Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Противоязвенная активность извлечений из лопуха войлочного

На правах рукописи

1 3 Ш Ш7

КАНАКИНА

Татьяна Александровна

ПРОТИВОЯЗВЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ИЗВЛЕЧЕНИЙ ИЗ ЛОПУХА ВОЙЛОЧНОГО

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск - 1997

Работа выполнена в научно-исследовательском институте фармакологии (директор - академик РАМН, профессор Е.Д.Гаяьдберг) Томского научного центра РАЖ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.Г.Лашнский

Научный консультант:

кандидат биологических наук Т.Н.Поветьева

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.И.Венгеровский кандидат медицинских наук Е.В.Еородулина

Ведущая организация - Кемеровская государственная

медицинская академия

Защита состоится МяЛ^- 1997 г. в_час. на

заседании диссертационного совета К 001.33.01 при НИИ фармакологии Томского научного центра РАМН (634028, пр.Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии ТНЦ РАМН.

Автореферат разослан '"/£'" вп^иЛЛ^хдк? г. Ученый секретарь

ого совета ческих наук

специализированного совета ^

кандидат биологических наук Е.Н. Амосова

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Сравнительно зирокзя распространенность язвенной болезни делудка и двенадцатиперстной юшки, особенно у людей трудоспособного возраста, часто длительное рецидивирующее течение с развитием различных осложнений, приводящих к инвалндизацип и потере трудоспособности, делают ее одной иг наиболее важных социальных проблем современной медицины [Еасиленко В.Х., 1987, Гончарик й.И., 19343. По статистическим данным различных стран от 5 до 10* населения страдают язвенной болезнью в течение жизни [Дегтярева К.К., Харчекко К.В., 13953 5 при этом качало заболевания в 30« случаев приходится на молодей и юношеский возраст [Дорофеев Г.И., Успенский В.М., 1934]. В CHIA и Германии каждый десятый житель заболевает язЕенной болезнью, в Швеции - 15,2*. Большое число таких больны;-: диагностируется и £ СНГ (41 взрослого населения). Ежегодная стоимость лечения больных яззенной болезнью составляет 1,3-2,6 млн долларов [Голиков О.Н., Рысс Е.С., 1Э92. Гончарпк К.И., 19943.

Все это обусловливает социально-экономическую значимость поиска эффективных лекарственных средств для лечения этого заболевания. Несмотря на то, что имеется большое количество лекарственных препаратов для лечения больных язвенной болезнью, до сих лор нет универсального противоязвенного средства, способного воздействовать на все звенья язвообразовзнкя и быть эффективным во всех случаях заболевания [Гончарик И.И., 1394]. В этом отношении наиболее перспективными является фитопрепараты, обладающие зироким спектром фармакологического действия, влияющие на различные стороны патогенетического процесса [Киселева A.B., 1991, Галушкина Л.Р., 19953. Несмотря на успехи науки и техники в создании ценных синтетических препаратов, лекарства из растений продолжают занимать важное место в современной научной медицине. Практика показала, что синтетические препараты к лекарственные растения дополняют, а не заменяют друг друга СШретер А.И., 19803.

Ассортимент официнальных противоязвенных фитопрепаратов невелик (биосед, ромазулан, масло плодов облепихи п шиповника, аллантон, калефлон, плантаглюцид, бефунгин, препараты солодки) СМашковокий-М.Д., 19933. В связи с этим поиск перспективных растений и разработка на их основе -эффективных лекарственных

средств для профилактики и лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки является актуальным.

Наше внимание привлекло широка распространенное растение лопух (репейник). Большие ресурсы и доступность сырья, обширные сведения народной медицины о применении его при различных заболеваниях, в том числе при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, широкий спектр фармакологического действия делают лопух перспективным объектом исследования.

Работа выполнена в рамках региональной программы "Здоровье человека в Сибири" ( блок 6.3. Лекарственные растения Сибири к Дальнего Востока).

ЦЕЛЬ К ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Целью настоящей работы явилось исследование противоязвенной активности извлечений из разных частей лопуха.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. В скрининговых исследованиях провести сравнительное изучение влияния спиртовых и водных извлечений из корней, листьев, семян, семянок, свежего сока из корней лопуха на течение стрессовой реакции, ориентировочно-исследозательское поведение, эмоциональную реакцию животных.

2. Изучить защитное действие извлечений из лопуха на слизистую ободочку желудка на разных моделях экспериментальной язвы.

3. Исследовать влияние наиболее активных извлечений из лопуха на ыоторко-эвакуаторкую функцию желудочно-кишечного тракта.

4. Оценить воздействие извлечений из растения на секреторную функцию желудка.

5. Изучить противовоспалительные свойства извлечений из лопуха.

6. Исследовать влияние извлечений из лопуха на ближайшие и отдаленные последствия гипокоической травмы.

7. Оценить регенераторные возможности вытяжек из лопуха.

НАУЧНАЯ ЗНАЧИМОСТЬ И НОВИЗНА РЕЗУЛЬТАТОВ.

1. Впервые экспериментально показано, 'что извлечения из корней, листьев, семян и семянок лопуха, а также свежий сок из корней лопуха смягчают проявления стресса, нормализуют ориенти-

ровочко-исследовательское поведение и эмоциональных реакцию животных в условиях стрессовой ситуации.

2. Выявлено, что вытяжки из всех изученных частей растения оказывают выраженное защитное действие на слизистую оболочку желудка: уменьшают количество и общую площадь язвенных поражений, снижают отечность и воспаление слизистой желудка, вызванных различными повреждающими агентами.

3. Установлено, что вытяжки из лопуха обладает широким спектром фармакологического действия: нормализуют нарушенную при стрессе нейрогуморальную регуляцию гастродуоденэльксй системы, оказывают антизкссудативное действие, снижают агрессивные свойства желудочного сока, устраняют нарушения тонуса гладкой мускулатуры, ускоряя продвижение желудочного содержимого, оказывают ранозаживляюаее и антигипокеическсе действие.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Результаты экспериментальных исследований служат основанием для разработки новых лекарственных препаратов из лопуха в качестве средств терапии при патологических состояниях пищеварительной системы.

ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЗ^ТУ.

1. Установлено, что извлечения из лопуха оказывают выраженное залетное действие на слизистую оболочку желудка на всех использованных моделях экспериментальной язвы (нейрогенной, ре-зерпиновой, аспириковсй, бутадиеновой, пептической язвы у крыс, с перевязанным привратником., хронической ацетатной язвы).

2. Вытяжки ив всех исследуемых частей растения проявляют •антиотрессорное действие в условиях экспериментального невротического воздействия, нормализуя состояние внутренних органов и поведение животных. Наиболее выражены гастрозащитные свойства у спиртовых извлечений и свежего сока из корней лопуха на фоне стрессовой ситуации.

3.' Извлечения из лопуха проявляют антизкосудатквкое, рано-заживляющее и антигипоксическое действие, устраняют нарушение тонуса гладкой мускулатуры, снижают агрессивные свойства желудочного сока.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Часть данных диссертационной работы оформлены заявкой на изобретение N 98112859 "Противоязвенное средство и способ его получения". Заявка подана в Российское агентство по патентам и товарным знакам, приоритет от 26.06.96 г.

Основные положения и результаты работы доложены на 4-й научно-практической конференции "Актуальные вопросы гастроэнтерологии" (Томск,1996), на научной итоговой конференции "Актуальные проблемы фармакологии и фармакотерапии" (Томск,1996).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Работа изложена на 158 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводоз и списка литературы, включающего 211 источников, из них 38 на иностранном языке. Диссертация иллюстрирована 38 таблицами п 4 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ Ж МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Эксперименты проведены на 852 беспородны:-: мышах обоего пола массой 18-25 г., 316 крысах Wistar обоего пола мас-сой 180-250 г. Животных содержали на обычном пищевом рационе в условиях вивария.

Объектами исследования служили настои листьев, отвары: корней, семян, семянок лопуха в соотношении (1:20); настойки корней, листьев, семянок лопуха в соотношении (1:20), в качестве извлекателя использовали 40Z этанол; сок из свежих корней лопуха. Настои и отвары готовили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI издания (1989). Настойки готовили методом мацерации (настаивания). Сок получали путем отжатия измельченных свежих корней лопуха. Все части растения были собраны в окрестностях Томска, вдали от автомобильных и железнодорожных магистралей : листья - в мае-июне 1995 г., корни - в мае, октябре 1995 г., семянки - в октябре 1995 г. Собранное сырье подвергали сушке в хорошо проветриваемых помещениях. Влажность высушенного сырьк определяли по методике, описанной в ГФ XI издания. В качестве препаратов сравнения использовали экстракт левзеи жидкий, применяемый как стимулирующее, повышающее работоспособность средство; бефунгин, плантагюцид, применяемые при заболеваниях желудочно-кишечного тракта; индометацик,

обладающий противовоспалительным действием, фосфалвгель - анта-цвдкое средство.

Препараты вводили через зонд в желудок в течение пяти дней, последнее введение - за один час до тестирования.

Влияние извлечений из лопуха на течение острого стресса исследовали по изменен™ ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле, эмоциональной реакции и соматических показателей у мышей через 10 минут после 22-часового подвешивания за шейную складку. Оценку стреосорного состояния проводили по бальной системе по методу Ю. И.Добрякова (1978). Препарат считали активны!«!, если разница в оценке стресса в подопытной и контрольной группах составляла 2 и более баллов.

Для изучения влияния препаратов лопуха на ориентировочно-исследовательское поведение животных был использован метод "открытого поля" [Вихляев Ю.й. и др., 19823. Эмоциональную реакцию животных исследовали по методу Brady J, Nauta- W. [1953] в модификации для мышей. Влияние на процессы обучения и памяти на фоне гипоксической травмы исследовали при выработке у мышей условной реакции пассивного избегания СЯ.Буреш и др., 1991].]

Антиульцерогенную активность препаратов лопуха исследовали, используя различные модели экспериментального повреждения слизистой оболочки желудка. РезерпиноЕые язвы вызывали однократным введением внутрибрюшинно раствора резерпина (2,5 мг/кг), разведенного в воде для инъекций в количестве из расчета 0,3 мл на одно животное, с последующим охлаждением животных до 7°С в течение двух часов [О.Д.Варнаулов и ооавт., 1383]. Препараты вводили за 5 часов и непосредственно перед воздействием ульце-рогена.

Повреждения желудка по Shay et al. (1945) заключается в полной перевязке лигатурой пилорической части желудка крыс на 24 часа до момента вскрытия животных, максимальное количество язв локализуется е области рубца (преджелудка). Препараты вводили курсом в течение пяти дней, последнее введение- за один час до операции. Оперативные вмешательства на животных выполняли под легким эфирным наркозом.

Субхроническое повреждение слизистой оболочки- желудка вызывали: внутримышечным введением белым крысам 300 мг/кг бутадиена в виде 15* взвеси на ацетоне через час после последнего

введения фитопрепарата [Барнаулов О.Д., Денисенко Т.П., 19801; введением кислоты ацетилсалициловой по 128 мг/кг белым крысам внутрижелудочно в течение суток дважды с интервалом в четыре часа. За один час до второго введения аспирина животные получали исследуемые препараты ЕГ.В.Оболенцеза и соавт., 1974, P.Semple, R.Rüssel, 1975]. Забой животных проводили под легким эфирным наркозом через 24 часа методом декапитации.

Хроническую ацетатную язву моделировали на крысах-самках Wistar с исходной массой 200-250 гр СС.И.Буданцева, 1973, H.К.Кзлиниченко, 1973]. Накануне операции животных лишали шщи на 24 часа. Под легким эфирным наркозом у крыс, производили ла-паротомию по белой линии живота. В подоерозный слой передней стенки желудка вводили 0,05 мл 10% раствора уксусной кислоты СВ.П.Рябченко, 1987]. Настойки листьев к семянок лопуха в дозе 1 мл/кг вводили через зонд ежедневно внутрижелудочно, начиная с первого дня после индуцирования язвы, в течение 14 дней. Животных выводили из эксперимента на 7, 14, 21 сутки с начала опыта. Эффективность терапии оценивали по количеству выживших животных, площади язв и индексу заживления PR CK.Kyogoky et al., 1976].

Животных лишали пищи за 24 часа до воспроизведения экспериментальной язвы при свободном доступе к воде. Исследуемые препараты вводили с помощью зонда внутрижелудочно курсом в течение пяти дней. Через 22-24 часа после ульцерогенного воздействия животных декапитировзли, желудки извлекали, вскрывали по большой кривизне, промывали физраствором и макроскопически определяли число и площадь деструкции, которые дифференцировали.-точечные (менее 1 ым), крупные (1 и более мм) и полосонидныэ; определяли степень изъязвления желудка - среднее количество деструкции , приходящееся на 1 животное в группе; процент животных с язвами [Хаджай Я.И., Оболенцева Г.В., 19623; индекс Паулса, как интегральный показатель количества деструкции [F.Pauls et al., 1947]. Противоязвенную активность препаратов определяли как отношение индекса изъязвления в контрольной группе к индексу изъязвления в исследуемой группе.

Влияние препаратов лопуха на моторно-звакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта изучали на беспородных мышач методом "меток" СКооршап G.P., Kennis H.M., 1977], для чего в желудок

вводили 10% взвесь активированного угля, приготовленного на 2% крахмальной слизи в количестве 0,5 мл через один час после последнего введения фитопрепарата. Через 10 минут после введения угля животных умерщвляли методом дислокации шейного отдела позвоночника. Желудок, с кишечникам извлекали, расправляли на стеклянной пластинке, измеряли общую длину кишечника, а также дистанцию "пробега" угля. Отношение длины заполненной части кишечника к общей его длине выражали в процентах и определяли ускорение или замедление моторики.

Исследование флоголитической активности препаратов лопуха проводили по методу Winter et Al. (1952) на модели острого воспаления, вызванного введением под плантарный апоневроз левой задней лапки мыши 0,05 мл 1% раствора каррагеника на изотоническом растворе хлорида натрия [2083. Животные в течение пяти дней получали исследуемые препараты внутрижелудочно через зонд. Через один час после последнего введения препарата животным субплантарно вводили 1* раствор каррагенина. Забой животных производили черев 3,5 часа, отрезали обе задние лапки по коленный сустав, взвешивали. Степень воспалительной реакции оценивали как отношение разницы в массе между интэктной и опытной лапками, выраженное в процентах.

Влияние препаратов лопуха на пролиферативнув фазу воспаления изучали на модели "ватной гранулемы" [R.Meier et al. 19501 в нашей модификации. Стерильный ватный тампон ьесом 13 мг имплантировали с помощью иглы для взятия крови (A-1-20X40-1.17 и 25) крысам под кожу спины между лопатками. Исследуемые препараты лопуха вводили внутрижелудочно ежедневно (со дня трансплантации) в течение пяти дней. На шестые сутки животных умерщвляли, имплантированный тампон с грануляционной тканью извлекали, взвешивали, высушивали до постоянной массы и снова взвешивали. Эффективность препаратов оценивали по степени угнетения пролиферации, выраженной в процентах.

Регенераторнуюю активность препаратов лопуха изучали на модели заживления кожного повреждения. На депилированном участке кожи спины у мышей под легким эфирным наркозом вырезали лоскут кожи размером 10x10 мм. Для моделирования более длительного заживления струп с экспериментальной раны регулярно (через сутки) снимали. Исследуемые препараты вводили внутрижелудочно че-

рез зонд, начиная с первого дня после нанесения раны, в течение пяти дней. О коде заживления судили по среднему диаметру раны и срокам полной грануляции и эпителизации раневого дефекта. Укорочение срока заживления ран рассчитывали как отношение разницы времени полного заживления рак в контроле и времени полного ва-живления ран в опытной группе ко времени полного заживления ран в контроле, выраженное в процентах

Влияние извлечений из лопуха на секреторную функцию желудка изучали на крыса У1з1аг с лигирсванным привратником. Исследуемые препараты вводили курсом в течение 5 дней, последнее -за 1 час до операции. За 24 часа до операции животных лишали пиар при свободном доступе к воде. Через сутки после операции животных умерщвляли, содержимое желудка извлекали, центрифугировали. Определяли объем желудочного сока, измерение Рн производили на интраоперационном ацидогастрометре (АГМК-01). По про-теолитической активности оценивали количественное содержание пепсина [Туголуков В.Н., 13653. Общую кислотность желудочного сока и содержание свободной соляной кислоты определяли титраци-онным методом ГМихаэлис,1935].

Статистическую обработку полученных результатов проводили путем расчета средней (X) и средней квадратичной окибки. О достоверности различий-судили, используя параметрический {критерий Стьюдента) и непараметрический (критерий Вилкоксона-Манна-Уит-ни) методы. Для сравнения результатов экспериментов, где показатели выражались в долях, достоверность определяли о помощью углового преобразования Фишера. Значимость различий считали достоверной при Р^Р'и < С,05 ЕЕ.В.Гублер, 1978].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Исследование водных и спиртовых извлечений из корней, семян, листьев, семянок, свежего сока из корней лопуха по их влиянию на ориентировочно-исследовательское поведение животных в открытом поле показало, что все они вызывали снижали двигательной активности. Это достигалось путем сокращения горизонтального, вертикального компонентов и норкового рефлекса, в меньшей степени препараты влияли на груминг и не оказывали влияния на дефекацию. Лишь настойка семянок, в дозе 10 мл/кг способствовала увеличению общей двигательной активности, йзвлече-

ния из лопуха з большинстве случаев способствовали уменьшении эмоциональной реакции животных.

Экспериментально в наших исследованиях показано, что и водные, и спиртовые извлечения из всех частей репейника обладают выраженной антистрессорнок активностью. Наибольший эффект (разница в баллах по сравнению с контролем 5-6) проявили: отззр семян (1,0 мл/кг), отвар семянок (1,5; 5,0 и 10,0 мл/кг), настой листьев (5,0 мл/кг), свежий сок из корней (1,0; 1,5; 2,5; 5,0 мл/кг), настойка семян (1,0; 1,5; 2,5; 10,0 мл/кг), настойка корня (1,0; 1,5; 5,0; 10,0 мл/кг), настойка семянок (1,5 мл/кг), настойка листьев (1,5;2,5 мл/кг). Исследуемые препараты препятствовали инволюции тимуса и селезенки, снижали гипертрофию надпочечников, но наиболее выражено на фоне стрессовой ситуации их гастрозащитное действие. Спектр противоязвенной активности извлечений из лопуха представлен в таблице 1. Выраженное защитнее действие на слизистую оболочку желудка было зарегистрировано под влиянием отвара семян (1,5 и 5,0 мл/кг), настоя листьев (5,0 мл/кг), отвара семянок (5,0 и 10,0 мл-'кг), свежего сока из корней лопуха (1,0; 2,5; 10,0 мл/кг), настойки семян (1,0; 2,5; 5,0 и 10,0 мл/кг), настойки корней (1,0 и 1,5 мл/кг), настойки семянок (1,0; 1.5; 2,5; 5,0 мл/кг), настойки листьев (1,0; 1,5; 10,0 мл/кг). Гаотропротективный эффект выражался в снижении средней степени изъязвления желудка в 2-5,5 раза, уменьшении числа животных с деструкциями на 17-57». Отвар семян в дозах 5,0 и 10,0 мл/кг, сск из корней в дозе 2,5 мл/кг проявили стопроцентную противоязвенную активность.

Наиболее высокий и стабильный эффект на фоне стресса проявили спиртовые вытяжки и свежий сок из корней лопуха, нормализуя соматические и поведенческие параметры животных. Эксперименты показали, что извлечения из семянок лопуха не уступают по своей активности препаратам из семян. Поскольку процесс извлечения семян из семенной коробочки довольно трудоемок, для дальнейших исследований препараты готовили из семянок (семян Еместе с семенной коробочкой, так называемых репейных колючек).

Выраженный антиульцерогеннкй эффект извлечений из лопуха зарегистрирован на модели резершшового повреждения желудка у мышей. Величина противоязвенной активности настойки семянок варьировала от 3,6 до 30,0, корней лопуха - от 2,4 до 4,8, у

Таблица 1

Сравнительная оценка противоязвенной активности спиртовых и водны?; извлечений из лопуха на модели нейрогенной язвы

1 г 1 ! | Препараты | i Коэффициент противоязвенной активности ¡ дозы мл/кг ¡

1 Г ! 1 10,0 i 5,0 ¡ f 2,5 ¡ ! i 1,5 ¡ i Л Г\ 1 i, и ( |

1 ) 1 Отвар семян ! ( 1 1,1 3,9 ! i 1,6 ! i » p т ! ы) ' i } ¡ * S> ! ■4 «- I t

1 1 ! Отвар корня | 1 1 0 ? о ! 1 i 2,3 ¡ i i -1 С 1 x9o í o ! i

1 1 | Отвар семянок ! *** 1 *** j 1 0 ¡ 1 t i к Í t i л n 1 A,' i

! 1 1 Настой листьев 1 0 •< n I 4,U 1 t 1 0 ! i Л к ¡ i,и | i 1 Л Г, } A, O i

1 1 1 Сок из корней | 1 | к,,** 1 1,5 ! **•* j 1 1,7 ! 1 1 5,0 i

1 Г ! Настойка семян ! 1 1 6,3 1 o * < С, i | | i 3,7 ! ] 1,5 ¡ ¡ i 2,0 ¡

1 I ! Настойка корня ! 1 1 1,5 1 1,9 ¡ 0 1 2,9 ¡ i 7 "a i Í i

! 1 ¡Настойка семянок| ( I i г' i»' 1 П rt l ó, I ¡ ( 1 3,7 | i 3,7 ! i 2 3 i íw , W

> 1 ¡Настойка листьев! 1 I 2,9 С < j.,0 ¡ 1 1,1 ¡ i 1 2,5 | l n 7 ¡

1 1 ¡Экстракт левзеи | 1 1 1,4 1 - s 1 1 ¡ . ,... j. ! f 1 i I i

ПРИМЕЧАНИЕ: *** - означает отсутствие деструктивных

повреждений у 100%, животных в группе.

свежего сока нэ осенних корней - от 2,4 до 22,5 в зависимости от дозы. У настойки листьев на данной модели наблюдали незначительный противоязвенный эффект от 1,2 до 1,9.

На модели "острой" язвы, вызванной резерпином, было проведено сравнительное исследование антиульцерогенной активности свежего сока из корней лопуха, собранны}: в различные периоды вегетации растения, в июне и з октябре. Сек из июньских корней лопуха проявил противоязвенную активность в доге ,1,0. ыл/кг, снижая среднюю степень изъязвления желудка на 64,2%. -'Во всех исследуемых группах в меньшей степени выражена гиперемирозан-кость желудка, чем в контроле. Сок из осенних керней лопуха во всех изученных дозах оказывал высокий гаптрозащитный аффект, который выражался в достоверном уменьшении степени изъязвления желудка на 54-88%, отсутствии крупных язв, снижении частоты яз-зообразования на 24-5?* по сравнен® с контрольной группой (рисунок 1). Противоязвенная активность сока из корней лопуха значительно превышает таковуи у официального препарата плак-таглюцида, применяемого в клинической практике для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

На модели повреждения желудка с перевязанным привратником выявлено, что предварительное курсовое введение настоек лопуха в дозе 1,0 мл/кг крысам з течение пяти дней оказывает благоприятное воздействие на слизистую оболочку желудка. Наибольшую активность проявила настойка листьев (таблица 2). Это выражалось в достоверном снижении средней степени изъязвления желудка на 64?; за счет снижения в 2,8 раза количества мелких язв, в 1,5-2,0 раза уменьшалось число крупных язв. противоязвенная активность составила 2,8. Под действием настойки семянок наблюдалась лишь тенденция уменьшения изъязвлений на 24%, при этом полностью отсутствовали крупные деструкции, а полосовидные сократились в 1,5 раза. Фосфалюгедь, аналогично исследуемым препаратам, повышал устойчивость слизистой оболочки желудка к действию ульцерогенных -агентов. Он достоверно снижал среднюю степень изъязвления на 54* исключительно за счет уменьшения количества мелких язв, Гаотрозащитный эффект фосфалюгеля - 2,2. Бе-фунгин на данной модели проявил слабую противоязвенную активность, хотя число крупных и полосовидных деструкции уменьшалось в 2,5-7,5 раза.

Контроль 1

Контроль 1,0 1,5 г,5 5 10,0 Плантаглюцид

Рисунок 1. Влияние свежего сока из корней лопуха, собранных в июне (А) и в октябре (В), на степень изъязвления слизистой желудка на модели резерпиновой

язвы

Таблица 2

Влияние настоек семянок и листьев лопуха на повреждение желудка по методу Н.БЬаи (Х+тп)

| Группа I Доза ¡Число 1 ■ |Процент Кол и ч е с Т В 0 я о в I I 1 !Индекс!Противо- |

I наблюдения мл/кг|кивот- |гибели 1 -'1..........1 -¡Паулса язвенная |

мг/кг| 1 ных 1 1 мелкие \ крупные ¡ленточные] общее 1 активность|

I Контроль ! - 1 16 | 10 1 76,0+18,71 1,0+0,4 I | 1 1,5+0,7 ! 73,7+13,7 ! 81,9 |

1 Фосфатогель 1 1,251 10 ! ! о *34,0+ 9,9| 1,5+0,8 | 1 0,9+0,7 | *36,4+10,0 1 36,4 2,£ \

1 I Р< 0,05 ! ! ! Р< 0,05 !

1 Бефунгин 0,45| 10 | 10 76,3+18,4| 0,4+0,2 1*0,2+0,1 | 77,0+17,8 ! 77,0 о 1

! 1 1 | Р<0,05 | 1

| Настойка 1,0 1 10 1 о 59,2+6,5 [ 0 ! 0,6+0,2 1 59,8+ 6,5 1 59,3 1,3 1

I семянок 1 1 1 ! 1 1

1 Настойка 1,0 | 10 | 10 27,4+5,3 | 0,5+0,2 [ 0,6+0,2 | 28,5+ 5,7 1 28,5 2,8 |

! листьев 1 1_. 1 1 I *Р< 0,05 | 1 1 I ...... 1 *Р< 0,02 ( | ,. 1

ПРИМЕЧАНИЕ: * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем при Р^Ри<0,05

Сравнительная оценка защитного действия настоек листьев и семянок лопуха с известным препаратом плантаглюцидом (250 мг/кг) на. модели "аспириновой" язвы показала, что гастропротек-тизное действие исследуемых препаратов не уступает официальному лекарственному средству растительного происхождения, используемого в терапии язвенной болезни желудка. Фарыакотералевти-ческий эффект извлечений из лопуха реализовался в плаке ограничения числа мелких и крупных язв при их введении во Есех исследуемых дозаг.; (таблица 3). Величина противоязвенной активности составила от 1,5 до 3,8. Аналогичный эффект проявили настойки листьев и семянок лопуха на модели бутадионозой язвы, который выражался преимущественно в сокращении чиста мелких и крупных язв в 1,6-2 раза, а также в снижении площади язвенных повреждений на 42-75% (рисунок 2). Под действием настоек семянок и листьев лопуха в меньшей степени была выражена гиперемия и отечность слизистой желудка.

Противоязвенное действие извлечений из лопуха на моделях острых повреждений желудка ке вызывает сомнений. Но наиболее адекватная информация о действительной эффективности исследуемых препаратов может быть получена на модели хронического патологического язвенного процесса. Исследование на модели хронической ацетатной язвы желудка показало (таблица 4, рисунок 3), что наиболее выраженный актиульцерогенный эффект проявила настойка листьев лопуха (1,0 мл/кг). Ока достоверна снижала площадь язвенного поражения уже к 14 дню после операции, а через три недели происходило полное заживление язв. Противоязвенная активность настойки листьев превосходит действие плантаглюцида. Настойка семянок оказывала умеренное влияние на заживление хронической экспериментальной язвы желудка, ее эффективность на уровне препарата сравнения. Следует отметить, что под действием настоек листьев и семянок лопуха уже к 14 дню отмечалось полное заживление операционного шва, тогда как у контрольных животных даже к концу третьей недели не произошло заживления шва у 57% животных. Кроме того, исследуемые препараты предотвращали нарушение тонуса гладкой мускулатуры, которое наблюдалось у 43-83% животных в контрольной группе (в зависимости от срока наблюдения) .

На следующем этапе исследования предпринято более углуб-

Контроль 0,5 1 2,5 5 Плактаглюцид

Рисунок 2. Влияние препаратов лопуха на степень изязвления слизистой желудка крыс на модели аспириновой язвы. А - настойка листьев; В - настойка семянок

Таблица 3

Влияние настоек листьеЕ и семянок лопуха на новообразование, вызванное бутадионом (Х+т)

Группа Доза Число К о л и ч е с Т Б 0 я о Б ...... Площадь Индекс Противо-

наблюдения мл/кг живот 1 ■ ......... ) язвенных Паулса язвенная

мг/кг ных ; точечные |крупные ленточные ( общее дефектов активность

Контроль - ] 9 14,1+1,8 ¡5,6+1,1 1 ...........1 3,1+0,7 | [ 22,8+2,7 32,0+8,8 ПО О , О -

Бефунгин 450 1 9 11,0+1,9 ¡3,0+0,6 3,3+1,1 | 17,3+1,9 17,4+3,0 л п п X ' , о 1,3

|*Р<0,05 !

Настойка ■1,0 8 I 8,9+2,1 ¡2,5+0,4 3,0+0,5 | 14,4+2,4 18,5+5,4 14,4 1.6

листа л Р<0,05 |*Р-:0,02 1 *Р<0,05

<с»5 8 1 6,5+1,2 11,9+0,7 1.4+0,5 | 9,8+1,2 8,9+3,2 9,8 2,3

* Р<0,01 ¡*Р<0,02 ! *Р<0,001 *Р< 0,05

Настойка 1,0 8 1 6,9+2,1 ¡2,8+0,6 2,4+0,5 | 12,0+2,7 8,1+2,0 12,0 1,9

семянок 1 л Р<0,01 !*Р<0,05 1 *Р<0,02 *Р< 0,02

2,5 8 6,5+0,7 ¡3,0+0,6 1,1+0,4 | 11,0+1,4 10,6+2,7 11,0 2 1 , л.

1 . , 1 *Р<0,001 ¡*Р<0,05 1 1 *Р<0,05 ! 1 *Р<0,01 *Р< 0,05 ....... <

С"

ПРИМЕЧАНИЕ: * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем при Р<:,Ри< 0,05

Таблица 4

Осложнения, выявленные у животных, при моделировании хронической ацетатной язвы

Г......... 1 I Группа | Животные с к рупными язвами Л 1 Животные с незажившим | операционным швомД | | ........ 1 Животные с нарушением ! тонуса кишечника.% |

7 день 1 |14 день 21 день 7 день 14 день 1 21 день) 1 7 день 14 день 1 21 день)

I Контроль | 71,4 | 83,0 67,0 85,7 67,0 57,0 | 1 1 | 43,0 83,0 43,0 |

| Планта- | I глюцид | 50,0 | 66,6 33,0 83,0 *0 ао ! ! I 33,0 83,0 аО |

! Настойка | | семянок | 50,0 1 60,0 43,0 *16,7 АО ао ! 1 1 1 АО АО *о |

| Настойка | I листьев | 1 , ( 50,0 !*20,0 1 *0 1 50,0 *0 ............ *о ! 1 1 1 АО а20,0 а16,7 | |

ПРИМЕЧАНИЕ: * - различия статистически достоверны в сравнении с контролем

данное изучение механизма антиульцерогенного действии извлечений из лопуха. Противоязвенный эффект весьма слажен по своему биологическому содержанию и включает в качестве составляющих противовоспалительную, ранозаживляющую, антигипоксическую активность, регуляцию моторЕо-эвакуаторкой функции желудочно-кишечного тракта, нормализацию кислотно-пеятического фактора.

Исследование противовоспалительной активности извлечений из лопуха на модели острого каррагенинового и хронического воспаления на модели "ватной гранулемы" показало, что антиэкссуда-тивное действие на пике воспаления проявил настой семянок (1,0; 2,5 мл/кг), угнетая отек на 20-30%; свежий сок из корней лопуха (1,5; 5,0; 10,0 мл/кг) - процент угнетения отека колеблется от 27,5 до 35,5 в зависимости от дозы; настойка листьев (1,5; 10,0 мл/кг) уменьшала экссудацию на 25,5-30%. Настойка семянок в данном эксперименте оказывала менее выраженный эффект. Антипро-лиферативное действие, сравнимое с известным препаратом индоме-тацином, было зарегистрировано у настойки листьев (2,5 мл/кг) -угнетение пролиферации составило 15%. Извлечение из семянок активности не проявило.

Исследования влияния настоек листьев и семянок лопуха на моторно-звакуаторную функцию желудочно-кишечного тракта показали, что настойки листьев и семянок лопуха достоверно ускоряют продвижение активированного угля по тонкому кишечнику: настойка семянок - на 24 и 53% (5,0 и 2,5 мл/кг), настойка листьев - на 33% (2,5мл/кг).

При терапии язвенной болезни немаловажное значение придается препаратам, стимулирующим процессы регенерации поврежденных тканей, тем самым способствующим ускорению заживления язв. Исследования показали, что изучаемые нами настойки листьев и семянок лопуха оказывают регенеративную активность, что выражалось в ускорении сроков заживления раневого повреждения на 22% (5,0 мл/кг). Известный препарат индометацин усугублял этот процесс на 22%.

Исследования влияния настоек семянок и листьев лопуха на секреторную функцию желудка были проведены на крысах с дотированным привратником при курсовом профилактическом введении препаратов в дозе 1,0 мл/кг в течение пяти дней. Для сравнения были использованы официнальные лекарственные средства бефунгин в

114-

§

£104 I

14

21

- Контроль

Щ - Плантаглюцид

- Н-ка семянок

- Н-ка листа

Рисунок 3. Влияние настоек семянок и листьев лопуха на течение язвенного процесса у крыс на модели хронической ацетатной язвы желудка.

дозе 0,45 г/кг и фосфалюгель в дозе 1,25 г/кг. В результате исследования было выявлено, что настойка листьев способствует снижению содержания свободной соляной кислоты и общей кислотности желудочного сока, что уменьшает его повреждающее воздействие на слизистую оболочку желудка. Препарат не влиял на секрецию пепсина. Настойка семянок лопуха способствовала увеличению напряжения желудочной секреции и снижению выхода пепсина в 2 раза по сравнению с контролем, не влияя при этом на кислотообразующий фактор. Полученные данные свидетельствуют о том, что исследуемые препараты неоднозначно влияют на секреторную активность. Препараты сравнения, бефунгин и фосфалюгель, также имеют свои особенности действия на секреторную функцию желудка. Вое это может способствовать индивидуальному назначению лекарственных средств.

В патогенезе язвенной болезни определенную роль играет гипоксия слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки. Исследования, проведенные с использованием метода гипоксическсй гипоксии в герметически замкнутом сосуде (0,5 л), показали, что настойка семянок лопуха обладает антигипоксическими свойствами, увеличивая время нахождения в гермообъеме ка 15-18% (2,5; 1,0 мл/кг). Настойка семянок в дозе 0,5 мл/кг оказывала положительное влияние на процессы обучаемости и памяти, нарушенные гипоксическсй травмой, когда обучение проводили непосредственно перед гипоксическиы воздействием. Это характеризовалось увеличением числа животных с сохранившимся рефлексом, сокращением латентного времени первого захождения в темную камеру и суммарного времени пребывания в темном отсеке.

Таким образом, расширенные исследования на различных моделях повреждения слизистой оболочки желудка показали, что извлечения иа лопуха обладают выраженным гастрозащитным действием, которое связано с влиянием на различные звенья патогенетического процесса: восстановление нарушенной нейрогуморальной регуляции функций гастродуоденальной системы, снижение агрессивности желудочного содержимого, нормализация моторно-эвакуаторной функции желудочно-кишечного тракта, антигипоксическое действие, стимуляция репаративных процессов в слизистой оболочке с устранением изъязвлений и активных воспалительно-дистрофических изменений в ней. Не исключаются и другие аспекты противоязвенного действия.

ВЫВОДЫ

1. Проведенные исследования показали, что водные и спиртовые извлечения из корней, листьев, семян, семянок, а также свежий сок из корней лопуха нормализовали ряд соматических и поведенческих параметров на фоне острого стресса.

2. В условиях стрессовой ситуации наиболее выраженным является антиульцерегекный эффект. Спиртовые извлечения из надземной части лопуха и свежий сок из корней имели преимущества перед водными вытяжками, з связи о чем они выбраны для дальнейшего исследования.

3. На всех используемых моделях экспериментальной язвы желудка (нейрогенной, резерпжгсЕой, аспириновой, бутадионоЕсй, пептической язвы у крыс с перевязанным привратником, хронической ацетатной язвы) извлечения из лопуха проявили гастрозащит-ное действие, которое выражалось в снижении количества и площади деструкции слизистой оболочки желудка, в уменьшении числа животных с язвенными поражениями.

4. Извлечения из лопуха регулировали деятельность желудочно-кишечного тракта: ускоряли эвакуация киаечного содержимого, уменьшали содержание соляной кислоты и пепсина в желудочном соке у крыс, тем самым обеспечивали защиту слизистой оболочки желудка от повреждающих факторов.

5. В механизме действия извлечений из лопуха имеют значение антиэкссудативная активность, регенераторное действие, ан-тигипоксические свойства, в том числе и способность уменьшать неблагоприятные последствия гипоксическс-й травмы.

С П И С О К работ, опубликованных по теме диссертации

1. Регуляция психоэмоциональных реакций в нерме и при стрессе; влияние растительных средств / В соавт. с В.Г.Пашинс-ким, Т.Н.Поветьевой, Д.В.Ратахиной // II съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока, часть 2. - Новосибирск. - 1995. - С.342

2. Некоторые итоги работы лаборатории психофармакологии по исследованию растительных препаратов / В соазт. с В.Г.Нашинским, Н.И.Сусловым и др. //' Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Под редакцией академика РАМН Е.Д. Гольдберга. - Томск. - 1935. - С.11-15

3. Влияние извлечений из лопуха на развитие острого стресса / В соавт. с Т.Н.Поветьевой // Клинические и экспериментальные исследования молодых ученых Сибирского отделения РАМН (Сборник тезисов, посвященных 25-летию СО РАМН). - Новосибирск. - 1996.- С.53

4. Антиульцерогенные свойства растительных препаратов в эксперименте / В соавт. с Т.Н.ПаветьвБОЙ, Е.Г.Пагинским // Сибирский журнал гастроэнтерологии и гепатологни. - 1996. - Т.1, N2. - С.141-142

5. Противовоспалительные свойства препаратов из лопуха в эксперименте / В соавт. с В.Г.Папгпнокпм, Т.Н.Поветьевой, В.Н.Ждановым /■' Современное состояние и перспективы научных исследований в области фармации. - 1395. - С.£04-205

6. Поиск перспективны-: растительны:-: адаптогенов / В ссазт. с В.Г.Нашинским, Т.Н.Поветьевой // Теоретические и практические аспекты изучения лекарственных растений (материалы посвящаются памяти профессора Л..Ч. Березнпговокой). - Томок, 1996. - С.134

7. Влияние препаратов лопуха на моторнузс функцию желудочно-кишечного тракта / В соавт. с Т.Н.Поветьевой // Проблемы экспериментальной и клинической медицины. - Под редакцией академика РАМН Е.Д.Гольдберга. - Томск, 1995.

8. Сравнительная оценка фармакологической активности надземных и подземных частей представителей семейства сложноцветных / В соавт. с Т.Н.Поветьевой, Е.Г.Пашинским и др. / ' Труды первой всероссийской конференции по ботаническому ресурсоведе-нкю. - СПб. - С.218-219.