Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Сравнительная оценка высвобождения in vitro/in vivo препаратов пролонгированного действия индапамида, триметазидина, ципрофлоксацина

4842730

шлыков

Вадим Сергеевич

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВЫСВОБОЖДЕНИЯ IN VITRO/IN VIVO ПРЕПАРАТОВ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ ИНДАПАМИДА, ТРИМЕТАЗИДИНА, ЦИПРОФЛОКСАЦИНА

14.04.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 0 ЯН3 2011

Москва-2010

4842730

Работа выполнена в ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И.М. Сеченова

Научный руководитель;

доктор фармацевтических наук, профессор

Галина Владиславовна Ртаенская

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук Татьяна Николаевна Боковикова

кандидат фармацевтических наук Андрей Семенович Михалев

Ведущая организации:

Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В, Закусова РАМН.

Зашита состоится « 2-4» 2011 г. в 14 часов на заседании

Диссертационного Совета Д.208.040.09 при Первом МГМУ имени И.М.Сеченова по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной Научног: Медицинской Библиотеке Первого МГМУ им. ИЖСеченова по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, 49.

Автореферат разослан « ¿о » г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета,

доктор фармацевтических наук, /'< I

профессор Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

В России значительная часть оборота фармацевтического рынка приходится на генерические препараты. Являясь более дешевым, генерический препарат в то же время должен соответствовать оригинальному препарату по критериям качества, безопасности и эффективности. Известно, что генерики разных производителей, содержащие одно лекарственное вещество в одинаковой дозировке и лекарственной форме, могут отличаться как друг от друга, так и от инновационного препарата. Это может негативно отражаться на качестве, эффективности и безопасности препаратов и в целом на их взаимозаменяемости [Верткин A.JI., Талибов О.Б., 2004 г.].

Основными исследованиями, подтверждающими эквивалентность ге-нерического препарата оригинальному, являются: сравнительные клинические испытания, сравнительные клинические исследования биодоступности. Сравнительные клинические исследования являются длительными, трудоемкими и дорогостоящими исследованиями. На основании биофармацевтической классификационной системы (БКС) [FDA, 2001 г.; ВОЗ, 2006 г.] можно прогнозировать выявление корреляции in vitro-in vivo (IVIVC), которая позволяет в ряде случаев отказаться от затратных и продолжительных сравнительных фармакокинетических исследований в опытах in vivo, а также на основании данных in vitro, можно предсказать поведение лекарственных веществ в условиях in viro. С наибольшей вероятностью можно говорить об IVIVC для немногих лекарственных препаратов, относящихся ко 2 и 3 классу БКС.

С помощью профилей высвобождения методами in vivo и in vitro можно сделать научно обоснованные выводы о качестве препаратов сравнения по относительно меньшему объему первичной информации в более короткие сроки и более экономично, чем при проведении клинических исследований. Подобный подход применяется за рубежом, особенно для пролонгированных

форм. Именно степень и скорость высвобождения из таких препаратов является лимитирующим фактором всей фармакокинетики.

Таким образом, выявление и внедрение IVIVC для пролонгированных лекарственных средств, имеющих высокую клиническую значимость, с целью их скорейшего внедрения в практику и снижения стоимости проведения клинических исследований является актуальной современной проблемой.

Цель исследования.

Провести сравнительную оценку высвобождения действующего вещества в условиях in vitro и in vivo из таблетированных лекарственных форм с замедленным высвобождением и с последующим выявлением корреляции in vitro/in vivo.

Задачи исследования.

1. На основании анализа литературных данных сделать научно-обоснованный выбор лекарственных средств, пролонгированного действия для дальнейшей сравнительной оценки высвобождения методами in vitro и in vivo.

2. Охарактеризовать с позиций БКС лекарственные вещества исследуемых лекарственных препаратов пролонгированного действия.

3. Подобрать оптимальные условия для проведения испытания «Высвобождение».

4. Изучить кинетику растворения в опытах in vitro и провести ретроспективный анализ фармакокинетических параметров in vivo для следующих препаратов пролонгированного действия: индапамид, триметазидин, ципрофлок-сацин с последующим выявлением корреляции in vitro/in vivo.

5. На основании комплексной научной сравнительной оценки полученных экспериментальных данных сделать обоснованное заключение о возможности применения IVIVC для исследуемых препаратов.

Научная новизна.

Проведена сравнительная оценка высвобождения методами in vitro и in vivo, для препаратов пролонгированного действия индапамида, триметазидина, ципрофлоксацина с целью установления статистически достоверной линейной корреляционной зависимости между параметрами этих двух методов. Выявленная IVIVC относится к корреляции уровня В (по классификации USP 33). Полученные результаты исследований могут служить в качестве отправной точки для выявления более высокого уровня корреляции - уровня А, необходимой для отказа от проведения исследований на человеке в пользу проведения испытаний по кинетике высвобождения лекарственных веществ in vil го.

Практическое применение.

Выявленная IVIVC доказывает возможность использования разработанных методик высвобождения при разработке препарата с целью оптимизации состава лекарственной формы или для целей биофармацевтического анализа. В ряде случаев, может являться основанием для обоснованного отказа от проведения исследований биоэквивалентности.

Положения, выносимые на защиту.

1. При изучении сравнительной оценки высвобождения для препаратов, содержащих триметазидин, ципрофлоксацин методами in vitro/in vivo была выявлена линейная корреляция (г=0,97;0,96).

2. При изучении сравнительной оценки высвобождения для препаратов, содержащих индапамид, методами in vitro/in vivo выявлена нелинейная корреляция (г=0,94).

Внедрение результатов в практику.

Результаты работы внедрены в работу ООО «Технология лекарств» при проведении исследований по тесту «сравнительной кинетики растворения», в Филиал «Клиническая фармакология» НЦ БМТ РАМН.

Апробация работы.

Апробация работы проведена на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ им.И.М.Сеченова в июне 2010 года.

Основные результаты доложены и обсуждены на VI Международной конференции "Молекулярная медицина и биобезопасность" (Москва, 2009 г.)

Связь задач исследования с проблемным планом.

Диссертационная работа является частью исследований по совершенствованию методов стандартизации и контроля качества JIC, которые проводятся на кафедре фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. Тема включена в план научных исследований кафедры фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, № Государственной регистрации - № 01.2.006 06352.

Публикации по работе.

По результатам выполненной диссертационной работы опубликовано 4 печатных работ, в том числе 3 - в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем н структура диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований: «Материалы и методы исследований», «Исследование кинетики растворения препаратов пролонгированного действия методом in vitro», «Сравнительная оценка высвобождения исследуемых препаратов пролонгированного действия методами in vitro и in vivo», общих выводов и списка литературы. Работа изложена на 139 страницах машинописного текста, проиллюстрирована 34 рисунками и 23 таблицами. Библиографический указатель включает 140 источник из которых 75 зарубежные.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для изучения сравнительной оценки высвобождения в условиях in vitro были выбраны следующие лекарственные средства пролонгированного действия:

Лекарственные средства индапамида, таблетки, 1,5 мг:

Исследуемые препараты:

1. Ионик ретард, таблетки с контролируемым высвобождением, покрытые оболочкой, (ЗАО ФП «Оболенское», Россия)

2. Индапамид MB, таблетки с модифицированным высвобождением, покрытые оболочкой, (ЗАО Макиз-фарма, Россия)

3. Равел СР, таблетки пролонгированного действия, покрытые оболочкой, (ООО «КРКА-РУС», Россия)

4. Акрипамид ретард, таблетки, покрытые оболочкой, пролонгированного действия, (ОАО ХФК «Акрихин», Россия).

Препарат сравнения:

Арифон ретард, таблетки с контролируемым высвобождением, покрытые оболочкой, (АО «Лаборатория Сервье», Франция)

Лекарственные средства триметазидина, таблетки 35 мг:

Исследуемый препарат:

Депренорм МВ, таблетки с модифицированным высвобождением, покрытые оболочкой, (ЗАО «Канонфарма продакшн», Россия)

Препарат сравнения:

Предукгал МВ, таблетки с модифицированным высвобождением, покрытые оболочкой, (АО «Лаборатория Сервье», Франция)

Лекарственные средства ципрофлоксацина, таблетки, 500 мг:

Исследуемый препарат:

Ципринол СР, таблетки пролонгированного действия, покрытые пленочной оболочкой, (ООО «КРКА-РУС», Россия)

Препарат сравнения:

Цифран ОД, таблетки, покрытые оболочкой, пролонгированного действия, («Ранбакси Лабораториз Лтд.», Индия)

В качестве объектов исследования использовались лекарственные средства, зарегистрированные на территории РФ, активные ингредиенты которых относятся к различным классам БКС в соответствии с рекомендациями ВОЗ.

В работе использовали следующее оборудование:

Спектрофотометр «Lambda25 Perkin Elmer» (США), прибор «Лопастная мешалка», «Sotax AT 7 smart» (Швейцария), с управлением от внешнего компьютера с использованием встроенной программы «UV WinLab», рН-метр «Mettler Toledo» (Швейцария), электронные весы «Сарториус» (Германия).

В работе использовали следующие реактивы: вода дистиллированная, кислота хлороводородная концентрированная, кислота уксусная ледяная, натрия гидрофосфат додекагидрат, калия дигидрофосфат, натрия ацетат тригидрат, калия хлорид, натрия гидроксид.

Все реактивы, используемые в анализе, имели градацию «ЧДА». Образцы субстанций лекарственных веществ были предоставлены фирмами-производителями исследуемых препаратов.

Сравнительная оценка биофармацевтических свойств лекарственных средств и их активных ингредиентов проводилась на основании анализа литературных данных по их растворимости, проницаемости, составу вспомогательных веществ.

Изучение сравнительной кинетики растворения лекарственных средств проводилось в соответствии с требованиями МУ МЗиСР РФ «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств», приложение 4,2008 г.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью компьютерных программ ORIGIN 7.0 и М-IND.

Метрологические характеристики методик изучения сравнительной кинетики растворения рассчитывали в соответствии с ГФ XI, т.1.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Анализ биофармацевтических свойств изучаемых лекарственных

средств и активных ингредиентов. 1.1. Биофармацевтические свсйстбз нндзпзм»дз.

Растворимость активного ингредиента.

Максимальная доза индапамида, указанная в Списке Основных Лекарственных Средств ВОЗ и в Государственном реестре РФ составляет 2,5 мг. В воде он практически нерастворим - 0,034 мг/мл. Отношение максимальной дозы к растворимости (D/S) - 73,529 мл. Выраженных центров основности не имеет: атом азота в остатке индольной структуры обладает слабо выраженными основными свойствами, что не имеет практического значения и делает его мало растворимым при pH от 1,2 до 6,8.

Согласно приведенным данным, с учетом критериев классификации ВОЗ, индапамид можно отнести к «малорастворимым» лекарственным веществам.

Проницаемость активного ингредиента.

Экскреция метаболитов индапамида с мочой составляет 90-95%. О высокой проницаемости индапамида (более 85% по требованиям ВОЗ) можно говорить на основании данных экскреции метаболитов. Прием пиши несколько замедляет скорость, но не влияет на полноту абсорбции. В соответствии с этим, индапамид можно отнести к лекарственным веществам с «высокой проницаемостью».

Таким образом, учитывая, что лекарственное вещество индапамид согласно классификации ВОЗ имеет «низкую растворимость» и «высокую проницаемость», его следует относить ко II классу БКС.

Состав вспомогательных веществ изучаемых объектов. Оригинальный лекарственный препарат Арифон ретард® содержит в своем составе следующие вспомогательные вещества: ГПМЦ, повидон, лактозы моногидрат, кремния ангидрид коллоидный, магния стеарат.

Заявленный состав препаратов, содержащих индапамид Таблица 1

Индапамид MB Равел СР Акрипамид ретард Ионик® ретард

Метоцель, лактоза, аэросил, магния стеарат ГПМЦ, повидон, целлакто-за, кремния ангидрид коллоидный, магния стеарат Лудипресс, ГПМЦ, аэросил, магния стеарат, макрогол (ПЭГ), глицерол, титана диоксид, тальк, лактоза Гипромелоза (Бе-нецел МР), коли-дон, лактоза, целлюлоза микрокри-сталличе-ская, аэросил, магния стеарат

Согласно данным, представленным в таблице 1 качественный состав вспомогательных веществ в лекарственных средствах сходен.

1.2. Биофармацевтические свойства триметазидина.

Растворимость активного ингредиента.

Триметазидин в составе таблетированных форм пролонгированного действия находится в солевой форме триметазидин дигидрохлорида. Максимальная доза триметазидина, указанная в Списке Основных Лекарственных Средств ВОЗ составляет 35 мг. Растворимость в воде - 1,2 мг/мл. Отношение максимальной дозы к растворимости (D/S) - 29,2мл.

Согласно приведенным данным, с учетом требований ВОЗ триметазидин можно отнести к «высоко растворимым» лекарственным веществам.

Проницаемость активного ингредиента. Биодоступность триметазидина составляет 90%.

Ii

Таким образом, учитывая, что в соответствии с критериями, установленными ВОЗ, триметазидин имеет «высокую растворимость» и «высокую проницаемость», его следует относить к I классу БКС.

Состав вспомогательных вегцеств изучаемых объектов.

Таблетки, покрытые оболочкой, выпускаемые под торговым названием Депренорм MB (ЗАО «Канонфарма продакшн»), содержат в своем составе вспомогательные вещества: кальция гидрофосфат дигидрат, целлюлозу микрокристаллическую, аэросил, клуцель гидроксипропилцеллюлозу (ГПЦ) LF, гидроксипропилметилцеллюлозу (ГПМЦ), плаздон, магния стеарат.

Триметазидин, выпускаемый «Лаборатории Сервье », в состав ЛФ включает вспомогательные вещества: кальция гидрофосфат дигидрат, магния стеарат, глицерол, повидон, аэросил, макрогол, гидроксипропилметилцеллюлозу.

Качественный состав вспомогательных веществ в обоих лекарственных средствах сходен, все вспомогательные вещества хорошо изучены и широко используются.

1.3. Биофармацевтические свойства ципрофлоксацина.

Растворимость активного ингредиента.

Растворимость ципрофлоксацина в воде составляет 21,7 мг/мл, является слабым основанием. Максимальная доза ципрофлоксацина, утвержденная в Списке Основных Лекарственных Средств ВОЗ составляет 1000 мг. Соотношение D/S (в воде) для ципрофлоксацина = 46,08 мл, что соответствует требованиям ВОЗ (250 мл или менее).

С учетом приведенных данных, согласно критериям растворимости ЛВ биофармацевтической классификации ВОЗ, ципрофлоксацин относят к «высоко растворимым» лекарственным веществам.

Проницаемость активного ингредиента.

Ципрофлоксацин неполно всасывается в ЖКТ, его абсолютная биодоступность составляет 40-60%. Так как проницаемость составляет менее 85%, что заявлено ВОЗ как критерий высокой проницаемости, ципрофлоксацин следует отнести к лекарственным веществам с «низкой проницаемостью».

Таким образом, учитывая, что ципрофлоксацин имеет «высокую растворимость» и «низкую проницаемость» в соответствии с критериями ВОЗ, его следует относить к III классу БКС.

Состав вспомогательных веществ изучаемых объектов.

В препарате Ципринол СР фирмы-производителя «КРКА РУС» включены следующие вспомогательные вещества: магния стеарат, кремния диоксид коллоидный безводный, тальк. Оболочка: Опадрай-Y-1 -7000: гипромел-лоза, титана диоксида и макрогол 400.

В состав препарата Цифран ОД производства «Ранбакси» в качестве вспомогательных веществ входят: натрия альгинат (Kelton LVCR), ГПМЦ, натрия гидрокарбонат, кросповидон (Kollidon CLM), магния стеарат, аэросил 200, тальк. Качественный состав вспомогательных веществ в лекарственных средствах сходен, все вспомогательные вещества хорошо изучены и широко используются.

Таким образом, на основании сравнительного рассмотрения биофармацевтических свойств изучаемых объектов и содержащихся в них активных ингредиентов, можно сделать заключение, что данные свойства индапамида, триметазидина и ципрофлоксацина удовлетворяют критериям возможности проведения процедуры IVIVC согласно рекомендациям ВОЗ.

2. Изучение сравнительной кинетики растворения in vitro лекарственных средств индапамида, триметазидина и ципрофлоксацина.

Изучение сравнительной оценки высвобождения исследуемых лекарственных средств выполнялось при следующих условиях:

1J

• Аппарат - Лопастная мешалка

• Число оборотов - 50 об/мин

• Временные точки - 1, 2, 3, 4, б час

• Температура - 37±0,5°С

• Среда растворения - буферные растворы с pH: 1,2; 4,3; 6,8

• Объем среды растворения:

500 мл (индапамид и триметазидин) 900 мл (ципрофлоксацин)

Количественное определение - СФМ при длине волны:

• 240 нм (индапамид)

• 270 нм (триметазидин)

• 327 нм (ципрофлоксацин)

Сравнительная оценка эквивалентности профилей высвобождения проводилась с помощью параметров/} и/>.

Фактор различия/; вычисляли по формуле:

Z R,

.vi00 %,

где: - п - число временных интервалов отбора проб;

- Я и Т - процентное содержание определяемого вещества (среднее значение), высвободившегося в среду растворения, в каждый момент времени (I) из препарата сравнения (Я) и испытуемого препарата (Т). Фактор подобиявычисляли по формуле:

-0.5 ]

/2 = 5»* К.

1 '=" ? 1+(-) I (RrTt) п i=1

<юо[,где обозначения см.выше.

Для каждой временной точки производился расчет величины стандартного отклонения.

Кинетика растворения лекарственных средств считалась эквивалентной, если значение/; лежит в пределах от 0 до 15, а значение/? лежит в пределах от 50 до 100.

Результаты сравнительной оценки высвобождения in vitro для исследуемых препаратов в трех средах приведены на рис. 1-9.

Рис. 1. Усредненные профили высвобождения индапамида из изучаемых препаратов при рН 1,2 (п=12).

Иллу^ьйг^прп' S, f:

1ЬШ1Мсь\В ад OA

Лкрпмпрларз «2.7 .42

Ии^рес^а 11.45 84,52

1Ъо> Н CWMjC HipitJ 0-15 »ICO

№}ЦЩЭЪЙ t ЧХПТИГ-АрфП рлир>|

время, час

Рис. 2. Усредненные профили высвобождения индапамида из изучаемых препаратов при рН 4,3 (п=12).

время,нас

Рис. 3. Усредненные профили высвобождения индапамида из изучаемых препаратов при рН 6,8 (п=12).

При изучении кинетики высвобождения индапамида из ЛС пролонгированного действия различных производителей было установлено, что максимально схожие с препаратом сравнения Арифон ретард профили растворения in vitro имели препараты Индапамид MB и Ионик ретард. Существенные различия в динамике высвобождения индапамида с препаратом сравнения были выявлены для препарата Акрипамид ретард (значение /> для трех сред не превышало 51 - 53; разница в линейной скорости высвобождения составляла 15 - 20 %). Менее существенные различия были отмечены для препарата Равел PC.

—*—npeflytrtn ut

0 1 2 3 4 5 в

вр»ия,чае

Рис. 4. Усредненные профили высвобождения триметазидина из изучаемых препаратов при рН 1,2 (п=12).

время,час

Рис. 5. Усредненные профили высвобождения триметазидина из изучаемых препаратов при рН 4,3 (п=12).

время, час

Рис. 6. Усредненные профили высвобождения триметазидина из изучаемых препаратов при рН 6,8 (п=12).

0 1 2 3 4 5 6

время,час

Рис. 7. Усредненные профили высвобождения ципрофлоксацина из изучаемых препаратов при рН 1,2 (п=12).

Рис. 8. Усредненные профили высвобождения ципрофлоксацина из изучаемых препаратов при рН 4,3 (п=12).

Рис. 9. Усредненные профили высвобождения ципрофлоксацина из изучаемых препаратов при рН 6,8 (п=12).

Совокупность графического и математического анализа результатов, полученных для трех сред растворения при изучении сравнительной оценки высвобождения препаратов пролонгированного действия триметазидина, (Предуктал МВ и Депренорм МВ) показывает, что существенных различий в высвобождении не было выявлено. Высвобождение триметазидина из препарата Депренорм МВ можно считать эквивалентным препарату сравнения.

18

При сравнительной оценки высвобождения in vitro препаратов пролонгированного действия ципрофлоксацина (Цифран ОД и Ципринол CP) было установлено наличие достаточно существенных различий между испытуемыми препаратами. Наиболее существенное различие между испытуемыми препаратами было отмечено в среде ацетатного буферного раствора. В этой среде в 1-й контрольной точке среднее количество высвободившегося ципрофлоксацина из Цифрана ОД составило около 23 %, а из Ципринола CP -более 90 %. В среде 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной профили растворения испытуемых препаратов имеют схожий характер, однако скорость высвобождения ципрофлоксацина из препарата Ципринол CP существенно снижается после третьего часа испытаний.

3. Выявление корреляции между параметрами in vitro и in vivo.

Нами был проведен ретроспективный анализ результатов биоэквивалентности для нижеперечисленных препаратов, принятых в качестве препа-ратов-сравнения в исследованиях по изучению кинетики растворения по тесту «Растворение» методом in vitro: Арифон ретард 1,5 мг (Сервье, Франция); Предуктал MB 35 мг (Сервье, Франция); Цифран ОД 500 мг (Ранбакси, Индия). Основные фармакокинетические параметры представлены в таблице 2.

Таблица 2

Усредненные фармакокинетические параметры исследуемых препаратов

Лекарственный препарат Стах Ттах AUC MRT¿„ vívd

Арифон ретард 25,5 8,6 531,1 6,856

Предуктал MB 64,2 2,9 743,7 10,198

Цифран ОД 1306,5 3,4 7704,5 4,090

Корреляция проводилась для оригинальных препаратов пролонгированного действия, которые выступают в качестве препаратов сравнения в ис-

19

следованиях кинетики растворения in vitro для всех трех фармакологических групп. В отличие от препаратов с обычным высвобождением, лекарственные формы с медленным высвобождением имеют более длительный по времени профиль высвобождения ЛВ, что обуславливает большее количество временных точек как для метода in vitro, так и для in vivo.

На основании БКС можно, в ряде случаев, прогнозировать выявление IVIVC. Чтобы отнести исследуемые препараты к определенному классу БКС, следует оценить данные об их растворимости и всасывании (фармакокинеги-ке).

В исследованиях проводилось установление связи между фармакоки-нетическим параметром MRTw vivo и параметром растворения in vitro MDT/и vitro. При условии, что процесс растворения для исследуемых препаратов описывается уравнением кинетики растворения первого порядка, был произведен расчет констант скорости растворения, по которым проводились дальнейшие вычисления параметра MDT/n vitro .

Результаты установления корреляции между параметрами in vitro и in vivo приведены на рис. 10-12.

—i---1-•-1---1---1---1-■-1 ■ i --г-

6,2 6,4 0,6 б.а 7.0 7.2 7,4 7.6 7.6 MRTeirto(4ac)

Рис. 10. Зависимость между средним временем растворения in vitro (MDT„ унт) и средним временем удерживания индапамида в организме in vivo (MRT,, vivo} для таблеток Арифон ретард 1,5 мг.

у= -1,0893+0,7658*х

г=0,9666 р<0,0001

MRT(4ac) in vivo

Рис. 11. Зависимость между средним временем растворения in vitro (MDT,„ , ,,„,) и средним временем удерживания JIB в организме in vivo (MRT,„ v,v0) для таблеток Предуктал MB 35 мг.

MRT»,».<4ac)

Рис. 12. Зависимость между средним временем растворения in vitro (MDT,„ «tro) и средним временем удерживания J1B в организме in vivo (MRT/„ „„) для таблеток Цифран ОД 500 мг.

Согласно представленным данным для Арифон ретард 1,5 мг установлены корреляционные зависимости между параметрами экспериментальной фармакокинетики исследуемого препарата (MRT) и скоростью его высвобождения in vitro (MDT), отображающие корреляции типа В. Исходя из того,

что препарат Арифон ретард выступает препаратом сравнения в опытах да vitro и наиболее эквивалентными по значению факторов подобия (/*>) для него являются профили высвобождения препаратов Ионик® ретард и Индапамид MB, то можно сделать прогноз о том, что коэффициент корреляции для эквивалентных препаратов будет иметь значение близкое к значению препарата Арифон ретард. Корреляционная зависимость между параметрами описывается уравнением Больцмана. Коэффициент корреляции составил 0,94.

Для препарата Предуктал MB 35 мг (препарат сравнения in vitro) полученные данные свидетельствуют о IVIVC. Коэффициент корреляции (г) составляет 0,96.

Проводимая в наших исследованиях IVIVC уровня В позволяет говорить о тождественности параметров сравнения (MRT/MDT) только в том случае, если коэффициент корреляции (г) приближается к значению 0,85.

Полученные корреляционные зависимости свидетельствуют о IVIVC уровня В. Однако, установленная корреляция, в нашем случае, уровня В не позволяет полностью отражать связь концентраций JIB в плазме крови с уровнем ЛВ в среде растворения, т.к. проведение корреляции данного уровня не формируется от точки к точке, в отличии от IVIVC уровня А прямым накладыванием кривых высвобождения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате анализа литературных данных были выбраны следующие таблетированные препараты с медленным высвобождением действующего вещества: индапамида, как представителя II класса БКС, триметазидина, как представителя I класса БКС, ципрофлоксацина, как представителя III класса БКС, для дальнейшей сравнительной оценки высвобождения методами in vitro и in vivo.

2. Изучены биофармацевтические свойства исследуемых лекарственных препаратов и их активных веществ в соответствии с БКС. В соответствии с критериями БКС установлено, что исследуемые препараты триметазидина обладают высокой растворимостью и высокой проницаемостью; препараты индапамида - низкой растворимостью и высокой проницаемостью; препараты ципрофлоксацина — высокой растворимостью и низкой проницаемостью.

3. Подобраны основные условия проведения испытания «Высвобождение» в условиях in vitro для исследуемых объектов.

4. Изучена сравнительная кинетика растворения препаратов пролонгированного действия индапамида («Арифон ретард», «Индапамид МВ», «Ионик ретард», «Акрипамид МВ», «Равел CP»), препаратов триметазидина («Пре-дуктал МВ» и «Депренорм МВ») а также лекарственных средств ципрофлоксацина («Цифран ОД» и «Ципринол CP»). Для препаратов, выступающих в качестве препаратов - сравнения, («Арифон ретард», «Предуктал МВ», «Цифран ОД») на основании данных по кинетике растворения в опытах in vitro был рассчитан параметр - среднее время растворения (MDT ,„ v„ra).

5. Между данными растворения in vitro и фармакокинетическими параметрами in vivo для препаратов триметазидина и ципрофлоксацина установлена линейная корреляционная зависимость уровня В (г=0,94 и 0,95 соответственно), а для препаратов индапамида - нелинейная зависимость уровня В (г=0,94). Для исследуемых препаратов триметазидина и ципрофлоксацина выявлена возможность применения IVJVC. Для препаратов индапамида доказана невозможность применения процедуры IVIVC.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Раменская Г.В., Шлыков B.C., Деханова O.A. Сравнительная оценка высвобождения in vitro таблеток индапамида пролонгированного действия // Хим.фарм.журнал.-2008.-№12. - С.52-55.

2. Раменская Г.В., Шлыков B.C., Деханова O.A. Сравнительная оценка высвобождения in vitro таблеток триметазидина пролонгированного действия //Хим.фарм.журнал. -2009.-№12,- С.36-38.

3. Шлыков B.C. Сравнительная оценка высвобождения in vitro таблеток триметазидина пролонгированного действия //Сборник материалов VI Международной конференции "Молекулярная медицина и биобезопасность". -Москва, 2009,- С.242-244.

5. Раменская Г.В., Шлыков B.C., Деханова O.A. Сравнительная оценка высвобождения in vitro таблеток индапамида пролонгированного действия //Клиническая фармакология и терапия. - 2009,- №6(доп.).-С.288-290.

Актуальность темы.

В настоящее время выпускается множество современных пероральных таблетированных лекарственных форм с модифицируемым высвобождением (ЛФМВ) [24,64]. В России значительная часть оборота фармацевтического рынка приходится на более дешевые «генерики»[36,54]. Генерический препарат должен отвечать оригинальному ЛП по критериям качества, безопасности и эффективности. Генерики нескольких производителей, содержащие одно лекарственное вещество (ЛВ) в одинаковой дозировке и лекарственной форме (ЛФ) могут отличаться как друг от друга , так и от оригинального ЛП. Это может негативно отражаться на качестве, эффективности и безопастности ЛП и в целом на взаимозаменяемости препаратов.

Основными исследованиями, подтверждающими эквивалентность генерического ЛП оригинальному, являются: сравнительные клинические испытания, сравнительные исследования биодоступности у человека, сравнительные фармакодинамические исследования, исследования биоэквивалентности методами in vitro [12]. Сравнительные клинические исследования являются длительными, трудоемкими и дорогостоящими исследованиями. На основании биофармацевтической классификационной системы (БКС) можно прогнозировать выявление корреляции in vitro-in vivo (IVIVC), которая позволяет в ряде случаев отказаться от затратных и продолжительных сравнительных фармакокинетических исследований в опытах in vivo, а также на основании данных in vitro, предсказать поведение ЛВ в условиях in vivo. С наибольшей вероятностью можно говорить об IVIVC для ЛП, относящихся ко 2 и 3 классу БКС. С помощью профилей высвобождения ЛФМВ методами in vivo и in vitro можно сделать научные выводы о качестве препаратов сравнения по относительно меньшему объему первичной информации и в более короткие сроки и более экономично, чем при проведении клинических исследований.

Таким образом, сравнительное изучение профилей высвобождения методами in vitro и in vivo для дальнейшего установления статистически достоверной корреляции между фаркакокинетическими параметрами и параметрами растворения in vitro является актуальной, современной проблемой, что и определило цели и задачи исследования.

Цель исследования: провести сравнительную оценку высвобождения действующего вещества в условиях in vitro и in vivo из таблетированных лекарственных форм с замедленным высвобождением и с последующим выявлением корреляции in vitro/in vivo. Задачи исследования:

1. На основании анализа литературных данных сделать научно-обоснованный выбор лекарственных средств, пролонгированного действия для дальнейшей сравнительной оценки высвобождения методами in vitro и in vivo.

2. Охарактеризовать с позиций БКС лекарственные вещества исследуемых лекарственных препаратов пролонгированного действия.

3. Подобрать оптимальные условия для проведения испытания «Высвобождение».

4. Изучить кинетику растворения в опытах in vitro и провести ретроспективный анализ фармакокинетических параметров in vivo для следующих препаратов пролонгированного действия: индапамид, триметазидин, ципрофлоксацин с последующим выявлением корреляции in vitro/in vivo.

5. На основании комплексной научной сравнительной оценки полученных экспериментальных данных сделать обоснованное заключение о возможности применения IVIVC для исследуемых препаратов

Научная новизна предполагаемой темы.

В работе проводится сравнительная оценка кинетики растворения и высвобождения двумя методами in vitro и in vivo, для препаратов пролонгированного действия индапамида, триметазидина, ципрофлоксацина на предмет установления статистически достоверной линейной корреляционной зависимости между параметрами этих двух методов. Установленная IVIVC относится к корреляции уровня В (по классификации USP 33). Полученные результаты исследований могут служить в качестве отправной точки для выявления более высокого уровня корреляции - уровня А, необходимой для отказа от проведения исследований на человеке в пользу проведения испытаний по кинетике высвобождения лекарственных веществ in vitro.

Практическая значимость.

Выявленная IVIVC может использоваться при разработке препарата с целью оптимизации состава ЛФ или при контроле качества, например, в связи с изменением места производства. Кроме того, может послужить в качестве заменителя измерения скорости всасывания in vivo. Что тем самым, сопряжено с процессами, связанными с изучением ЛП в экспериментальных исследованиях на животных или человеке. В ряде случаев, может являться основанием для обоснованного отказа от проведения исследований биоэквивалентности.

Личный вклад соискателя.

Автором лично проведены методики по кинетики растворения в условиях in vitro, рассчитаны фармакокинетические параметры in vivo и параметры растворения in vitro, выполнена статистическая обработка и анализ полученных результатов, проведена работа на выявление корреляционной зависимости между фармакокинетическими параметрами высвобождения ЛВ в условиях in vivo и параметрами растворения ЛВ из ЛФМВ, полученными в опытах in vitro. Апробация работы.

Апробация работы проведена на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова в июне 2010 года.

Основные результаты доложены и обсуждены на на VI Международной конференции "Молекулярная медицина и биобезопасность" (Москва, 2009).

Связь задач исследования с проблемным планом.

Диссертационная работа является частью исследований по совершенствованию методов стандартизации и контроля качества JIC, которые проводятся на кафедре фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. Тема включена в план научных исследований кафедры фармацевтической и токсикологической химии фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, № Государственной регистрации — № 01.2.006 06352. Исследование выполнено на базе ФГУП «Центр по химии лекарственных средств ЦХЛС - ВНИХФИ». Публикации по работе.

По результатам выполненной диссертационной работы опубликовано 4 печатных работы, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ. Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований: «Материалы и методы исследований», «Исследование кинетики растворения препаратов пролонгированного действия методом in vitro», «Сравнительная оценка высвобождения исследуемых препаратов пролонгированного действия методами in vitro и in vivo», общих выводов и списка литературы. Работа изложена на 139 страницах машинописного текста, проиллюстрирована 34 рисунками и 23 таблицами. Библиографический указатель включает 140 источник из которых 75 зарубежные.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате анализа литературных данных были выбраны следующие таблетированные препараты с медленным высвобождением действующего вещества: индапамида, как представителя П класса БКС, триметазидина, как представителя I класса БКС, ципрофлоксацина, как представителя III класса БКС, для дальнейшей сравнительной оценки высвобождения методами in vitro и in vivo.

2. Изучены биофармацевтические свойства исследуемых лекарственных препаратов и их активных веществ в соответствии с БКС. В соответствии с критериями БКС установлено, что исследуемые препараты триметазидина обладают высокой растворимостью и высокой проницаемостью; препараты индапамида - низкой растворимостью и высокой проницаемостью; препараты ципрофлоксацина — высокой растворимостью и низкой проницаемостью.

3. Подобраны основные условия проведения испытания «Высвобождение» в условиях in vitro для исследуемых объектов.

4. Изучена сравнительная кинетика растворения препаратов пролонгированного действия индапамида («Арифон ретард», «Индапамид МВ», «Ионик ретард», «Акрипамид МВ», «Равел CP»), препаратов триметазидина («Предуктал МВ» и «Депренорм МВ») а также лекарственных средств ципрофлоксацина («Цифран ОД» и «Ципринол CP»). Для препаратов, выступающих в качестве препаратов - сравнения, («Арифон ретард», «Предуктал МВ», «Цифран ОД») на основании данных по кинетике растворения в опытах in vitro был рассчитан параметр - среднее время растворения (MDT in vitro).

5. Между данными растворения in vitro и фармакокинетическими параметрами in vivo для препаратов триметазидина и ципрофлоксацина установлена линейная корреляционная зависимость уровня В (г=0,94 и 0,95 соответственно), а для препаратов индапамида - нелинейная зависимость уровня В (г=0,94). Для исследуемых препаратов триметазидина и ципрофлоксацина выявлена возможность применения IVIVC. Для препаратов индапамида доказана невозможность применения процедуры IVIVC.

Заключение

1. - Подобраны оптимальные условия для проведения исследований кинетики высвобождения in vitro препаратов Цифран ОД и Ципринол СР.

2. - В выбранных условиях изучена кинетика растворения ципрофлоксацина для препаратов различных производителей.

3. - Проведена статистическая обработка полученных результатов, позволяющая провести сравнительную оценку кинетики высвобождения in vitro.

4. - При сопоставлении графических профилей высвобождения» и математических критериев был выявлен ряд закономерностей, позволяющих прогнозировать наличие принципиальных различий между препаратами Цифран ОД и Ципринол CP в in vivo профилях.