распределение частот аллелей HLA генов I и II классов среди тувинцев имеет ряд уникальных особенностей, заключающихся в

характерном,для монголоидов распределении аллелей HLA-A3, А9, All, В8, В40 и характерном для европеоидов распределении аллелей HLA-A1, В5, В7, DPB1+0501, DQB1*0301, и соответствует историко-археологическим данным о их смешанном происхождении.

3. Обнаружение в обеих исследованных популяциях достоверно сцепленных гаплотипов монголоидного (А2-В13, А2-В15, А9-В12, А9-В35, А9-В40) и европеоидного (А1-В17, А2-В12, B7-DR2, B8-DR3) происхождения свидетельствует о сложном генезе популяций, с преобладанием европеоидного компонента в генетической структуре пришлого населения Сибири, и монголоидного компонента - в генетической структуре тувинцев.

4. Результаты филогенетического анализа продемонстрировали генетическую близость популяции европеоидного населения Сибири и европейских регионов России, наряду с которой наблюдалась тенденция к снижению генетических дистанций между популяцией европеоидов Сибири и центральноазиатскими и северными монголоидами. Спектр аллельных частот HLA генов I и II классов тувинцев позволил выявить монгольский, тюркский и древний европеоидный этнические компоненты, участвовавшие в формировании тувинского этноса.

5. Установлена ассоциированность HLA генов с варьированием параметров иммунного статуса, отражающих состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клеточного звеньев иммунной системы, у здоровых представителей двух сибирских популяций различного этнического происхождения.

6. Установлены межпопуляционные различия в характере ассоциированности HLA генов с параметрами иммунного статуса: специфическими для тувинцев являлись ассоциации, установленные для аллелей HLA-A9, -В 15 и -В 17, тогда как специфическими для европеоидов Сибири являлись ассоциации, установленные для аллелей HLA- В27.-В35 и -DR3. ■■■■■■• --,::■

7. Выявленные нормативные значения распределения аллельных вариантов генов HLA I и II классов для жителей Сибири различного этнического происхождения показывают наличие определенной степени метисации населения этого региона и свидетельствуют о необходимости разработки региональных иммуногекетических методов раннего диагноза и прогноза HLA ассоциированных болезней с учетом этнических контролей.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

L Konenkov V.I., Sartakova M.L.,.Prokofiev V.F, Shevchenko A.V, Golovanova O.V. Allelic frequenies and disequilibrium between TAPI and DRB1 genes in Caucasian population of West Siberia in Russia H Human Immunology. - 1999. - Vol.60. - Suppl. I. - P. 44. Abstr. of 13th European Histocompatibility Conference.

2. Голованова О.В., Шевченко А.В, Прокофьев В.Ф., Сартакова M.JI, Коненков В.И. Распространенность и неравномерное сцепление TAPI, ТАР2 и DR-B1 в популяции кавказоидного населения Западной Сибири II Матер. II съезда иммунологов России.-1999.- Т.4, № 1.-С. 97

3. Голованова О.В., Шевченко A.B., Коненков В.И. Распределение частот аллелей гена HLA-DPBI в популяции кавказоидов, проживающих в Западно-Сибирском регионе И Иммунная система: функционирование в норме, при экстремальных экологических воздействиях, при иммунопатологии: Матер. 5-й отчетной сессии ИКИ СО РАМН, Новосибирск, 2000,- С. 21-23.

4. Голованова О.В.,Шевченко A.B., Коненков В.И. Молекулярньш полиморфизм генов HLA-DRB1, -DPB1 МНС II класса в' популяции европеоидов, проживающих на территории Западно-Сибирского региона // Матер. III съезда иммунологов и аллергологов СНГ: Аллергология и иммунология,- 2000,- Т.1, №2.-С. 193.

5. Сартакова M.JL, Коненков В.И., Голованова О.В., Шевченко A.B., Jlonec-JIappea К.-; Гонзалес-Роцез С., Ламажаа А.М., Донгак Л.Г., Кара-Мошуш С.И. Изучение наиболее часто встречающихся аллелей гена HLA-В27 у тувинцев и русских жителей Западной Сибири // Генетика.-2000,-Т.36.-№5,- С.710-713

6. Голованова О.В., Гельфгат E.JI., Прокофьев В.Ф., Коненков В.И., Ламажаа AM., Цыбикова Э.В. Исследование иммуногенетической структуры тувинской популяции. В сб.: "Проблемы развития и сохранения тувинского генофонда: теория и практика". - Кызыл, Томск: STT, 2000.-С. 110-124.

7. Konenkov V. I, Prokofiev V. F., Shevchenko A. V., Golovanova O.V., Smolnikova M. V. Polymorphism of Immune Response Genes as a factor for Predisposition to Development of Diseases II Russian Journal of Immunology. -2001,- Vol.6.-N.2.-P. 124-129

8. Коненков В.И, Прокофьев В.Ф., Шевченко A.B., Голованова О.В., Короткова И.Ю. Клиническое значение генотипирования HLA комплекса. В сб.: Молекулярно-биологические технологии в медицинской пракгике.-Новосибирск: Изд. Дом «Манускрипт», 2001.-C27-34.

9. Golovanova О., Konenkov V., Prokofiev V. HLA И class molecular polymorphism and linkage disequilibrium paraneteres in Siberian Caucasoids // Eur. J. Immunogenet. - 2002. - Vol.29, N2.-P.182: Abstr. of 16th European Histocompatibility Conference.

10. Голованова O.B., Шевченко A.B., Прокофьев В.Ф., Коненков В.И. Молекулярный полиморфизм генов HLA- DRBI , -DPB1 в популяции европеоидного происхождения, проживающей в Западно-Сибирском регионе // Иммунология.-2002.-№1.-С.29-31.

Подписано в печать 11.04.2002 Формат 60x84 1/16

Заказ № 63 Бумага офсетная, 80 гр/м2

Печ.л. 1 Тираж 100

Отпечатано на полиграфическом участке издательского отдела Института катализа им. Г.К. Борескова СО РАН 630090, Новосибирск, пр. Академика Лаврентьева, 5

¡sL¡

Актуальность темы.

Главный комплекс гистосовместимости является одной из наиболее полиморфных генетических систем человека [71]. Широкий полиморфизм НЬА генов является основанием их использования в качестве маркеров для исследования дивергенции человеческих популяций. Установлено, что частоты определенных аллелей и их комбинаций, наследуемых совместно благодаря феномену неравновесного сцепления, могут служить устойчивой характеристикой популяций различного расово-этнического происхождения. НЬА комплекс является уникальным инструментом для исследования генетических взаимоотношений между современными человеческими популяциями, т.к. частоты аллелей, характеризующие предковые группы, участвовавшие в их этногенезе, на протяжении длительного времени остаются неизменными [16,70,113,114].

Особое значение приобретают исследования иммуногенетических структур этнических общностей смешанного происхождения, в формировании которых участвовали разнообразные племенные группы, с целью изучения их генетического своеобразия [6,11,50,58,94]. На протяжении многих веков в Сибири протекали сложные этногенетические процессы, обусловленные тем, что данная территория издревле являлась ареной контактов европеоидной и монголоидной рас. Открытие сибирских территорий русскими в XVI и их последующее освоение вплоть до нынешних дней активизировало межэтнические контакты между коренным монголоидным и пришлым европеоидным населением Сибири, сопровождающиеся процессами генетической гомогенизации и ассимиляции [100].

Проведенное исследование посвящено анализу генетических структур популяций, представляющих пришлое европеоидное и коренное монголоидное население Сибири по комплексу иммуногенетических маркеров. Пришлое европеоидное население, длительное время проживающее в окружении коренных монголоидов Сибири, заслуживает пристального внимания, вследствие того, что на структуру его генофонда, несомненно, повлияли межэтнические контакты с коренными монголоидными народностями края [8,32,40].

Коренное монголоидное население Сибири представлено в исследовании группой тувинцев. Тувинцы, антропологически относящиеся к центральноазиатскому антропологическому типу монголоидной расы, принадлежат к тюркской группе алтайской языковой семьи. Формирование тувинского генофонда происходило в результате смешения многочисленных тюркских, монгольских, кетоязычных и самоедоязычных родоплеменных групп, на основе генетического субстрата древних индоевропейских племен [5,39,44].

Исследование распределения частот генов НЬА в популяциях европеоидного населения Сибири и тувинцев направлено как на изучение внутрипопуляционного иммуногенетического разнообразия, так и на оценку степени их генетического своеобразия и анализ генетических взаимоотношений с различными расово-этническими группами.

Известна важная роль НЬА антигенов в осуществлении иммунных реакций. Комплекс представлен несколькими полиморфными локусами, кодирующими мембранные протеины, основной функцией которых, является презентация антигенного материала рецепторам С04- и С08-позитивных Т-лимфоцитов. Распознавание ассоциированных с НЬА молекулами пептидов Т-клеточными рецепторами активирует лимфоциты и инициирует развитие адаптационного иммунного ответа [26,34,53,118].

Установление ассоциаций генов НЬА комплекса с развитием целого ряда иммунопатологий [16,17,70,124,183], а также межиндивидуальных различий в параметрах иммунного статуса у здоровых лиц в отсутствие явных внешних социально-экологических воздействий [56,81,82,129 и др.] свидетельствуют о возможном влиянии иммуногенетических детерминант на иммунный статус индивида.

Установленные различия в распределении частот аллельных вариантов НЬА генов в популяциях различного этнического происхождения позволяют говорить о наличии межпопуляционных различий в характере ассоциаций НЬА генов с иммунологическими параметрами. Подтверждение данного предположения потребовало исследования взаимосвязей различных аллелей НЬА генов с иммунологическими параметрами в популяциях, проживающих в сходных социально-экологических условиях, однако, характеризующихся различным расово-этническим происхождением.

Цель исследования: Провести сравнительный анализ современной иммуногенетической структуры популяций монголоидного и европеоидного населения Сибири и их генетических взаимоотношений с расово-этническими группами Европы и Азии; изучить характер ассоциативных связей НЬА генов с параметрами иммунного статуса в исследуемых популяциях.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучить характер распределения частот аллелей НЬА генов I и II классов в популяциях европеоидного и коренного монголоидного населения Сибири.

2. Установить и провести сравнительный анализ параметров неравновесного сцепления между НЬА генами I и II классов и частот гаплотипов в исследуемых популяциях.

3. Провести анализ филогенетических взаимоотношений между исследуемыми популяциями и другими расово-этническими группами на основании распределения частот аллелей НЬА генов I (НЬА-А, -В) и II классов (НЬА-ОЯВ!).

4. Изучить этнические особенности в характере взаимосвязей аллелей НЬА генов с иммунологическими параметрами, отражающими функциональную активность макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клеточного звеньев системы иммунитета.

Научная новизна. В работе впервые приведены данные о молекулярном полиморфизме НЬА генов II класса в популяциях европеоидного населения Сибири и тувинцев, отражающие особенности их иммуногенетических структур, обусловленных сложным генезом данных популяций. Установление частот аллелей НЬА генов, двух- и трехлокусных гаплотипов, а также параметров неравновесного сцепления между отдельными аллелями позволило выявить иммуногенетическое своеобразие пришлого европеоидного населения Сибири по сравнению с европеоидным населением Западных регионов России.

На основании данных о распределении иммуногенетических маркеров впервые произведен филогенетический анализ взаимоотношений исследуемых популяций с популяциями различной географической и расово-этнической принадлежности, отразивший промежуточное положение тувинцев между монголоидными и европеоидными популяциями, а также близость европеоидного населения Сибири и европейских регионов России.

Впервые установлена ассоциированность ряда аллелей НЬА генов с параметрами иммунного статуса в сибирской популяции монголоидного происхождения, а также установлены межпопуляционные различия в характере ассоциированности аллелей НЬА генов с иммунологическими параметрами, отражающими состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клеточного звеньев системы иммунитета.

Научно-практическое значение.

Полученные данные о распределении генов НЬА I и II классов в значительных группах представителей европеоидов Сибири и тувинцев могут служить в качестве контролей для выявления НЬА маркеров резистентности и предрасположенности к различным заболеваниям иммунопатологической природы. Проведенное исследование позволило значительно дополнить данные о распределении частот НЬА генов в популяции европеоидного населения Сибири сведениями о молекулярном полиморфизме генов НЬА-ОИМ, А1, -0С)В1 и -0РВ1. Применение молекулярных методов НЬА-типирования, позволяющего определять аллельные варианты на уровне ДНК, значительно расширило спектр тестируемых НЬА аллелей, по сравнению с ограниченным с позиций сегодняшнего дня количеством серологически тестируемых НЬА специфичностей. Полученные данные могут быть использованы для ревизии существующих и разработки новых этнически ориентированных критериев как для раннего индивидуального диагноза и прогноза, так и для оценки общего потенциала здоровья в популяции.

Впервые примененные методы ДНК-типирования позволили выявить различия в распределении аллельных вариантов НЬА-генов среди жителей Сибири различного этнического происхождения и характере их ассоциированности с параметрами оценки состояния системы иммунитета, что может быть использовано для решения практических вопросов трансплантации аллогенных органов и тканей.

Основные положения, выносимые на защиту :

1. Наряду с чертами характерными для популяций европеоидного происхождения иммуногенетическая структура европеоидного населения Сибири имеет определенные особенности, выраженные в повышении частот ряда аллелей НЬА генов, наиболее характерных для популяций монголоидного происхождения.

2. Распределение частот аллелей и гаплотипов НЬА I и II классов среди тувинцев свидетельствует о присутствии европеоидного компонента в генетической структуре данной популяции, что выражается в повышении частот ряда аллелей НЬА генов и их ассоциаций, характерных для европеоидов.

3. В исследуемых популяциях установлена ассоциированность аллельных вариантов НЬА генов с вариабельностью параметров иммунного статуса, отражающих состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и В-клеточного звеньев иммунной системы, в характере данной ассоциированности присутствуют межпопуляционные различия.

Выводы.

1. Установлены особенности региональной имуногенетической структуры европеоидного населения Сибири, заключающиеся в тенденции к снижению частоты аллелей HLA-A1, -DRB1*13, на фоне возрастания частоты аллелей HLA-A9 и -DPB 1*0402, что свидетельствует о возможном вкладе монголоидного компонента. Снижение частот аллелей HLA-A19, -А28, -В 18 и -В22 возможно свидетельствует о влиянии как внешних климатогеографических, так и внутренних этногенетических факторов.

2. Распределение частот аллелей HLA генов I и II классов среди тувинцев имеет ряд уникальных особенностей, заключающихся в характерном для монголоидов распределении аллелей HLA-A3, А9, Al 1, В8, В40 и характерном для европеоидов распределении аллелей HLA-A1, В5, В7, DPB1*0501, DQB1*0301, и соответствует историко-археологическим данным о их смешанном происхождении.

3. Обнаружение в обеих исследованных популяциях достоверно сцепленных гаплотипов монголоидного (А2-В13, А2-В15, А9-В12, А9-В35, А9-В40) и европеоидного (Al-В 17, А2-В12, B7-DR2, B8-DR3) происхождения свидетельствует о сложном генезе популяций, с преобладанием европеоидного компонента в генетической структуре пришлого населения Сибири, и монголоидного компонента - в генетической структуре тувинцев.

4. Результаты филогенетического анализа продемонстрировали генетическую близость популяции европеоидного населения Сибири и европейских регионов России, наряду с которой наблюдалась тенденция к снижению генетических дистанций между популяцией европеоидов Сибири и центральноазиатскими и северными монголоидами. Спектр аллельных частот HLA генов I и II классов тувинцев позволил выявить монгольский, тюркский и древний европеоидный этнические компоненты, участвовавшие в формировании тувинского этноса.

5. Установлена ассоциированность HLA генов с варьированием параметров иммунного статуса, отражающих состояние макрофагально-фагоцитарного, Т-клеточного и B-клеточного звеньев иммунной системы, у здоровых представителей двух сибирских популяций различного этнического происхождения.

6. Установлены межпопуляционные различия в характере ассоциированности HLA генов с параметрами иммунного статуса: специфическими для тувинцев являлись ассоциации, установленные для аллелей HLA-A9, -В 15 и -В 17, тогда как специфическими для европеоидов Сибири являлись ассоциации, установленные для аллелей HLA- В27,-В35 и -DR3.

7. Выявленные нормативные значения распределения аллельных вариантов генов HLA I и II классов для жителей Сибири различного этнического происхождения показывают наличие определенной степени метисации населения этого региона и свидетельствуют о необходимости разработки региональных иммуногенетических методов раннего диагноза и прогноза HLA ассоциированных болезней с учетом этнических контролей.