Автореферат и диссертация по медицине (14.00.31) на тему:Сравнительное изучение эмбриотоксического действия амфотерицина В и его метилпроизводного (экспериментальное исследование)

Г ГО 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧ1ШЙ ЦЕНТР ПО ШИБИОМСАЫ

1 5 ; ',А!\ !?Ш

На правах суиопиеи УДК 615.332.032.14].076.9

ЫОГУЧЕНОК ЕЛЕНА АРКАДЬЕВНА

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ШБРИОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ АМШЕРИЦИИА В И ЕГО МЕТШРОШВОДООГО (экспериментальное исследование)

14.00.31 - химиотерапия и антибиотики

Автооефера.г диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ыосхш - 1993

Работе выполнена в Государственном научно-исследовательском технологическом институте антибиотиков и ферментов медицинского назначения (Санкт-Петербург).

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

каедвдат медицинских наук, старший научный сотрудник М.В. Моисеева

доктор медицинских наук, профессор Ы.С.Поляк

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор E.H. Падейская кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник A.B. Никитин

ВВДУ1ДАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

Институт экспериментальной медицины Российской Медицинской Академии наук (Санкт-Петербург).

Зацита состоится .............. 1593 г,

б " часов на заселении Специализированного совета Д 034.68.01 в Государственном научное центре пс антибиотикам (ГНЦА) по адресу: II3I05, Москва, Нагатинская ул., За.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦА.

Автореферат разослан

Ученый секретарь Специализированного совета квнцедат медицинских наук

С.И. Кузнецова

Актуальность тема. В овяэи с ростом оппортунистических грибных инфекций, увеличением числа больных с недостаточностью иммунной системы и пояашшем гоопиталшцх грибннх ипфекгшР возрастает необходимость в применении системных аятимякогичео-ких средств /Яшт iïfl 1988. Пикала- 0, HiAwi N., ¿kkl&tc «i. . 1987/.

Известно, что системные микозы у беременных женщин протекают намного тяжелее я имеет тенденцию к более быстрому и опасному развитию ¡ТЫои ШЛ Шм&т Ш ИШгип ЛР. ,шо. ВшгЫоОТ. . 1975. *Шпшае>с и. шм й>Ы WA à (Л. . 1980/.

Наиболее эффективным средством лечения многих систошых микозов до настоящего времени остается амфотерпшш В. Однако, серьезной ироАленой при применении этого антибиотика латается его выраженная токсичность, в том числе нефротокскчность, проявляющаяся даже при использовании терапевтических доз /ЯтшС' tmyl, P&wdvty Ш, Hday&tM H et Ж, шо/.

Несмотря на более чей Х-латнее клиническое применение амфотерицкаа В, данных относительно результатов его использования во время беременности мало Ккш A.W., fadiWMl Р.]. , 1985/, и взгляда клиницистов на возможность его применения при беременности противоречивы. Ряд авторов /Селезнев В.Ф., 1987, Федотов В.П., Гладагаев В.В., Соловьева В.П. и др., 1987, fcwt-h H, Ш 4. , 1985/ считают, что применение ямфотеришша В при беременности противопоказано вследствие его общей высокой токсичности. С другой стороны, было найдено, что введение амфотеришша В беременным с диссешшвро ванными формами заболевания оказывает благоприятный эффект на^ течение ааболевания

АкшЛЖ ]шешп Р.1, Ш5,Imail ШЛ, 2т*ъ 6.Л. , mz,4anam М, Чпж JR.t bmt А, 2, , шзз/.

Метилироазводное амфотерюина В, как било установлено о ряде исследований, имеет несколько меньшую терапевтическую эффективность, чем амфогерпшш В, во одновременно обладает меньшей токсичностью, в том числе нефро- и гепатотоксичностью/ЙА£-

№ QP, ÏWMÙ Я.Р iMùm&M т. et al. , 1975, faùn Ш,

&Щ. Р.2., Нооп, m d ai. , 1975/, «, следовательно, может оказаться приемлемым средством для лечения мнкотичвскях инфекций у беременнкх.

Во ВНИЗЖФ синтезировано новое водорастворимое производное амфотеридана В - ыетшлЗощш, обличающееся до химической отруктуре от зарубежных аналогов.

Согласно данным лаборатории фармакологии ВШТИАФ, ыетам-фощш обладает в 4 раза ыеншеГ токсичностью по сравнению о аыфотерицином В. Действие его на воспроизводящую сиотеьцу в развитие плода ранее не изучалось.

Работа выполнена в соответствии с Государственный заказом Министерства медицинской промышленности № 1691026102. Номер государственной регистрации 01890064454.

Цели исследования. Задачами настоящей работы являлись;

- сравнительное изучение шбрио/фа тотоксичдости амзЕютерицш» В и метамфоццна при различных нутах: введения в эксперименте;

- изучение трансплацентарного переноса а фармакогашетики в организме плода амфотерицина В и ыетамфоцина;

- изучение распределения амфогерищша В и метамфоодна в аынио-тической аидкоста и плодах после внутриашиотвчвоких инъекций;

- определение взаимосвязи снижения общей токсичности при применении ыеталфэщша в амбрш/фетотоксичяостыо;

- разработка рекомендаций по применению метамфоодна во время беременности.

Научная новизна результатов. Проведено сравнительное изучение эмбрио/фетотокенчности амфотерицина В и его нового производного в связи с особенностями их фармакокинетики и трансплацентарного перехода. Проанализировано влияние меньшей общей токсичности метамфоадна по сравнению с исходным антибиотиком на амбрио/фетотоксичность. На основании сопоставления результатов прямого (при введении в ашиотическую полость) и опосредованного (при* введении в организм самки) действия амфотерищна В и ыетамфощша на плод и изучения их трансплацентарного перехода сделан вывод об опосредованном механизме фетотоксиче-ского действия амфотерищна В и метамфоццна. Ранее аналогичные исследования нз проводили.

Практическая знатаюсть работы состоит в следующем:

- установлено (л эксперименте) отсутствие эмбриотоксического действия ам|стерщдща В и иетатощлга в дспиялантационный период при шгалявдюлнои и внутривенном путях введения;

- определен« пороговые дозы во фетотокоичаскоцу действию при внутривенном введении амфотеривдна В (1,7 ыг/кг) и ыетаыфо-щша (2,5 ыг/кг). '

- выявлена потенциальная таратогашость метамфоцана при прямой действии на плод (виутриамшотические инъекция);

- обоснованы рекомендации ш использованию метамфоцана во время беременности.

Публикации и апробация работа. По теме диссертационной работы опубликовано 2 статьи и тезисы 6 докладов. Основные результаты были дожжены на конференции молодых ученых ШШШ> "Творчество молодежи - научно-техническоад прогрессу" (Ленинград, 1986), конференции молодых учение ВНИМАЙ "Современные проблемы получения лекарственны* препаратов" (Ленинград,1990), Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций" (Москва, 1991).

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 164 страницах. В списке литературы 226 наименований. Работа состоит аз введения, обзора литературы, результатов исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, заключения. В тексте содержатся 35 таблиц, 9 микрофотографий, 3 рисунка. .'

Материал и метода I. Изучение змбриотоксического действия

Опыты проведены на 495 нелинейных белы* крысах массой 160-200 г.

Внутривенное введение антибиотиков осуществляли о 1-го по 6-й и с 6-го по 16-Й дай беременности.

Амфотерицин В (С^Н^У/? ) вводили в двух дозах: терапевтической - 1,0 ыг/кг (300 ¡¿кг/кг) и близкой к максимально переносимой дая беременных крыс -1,7 мг/кг (500 (Ш'ЛаО. МетаЬ-фоцин триметшшфтерицан В хлорид.СяПкНО^Сс) так-

же вводили в двух дозах; 2,5 мг/кг (2250 мкг/кг) и 3,3 ыг/кг (3000 мкг/кг), обе дозы находятся на уровне предполагаемой терапевтической (одновременно доза 3,3 мг/кг близка к максимально переносимой* для беременных крыс).' У самок, которым с 6-го во 16-й дни беременности вводили амфотерицин В в дозе 1,7 ыг/кг и ыеталфцин в дозе 3,3 мг/кг, были взять образцы внутренних

органон дли гистологического изучиш.

В опыте во изучению ингаляционного воздействия крыс подвергали ежедневному воздействию аарозоля водных растворов антибиотиков в концентрации 10 иг/ил с 1-го по 6-Й и с б-го по 16-й дни барвыеинссти. Расчетные дозы антибиотиков составили 1,4 иг/кг.

Б целях изучения прямого воздеЯствия аыфотерищша В и ие~ тамфоцина на развитие плодов било осуществлено введение антибиотиков в амниотическую цолость на 13-й, 14-й и 15-й дни беременности. В ашшотцческой жидкости были созданы расчетные концентрации антибиотиков, преьшлмдие в 10 раз ыаксиыалыю достшкалие в сыворотка крови самок крыс цосл8 их внутривенного введшим.

Вскрытие самок проводили на 20-й деиь беременности ио общепринятой методике. Исследование внутренних органов плодов осуществляли по методу Вильсона в модификации отдела омбраоло-пш ШШЗУ А£Ш СССР. Изучение скелета плодов проводили до методу Даусона в модификации отдела еыбриологии НШЭЫ АШ СССР.

2. Изучение развития и доведения потомства крыс посла внутривешюго введения аыфотериццна В и ыетамфоцина е пренатальном периода

А^отеришт В и юать&оцм вводили внутривенно с 12-го но 22-Й дни беремекносги в дозах I,? ыг/кг и 3,3 иг/кг соответственно. Проводшш наблюдение за физическим развитием потомства, скоростью созревании сенсорно-двигательных рефлексов в период вскармливания, изучали эмоционально-двигательное поведение красят после окончания периода вскармливания с использованием теста "открытое поле" в в шюгоальтернативном лабиринте.

Проведено гистологическое изучение внутренних , органов крысят.

3. Изучение траноодацеатарного перехода амфотерицшш В

и метаифощша

Опыты поставлены на самках 96 белых с зсиородных крыс массой 180-200 г и 12 кроликов породы шиншилла массой 2,5-3 кг.

Содержание амфотерицина В и ыетамфоцина ц биосубстратах определяли микробиологическим методом диффузии в агар. Концентрацию моченого но 14С ыетамфоцина определяли радиоизотонным

методом.

Для определения биологической активности антибиотиков использовали среду следующего состава:На,& - 20 г,- Ю г, натрий двузамещеиный фосфорнокислый - 3 г, глюкоза - 5 г,дрожжевой экстракт - 30 мл/0,15-0,2^ сухих веществ, агар-агар -I? г, вода дистиллированная до I л. рН посла стерилизация 5,8 6,0. Тест-микробом служила ОшШл ТУЛ - I. Величина

микробной нагрузки составляла 1,2-ДО10 КОЕ/мя для амфотерици-на В и для метамфоцина.

Амфотерицин В вводили внутривенно крысам в дозе 1,7 мг/кг о ?-го по 20-Й дан беременности. Нетамфощш вводили внутривенно в дозе 4,0 мг/кг с 16-го по 20-й дни беременности шш однократно на 20-Й день.

Меченый металфонин вводили внутривенно крысам в дозэ 3,3 мг/кг с 6-го но 16-й дни беременности или однократно на 20-й день. Кроликам меченый ыетамфоцнн вводили внутривенно в дозе 4,0 мг/кг однократно на 16-й или 27-й дни беременности.

У всех исследуемых животных брали образцы сыворотки крови самок, плаценты, сыворотки крови пуповины, амниотичеокой жидкости, внутренних органов плодов.

4. Изучение распределения амфотерицина В и метамфоцина при юс введении в амниотическую полость крыо

Опыты поставлены на самках 84 белых беспородных крыс массой 180-200 г. Концентрация амфотерицина В и ыетам$оцина в исследуемых субстратах изучали о использованием микробиологического и рпдиоизотопного (через 48 часов) методов.

Амфотарпиин В вводили в амннотичеокую полость на 15-й пень беременности, метанфовдш - на 14-й и 15-й дай беременности.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУВДЗНИБ

I. Экспериментальное изучение эыбриотоксического действия амфотерицина В и метаУ1фоц?1на

1.1. Иэ^че11ие_эмб£иотоксического действия при ш1£т£ивеш1£м_введении

Внутривенное введение в доимплактациошшй период амфате-ришна В в до а о [,? мг/кг и метам1оцяна в дозах 2,5 мг/кг и

3,3 иг/кг не выяыию различий иеаду ниш: инъекции антибиотиков не оказали эыбриогоксического действия и не вызвали токсикоза у самок.

При внутривенном введении аыфотершшна В и матамфоцина в период алацентации и органогенеза токсикоз самок крыо и фето-токсичность ошш взаимосвязаны и носили дозозависямый характер . Так, внутривенное введение амфотерицина В о дозе 1,0ыг/кг не вызвало появления симптомов токсикоза у самок, а введение в дозе 1,7 иг/кг привело к гибели 2Ъ,Ь% самок и замедлению темпов прироста массы тела; вваденме матамфоцина в дозе 2,5 мг/кг сопровождалось замещением темпов прироста массы тела, введение в дозе 3,3 мг/кг - гибелью 16,7% самок. Гистологическое изучение внутренних органов самок, получавших амфотерицин В в дозе 1,7 мг/кг, выявило наличие токсической дистрофии печени и диффузного воопадендя клубочкового аппарата почек. У самок,получавших метамфоцш в доза 3,3 мг/кг, отмечены менее выраженные дистрофические изменения в печени и дистрофические изменения в клубочксвом отделе аочок и части проксимальных канальцев.

Цостимдлантационная гибель при введении амфотерицина В в дозах 1,0 мг/кг и 1,7 мг/кг в метаыфошна в дозе 2,5 мг/кг на отличалась от уровня контроля. При введении металфоцина о 6-го по 16-й дай беременности в дозе 3,3 мг/кг означено достоверное увеличение постшшшнтаццоняой гибели (30,81+6,22$) по сравнение с контролем (4,64+1,78#), Р< 0,00Г. Средняя масса плодов крыо всех Еодоаытаых групп не отличалась от средней маосы плодов соответствующих контрольных групп. ЦрИ наружном осмотре плодов, изучении состояния внутренних органов и скелета на обнаружено увеличения частоты аномалий или замедления тешов ос-оификации в подопытных группах. Введение амфотерицина В в дозе 1,7 мг/кг а метамфощша в дозе 2,5 мг/кг о 6-го по 16-й дай беременности вызвало уменьшение краняокаудального размера плодов по сравнению о контролем (30,10+0,17 мм - введение амфотерицина В, 30,7&t0,29 мы - в контроле; 29,20¿0,32 мм - введение ыетаыфощша, ЗО^Об+О.З! мм - в контроле/, j?"<0,'05. ,

Анализируя полученные результаты, можно отметить, что при внутривенном введении между выраженностью токсикоза у самок и степень^ воздействия на плод существует прямая зависимость.

В доступной литературе описан 21 случай применения амфо-

терицина В внутривенно у женщин в различные периода беременности, при этом не выявлено очевидного тератогенеза или стойких токсических побочных эффектов у новороядениых. При внутривенном введении крысам аифотерицина В в доза 1,7 мг/кг несмотря на явно выраженный токсикоз самок отмечалась незначительная фетотоксичность, что не противоречит клиническим наблюдениям.

1.2. Изучение эмбриотоксического действия при_мгаяяциошюм воздействие водаю^астЕоров_&чтабцотиков

При "ингаляционном воздействии водных растворов акфютерк-цина В в концентрации 10 иг/мл, расчетная доза 1,4 мг/кг (на уровне терапевтической), и метамфоцпна в концентрации 10 м^/шг, расчетная доза 1,4 мг/кг (ниже предполагаемой терапевтической), о 1-го по 6-й дай беременности явных симптомов токсикоза у самок не было оплачено. Эмбриотоксического действия ингаляционное воздействие водных растворов антибиотиков в доидалантаци-онный период яе оказало.

Ингаляционное воздействие о 6-го по 16-й дай беременности вызвало появление у самок симптомов общетоксического действия антибиотиков - снижение темпов прироста массы тела. Судорог в гибели самок не отмечено, что согласуется о данными литературы о хорошей переносимости аифотерицина В при его ингаляционном введении.

Ингаляционное воздействие водного раствора аифотерицина В о 8-го до 16-й дни беременности в концентрации 10 мг/мд (расчетная доза 1,4 мг/кг) вызвало достоверное уменьшение по'сравнению о контролем краниокаудалъного размера плодов, средней массы плодов, а также задержку тейпов оссифшсадии ыетакарпаль-ньос и мэтатарзальных костей. Ингаляционное воздействие водного раствора метаыфоцина о 6-го во 16-й дав беременности в концентрации 10 мг/мл (расчетная доза 1,4 иг/кг) вызвало уменьшение средней массы плодов и задержку темпов оссифшкадаи мэтатарзальных костей к грудяны (табл. I).

Таким образом, внгкяадаояяое воздействие в период плацен-тации и органогенеза вызывает на фоне токсикоза самок замедление роста и развития плодов крыс, более выраженное при воздействии амфотерицкна В.

При сопоставлении результатов» подученных при ингаляцяон-

Х'айяхш I

Результаты исследовании эмйриотоксического действия амфотерицина £ и метаыфоцина при ингаляционном воздействии водных растворов антибиотиков в концентрация Ю мг/шг ^расчетная доза 1,4 мг/кг) на белых крысах с 6-го по 16-й дай беременности

иоказатеде

Дистиллированная вода Амфотерицин Б Ыетамфовдн

Количество беременных самок Пре.щшлантадионная смертность, % йостикадантационная смертность, % Масса плодов, г

20

7,3514,25 5,26+2,17 2,43+0,04

Краниокауднлъяый размер, мм

29,14+0.17 Состояние костное системы

Количество исследованных плодов

Количество плодов с числом точек окостенения грудины < 4, %

Число центров оссифшсашш метш.-фпадышх костей справа слева

ыегатарзалъннх косте£ справа слева

96

45,97+5,96

2,87+0,05 2,87+0,05

2,99+0,01 2,99+0,01

20

4,49+1,49 4,22+1,06 2,13+0,04 КС, 001 28,47+0,25

90

57,98+5,96

2,73+0,04 2,79*0,04 К0,05 2,79+0,06 2,82+0,06 КО,05

20

2,55+0,99 4,69+1,99 £.11*0,05 ?<С,001 28,81+0.26

104

67,03+5,96 Р<О7О5

2,74+0,05 2,76+0,06

2,79+0,06 2,77+0,06

КО,05

I

®

I

ном и внутривенном путях введения амфотертоша В и мвтамфоцииа, можно отметить, что более выраженная фетотоксичность имела место при ингаляционном воздействии водных растворов антибиотиков (за исключением введения мвтаыфошша в дозе 3,3 мг/кг).

Экспериментальные и клинические данные свидетельствуют о том, что отставшие в росте и развитии скелета плодов - это яеспецифический ответ на большинство экстрагенптальних заболеваний и осложнений беременности или другие неблагоприятные воздействия на материнский организм.

Характер отмеченных при обоих путях введен;« отклонений у плодов крыс: замедление роста и развития, увеличение постнмл-лаятациошой гибели; сжмггоин токсикоза у самок, а также известная токсичность амфэтертвша В и мэтамфощша являются свидетельством наличия опосредованного воздействия на развитие плодов, обусловленного их обиетокснческпм действием на материнский организм.

Установлено, что пороговая доза амфотерсцина В при внутривенном введении - 1,7 мг/кг, метамфоцина - 2,5 мг/кг.

1.3. Из£чешш_8мб£иотоксиээского 5ействш1_антибиотяков при их введении в амототаческую полость

Прямое действие амфотеряцша В и метамфоцина на плод с исключением эффектов, индуцированных воздействием данных антибиотиков иа самок, было исследовано при их введении в амяиотп-ческую полость.

Введение аифотерицина В в амниотаческую полость на 13-й, 14-Й и 15-й дни беременности о созданием в ней расчетной концентрации 1,50 икт/к'л (в Ю раз превышавшей максимально достижимую в крови самок при внутривенном введении в дозе 1,7мг/кг) не оказало повреждающего действия.

Введение метамфоцина иа 13-И день беременности в амяиотп-ческую полость с созданием в ней расчетной концентрации антибиотика 36,0 мкг/ш (в 10 раз превыпаадей максимально достижимую в крови самок лря внутривенном введении в дозе 4,0 мг/кг) также не оказало повреждающего действия.

Прп введении метамфоцина на 14-й день беременности п создании в ашшотической полости концентрации 3,6 и 36,0 мкг/ил обнаружено замедление темпов осс#икащш мэтакарппльянх я ме-

татарзшгышх костей в грудины.

Введение метамфоцша на 15-й день беременности с созданием концентрации 36,0 нкг/ш в вшшогвческой полости оказало тератогенный аффект - отмечено достоверное увеличение (У « 34, Р<0,05) количества плодов с наружными уродствами (отсутствие пальцев на коне гостах, изогнутый хвост). Количество плодов о наружными уродствами в подопытной группе Сило 24,00*10,28$, а контрольной - 7,За£3,652. Яри изучения скелета плодов выявлено ааыедяение теыаов оссифшшции ыататарзальных костей в подопытной груше.

Таким образом, Бнутриашшотическно инъекции мвтаи&оцина выявили стадиоспецкфичность его действия на алод при непосредственное контакте. Результаты, полученные при введении антибиотиков в амниотичвскую полость, ври сопоставления с данными по внутривенному и ингаляционному введениям, подтвердили опосредованный механизм действия амфотерицина В и ыаталфзцина при их внутривенном и ингаляционной путях введения и одновременно показали потенциально тератогешзость метамфоцдна.

П. Экснершеыгальное из^чвние^развития и поведения потомства крж:_п£сле_ваутравешого_введеяил аи^>оте£1щила_В и иетам^оцина в пренатшшном_периода

При внутривенном введении шгротэршщна В о 12-го по 22-й дай беременности гибель саыок составила 46,при введении ыетамфоцина - 6,3%.

Внутривенное введение аи^отерицина В и метшлфоцшт в пре~ натаяьном периоде вызвало отставшие в физическом развитии потомства крыс. Наблюдалось отставание в появлении первичного волосяного покрова после введения амфотерицина В и ыетаыфоцина; отставание в прорезывании резцов на один день выявлено только после введения амфотерицина В; отставшие по ыассе тела на 4-й дань после родов било отмечено только после введения метамфо-цина. Таким образоц, отставание в физическом развитии потомства крыс, получавших внутривенно амфотерищш Ч ь'пренатаяьном периоде, продолжалось не более двух недель после родов, после введения ыетшлфоцшт - не более одной недели.

По окорости созревания оеиоорио-двигателшых рефлексов в период вскармливания различий среди потомства не отмечено.

Изучение эмоционально-двигательного поведения потомства крыс в "открытом поле" выявило увеличение времени сидении неподвижно (более выраженное после введения амфотерицина В) а снижение эмоциональности посла введении амфотерицина В и мета-ыфоцииа. Двигательно-исследоаательская активность, ориентировочно-исследовательская активность, ориентировочная реакция не отличались от таковых, в контрольной группе.

Изучение двигательной активности в гшогоальтернативном лабиринте показало, что потомство крыс после введения метаыфо-цина совершает достоверно меньше поворотов, возможно, это объясняется их несколько большей скоростья движения по лабиринту. Число пересеченных зон и средой скорость движения по лабиринту достоверно не различаются среда потомства крыс подопытных групп.

Изучение внутренних органов красят выявило увеличение относительна массы печени после введения метаыфоцина и увеличение относительной масон печени и селезенки поело введения ач-фотеркцана В. Гистоморфологические изменения в печени и почках крысят после введения амфотерицина В а метамфоцина были незначительны.

Иолученныг, результаты согласуются с данными литературы о частом сочетании нарушений поведения у потомства с изменениями со стороны других систем, в том числа о отклонениями в физическом развитии и о возможном изолированном нарушении одной из форм поведения при сохранении других форм без изменения.

При сопоставлении данных по физическому развитию, эмоционально-двигательному поведению в "открытом поле", относительной массе внутренних органов крысят можно отметить, что в группе посте введения амфотерицина В изменения во сравнению о контролем выражены в большей степени, чем в группе после введения метамфоцина. Очевидно, это связало о более выраженным токсикозом у самок во время введения антибиотика в пренатальном периоде а еще раз подчеркивает наличие опооредовашого механизма действия амфотерицина В.

В литературе также отмечается возможность непрямого воздействия лекарств, вводимых в период беременности самке, на постнатальное развитие потомства.

И. Из^чшие_5^шсш1ш^еята£ного перехода

Полученные с использованием микробиологического метода данные свидетельствуют, что амфотерицин В и метамфоцш после однократного и курсового введший не проникают через "плацентарный барьер" к плоду ни в свободном, ни в связанном виде. Амфотерицин В и метамфоцш не были обнаружены в печени, почках, легких, сердце плодов, где обычно определяются наибольшие концентрации других антибиотиков*в плодах. Отсутствие следов антибиотиков в амдаотичвской жидкости (в том числе н поело курсового введения) исключает возможность' параплацентарного перехода. Дополнительно можно отметить, что значительная часть амротерицяна В и матамфоцина в плаценте находятся в связанном со стериноаыш структурам клеток состоянии, о чем свидетельствует возрастание определяемой концентрации антибиотиков при 'экстракции их органическими растворителями из гомогенатов плаценты.

Результаты, полученные с использованием радиоизотояного метода на крысах и кроликах, подтвердили, что метамфоцин не проникает к плоду и в амниотическую жидкость при однократном и курсовом введениях как в конце беременности, так и на более ранних сроках, что отличает его от многих других лекарственных средств (табл. 2).

При' сравнении скорости снижения концентрации метамфоцина в плаценте (относительно снижения сывороточного уровня) у крыс а кроликов в различные сроки беременности можно отметить, что скорость элиминации метамфоцина из плацентарной ткани зависит от видовых особенностей строения плаценты и от стадии ее развития.

Отсутствие трансплацентарного перехода аыфотершоша В и метамфоцина, очевидно, связано с их большой молекулярной мао-сой, ионным характером молекул, с тем, что 90-955? антибиотиков находится в связанном с компонентами сыворотки состоянии, что, как известно, препятствует траясплацентарному переходу.

Данные доступной литературы об определении аыфотерищша В в амниотической жидкости и сыворотке крови пуповины у человека ограничены (2 публикации) и сообщаемые результаты были подучены в момент* родов, когда условия трансплацентарного перехода

Та&пша 2

Содержание метамфоцина в скворотке крови самок крыс и кроликов, печени к почках плодов, плаценте, амниотической жидкости после его внутривенного введения в дозе 3,3 мг/кг на 20-й день беременности крысам и в дозе 4,0 мг/кг на 27-£ день беременности кроликам

(определение радаоизотопнш методом)

Вид животных

.время

Концентрация метамфоцина, мкг/мл Смкг/г)

после введения, мин. Сызооотка крови "самки Цдацента Амяиотическая жидкость Сыворотка крови пуповины Печень плода Почки плода

10 4,37+0,64 0,45+0,03 0 0 0 0

30 3,58+0,12 0,36+0,02 0 0 0 0

60 Г,8&+0,16 0,31+0,03 0 0 С 0

180 1.38+0,10 0,27+0,02 0 0 0 0

Крысы

Кролики 10 11,19+0,35 I0.06sP.06 О ООО

30 7,66^0,02 7,50+0.03 О ООО

оО 5,05+0,36 £,05+0,08 С ООО

могли быть резко изменены. Возможно, отсутствие трансплацентарного перехода, выявленное в опытах на крысах и кроликах, обусловлено ыежввдовдага различиями между грызунами и человеком.

Результаты изучения траясплаценгарного перехода амфотери-цияа В и метамфоцина подтверждают, что выявленная при внутривенном введении фвтотоксичность, в том числа и отклонения в постнатальном развитии, является следотвием только общетоксического действия данных антибиотиков на организм самок, а прямого повреждающего действия на плод нет.

1У. И8^чение_распредетв15ш_ам1ютершдаяа В и метамфоцрна при их введении в абиотическую полость

При изучении распределения амфотерицина В после его введения в амняотичвскую полость было выявлено, что се сохраняется до 24 часов в амниотической жидкости, находится в основном в связанном состоянии, с тканями плодов и плаценты связывается в незначительных количествах. Возможно, этот факт объясняет отсутствие тератогенного аффекта при введении амфотерицина В в аминотическу» полость.

Мегаыфоцин после его введения в амниотическую полость на 14-й день беременности определялся в значимых концентрациях в течение 24-х часов в амниотической жидкости и плодах. Максимальная концентрация метамфоцина в плодах была через 10 минут (1,67+0,24 мкг/г и 2,25+0,16 мкг/г при экстракции ДШ), содержание* антибиотика в плодах было в 2-2,5 раза ниже, чём в амни-отичеоюой жидкости, значительная часть метамфоцпна в исследуемых субстратах находилась в связанном состоянии.

Концентрация метамфоцина после его введения на 15-й день беременности в амниотической жидкости через 10 минут после инъекции била 5,28+0,52 мкг/мл и 12,32+1,45 мкг/мл при экстракции ДШД. В плодах. содержание метамфоцина через 10 минут было 0,64+0,13 мкг/г. Через 48 часов ыетамфоцин не находили или он определялся в виде следов микробиологическим и радиоизотопа ш методами в плодах и амниотической жидкости. Значительная чаоть антибиотика в плодах в амниотической жидкости находилась в связанном состоянии (табл. 3).

Полученные при изучении распределения метамфоцина данные позволяет предполагать, что он мог быть непосредственной при-

Таслипа 3

Содержание ыетамфоцина в амниотической гидкости, плаценте и плодах крыс после внутриамаиотическнх инъекшй на 14-9 и 15-2 дни беременности с создание» расчетной концентрации 36,0 ыкт/ыл (определение микробиологическим методом)

Время

День беое- пооле

Концентрация метамфоцина, мкг/мл (мкг/г)

менностк

введения.

Амниотическаа жидкость экстракция

Плоды экстоакшн

Плацента экстракция

шн. ДШ буфером ДША буфером ДЖА

14-й 10 4,68+0,32 10,71+1,03 1,67+0,24 2,25+0,16 0,74+0,21 _

60 3,78+0,21 8,66+1.26 1,47+0.30 3,47+0,43 0,88+0,25 1,1+0,48

180 3,05+0,26 6,95+0,62 1,46+0,23 3.65+0,64 0,80+0,0£ -

24 ч. 0,78+0,11 - 0,67+0.32 - 0-сл. -

15-й 10 5,28+0,52 . 12,32+1,45 0,64+0,13 - 0,35+0,05 -

60 4.67+0,53 9,45+0,82 0,68+0,13 2,50+0,41 сл. сл.

180 3,36+0,41 4,16+0,58 1,10+0,15 - сл. -

24 ч. 0,92+0,38 - 0,27+0,06 - 0-сд. 0-сл.

48 ч.Х/ 0-сл. 0-сл. 0-сл. 0-сл. 0 0

ел

I

й V

х/ - определение, радиоизотопным методом

чиной отмеченных при внутраашиотических инъекциях уродств и замедления темпов оссификацни.

Выявлено различие в степени и длительности связывания о тканями плодов мэзду амфотерицином В и метамфоцином при изучении распределения антибиотиков после внутриамниотических инъекций.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что выявленная при внутривенном введении и ингаляционном воздействии водных растворов амфотерицина В и метамфо-щша в период органогенеза фетотоксичность, а также отклонения в постнатальном развитии после внутривенного введения антибиотиков в пренатальном периоде являются следствием общетоксического действия амфотерицина В и метамфоцина на материнский организм. Отсутствие трансплацентарного перехода данных антибиотиков исыючает возможность их прямого действия на плод. Внут-риамниотичеокие инъекции выявили потенциальную тератогенность метамфоцина при непосредственной воздействии на плод.

Приведенные результаты согласуются с данными литературы. Общетоксичеокоа действие амфотерицина В на экспериментальных животных (в том числе нефротоксическое действие и отставание в приросте массы тела) неоднократно было описано в литературе. Одновременно во многих работах отмечалось, что токсикоз матери может являться этиологическим фактором вдбрио/фетотоксичности. В частнооти, при поражении функции почек у матери наблюдалось увеличение гибели плодов и нарушения развития плодов при отсутствии прямого действия на них.

вывода

1. Внутривенное введение амфотерицина В в дозе 1,7 мг/кг и метамфоцина в дозах 2,5 мг/кг и 3,3 мг/кг в доимплантациошшй период не оказывает эмбриотоксического действия.

2. Внутривенное введение в период шшцентацки и органогенеза амфотерицина В в дозе 1,0 мг/кг (эквивалентной терапевтической) не оказывает фетотоксическбго действия. Внутривенное введение амфотерицина В в дозе 1,7 мг/кг (в два раза выше терапевтической и на уровне максимально переносимой) и метамфоцина в дозе 2,5 ыг/кг Сна уровне терапевтической) вызывает уменьшение краниокаудалыгого размера плодов крыс на

фоне токсикоза ошок. Бнутривеццое введение метамфоцина в период олацантацйм и органогенеза в дозе 3,3 иг/кг (на уровне терапевтической и близкой к максимально переносимой) вызывает увеличение поотимплаятационной гибели также на фоне токсикоза самок.

3. Ингаляционное воздействие водных раотворов амфотерицша В и метамфощша в концентрации Ю мг/мл (расчетная доза 1,4 мг/кг) - на уровне терапевтической, в доиыилантационный период не оказывает выбриотоксического действия.

4. Ингаляционное воздействие водных растворов амфотерицина В и метамфощша в период шшцентацих и органогенеза в концентрации 10 мг/мл (расчетная доза 1,4 мг/кг) - на уровне терапевтической - вызывает замедление роста и развития плодов крыс, более выраженное при воздействии амфотерищша В.

б. Внутривенное введение аыфотерицина В в доза 1,7 мг/кг и метамфощша в дозе 3,3 мг/кг в пренаталышй период вызывает задержку физического развития, снижение эмоциональности и увеличение относительной маооы печени потомства крыо, изменения более выражены после введения аыфотерицина В.

6. Введение амфотерицияа В в амниотячеокую полость на 13-й,

14-й и 15-Й дай беременнооти с созданием в ней концентрации, превышающей максимально достижимые в крови самок посла внутривенного введения в дозе 1,7 ыг/кг, не оказывает тератогенного действия.

7. Введение метамфоцина в шшиотаческую полость о созданием в ней концентраций, превышающих максимально достижимые в крови самок после внутривенного введения в доза 4,0 мг/кг, на 13-й дань беременнооти на оказывает тератогенного действия, на 14-й день - вызывает замедление темпов оссификации, на

15-й день - вызывает появление уродств и замедление темпов оссификации. '

в. Не доказана возможность транспдацентарного перехода аыфотерицина В и метамфоцина ни в свободном, ни в связанном виде. Антибиотики не определялись в плодах и амниотичаской жидкости микробиологическим методом, в том числе с использованием органических растворителей, и радиоизотопным методом (метамфоцин) после однократного и курсового введений в различи ые сроки беременности.

U. При введении амфотерицина В в анниотическую полость и сов-дании в ней концентрации 1,50 мкг/кл определяются слеш антибиотика в тканях плодов и плаценты в течение 24-х часов. иетаифоцин после введения в амниотическую полость в создании в Hell концентрации 86,0 икг/нд определяется в ана-чииых концентрациях в тканях плодов и плаценты в течение 24-х часов.'

10. Биявлениая при внутривенной и ингаляционной путях введения фетотоксвчность амфотерицина £ и метамфоцина является следствием обадетоксического действия антибиотиков на материнский организм.

11. иетаифоцин можно испольвовать о осторожностью у беременных, при постоянной контроле за состоянием матери и плода.

Список публикаций по теме диссертации

I. Мохученок S.A. Изучение змбриотокеического и тератогенного действия амфотерицина В у крыс. - В кн.: Тезисы докладов конференции молодых ученых "Творчество молодежи - научно-техническому прогрессу" (г,Ленинград, 24-26 октября 1988г.). - Ленинград, 1988. С.75.

Ii. Ыогученок Б.А. Изучение эмбриотоксического действия нетил-проязводного аифотерицина В у крыс при ого введении в аи-ниотическуо полость. - В кв.: Тевисы докладов конференция молодых ученых "Совреыенние проблемы получения лекерствен-ных препаратов" (г.Ленинград, 15-17 мая 1990 г.). - ц., 1990. С.77.

3. Ыогученок Б.А. Воздействие полаановых антибиотиков вмфоте-рицикв В и натилпроизводного выфотерицяна В ва зародыши крыс при ингаляционных затравках. - Таи же. С.82.

4. Могученок Е.А. изучение эмбриотоксического действия амфотерицина В у крыс при его введении в вындотическую полость. -Там хе. С.90.

5. Могученок Е.А. Изучение распределения амфотерицина В и ме-.тидпроизводного аифотерицина В при их введении в амниота-]ческую полость у крыс. В кн.: Тезисы док; дов Всесоюзной

конференции "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций" Сг.Москва, 22-24 октября IS9I г.). - И., ■1991. С.446-Ш.

6. Иогученок Е.А. Изучение транстгацоптарного перехода иотил-производпого амфогерицнна В на белых крысах при внутривенном введения// Антибиотики я хишюторания. - 1»у1. - МО. •• С.36-33.

?. Ногучонок Е.А., Моисеева М.В. Ивучоаио развитая н поведения потомства крыс после внутривенного введения омфотериг одна в я метилпроиэводного аифотеривдна В в пренатальннй период. - В кн.: Тезисы докладов зсосорзной научной конференции "Медико-биологические и гнгяоничоскпе аспекты охраны окружающей среды на предприятиях медицинской промышленности" ( г. Москва , ВН11Ш, 2-5 Декабря 19»! г.). - I!., 1991. С.93.

С. Ногученок Е.А. Изучение эмбриотоксичвского и тератогенного действия аыфотеринина В и кетяяпроизводного аифоторивдна В у крыс при внутривенкоы введенви л введении в екнтачос-кую полость//Антибиотики и химиотерапия. - 1992. -С.25-28. 1