Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Сравнительная оценка эффективности депоколлекторных систем, содержащих некоторые адаптогены

На правах рукописи

ФАТИХОВ Илсур Муслимович

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕПОКОЛЛЕКТОРНЫХ СИСТЕМ, СОДЕРЖАЩИХ НЕКОТОРЫЕ АДАПТОГЕНЫ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой силп,.... -кандидата медицинских наук

Челябинск - 2009

003482623

Работа выполнена на кафедре фармакологии в Государственном образовательно учреждении высшего профессионального образования «Уральская государственна медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальнс му развитию»

Научный руководитель

доктор медицинских наук, Ларионов Леонид Петрович

профессор

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, Волчегорский Илья Анатольевич

профессор

доктор медицинских наук, Юшков Владимир Викторович

профессор

Ведущая организация

Государственное учреждение Научно-исследовательский институт фармакс логии им. В.В. Закусова Российской академии медицинских наук

Защита диссертации состоится «_»_2009 г. в « » часе

на заседании диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном образе вательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская гс сударственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранени) и социальному развитию».

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образе вательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинске государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохраш нию и социальному развитию».

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Телешева Л. Ф.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Для поддержания здоровья людей не вызывает сомнения значимость использования лекарственных растений. Если учесть, что нарушение гомеостаза приводит к повреждению и гибели организма, то становится понятной важная регуляция потока биологически активных веществ, поступающих в организм с лекарствами и пищей. Профилактика заболеваний и повышение адаптационных возможностей организма является важной задачей на современном этапе. В этом случае становится понятна актуальность своевременного приема адапто-генных препаратов (Барнаулов О.Д., 2001). Привлекает внимание малая токсичность, возможность длительного использования лекарственных средств растительного происхождения без возникновения существенных побочных эффектов при поддерживающей терапии, а также в комбинации с синтетическими препаратами (Куркин В.А, 1999).

В суббуккальных (буккальных, трансбуккальных, защёчных, надёсенных) лекарственных желатиновых плёнках мы предлагаем использовать очень малые дозы адаптогенов и других биологически активных веществ, составляющие порядка 1/10 обычной средней разовой терапевтической дозы. В литературе имеются данные (Алюшин М.Т.,1987; Higuchi Т., 1983) о том, что при использовании традиционных лекарственных форм (не направленного действия) до 90% дозы лекарственного вещества не достигает цели, т.е. зоны патологии.

От дозы зависит и избирательность действия лекарственного препарата. Чем выше доза препарата, тем менее избирательным он становится. Препараты с низкой избирательностью действия оказывают влияние на многие ткани, органы и системы, вызывая большое число побочных реакций. От дозы зависит не только эффективность, но и безопасность лечения (Белоусов Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К., 2000). Предварительные исследования желатин-глицериновых масс с лекарственными веществами (Фурина Е.А., Ларионов Л.П., Евтушенко А.Д. и др., 1981) и ме-тилцеллюлозных масс (Ерофеева Л.Н., Афонина Н.Д., Карпенко E.H. и др., 2003) также показали возможность снижения доз в данных композициях без уменьшения действия лекарственных веществ. Для некоторых лекарственных веществ установлено, что малые дозы предпочтительнее больших для пролонгирования эффекта (Гуревич К.Г., 2001). Лекарственное вещество практически не попадает в кишечник и не разрушается в нём. Это дало нам возможность рассмотреть лекарственные желатиновые пленки как эффективную депоколлекторную систему для адаптогенов,

\

обеспечивающую пролонгированное поступление малых доз адаптогенов в систе? ный кровоток. Кроме того, остаются неисследованными вопросы использован) экстракта коры осины в фармакотерапии, несмотря на широкое ее использование «нетрадиционной» и народной медицине.

Цель исследования. Разработать, изготовить опытные образцы депоколле торных систем (лекарственные желатиновые пленки), содержащих некоторые ада! тогены и экстракт коры осины. Провести сравнительную оценку безопасности эффективности полученных лекарственных желатиновых пленок в эксперименте I животных и людях, для трансбуккального использования адаптогенов в медици] ской практике.

Задачи исследования:

1. Разработать трансбуккальные лекарственные желатиновые пленки, соде] жащие адаптогены (элеутерококк колючий, аралия маньчжурская, левзея сафлор видная, родиола розовая) и экстракт коры осины.

2. Провести доклинические исследования полученных лекарственных жел тиновых пленок с адаптогенами в эксперименте, оценить их возможную острую хроническую токсичность, безопасность при трансбуккальном применении.

3. Оценить возможность использования экстракта коры осины в лекарственнь желатиновых пленках и в виде водно-спиртового экстракта в качестве адаптогена.

4. Изучить в сравнительном аспекте влияние адаптогенов и экстракта кор осины в форме лекарственных желатиновых пленок и жидких водно-спиртовь экстрактов на поведенческие реакции, работоспособность и утомляемость лабор торных животных в эксперименте.

5. Модифицировать методику исследования переключения внимания, пре, ложенную Е.А. Умрихиным (1979) и усовершенствованную Л.П. Ларионовы (1980), для выявления темпа сенсомоторных реакций и особенностей внимания человека.

6. Исследовать влияние лекарственных желатиновых пленок, содержали экстракт коры осины, на инертность психических процессов и истощаемость ци тральной нервной системы у человека с использованием модифицированной 4 цветной методики исследования.

Научная новизна исследования. В процессе проведения экспериментам ных исследований впервые разработаны и изготовлены лекарственные желати» вые пленки, содержащие адаптогены (элеутерококк колючий, аралия маньчжу

екая, левзея сафлоровидная, радиола розовая) и экстракт коры осины. Изучены их физико-химические свойства (растворимость, высвобождаемость действующих начал, сроки хранения), установлена безопасность для организма лабораторных животных и людей. Впервые выявлена высокая трансбуккальная активность адаптоге-нов и экстракта коры осины в лекарственных желатиновых пленках, сопоставимая с активностью пероральных лекарственных форм в виде жидких водно-спиртовых экстрактов. Выявлены особенности локомоторной ответной реакции крыс в эксперименте под действием некоторых адаптогенов в различной лекарственной форме, установлены адаптогенные свойства жидкого экстракта коры осины и лекарственных желатиновых пленок с его содержанием. Впервые разработан компьютеризованный вариант четырехцветной (красный, черный, желтый, зеленый) методики на основе модификации таблиц Шульте для исследования переключения внимания, позволяющей легко выявить инертность психических процессов и наличие исто-щаемости нервной системы у испытуемых.

Практическая значимость работы. Разработанные и изученные в эксперименте лекарственные желатиновые пленки с адаптогенами безопасны в применении, обладают высокой трансбуккальной и системной активностью, что позволяет усилить эффект действия фармацевтических композиций, расширить диапазон и удобство применения адаптогенов в сравнении с водно-спиртовыми экстрактами. На основании результатов, полученных в экспериментальных исследованиях, предложены фармакологические композиции, приготовленные на основе лекарственных желатиновых пленок с добавлением экстракта родиолы розовой, аралии маньчжурской, элеутерококка колючего, левзеи сафлоровидной и экстракта коры осины, для клинической апробации с последующим внедрением в медицинскую практику. Наиболее перспективными областями для применения лекарственных композиций на основе лекарственных желатиновых пленок являются: спортивная и военная медицина, общая терапия, геронтология, педиатрия, общая хирургия и в других областях профилактической медицины для повышения толерантности организма человека к неблагоприятным условиям окружающей среды.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Лекарственные желатиновые пленки, их физико-химические особенности, эссенциальность для организма человека и животного.

Лекарственные желатиновые пленки (ЛЖП) относятся к иммобилизованные депоколлекторным системам, полученным путем включения действующих вещест в гель желатина.

2. Безопасность и удобство в применении лекарственных желатиновых пле нок по сравнению с приемом внутрь жидких лекарственных форм, содержащи адаптогены.

Полученные в экспериментах результаты свидетельствуют об отсутствии ост рой токсичности, местного раздражающего действия на кожу и слизистые оболоч ки, сенсибилизирующих свойств. Композиции лекарственных желатиновых плено обладают трансбуккальной активностью, которая способствует лроникновенш фармакологически активных веществ в системный кровоток.

3. Впервые разработаны и изготовлены экспериментальные образцы лекарст венных желатиновых пленок, содержащие экстракт коры осины, адаптогенное дей ствие которого выявлено в эксперименте на лабораторных животных и людях.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены и обсуждены н Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов международным участием (Екатеринбург, 2008), IV съезде физиологов Урала с ме ждународным участием (Екатеринбург, 2009), Научно-практической конференции с международным участием «Достижения клинической фармакологии в России» (Москва, 2009), съезде терапевтов Юга России «Врач XXI века: сегодня и завтра» (г. Ростов-на-Дону, 2009 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, главы «материалы и методы исследования», трех глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа проиллюстрирована 23 рисунками, содержит 12 таблиц. Библиография включает в себя 118 наименований отечественных и 54 наименования зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Краткая характеристика экспериментальных животных

Исследования были проведены на теплокровных животных: нелинейных белых мышах (240 особей), белых крыс популяции Wistar (1200 особей), морских свинках (всего 80 особей), кроликах породы «Шиншилла» (60 особей) обоего пола.

Животных содержали при температуре 18 - 24°С в условиях естественного светового цикла на стандартном рационе вивария, при свободном доступе к воде и пище в соответствии с Приказом № 1179 от 10.10.1983 г. «Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения» Общая характеристика использованных фармакологических средств В работе были использованы препараты:

- экстракт элеутерококка жидкий спиртовой, содержащий 0,006 г сухого вещества в 15 каплях; лекарственные желатиновые пленки, содержащие 0,006 г сухого экстракта;

- экстракт родиолы жидкий спиртовой, содержащий 0,002 г сухого вещества в 5 каплях; лекарственные желатиновые пленки, содержащие в каждой пленке 0,002 г сухого экстракта;

- спиртовая настойка аралии маньчжурской, содержащая 0,0068 г сухого вещества в 17 каплях; лекарственные желатиновые пленки, содержащие 0,0068 г сухого экстракта;

- экстракт левзеи жидкий спиртовой, содержащий 0,0048 г сухого вещества в 12 каплях; лекарственные желатиновые пленки, содержащие 0,0048 г сухого экстракта;

- экстракт коры осины жидкий спиртовой, содержащий 0,002 г сухого вещества в 5 каплях; лекарственные желатиновые пленки, содержащие 0,002 г сухого экстракта коры осины.

В качестве образцов для сравнения были использованы лекарственные желатиновые пленки, не содержащие экстрактов адаптогенов, и 70% раствор спирта этилового.

Методы исследования Двигательную активность и ориентировочно-исследовательскую реакцию изучали в условиях методики «открытое поле» в нашей модификации. Наблюдения проводили в полной тишине, в вечернее время при искусственном освещении лампой 100 Вт, расположенной на высоте 200 см над центром поля. Животное помещали на центральный круг и начинали отсчет времени ухода с круга и регистрацию поведения в течение 3 минут. При этом регистрировали время реакции ухода с центрального круга, количество пересеченных квадратов (горизонтальная активность), количество вставаний на задние лапки (вертикальная активность), количество обследованных отверстий (исследовательская активность), количество умываний (груминг).

Для сравнительной оценки влияния исследуемых веществ на физическую работоспособность и выносливость использовали тест «принудительного плавания» (аквариум объемом 50 л). Исследование заключалось в следующем: каждое животное поочередно помещали в бассейн с прикрепленным грузом (10 % от массы животного) и засекали время. Как только оно начинало тонуть - из воды извлекали. После этого крысам (массой 200 г) вводили в ротовую полость под язык по одной измельченной (до размеров 100-200 мкм) лекарственной желатиновой пленке. Через 60 минут повторяли процедуру купания. Такой же эксперимент был проведен с использованием водно-спиртовых экстрактов вышеперечисленных адаптогенов.

Биохимический метод определения молочной кислоты и глюкозы. Согласно требованиям Руководства по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ (М., 2005) исследование было проведено на белых крысах - самцах массой 220 - 300 г, которые были разделены на 2 группы (контрольная и опытная) по 10 особей в каждой. Забор крови для исследования осуществляли из полостей сердца под эфирным наркозом у 5 животных из каждой группы до плавания. У других 2 групп животных забор крови производили после теста принудительного плавания на фоне приема измельченных лекарственных желатиновых пленок, содержащих экстракт коры осины (опытная группа), и на фоне измельченного желатина (контрольная группа). Количественное определение концентрации молочной кислоты, глюкозы осуществляли ферментативными методами на автоматическом биохимическом анализаторе BioSystems А25.

Методика исследования внимания, сенсорных реакций, психоаналитической способности человека. Применялось интегральное исследование работоспособности ЦНС при помощи разнообразных буквенных и цифровых тестов на основе таблиц Шульте и «Психофизиологического 4-х цветного анализатора цве-тоцифрового дифференцировочного электронного» нашей модификации, которые позволяли нам более тонко и дифференцированно оценивать показатели психофизиологической способности испытуемого. Это устройство представляет собой двустороннее цветовое (красный, желтый, зеленый, черный цвета) цифровое табло и пульт управления, осуществляющий автоматическую обработку и индикацию результатов действия испытуемого. В 2008 г. Л.П. Ларионовым, И.М. Фатиховым, Д.О. Осипчуком, A.A. Волковым прибор был компьютеризирован. С помощью этой методики легко выделить инертность психических процессов, а при правильно проведенном хронометраже отдельных этапов работы обследуемого можно устано-

вить наличие повышенной истощаемости. Для субъективной оценки человека была использована карта Доскина В.А. «САН».

Статистическая обработка результатов. Набор и обработку материалов проводили на ПК с процессором типа Celeron (R CPU 2 GHz) и операционной системой Microsoft Windows ХР с применением программных комплексов Microsoft Office Word 2003 и Microsoft Office Excel 2003. Статистическую обработку проводили с помощью пакета статистических программ «STATISTIKA» for Windows версия 6.0 фирмы StatSoft Inc. (США).

Для сравнения между собой групп показателей использовали критерий z и t (критерий Стьюдента), уровень значимости (р). Статистически значимые различия определяли при р<0,05. Для описания количественных показателей использовали выборочную среднюю (средняя арифметическая) и стандартное отклонение (SD). Качественные признаки выражали в виде относительной величины (в процентах).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Определение растворимости лекарственных желатиновых пленок in vitro, высвобождаемости лекарственных веществ из лекарственных желатиновых пленок in vitro, стабильности лекарственных желатиновых пленок при хранении. В процессе выполнения данных исследований нами разработана рецептура желатиновых пленок, установлена их стабильность, проанализированы растворимость и способность высвобождения из них биологически активных веществ. Состав лекарственных желатиновых плёнок включает в себя лекарственные вещества и основу: желатин или желатин и глицерин. При разработке рецептуры учитывалась физико-химическая совместимость лекарственного вещества и основы. Предварительные исследования лекарственных желатиновых пленок проводили по следующим параметрам: растворимость лекарственных желатиновых пленок и вы-свобождаемость лекарственных веществ (элеутерококк колючий, аралия маньчжурская, левзея сафроловидная, родиола розовая, экстракт коры осины) из них in vitro и in vivo, время растворения лекарственных желатиновых пленок в ротовой полости человека; микробиологическую чистоту полученных пленок и их стабильность при хранении.

Растворимость лекарственных желатиновых пленок in vitro. Лекарственные желатиновые пленки, содержащие лекарственные вещества, помещали в 50 мл воды при температуре 37 °С и выдерживали при данной температуре до полного

растворения. Желатин при этом растворялся полностью, а лекарственные вещества - в зависимости от физико-химических свойств - также растворялись (водорастворимые вещества). Растворимость лекарственных желатиновых пленок служит одним из показателей высвобождаемое™ лекарственных веществ из данной лекарственной формы (Тенцова А.И., Ажгихин И.С., 1974).

Высвобождаемость лекарственных веществ из лекарственных желатиновых пленок in vitro. Исследование лекарственных желатиновых пленок с отваром коры дуба показало, что данные плёнки полностью растворяются в воде при температуре 37 °С и выше. Количественное определение дубильных веществ в полученном растворе показало, что вся доза дубильных веществ, введённая в плёнку, переходит в раствор.

Время растворения лекарственных желатиновых пленок placebo, а также лекарственных желатиновых пленок с некоторыми лекарственными веществами (адаптогенами) in vivo в полости рта при аппликации пленок на десну изучали с целью определения кратности применения суббуккальных пленок. Исследование проводили в дневное время суток на добровольцах с их информированного согласия, принимавших участие в данных исследованиях - Разрешение этического комитета ГОУ ВПО УГМА от 17.09.2008 г. протокол № 2. Проведено 9 наблюдений с лекарственными желатиновыми пленками, содержащими отвар коры дуба. Время нахождения плёнки на десне составляло 3 часа. Количество высвободившихся дубильных веществ определялось как разница между содержанием этих веществ в исходной плёнке и в остатке плёнки после 3-часовой аппликации. Исходное содержание принималось за 100%. Результаты представлены в таблице 1.

Средняя арифметическая масса растворившейся лекарственной желатиновой пленки со средней ошибкой средней арифметической (М ± т) равняется 73,2 ± 4,19 % от исходной массы, среднее квадратическое отклонение S = ± 12,56 %. Высвобождаемость дубильных веществ в этом эксперименте составляла от 55,0 % до 91,9 %. Средняя арифметическая величина выделившихся дубильных веществ со средней ошибкой средней арифметической (М ± т) равняется 73 ± 4,74 % от первоначального содержания, среднее квадратическое отклонение S = ±13,73%. В первом и во втором случае выборочные средние являются статистически достоверными, так как они значительно превышают значение t - по распределению Стыодента 3,35 (число наблюдений - 9) для уровня вероятности 99,9 % (р < 0,001).

и

Таблица 1

Масса лекарственных желатиновых пленок и количество дубильных веществ, высвободившихся из них после 3-часовой аппликации на десну ___(в процентах к исходному)_

Масса лекарственных Количество

желатиновых пленок дубильных веществ

№ остаток после растворившаяся остаток в лекарст- высвободившихся

аппликации во время венной желатино- во время

аппликации вой пленке аппликации

1 44,3 55,7 45,0 55,0

2 41,5 58,5 42,1 57,9

3 35,8 64,2 36,0 64,0

4 31,6 68,4 31,3 68,7

5 27,0 73,0 27,9 72,1

6 21,7 78,3 20,9 79,1

7 18,2 81,8 14,1 85,9

8 12,0 88,0 11,7 88,3

9 9,0 91,0 8,1 91,9

Стабильность лекарственных желатиновых пленок при хранении изучали при использовании методики «ускоренного хранения». Исследование проводили в следующих условиях:

1. Температура не выше 25°С, темное место.

2. Температура та же, на свету.

3. Хранение на месте, освещаемом солнцем.

4. Хранение в холодильнике при температуре 15 °С.

Исследование проводили в течение 2 лет. При этом контролировали появление возможных продуктов разложения лекарственных веществ, включенных в лекарственные желатиновые пленки.

В результате проведенных исследований по возможности создания лекарственных желатиновых пленок, нам удалось получить опытные образцы данной лекарственной формы, содержащие фармакологически активные вещества - элеутерококк колючий, аралию маньчжурскую, левзею сафроловидную, родиолу розовую, экстракт коры осины, и проанализировать их растворимость in vitro и in vivo, а

также удалось установить их стабильность при двухгодичном хранении. В процессе проведенных исследований установлены: высокая емкость лекарственных желатиновых пленок по отношению к различным лекарственным веществам; обеспечение стабильности действующего вещества в процессе хранения в течение 2 лет; аккумулирование лекарственного вещества в месте действия и высвобождение в системный кровоток; простота и экономичность изготовления системы доставки; безболезненность и удобство применения лекарственных желатиновых пленок; возможность приостановить дальнейшее воздействие невсосавшихся лекарственных препаратов в случае возникновения нежелательных побочных эффектов.

Определение возможного проявления острой токсичности изучаемых лекарственных желатиновых пленок проведено на беспородных белых мышах (массой 18 - 20 г) и белых крысах (массой 170 - 200 г) обоего пола. Образцы вводили в желудок через зонд в виде 50% водного желатинового раствора, содержащего изучаемые адаптогены. Объем раствора соотносили объему желудка животных (а для мышей - 1 мл, для крыс - 4 мл). После введения препаратов поведение животных в первые сутки оценивали каждый час, а в последующие 14 суток - один раз в день. В течение этого срока наблюдения у животных не было отмечено особенностей их поведения, интенсивности и характера двигательной активности, координации движений, тонуса скелетных мышц, реакции на тактильные, болевые и световые раздражители, частоты сердечных сокращений, окраски слизистых. По результатам выживаемости изучаемые экстракты оказались не токсичными, так как LD50 установить не удалось.

Определение субхронической и хронической токсичности ЛЖП, содержащих экстракты адаптогенов изучали в течение 30 суток на белых крысах популяции линии Wistar массой 170 - 280 г, кроликах породы «Шиншилла» (2900 -3500 г) и морских свинках (350 - 380 г) обоего пола. Изучаемые пленки вводили в желудок через зонд и наносили накожно, на слизистые ротовой полости, за веки глаз в виде 50% желатинового водного раствора.

Изучение местного раздражающего действия лекарственных желатиновых пленок на кожу и слизистые оболочки. Эксперимент проводили на 30 кроликах обоего пола. На подготовленный от шерсти участок кожи (4><6 см) справа наносили испытуемые препараты в 50% растворе желатина в объеме 1 мл, с соответствующей дозой сухого экстракта.

На подобный участок кожи слева, который служил контролем, наносили 50% водный раствор желатина в этом же объеме. Параллельно с данной процедурой по 0,1 мл растворы препаратов наносили на слизистую век правого глаза кроликов. Аппликации осуществляли ежедневно в течение 30 дней. За указанный период эксперимента ни в одном случае не наблюдали возникновения эритемы и отека. У всех животных было отмечено отсутствие раздражающего действия.

Таким образом, изучаемые адаптогены в желатиновом водном растворе по степени выраженности раздражающего действия на кожу и слизистые относятся к «0» классу веществ (по пятибалльной системе по Алексеевой О.Г., Петкевич А.И, 1972 г.).

Исследования сенсибилизирующих свойств лекарственных желатиновых пленок, содержащих экстракты адаптогенов были проведены на 20 кроликах обоего пола. Опытным животным за веко правого глаза и на подготовленный от шерсти участок кожи правого бока размером 4x6 см наносили испытуемые растворы в объеме по 0,1 и 1 мл соответственно. Контрольным кроликам на подобные участки наносили чистый желатиновый 50% водный раствор. Подобные аппликации осуществляли один раз в день в течение 6 дней. На 7 сутки была проведена разрешающая проба путем нанесения изучаемых веществ на подобный участок кожи противоположного бока кролика. Реакция не проявилась, что заставило нас продолжить исследование до 14 суток. На эти сутки реакция также не проявилась, и исследование было продолжено до 28 суток, и на 28 сутки после проведения разрешающей пробы видимых изменений на коже в области воздействия, изменений склеры, конъюнктивы, слезного протока отмечено не было. Таким образом, был сделан вывод, что опасность сенсибилизации лекарственными желатиновыми пленками, содержащими экстракты адаптогенов, маловероятна.

Изменение уровня глюкозы и молочной кислоты в крови крыс. Количественное определение концентрации молочной кислоты, глюкозы осуществляли ферментативными методами на автоматическом биохимическом анализаторе BioSystems А25, и получили следующие результаты исследований: 1. В условиях плавания с грузом в сыворотке крови опытных животных по сравнению с интакт-ной группой содержание глюкозы достоверно понизилось на 52 % (р < 0,01), а содержание лактата - достоверно повысилось на 29 % (р < 0,05). 2. Показатели глюкозы и лактата в сыворотке крови у опытных животных и у животных на фоне предварительного введения в желудок желатинового геля достоверно не отличались. 3. В сыворотке крови у опытных животных с предварительным введением

и

измельченных ЛЖП на слизистые ротовой полости по сравнению с группой животных, получивших измельченный желатин, содержание глюкозы достоверно понизилось на 40 % (р < 0,01), а содержание лактата достоверно повысилось на 35 % (р < 0,05).

Таким образом, следует отметить, что интенсивное плавание с грузом на выживаемость можно отнести к работе субмаксимальной мощности, при выполнении которой наблюдается значительный дефицит кислорода. АТФ ресинтезируется преимущественно анаэробными путями (креатинкиназным и гликолитическим) и вызывает кислородный долг, составляющий значительную долю от кислородного запроса.

Изучаемый нами препарат, вероятно, способствует высвобождению гормонов, которые стимулируют синтез ферментов гликогенолиза и обмена креатинфос-фата, что, в свою очередь, способствует лучшему и более полному использованию сахара крови.

Изучение влияния адаптогенов на центральную нервную систему при физической нагрузке. Достоверные показатели времени ухода животных на фоне введения экстрактов адаптогенов и плацебо с центрального круга были зафиксированы при следующих уровнях регистрации. Начиная с 60 и до 90 минуты включительно, время ухода крыс с круга после купания на фоне экстракта родиолы розовой существенно уменьшилось. Произошло незначительное уменьшение активности ухода животных с центрального круга после купания на фоне введения экстракта левзеи, что отразилось в увеличении показателей, зарегистрированных через 30, 60 минут. После введения плацебо и последующего купания отмечалось некоторое уменьшение времени ухода крыс с центрального круга, особенно при исходном уровне регистрации, что свидетельствует об увеличении активности животных. На фоне введенного экстракта коры осины после плавания показатели исходного уровня, зарегистрированные на 30 день эксперимента, снизились (активность ухода возросла), а с 30 до 60 минуты увеличились по сравнению с исследованием, проведенным в 1 день. После купания с экстрактом аралии отмечалось достоверное увеличение времени ухода с круга на 60 минуте регистрации. У группы опытных животных, которым вводили экстракт элеутерококка, при исходной регистрации их ухода с центрального круга результаты оказались противоположными: исходный уровень до купания составлял 4 секунды, в то время как после купания - 10 секунд. Через 30 минут у этой группы после купания время ухода с круга значительно уменьшилось по сравнению с аналогичным показателем до купания (в 12 раз). На

60 минуте время ухода было одинаковым со временем исходного уровня регистрации.

При регистрации горизонтальной двигательной реакции у экспериментальных животных, были получены следующие достоверные результаты. У крыс, получавших экстракт родиолы розовой, были выявлены некоторые особенности их поведения. До купания животные активнее передвигались, а после приема экстракта родиолы розовой активность достоверно снизилась при исходном уровне регистрации и на 30 минуте эксперимента.

I Для наглядности эффективности действия адаптогенов представляем диа-

граммы результатов (рис. 1, 2).

исходный через 30 минут через 60 минут через 90 минут уровень

@ до плавания □ после плавания

Рис. 1. Горизонтальная двигательная реакция до и после теста «принудительного плавания» на фоне плацебо

Регистрируя указанные выше показатели группы животных на фоне плацебо, мы наблюдали достоверное снижение активности после плавания без выраженных колебаний в течение всего эксперимента.

На фоне введения экстрактов коры осины и левзеи полученные результаты были однотипны - отмечалось уменьшение активности животных после плавания при исходном уровне регистрации, на 30, 60 и 90 минутах эксперимента. Единст-

венным отличием было увеличение показателей горизонтальной двигательной реакции после применения экстракта коры осины на 90 минуте исследования.

» 50 т

исходный через 30 минут через 60 минут через 90 минут уровень

И до плавания □ после плавания

Рис. 2. Горизонтальная двигательная реакция до и после теста «принудительного плавания» на фоне экстракта левзеи сафлоровидной

После введения экстракта аралии и плавания горизонтальная активность к 30 минуте существенно и достоверно снизилась. У группы животных, которая получала экстракт элеутерококка, горизонтальная активность до плавания и после были различными. При первой посадке двигательная активность крыс была высокой, в то время как после плавания при регистрации уровня горизонтальной активности мы получили достоверно низкие показатели в исходном положении и на 90 минуте исследования.

Анализ полученных показателей вертикальной активности опытных животных показал, что достоверные, статистически значимые результаты были зарегистрированы в следующих случаях. При оценке показателей вертикальной активности группы крыс после принудительного плавания с приемом экстракта родиолы розовой отмечалось снижение активности в исходном положении (на 30 день эксперимента, в сравнении с данными, полученными в 1 день) и на 90 минуте эксперимента. В то время как у группы животных после плавания с приемом плацебо проявилось снижение показателей вертикальной активности на всех уровнях реги-

страции. Регистрируя указанные выше показатели у группы крыс, получавших экстракт коры осины, нами было отмечено значительное увеличение вертикальной активности на 90 минуте исследования, в то время как при исходной регистрации на 30 день эксперимента было зафиксировано ее уменьшение (по сравнению с исследованием, проведенным в 1 день). На фоне введения экстрактов левзеи сафлоро-видной после плавания зарегистрировано значительное снижение вертикальной активности при всех уровнях регистрации. После приема экстракта аралии маньчжурской и последующего купания также наблюдалось уменьшение вертикальной активности животных на 30 день эксперимента в исходном положении (в сравне-I нии с показателями, полученными в 1 день) и через 30 минут, а на 90 минуте исследования активность крыс возросла.

Показатели вертикальной двигательной активности группы крыс, получавших экстракт элеутерококка колючего, оказались более низкими на исходном уровне после принудительного плавания (на 30 день эксперимента) по сравнению с исходным уровнем до купания. С 30 минуты и до конца эксперимента значения были одинаково низкими как до, так и после плавания.

При оценке показателей ориентировочно-исследовательской реакции, полученных в эксперименте, статистически значимыми оказались следующие результаты. У группы животных, которым вводили экстракт родиолы розовой, наблюдалось значительное снижение ориентировочно-исследовательской реакции после | теста «принудительного плавания» на 30 день эксперимента при исходном уровне регистрации, 30 и 60 минутах эксперимента.

Структура показателей ориентировочно-исследовательской реакции групп животных, получавших экстракт элеутерококка колючего: после купания зафиксировано снижение активности крыс на 30 день эксперимента при исходном уровне регистрации, на 30 и 90 минутах исследования, а на 60 минуте наблюдалось некоторое увеличение количества «заглядываний» (рис. 3). | Показатели, полученные нами на 30 день эксперимента при исходной регист-

рации после плавания в группе крыс, которым вводили плацебо, оказались достоверно ниже таковых до плавания. При анализе ориентировочно-исследовательской реакции крыс отмечалось ее достоверное существенное снижение на 30 день эксперимента при исходном уровне регистрации после плавания с введением экстрактов коры осины и левзеи сафлоровидной.

исходный уровень через 30 минут через 60 минут через 90 минут В до плавания □ после плавания

Рис. 3. Ориентировочно-исследовательская реакция крыс до и после теста «принудительного плавания» на фоне введенного экстракта элеутерококка

При последующей регистрации показателей у животных на фоне введение экстракта левзеи сафлоровидной на 30 минуте эксперимента после плавания коли чество «заглядываний» было значительно меньше, чем до плавания.

На фоне введенного экстракта аралии маньчжурской локомоторная актщ: ность снизилась по сравнению с результатами, полученными до плавания на исходном уровне и через 30 минут от начала эксперимента. Показатели 90 минут:-', исследования были одинаково низкими как до, так и после плавания.

Показатели груминга до и после принудительного плавания были однообра: но низкими. Достоверными были лишь результаты, зарегистрированные на 30 минуте эксперимента после купания на фоне введения экстрактов левзеи сафлоровидной и родиолы розовой, после плавания на фоне введения плацебо и экстракта коры осины соответственно.

Влияние изучаемых адаптогенов на физическую работоспособность крыс. Для сравнительной оценки влияния исследуемых веществ на компенсацию физическую выносливость использовали тест «принудительного плавания».

Полученные результаты отражены на рис. 4, (р<0,05)

350% -|------------------1

300% --1-------------

250% ---1-------г» |

200% т--Г*"]-1---г-----

!50%^а —гьГТ---

юо% —......™ и И 1,1 И

элеутерококк роднола левзея аралия кора осины основы

50% ----------

]

0% :------------J

□ ЛЖИ ■ ВСЭ □ спирт

Рис. 4. Результаты теста «принудительного плавания» на фоне различных препаратов в лекарственных желатиновых пленках (ЛЖП) и водно-спиртовых экстрактах (ВСЭ). * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой

За 100% принимали исходное время плавания животных (до введения лекарственных желатиновых пленок содержащих адаптогены, спиртовых экстрактов адаптогенов, настойки аралии маньчжурской и спирта).

Было установлено, что прием различных лекарственных форм, содержащих адаптогены, в исследуемых дозах повышал физическую работоспособность животных. Достоверное увеличение физической активности произошло при введении экспериментальным животным лекарственных желатиновых пленок, содержащих экстракты элеутерококка колючего и родиолы розовой, а также пленок, содержащих экстракт коры осины. Наиболее выраженная тенденция к увеличению времени плавания зарегистрирована на фоне приема пленок, содержащих экстракты аралии маньчжурской и левзеи сафлоровидной, в то же время эти показатели оказались недостоверными (р>0,05). Недостоверность отмечалась за счет того, что ряд животных проявил высокую чувствительность к данным адаптогенам, время плавания при этом оказалось больше, чем у остальных животных в 2-3 раза.

В данной методике подтверждено ранее изучавшееся актопротекторное действие экстрактов элеутерококка, левзеи, родиолы, аралии и впервые обнаружено подобное действие у экстракта коры осины.

Сравнительная оценка времени реакции человека при переключени внимания на фоне приема экстракта коры осины. Объектами исследования бь ли добровольцы, с информированного их согласия - молодые люди (юноши и дг. вушки в возрасте от 19 до 25 лет), разделенные на 2 группы. 1-ая и 2-ая группы со стояли из 10 юношей и 10 девушек. Первая группа принимала исследуемый препг рат (лекарственные желатиновые пленки, содержащие экстракт коры осины), а втс рая группа параллельно им принимала плацебо.

Далее, в течение 10 дней испытуемый принимал желатиновые пленки, с< держащие экстракт коры осины, 2 раза в день до еды, после чего исследование те же было повторено с регистрацией всех показателей.

При оценке основных физиологических показателей статистически значимо

динамики не выявлено, и экстракт коры осины не вызывает сдвигов физиологич!

J

ских реакций (частота сердечных сокращений, частота дыхательных движений, а]: териальное давление, динамометрия). При анализе данных скорости реакции прг-хождения четырехцветного теста определилась статистически достоверные даннь : (р<0,05) на уменьшение времени, необходимого для его прохождения, снизилос количество совершаемых при этом ошибок, (рис. 5,6),

прямой ¡ обратный желтый

прямой обратный: прямой ¡обратный: прямой 'обратный

]

зеленый ] красный i черный

О до ■ после D10 дней

Рис.

5. Динамика изменения времени при прямом и обратном поиске чисел у женщин. * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой

□ до ■ после □ 10 дней Рис. 6. Динамика изменения времени при прямом и обратном поиске чисел у мужчин. * - р<0,05 по сравнению с контрольной группой

ВЫВОДЫ

1. Впервые разработаны трансбуккальные лекарственные желатиновые пленки. содержащие адаптогены (элеутерококк колючий, аралия маньчжурская, левзея сафлоровидная, родиола розовая) и экстракт коры осины, изучены их физико-химические свойства (растворимость, высвобождаемость, сроки хранения).

2. В доклинических исследованиях острой и хронической токсичности нами доказаны безопасность лекарственных желатиновых пленок, содержащих изучаемые адаптогены (элеутерококк колючий, аралия маньчжурская, левзея сафлоровидная, родиола розовая) и экстракт коры осины, отсутствие проявления местно-раздражающего и сенсибилизирующего действия.

3. В процессе изучения ориентировочно-исследовательских реакций у крыс в методике «открытое поле» на фоне применения экстракта коры осины установлено повышение двигательной горизонтальной активности.

4. Показана актопротекторная активность адаптогенов и экстракта коры осины в лекарственных желатиновых пленках. Их применение повышало физическую выносливость крыс в тесте «принудительного плавания». Наиболее выраженное

достоверное увеличение времени плавания зарегистрировано на фоне приема пл нок, содержащих экстракты аралии маньчжурской и левзеи сафлоровидной.

5. Модифицирована методика и прибор «Психофизиологический анализам цветоцифровой дифференцировочный электронный» для выявления инертное психических процессов, истощаемости нервной системы, устойчивости и спосо ности к концентрации внимания у человека при приеме фармакологических прел ратов.

6. При трансбуккальном приеме экстракта коры осины в лекарственных ж латиновых пленках в группе здоровых добровольцев установлено уменьшение вр мени на поиск чисел при прямом и обратном поиске чисел, уменьшение количест ошибок, увеличение мышечной силы при динамометрии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фатихов И.М. Безопасный и эффективный путь введения адаптогенов в н вой лекарственной форме: лекарственных желатиновых пленках/ И.М. Фатихс Л.П. Ларионов, П.А. Еремина, Ю.Т. Новиков, В.А. Фурин// Материалы Съезда т рапевтов Юга России «Врач XXI века: сегодня и завтра». Ростов-на-Дону, 17-сентября 2009 г. - Росгов-на-Дону, 2009 г. - С. 89.

2. Фатихов И.М. Опыт разработки композиций лекарственных желатинов! пленок (ЛЖП) с различным содержанием экстрактов адаптогенов/ И.М. Фатихс Л.П. Ларионов, П.А. Еремина, Ю.Т. Новиков, Е.А. Фурина, В.А. Фурин// Клинич екая фармакология и терапия. - Москва: типография «КОПИРИНГ», 2009 г. - № - С. 305-306.

3. Фатихов И.М. Сравнительная оценка локомоторной ответной реакции кр! в эксперименте под действием некоторых адаптогенов в различной лекарственш форме/ И.М. Фатихов, Л.П. Ларионов, П.А. Еремина, Ю.Т. Новиков, Е.А. Фурин; Вестник Уральской медицинской академической науки.- Екатеринбург, 2009 г. -. 2. - С. 307-309.

4. Фатихов И.М. Возможные изменения скорости реакции человека при пр менении экстракта коры осины в желатиновых пленках/ И.М. Фатихов, Л.П. Л рионов, П.А. Еремина, Ю.Т. Новиков, Е.А. Фурина// Вестник Уральской медици ской академической науки. - Екатеринбург, 2009 г. - № 2. - С. 309-310.

ФАТИХОВ Илсур Муслимович

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕПОКОЛЛЕКТОРНЫХ СИСТЕМ, СОДЕРЖАЩИХ НЕКОТОРЫЕ АДАПТОГЕНЫ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 05.10.2009 г. Объём 1 п л. Формат 64x84. Гарнитура «Times New Roman суг». Бумага для офисной техники, 80 мг/м2. Тираж 100 экз. Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ГОУ ВПО УГМА Росздрава. Заказ № 125. 620028, г. Екатеринбург, ул. Репина, д.З