Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Сравнительное фармакогностическое исследование лопуха войлочного и лопуха большого

На правах рукописи

Величко Виктория Владимировна

Сравнительное фармакогностическое исследование лопуха войлочного и лопуха большого

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 6 дпр 2012

Самара - 2012

005017977

005017977

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательн учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственн медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российск Федерации

Научный руководитель: Ханина Миниса Абдуллаевна

Официальные оппоненты: Фурса Николай Сергеевич

доктор фармацевтических наук, профессор

Киселева Татьяна Леонидовна

Доктор фармацевтических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ярославская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, заведующий кафедрой фармакогнозии и фармацевтической технологии

Доктор фармацевтических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М.Сеченова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, профессор кафедры фармакогнозии

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессиональнс образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерст здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « /Г» <иЮ£- 2012 г. в часов на заседании Диссертационнс совета Д 208.085.06 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высше профессионального образования «Самарский государственный медицинский университе Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адре< 443079, г. Самара, пр. К. Маркса, 165 Б.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетнс образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарск государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социально развития Российской Федерации (г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171).

Автореферат разослан « 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

кандидат фармацевтических наук, доцент

И.К. Петрухина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время онкологические заболевания являются ,ной из актуальных проблем в медицине. Они привлекают повышенное внимание щества и затрагивают многие аспекты социальной жизни больного. В России, а также большинстве развитых стран мира отмечается рост заболеваемости злокачественными вообразованиями и смертности от них. На официальном учете онкологических льных в Российской Федерации в настоящее время находятся более 2 миллионов 300 [сяч пациентов.

Современная химиотерапия, применяемая в онкологии, позволяет не только юдлить жизнь больным, но и во многих случаях добиться их полного излечения. 1нако высокая общая токсичность противоопухолевых препаратов приводит к звитию многочисленных осложнений, которые снижают эффективность лечебных :роприятий и качество жизни больных, причем не только во время индукции ремиссии, I и в отдаленный период. Известно, что в качестве средств поддерживающей терапии, учшающих состояние онкологических больных, с успехом могут применяться карственные растения. Биологически активные вещества (БАВ) лекарственных стений способствуют выведению из организма токсичных метаболитов, появление торых вызвано как течением опухолевого процесса, так и токсичностью проводимой ■чевой и химиотерапии. В отдельных случаях лекарственные растения способны >тенцировать противоопухолевый эффект. С целью снижения токсичности [миопрепаратов в настоящее время большое внимание уделяется изучению таких стений, как аир болотный, лабазник вязолистный, подорожник большой (Пашинский Г., 1991; Гольдберг Е.Д., 2008). Наше внимание привлекли два вида растений рода ■ctium: Arctium tomentosum Mill, и Arctium lappa L. В народной медицине надземную и >дземную части растений используют при раковых опухолях различных органов как токсикационное, регулирующее обмен веществ, мочегонное, противовоспалительное, тисептическое, ранозаживляющее средство, и они обладают обеспеченной сырьевой зой. В официнальной медицине применяются только корни, а надземная часть, (евосходящая по массе, остается невостребованной, что нерационально с точки зрения ерсжсния природных ресурсов.

В связи с этим актуально определить возможность применения надземной и щземной частей A. tomentosum и A. lappa в медицине для снижения токсического «действия противораковых препаратов.

Цель и задачи исследования. Целью диссертационной работы является 1авнительное фармакогностическое исследование листьев и корней лопуха войлочного лопуха большого по обоснованию возможности применения их в медицине в качестве 1едств для профилактики осложнений полихимиотерапии.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Провести сравнительный фитохимический анализ листьев и корней лопуха войлочного и лопуха большого и изучить компонентный состав доминирующих групп биологически активных соединений (БАС).

2. Определить оптимальные сроки заготовки сырья. Разработать параметры подлинности и доброкачественности листьев и корней исследуемых видов лопуха.

3. Получить сухие экстракты из листьев и корней лопуха войлочного и лопу большого, изучить химический состав основных групп БАВ сухих экстрактов выявить их биологическую активность.

4. Разработать проект нормативного документа на сырье «Лопуха листья».

5. На основании исследований биологической активности внести изменения действующую фармакопейную статью на сырье «Лопуха корни» по расширени спектра фармакологической активности.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное фармакогностическ исследование двух видов рода Arctium, произрастающих на территории Сибир собранных из разных точек ареала по фазам развития и органам растения.

Впервые проведен сравнительный микроскопический анализ надземной подземной частей A. tomentosum и A. lappa и выявлены их микродиагностичесю признаки.

Впервые детально изучен качественный состав и количественное содержаю основных групп БАВ листьев и корней A. tomentosum и A. lappa (флавоноидс гидроксикоричных кислот, кумаринов, кислоты аскорбиновой, полисахаридо дубильных веществ, аминокислот, макро- и микроэлементов) в зависимости от oprai растения, места произрастания и фазы его развития с использованием современнь методов анализа. Определена фаза развития растения, оптимальная для сбора сырья.

Изучен компонентный состав соединений фенольного комплекса A. lappa и . tomentosum, произрастающих на территории Сибири. Впервые установлено налич! квердетина рамнозида, ферулловой, лг-гидроксикоричной, галловой кислот, кумарин умбеллиферона, скополетина, эскулина, эскулетина.

Впервые определено содержание в надземной и подземной частях A. tomentosu фракций полисахаридов (водорастворимых, пектиновых веществ, гемицеллюлозы А и Е В листьях лопуха большого впервые идентифицированы аминокислоты лейци триптофан, пролин, цистеин, глутамин, орнитин; в корнях - валин, лейцин, триптофа треонин, цистеин, серин, орнитин. В листьях лопуха войлочного - триптофан, проли цистеин, глутамин, орнитин; в корнях лопуха войлочного - валин, лейцин, триптофа треонин, лизин, гистидин, пролин, цистеин, глутамин, серин, орнитин, аспарагинов! кислота.

Впервые в листьях лопуха войлочного и лопуха большого определены 45, в корш — 64 элемента и их количественное содержание.

Проведение фармакологических исследований впервые позволило определит специфическую биологическую активность листьев и корней лопуха. Сухие экстракт уменьшают степень выраженности и предотвращают развитие процессов деструкции печени, которые развиваются при проведении полихимиотерапии (ПХТ).

Практическая значимость работы. Проведен сравнительнь: фармакогностический анализ листьев и корней лопуха войлочного и лопуха болыпог Предложен новый вид лекарственного растительного сырья - лопуха листь Определены оптимальные сроки заготовки лекарственного растительного сырь Получены сухие экстракты, определено количественное содержание в них БА] Показано, что сухие экстракты листьев и корней лопуха войлочного и лопуха болыно1 могут использоваться в качестве средств для профилактики осложнени полихимиотерапии. Разработаны показатели подлинности и доброкачественности лопу?

[стьев и корней. Составлен проект фармакопейной статьи «Лопуха листья» и юдложено внести изменения в фармакопейную статью на сырье «Лопуха корни».

Результаты микроскопических и химических исследований использованы для зработки методик диагностики и определения качества сырья лопуха корни и лопуха [стья и включены в проекты фармакопейных статей «Лопуха корни» и «Лопуха [стья». Материалы диссертации использованы при составлении методического пособия Ликродиагностические признаки двух видов рода Arctium (A. tomentosum и A. lappa)». шное методическое пособие используется в учебном процессе и научных следованиях кафедры фармакогнозии и ботаники ГБОУ ВПО НГМУ инздравсоцразвития России, кафедры фармакогнозии с ботаникой и основами иотерапии ГБОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России, кафедры фмакогнозии ГБОУ ВПО ПГФА Минздравсоцразвития России, кафедры фмакогнозии с курсом ботаники и экологии, кафедры фармации ФПК и ППС, а также в НИЛ при ГБОУ ВПО СибГМУ Минздравсоцразвития России.

Основные положения, выносимые на защиту: результаты сравнительного фитохимического анализа компонентного состава и шичественного содержания доминирующих групп БАВ листьев и корней A. tomentosum A. lappa;

оптимальные сроки заготовки сырья лопуха корни и лопуха листья; результаты фармакологических испытаний сухих экстрактов; параметры подлинности и доброкачественности сырья.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук, дссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований осударственного бюджетного образовательного учреждения высшего юфессионального образования «Новосибирский государственный медицинский шверситет» и является фрагментом исследований кафедры фармакогнозии и ботаники Г® государственной регистрации 01200807420).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и >суждены на 68-й Всероссийской итоговой студенческой научно-практической шференции, посвященной 105-летию проф. В.Ф. Гливенко (г. Красноярск, 2004), 1-й уденческой научной конференции Сибирского федерального округа «Качество жизни lk критерий санитарно-эпидемиологического благополучия» (г. Омск, 2005), ежегодной шкуре-конференции студентов и молодых ученых «Авиценна» (г. Новосибирск, 2005, )06), межрегиональной научно-практической конференции «Экспериментальные и [инические исследования новых лекарственных средств» (г. Томск, 2006), героссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии [стителыюго сырья» (г. Барнаул, 2007), 11-м международном съезде «Фитофарм» (г. гйден, 2007), II международной научной конференции «Химия, технология и здицинские аспекты природных соединений» (г. Алматы, 2007), научной конференции удентов и молодых ученых (г. Пермь, 2008), V Всероссийской научной конференции . Уфа, 2008), II Всероссийской научно-практической конференции с международным истаем «Ученые Урала и Сибири - развитию отечественной фармации: от синтеза до шовационных лекарственных средств», посвященной 300-летию М.В. Ломоносова (г. овосибирск, 2011).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 20 научных работ, из них ■риалах, рекомендуемых ВАК - 4 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 1! страницах машинописного текста, содержит 53 таблиц и 90 рисунков. Диссертащ состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной объектам и методг исследований, трех глав собственных исследований, выводов, а также спиа литературы, включающего 186 наименований, из них 34 источника иностраннь авторов.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и зада1 исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы, также изложены основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе представлен обзор литературы по современному состояни исследований растений рода Arctium, в котором обобщены и систематизировав ботаническая характеристика, сведения по изучению химического состав биологической активности и применению в народной, официнальной и зарубежш медицине, приведена биологическая активность основных групп БАВ, содержащихся A. tomentosum Mill, и A. lappa L.

Во второй главе (объекты и методы) приведены сведения об объектах изучения, методах и приборах, используемых в экспериментах.

В главе 3 экспериментальной части приведены результаты сравнительно) исследования качественного состава и количественного содержания основных груг БАВ в листьях и корнях лопуха войлочного и лопуха большого.

В главе 4 приводятся показатели подлинности и доброкачественности сыр] лопуха листья и лопуха корни.

В главе 5 экспериментальной части приводится способ получения сухих экстракте из листьев и корней A. tomentosum, анализ количественного содержания в них основнь групп БАВ и результаты собственных исследований биологической активное! экстрактов.

Диссертация завершается общими выводами по работе, списком литературы приложениями. В приложения вынесены хроматограммы, проекты фармакопейнь статей «Лопуха листья» и «Лопуха корни», акты внедрения.

Результаты, полученные при проведении исследований, обработаны статистичесв и представлены в таблицах и на рисунках, которые приведены в тексте диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

Arctium tomentosum Mill, и Arctium lappa L. - двулетние травянистые растени образующие на первом году жизни прикорневую розетку листьев, на втором - стебель листьями и соцветиями. По внешним признакам данные виды трудноразличим! поэтому нами проведено сравнительное фармакогностическое исследование листьев корней лопуха войлочного и лопуха большого первого и второго года жизни с цель: определения оптимальных сроков заготовки сырья и необходимости различать д£ сходных между собой вида при заготовке.

Объекты исследования - образцы гербаризированных растений и образцы свежеп консервированного, воздушно-сухого сырья - надземной и подземной части

tomentosum и A. lappa. Образцы собраны из разных мест естественного произрастания . территории Новосибирской области в период 2004 - 2008 гг.

Обнаружение основных групп БАВ, компонентный состав и их количественное держание определяли с помощью общепринятых в фитохимическом анализе и временных методов исследования, в частности, спектрофотометрии, юматоспектрофотометрии, БХ, ТСХ, ВЭЖХ, масс-спектрометрии с индуктивно язанной плазмой.

Обнаружение БАВ в листьях и корнях лопуха методом ВЭЖХ проводили на ечественном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» с многоволновым тектором и последующей компьютерной обработкой результатов анализа в программе ЛультиХром» для Windows. Хроматографическая идентификация обнаруженных БАС юводилась в сравнении со стандартными веществами. Спектрофотометрическое следование проводилось на приборе СФ-56.

Анатомо-морфологический анализ надземных и подземных частей растений шолнялся на микроскопе «Микмед» при увеличении в 70, 150, 280 и 600 раз. Рисунки шолнялись на рисовальном аппарате РА-7а, фотографии - при увеличении до 1000 раз помощью микроскопа «Acsio Vision». Присутствие различных включений доказывали юведением общепринятых гистохимических реакций.

Стандартизацию цельного и измельченного сырья проводили согласно методикам D XI. При разработке проекта ФС на сырье руководствовались ОСТ 91500.05.001-00 Стандарты качества J1C. Основные положения».

Изучение биологической активности исследуемых экстрактов проводили на 140 лых беспородных мышах двухмесячного возраста массой тела 20-22 г. лтотоксическое повреждение печени создавали однократным внутривенным введением мплекса противоопухолевых препаратов в дозах, равных 1/5 ЛД50: циклофосфан - 50 Укг, доксорубицин - 4 мг/кг, винкристин - 0,1 мг/кг и преднизолон - 5 мг/кг массы ла. Части животным внутрижелудочно через зонд вводили сухой экстракт листьев (или хой экстракт корней) после ПХТ, а части - до и после ПХТ в дозе 100 мг/кг в течение 3 7 дней (Здн, 7дн). СЭК (и СЭЛ) предварительно растворяли в воде очищенной, объем зовой дозы составлял 0,2 мл. Препарат сравнения - а-токоферол ацетат (а-Т) в дозе 1,7 •/кг. а-Т в крахмальной слизи вводили животным в аналогичном режиме в объеме 0,2 I. Контролем служили интактные животные, животные с ПХТ и животные, получавшие стракты лопуха в течение 10 и 14 дней без проведения ПХТ. Забор материала для »следующего патоморфологического исследования производили на 11 и 15 сутки. Для стологического исследования изготавливали микропрепараты печени. При )рфометрическом исследовании на микроскопе Axioimager AI ("ZEISS", Германия) при еличении в 1000 раз подсчитывали объемные плотности нормальных и дистрофически мененных гепатоцитов, некрозов паренхимы печени и численную плотность ¡уядерных гепатоцитов.

Для обработки полученных результатов использовали программы: Gel-Pro Analyzer 0, Adobe Photoshop С52, VideoTes Morphology 5. Статистическую обработку шученных результатов проводили с помощью программ статистической обработки нных Statistica MS Excel, OriginPro 7.5. Для выявления статистической значимости зличий использовали параметрический критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Фитохимическое исследование корней и листьев лопуха войлочного и лопуха большого

Выявлено, что в листьях и корнях первого и второго года жизни л. войлочного и большого присутствуют полисахариды, инулин, полифенольные окисляемые соединеь (дубильные вещества преимущественно гидролизуемой группы), флавонощ гидроксикоричные кислоты, кумарины, аскорбиновая кислота, аминокислоты, сапонины отсутствуют крахмал, алкалоиды, антраценпроизводные, сердечные гликозиды (табл. 1).

Таблица

Результаты анализа компонентного состава основных групп БАВ листьев и корней лопуха

(Новосибирская область, фаза полного развития листовой пластинки)

Группа БАВ

Arctium tomentosum Mill.

Arctium lappa L.

Гидроксикоричные кислоты

хлорогеновая, кофейная, феруловая,

_.о-гидроксикоричная_

хлорогеновая, кофейная, ферулловая, .ц-гидроксикорична

Фенолкарбоновые кислоты

Флавоноиды

Рутин, кверцетин и кверцетина _рамнозид_

рутин и кверцетин и кверцетина рамнозид

Кумарины

кумарин, умбеллиферон, скополетин,эскулин,эскулетин

кумарин, умбеллиферон, скополетин,эскулин, эскулети»

Полифенольные

окисляемые _соединения

преимущественно гидролизуемой группы

преимущественно гидролизуемой группы

Аминокислоты

валин, лейцин, триптофан, треонин, лизин, гистидин, пролин, цистеин, глутамин, серии, орнитин, _аспарагиновая кислота_

валин, лейцин, триптофан, треони лизин, гистидин, пролин, цистеин, глутамин, серин, орнитин, _аспарагиновая кислота

Хроматографический анализ водного, хлороформного и водно-спиртов: извлечений показал, что в листьях и корнях A. tomentosum и A. lappa содержится менее 25 фенольных соединений. Из них восемь являются флавоноида! (идентифицированы рутин, кверцетин и кверцетина рамнозид), восемь - кумарина! (идентифицированы кумарин, эскулетин, эскулин, умбеллиферон и скополетин), девять гидроксикоричными и фенолкарбоновыми кислотами (идентифицированы кофеин: хлорогеновая, феруловая, м-оксикоричная и галловая кислоты).

Методом препаративной рехроматографии были выделены индивидуальн; вещества и сняты их спектры поглощения в УФ-области света. Полученные результа подтверждают присутствие в исследуемых образцах хлорогеновой, кофейне феруловой, .м-гидроксикоричной, галловой кислот, рутина, кверцетина, кумарш эскулетина, умбеллиферона (рис. 1,2).

'| ' ' ' ' I ■ ' ■ ' I.........I

300 230 300 330 400

Рис. 1а. Спектр поглощения кислоты хлорогеновой (Х=32б нм)

Рис. 1в. Спектр поглощения кислоты феруловой (Х=317 нм)

200 230 300 330 «00

Рис. 16. Спектр поглощения кислоты кофейной (>.=314 нм)

Рис. 1г. Спектр поглощения кислоты .м-гидроксикоричной (Х=273 нм)

Рис. 1д. Спектр поглощения кислоты галловой Рис. 1е. Спектр поглощения кверцетина (Х=379 (}=265 нм) нм)

Рис. 1ж. Спектр поглощения Рис. 1з. Спектр поглощения

рутина (Х=361 нм) кумарина (Х=323 нм)

1С. 1. Спектры поглощения БАВ, выделенных методом препаративной рехроматографии из суммарных извлечений листьев и корней лопуха войлочного и лопуха большого

Рис. 2а. Спектр поглощения Рис. 26. Спектр поглощения

эскулетина (Х=334 им) умбеллиферона (Х=326 нм)

Рис. 2. Спектры поглощения БАВ, выделенных методом препаративной рехроматограф! из суммарных извлечений листьев и корней лопуха войлочного и лопуха большого

Кислота хлорогеновая, является преобладающей в сумме гидроксикоричш кислот листьев и корней A. tomentosum и A. lappa, что подтверждается сравнителен анализом хроматограмм и спектров поглощения извлечений из листьев и корней и PC кислоты хлорогеновой в УФ-области (рис. 3,4).

Рис. 3. Спектры поглощения суммарных извлечений из листьев и корней А. tomentosum первого года и PCO кислоты хлорогеновой (шах >.=326 нм)

Рис. 4. Спектры поглощения суммарных извлечений из листьев и корней А. tomentosum второго года и PCO кислоты хлорогеновой

Методом ВЭЖХ установлено присутствие рутина и кверцетина в исследуемых 5разцах, наличие рутина подтверждено методом добавок (рис. 5-8).

кверцетин

/• "

"н /' i !

У N

'I I,

/

мм) mm 1 (*« itttft !w«t i-'Kt ::>»> :;м> ;if» 1ыi

Рис. 5. ВЭЖ - хроматограмма извлечения из листьев Рис. 6. ВЭЖ - хроматограмма извлечения

из листьев лопуха войлочного с добавкой PCO рутина

лопуха войлочного

V

... . I ,....!..» .!...

24 91«: '

' ■ V : ■

ыч» 1'ия» i;na s-нм ¡w« (soft Jsxt« lim 24«m

S1 I РУГОИ 1

' V.:

I /1

-г Г Т Т

i (, I» -•» Ч И.

__________ы „ Рис. 8. ВЭЖ - хроматограмма извлечений

Рис. 7. ВЭЖ - хроматограмма извлечении из корней ю к я войлочного с добавкой

лопуха войлочного РСОругина

При спектрофотометрическом анализе количественного содержания основных эупп БАВ, установлено, что накоплением наибольшего их количества характеризуются истья первого года вегетации в фазе полного развития листовой пластинки и корни ервого года в фазе увядания надземной части. Листья накапливают не менее 4 % адроксикоричных кислот (в пересчете на кислоту хлорогеновую), корни - не менее 2%. >лавоноидов (в пересчете на рутин) в листьях - не менее 2%, в корнях - не менее 1%. умаринов (в пересчете на кумарин) - не менее 1% и 0,5% соответственно, одорастворимых полисахаридов в листьях - не менее 5%, в корнях - не менее 10%. [олифенольных окисляемых соединений в листьях - не менее 3%, в корнях - не менее %. Аскорбиновой кислоты в листьях -не менее 19 мг%, в корнях - не менее 13 мг% бл. 2,3).

В исследуемых образцах установлено присутствие не менее 20 аминокислот, I которых идентифицированы 12. Преобладающей кислотой в сумме аминокислот листье является триптофан, корней - аспарагиновая кислота (рис. 9, 10). В листьях содержат аминокислот достигает наибольшего значения (2,54%) в фазе полного развития листово пластинки в первый год жизни; в корнях (2,31%) - в фазе увядания надземной части первый год жизни в пересчете на преобладающие компоненты.

1.0

0.9

а.в ол 0.6 0.5 0., 0.3

о.г~ 0.1 . о.о-

лопуха ; корень

/

лопуха лист

V

PCO кислоты .аспарагииовой

1

<50

Клине Honest, HM

г--T-p-. I ..... 600 (¡50

Рис. 9. Спектры поглощения извлечений из листьев и корней А. tomentosum первого года и раствора PCO кислоты аспарагиновой

-т-г-г-т-г-1 Г' Г ' ,"-г-г-,-Гт-7~г"Г1 8 1» и Н 16 IS » Я 24 16 » 5» >;

Рис. 10. ВЭЖ - хроматограмма извлечений из листьев А. tomentosum первого года

Анализ элементного состава показал присутствие 64 элементов в листьях и корнях A. tomentosum. По качественному составу элементов листья и корни различий не имеют, количественное содержание варьирует в незначительных пределах. При изучении элементного состава особое внимание обращали на содержание токсичных элементов свинца, ртути, кадмия, мышьяка. По содержанию токсичных элементов исследуемые образцы сырья отвечают требованиям стандарта для БАД (СанПиН 2.3.2.1078-01).

С целью определения оптимальных сроков заготовки сырья (листья и корни) проведен анализ количественного содержания основных групп БАВ по фазам развития растения (табл. 2, 3).

Рекомендуемые сроки сбора сырья лопуха листья - от растений A. tomentosum и A. lappa на первом году в фазе полного развития листовой пластинки; лопуха корни - от растений A. tomentosum и A. lappa на первом году в фазе увядания надземной части растения.

Таблица

Содержание доминирующих групп БАВ в листьях и корнях А. *отеМовит по фазам развития

БАВ A. tomentosum первого года жизни A. tomentosum второго года жизни

Лист Корень Лист Корень

молодые листья (начало вегетации) ф.полного развития листовой пластинки молодые листья (начало вегетации) ф. полного развития листовой пластинки ф. увядания надземной части ф. появления прикорневой розетки листьев ф. цветения ф. появления прикорневой розетки листьев ф. цветения ф. увядания надземной части

Гидроксикоричные кислоты 4,92± 0,06 5,76± 0,09 2,78± 0,04 3,05± 0,05 3,57± 0,06 1,93± 0,05 2,29± 0,04 331±0,05 3,14± 0,04 2,81 ±0,05

Флавоноиды 2,92±0,06 3,83±0,05 1,17±0,04 1,69±0,05 2,0б±0,0б 2,49±0,05 2,86±0,04 1,72±0,06 1,43±0,05 1,02±0,05

Кумарины 1,19±0,05 1,21±0,05 0,12±0,04 0,32±0,05 0,56±0,06 0,46±0,05 0,62±0,06 0,SS±0,05 0,21 ±0,05 0,08±0,07

Дубильные вещества 3,64±0,04 3,06±0,04 6,72±0,05 7,21 ±0,04 8,42±0,06 3,84±0,05 3,17±0,04 8,35±0,06 6,02±0,05 4,76±0,04

Аскорбиновая кислота 21,08±0,05 19,31 ±0,04 17,54±0,05 15,67±0,04 13,23±0,06 20,18±0,05 18,79±0,04 15,92±0,06 11,23±0,05 7,84±0,04

Полисахариды: ВРПС ПВ ГЦ А ГЦ В - 6,08±0,04 7,20±0,05 5,16±0,05 3,18±0,05 - - 13,79±0,07 10,04±0,06 3,64±0,04 2,27±0,04 - 6Д7±0,06 2,87±0,04 б,44±0,06 2,26±0,04 13,24±0,07 9,43±0,06 2,64 ±0,04 2,27±0,04 - -

Таблица 3

Содержание доминирующих групп БАВ в листьях и корнях A. lappa по фазам развития

БАВ A. lappa первого года жизни A. lappa второго года жизни

Лист Корень Лист Корень

молодые листья (начало вегетации) ф. полного развития листовой пластинки молодые листья (начало вегетации) ф. ПОЛНОГО развития листовой пластинки ф. увядания надземной части ф. появления прикорневой розетки листьев ф. цветения ф. появления прикорневой розетки листьев ф. цветения ф. увядания надземной части

Гидроксикоричные кислоты 3,69±0,05 4,37±0,07 1,94±0,05 2,02± 0,04 2,42± 0,06 1,94± 0,06 2,19± 0,04 2,34± 0,04 2,05± 0,06 1,81 ±0,07

Флавоноиды 2,89±0,05 3,42±0,07 1,23±0,05 1,62±0,06 1,83±0,05 2,31±0,05 2,68±0,06 1,67±0,05 1,40±0,06 1,13±0,05

Кумарины 0,89±0,05 1,07±0,06 0,43±0,05 0,54±0,04 0,61±0,05 0,51±0,06 0,62±0,04 0,58±0,04 0,50±0,06 0,43±0,05

Полисахариды: ВРПС ПВ ГЦ А ГЦ В - 5,87±0,04 б,37±0,05 5,01±0,05 3,12±0,05 - - 13,24±0,07 9,58±0,06 3,21 ±0,04 2,06±0,04 - 6,13±0,06 2,74±0,04 5,92±0,06 2,83±0,04 12,89±0,7 9,17±0,06 2,41±0,04 2,04 ±0,04 - -

Разработка параметров стандартизации листьев и корней лопуха

Стандартизацию сырья предложено проводить по двум группам веществ гидроксикоричным кислотам и полисахаридам, так как предполагается, что они име] наибольшую значимость в проявлении фармакологической активности экстракт листьев и корней лопуха. Для этого предлагаются следующие методики.

Предлагаем проводить качественное определение присутствия водорастворим] полисахаридов по реакции осаждения спиртом этиловым 95%-м из водного извлечение реакцию азосочетания на присутствие гидроксикоричных кислот.

Методика количественного определения гидроксикоричных кислот.

Аналитическую пробу воздушно-сухого сырья измельчают до размера часта проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм. Точную навеску сырья (око 1,0 г) помещают в колбу вместимостью 100 мл, заливают 25 мл спирта этилового 50%-] К колбе присоединяют обратный холодильник и нагревают на водяной бане в течение часа. По истечении времени колбу снимают, содержимое колбы фильтруют через сух бумажный фильтр, следя за тем, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Зат! фильтр помещают в колбу с сырьем и экстракцию повторяют дважды в описанных вьп условиях. Фильтраты объединяют и замеряют объем извлечения. Оптическую плотное полученных извлечений замеряют на приборе СФ-56 при длине волны 326 нм. качестве раствора сравнения используют спирт этиловый 50%-й.

Таблица

Метрологическая характеристика методики количественного определения

гидроксикоричных кислот

п f ^ср. s2 s Р,% t(p,f> Ахср. Б, %

10 9 4,13 0,016 0,124 95 2,23 0,088 2,13

Предложенная методика количественного определения гидроксикоричных кислот листьях и корнях A. tomentosum надежна и дает воспроизводимые результаты. Ошиб единичного определения при доверительном интервале 95 % не превышает 2,13 % (табл. • Валидацию метода проводили по показателям правильность, повторяемость воспроизводимость.

Листья содержат не менее 4% гидроксикоричных кислот в пересчете на кисло хлорогеновую, корни - не менее 2%.

Для количественной оценки содержания водорастворимых полисахарид использовали гравиметрический метод.

Содержание водорастворимых полисахаридов в сырье лопуха листья - не мен 5%, в сырье лопуха корни - не менее 10%.

Показатели подлинности сырья

На территории Новосибирской области среди растений рода Arctium встречают два вида: A. tomentosum и A. lappa. Преобладающим по распространенности является tomentosum. В связи с тем, что по морфологическим признакам изучаемые в и; трудноразличимы, особенно при сборе подземной части первого года вегетации, nepi нами стояла цель изучить микродиагностические признаки A. tomentosum и A. lapp Нами была исследована анатомическая структура листовых пластинок и корней лопу войлочного и лопуха большого.

У обоих видов верхняя эпидерма листа почти прямостенная, клетки нижней :;идермы извилистостенные. На обеих сторонах листа располагается большое щичество погруженных устьиц аномоцитного типа, волосков бичевидного типа, : 5разующих паутинистое опушение. Волоски состоят из основания, образованного 2-6 ретками и терминальной клетки - узкой, очень длинной и скрученной, придающей лоску бичевидную форму. У A. tomentosum волоски располагаются по всей »верхности листовой пластинки, у A. lappa преимущественно по краю листа и вдоль шок. Эфирно-масличные железки имеют строение, характерное для семейства steraceae. Мезофилл листа выполнен губчатой паренхимой (идиобласты), клетки »торой имеют округлую и лопастную форму, содержат капельки масла желтого цвета.

Установлены основные микродиагностические признаки черешков и корней »пуха войлочного и лопуха большого. Полученные данные использованы при оставлении ФС.

Рис. 12. Извнлистостеннзя нижняя эпидерма листа с устьичным аппаратом аномоцитного типа

Рис.15. Клетки эпидермы в основании волоска

Рис. 13. Войлочное опушение на поверхности листа

Рис. 16. Место прикрепления волоска

. с. 14. Простые многоклеточные волоски бичевидного типа

Рис. 11. Прямостенная верхняя эпидерма листа, устьице аномоцитного типа, погруженное

Рис. 17. Эфирно-масличная железка на верхней эпидерме (вид сверху, вид сбоку)

Рис. 21. Паренхимные клетки округлой Рис. 22. Жилка листовой формы пластинки А. (отемояит

Рис. 24. Смоляные ходы с бурым содержимым в коровой части

Рис. 25. Фрагмент поперечный среза корня л. войлочного

Рис. 18. Волоски на поверхности листовой пластинки Л. (отеплит

Рис. 19. Волоски по краю листовой пластинки и вдо

Рис. 20. Паренхимные клетки лопастной формы

Рис. 26. Проводящие элементы ксилемы корня

Рис. 27. Фрагмент анатомического строения корня (паренхима)

Рис. 33. Поперечный срез черешка. Схема Рис. 34. Первичная механическая ткань - уголковая

микроскопического строения (микрофотография) колленхима заполняет ребра черешка (микрофотография)

Рис. 28. Поперечный срез черешка. Рис. 29. Простые многоклеточные

Схема микроскопического строения волоски на поверхности черешка

Рис. 30. Эфирно-масличные

железки на поверхности черешка (микрофотография)

Рис. 32. Паренхимная ткань черешка (микрофотография)

Рис. 31. Открытые коллатеральные пучки, залегающие черешка (микрофотография)

ребрах и межреберье

Показатели доброкачественности сырья

Согласно перечню разделов фармакопейной статьи на лекарственное растительн сырье, утвержденному ОСТ 91500.05.001-00, установлены числовые показатели д

стандартизации сырья (табл. 5).

Таблиц;

___Числовые показатели корней и листьев лопуха_

Числовой показатель, % Лопуха листья Лопуха корни

Полисахариды не менее 5% не менее 10%

Гидроксикоричные кислоты не менее 4% не менее 2%

Влажность не более 12% не более 14%

Зола общая не более 11% не более 9%

Зола, нерастворимая в 10 % растворе хлористоводородной кислоты не более 1% не более 3%

Потемневших частей листьев не более 4% __

Побуревших, пожелтевших и почерневших частей растения не более 4% -

Корней потемневших на изломе _ не более 5%

Остатков стеблей - не более 5%

Органической примеси не более 3% не более 3%

Минеральной примеси не более 2% не более 2 %

На основании проведенных исследований разработан проект ФС «Лопуха листь и внесены изменения в ФС «Лопуха корни».

Получение и исследование химического состава экстрактов

Методом дробной мацерации при нагревании из листьев и корней лопуха обо видов были получены сухие экстракты с использованием экстрагента 40%-го спир этилового, т. к. в ходе экспериментов было доказано, что данный экстрагент извлека наибольшее количество БАВ. Полученный экстракт листьев представляет собой сух-рассыпчатый порошок темно-зеленого цвета, горького вкуса, легко растворимый водно-спиртовых смесях различной концентрации, растворимый в воде при нагревани Влажность экстракта 5%, зола общая 9%, зола, не растворимая в 10%-м раство кислоты хлористоводородной, - 0,03%. Экстракт корней - порошок светло-коричнево цвета, характерного, чуть сладковатого вкуса и запаха, легко растворимый в воде водно-спиртовых смесях. Влажность экстракта 5%, зола общая 8%, зола, не растворим в 10%-м растворе кислоты хлористоводородной, - 0,02%. В экстрактах определи содержание основных групп БАВ (табл. 6).

Таблица

Содержание основных групп БАВ в сухих экстрактах_

№ п/п Параметры качества Сухой экстракт корней (СЭК) Сухой экстракт листьев (СЭЛ)

I Полисахариды, % 67,32±0,08 48,01 ±0,07

2 Аскорбиновая кислота, мг% 0,176±0,05 0,319±0,05

3 Дубильные вещества, % 24,08±0,05 13,47±0,05

4 Гидроксикоричные кислоты, % 7,43±0,06 13,56±0,05

5 Флавоноиды, % 5,94±0,04 9,21 ±0,04

Фармакологические исследования

Исследования острой токсичности сухих экстрактов листьев (СЭЛ) и корней (СЭК) 1уха показали, что они относятся к группе малотоксичных веществ (IV класс).

Изучение биологической активности СЭК и СЭЛ проводили при моделировании отоксического повреждения печени комплексом антибластомных препаратов, готоксическое повреждение печени выражалось в развитии деструктивных и щиркуляторных изменений: цснтролобулярное полнокровие, нарушение балочного оения, коллапс синусоидов. Во многих гепатоцитах определялась зернистость и отек гоплазмы, центральное расположение ядер с перинуклеарной зоной просветления -тана гидропической и баллонной белковой дистрофии гепатоцитов. Обнаружены тые внутридольковые центролобулярные микронекрозы и очаговые некрозы атоцитов. Данные изменения прогрессивно нарастали и достигали максимальной эаженности к 7 суткам после ПХТ.

Установлено, что предварительное введение СЭЛ и СЭК перед проведением курса Т уменьшает деструктивные изменения в печени (табл. 7). Изменения в печени шей с ПХТ при предварительном введении экстракта корней и экстракта листьев ;уально одинаковы, но при морфометрии было выявлено, что экстракт корней более ¿ективно предотвращает развитие дистрофии и некрозов паренхимы печени, чем тракт листьев лопуха. Аналогичная закономерность была выявлена при эфометрическом исследовании печени мышей с курсом ПХТ без предварительного :дения сухих экстрактов.

Сравнительные микроскопические исследования влияния фоновой коррекции :сического воздействия ПХТ на печень мышей СЭК и СЭЛ и препарата сравнения -амина Е не выявили принципиальных отличий, но при морфометрии было ановлено, что сухие экстракты листьев и корней лопуха эффективнее предотвращает ;витие деструктивных изменений паренхимы печени, чем а-Т (табл. 7).

Таким образом, было выявлено достоверное снижение объема деструктивных 1енений паренхимы печени при проведении курса ПХТ с предварительным введением :их экстрактов корней и листьев лопуха.

Неоспоримое преимущество СЭК и СЭЛ - это широта проявляемой биологической ивности, что связано с присутствием в их составе БАВ, принимающих участие во огих биологических процессах в организме. Известно, что наиболее [лансированными и перспективными для клинического применения гиоксидантными и антирадикальными средствами являются комплексы липофильных гидрофильных веществ, влияющих на процессы липопероксидации и шкалообразования. Присутствие биогенных элементов в СЭК и СЭЛ увеличивает })активность их биологической активности, поскольку можно предположить наличие ювременной и адекватной коррекции нарушений минерального обмена, возникающих I проведении ПХТ. Следовательно, сухие экстракты листьев и корней лопуха -|)ективные средства фоновой коррекции тяжелых деструктивных изменений дренних органов, закономерно развивающихся при проведении полихимиотерапии.

Таблица 7

Результаты морфометрического исследования печени мышей при ПХТ и введении экстрактов листьев и корней лопуха и а-токоферола ацетата (аТА) в разных режимах

№ п/п Сроки введения препаратов Нормальные гепатоциты, Vv, % Гепатоциты в состоянии дистрофии, % Некрозы паренхимы печени, Vv, % Суммарные альтеративные изменения в печени, Уу, % Двухъядерные гепатоциты, Nai

1 Интактные 80,8*0,8 5,5*0,5 9,0±0,8 14, 5±1,0 1,3±0,2

2 ПХТ 3-й сутки 49,4*1,2 18,2*1,0 27,8±1,0 46,0±1,5 1,1±0,2

3 ПХТ 7-е сутки 43,8*1,4 19,3*0,8 35,3±1,3 54,6±1,2 0,5±0,1

4 СЭК 10 дн. 88,8±1,2 2*0,7 4,8±1,2 6,8±0,7 1,5±0,5

5 СЭЛ 10 дн. 89,2±1,4 2,8±0,7 4,2±0,7 7,0±0,5 1,6±0,3

6 СЭК 14 дн. 87,6±1,2 2,3*0,5 4,5±0,6 6,8±0,6 0,8±0,15

7 СЭЛ 14 дн. 87,7*1,1 3,7*0,5 4,7±0,6 8,4±0,7 0,6±0,15

8 СЭК 7 дн.+ ПХТ + СЭК 3 дн. 66,5±2,За 11,74:1,2» 12,4±1,0 24,1±1,3 3,6±0,3а

9 СЭЛ 7 дн.+ ПХТ + СЭЛ 3 дн. 59,4*1,45a 15*0,8" 15,0±1,0 30,0±1,2 2,5*0,3"

10 СЭК 7 дн.+ ПХТ + СЭК 7 дн. 58,5*1,6" 18,5±0,8а 18,8±1,1 37,3±1,4 1,4*0,3

11 СЭЛ 7 дн.+ПХТ + СЭЛ 7 дн. 50,7±1,4* 24,6*0,9® 18,4±1,0 43,0*1,6 1,4*0,2

12 ПХТ + СЭК 3 дн. 53,7*1,3» 19,5±1,2а 16,6±1» 36,1±1,15 2,5*0,4

13 ПХТ + СЭЛ 3 дн. 48,8*2,2" 23,4±1,5а 21,4±1,6" 44,8±1,1 1,85*0,3

14 ПХТ + СЭК 7 дн. 46,6* 1,6a 25,5±1,1а 23,3±1,2 48,8±1,6 1,3*0,2

15 ПХТ + СЭЛ 7 дн. 41,3±1,1а 28,5±0,9а 23,9±1,4 52,4±1,2 1,2*0,3

16 7 дней аТА + ПХТ + 3 дня аТА 61,6±1,4 12,5±0,7 22,7±1,3 35,2±1,3 1,3*0,2

17 7 дней аТА + ПХТ + 7 дней аТА 50,5*1,6 17,5±0,9 30,1±1,15 47,6±1,6 1,0*0,2

* - достоверные отличия показателей между группами без предварительной фитотерапии и с предварительной фитотерапией при р<0,05.

ВЫВОДЫ

Проведено комплексное изучение листьев и корней A tomentosum Mill, и >4. lappa L., установлено наличие основных групп БАВ: полисахаридов, гидроксикоричных кислот, флавоноидов, кумаринов, дубильных веществ, аминокислот, макро- и микроэлементов, кислоты аскорбиновой.

С помощью химических, хроматографических и спектральных методов анализа определен компонентный состав и количественное содержание доминирующих групп БАВ. Установлено, что качественный состав БАВ остается постоянным независимо от места произрастания растения на территории Новосибирской области и фазы его развития. Идентифицированы хлорогеновая, кофейная, феруловая, м-гидроксикоричная, галловая кислоты, рутин, кверцетин, кверцетина рамнозид, кумарин, умбеллиферон, скополетин, эскулин, эскулетин, валин, лейцин, триптофан, треонин, лизин, гистидин, пролин, цистеин, глутамин, серин, орнитин, аспарагиновая кислота, 64 макро- и микроэлемента.

В результате сравнительного фотохимического анализа двух видов рода Arctium: А. tomentosum Mill, и A. lappa L. - установлено, что данные виды не различаются по компонентному составу основных групп БАВ и содержат их в сопоставимых количествах. Рекомендуемые сроки сбора сырья лопуха листья - от растений А. tomentosum и A. lappa на первом году в фазе полного развития листовой пластинки; лопуха корни - от растений A. tomentosum и A. lappa на первом году в фазе увядания надземной части растения.

Проведен сравнительный морфолого-анатомический анализ сырья A. lappa L. и A. tomentosum Mill. Установлены диагностические признаки листьев двух видов лопуха, заключающиеся в расположении волосков на поверхности листовой пластинки: у A. tomentosum волоски располагаются по всей поверхности листа, у А. lappa преимущественно по краю листа и вдоль жилок.

Получены сухие экстракты из листьев и корней лопуха. Количественное содержание основных групп БАВ в сухих экстрактах значительно превышает содержание БАВ в исходном сырье.

Показано, что сухие экстракты листьев и корней лопуха - эффективные средства фоновой коррекции тяжелых деструктивных изменений внутренних органов, закономерно развивающихся при проведении полихимиотерапии. Разработаны показатели подлинности и доброкачественности и методики стандартизации сырья лопуха листья и лопуха корни и на их основе составлен проект фармакопейной статьи «Лопуха листья - Arctii folia» и предложено внесение изменений в ФС «Лопуха корни - Arctii radices», что дает возможность их внедрения в качестве сырьевого источника получения средства, снижающего токсическое воздействие ПХТ на печень.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Величко, В.В. Фармакогностическое исследование лопуха войлочно произрастающего в Новосибирской области / В.В. Величко // Бюллетс сибирской медицины. - Приложение 2. - Томск : ООО «Печатная мануфактур 2006.-Том5.-С. 78-80.

2. Величко, В.В. Фитохимическое исследование растений флоры Сибири / Д Макарова, В.В. Величко, Н.Е. Ким, М.Г. Ханина, М.А. Ханина // Фармация. - 20 -№3.-С. 19-22.

3. Величко (Никулич), В.В. Аминокислоты Agrimonia pilosa Ledeb., Arctium tomentos Mill. / М.Г. Ханина, В.В. Величко, B.B. Иванова, М.А. Ханина, А.П. Родин Вестник Уральской медицинской академической науки. - Екатеринбург, 2011. № 3/1 (37). - С. 77-78.

4. Величко, В.В. Элементный состав листьев, корней и экстрактов лопуха войлочног Величко В.В., Ханина М.А. // Медицина и образование в Сибири. - 2011. - №5. 4с. Электронное научное издание. - http://www.namu.ru/cozo/mos/

5. Величко, В.В. Фармакогностическое исследование лопуха войлочно произрастающего на территории Сибири // Экология России и сопредельн территорий. Экологический катализ : материалы X международной экологическ студенческой конференции. - Новосибирск : РИЦ НГУ, 2005. - С. 161.

6. Величко, В.В. Фармакогностическое исследование Arctium tomentosum Mill. / В Величко, М.А. Ханина // Качество жизни как критерий санитар] эпидемиологического благополучия : сборник материалов 1-й студенческой научн конференции Сибирского федерального округа. - Омск : ОмГМА, 2005. - С. 1А 149.

7. Величко, В.В. Фармакогностическое исследование Arctium tomentosum Mill. / В Величко // «Авиценна - 2005» : материалы ежегодной конкурс-конферени студентов и молодых ученых. - Новосибирск : Сибмедиздат, 2005. - С. 366.

8. Величко, В.В. К фармакогностическому изучению Arctium tomentosum М Сравнительное фитохимическое исследование / В.В. Величко // Достижен: проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: материа региональной научно-практической конференции (с международным участие: посвященной 40-летию фармацевтического факультета КГМУ. - Курск : КГМ 2006. - С. 265-267.

9. Величко, В.В. Некоторые аспекты фармакогностического исследования Arcti, tomentosum Mill. / В.В. Величко // «Авиценна - 2006» : материалы ежегодн конкурс-конференции студентов и молодых ученых. - Новосибирск : CnÖMeflraj НГМУ, 2006. - С.472-^73.

10. Величко, В.В. Фитохимическое изучение лопуха войлочного / В.В. Величко, М. Ханина // Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений сборник материалов II международной научной конференции. - Алматы, 2007. С.268.

11. Величко, В.В. Изучение гидроксикоричных кислот надземной и подземной част лопуха войлочного / В.В. Величко, Н.О. Кокорина, М.А. Ханина // Разработ; исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб. науч. тр. Пятигорская ГФА, Санкт-Петербургская ГХФА. - Пятигорск, 2007. - Вып. 62. -262-266.

Величко, B.B. Разработка характеристик доброкачественности лекарственного растительного сырья лопуха войлочного / В.В. Величко, М.А. Ханина // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья : материалы III Всероссийской конференции. - Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2007. - кн. 2. - С. 282287.

Величко, В.В. Внедрение в медицину нового вида лекарственного растительного сырья - листьев лопуха войлочного / В.В. Величко // «Инновации: от идеи до продукта» : материалы школы-семинара. - Новосибирск, 2007. - С. 10 - 11. Величко, В.В. Сравнительное фитохимическое изучение надземной и подземной части лопуха войлочного / В.В. Величко, М.А. Ханина // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения : сборник материалов научно-практической конференции (с международным участием), посвященной 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА. - Ярославль : Изд-во «Найс», 2007. - С.65-68.

Величко, В.В. Сравнительное фармакогностическое исследование корней и листьев лопуха войлочного, произрастающего в Новосибирской области / В.В. Величко, М.А. Ханина, Н.О. Кокорина II Химия и технология растительных веществ : тезисы докладов V Всероссийской научной конференции. - Сыктывкар - Уфа, 2008. - С.30. Величко, В.В. Изучение биологически активных веществ Arctium tomentosum Mill. / В.В. Величко, М.А. Ханина // Хист. - Черновцы, 2008. - Вып. 10. - С. 198 - 199. Величко, В.В. Исследование химического состава Arctium tomentosum Mill. / B.B. Величко // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. -Пермь, 2008. - №4. - С. 218-222.

Величко, В.В. Микродиагностические признаки двух видов рода Arctium:

(A. tomentosum Mill, и A. lappa L.) : методическое пособие / В.В. Величко, М.А.

Ханина // Новосибирск: Сибирская Сервис Служба. - 2008. - 24 с.

Величко, В.В. Микродиагностические признаки двух видов рода Arctium / В.В.

Величко, М.А. Ханина // Фармация и общественное здоровье : материалы ежегодной

конференции. - Екатеринбург, УГМА, 2009. - С. 92-94.

Velichko, V.V. Phytochemical study of Arctium tomentosum Mill, boots and leaves / V.V. Velichko, M.A. Hanina // Material of the 11 International congress «Phytopharm 2007». -Leiden, 2007. - P. 114.

Автор выражает искреннюю благодарность д.м.н., профессору кафедры патологической анатомии ГБОУ ВПО НГМУ Минздравсоцразвития России Т. А. Агеевой; с.н.с. Института Цитологии и Генетики СО РАН

Т.Е. Алешиной; н.с. лаборатории Гербария Центрального Сибирского Ботанического Сада (ЦСБС) СО РАН О.С.Жировой; к.х.н., ведущий специалист ЗАО Институт хроматографии «ЭкоНова» И.Н. Азаровой; ;дующей химического отдела ОГУЗ «Новосибирское областное бюро судебно-медицинской экспертизы» Н.О. Кокорнной; провизору высшей категории, директору ОГУЗ «Новосибирский центр контроля качества лекарственных средств» Н.В. Головневой за содействие в ходе выполнения работы.

собую благодарность автор выражает научному руководителю доктору фармацевтических наук, профессору

заведующему кафедрой фармакогнозии и ботаники ГБОУ ВПО НГМУ Минздравсоцразвития России А. Ханиной за научно-методическую помощь, ценные замечания и консультации в ходе выполнения работы.

Величко Виктория Владимировна

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Отпечатано в типографии Новосибирского государственного Технического университета 630092, г. Новосибирск, пр. К. Маркса, 20, тел./факс: (383) 346-08-57 формат 60x84 1\16, объем 1.0 пл., тираж 100 экз. заказ № 379 подписано в печать 05.04.12 г.