Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Специфичности HLA DRB1, полиморфизмы генов цитокинов и TLR, ассоциированные с бронхиальной астмой у жителей Республики Адыгея

и

На правах рукописи

РУДЕНКО КСЕНИЯ АНДРЕЕВНА

Специфичности НЬА ОМЛ, полиморфизмы генов цитокииов и ТЬИ, ассоциированные с бронхиальной астмой у жителей Республики Адыгея

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

25 СЕН 2014 005552730

Майкоп - 2014

005552730

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Адыгейский государственный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Тугуз Аминат Рамазановна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Шкурат Татьяна Павловна,

директор НИИ биологии ФГАОУ ВПО «ЮФУ», заведующая кафедрой генетики ФГАОУ ВПО «ЮФУ».

доктор медицинских наук, профессор Болдырева Маргарита Николаевна, ведущий научный сотрудник отдела иммуногенетики ГНЦ Институт Иммунологии ФМБА России.

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерство здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится октября 2014 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 в ФГБУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» Российской академии медицинских наук, по адресу: г. Москва, Малый Казенный переулок, д.5А.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» РАМН

Автореферат разослан « » СЛиЦъЛ^^Я 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Яковлева Ирина Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Международная программа GINA (2006, 2011) относит бронхиальную астму к распространенным заболеваниям бронхо-лёгочной системы и к 2020 г., по прогнозам комиссии экспертов ВОЗ, ожидается дальнейший рост заболеваемости и перевод БА в группу наиболее часто регистрируемых нозологий (Masoli M. et al., 2004; Yan D.C. et al., 2005; Vincent S.D. et al., 2006). В Республике Адыгея, по данным МИАЦ, за последние три года (2010-2013гг.) заболеваемость БА возросла на 12%. Высокая смертность и социально-экономический ущерб от БА в РФ обуславливает необходимость выявления молекулярно-генетических маркеров, вовлеченных в патогенез БА.

В развитии мультифакторной БА наследственный компонент составляет от 30 до 70%, однако специфические гены предрасположенности к этой нозологии не установлены (ВОЗ, 2000, GINA, 2011). Данные по полиморфизмам генов, ассоциированным с БА, фрагментарны и противоречивы (Hanchard N.A. et al., 2010; Chen J., 2010; Tsai C.H. et al., 2011; Wang M. et al., 2012; Trajkov D. et al., 2012).

Согласно современной классификации, бронхиальную астму относят к хроническим воспалительным заболеваниям органов дыхания (GINA, 2011), механизм развития которых включает несколько основных этапов: распознавание «образов патогенности» То11-подобными рецепторами, презентацию антигенов молекулами HLA II класса, активацию продукции основных медиаторов воспаления - цитокинов (Симбирцев А.С., 2005; Смирнова О.В., 2011 и др.). Поэтому представляется актуальным исследование SNP промоторных и структурных регионов некоторых генов, обеспечивающих многоуровневую регуляцию воспалительных процессов: специфичностей HLA II класса, генов TLR и провоспалительных цитокинов.

Ряд полиморфизмов TLR, повышающих восприимчивость к паттернам микроорганизмов, могут приводить к развитию хронической воспалительной

реакции и таким образом участвовать в патогенезе бронхиальной астмы. Запуск воспалительной реакции, опосредованный TLR и завершающийся стимуляцией экспрессии генов цитокинов, непосредственно связан с активацией HLA II класса, специфичности которых используются в качестве генетических маркеров резистентности или предрасположенности ко многим заболеваниям, в том числе и БА (Яковлева К.П., 2002; Di Somma С. et al., 2003; Donfack J. et al., 2003; Torio, A., et al., 2003; Juhn Y.J. et al., 2007; Munthe-Kaas M.C. et al., 2007; Hanchard N.A. et al., 2010; Knutsen A.P. et al., 2010; Martyn M.B. et al., 2010; Убайдуллаев С. A., 2010; Андреева E.E., 2011). Однако, MHC-II является высокополиморфной структурой, имеющей этно-генетические различия, что требует региональных исследований для определения протективных и ассоциированных с БА специфичностей HLA II.

Иммуно-воспалительные реакции запускаются провоспалительными цитокинами «первой волны», к которым относятся IL-17A, TNF-a, IL-6. SNP промоторных регионов этих генов могут влиять на уровни экспрессии цитокинов и приводить к медиаторному дисбалансу, инициирующему развитие хронических воспалительных заболеваний (Кубышева Н.И., 2002; Демьянов А.В., 2003; Щеглова М.Ю., 2005; Зенкина Л.В., 2008; Макарова В.И., 2008; Борисова Т.В., 2013; Ковальчук Л.В., 2012).

Исследования по частотам и ассоциированности единичных нуклеотидных полиморфизмов генов TLR (TLR4; TLR9), специфичностей HLA DRB1, генов провоспалительных цитокинов с бронхиальной астмой в регионах Российской Федерации немногочисленны, а для населения Республики Адыгея не представлены в международных электронных базах данных (HuGenet, PubMed, Ensembl, OMIM).

Цель исследования: типирование полиморфных вариантов генов TLR, специфичностей HLA DRB1 и SNP основных провоспалительных цитокинов, ассоциированных с риском развития бронхиальной астмы у жителей Республики Адыгея.

Задачи:

1. Исследовать распределение частот и ассоциированность SNP генов TLR4 (Asp299Gly, Thr399IIe) и TLR9 (A2848G) с риском развития бронхиальной астмы у жителей РА.

2. Идентифицировать аллели генов основных провоспалительных цитокинов (IL-17A G197A, TNF-a G308A, IL-6 C174G), вовлеченных в патогенез бронхиальной астмы.

3. Исследовать влияние полиморфизмов генов цитокинов IL-17A, TNF-а, IL-6 на уровни спонтанной и стимулированной in vitro продукции медиаторов иммунной системы в культуре мононуклеарных клеток доноров и больных Б А.

4. Выявить протективные и маркерные для БА специфичности, генотипы HLA DRB1. Провести анализ сочетанного носительства генотипов HLA DRB1 с SNP генов цитокинов G197A (IL-17A), G308A (TNF-a), C174G (IL-6) в норме и при бронхиальной астме.

Научная новизна:

Впервые для жителей РА исследовано частотное распределение аллелей и генотипов полиморфизмов генов TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile), TLR9 (A2848G), IL-17A (G197A), TNF-a (G308A), IL-6 (C174G) и специфичностей гена HLA DRB1 в обследованных группах населения РА в зависимости от тендерных различий и наследственной отягощенности по БА.

Определены сывороточные концентрации, уровни спонтанной, стимулированной in vitro ФГА продукции цитокинов МНК доноров и больных БА. Установлены особенности влияния полиморфных вариантов генов на продукцию медиаторов у доноров и больных.

Получены новые данные о роли полиморфизмов генов IL-17A (G197A), TNF-a (G308A) в развитии БА на примере жителей РА.

Впервые проанализировано сочетанное носительство SNP генов TLR, HLA DRB1 и основных провоспалительных цитокинов в норме'и при БА.

Научно-практическая значимость:

На основании экспериментальных данных впервые:

- показано, что в патогенез БА вовлечены преимущественно медиаторы иммунной системы, про воспалительные цигокины «первой волны» IL-17A, TNF-a;

- установлены маркерные SNP, ассоциированные у жителей РА с БА: 197А аллель и А197А генотип гена IL-17A; G308A генотип TNF-a;

доказано влияние 197А аллели промоторного региона и А197А генотипа гена IL-17A на спонтанную продукцию медиатора (IL-17A).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфизмы генов TLR4 (Asp299/299GIy, rs4986790; Thr399/399Ile„ rs4986791), TLR9 (A2848/2848G, rs352140) и специфичности генов HLA DRB1 не ассоциированы у жителей Республики с бронхиальной астмой.

2. В патогенез бронхиальной астмы вовлечены полиморфизмы генов основных провоспалительных цитокинов IL-17A (G197A), TNF-a (G308A) - медиаторов «первой волны».

3. У больных бронхиальной астмой SNP промоторных регионов генов IL-17A (G197A) и IL-6 (C174G) разнонаправлено влияют на продукцию интерлейкинов МНК, что может привести к медиаторному дисбалансу: мутантный 197А аллель и А197А гомозиготный патологический генотип основного провоспалительного IL-17A снижают спонтанную продукцию, а патологический G174G генотип IL-6 повышает стимулированную in vitro ФГА продукцию провоспалительных цитокинов МНК.

4. G308A полиморфизмы гена TNF-a не влияют на сывороточные уровни, спонтанную продукцию TNF-a МНК доноров и больных БА.

Внедрение результатов работы в практику

Работа выполнена в рамках аналитической ведомственной целевой программы, проводимой по заданию Минобрнауки РФ в 2012-2014 гг. (ЕЗН, код ГРНТИ 34.2341, 34.23.53, 34.13.37, № проекта 4.1334.2011, № гос.

контракта 01201276009) на базе иммуногенетической лаборатории Адыгейского государственного университета.

Материалы диссертационного исследования внедрены в учебный процесс Адыгейского государственного университета в рамках биологических дисциплин (иммунология, экологическая иммунология, физиология человека и животных) и Майкопского государственного технологического университета в рамках медико-биологических дисциплин (клиническая иммунология, медицинская генетика, нормальная физиология, патологиче.ская физиология).

Личный вклад автора Автором выполнены все экспериментальные исследования, проведен анализ и статистическая обработка полученных результатов, подготовлены публикации по теме диссертации.

Апробация диссертации

Основные результаты диссертационной работы доложены на II Всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2012), региональной конференции «Фестиваль Недели науки Юга России» (Ростов-на-Дону, 2012, диплом за 1-е место), международной конференции «Достижения науки за последние годы. Новые наработки» (Варшава, Польша, 2012), XXV и XXVI международных конференциях «Неделя науки МГТУ» (Майкоп, 2012, 2013), VII международной научной конференции молодых ученых медиков (Курск, 2013), X международной научной конференции молодых ученых «Наука. Образование. Молодежь» (Майкоп, 2013), Всероссийской научно-практической конференции студентов и молодых учёных с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2013), девятой ежегодной научной конференции студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН (Ростов, 2013), Международной научной конференции молодых

ученых, аспирантов и студентов «Перспектива-2013» (КБР, пос. Эльбрус, 2013), 17 и 18-ой международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2013, 2014), XXII Национальном Конгрессе по болезням органов дыхания (Казань, 2013)".

Публикации

Основные результаты работы изложены в 16 печатных работах; 5 статей опубликованы в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ, 11 публикаций - в материалах российских и международных конгрессов.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 133 страницах печатного текста и состоит из разделов: введения, обзора научной литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Работа содержит 8 рисунков и 60 таблиц. Библиографический указатель включает 252 литературных источника, в том числе 84 отечественных и 168 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Типирование единичных нуклеотидных замен в генах цитокинов, TLR и специфичностей HLA DRB1. Полиморфизмы генов TLR4 (Asp299Gly, rs4986790), TLR4 (Thr399Ile, rs4986791), TLR9 (A2848G, rs352140), IL-17A (G197A, rs2275913), TNF-a (G308A, rsl800629), IL-6 (C174G, rsl800795) исследованы SNP-методом на тест-системах НПФ «Литех» (Москва) с электрофоретической детекцией результатов. Геномная ДНК выделена из периферической крови доноров и больных «ДНК-экспресс кровь» НПФ «Литех» (Москва), «Проба-ГС-Генетика» (НПФ ДНК-Технология, Москва). Концентрации и качество образцов ДНК тестированы на спектрофотометре NanoDrop 2000с «Thermo Scientific» (USA). HLA DRB1

- специфичности типированы на тест-системе НЬА-ДНК-ТЕХ (НПФ ДНК-Технология, Москва) методом полимеразной цепной реакции с детекцией результатов в режиме реального времени.

Определение сывороточного уровня, спонтанной и стимулированной in vitro МНК продукции основных провоспалительных медиаторов. МНК выделены из стабилизированной гепарином (25 ед/мл) периферической крови на одноступенчатом градиенте фиколла («Histopaque», плотность 1,077, «Sigma», USA) центрифугированием при 4°С и 400g в течение 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой и трехкратно отмыты центрифугированием при 1000 оборотах/мин и 4° С средой 199 («ПанЭко», Москва).

Для исследования спонтанной и стимулированной фитогемагглютинином (ФГА, «ПанЭко», 5 мкг/мл) продукции IL-17A, TNF-а, IL-6 МНК культивировали при 37°С и 5 % С02 в течение 18 часов в среде RPMI-1640 («ПанЭко», Москва) с добавлением 10% фетальной сыворотки, 80 мкг/мл гентамицина («ПанЭко», Москва) в 24-луночных плоскодонных планшетах («Costar», USA) в концентрации 2-106 мкл/мл.

Уровни IL-17A, TNF-a, IL-6 в сыворотках, супернатантах МНК доноров и больных определены иммуноферментным анализом (ELISA) на 96-луночном плашечном спектрофотометре (BIO-RAD, USA) при длине волны 450 нм с использованием коммерческих тест-систем «Вектор-БЕСТ» (Новосибирск), «Цитокин» (Санкт-Петербург).

Статистическая обработка данных. Статистически значимые различия (Р<0,05) частот аллелей гена TLR4 (Asp299/299GIy, rs4986790), TLR4 (Thr399/399Ile, rs4986791), TLR9 (A2848/2848G, rs352140), IL-17A (G197/197A, rs2275913), TNF-a (G308/308A, rsl800629), IL-6 (C174/174G, rsl 800795) рассчитаны с использованием непараметрического метода Фишера, х2 (хи - квадрата), OR (odds-ration - отношения шансов), 95% доверительного интервала (95% CI). Достоверность различий концентрации

цитокинов IL-17A, TNF-a, IL-6 в образцах сывороток, супернатантах МНК доноров и больных при нормальном распределении значений определяли с использованием параметрического коэффициента Стьюдента (t).

Протективность и ассоциированность специфичностей HLA генов с БА определяли по формуле B.Woolf для расчета относительного риска развития (RR); при RR>1 исследуемый вариант ассоциирован с БА, в случае RR<1 является протективным, а при RR=1 не вовлечен в патогенез БА. Для учета множественности сравнений степень достоверности корректировали поправкой Бонферрони.

Обработку данных проводили с помощью статистических пакетов MS Office Excel 2003 (Microsoft), SPSS Statistics версии 17.0 (Inc., Chicago, USA).

Контингент обследованных лиц: в проспективное исследование включено 112 жителей Республики Адыгея. Контрольная группа (п=49) представлена неродственными донорами в возрасте от 18 до 43 лет (средний возраст 25±1,25), подобранных случайным образом, без клинических проявлений и наследственной отягощенности БА (по данным ежегодных диспансеризаций населения РА и анкетирования).

Группа больных (п=63) с тяжелыми формами бронхиальной астмы в возрасте от 23 до 50 лет (средний возраст больных 46±1,8) сформирована из пациентов пульмонологического отделения Адыгейской республиканской клинической больницы г. Майкоп (зав. отделением Нихай М.М.). В соответствии с Хельсинской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000г. и «Правилами клинической практики в РФ», утвержденные Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003г. №266, все исследования проведены с информированного согласия больных и доноров. Больные разделены на две группы: с приобретенной и наследственно-отягощенной БА (случаи БА у близких родственников в трех поколениях).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Полиморфизмы TLR при бронхиальной астме. Исследование ассоциации SNP генов TLR с БА обусловлено их ролью в переключении врожденного и адаптивного иммунитета при контактах с патогенными микроорганизмами, индукции системных воспалительных реакций, провоцирующих развитие БА (Асанов А.Ю., 2008; Катунина, О. Р., 2011). Из 10 известных типов TLR, по данным мировых исследований, в патогенез БА вовлечены TLR4 и TLR9, распознающие как вирусные, так и бактериальные молекулярные «паттерны» (Adjers К. et al., 2005; Daley D. et al., 2009; Kerkhof M. et al., 2010; Воронько O.E., 2011; Lange, N.E. et al., 2011; Zhang Q. et al., 2011; Chen S., 2012; Hussein Y.M. et al., 2012). Наиболее распространенные в мировых популяциях и ассоциированные с XB3JI SNP Asp299Gly (896A>G, rs4986791) и Thr399Ile (1196С/Т, rs4986791) TLR4; A2848G (exon 2; Pro-545-Pro, rs352140) TLR9 y жителей Республики Адыгея не исследованы.

В соответствии с поставленной целью, на первых этапах работы нами проанализировано распределение полиморфных вариантов генов TLR4,9 у доноров и в общей группе больных с тяжелыми формами верифицированной Б А без учета тендерных различий, наследственной отягощенности (табл. 1,2).

В анализируемых общих группах больных и здоровых жителей РА не выявлено статистически значимых различий по частотному распределению полиморфных вариантов и генотипов исследуемых генов TLR: (TLR4 (Asp299/299Gly), TLR4 (Thr399/399Ile), TLR9 (A2848/2848G), что согласуется с данными Chen S. (2012) и противоречит утверждениям Воронько O.E. с соавт. (2011) об ассоциации «мутантного» 299Gly аллеля гена мембранного TLR4 с тяжелым течением БА у этнических русских, проживающих в Московской области. При тестировании маркерных полиморфизмов TLR в цитируемых работах практически не учтены факторы, определяющие риск развития и тяжесть течения ХВЗЛ, поэтому на примере населения РА нами

исследованы тендерные рестрикции и наследственная отягощенность в ассоциированности определенных БОТ с БА.

Таблица 1. Частоты БЫР генов ТЬЯ 4, ТЬЯ 9 в общих группах доноров и

больных БА

Ген/п Аллели/ генотипы Частоты аллелей х", (Р) OR (95% CI)

больные БА доноры

TLR4-299 (28/26) Asp 0,946 0,885 1,35 (0,25) 2,30(0,55-9,74) 0,43(0,10-1,83)

Gly 0,054 0,115

Asp/Asp 0,893 0,769 1,48 (0,48) 2,50(0,55-11,27)

Asp/Gly 0,107 0,231 0,40(0,09-1,80)

Gly/Gly 0,000 0,000 0,93(0,02-48,56)

TLR4-399 (28/27) nu- 0,893 0,907 0,06 (0,8) 0,85(0,24-2,97) 1,18(0,34-4,11)

lle 0,107 0,093

Thr/Thr 0,786 0,815 0,07 (0,96) 0,83(0,22-3,14)

Thr/Ile 0,214 0,185 1,20(0,32-4,52)

Ile/Ile 0,000 0,000 0,96(0,02-50,36)

TLR9-2848 (25/23) A 0,480 0,565 0,70 (0,4) 0,71 (0,32-1,59) 1,41 (0,63-3,15)

G 0,520 0,435

A/A 0,280 0,261 2,94 (0,23) 1,10(0,31-3,95)

A/G 0,400 0,609 0,43(0,13-1,36)

G/G 0,320 0,130 3,14(0,72-13,73)

Примечания: X*- хи - квадрат; OR- отношение шансов, п - количество обследованных.

Между сравниваемыми группами больных и здоровых жителей РА не выявлено статистически значимых тендерных различий в соотношении частот трех исследуемых SNP TLR.4,9 (мужчины и женщины, соответственно).

Наши данные не согласуются с утверждениями Adjers К. et all. (2005) об ассоциации «мутантной» 299Gly аллели гена TLR4 и определенного генотипа «высокого риска» развития БА для женщин Финляндии, что может быть обусловлено этническими особенностями сравниваемых групп.

Ассоциированность SNP TLR с наследственно-отягощенной или приобретенной формой БА не отражена в основополагающих работах (Rogers A.J. et al„ 2009; Daley D. et al., 2009; Zhang Q. et al„ 2011; Chen S„ 2012).

Типирование полиморфизмов генов TLR не выявило ассоциированности трех исследованных SNP генов TLR у больных с приобретенной или

наследственно-отягощенной БА. Вероятным кандидатом в маркерные SNP мог быть гомозиготный «патологический» G/G генотип внутриклеточного TLR9, участвующий в распознавании вирусных и бактериальных паттернов (Х2=3,62; C)R=3,03; р>0,05).

Таблица 2. Риск развития БА при сочетанием носительстве SNP TLR 4 (Asp299/299Gly), TLR 4 (Thr399/399Ile), TLR 9 (A2848/2848G)

Аллели / генотипы TLR 4 (Asp299/299Gly), TLR 4 (Thi399/399Ile), TLR 9 (A2848/2848G) Частоты аллелей и генотипов х2 OR (95% CI)

больные БА (п=19) Доноры (п=19)

Asp/Thr/A 0,474 0,656 2,35 0,471 (0,18-1,24)

Asp/Thr/G 0,526 0,344 2,121(0,81-5,59)

Asp Asp/Thr Thi/A A 0,263 0,375 3,49 0,60 (0,14-2,51)

Asp Asp/Thr Thr/A G 0,421 0,563 0,57(0,15-2,17)

Asp Asp/Thr Thr/G G 0,316 0,062 6,92 (0,73-65,26)

Примечание: n - количество обследованных; -¿- хи — квадрат; OR-отношение шансов

Из трех БИР Азр299/299С1у (ге4986791), ТЬг399/399Ие (ге4986791), А2848/2848С (гб352140) TLR, перспективным генотипом повышенного риска развития БА может оказаться А5р299АБр/ТЬг399ТЬг/028480 вариант генотипов (х2=3,49; СЖ=6,92; р>0,05)(табл. 2).

Специфичности НЬА ОЯВ1 при бронхиальной астме. Из многочисленных генов, вовлеченных в патогенез таких мультифакгорных заболеваний как БА, определенный научный интерес представляют НЬА DRB1 специфичности, экспрессирующиеся на антигенпрезентирующих клетках иммунной системы. Наиболее информативными генетическими маркерами БА являются не отдельные специфичности, а наследуемые генотипы, сочетающие в норме две специфичности, частоты которых типированы у здоровых и больных жителей РА. У доноров (0,161) в отличие от больных БА (0,088) повышена частота *04*15 генотипа по НЬА ОЯВ1 локусу, однако протективных и ассоциированных с Б А НЬА Б1Ш1 специфичностей не выявлено.

Полиморфизмы генов цитокинов при бронхиальной астме.

С197А аллели 1Ь-17А. Исследование роли полиморфизмов генов основного провоспалительного 1Ь-17А в патогенезе БА обусловлено

широким спектром его биологических эффектов: запуском базовой воспалительной реакции, активацией продукции других медиаторов иммунной системы (1Ь-6, в-СЭР, вМ-СЗР, 1Ь-1|3, ТвР-р, ТОТ-а), простагландинов (РОЕ2), хемокинов, привлечением в очаг воспаления моноцитов и нейтрофилов и т.д. (ВиПепэ Б. е1 а!., 2006; Кетлинский С.А., 2006; Будчанов Ю.И., 2010). Полиморфизмы гена 1Ь-17А проанализированы в образцах геномной ДНК больных с тяжелой формой БА (п=47) и здоровых жителей РА (п=34) в зависимости от тендерных различий, наследственной отягощенности (табл. 3).

Таблица 3. Частоты 0197А аллелей и генотипов 1Ь-17А в общих группах больных БА и доноров

Ген Аллели/ генотипы Частоты аллелей и генотипов ¿(Р) OR (95% CI)

больные БА (п=47) доноры (п=34)

IL17A-197 G 0,564 0,765 6,98* (0,008) 0,40 (0,20-0,80)

А 0,436 0,235 2,51* (1,26-5,03)

GG 0,404 0,559 8,45* (0,01) 0,54(0,22-1,31)

GA 0,319 0,412 0,67 (0,27-1,68)

АА 0,277 0,029 12,62* (1,56-101,97)

Примечание: п — количество обследованных; '-статистически значимые отличия по х (при р<0,05) и OR (95% CI).

Между сравниваемыми группами больных БА и здоровыми жителями Республики Адыгея выявлены достоверные различия по распределению G197/197A аллелей и генотипов IL-17A с повышением частоты мутантной 197А аллели и «патологического» гомозиготного А197А генотипа (табл. 3).

Маркером повышенного риска развития Б A (OR=2,51 и 12,62; табл. 3) является 197 А полиморфизм и А А генотип IL-17A, ассоциированные у жителей РА с БА, что подтверждается исследованиями Chen J et al, 2010 для китайцев. Следует отметить, что и в мировых исследованиях последних 4-х лет, направленных на поиск полиморфного варианта гена IL-17A, ассоциированного с риском развития бронхиальной астмы, в качестве маркера предложен только G197/197A полиморфизм (rs2275913) гена IL-17A.

Между группами больных с наследственно-отягощенными и приобретенными формами БА статистически значимых отличий по

распределению аллелей и генотипов 1Ь-17А не выявлено. Однако относительные риски развития наследственно-отягощенной БА при носительстве А197А генотипа выше (011=15,00; р=0,02), чем для приобретенных форм (ОЯ=11,48; р=0,04).

Продукция 1Ь-17А. Уровни 1Ь-17А в образцах сыворотки, супернатантах интактных и стимулированных ФГА МНК в общих группах больных и доноров представлены в таблице 4.

Таблица 4. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro МНК продукция IL-17A в группах больных Б А и доноров

IL-17A M±m, пг/мл t.P

Больные БА (п=17) Доноры (п=23)

сыворотка 2503,37±47,21 2563,19*46,35 0,878; >0,05

МНК 677,10± 369,60 395,79*184,08 0,907; >0,05

МНК + ФГА 392,96±197,45 269,96±110,84 0,578; >0,05

t,P 6,678'*; <0,001 10,1082*; <0,001 0,8673; >0,05 11,417"*; <0,001 19,08 85*; <0,001 0,5866; >0,05

Примечания: п — количество обследованных; М — Среднее значение; m — стандартная ошибка среднего; s — стандартное отклонение, t - критерий Стьюдснта; р - вероятность ошибки; (t)1 - между сывороточными уровнями и МНК больных БА; (t)! - между сывороточными уровнями и МНК + ФГА больных БА; (t)3 - между МНК и МНК + ФГА больных БА; (t)4 - между сывороточными уровнями и МНК доноров; (t)5 - между сывороточными уровнями и МНК + ФГА донов; (t)6 - между МНК и МНК + ФГА доноров.

В образцах сыворотки крови всех обследованных лиц обнаружены уровни IL-17A, с высокой степенью достоверности (р<0,001) превышающие концентрации медиатора в супернатантах интактных и стимулированных in vitro ФГА МНК, однако достоверных различий между донорами и больными не выявлено. Течение хронических воспалительных заболеваний легких у мужчин и женщин существенно различается, что может быть обусловлено влиянием гормонального профиля на экспрессию медиаторов воспаления (GINA, 2006).

С целью выявления тендерных различий проанализированы сывороточные концентрации, уровни спонтанной и стимулированной продукции IL-17A МНК мужчин и женщин в норме и при Б А. Высокие сывороточные уровни IL-17A для группы женщин достоверно превышают

концентрации медиатора в супернатантах интактных, стимулированных in vitro ФГА МНК доноров и больных БА. Статистически значимые отличия по уровню спонтанной продукции IL-17A (t=2,269; р<0,05) выявлены между здоровыми и больными женщинами. Для группы мужчин таких различий выявлено не было. Нами впервые проанализировано влияние 197А аллели гена IL-17A не только на сывороточные уровни, но и на продукцию in vitro в культуре мононуклеарных клеток крови, содержащих более 70% Т-лимфоцитов — основных продуцентов цитокинов (табл.5). Таблица 5. Влияние SNP гена IL-17A на продукцию медиатора МНК

доноров и больных БА

IL-17A G197A M±m, пг/мл t

Больные БА Доноры

Сыворотка МНК МНК + ФГА Сыворотка МНК МНК + ФГА

GG 2516,11 ±33,29 1698,28 ±822,35 177,64 ±103,56 2533,62 ±87,96 226,67 ±170,31 425,93 ±242,83 0,10'; 2,822*; 0,623

GA 2572,23 ±13,12 39,03 ±9,85 462,32 ±352,91 2542,72 ±36,72 99,81 ±85,85 128,57 ±58,00 0,684; 0,575; 1,066;

АА 2416,67 ±121,44 604,43 ±407,32 455,58 ±408,34 - - - -

t 1,95'; 0,55s; 1,389 3,08'"*; 1,36"; 1,3912 0,59"; 0,5414; 0,0115 0,0916; 0,66"; 1,13"

Примечания: * - значения I при р < 0,02; М — Среднее значение, га — стандартная ошибка среднего, Б — стандартное отклонение, р - вероятность ошибки, I - критерий Стьюдента между концентрациями II- 17А в: (I)1 - сыворотках больных БА и доноров с СО генотипом; (I)2 - МНК больных БА и доноров с СЮ генотипом; О)' - МНК + ФГА больных БА и доноров с СЮ генотипом; (I)4 - сыворотках больных БА и доноров с генотипом; (О5 - МНК больных БА и доноров с ОА генотипом; О)6 • МНК + ФГА больных БА и доноров с вА генотипом; (I)7 - сыворотках больных БА с (Ю и ОА генотипом; (О1 - сыворотках больных БА с (Ю и АА генотипом; (О9 ♦ сыворотках больных БА с ОА и АА генотипом; - МНК больных БА с СО и ОА генотипом; (0П - МНК больных БА с СЮ и АА генотипом; (г)12 - МНК больных БА с ОА и АА генотипом; (О13 - МНК + ФГА больных БА с СЮ и ОА генотипом; О)14 - МНК + ФГА больных БА с ОО и А А генотипом: (()" - МНК + ФГА больных БА с ОА и АА генотипом; (1) - сыворотках доноров БА с ОО и ОА генотипом; (I)17 - МНК доноров с ОО и ОА генотипом; (О18 - МНК+ ФГА доноров с ОО и ¿А генотипом.

Сывороточные концентрации 1Ь-17А больных и доноров не определяются генотипом по 197 позиции гена 1Ь-17А. Влияние 0197А БЫР гена 1Ь-17А отмечено на спонтанную продукцию медиатора. Интактные МНК больных с нормальным гомозиготным 01970 генотипом продуцируют достоверно более высокие уровни 1Ь-17А по сравнению с гетерозиготным 0197А генотипом (1 = 3,081 при р<0,05). Повышение спонтанной продукции

IL-17A МНК доноров - носителей G197G гомозиготного генотипа статистически не подтверждено (р>0,05). Различия в уровнях стимулированной in vitro ФГА продукции IL-17A МНК в зависимости от генотипа статистически не значимы.

Таким образом, у больных G197/197G генотип и 197G аллель ассоциированы с повышенной, а 197А аллель IL-17A в гетерозиготном (A197/197G) и гомозиготном состоянии (А197/197А) - со сниженной спонтанной продукцией IL-17A МНК. Полученные экспериментальные данные не имеют отечественных и зарубежных аналогов.

Аллельные варианты G308A гена TNF-a. Распределение G308/308A аллелей и генотипов основного провоспалительного цитокина TNF-a в норме и при БА у жителей РА, приведенные в таблице 6, соответствуют мировым данным (Ensembl).

Таблица 6. Частоты С308А аллелей и генотипов Т№-а в общих группах доноров и больных БА

Ген Аллели/ генотипы Частоты аллелей и генотипов ¿(Р) OR (95% CI)

больные Б А п=61 Доноры п=38

TNF-a G308A G 0,795 0,882 2,46 (0,12) 0,52 (ОДЗ -1,19)

А 0,205 0,118 1,92(0,84-4,37)

GG 0,607 0,789 4,14* (0,05) 0,41 (0,16-1,05)

GA 0,377 0,184 2,68*. (1,02 -7,07)

АА 0,016 0,026 0,62 (0,04-10,16)

Примечания: п- количество обследованных * - статистически значимые различия р<0,05

Ассоциированность гетерозиготного G308/308A генотипа TNF-a с БА подтверждается достоверным повышением частоты в группах больных по сравнению с донорами. Ряд исследователей устанавливают ассоциацию G308A полиморфизмов с патогенезом воспалительных и инфекционных заболеваний человека (Zheng B.Q. et al., 2012; Ricciardolo F.L. et al., 2013; Shaker O.G. et al., 2013; Chiang C.H. et al., 2013). У жителей Великобритании, США, Мексики, Кореи, Японии, России при БА чаще выявляется 308А аллель, для египтян характерна БА, ассоциированная с G308 аллелью, а в Китае, по данным 4 исследований, при БА выявляется G и А аллели TNF-a

(Черкашина И.И., 2009, 2010; Tsai С.Н. et al., 2011; Zhang Y. et al., 2011). Вместе с тем, имеются данные об отсутствии ассоциации G308/308A аллелей гена TNF-a с БА. Так, у больных БА, проживающих в Белоруссии, частотные распределения G308A аллелей гена TNF-a достоверно не отличались от таковых для здоровых жителей (0,853/0,147). Тендерные различия в распределении полиморфизмов гена TNF-a, отмеченные в ряде исследований (Jiffri Е.Н. et al., 2011; Zheng B.Q. et al., 2012; Shaker O.G. et al., 2013), не нашли подтверждения в наших исследованиях: частоты G308/308A аллелей и генотипов TNF-a в обследованных группах мужчин и женщин достоверно не отличались.

Продукция TNF-a. Наиболее распространенный в мире G308A (rsl800629) полиморфизм TNF-a в 308 промоторном локусе гена оказывает влияние на уровень продукции цитокина TNF-a (табл. 7).

Таблица 7. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro МНК продукция TNF-a в группах больных БА и доноров

TNF-a M±m, пг/мл t Р

Больные БА (п=31/31/26) Доноры (п=27/27/25)

сыворотка 19,05±5,26 13,65±1,89 0,91 >0,05

МНК 63,42±11,39 53,07±13,41 0,54 >0,05

МНК + ФГА 162,96±31,96 96,82±19,36 2,20 <0,05

t,P 3,09'* ,<0,005 7,502*, <0,001 4,253*, <0,001 2,91"*, <0,01 4,705*, <0,001 2,096*, <0,05

Примечания: п - количество обследованных; М - среднее значение, ш - стандартная ошибка среднего; I - критерий Стьюдеетга, р - вероятность ошибки. (Ч)1 - между сывороточными уровнями и МНК больных БА; (О2 - между сывороточными уровнями и МНК + ФГА больных БА; (О3 - между МНК и МНК + ФГА больных БА; (О4 - между сывороточными уровнями и МНК доноров; (О5 - между сывороточными уровнями и МНК + ФГА донов; (1)ь - между МНК и МНК + ФГА доноров.

В соответствии с экспериментальными данными, полученными для доноров и больных БА, сывороточные концентрации Т№-а (р>0,05) не превышающие физиологических значений (меньше 100 пг/мл), не зависят от генотипов исследованных статистически значимо не отличаются в

обследованных группах.

Уровни спонтанной продукции TNF-a МНК больных и доноров варьируют в более широком диапазоне значений (0-308 pg/ml), поэтому между группами доноров и больных БА достоверных различий не выявлено. При стимуляции ФГА МНК больных по сравнению с МНК доноров статистически значимо продуцируют более высокие концентрации TNF-a (табл. 7), что может при определенных условиях влиять на развитие хронических воспалительных заболеваний легких.

G308/308A полиморфизмы, расположенные в промоторном регионе гена TNF-a, могут регулировать продукцию цитокина. Уровни спонтанной, стимулированной in vitro ФГА продукции TNF-a МНК больных БА и доноров сравнивали между носителями нормального гомозиготного G308G и гетерозиготного G308A генотипов при отсутствии А308А гомозигот. Повышенная стимулированная продукция TNF-a ассоциирована с GG генотипом у больных БА, проживающих в РА, что противоречит данным Hoffmann S.C. et al., 2002, полученным для других популяций.

Аллельные варианты C174G гена IL-6 при бронхиальной астме. Наибольшее количество работ по поиску маркеров, ассоциированных с бронхиальной астмой, направлено на изучение C174G (rsl800795) полиморфизмов гена провоспалительного IL-6. В работах Ahmad Settin et al., 2008 и Dejan Trajkov et al., 2008 показано, что риск развития бронхиальной астмы у жителей Египта, Македонии связан с «нормальной» С174 аллелью и нормальным С174С генотипом IL-6, однако в наших исследованиях это не подтвердилось.

Продукция IL-6. Концентрации свободного сывороточного IL- 6 в норме (п=15) и при БА (п=15) не превышают пределов чувствительности метода (020 пг/мл), что может быть обусловлено секрецией или повышенным шеддингом растворимых рецепторов к IL-6. По сравнению с сывороточными концентрациями, достоверно более высокие уровни IL-6 обнаружены в супернатантах интактных и стимулированных ФГА МНК доноров (соответственно 200,38±63,4; t=3,16; р<0,005 и 219,07±56,37; t='4,37; р<0,001)

и больных (246,38±63,40; t=3,34; р<0,005 и 389,00±56,21; t=6,81; р<0,001). Повышенное содержание IL-6 отмечено в супернатантах интактных и стимулированных МНК больных, однако статистически значимых отличий между донорами и больными не установлено. Анализ влияния аллельных вариантов C174/174G гена IL-6 на продукцию медиатора представлен в таблице 8.

Таблица 8. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro МНК продукция IL-6 в группах больных БА и доноров в зависимости от генотипа С174G гена IL-6

ч» 5 М±т, пг/мл

Больные БА Доноры t,P

-J ^ "" и Сыворотка МНК2 МНК + ФГА3 Сыворотка МНК2 МНК + ФГА3

СС 8,67 32,45 203,90 0 87,29 340,15 1,19'; >0,05 0,952; >0,05 0,703; >0,05

±8,67 ±24,46 ±117,65 ±136,39 ±141,59

CG 0 319,39 440,41 0 294,16 361,56 0,164; >0,05 0,685; >0,05

±101,51 ±74,37 ±123,98 ±90,15

GG 12,55 210,23 367,53 0 130,96 59,32 1,26'; >0,05 0.537; >0,05 2,7318*; <0,05

±12,55 ±122,73 ±106,64 ±89,81 ±36,89

Примечания: п - количество обследованных; М — Среднее значение, m - стандартная ошибка среднего, s - стандартное отклонение, t - критерий Стьюдента, р - вероятность ошибки; (t)1 - между сывороточными уровнями больных БА и доноров с СС генотипом; (t)2 - между МНК больных БА и доноров с СС генотипом; (t)3 - между MHK+ФГА больных БА и доноров с СС генотипом; (t)4 - между МНК больных БА и доноров с CG генотипом; (t)5 - между MHK+ФГА больных БА и доноров с CG генотипом; (t)6 - между сывороточными уровнями больных БА и доноров с GG генотипом; (t)7 - между МНК больных БА и доноров с GG генотипом; (t)s - между MHK+ФГА больных БА и доноров с GG генотипом.

Среди носителей нормального и гетерозиготного генотипов C174/174G SNP гена IL-6 в группах доноров и больных не выявлено статистически значимых отличий по спонтанной продукции IL-6 МНК. При стимуляции in vitro ФГА продукция IL-6 МНК повышается у больных - носителей патологического гомозиготного генотипа GG (р<0,05).

Сочетание HLA DRB1 специфичностей и SNP генов цитокинов при Б А. Экспериментально установлено, что у доноров и больных генотип DRB1*04*15 сочетается с определенными SNP генов двух

провоспалительных цитокинов - IL-17A и IL-6. Так, у доноров DRB1*04*15 генотип чаще типируется (х2=2,875) с «нормальными» аллельными вариантами IL-17A G197A (0,875:0,125) и IL-6 C174G (0,625:0,375). У больных БА, в отличие от доноров, HLA DRB1*04*15 генотип преимущественно сочетается с «мутантными» аллельными вариантами IL-17А G197A (0,250:0,750) и IL-6 C174G (0,500:0,500), которые in vitro оказывают ингибирующее действие на продукцию самого медиатора (Osiri М. et al., 1999; Jordanides N. et al., 2000). По распределению аллельных вариантов TNF-a и TLR-9 каких-либо закономерностей в группах доноров и больных не выявлено.

Т.о., при исследовании полиморфизмов ключевых генов, обеспечивающих многоуровневую регуляцию воспалительных процессов, наиболее достоверные данные по ассоциированности с бронхиальной астмой получены для генов основных провоспалительных цитокинов IL-17A, TNF-a. Это подтверждает ведущую роль воспаления в развитии БА.

Выводы

1. SNP генов TLR4 (Asp299Gly, rs4986791; Thr399Ile, rs4986791) и TLR9 (A2848G, rs352140) у жителей Республики Адыгея не ассоциированы с риском развития бронхиальной астмы.

2. Патогенетическим фактором иммунологического звена в развитии БА является носительство «мутантной» 197А аллели и А197А генотипа промоторного региона гена основного провоспалительного цитокина IL-17A и гетерозиготный G308A генотип TNF-a.

3. Полиморфизмы промоторных регионов генов IL-17A и IL-6 влияют на продукцию МНК соответствующих медиаторов: 197А аллель IL-17А в гетерозиготном и гомозиготном состоянии ассоциирован со сниженной спонтанной продукцией цитокина, G174G генотип IL-6 - с повышенной стимулированной in vitro ФГА продукцией IL-6.

4. Протективных и ассоциированных с БА сочетаний HLA DRB1 генотипов и SNP генов цитокинов IL-17A, TNF-a, IL-6 не установлено.

21

Практические рекомендации:

1. При диспансерном обследовании населения в группу риска по бронхиальной астме включать носителей маркерных А197А (IL-17A) и G308A (TNF-a) генотипов, ассоциированных с БА.

2. Уровни спонтанной продукции основных провоспалительных цитокинов первой волны (IL-17A и IL-6) мононуклеарными клетками периферической крови могут, быть использованы в диагностике предрасположенности к бронхиальной астме.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Руденко К.А. Специфичности человеческих лейкоцитарных антигенов второго класса (HLA II), ассоциированные с риском развития бронхиальной астмы в мировых популяциях / Руденко К.А. // Вестник Адыгейского государственного университета. Серия естественно-математических и технических наук. - 2012. - Выпуск 2 (101). - С. 94-106.

2. Руденко К.А. Полиморфизмы генов основных провоспалительных цитокинов IL-17A (G197/197A) и TNF-a (G308/308A) при хронических воспалительных заболеваниях органов дыхания у жителей Республики Адыгеи / Руденко К.А., Нихай М.М., Тугуз А.Р., Анохина E.H., Муженя Д.В. // Медицинский академический журнал. Сборник материалов конференции, г. Санкт-Петербург. - 2012. - С. 236-238.

3. Руденко К.А. G308/308A полиморфизмы гена TNF-a и уровни продукции цитокина в норме и при хронических воспалительных заболеваниях органов дыхания / Руденко К.А., Нихай М.М., Тугуз А.Р., Анохина E.H., Муженя Д.В. // Вестник Адыгейского государственного университета. Серия естественно-математических и технических наук. - 2012. - Выпуск 4 (110). - С. 146-155.

4. Руденко К.А. HLA DRB1 специфичности, ассоциированные с бронхиальной астмой у жителей Республики Адыгея / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Анохина E.H., Муженя Д.В // Наука: комплексные проблемы,- 2013. Выпуск 1 (1).-С. 12-15.

5. Тугуз А.Р. Протективные и ассоциированные с бронхиальной астмой HLA DRB1 специфичности у жителей Республики Адыгея / Тугуз А.Р., Руденко К.А., Нихай М.М., Анохина E.H., Муженя Д.В. //Достижения науки за последние годы. Новые наработки. Сборник научных докладов. Варшава. Польша. - 2012. - С. 36-39.

6. Руденко К.А. Влияние полиморфизмов генов цитокинов (IL-17A G197A, TNF G-308A, IL-6 C174G) на риск развития бронхиальной астмы / Руденко К.А., Анохина E.H., Муженя Д.В., Кизянов А.Ф. // Материалы VII Международной научной конференции молодых ученых-медиков, г. Курск. - 2013. - С. 123-128.

7. Руденко К.А. Ассоциация полиморфизмов генов провоспалительных цитокинов IL-17A (G197A, TNF (G-308A), IL-6 (C174G) с бронхиальной астмой у жителей Республики Адыгея / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Анохина E.H., Муженя Д.В. // Материалы X Международной научной конференции молодых ученых «Наука. Образование. Молодежь», г. Майкоп. - 2013. - С. 61-66.

8. Руденко К.А. C174/174G полиморфизмы гена провоспалительного цитокина IL-6 в норме и при бронхиальной астме у жителей Республики Адыгея / Руденко К.А., Муженя Д.В., Анохина E.H. // Актуальные вопросы медицинской науки. Сборник научных работ. Ярославль. - 2013. - С. 46-47.

9. Руденко К.А. Полиморфизмы генов основных провоспалительных цитокинов IL-17A, TNF-a, IL-6 при бронхиальной астме / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Нихай М.М., Анохина E.H., Муженя Д.В // 17-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века». Сборник тезисов. Москва. - 2013. - С. 225-226.

10. Руденко К.А. Полиморфизмы генов цитокинов (IL-17A G197A, TNF-a G308A, IL-6 C174G) и специфичности главного комплекса гистосовместимости человека (HLA DRB1) при бронхиальной астме / Руденко К.А., Нихай М.М. // Перспектива-2013.Материалы Международной научной конференции студентов, аспирантов, молодых ученых, г. Нальчик. - 2013. - Т. II. - С. 332-336.

11. Руденко К.А. Специфичности главного комплекса гистосовместимости человека и полиморфизмы генов основных провоспалительных цитокинов при бронхиальной астме / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Анохина E.H.," Нихай М.М.,

Муженя Д.В //Девятая ежегодная научная конференция студентов и аспирантов базовых кафедр Южного научного центра РАН. Тезисы докладов, г. Ростов. -2013. - С. 22-23.

12. Руденко К.А. Полиморфизмы TLR4 и TLR 9 (То11-подобных подобных рецепторов) при бронхиальной астме / Руденко К.А., Нихай М.М., Тугуз А,Р., Муженя Д.В., Анохина E.H. // XXII Национальный Конгресс по болезням органов дыхания. Сборник трудов конгресса, г. Казань. - 2013, С. 55-56.

13. Руденко К,А. Полиморфизмы генов toll-подобпых рецепторов, ассоциированные с наследственной отягощенностью и возрастом манифестации бронхиальной астмы / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Анохина E.H., Муженя Д.В. // Вестник Адыгейского государственного университета. Серия естественно-математических и технических наук. -2014. - Выпуск 1 (133). С. 64-69.

14. Руденко К.А. Влияние полиморфизмов генов IL-17A (G197/197A), TNF-a (G308/308A), IL-6 (C174/174G) на спонтанную и стимулированную in vitro продукцию основных провоспалительных цитокинов при бронхиальной астме / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Анохина E.H., Муженя Д.В // Иммунология. - 2014. -Выпуск 2. (35). - С. 92-94.

15. Руденко К.А. Полиморфизмы генов основных провоспалительных цитокинов IL-17A, TNF-a, IL-6, ассоциированные с риском развития бронхиальной астмы в мировых популяциях и у жителей Республики Адыгея / Руденко К.А. // Вестник Адыгейского государственного университета. Серия естественно-математических и технических наук. - 2013. - Выпуск 3 (122). - С. 5461.

16. Руденко К.А. Специфичности HLA DRB1, полиморфизмы генов цитокинов и TLR, ассоциированные с бронхиальной астмой (БА) у жителей Республики Адыгея (РА) / Руденко К.А., Тугуз А.Р., Нихай М.М., Анохина E.H., Муженя Д.В. // 18-я международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века». Сборник тезисов, г. Москва-2014,- С. 276.

Список сокращений

БА - бронхиальная астма

ВОЗ - Всемирная организация здоровья

МИАЦ - Медико-исследовательский аналитический центр

МНК - Мононуклеарные клетки периферической крови

РА — Республика Адыгея

РФ - Российская Федерация

ФГА — Фитогемагглютинин

XB3JI — хронические воспалительные заболевания органов дыхания GINA - Global Initiative for Asthma, Глобальная стратегия лечения и профилактики БА

HLA II - Human leukocyte antigens, человеческие лейкоцитарные антигены 2-го класса

IL - интерлейкины, IL-17A; IL-6

МНС - Major histocompatibility complex, главный комплекс гистосовместимости

SNP - single nucleotide polymorphism, единичные нуклеотидные полиморфизмы

TLR- Toll-like receptor, толл-подобные рецепторы: TLR4, TLR9 TNFa - фактор некроза опухолей а

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает особую благодарность д.с.н., профессору Хунагову Рашиду Думаличевичу, ректору ФГБОУ ВПО «Адыгейский государственный университет» за возможность выполнения диссертационной работы в иммуногенетической лаборатории АГУ; заслуженному врачу РФ, Нихай Мире Моссовне, зав. пульмонологическим отделением Адыгейской республиканской клинической больницы за предоставленные клинические материалы, консультативную и практическую помощь в выполнении работы; научному руководителю доктору биологических наук, профессору, зав. иммуногенетической лабораторией ФГБОУ ВПО «Адыгейский государственный университет» Тугуз Аминат Рамазановне за научное руководство, поддержку при выполнении и написании работы.

РУДЕНКО КСЕНИЯ АНДРЕЕВНА

Специфичности НЬА ОКВ1, полиморфизмы генов цитокинов и ТЬК, ассоциированные с бронхиальной астмой у жителей Республики Адыгея

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 07.07.2014. Бумага типографская №1. Формат бумаги 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Печ.л. 1,0. Тир. 100. Заказ 040.

Отпечатано на участке оперативной полиграфии Адыгейского государственного университета. 385000, г. Майкоп, ул. Первомайская, 208.