Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуногенетические особенности чувашской популяции

На правах рукописи

БОРИСОВА

Людмила Владшшропиа

ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЧУВАШСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ

«14.00.36 - аллергология и иммунология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

? ? СЕН 2008

Москва-2008 г.

003446800

Государственное предприятие Государственный научный центр «Институт иммунологии Федерального медико-биологического агентства»

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

В£. Яздонский

Официальные оппоненты: доктор медицинских неук, профессор доктор медицинских наук, профессор

А.Л. Ярилин Л.И. Винницкий

Ведущая организация: Российский государственный медицинский институт Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию, г. Москва

защите докторских и кандидатских диссертаций Д 208.017.01 в ГНЦ

«Институт иммунологии ФМБЛ Россия» по адресу: 115478, г Москва, Каширское шоссо, дом 24, корп. 2.

С диссертацией мокко, ознакомиться в библиотеке Государственного научного центра «Институт иммунологии Федерального медико-биологического агентства».

Автореферат разослан у^2008 г.

Ученый секретарь совета по защите докторских и кандидатских диссертаций.

Защита состоится г. в ж на заседании совета но

доктор медицинских наук

Актуальность темы

Главный комплекс гистосовместимости человека, система HLA (от Human Leucocyte Antigens), является одной из наиболее полиморфных генетических систем организма, важнейшими функциями которой являются генетический контроль иммунного ответа и поддержание иммунологического гомеостаза, нарушение которого лежи г в основе многих патологических процессов [Алексеев Л.П, 2000]

Полиморфизм HLA-системы широко используется в популяционных исследованиях для изучения иммупогенетического профиля популяций, что служит основой для дальнейшего использования полученных данных в трансплантологии, в антропологических исследованиях и для выявления харагаерных для популяции НЬЛ-марксроп предрасположенности и резистептносш к различным заболеваниям. На фоне многих уже изученных в иммуногенезическом плане популяций, проживающих на территории России, Чувашия до сих пор остается «белым неисследованным пятном».

На сегодня выявлены HLA-маркеры многих заболеваний с иммунными нарушениями, при некоторых полученные данные приобрели практическое значение в плане диагностики и прогноза течения. Одним из заболеваний с иммунными нарушениями является хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), представляющая собой важную медицинскую и социально-экономическую проблему. Значительная роль в развитии ХОБЛ принадлежит генетическим факторам. Установление HLA-маркеров предрасположенности к заболеванию в чувашской популяции имеет большое значение для выявления лиц, входящих в группу повышенного риска развития болезни, а также для выяснения генетически обусловленных механизмов патогенеза заболевания.

В эгом отношении представляет интерес установление связи HLA-аллелей с иммунологическими параметрами (ИП) в здоровой чувашской популяции, а также выявление HLA-маркеров патогенетически важных особенностей иммунного статуса у больных ХОБЛ.

Цель работы

Изучить особенности HLA-генетического профиля здоровой чувашской популяции, а также больных хронической обструктивной болезнью легких и лиц, резистентных к заболеванию.

Задачи исследования

1. Изучить особенности распределения HLA-аллелей классов I и II (локусы А, В, DRB1, DQA1 и DQB1) у здоровых лиц чувашской национальности, принадлежащих к различным этническим группам (верховые, низовые и средненизовые чуваши), у больных ХОБЛ и лиц, резистентных к заболеванию

2. Исследовать параметры иммунного статуса и их связь с HLA-аллелями н здоровой чувашской популяции

3 Провести исследование связи HLA-аллелей с ХОБЛ. Исследовать иммунологические параметры у больных с ХОБЛ и их связь с HLA-генотипом

Научная новизна

Впервые детально изучено распределение HLA-аллелей в чувашской популяции. HLA-профиль чувашей имеет сходство с европеоидами как по характеру распределения аллелей, так и по особенностям неравновесного сцепления генов, составляющих гаплотипы, однако наряду с этим имею гея характерные для популяции черты.

Установлена и охарактеризована связь иммунологических параметров <3 HLA-генотипом здоровых представшелсй чувашской национальности

Впервые идентифицированы маркеры предрасположенноеiи к ХОБЛ в чувашской популяции - аллели DRB1*11 и DQBI*0301 и маркеры рсзисгсншости -аллели DRB1*01, DQA1*0101, DQB1*0501 и *0502-04

Впервые выявлена связь ПЬЛ-марксров предрасположенности к ХОБЛ DRB1*11 и DQB 1*0301 с рядом патогенетически важных параметров иммунного статуса (сниженное содержание и периферической крови CD3, CD4, CD8, CD25 субпопуляций Лф и повышенный уровень IgM, IgA, ЦИК), чго можеч свидетельствовать об участии в патогенезе заболевания HLA-сцепленного генетического контроля иммунного статуса.

Практическая значимость

Детально исследованный HLA-гснетический профиль чувашской популяции может использоваться в популяционно-генетических исследованиях для изучения ее происхождения и эволюции, а также служить основой для изучения характерных для популяции связей HLA с заболеваниями

Выявленные HLA-маркеры предрасположенности и резистентности к возникновению ХОБЛ у лиц, занятых в химическом производстве, могут служить

4

одним из критериев профессионального отбора, а также для ранней диагностики и прогнозирования течения ХОБЛ.

Публикации

По теме диссертации опубликована 21 научная работа, из них 4 работы опубликованы в журналах, рекомендованных ВАК для опубликования научных результатов диссергационных работ на соискание ученой степени кандидата и доктора наук.

Основные материалы работы были доложены на 2-й международной конференции «Патофизиология и современная медицина» (2004 г, Москва), на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы пульмонологии» (2007 г, Чебоксары) и на VIII конгрессе РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (2007 г, Москва)

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 139 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов и списка цитируемой литерагуры, который содержит 177 отечественных и зарубежных источников Диссертация содержит 5 рисунков и 30 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Проведены популяциошгые иммуногенетические и иммунологические исследования у здоровых лиц чувашской национальности, не состоящих в кровном родстве, а гакже у больных ХОБЛ и лиц, резистентных к заболеванию Национальность обследованных (276 человек с равным соотношением мужчин и женщин в возрасте от 18 до 60 лет) устанавливали по паспортным данным и путем опроса с учетом предшествующих поколений и места жительства В число обследованных вошли представители трех групп, проживающих в различных районах Чувашской республики верховые чуваши (83 человека) из северной и северо-западной части Чувашии, низовые (94 человека) из южной Чувашии и средненизовые чуваши (99 человек) - представители центральных и северовосточных районов Чувашии Диагноз ХОБЛ поставлен в соответствии с критериями GOLD (Global initiative for chronic obstructive lung disease, 2003), отбор больных (31 человек чувашской национальности, из них - 13 мужчин и 18 женщин

в возрасте от 28 до 66 лет) проводился на основании тщательного клинического, лабораторного и аллергологического обследования. Все обследуемые больны в течение последних 10-15 лет. Группу резистентных составили 33 человека чувашской национальности (19 мужчин и 14 женщин в возрасте от 32 до 60 лет), работающих на химическом комбинате (АО «Химпром», г. Новочебоксарск) на протяжении 10-30 лет и не имеющих заболеваний, связанных с профессиональной деятельностью.

У всех обследованных лиц определяли HLA-генотип и показатели иммунного статуса. Объектом исследования служила периферическая кровь. Лимфоциты выделяли из свежей гепаринизированной крови центрифугированием при 2000 об/мин в течение 20 мин на градиенте фиколл-верографина (плотность 1,077 г/мл) Полученные лимфоциты использовали для серологического HLA-гипировапия и для идентификации субпопуляций лимфоцитов методом непрямой иммунофлуоресценции с использованием мопоклональных антител

Типировапис HLA-аптигснов класса I проводили в стандартном микролимфоциютоксичсском тесте Использовали HLA-гипирующие сыворотки ЗАО «Межрегиональный центр иммуногенстики и гисклипирующих реагентов «Гисанс» (С.-Петербург). Проведено типированис по 8 антигенам локуса А и 18 антигенам локуса В.

HLA-rcno типированис аллелей класса II проводили методом мультипраймерной иолимеразной цепной реакции (ПЦР) согласно методике производителя, разработанной в ГНЦ «Институте иммунологии ФМБА» России Проведено типирование по 14 аллелям DRB1, 8 аллелям DQA1 и 11 аллелям DQB1 локусов

Идентификацию лимфоцитов и их субпопуляций проводили методом

непрямой иммунофлуоресценции с использованием моноклональных антител CD3,

CD4, CD8, CD16, CD20, CD25, CD71, CD95 и HLA-DR (ООО «Сорбент»,

г.Москва) согласно методике производителя.

Концентрацию иммуноглобулинов классов М, G, А в сыворотке крови

определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини

Концентрацию ЦИК в сыворотке крови определяли методом осаждения в

3,5% полиэтиленгликоле с молекулярной массой 6000 Д

Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов взвесь лейкоцитов

инкубировали со стандартными частицами латекса диаметром 1,35 мкм

6

(«Иммуноскрин», Москва) в течение 30 мин. Процент -фагоцитирующих нейтрофилов обозначали как фагоцитарный индекс, число частиц, поглощаемых в среднем одним фагоцитирующим нейтрофилом, - как фагоцитарное число.

Уровень общего IgE в сыворотке определяли с использованием тест-систем ЗАО «Алкор Био» (С.-Петербург) с помощью твердофазного иммуноферметного метода

Методы генетического и статистического анализа Частоты генов, гаплотипов (Н) и величины неравновесного сцепления (D) вычисляли по формулам, предложенным PMattiuz и соавт. [J970J. Достоверность величины D определяли по точному двустороннему тесту Фишера для четырехпольных таблиц Статистическую оценку ассоциации HLA-антигснов с заболеваниями проводили по показателю относительного (RR) риска Величину RR вычисляли по формулам В Wool! и J Haldane. Достоверность ассоциации (р) определяли по критерию х1 для альгершиивных признаков с поправкой па непрерывность выборки и но точному двустороннему тесту Фишера для четырехпольных таблиц Коррекцию р (р0) проводили путем умножения величины р на число исследованных HLA-аллелей Для определения часгош [рсхлокусных гаплотипов методом максимального правдоподобия (maximum-likelihood) использовали компьютерную программу «Арлекин», версия 21 (URL: http У/ anthro.unige ch/arlequin). Полученные частоты были использованы для расчета генетических рассюяний между популяциями по М Нею [1972] Расчеты генетических расстояний и построение соответствующих матриц были произведены при помощи компьютерной программы "DJGenetics" версия 0.03 (Ю А Серегин, Е.В Балановская) Полученные матрицы были использованы для проведения кластерного анализа при помощи компьютерной программы «Statistica v.6 0 » Если распределение признака приближалось к нормальному, то данные представляли в виде М ± Sd (где М - среднее арифметическое, Sd - среднее квадратичное отклонение), при этом достоверность различия количественных показателей определяли с помощью параметрического t-критерия Стьюдента (р) Если распределение отличалось от нормального, то данные представляли в виде Me {P2S, Р75}, где Me - медиана, P2s - нижний и Р75 - верхний квартили, и при сравнении двух независимых выборок использовали непараметрический критерий Манна-Уитни [Платонов АЕ, 2000]. Критическое значение уровня значимости принимали равным 5%.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты исследований, проведенных в здоровой чувашской популяции, позволили выявить основные черты ее иммуногенетического профиля Частоты антигенов и генов класса I представлены в табл. 1, частоты генов класса II - в табл. 2. В чувашской популяции встречаются с различной частотой все исследуемые аллели. Среди антигенов локусов А и В с высокой частотой определяются НЬА-антигены А2 (41,7%) и В7 (23,6%), являющиеся одними из наиболее частых среди представителей как европеоидной, так и монголоидной рас Самая низкая частота в фенотипе обследованных в локусе А характерна для антигена НЬА-А28 (8,0%), в локусе В - для НЬА-антигеион В41 (2,5%), В53 (2,2%) и В42 (1,1%) Большими во НЬА-аптигенов класса I у чувашей встречается с частотами, сходными со средними часюшми у европеоидов, и лишь частоты встречаемости НЬА-ЛЮ, В8 и В18 близки к значениям этих часю1 у монголоидов. В то же время некоторые НЬА-антигены в чувашской популяции выявляются с характерной, отличающей их 01 европеоидов и монголоидов, частотой чаще встречаются НЬЛ-аптигены А9 и В27 и реже - НЬЛ-А19 и В12 МЬЛ-ангиген Л2 у чувашей встречается реже, чем у европеоидов, но чаще по сравнению с монголоидами.

В распределении НЬА-аллелсй класса II в чувашской популяции также можно наблюдань преобладание европеоидных черт - большинство аллелей локусов 0<ЗА1 и ОС)В1 встречаются с частотами, близкими к

европеоидным. НЬА-аллели, частоты встречаемости которых были бы близки к характерным для монголоидов частотам, в чувашской популяции не выявлены. Самыми распространенными у чувашей НЬА-аллелями являются Б11В 1*01 (20,51%), 0<ЗА 1*0501 (27,56%), ОдА1*ОЮ1 (22,44%), 0(}В 1*0501 (20,51%) и 0(2В1*0602-08 (18,59%), К редким НЬА-аллелям, встречающимся меньше, чем у 5% обследованных лиц, относятся 011В1*08 (1,28%), *14 (1,28%), *16 (3,21%), Б()А1*0401(1,28%), 0(581*0302 (4,49%), *0305 (3,21%), »0401-02 (1,28%), *0502-04 (4,49%) и *0601 (1,28%). НЬА-аллели 01Ш*10, *18; 0(^1*0601 и БрВ1*0304 не выявлены. Характерными для исследуемой популяции особенностями распределения НЬА-аллелей являются повышенные частоты встречаемости НЬА-0яв1*01, ПдА1*0101, 0(ЗВ1*0303 и *0501 и сниженная частота НЬА-БдВ1*0301.

Сложившиеся в результате естественной селекции устойчивые НЬА-

гаплотипы, обладающие выраженным позитивным неравновесным сцеплением

8

Таблица 1.

Распределение HLA-антигенов I класса в чувашской популяции (N=276)

HLA- Частота Частота HLA- Частота Частота

антиген антигена (%) гена антиген антигена (%) гена

А1 27,2 0,1466 В14 7,2 0,0369

А2 41,7 0,2362 В15 14,5 0,0753

A3 25,4 0,1361 В16 11,6 0,0598

А9 30,1 0,1638 В17 9,8 0,0502

А10 18,8 0,0991 В18 5,8 0,0294

All 13,8 0,0714 В21 7,6 0,0388

А19 14,1 0,0733 В22 9,1 0,0464

А28 8,0 0,0407 В27 12,0 0,0617

A blank - 0,0328 В35 15,6 0,0812

В5 12,7 0,0656 В40 И,2 0,0578

В7 23,6 0,1256 В41 2,5 0,0128

В8 12,7 0,0656 В42 1,1 0,0054

В12 10,5 0,0540 В53 2,2 0,0109

В13 9,1 0,0464 В blank - 0,0762

Примечание A blank, В blank - невыявленные аллели в локусах А и В.

Таблица 2

Распределение HLA-аллелей класса II в чувашской популяции (N=78)

HLA- Частота l-lLA-аллель Часгога HLA-аллель Частота

аллель гена (%) гена (%) гена (%)

DRB1*01 20,51 DQA1*0101 22,44 DQB 1*0201 17,31

DRB1*04 10,90 DQA1*0102 14,10 DQB1*0301 17,95

DRB1*07 8,97 DQA 1*0103 8,33 DQB 1*03 02 4,49

DRB1*08 1,28 DQA1*0201 8,97 DQB 1*0303 10,89

DRB1*09 6,41 DQA1*0301 17,31 DQB 1*0304 0

DRB1*10 0 DQA1*0401 1,28 DQB 1*0305 3,21

DRBPll 8,97 DQA1*0501 27,56 DQB 1*0401-02 L,28

DRB1*12 5,13 DQAP0601 0 DQB 1*0501 20,51

DRB1*13 10,26 DQB 1*0502-04 4,49

DRB1*14 1,28 DQB 1*0601 1,28

DRB1*15 10,26 DQB 1*0602-08 18,59

DRB1*16 3,21

DRB1*17 12,82

DRB1*18 0

аллелей, служат более яркой индивидуальной характеристикой генетического профиля популяции. В чувашской популяции встречаются как НЬА-гаплотипы, характерные для европеоидов, так и гаплотипы, свойственные изученной популяции. К характерным для европеоидов гаплотипам можно отнести НЬА-А1-В8 (Н=0,0199, 0=0,0104), А2-В12 (Н=0,0277, 0=0,0149), АЗ-В7 (Н=0,0396, Б= 0,0225), А3-В35 (Н=0,0271, 0=0,0160); А9-ОЯВ1*11 (Н=0,0517, 0=0,0307); А2-БОВ 1*0201 (Н=0,0795,0=0,0413), А9-ОдВ1*0301 (Н=0,1025,0=0,0579); В8-ОЯВ1 ♦17 (Н=0,0716, 0=0,0586), В8-ОдА1*0501 (Н=0,0748, 0=0,0437), В8-ОдВ1*0201 (Н=0,0782, 0=0,0601), В15-ОМ31*13 (Н=0,0286, 0=0,0204), В17-01Ш1*07 (Н= 0,0234, 0=0,0178); 01Ш1*01-ВдА1*0101 (Н=0,2321, 0=0,01743), ОЯВ1*04-ОдА1 *0301 (Н=0,1679, 0=0,01358), ОЯВ 1*07-00А1*0201 (Н=0,0942, 0=0,0853), ОГШ1 *11-ОдА1*0501 (Н=0Д084, 0=0,07026), О11В1*15-ОдА1*0102 (Н=0,0932, 0= 0,0766), О1Ш1*17-ОдА1*0501 (Н=0,1451, 0=0,0972), ОГШРОЬОдВ 1*0501 (Н= 0,2237, 0=0,1718), ОКВ1*11-ОдВ1*0301 (Н=0,0942, 0=0,0754), 011В1*13-0дВ1 ♦0602-08 (Н=0,1057, 0=0,0813), О1*в1*15-Одв 1*0602-08 (Н=0,1084, 0=0,0860), 01Ш1*17-0дВ 1*0201 (Н=0,1527, 0=0,1235), 0дл1*0102-0дв1*0602-08 (Н= 0,1446, 0=0,1129), 0дл1*0301-0дв1*0303 (Н=0,0996, 0=0,0775), ОдА1*0501-О0В 1*0201 (Н=0,1720,0=0,1088), ПдА1*0501-ОдВ1*0301 (1-1=0,1994, 0=0,1335).

Среди характерных для чувашской популяции НЬА-гаплотинов особое место занимаю! гаплотипы, составленные парами аллелей, частоты которых отличаются от соошетсгвующих значений в других популяциях1 АЭ-ОПВ! *09 (Н=0,0411, 0=0,0263), А9-ОдА1*0301 (Н=0,0945, 0=0,0517), А19-ОдА1*ОЮ2 (Н= 0,0493, 0=0,0371); В5-ОдА1*ОЮ1 (Н=0,0422, 0=0,0274), В27-ОдА1*ОЮЗ (Н= 0,0251, 0=0,0217); В5-ОдВ1*0501 (1-1=0,0428, 0=0,0295), В17-ОдВ1*ОЗОЭ (Н= 0,0300, 0=0,0231), В27-ОдВ1*0305 (Н=0,0124, 0=0,0111), В27-ОдВ 1*0602-08 (Н= 0,0311, 0=0,0230), В35-ОдВ 1*0303 (Н=0,0362, 0=0,0277). Из других свойственных изученной популяции гаплотипов с наиболее высокой частотой и величиной неравновесного сцепления встречаются НЬА-гаплогипы А2-ОЛВ1*13 (Н=0,0674, 0=0,0547), А2-ОдА1*ОЮЗ (11=0,0627, 0=0,0454), А2-ОдВ1*0602-08 (Н=0,1047, 0= 0,0634), А10-0дв1*0201 (И=0,0509, 0=0,0301), В7-ОдА1*0501 (Н=0,0863, 0=0,0481), В35-ОдА1*0301 (Н=0,0490, 0=0,0350), В 15-Одв 1*0602-08 (Н=0,0451,0=0,0360).

Чувашская популяция неоднородна по своему составу, она состоит из

нескольких этнических групп, отличающихся по своему происхождению,

10

сложившемуся языковому диалекту, быту, а также имеющих различную материальную и духовную культуру. Чувашский народ сформировался в Среднем Поволжье в начале второго тысячелетия н. э. Часть тюрко-язычных племен, пришедших с Востока, смешалась с местными финно-угорскими племенами (древними мари, удмуртами и мордвой), что положило начало образованию группы верховых чувашей, проживающих в северной части Чувашии. Другая часть племен компактной массой поселились на территории южной части Чувашии, где сложилась группа низовых чувашей. В северо-восточном и центральном районах сформировалась группа средненизовых чувашей. Есгественпо-природпые рубежи на территории республики способствовали образованию историко-географических областей, каждая из которых была не только локализована, но и на протяжении веков развивалась в условиях изоляции Учитывая сложность этногенеза чувашской популяции можно ожидать своеобразие иммуногснстичсских характеристик этнических 1рупп, соаавляющих популяцию

Сравнительный анализ распределения НЬА-аплелей класса I и класса II между верховыми, низовыми и средпенизовыми чувашами представлен в габл 3. Этнические группы чувашей различаются по распределениго НЬА-антигеков класса Г НЬА-А9, который у верховых чувашей встречается чаще, чем у низовых и средненизовых чувашей, НЬА-В5, В12, В17 (выявляются у верховых чувашей реже, чем в других группах), НЬА-В8 (его частота у низовых чувашей выше, чем у верховых и средненизовых), НЬА-В18 и В22 (у низовых чувашей встречаются реже, чем у средненизовых). Также различия наблюдаются в распределении НЬА-аллелей класса 11: частота ИЬА-ОС>А 1*0301 в популяции верховых чувашей выше, чем в популяции низовых и средненизовых, НЬА-0(}В 1*0201 у верховых чувашей встречается реже, чем у низовых, а НЬА-0(2В1*0305 у них же встречается чаще по сравнению со средпенизовыми, у которых этот аллель не выявлен

Однако, при введении поправки на количество аллелей все различия оказались недостоверными, что может свидетельствовать о том, что имевшие место межэтнические различия постепенно стираются, сливаются между собой, и популяция приобретает новые, характерные для нее, черты

Представляет интерес сравнение НЬА-профилей чувашей и популяций мари и мордвы, т к. с представителями именно этих народностей происходило смешение предков чувашей, и эти популяции в настоящее время являются

непосредственными соседями чувашей на севере (мари) и юго-западе (мордва).

11

Таблица 3

Сравнение распределения НЬА-аллелей класса I и класса II между верховыми,

низовыми и средненизовыми чувашами

Частота НЬА-аллеля(%) Частота HLA-аллеля (%)

HLA- Верхо вые Низо вые Средне низо- HLA- Верховые Низовые Средне низо-

аллель чуваши N=83 чуваши N=94 вые чуваши N=99 аллель чуваши N=83 чуваши N=94 вые чуваши N=99

(22) (26) (30) (22) (26) (30)

А1 24,1 30,9 26,3 DRBI*07 9,1 11,5 6,7

А2 38,6 43,6 42,4 DRB1*08 2,3 0,0 1,7

A3 22,9 25,5 27,3 DRB1*09 9,1 5,8 5,00

А9 37,3* 0 26,6* 27,3° DRBini 11,4 9,6 6,7

А10 18,1 23,4 15,2 DUBI *12 2,3 1,9 10,0

АН 36,9 12,8 12,1 DRBI*13 6,8 9,6 13,3

А19 14,5 14,9 13,1 DRB1*14 0,0 0,0 3,3

А28 7,2 5,3 11,1 DRB1*I5 13,6 13,5 5,0

В5 7,2° 13,8 16,2° DRBIM6 2j3 1,9 5,0

В7 28,9 22,3 20,2 DRB1*17 6,8 19,9 11,7

В8 10,8 18,)л 9,1л DQA1*0101 22,7 19,2 22,6

В12 4,8*° 13,8* 12,1° DQA1*0102 13,6 17,3 13,3

В13 5,7 4,3 8,1 DQA1*0103 4,6 7,7 8,3

В14 6,0 5,3 10,1 DQA1*0201 9,1 11,5 6,7

В15 12,0 16,0 15,2 DQA1*0301 27,3* 0 13,5* 13,3°

В16 10,8 13,8 10,1 DQA1*0401 2,3 0,0 1,7

В17 4,8* 13,8* 10,1 DQA1*0501 20,5 30,8 30,0

В18 7,2 2,1л 8,1л DQB 1*0201 11,4* 25,0* 15,0

В21 7,2 9,6 6,1 DQB1*0301 13,4 15,4 13,3

В22 8,4 5,3Л 13,1л DQB 1*0302 6,8 1,9 5,0

В27 13,3 10,6 12,1 DQB 1*0303 13,6 11,5 16,7

В35 19,3 11,7 16,2 DQB1*0304 2,3 0,0 0,0

В40 12,0 8,5 13,1 DQB 1*0305 9,1° 1,9 0,0°

В41 2,4 2,1 3,0 DQB 1*0401-02 2,3 0,0 1,7

В42 0 3,2 0 DQB 1*0501 18,2 21,2 23,3

В53 3,6 2,1 1,0 DQB 1*0502-04 2,3 1,9 8,3

DRB1*01 18,2 19,2 23,3 DQB 1*0601 4,6 0,0 0,0

DRB1*04 18,2 7,7 8,3 DQB 1*0602-08 15,9 21,2 16,7

Примечание. N - количество обследованных по НЬА-антигенам класса I, число в

скобках - количество обследованных по НЬА-аллелям класса И,

* - р<0,05 в сравнении между верховыми и низовыми чувашами, ° - р<0,05 в сравнении между верховыми и средненизовыми чувашами.

Мордовская популяция подразделяется на мордву-мокша и мордву-эрзя, непосредственно с чувашами граничит эрзянская группа. По сравнению с популяциями мордвы в чувашской популяции чаще встречаются антигены HLA-А9, В7, В22 и реже В35 (табл. 4). Частоты HLA-A9 в мордовских популяциях близки к европеоидным, в то время как повышенная частота этого антигена является характерной для чувашей чертой. Частоты же HLA-антигенов В7, В22 и В35 в чувашской популяции сходны со значениями в европеоидных популяциях.

Современная чувашская популяция отличаегся от популяции мари распределением только HLA-антигенов класса I: у чувашей чаще выявляются HLA-антигены В5, В14 и реже-A3, В27, В35, В40, в распределении HLA-аллелей класса II различий не наблюдается. Являющиеся характерными для чувашей частоты распределения HLA-антигенов А2, А9, A J 9, В12 сходны с соответствующими значениями у мари (см. тбл. 4) Повышенная по сравнению с европеоидами и монголоидами частот IILA-антигспа В27 у чувашей -оказалась ниже, чем в марийской популяции. Отличающиеся от мари частоты HLA-антигенов A3, В5, В14, В35 и В40 у представителей чувашей сходны со значениями у европеоидов Важной особенностью является сходство частот HLA-аллеля DRB1*01 у чувашей и мари, который в этих популяциях встречается чаще, чем у европеоидов и монголоидов. Таким образом, у чувашей и мари имеются сходные черты распределения HLA-аллелей А2, А9, А19, В12, В27, _DRB1*01, DRBl*09, которые являююя характерными для эшх популяций.

Наглядно продемонстрировать сходство HLA-профиля этих популяций можно и на дендрограмме (рис 1) На основании частот гаплогипов DRB1-DQA1-DQB1 в 19 популяциях [Болдырева М.Н , 2005], проживающих в странах СНГ и на территории европейской части России, а также у представителей чувашей, были рассчитаны генетические расстояния по МНею и построены соответствующие матрицы генетических расстояний На основании этих матриц был проведен кластерный анализ, графически представленный в виде дендрограммы и позволяющий выявить более тонкие различия между популяционными группами Чуваши и мари, образуя одну группу, вошуи в кластер вместе с русскими популяциями, проживающими в северном и северо-западном регионах европейской части России.

Имеющиеся у мари и чувашей сходства в распределении HLA-аллелей А2,

А9, А19, В12 и DRB1*01, можно объяснить, во-первых, результатом влияния

13

Таблица 4.

Сравнение частот некоторых НЬА-аллелей (%) в чувашской популяции с частотами соответствующих аллелей в популяциях мари [Гусева И А., 1998, Болдырева М.Н, 2005], мордвы [Гусева И.А., 1998], европеоидов и монголоидов [Ваиг М.Р., 1984]

11LA- аплсль Чувашская популяция (N=276) Марийская популяция (N=175) Эрзя (п=148) Мокша (п=152) Европеоиды Монголоиды

А2 41.7 42,36 46,62 36,84 49,4 31,95

A3 25.4* 40,97 34,46 23,68 24,7 13,0

А9 30.1 °° 28,47 14,86 26,32 22,0 24,0

А19 14.1 9,03 14,86 14,47 27,1 41,8

В5 12.7* 2,78 15,54 10,53 15,7 4,9

В7 23,6 0 л 17,36 10,14 9,87 21,7 22,7

1312 10.5 11,81 21,62 19,08 23,8 19,0

В14 7,2* 0,69 4,05 4,61 7,3 5,7

В22 9 JOO лл 2,08 0 1,32 5,5 0,6

1327 12.0 ** 26,39 14,19 13,82 6,7 3,8

В35 15,6** 00 31,94 33,78 23,03 19,9 13,7

В40 11,2* 24,31 13,51 7,89 11,5 7,5

DRB1*01 2М1 24,0 нд нд 9,5 5,5

DRB1*09 <ш 11,4 нд нд 0,7 13,0

Примечание: жирным шрифтом выделены частоты тех НЬА-антигенов, в распределении коюрых между чувашами и европеоидами наблюдаются различия, подчеркнутые значения - между чувашами и монголоидами;

* - Ро<0,05, ** - рс<0,01, ■*"*** - рс<0,001 - при сравнении общей чувашской популяции с марийской популяцией;

0 - р„<0,05, 00 - рс<0,01, 000 - рс<0,001 - при сравнении чувашской популяции с мордвой-эрзя,

л - рс<0,05,лл - рс<0,01,ллл - рс<0,001 - при сравнении чувашской популяции с мордвой-мокша, нд - нет данных.

генофонда финно-угорских племен, с которыми происходило смешение тюрко-

язычных предков чувашей, и во-вторых, тем, что частоты этих аллелей сложились

в результате адаптации к условиям данной территории, когда как в чувашской

популяции, так и в марийской накапливались аллели, обеспечивающие лучшее

14

0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 1,2

Рис, 1. Дендрограмма генетических расстояний, рассчитанных на основании частот гаплотипов В И В1 - Э <3 А1 - 0(}В 1 для чувашей и некоторых популяций европейской части России и СНГ [Болдырева М.Н., 2005].

Примечание: БелГ' - белорусы из Гомельской области, БелБ - белорусы из Брестской области, РСм - русские из Смоленской области, БелЗ - белорусы из Витебской области, РМо - русские Москвы, УХм - украинцы из Хмельницкой области, УЛьв - украинцы из Львовской области, Гаг - гагаузы, Арм - армяне, У дм- удмурты, Тат - татары, РСп - русские из Санкт-Петербурга, РВ - русские из Вологодской области, РК - русские из Костромской области, Руд русские из Удмуртии, РАр - русские из Архангельской области, Мар - марийцы, Чу - чуваши, Саа - саамы.

приспособление (например, А9, В27,131181*0!), а также происходило уменьшение числа других аллелей (в данном случае - НЬА-А19, В12), в результате чего и возникло сходство НЬА-профилей популяций,

В пользу второго предположения выступает тот факт, что с финно-угорами ассимилировали только верховые чуваши. Следовательно, влияние марийского

15

генофонда должно сказаться только на этой этнической группе, а у низовых чувашей, прямых потомков суварских племен, должен быть иной набор HLA-аллелей. Однако отсутствие различий в распределении HLA-аллелей между верховыми и низовыми чувашами свидетельствует в пользу отбора определенных аллелей в результате адаптации к условиям среды.

Выявленные иммуногенетические особенности чувашской популяции позволяют ожидать характерное для данной этнической группы своеобразие ассоциаций HLA-аллелсй с параметрами иммунного статуса здоровых лиц, а также возможность выявления отличных от других популяций HLA-маркеров заболеваний.

В результате исследования уровня параметров иммунного статуса в

зависимости от HLA-генотипа обследованных лиц обнаружена связь между

иммунологическими параметрами (ИП) и аллелями HLA, свидетельствующая о

наличии HLA-геисжческой регуляции иммунного статуса В габл 5 представлены

l-ILA-маркеры ИП, выявленные в чувашской популяции. С HLA-аллелями связано

большинство исследованных параметров: содержание ней грофилов, содержание

субпопуляций лимфоцитов (Лф) (CD3, CD8, CD16, CD20, CD25, CD71, HLA DR),

содержание моноцитов, эозинофилов, уровень в сыворотке крови JgG, IgA, IgM и

IgE, а также ЦИК Поскольку повышенные или сниженные уровни исследованных

параметров связаны с наличием конкретных HLA-аллелей в генотипе здоровых

лиц, данные HLA-аллели могут служить маркерами особенностей иммунного

статуса, способствующих или препятствующих развитию иммунного ответа на

антигенное воздействие, маркерами, позволяющими прогнозировать

индивидуальные черты иммунореакгивносги человека, возможные пути ее

нарушений, приводящие к патологии С определенными уровнями ИП связаны не

все тестированные HLA-аллели, а только часть из них (54% HLA-антигенов класса

I и 27% HLA-аллелей класса И), выявленных в общей чувашской популяции (табл.

6) Причем не выявлено корреляции между частотой встречаемости в популяции

HLA-аллелей и количеством ИП, ассоциированных с каждым конкретным HLA-

аллелем Не обнаружено, например, связи ни одного показателя иммунного статуса

с HLA-антигеном А2, наиболее частым среди антигенов I класса в популяции

(41,7%), HLA-B7, наиболее частым в локусе В (23,6%), а также с наиболее

частотными в популяции HLA-аллелями II класса DRB1*01 (20,5%) и DQA1*0101

(22,4%) Не обнаружено связи ни одного показателя иммунного статуса с аллелями

16

Таблица 5.

НЬА-аллели, связанные со сходными параметрами иммунного статуса в

чувашской популяции

Параметры HLA-аллель

Нейтрофилы ¿B21,1DRB1*15

Фагоцитоз fA9, ¿DQA1*0103

Эозинофилы tB40, J.B53

Моноциты ¿A19, |B16

CD3 ÍB5

CD8 J.B14

CD4/CD8 |B14

CD16 ÍDRB1*07,1'DRBl*^

CD20 |А9, TA19

CD25 ÍA10, fDRBl *12, TDQA1*0501

CD71 JB16

HLADR J.A11, J.B18

IgA fB41

IgG |B21,¿B42, |DQA1*0501

IgM ¿B2I, ¿DQAI*0103

IgE ¿BIS, джвтз

ЦИК |DRB 1 *04

Примечание. | - сниженный и | - повышенный уровень исследуемого параметра, маркируемый данным аллелем.

НЬА-Б(ЗВ1. В то же время НЬА-аллели, встречающиеся в популяции со средней частотой или частотой ниже средней (В14, В16, В21, 0(ЗА1*0103), связаны с несколькими ИП В большинстве случаев (73%) в связях с ИП участвуют НЬА-аллели, входящие в НЬА-гаплотипы, характерные для чувашской популяции, что свидетельствует в пользу существования эволюционно сложившихся особенностей генетического контроля функций иммунитета, свойственных обследованной популяции

Характерные для чувашской популяции НЬА-контролируемые особенности

иммунного статуса могут обеспечивать предрасположенность или устойчивость к

возникновению болезней, в основе которых лежат иммунные нарушения (к их

числу относится и ХОБЛ). Учитывая это обстоятельство, были проведены

исследования связи НЬА-аллелей с ХОБЛ Необходимость выявления НЬА-

маркеров этого заболевания вызвана тем, что в настоящее время в связи с широким

17

Таблица 6

Суммарные данные о связи НЬА-аллелей с исследованными параметрами

иммунного статуса в чувашской популяции

НЬА-аллель Параметр А Р Р/А

А9 ТСБ20,%, ТФ,% 30,1 10,5 0,35

А10 ТСБ25,% 18,8 5,3 0,28

АН 1НЬА ОЛ,% 13,8 5,3 0,38

А19 |мон,%, ТС020,% 14,1 10,5 0,74

В5 тсоз,% 12,7 5,3 0,42

В14 1СБ8,%, ГСБ4/ СБ8 7,2 10,5 1,46

В15 ИВЕ 14,5 5,3 0,37

В16 Тмон,%, |С071,% 11,6 10,5 0,91

В18 ¿НЬА-БК, % 5,8 5,3 0,91

В21 1нф,%а18о, цйм 7,6 15,8 2,08

В40 Тэф,% 11,2 5,3 0,47

В41 ША 2,5 5,3 2,12

В42 ¿160 . У 5,3 4,81

В53 |эф,% 2,2 5,3 2,41

ОЯВ1*04 тцик 10,9 5,3 0,49

шт1*07 ТС016,% 9,0 5,3 0,59

БИВ 1*12 ТС025,% 5,1 5,3 1,04

ОПВ1*13 шв 10,3 5,3 0,51

ОШП*15 |нф,% 10,3 5,3 0,51

Б1Ш1*1б ГС016% 3,2 5,3 1,65

ООА1*ОЮЗ ИйМ, |Ф,% 7,1 10,5 1,48

ЭОА 1*0501 ТС025,%, |1йО 27,6 10,5 0,38

Примечание1 А - частота НЬА-аллсля в популяции (%), Р - часть параметров (%), связанных с данным НЬА-аллелем, от общего количества исследованных параметров (19), | - сниженный и | - повышенный уровень исследуемого параметра; нф - нейтрофилы, Ф - фагоцитоз, мон - моноциты, эф - эозинофилы, абс - абсолютное и % - процентное содержание указанных параметров.

развитием промышленности, в том числе и химической, возрастает число случаев

профессиональных заболеваний легких, возникающих у лиц, занятых на

производстве В данном случае поиск иммуногенетических маркеров

предрасположенности к заболеванию, способствует выявлению лиц с повышенным

риском развития профессиональной патологии, что имеет первостепенное

значение для профессионального отбора Особенность проведенных исследований

состоит в том, что изучена связь НЬА-аллелей с развитием ХОБЛ, возникающей в

результате профессионального контакта у лиц, занятых в химическом

18

производстве, а также в том, что в качестве контроля использовалась группа лиц, резистентных к заболеванию, несмотря на длительный срок контакта с множественными сенсибилизирующими агентами.

Изучение особенностей распределения аллелей класса I и II в группах больных ХОБЛ, резистентных к данному заболеванию лиц и здоровых чувашей показало наличие значительных отличий в частотах аллелей DRB1, DQA1 и DQB1 у больных ХОБЛ и здоровых индивидуумов В группе больных ХОБЛ огмечено достоверное увеличение частот аллелей DRB1*11 и DQB 1*0301. Значения показателей относительного риска для аллелей DRB1*U (RR=5,94, рс=0,0165) и DQB 1*0301 (RR=7,52; рс=0,0033) повышено, что свидетельствует о наличии положительных ассоциаций ХОБЛ с указанными аллелями и позволяет рассматривать их в качестве маркеров этого заболевания. Риск развития болезни при наличии в генотипе IiLA-аллеля DRB1*11 в 6 раз выше, чем при его отсутствии Для HLA-аплеля DQB 1*0301 это соотношение равно 7,5. В группе больных ХОБЛ не обнаружено ни одною индивидуума, в геношпе которого содержался xoni бы один из аллелей DRB1*01, DQA1*0101 и DQB1*0501. Значение показателя относительного риска для этих аллелей были минимальными и достоверными (RR=0,022, рс=0,0001 - для DRB1*01, RR=0,021, рсЧ),0001 -для аллеля DQA1*0101 и RR=0,021, рс=0,0001 - для аллеля DQB1*0501). Рсцинрокпые значения ошосительного риска (1/RR) равны 45,5 у аллеля DRB1*01, 47,6 - у DQA1*0101 и 47,6 - у DQB1*0501. Рсципрокныс значения показываю), во сколько раз риск развития заболевания меньше у индивидуумов при наличии в геношпе конкретного аллеля, чем при его 01су1с1вии У лиц, имеющих в своем rcnoiHiic HLA-аллель DRB1*01, вероятность заболеть ХОБЛ в 45,5 раз меньше, чем у лиц без данного аллеля Для аллелей DQA1*0101 и DQB1 *0501 эти значения равны 47,6 Рассчитанные показатели свидетельствует о выраженной негативной ассоциации указанных аллелей с ХОБЛ и позволяет считать их маркерами высокой резистентности к этому заболеванию.

Выделение группы резистентных позволило выявить еще один маркер устойчивости к заболеванию - HLA-DQB 1*0502-04 (RR=18,75; ре=0,0066 в сравнении с общей популяцией). Риск развития ХОБЛ при наличии в генотипе этого аллеля в 19 раз меньше, чем при его отсутствии.

Отсутствие ассоциации с заболеванием у HLA-антигенов класса I и высокий

уровень ассоциации заболевания с HLA-аллелями класса И согласуется с

19

Таблица 7

Показатели иммунного статуса у больных ХОБЛ и здоровых чувашей

Иммунологический | Больные Здоровые

показатель (п=31) чуваши (п=175)

Лейкоциты, абс. 5800,0±274,6 5264,4±131,4

НейтрофилЫ, % 56,7±1,34 57,8±0,6

Нейтрофилы, абс. 3326,1±205,2 3077,0±89,5

Лимфоциты, % 34,6±1,33 36,2±0,59

Лимфоциты, абс. 1973,9±107,3 1903,0±55,7

Моноциты, % 3,8±0,31 3,2±0,15

Эозинофилы, % 4,9±0,53*** 2,7±0,15

CD3, % 42,5±1,69*'1'* 59,9±0,54

CD3, абс. 835,5±58,2*** 1167,2±38,3

CD4, % 36,4±0,47

CD4, абс 699,3±22,4

CD8, % 21,5±1,26*** 25,2±0,34

CD8, абс. 429,7±3 8,62 493,3±17,77

CD4/CD8 t.l^o.o?*** 1,5±0,03

CD16, % 16,2±1,46 18,9±0,58

CD 16, абс. 322,7±3б,1 371,9±18,5

CD20, % 14,9±0,77 13,3±0,46

CD20, абс 29б,1±25,2 257,7±12,1

CD25, % 4,1±0,17*** 5,7±0,16

CD25, абс 78,3±5,2*** 117,6±8,4

CD71, % 3,8±0,17*** 5,5±0,20

CD71, абс. 72,5±4,2 *** 115,3±8,3

CD95, % 19,9±1,24 18,5±1,77

CD95, абс. 367,5±26,8 369,5±37,2

HLA DR, % 17,6±0,75 19,6±0,93

HLA DR, абс. 342,9±30,2 443,7±60,4

IgG.r/л 14,1±0,58* 12,7±0,29

Ig А, г/л 3,5±0,32*** 2,4±0,09

Ig М, г/л 1,1±0,42

IgE, МЕ/мл 277,0±69,6*** 69,5±15,29

Фагоцитарный индекс 50,7± 1,52 53,6±0,81

ЦИК 18,1±1,97 15,5±0,90

Примечание. % - процентное и абс - абсолютное содержание иммунологических показателей, * - р<0,05, ** - р<0,01, *** - р<0,001 - при сравнении больных лиц со здоровыми чувашами.

современными представлениями о важной роли НЬА-аллелей DRB1, DQA1 и DQB1 в развитии заболеваний с иммунными нарушениями. Выявленные маркеры предрасположенности к заболеванию свидетельствуют о существовании генетических факторов, сцепленных с HLA-аллелями DRB1*11 и DQB1*0301, контролирующими предрасположенность к ХОБЛ.

Предположив в качестве механизма реализации НЬА-ассоциированной предрасположенности к ХОБЛ наличие НЬА-контролируемых особенностей иммунного статуса, нами проведено исследование связи НЬА-маркеров заболевания с иммунологическими показателями у больных в фазе ремиссии Необходимо отмегить, что у больных ХОБЛ выявлены опхичия ряда ИП в сравнении со здоровыми донорами (табл. 7). Так, у них снижено содержание CD3, CD4 и CD8 Лф, a iaioicc выявляется снижение иммунорегулягорного индекса CD4/CD8. Кроме этого снижено содержание субпопуляций Лф, несущих различные амивациоплыс маркеры (CD25, CD71 Лф) В свою очередь, повышены содержание зозипофилов и уровни IgG, IgA, IgM и IgE

На фоне имеющихся особенностей иммунного аатуса у больных ХОБЛ уровни ряда показателей связаны с наличием в их генотипе НЬА-маркеров заболевания Установлено (см табл 8), что у больных, имеющих в НЬА-генотипе характерные для чувашской популяции HLA-маркеры предрасположенноеiи к заболеванию - DRB1*11 и DQBP0301, количесшо общей популяции Лф, их субпопуляций (CD3, CD4, CD8) и Лф, несущих рецепторы к ИЛ-2 (CD25), снижено, в то время как уровни IgM, IgA и ЦИК повышены по сравнению с больными без этих НЬА-аллелей.

Полученные данные свидетельствуют, что НЬА-сцепленные гены предрасположенности к ХОБЛ могут проявлять свое действие на уровне контроля

Таблица 8

Суммарные данные о связи НЬА-маркеров предрасположенности к ХОБЛ с исследованными параметрами иммунного статуса

НЬА-маркер Иммунологические показатели

DRB1*11 |CD3,%, |CD4,%, |CD8,%, |CD25,%, |IgM, TIgA, |ЦИК

DQB1*0301 |лф,%, J.CD8,0/«, |ЦИК

Примечания | - сниженный и | - повышенный уровень исследованного параметра,

маркируемый НЬА-аллелем; % - процентное содержание исследуемого параметра.

21

содержания в периферической крови CD3, CD4, CD8, CD25 Лф, а также уровня IgM, IgA и ЦИК. HLA-маркеры предрасположенности к ХОБЛ идентичны HLA-сцепленным генетическим факторам, контролирующим особенности иммунного статуса больных, и, следовательно, являются маркерами патогенетически важных параметров иммунного статуса больных.

Пример ХОБЛ показал, что HLA-сцепленный генетический контроль иммунного стагуса играет важную роль в реализации предрасположенности к заболеванию и что генетически контролируемые особенносги иммунного статуса, сцепленные с HLA-маркерами ХОБЛ, способствуют накоплению в популяции больных данных HLA-аллелей

ВЫВОДЫ

1. Охарактеризован HLA-генстичсский профиль здоровой чувашской популяции, а также больных хронической обегруктивиой болезнью легких и лиц, резистентных к заболеванию.

2. HLA-профиль чувашской популяции имеет выраженное сходство с HLA-профилсм европеоидных популяций, наряду с этим имеются национальные особенносги, заключающиеся в повышенной частоте HLA-аллелей А9, В27, DRBrOl, DRB1*09, DQA1*0101, DQB 1*0303, DQB 1*0501 и более низкой частоте HLA-аллелей А19, В12 и DQB 1*0301.

3 Этнические группы верховых, низовых и средненизовых чувашей по HLA-профилю не отличаются друг от друга.

4 Частоты HLA-аллелей А2, А9, А19, В12, В27, DRB1*01, DRB1*09 в чувашской популяции имеют сходство с частотами этих аллелей в марийской популяции.

5. Большинство исследованных иммунологических параметров связано с HLA-генотипом здоровых лиц

6 HLA-маркерами особенностей иммунного статуса являются HLA-аллели, входящие в гаплогипы, свойственные популяции.

7. Маркерами предрасположенности к ХОБЛ являются HLA-аллели DRB1*11 и DQB1*0301, маркерами резистентности к заболеванию являются HLA-аллели DRB1*01, DQA1*0101, DQB1*0501 и DQBl*0502-04

8. Маркеры предрасположенности к ХОБЛ связаны с патогенетически важными

особенностями иммунного статуса больных.

22

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I Иванов JIН , Борисова Л.В., Яздовский В.В., Карзакова Л.М, Распределение HLA-антигенов I класса в чувашской популяции. Материалы 2-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». М. ВИНИТИ, 1998, с 609.

2. Иванов Л.Н, Ванькина H.H., Карзакова Л.М, Александров Л.А., Тутканов Н.В , Борисова Л В., Мучукова О.М. Особенности иммунного статуса у жителей экологически неблагоприятных территорий Чувашской Республики Материалы 2-го Конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». М. ВИНИТИ, 1998, с. 232.

3. Мусалимова Г Г., Петров В П., Борисова Л.В., Карзакова Л М, Особенности распределения антигенов гистосовместимости I класса в чувашской популяции Материалы научно-пракгичсской конференции врачей-интернов «Актуальные проблемы в клинике внутренних болезней». Чебоксары, 1998, с. 38.

4. Карзакова Л.М,, Борисова Л.В., Ванькина H.H., Мучукова ОМ. Особенности распределения антигенов системы гистосовмесшмости первого класса в популяциях верховых и низовых чувашей. Материалы научно-практической конференции «Иммунодефицишые состояния в клинике внутренних болезней» Чебоксары, 1999, с.37-38.

5 Карзакова Л М, Ванькина Н Н., Борисова Л.В Изучение иммунного.статуса населения, проживающего в промышленно населенной зоне Чувашии Материалы научно-практической конференции «Иммунодефицитные сосшяния в клинике внутренних болезней». Чебоксары, 1999, с 38.

6. Мусалимова Г.Г, Борисова Л В , Карзакова Л.М Изучение HLA-профиля в чувашской популяции. Аллергология и иммунология, 2001,т.2, №2, с. 111.

7 Карзакова Л М, Борисова Л В , Мучукова О. М Особенности иммунного статуса жителей Чувашии как результат влияния эколого-биогеохимических факторов Russian Journal of Immunology, 2004, v. 9, p. 201.

8 Борисова Л В., Геранюшкина Е И., Иванов Л Н Иммунный статус населения зоны техногенного экологического неблагополучия Материалы 2-ой международной конференции «Патофизиология и современная медицина» Москва, изд-во РУДН, 2004, с.508.

9. Борисова Л В , Карзакова Л.М., Яздовский В В. HLA - профиль чувашской популяции. Материалы научно-практической конференции «Столичное здравоохранение 2004». Чебоксары, 2004, с 15-16

10 Борисова Л В. Иммуногенетический анализ распределения антигенов HLA - А, В локусов в чувашской популяции. Материалы научно-практической конференции «Столичное здравоохранение 2004». Чебоксары, 2004, с 16-19.

II Борисова Л В., Яздовский В.В HLA-генетический профиль верховых и низовых чувашей. Сборник научных трудов «Современные технологии в

23

медицине». Чебоксары, 2005, с.40-41.

12 Борисова JI.B., Яздовский В.В Связь HLA-генотипа с параметрами иммунного статуса у больных чувашской национальности, страдающих хроническим астматическим бронхитом. Здравоохранение Башкортостана, 2005, №7, с.44-46.

13 Борисова Л В., Яздовский В.В. Иммуногенетические маркеры профессионального риска развития хронического астматического бронхита у лиц чувашской национальности Материалы I Международного Конгресса «Иммунитет и болезни1 от теории к терапии». J of the Association of pédiatrie allergists and immunologists of Russia, 2005, vol. 6, suppl 1, M-6, p 87

14. Борисова Л В., Яздовский В.В. Иммуногенетическая характеристика чувашской популяции Здравоохранение Чувашии, 2006, №1, с.43-49.

15. Борисова ЛВ, Яздовский ВВ, Мучукова ОМ Иммуногенетические маркеры профессионального риска развития хронического астматического бронхи га у лиц чувашской национальности, занятых в химическом производстве. Иммунология, 2006, № 1, с 31-33.

16 Борисова Л.В, Яздовский В.В. Изучение связи HLA-специфичносгей с иммунологическими параметрами у больных ХОБЛ и резистентных лиц в чувашской популяции. Материалы научно-практической конференции «Современные лабораторные технологии - в практику здравоохранения». Чебоксары, 2006, с.47-48

17. Борисова Л.В Использование ПЦР-метода в изучении распределения HLA-аллелей класса II в чувашской популяции. Материалы научно-практической конференции «Современные лабораторные технологии - в практику здравоохранения». Чебоксары, 2006, с 23-27

18 Борисова Л.В, Яздовский В.В., Мучукова О.М. Иммуногенетический анализ распределения HLA-специфичностей у чувашей. Аллергология и иммунология, 2006, том 7, № 3, с.252-253.

19. Борисова Л.В., Яздовский В.В. HLA-маркеры хронической обструктивной болезни легких у лиц чувашской национальности. Материалы межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы пульмонологии». Чебоксары, 2007, с.23

20 Борисова ЛВ, Яздовский В.В Иммуногенетические особенности чувашской популяции Российский аллергологический журнал, 2007, №3, с 8.

21. Борисова Л.В., Яздовский В В. Связь иммуногенетических маркеров предрасположенности к хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) с показателями иммунного статуса у лиц чувашской национальности. Материалы И Международного Конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к терапии». J. of the Association of pédiatrie allergists and immunologists of Russia, 2007, vol 11, suppl. 2, p. 10.

Подписано в печать 28 04 2008 Формат 60x84/16 Печагь оперативная Гарнитура «Times» Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №51. Отпечатано в типографии Чувашского госуниверситета 428015 Чебоксары, Московский пр, 15

Актуальность темы. Главный комплекс гистосовместимости человека, система HLA (от Human Leucocyte Antigen), является одной из наиболее полиморфных генетических систем организма, важнейшими функциями которого являются генетический контроль иммунного ответа и поддержание иммунологического гомеостаза, нарушение которого лежит в основе многих патологических процессов [3, 40, 42].

Полиморфизм HLA-системы широко используется в популяционных исследованиях для изучения иммуногенетического профиля популяций, что служит основой для дальнейшего использования полученных данных в трансплантологии, в антропологических исследованиях и для выявления характерных для популяции HLA-маркеров предрасположенности и резистентности к различным заболеваниям. На фоне многих уже изученных в иммуногенетическом плане популяций, проживающих на территории России, Чувашия до сих пор остается «белым неисследованным пятном».

На сегодня выявлены HLA-маркеры многих заболеваний с иммунными нарушениями, при некоторых болезнях полученные данные приобрели практическое значение в плане диагностики и прогноза течения [8, 21]. Одним из заболеваний с иммунными нарушениями является хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), представляющая собой важную медицинскую и социально-экономическую проблему [4]. Значительная роль в развитии ХОБЛ принадлежит генетическим факторам. Установление HLA-маркеров предрасположенности к заболеванию в чувашской популяции имеет большое значение для выявления лиц, входящих в группу повышенного риска развития болезни, а также для выяснения генетически обусловленных механизмов патогенеза заболевания.

В этом отношении представляет интерес установление связи HLA-аллелей с иммунологическими параметрами (ИП) в здоровой чувашской популяции, а также выявление HLA-маркеров патогенетически важных особенностей иммунного статуса у больных ХОБЛ.

Вышесказанное определило цель и задачи исследования.

Цель работы. Изучить особенности HLA-генетического профиля здоровой чувашской популяции, а также больных хронической обструктивной болезнью легких и лиц, резистентных к заболеванию.

Задачи исследования.

1. Изучить особенности распределения HLA-аллелей классов I и II (локусы А, В, DRB1, DQA1 и DQB1) у здоровых лиц чувашской национальности, принадлежащих к различным этническим группам (верховые, низовые и средненизовые чуваши), у больных ХОБЛ и лиц, резистентных к заболеванию.

2. Исследовать параметры иммунного статуса и их связь с HLA-аллелями в чувашской популяции.

3. Провести исследование связи HLA-аллелей с ХОБЛ. Исследовать иммунологические параметры у больных с ХОБЛ и их связь с HLA-генотипом.

Научная новизна. Впервые детально изучено распределение HLA-аллелей в чувашской популяции. HLA-профиль чувашей имеет сходство с европеоидами как по характеру распределения аллелей, так и по особенностям неравновесного сцепления генов, составляющих гаплотипы, однако наряду с этим имеются характерные для популяции черты.

Установлена и охарактеризована связь иммунологических параметров с HLA-генотипом здоровых представителей чувашской национальности.

Впервые идентифицированы маркеры предрасположенности к ХОБЛ -аллели DRB1*11 и DQB 1*0301 и маркеры резистентности - аллели DRB1*01, DQA1*0101, DQB1*0501 и *0502-04.

Впервые выявлена связь HLA-маркеров предрасположенности к ХОБЛ DRB1*11 и DQB1*0301 с рядом патогенетически важных параметров иммунного статуса (сниженное содержание в периферической крови CD3,

CD4, CD8, CD25 субпопуляций Лф и повышенный уровень IgM, IgA, ЦИК), что может свидетельствовать об участии в патогенезе заболевания HLA-сцепленного генетического контроля иммунного статуса.

Научно-практическое значение. Детально исследованный HLA-генетический профиль чувашской популяции может использоваться в популяционно-генетических исследованиях для изучения ее происхождения и эволюции, а также служить основой для изучения характерных для популяции связей HLA с заболеваниями.

Выявленные HLA-маркеры предрасположенности и резистентности к возникновению ХОБЛ у лиц, занятых в химическом производстве, могут служить одним из критериев профессионального отбора, а также для ранней диагностики и прогнозирования течения ХОБЛ.

Результаты исследования частот аллелей HLA класса II представлены в таблице 3.4.2. Число обследованных составило 30 человек. В локусе DRB1 с наибольшей частотой встречаются аллели HLA-DRB 1*01 (23,33%), что превышает соответствующие значения в других популяциях. Реже встречаются аллели HLA-DRB 1*13 (13,33%), HLA-DRB 1*17 (11,67%), их частоты сходны со значениями в большинстве европеоидных популяций. Частота аллеля HLA-DRB 1*12 (05) (10,0%) приближается к значениям частоты этого аллеля в монголоидных популяциях [19]. Аллели HLA-DRB1*04 (8,33%) и HLA-DRB 1*15 (5,0%) в популяции средненизовых чувашей встречаются реже, чем в большинстве остальных популяций. Остальные HLA-DRB 1 аллели у средненизовых чувашей встречаются с частотами, сходными со значениями в европеоидных популяциях. Самыми распространенными среди аллелей HLA-DQA1 локуса являются аллели HLA-DQA1*0501 (30,0%) и *0101 (26,67%). С меньшей частотой встречаются аллели HLA-DQA1*0102 и *0301 (по 13,33%). Аллель HLA-DQA 1*0601 в популяции не обнаружен. Частота аллеля HLA-DQA1 *0101 у представителей средненизовых чувашей выше, чем в других популяциях, и в 2 раза превышает частоту HLA-DQA1*0102, тогда как в большинстве европеоидных популяций - наоборот. Остальные аллели локуса DQA1 встречаются в обследованной популяции с той же частотой, что и в большинстве европеоидных популяций [6, 19].

В локусе DQB1 чаще других встречаются аллели HLA-DQB1*0501 (23,23%), частота которого превышает значения в большинстве других популяций, и HLA-DQB 1*0301 (21,67%). Реже встречаются HLA

HLA-аллель Частота гена (%) HLA-аллель Частота гена(%) HLA-аллель Частота гена (%)

DRB1*01 23,33 DQA1*0101 26,67 DQB 1*0201 15,00

DRB 1*04 8,33 DQA1*0102 13,33 DQB1*0301 13,33

DRB 1*07 6,67 DQA1*0103 8,33 DQB 1*0302 5,00

DRB 1*08 1,67 DQA 1*0201 6,67 DQB 1*0303 16,67

DRB 1*09 5,00 DQA1*0301 13,33 DQB 1*0304 0,0

DRB1*10 0,0 DQA1*0401 1,67 DQB 1*0305 0,0

DRB 1*11 6,67 DQA1*0501 30,00 DQB 1*0401-02 1,67

DRB 1*12 10,00 DQA1*0601 0,0 DQB1*0501 23,33

DRB1*13 13,33 DQB 1*0502-04 8,33

DRB 1*14 3,33 DQB 1*0601 0,0

DRB 1*15 5,00 DQB 1*0602-08 16,67

DRB1*16 5,00

DRB 1*17 11,67

DRB 1*18 0,0 аллели DQBl*0602-08 (16,67%) и DQB1*0201 (15,00%). С меньшей частотой обнаруживаются HLA-DQB 1*0303 и HLA-DQB 1*0502-04 (по 8,33%) и HLA-DQB 1*0302 (5,00%). В обследованной популяции, как и в других популяциях мира, HLA-аллель DQB 1*0301 значительно преобладает над аллелем *0302.Распределение большинства HLA-аллелей локуса DQB1 имеет сходство с европеоидами [18]. HLA-аллели DQB 1*0304, DQB 1*0305 и DQB 1*0601 в популяции средненизовых чувашей не выявлены.

Дополнительную информацию о популяционных особенностях средненизовых чувашей дают сведения о частотах гаплотипов. В данной этнической группе имеются гаплотипы, характерные для европеоидов —

HLA-A3-B7, A3-B35, Al-DRB 1*17(03) и В15-DRB 1*13(06), а также гаплотипы, составленные парами аллелей HLA-DRB 1-DQA1, HLA-DRB 1-DQB1 и HLA-DQA1-DQB1, что является свидетельством сходства HLA-генетического профиля чувашской популяции с европеоидной. Остальные HLA-гаплотипы, составленные аллелями локусов А-В, A-DRB1, A-DQA1, А-DQB1, B-DRB1, B-DQA1 и B-DQB1, у которых величина неравновесного сцепления имеет статистически значимое (р<0,05) положительное значение, являются характерными только для данной популяции.

3.5. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПОПУЛЯЦИЙ ВЕРХОВЫХ, НИЗОВЫХ И СРЕДНЕНИЗОВЫХ ЧУВАШЕЙ.

В таблице 3.5.1 представлен сравнительный анализ распределения HLA-антигенов класса I среди различных этнических групп в чувашской популяции. Так, HLA-антиген А9 в группе верховых чувашей встречается чаще, чем у низовых (р=0,0400) и средненизовых (р=0,0445) чувашей. Частота встречаемости HLA-антигена В5 у верховых чувашей ниже, чем в других группах (р=0,0342 при сравнении с популяцией средненизовых чувашей). Частота антигена HLA-B12 также ниже по сравнению частотой этого антигена у низовых (р=0,0359) и средненизовых (р=0,0484) чувашей. HLA-антиген В17 у верховых чувашей встречается реже, чем в других этнических группах чувашей (р=0,0359 при сравнении с группой низовых чувашей).

В группе низовых чувашей также имеются отличия от других этнических групп: частота встречаемости антигена HLA-B8 выше, чем в других группах (р=0,0323 при сравнении со средненизовыми чувашами), HLA-антиген В18 встречается реже, чем в других этнических группах (р=0,0480 при сравнении с группой средненизовых чувашей), так же как и HLA-антиген В22, частота встречаемости которого у низовых чувашей ниже, чем у средненизовых (р=0,0357).