Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Сравнительное изучение уровней иммуноглобулинов и иммунорегуляторных белков при лимфогранулематозе и неходжкинских злокачественных лимфомах

На правах рукописи

Р Г Б ОД

1 6 ДВГ 1399

Архипова Светлана Викторовна

Сравнительное изучение уровней иммуноглобулинов и иммунорегуляторных

белков при лимфогранулематозе и неходжкинских злокачественных лимфомах

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск -1999

Работа выполнена в Новокузнецком государственном ордена Трудового Красного Знамени институте усовершенствования врачей МЗ РФ

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Н.А. Зорин

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук доктор медицинских паук

К.В. Гандуль А.Н. Глушков

Ведущая организация:

Российский государственный медицинский университет

Защита состоится «

1999 г. в

часов на за-

седании Диссертационного совета Д001.01.01 Института клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630091, Новосибирск, ул. Ядринцовская, 14

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН.

Автореферат разослан "_

1999 г.

Р б (о 9 V ^ .Мии^^а) -

'/Г, о

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

О.Т.Кудаева

»

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Процессы пролиферации и дифференци-ровки лпмфоидных клеток являются основными механизмами функционирования иммунной системы. Эволюциошю сложившаяся многоуровневая система иммунорегуляции контролирует интенсивность этих процессов, удерживая их в рамках физиологических норм. Нарушения механизмов регуляции иммуногенеза приводят к развито различных иммунопатологических состояний, в том числе злокачественных иммунопролиферативных заболеваний. В настоящее время взаимосвязь между иммунодефищггами на уровне регуляторных звеньев и возникновением в организме человека опухолей иммунной системы считается общепризнанной и имеет ряд убедительных доказательств (Симбир-цева Л.П., Холсти Л.,1985; Колыши Б.А.,1990; Йегер Л., 1990; Кирзон С.С. с соавт.,1993). Вероятность возникновения лимфом повышается при наследственных и приобретенных иммунодефицитах, аутоиммунных заболеваниях. У реципиентов с трансплантированными органами риск возникновения лимфом увеличивается в 60-100 раз, причем подчеркивается их крайняя резистентность к химиотерапии (Чиссов В.И.,1989).

За последгше 50 лет отмечается четко выраженная тенденция к увеличению заболеваемости лимфомами во всех странах мира и, особенно, за счет агрессивных форм. На территории России наиболее неблагоприятным регионом считается Кемеровская область, что, очевидно, связано с высоким уровнем комбинированных техногенных загрязнений, создающих экстремальные условия для проживания населения (Аксель Е.М., Двойрив В.В., Трапезников H.H., 1993; 1994; Трапезников H.H., Поддубная И.В., 1996).

Несмотря на активные исследования в области иммунопатологии лимфом, в том числе гуморального звена иммунитета при этих заболеваниях, данные об антителогенезе и его изменениях в процессе медикаментозного лечения малочисленны и противоречивы. Не оценена возможность использования концентраций сывороточных иммуноглобулинов в качестве показателей течения заболевания и возможных критериев эффективности противоопухолевого

лечения. Решение этого вопроса позволило бы рекомендовать относительно простые методы лабораторной иммунодиагностики для клиншеской практики.

Изучение механизмов, обеспечивающих естественную регуляцию активности клеток иммунной системы в норме, а также имеющих место в условиях наличия и роста злокачественных опухолей иммунной системы, имеет огромное значение для поиска путей и средств целенаправленной коррекции нарушений иммунитета, как при указанных типах опухолей, так и при опухолях нелимфоидной природы. По мнению некоторых исследователей, в формировании взаимоотношений между растущей опухолью и организмом принимают участие различные звенья иммунитета, в том числе белки, обладающие имму-норегуляторными свойствами (Зорин H.A. с соавт., 1993; Мингалев Н.В. с со-авт., 1993; Bischof Р. ,1987; Biclawiec М., Lioczko J., GalarM.,1990;MaltsevaN.V. е.а., 1996). К таким белкам относятся представители семейства макроглобулинов, лактоферрин, а-фстопротеин, хориошгаеский гонадотропин и др., функции которых при лимфогранулематозе (ЛГМ) инеходжкинских злокачественных лимфомах (H3JI) практически не изучались. Изучение этих белков перспективно также с точки зрения их возможного использования в качестве неспецифических опухолевых маркеров, так как до настоящего времени специфические маркеры лимфом неизвестны. Использование широкого спектра опухолевых маркеров считается одним из приоритетных направлений развития иммунодиагностики опухолей (Seifert G., Coselitz J., 1989). Доказана целесообразность применения многочисленных циркуляторных опухолевых маркеров для скрининга и диагностики различных злокачественных заболеваний, а также прогноза, мониторинга течения заболевания / эффективности лечения и раннего выявления рецидивов (Manna А. е.а.,1993; Molina R. е.а., 1993; Pectasides D. е.а., 1993; Tsavaris N. е.а., 1993; Lamerz R., 1998). Данные об использовании опухолевых маркеров при ЛГМ и H3JI малочисленны. Исключением являются проведенные работы по исследованию онко-фетального маркера CA-125 при НЗЛ (Ravoet С. е. а., 1995; Ferm Т. е. а.. 1998) и некоторых белков-металлопереносчиков при ЛГМ (Сухарев А.Е, Николаев A.A., Васильев М.Ю., 1990; Gupta R. е.а., 1989; Hann H.W.L.. е.а.,1990). Изучение пммуно-

регуляторных белков семейства макроглобулшюв, лактоферрина. сх-фетопро-теипа, хорионического гонадотропина как опухолевых маркеров пригодных для дифференциальной диагностики и мониторинга лимфом различных типов, а также для оценки эффективности медикаментозного лечения может иметь важное практическое значение.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы явилось сравнительное изучение факторов гуморального иммунитета и некоторых иммунорегуляторных белков у больных ЛГМ и НЗЛ и обоснование возможности использования этих показателей для диагностики и мониторинга течения лимфом различных типов.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Определить и сопоставить содержание иммуноглобулинов основных классов в сыворотках периферической крови пациентов с ЛГМ и НЗЛ до лечения и на фоне полихимиотерапии.

2. Выявить и проанализировать изменение сывороточных концентраций иммунорегуляторных белков семейства макроглобулшюв, лакгоферрина (ЛФ). а-фетопротеина (АФП) и хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) при ходжкинских и неходжкинских лимфомах по сравнению с нормальными значениями.

3. Изучить возможные взаимосвязи между сывороточными иммуноглобулинами и иммунорегуляторными белками семейства макрошобулинов и лак-тоферрином для установления общих характеристик и различий между указанными заболеваниями.

4. Установить информативность изученных иммунорегуляторных белков в качестве возможных маркеров лимфом различных типов.

5. Разработать критерии практического использоватш изученных показателей для уточняющей диагностики и прогнозирования течения ЛГМ и НЗЛ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. В настоящей работе впервые получены данные об изменении сывороточных уровней иммунорегуляторкых белков, указывающих на их участие в патогенезе заболеваний. При ходжкинских и неход-жкинских лимфомах впервые изучено содержание ассощшрованных с беременностью а2-пликопротеина (АБГ) и протеина А (АБПА), а также соотношение концентраций всех трех иммунорегуляторных белков семейства макроглобулинов, являющихся структурными и функциональными гомологами. Установлено, что при прогрессироваюш и регрессии ходжкинских и неходжкинс-ких лимфом концентрации а,-макроглобулина (МГ) и АБПА на фоне лечения изменяются различным образом. В сыворотках периферической крови больных ЛГМ и НЗЛ проведен одновременный анализ содержания иммуноглобулинов основных классов и белков семейства макроглобулинов и лакгоферрина (ЛФ), обладающих иммунорегуляторными свойствами в отношении гуморального звена иммунитета. Выявлена прямая корреляционная взаимосвязь между содержанием МГ и концентрациями сывороточных иммуноглобулинов при ЛГМ, которая наиболее выражена для Установлено, что прогрессировать лимфом, независимо от их типов, ассоциировано с повышением сывороточного содержания иммуноглобулинов классов в и А у большинства пациентов. При изучении содержания лактоферрина в сыворотке периферической крови больных ЛГМ и НЗЛ обнаружено, что наличие злокачественного лим-фопролиферативного процесса в организме сопровождается более значительным повышением концентраций этого иммунорегушггорного белка, чем было известно ранее. Установлено, что эффективное медикаментозное лечение ЛГМ и НЗЛ однотипно приводит к снижению содержания ЛФ, тогда как при про-грессировании указанных опухолей его концентрации в сыворотке крови больных нарастают. На основании полученных результатов изучения АФП и ХГЧ впервые показано, что сывороточные уровни АФП выше при лимфоме Ходж-кина, а ХГЧ - при неходжкинских лимфомах по сравнению с показателями здоровых лиц. Зависимость концентраций этих иммунорегуляторных белков от эффективности противоопухолевой лекарственной терапии отмечена только при НЗЛ.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Предложенный комплекс изученных показателей гуморального иммунитета и иммунорегулятор-ных белков, ассоциированных с лнмфомами, может быть использован в качестве возможного дополнительного критерия дифференциальной диагностики ходжкинских и неходжкинских злокачественных лимфом, а также как показатель эффективности проводимого лечения. Наибольшей диагностической и прогностической информативностью при лимфомах, независимо от их тина, обладает ЛФ, определение которого в клинической практике может проводиться как однократно, так и в динамике для выявления возможных рецидивов заболеваний. Высокая диагностическая чувствительность АБПА также свидетельствует о ценности его клинического использования для диагностики различных лимфом. Снижение содержания МГ типично для различных лимфом и некоторых других злокачественных опухолей, тогда как повышение его сывороточных концентраций в динамике ассоциируется с прогрессированием болезни Ходжкина и может использоваться в целях уточняющей диагностики рецидива данного заболевания. Одпократпое определите АБГ информативно для больных женского пола с НЗЛ. Значение данного показателя существенно возрастает при многократных определениях, т.к. отражает опухолевый прогресс не только у пациентов женского пола с НЗЛ, но при ЛГМ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Наличие лимфомы в организме человека независимо от ее типа сопровождается изменением сывороточных уровней некоторых иммунорегуля-торных белков по сравнению с показателями здоровых лиц, в том числе снижением МГ и повышением АБПА и ЛФ.

2. Прогрессирование лимфом однотипно соотносится с увеличением концентрацш! сывороточных иммуноглобулинов классов С и А, а также АБГ и ЛФ.

3. В отличие от неходжкинских лимфом, прогрессирование которых ас-

социируется с ростом таких иммунорегуляторных белков, как АБПА, ЛФП и ХГЧ, рост ходжк1шских лимфом сопровождается увеличением ковдентраций МГ, что коррелирует с содержанием сывороточных иммуноглобулинов, особенно IgG.

4. Иммунорегуляторные белки семейства макроглобулинов, ЛФ, АФП и ХГЧ в разной степени обладают свойствами неспецифических опухолевых маркеров ЛГМ и НЗЛ, определение которых рекомендуется использовать для диагностики и мониторинга течения лимфом / оценки эффективности полнхи-миотерапии.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации докладывались на межрегиональной научно-практической конференции "Актуальные вопросы клинической иммунологии" (г. Кемерово, 1996), международной конференции "Охрана здоровья населения угледобывающих районов" (г. Лснинск-Кузнецыш, 1997), всероссийской конференции "Актуальные проблемы здравоохранения Сибири" (г. Ленинск-Кузнецкий, 1998), на XXIV, XXV, XXVI ежегодных съездах международного общества онкобиологии и медицины (International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine) (Сан-Диего, США, 1996; Монтре, Швейцария, 1997; Умеё, Швеция, 1998).

ПУБЛИКАЦИИ. Опубликовано в печати 18 работ, из них - 12 по материалам диссертации, в том числе — 6 в центральной печати и 3 за рубежом.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 139 страницах машинописи, иллюстрирована 31 рисунком и 7 таблицами и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов ис-следовлния, трех глав собственных исследований, обсуждения, выводов и указателя литературы, содержащего 69 отечественных и 141 иностранный источ-miK. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Характеристика групп обследуемых. За период с 1995 г. по 1998 г. в ЦНИЛ Новокузнецкого ГИДУВа было обследовано 52 пациента с ходжкинс-кими и неходжкинскими лимфомами (30 мужчин 22 женщины). 11-1У стадий заболевания в возрасте от 18 до 55 лет. На основании гистологических исследований у 25 человек был выявлен ЛГМ (нодулярный склероз - 14 (56%), смешанно-клеточный вариант - 8 (32%), лимфоидное истощение -3 (12%)); у 27 человек - НЗЛ (лимфобластная лимфома - 21 (81%), иммунобластная лим-фома - 1 (4%), лимфоэпителиома - 1(4%), пролимфоцитарная и лимфоцитар-ная лнмфомы -3 (11 %). Все пациенты лечились в отделении химиотерапии Муниципального клшшческого онкологического диспансера г. Новокузнецка. Для лечения использовались традиционные медикаментозные схемы СОРР, СОР, АСОР. Диагностика и клинический мониторинг заболевания пациентов проводились сотрудниками онкологического диспансера. Образцы сывороток периферической крови получены однократно у 19 человек (ЛГМ -10; НЗЛ - 9) и в динамике от 2 до 6 раз у 33 человек (ЛГМ — 15: НЗЛ - 18).

Контрольную группу составили 40 практически здоровых субъектов, сопоставимых по полу и возрасту, однократно сдавших кровь в отделении гравитационной хирургии детской больницы №4 г. Новокузнецка.

Всего исследовано 176 образцов сывороток крови, в которых определено 10 различных факторов гуморального иммунитета.

Определение содержания сывороточных иммуноглобулинов. Концентраций сывороточных иммуноглобулинов в исследуемых образцах крови определяли методом радиальной иммунодиффузии (Мапшш в., е.а., 1965). Для выполнения этого метода использовали наборы мопоспецифическлх антисывороток против ¡цв, 1уА и ГеМ, выпускаемые НИИ ЭиМ (Нижний Новгород). В качестве поддерживающей среды применял!! бакто-агар (Регак, Германия).

Определение содержания МГ п АБГ. Для оценки содержания МГ и АБГ в исследуемых сыворотках крови использовали метод ракетного иммуно-

электрофореза (Вееке Б., 1977) с применением соответствующих моноспецифических антпсывороток собственного производства. Иммуиоэлекгрофорез проводили в аппарате ПЭФ-3 с блоком питания ПЭФ-3 при напряжении тока 1-ЗВ/см (низковольтный режим). По окончании электрофореза пластины геля отжимали, высушивали и окрашивали 1% аммдочерным 10В (Reanal, Венгрия), 0,25% кумасси бриллиантовым синим R250 (Sigma, США) (Грабар П., Буртэн П., 1963; Дэвени Т., Гергей Я., 1976; Фримель Г., 1984).

Определение содержании АБПА, ЛФ, АФП и ХГЧ. Для оценки содержания АБПА, ЛФ, АФП в образцах сывороток крови обследуемых применяли метод твердофазного иммуноферментного анализа (Voller А., 1976) и оригинальные тест-системы собственного производства. Для определения ХГЧ использовали готовые наборы реагентов "Прегнамон-стрип" для количественного иммуноферментного определения (ЗАО "Вектор-Бест"ГНЦ ВБ "Вектор", Кольцово). Совместно с ЗАО "Вектор-Бест" ГНЦ ВБ "Вектор" нами разрабатывается новый набор реагентов "Лактоферрин-стрип", предназначенный для количественного определения ЛФ в сыворотке крови в клинических, диагностических, научно-исследовательских и других лабораториях. Для получения коньюгатов использовали модификацию перийодатного метода (Nakane Р., Kawaoi А., 1974). Аффинно-очшценные антитела против АБПА, ЛФ и АФР выделяли посредством позитивной иммуноаффинной хроматографии на ага-розных сорбентах с иммобилизованными антигенами. Фотометрию проводили на Microplate Reader Model 3550-UV (Bio-Rad, США) в двухволновом режиме: 490нм и 655нм для уменьшения неспецифического поглощения светового потока. Обработку полученных данных осуществляли на ПК с помощью программы Microplate Manager/PC (Bio-Rad, США) Logit abs.

Выделение п очистка МГ, АБГ, АБПА, ЛФ и АФП. В качестве калиб-рантов и для получения моноспецифических антпсывороток использованы собственные высокоочшценные препараты белков. Для их выделения и очистки применяли различные варианты хроматографии: ионнообменную, метал-лхелатную, аффинную, гель-хроматографию, используя хроматографический комплекс Automated Econo System (Bio-Rad, США). МГ и АБГ человека выде-

ляли из плазмы кров» с использованием собственных модификаций метода цшпс-хелатной аффинной хроматографии (Sand О. е.а. 1985; Зорин H.A. с со-авт.,1990), АБПА человека - с использованием модифицированного метода аффинной хроматографии на гепарин-агарозе (Sinosich M.J. е.а.,1983; Meisser А. е.а. 1985; Зорин H.A.). Для очистки АФП использовали модифицированный метод Руослахти Э. (1979). Примененный способ получения ЛФ из грудного женского молока является модификацией метода, предложенного Сухаревым А.Е. (1988). Для идентификации белков и их качественной оценки применялись зональный электрофорез в полиакриламидном геле (Такач Б.,1981; Laemmli U., 1970) и различные сочетания иммуноэлектрофореза и иммуноднффузшг. Содержание белка в исследуемых препаратах определяли фотометрически (Е 210нм и Е 280нм) с помощью спектрофотометра хроматографа "Милихром-1А"и по методу- Lowri О., е.а. (1951).

Получение моиоспецнфпческпх антисывороток. Для получения моноспецифических поликлоналывых антисывороток против МГ, АБГ, АБПА, ЛФ, АФР человека иммунизировали кроликов соответствующими выделенными и очищенными белковыми препаратами, вводя по 0,5мл антигена, смешанного с неполным адъювантом Фрейнда. Качество антител оценивали с помощью различных вариантов иммуноэлектрофореза и иммунодиффузии. При отсутствии моноспецифнчности и наличии перекрестных реакций антисыворотки адсорбировали (Зорина P.M.. Зорин H.A., 1983).

Статистическая обработка полученных результатов. Для определения диагностической чувствительности и специфичности опухолевых маркеров использовали рекомендации Двойрина В.В. и Клименкова A.A. (1985):

Чувствительность =

Фактически больные, по дтвержд. данным методом Действительное число больных

100

Специфичность =

Здоровые лица, классифицированные как здоровые Действительноечисло здоровых лиц

100

Статистическую обработку полученных результатов проводили на ПК с использованием пакета сертифицированных компьютерных программ In Stat2 (Sigma, USA).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Изучение сывороточных иммуноглобулинов классов G, А и М при злокачественных лимфонролиферативных процессах в организме человека. Содержание иммуноглобулинов основных классов у больных ходжкинс-кими и неходжкинскими лимфомами не отличалось от соответствующих показателей группы здоровых доноров, а также не различалось между собой, несмотря на значительный диапазон индивидуальных колебаний. Медикаментозное лечение на начальных этапах не приводило к изменешпо концентраций сывороточных иммуноглобулинов за исключением достоверного снижения на 22-24% при ЛГМ концентраций IgG (с 12,05±0,86 до 9,14±0,82г/л, Р< 0,05) а также общего содержания иммуноглобулинов трех классов (с 15,19+0,82 до 11,75±1,17г/л, Р< 0,05).

У пациентов с прогрессированием лимфом независимо от их типа на фоне лечения концентрации IgG и IgA были достоверно выше, чем у пациентов с регрессией опухолей. Количество IgM при прогрессировании и регрессии лимфом достоверно не различалось (рис. 1).

Изучение динамики сывороточных иммуноглобулинов на фоне проводимой полихимиотерапии показало, что при регрессии опухолей у 83% больных лимфофанулематозом и 67% больных неходжкинскими лимфомами наблюдалось относительное снижение концентрации сывороточных иммуноглобулинов. особенно IgG. Полученные результаты, вероятно, отражают достаточную эффективность используемых комбинаций химиотерапевгических препаратов, приводящих к угнетению роста и последующему лизису опухолевых масс и соответствующему снижению концентраций первичных опухолеассо-циировашгых антигенов.

Лимфограпулематоз

Неходжкинские лимфомы

□ прогресс □регресс

РисЛ. Коипептрацни сывороточных иммуноглобулинов основных классов при прогресснрованин и регрессии лимфом различпых типов.

У пациентов с прогрессированием ходжкинских и неходжкинских лимфом после некоторого снижения содержания иммуноглобулинов С и Л на начальных этапах лечегам в дальнейшем наблюдался относительный рост их концентраций в сыворотке крови. Увеличение содержания иммуноглобулинов может свидетельствовать о возможной активизации их продукции при прогрессе лимфом. Этот феномен, вероятно, следует связать с наличием и ростом резистентных к лечению опухолевых линий и соответствующим повышением концентраций первшнллх оиухолсассоциированных антигенов, что приводит к развитию противоопухолевого иммунного ответа. Подобная динамика оказалась типичной для 86% пациентов с ЛГМ и 67% пациентов с НЗЛ.

Изучение концентраций МГ, АБГ и АБПА в сыворотке крови больных лимфомами. Следующим этапом работы было изучение при лимфомах содержания иммунорегуляторных белков семейства макроглобулинов, к кото-

рым относятся МГ, АБГ и АБПА. Эти белки являются ингибиторами протеи-наз широкого спектра действия, что предопределило перспективность их изучения при JITM и H3JI. Кроме того, АБГ хорошо себя зарекомендовал как неспецифический маркер некоторых опухолей не лимфоидной природы. Количество белков семейства макроглобулинов в сыворотке крови не зависело от половой принадлежности обследованных лиц, за исключением АБГ, содержание которого было различным у здоровых мужчин - 0,008 ± 0,002г/л и женщин - 0,021 ± 0,004г/л, Р<0,05. Половые различия сохраняются при H3JI (0,007± 0,002г/л - мужчины и 0,033±0,003г/л - женщины, Р<0,001) и стираются при ЛГМ.

Содержание основного сывороточного ингибитора протеиназ МГ при ЛГМ (1,90 ± 0,15г/л) и НЗЛ (1,82 ± 0,12г/л) было снижено в среднем на 30%, (Р<0,01) по сравнению с донорами (2,59 ± 0,20г/л). Установленный факт можно объяснить возможным расходом этого белка на связывание различных типов протеолитических ферментов, количество которых увеличивается с ростом и распространением опухолевого процесса.

Вместе с тем наблюдалось увеличение содержаши структурных и функциональных аналогов МГ, модифицированные протеиназами формы которых, особенно АБГ, наделены иммуносупрессивными свойствами, особенно в отношении Т-клеточного звена иммунитета.

Достоверное повышение сывороточных концентраций АБГ в среднем на 60% по сравнению со здоровыми женщинами было отмечено только у пациенток с НЗЛ (0,033 ± 0,003г/л по сравнению с 0,021 ± 0,004г/л, Р<0,05). Диагностическая чувствительность этого белка при ЛГМ составила 54-58% для мужчин и женщин, при НЗЛ - соответственно 12 и 70%, специфичность -50-60%.

АБПА при злокачественных заболеваниях практически не изучался, однако, его отношение к семейству макрогаобулннов предопределило исследование этого белка при лимфомах. Содержание АБПА при ЛГМ (0,219 ± 0,029мг/л, Р<0,001) и НЗЛ (0,230 ± 0,058мг/л, Р<0,05) было выше соответствующих показателей здоровых доноров (0,086 ± 0,006мг/л). Диагностическая

чувствительность этого белка составила 92% при ЛГМ и 96% при II3JI, специфичность - 55%.

На начальных этапах медикаментозного лечения было отмечено достоверное снижение содержания МГ на 30 % только при ЛГМ с 2,28 + 0,20 до 1,60 ± ОД 8г/л (Р<0,05). уровни других ингибиторов протеиназ и МГ при НЗЛ оставались относительно стабильным. Полученные результаты, возможно, связаны с прямым лимфолитнческим и гепатотоксическим действием применяемых препаратов, так как, по данным литературы, основными продуцентами МГ в организме являются гепатоцнты. Кроме того, этот белок может синтезироваться различными типами клеток, в том числе клетками монощгго-макро-фагального ряда, лимфоцитами периферической крови и др. (Горлина Н.К. с соавт., 1992; ЖабинС.Г., 1993; MunckC. е.а., 1988).

При анализе изменений сывороточных концентраций белков семейства макрошобулшюв с течением опухолевого процесса на фоне лечения оказалось, что прогрессирование ЛГМ ассоциировалось с более высокими средними значениями концентраций МГ (2,52 ± 0,14г/л) и АБГ, как у мужчип (0,017 ± 0.002г/л), так и у женщин (0,027 ± 0.005г/л) по сравненшо с соответствующими показателями пациентов с регрессией этой лимфомы (1.71 ±0,16г/л, Р<0,01; 0.010 ± 0,002 и 0,012 ± 0,004г/л. Р<0.05). Содержание АБПА при прогрессиро-вании и регресспп ЛГМ достоверно не изменялось (0.252 ± 0,042 и 0,201 ± 0,025мг/л, Р>0,05).

При прогресспровании НЗЛ отмечены более высокие средние значения содержания АБПА по сравнению с соответствующими показателями пациентов с регрессией этой опухоли (0,373 ± 0,057 и 0,162 ± 0,014мг/л. Р<0,01). а также более высокие концентрации АБГ только у пациентов женского пола (0,035 ± 0.003 п 0,020+ 0,002г/л. Р<0.01). Достоверных изменений содержания МГ при прогресспровании и регресии НЗЛ не обнаружено (1,73 ± 0.12 и 1,90 ± 0, Юг/л, Р>0,05).

Отмеченные закономерности сохранялись при изучении белков семейства макрогаобулинов в динамике. Относительное увеличение на фоне лечения концентраций МГ наблюдалось у 70% больных с профессированием, а

снижение у 77% больных с регрессией лимфомы Ходжкина, тогда как при H3JI только в 33% и 53% случаев соответствешю. Нарастание в динамике концентраций АБГ ассоциировалось с прогрессированием лимфом у 80% больных мужского и женского пола с ЛГМ и 70% женщин с НЗЛ с прогрессированием опухолей, а снижение - с регрессией лимфом, соответственно, у 60 и 81 % больных. Содержание АБПА отражало динамику опухолевого процесса на фоне лечения только при НЗЛ, достоверно повышаясь при прогрессировании и снижаясь при регрессии у 70-80% больных с этим типом лимфомы. При ЛГМ содержание этого белка на фоне лечения постепенно снижалось у 85% пациентов независимо от течения заболевания.

Повышенное содержание МГ при прогрессировании ЛГМ может быть связано с его возможным дополнительным синтезом опухолевыми клетками, а также элементами реактивного компонента опухоли, типичными для этой лимфомы. Более высокие средние сывороточные концентрации АБГ у больных мужского и женского пола с прогрессированием лимфомы Ходжкина и больных женского пола с прогрессированием НЗЛ, а также другого белка семейства макроплобулинов - АБПА при прогрессировании НЗЛ, вероятно отражают компенсаторную реакцию организма, приводящую к активизации биосинтеза этих аналогов в ответ на повышение концентраций протеиназ, сопровождающих рост и инвазию лимфом.

Известно, что трансформированные протеиназами макроглобулины стимулируют секрецию иммуноглобулинов (Зорин H.A. с соавт., 1990; Unai Т. е.а., 1991). Наши результаты свидетельствуют о наличии при лимфоме Ходжкина положительных корреляций между содержанием МГ и иммуноглобулинов основных классов, которые наиболее выражены для IgG (г = 0,68; Р<0,01). Учитывая способность МГ связываться с различными белками сыворотки крови, в том числе и иммуноглобулинами, можно предположить, что этот белок при ЛГМ может оказывать существенное влияние не только на содержание, но и на перераспределение указанных аффинантов в организме.

Изучение содержания ЛФ, АФП и ХГЧ у пациентов с ЛГМ п НЗЛ. ЛФ, АФП и ХГЧ являются гликопротеинами, обладающими иммунорегуля-

торными свойствами. На возможность использования ЛФ в качестве неспецифического маркера при ЛГМ указывалось в работах Сухарева А.Е. с соатл.. (1990). тогда как при НЗЛ этот белок не изучался. Кроме того, АФП и ХГЧ являются общепризнанными специфическими маркерами ряда опухолей, однако их информативность при лимфомах не оценивалась.

Данные, характеризующие содержание ЛФ, АФП и ХГЧ в сыворотках крови больных ЛГМ и НЗЛ, а также сравнение показателей больных и здоровых людей представлены в табл. 1. Достоверных половых различий в содержании этих белков не обнаружено.

Таблица 1.

Содержание ЛФ, АФП и ХГЧ у допоров и при лимфомах различных типов

Кол-во Стат. ЛФ АФП ХГЧ

Группы обследо- показа- (мг/л) (нг/мл) (МЕ/л)

ванных тели

1. ДОНОРЫ 40 М±т 0,532 ± 0,075 9,74 ± 2,07 2,9 ±0,6

2.ЛГМ 22 М±т, 3.702 ± 0,558 39,6 ± 11,8 6.6 ±2,5

Р2-1 <0,001 <0,05 >0.05

3.113Л 25 М±т, 4,693 ± 0,687 35,0+13,6 29,7 ±9,9

РЗ-1 <0,001 >0,05 <0,05

Р2-3 >0,05 >0,05 >0,05

При сопоставлешш с группой здоровых доноров концентрации ЛФ были выше в 7 раз при ЛГМ и в 9 раз при ГОЛ. Диагностическая чувствительность этого белка составляла 91% при ЛГМ и 92% при НЗЛ, специфичность-72%. Процентная доля больных лнмфомами с очень высоким содержащим ЛФ (в 10 и более раз превышающим показатели здоровых лиц) достигала 20%. Отмеченное нами увеличение в несколько раз концентраций этого белка при лимфомах не может быть объяснено увеличением процентного содержания поли-

морфноядерных лимфоцитов, которые считаются основным источником сывороточного ЛФ в организме. Данный факт может отражать либо стимуляцию клеток миелоидного ряда неизвестными агентами эндо- или экзогенного происхождения, либо наличие других источников этого белка при лимфомах. в том числе а его возможный биосинтез малипшзированньши лимфоидыымн клетками.

Содержание АФП по сравнению с соответствующими показателями контрольной группы было выше в 4 раза при ЛГМ и 3,5 раза при НЗЛ, однако, статистически достоверные различия с группой доноров были обнаружены только при ЛГМ, что, по-видимому, отражает способность к его биосинтезу составляющими реактивного компонента этой лимфомы. Диагностическая чувствительность этого гаикопротеина составляла 54% при ходжкинских и 32% при неходжкинских лимфомах, специфичность - 75%. Необходимо отметить, что ни в одном случае концентрации АФП не достигали величин свыше 500нг/мл, как при гепатоцеллюлярном раке и опухолях с элементами висцеральной энтодермы желточного мешка, для которых данный белок считается специфическим опухолевым маркером.

Концентрации ХГЧ были в 2 раза выше значений контрольной группы при ЛГМ и в 10 раз выше при НЗЛ. Статистически достоверные различия по сравнению с донорами были обнаружены только при НЗЛ. Диагностическая чувствительность этого гормона составляла 45,5% при ходжкинских и 64% при неходжкинских лимфомах, специфичность - 62,5%.

На начальных этапах медикаментозного лечения было отмечено однотипное для больных ЛГМ и НЗЛ снижение концентраций ЛФ на 44-47% от фоновых значений, тогда как содержание АФП и ХГЧ практически не менялось.

Изменение содержания ЛФ на фоне лечения у большинства пациентов соотносилось с клиническим течением лимфом. Сывороточные уровни этого гликопротеина при прогрессировании ЛГМ (5,09 ± 1,09мг/л) и НЗЛ (5,51 ± 0,84мг/л) были достоверно выше, чем при регрессии изучаемых заболеваний (2,08 ± 0,43мг/л при ЛГМ, Р<0,05 и 1,82 ± 0,27мг/л при НЗЛ, Р<0,001). У 86%

пациентов с ЛГМ и 78% пациентов с НЗЛ увеличение индивидуальных показателей лактоферрина ассощшровалось с нро1рессированнем опухолей, тогда как его снижение в более чем 80% случаев при ходжкинских и неходжкинских лимфомах соотносилось с регрессией заболеваний (рис.2).

Рнс.2. Динамика концентрации ЛФ па фоне лечения при прогрессиро-ваннн (сплошная линия) и регрессии лпмфом (прерывистая линия).

Зависимость содержания АФП и ХГЧ от течения опухолевого процесса отмечалась только при НЗЛ. При прогрессировашш лимфом этого типа концентрации АФП (53,37 ± 16.06нг/мл) и ХГЧ (40,41±13,22МЕ/л) были выше (Р<0,05), чем при регрессии опухолей (соответственно, 10,53 ± 3.9нг/мл и 6.42 ± 3,1 ОМЕ/л). Нарастание уровней АФП и ХГЧ в динамике на фоне полихимо-терашш отмечалось у 45% пациентов с прогрессированием НЗЛ.

Подводя итоги настоящего исследования, можно утверждать, что развитие в организме человека лимфом, независимо от их типа, сопровождается изменением соотношений систем изученных белков, являющихся естествен-

ными иммунорегуляюрами. Отмеченные нами различия в содержании белков семейства макрошоиулинои, АФП п ХГЧ при ходжкинских и неходжкинских лимфомах, вероятно, являются отражением различной природы заболеваний и особенностей иммунорегуляцин при данных опухолях. На основании литературных данных следует отметить, что многочисленные гистологические варианты H3JI являются типичными саркомами, тогда как природа ЛГМ до настоящего времени не ясна. Переключение при недостатке МГ биосинтеза на более мощный иммуносупрессор АБГ с совместным повышешюм концентраций АБПА при прогрессе НЗЛ формирует феномен специфической опухолевой иммуносупрессии, что характерно и для других злокачественных опухолей человека различной локализации. Особенностью лнмфомы Ходжкина является увеличение в сыворотке периферической крови при прогрессировали!! заболевания концентраций двух структурных и функциональных гомологов МГ и АБГ с изначально повышенным по сравнению со здоровыми лицами содержанием АБПА, что в какой-то степени сходно с формированием состояния иммуносупрессии при беременности. Схожесть процессов иммунорегуляцин с участием белков семейства макрогеюбулинов при беременности и ЛГМ может быть проиллюстрирована литературными данными о возникновении ЛГМ на фоне беременности и провоцирующей роли беременности в распространении ЛГМ (Симбирцева Л.П., Холсти Л.,1985; Olsson Н., Olsson M.L., Ranstam J., 1990). По всей видимости, именно благодаря совместному повышению содержания МГ и АБГ при прогрессе ЛГМ, наблюдается значительное угнетение реакций Т - клеточного звена иммунитета, которое является особенностью ЛГМ и коррелирует с течением заболевания (Kaplan Н., 1980).

ВЫВОДЫ

1. Концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов G и А при лимфогранулематозе (ЛГМ) и неходжкинских злокачественных лимфомах (НЗЛ) изменяются однотипно, нарастая при прогрессировашш и снижаясь при регрессии опухолей, что свидетельствует о нарушении механизмов их продукции при данных заболеваниях.

2. Количество а,-макроглобулпна при ЛГМ и НЗЛ снижено по сравнению с показателями здоровых лиц и продолжает оставаться стабильно низким при прогрсссировании НЗЛ. а ассоциированного с беременностью протеина А повышено и увеличивается при прогрессировашш НЗЛ. Содержание ассоции-

рованного с беременностью а - глншнротенна повышено только у женщин с H3J1. но увеличивается при npoipeccirponaiiim лимфом обоего типа, за исключением пациентов мужского пола с H3JI. Полученные данные указывают на различное участие этих белков в патогенезе заболеваний.

3. Прогрессирование ЛГМ сопровождается увеличением в сыворотке крови больных концентраций GL - м а кр о гл о бу: i и п а. что прямо коррелирует с содержанием иммуноглобулинов, особенно IgG, и свидетельствует об учаспш этого белка в механизмах образования иммуноглобулинов.

4. Обнаруженное повышение концентраций лактоферрииа в процессе проведения химиотерапии у пациентов с прогрессированием ЛГМ и НЗЛ указывает на формирование механизмов резистентности его продукции и является показателем неэффективности проводимого лечения и ухудшения клинического течения данных опухолей.

5. Повышающиеся в динамике уровни ОС-фетопротеина и хорионичес-кого гонадотропина, обнаруженные в процессе развития неходжкинских лимфом, говорят об участии иммунорегуляторнмх механизмов в прогрессировл-нии опухолей этого типа.

6. Полученные данные о содержании белков семейства макроглобулинов, лактоферрина, а-фетоиротеина и хорионического гонадотропина в процессе развития ЛГМ и НЗЛ свидетельствуют о наличии изменений механизмов регуляции иммунной системы при данных заболеваниях и о возможности использования этих показателей в качестве информативных критериев диагностики.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изучение альфа-2-макроглобулина человека и его аначогов у животных (в соавт. с Зориным H.A., Белогорловой Т.И.. Лыковой О.Ф. и Чириковой Т.С.)// ЖЭБиФ,- 1990.- № 1,- С.3-8.

2. Иммугноэлектрофоретическая идентификация белков, разделенных методами зонального электрофореза и изоэлектрического фокуссирования (в соавт. с Зориным H.A. и Жаб иным С.Г.) // Вопросы мед. химии.- 1990.- Т.36, №2.- С.91-93.

3. Сравнительное изучение альфа-2-макрогаобулнна и ассоциированных с беременностью альфа-2-гликопротеиш и протеина А как возможных ана-

логов (в соавт. с Жабиным С.Г. и Белогорловой Т.И.) // Вопросы мед. химии.-1991.- Т.37, №3. - С.48-50.

4. Альфа-2-макропхобулин (МГ) и ассоциированный с беремешюстью альфа-2-пшкопротеин (PAG) при некоторых онкологических заболеваниях (в соавт. с Промзелевым Е.Г., Промзелевой Н.В. и Зориной P.M.) // Тез. докл. Межрегион, научно-практической конференции.- Кемерово, 1996. - С.66-67.

5. Immunoregulatoiy properties of alpha-2-macroglobulin (with MaltsevaN.V., Lykova O.F., Konisheva T.V., Zorina R.M., Zorin N.A. and Chirikova T.S.) // Russian J. of Immunol. -1996.- V.l, N.l, PP. 55-60.

6. Лактоферрин как перспективный диагностический и прогностический маркер при лимфопролиферативных заболеваниях (в соавт. с Промзелевым Е.Г., Промзелевой Н.В., Лыковой О.Ф., Конышевой Т.В. и Вальтфогелем ИВ.) //Тез. докл. Международ, конференции.- Ленинск-Кузнецкий, 1991.- С.337.

7. Macroglobulins as prognostic markers inlymphatic malignancy (withZorin N.A., Konisheva T.V., Lykova O.F. and Promzelev E.G.)// Tumor Biology.-1997.-Vol.18, (S.2).- P. 107.

8. Влияние альфа-2 макроглобулипа человека на пролиферативную активность опухолевых клеток крыс (в соавх с Зориным Н.А. и Мальцевой Н.В.) // Цитология.- 1998,- Т.40, № 2/3.- С.167-171,19.

9. Иммуноферментный метод определения лактоферрина (в соавт. с Конышевой Т.В., Лыковой О.В., Куксинским В.А. и Зориной P.M.) // Клин. лаб. диагносшка.-1998.- № 4.-C.33-34.

10. Некоторые маркеры рака при лимфогранулематозе и неходжкинских злокаческтвенных лимфомах (в соавт. с Конышевой Т.В., ЛыковойО.Ф. иПром-зелевой Н.В.) // Тез. докл. Всероссийской конференции.- Ленинск-Кузнецкий, 1998. - С. 328-329.

11. Pregnancy-assosiated protein A for prognosis chemotherapy monitoring in patients with ovarian cancer and lymphatic malignancy (with Bagenova L.G., Promzelev E.G. and Zorina R.M) // Tumor Biology.-1998.- Vol.19 (S.2).- P.76.

12. Lactoferrin for monitoring lymphatic malignancy(with Konisheva T.V., Promzeleva N.V. and Zorin N.A.) //Tumor Biology.-1998.- Vol. 19 (S.2).- P.91.