Автореферат и диссертация по медицине (14.01.10) на тему:Совершенствование ранней диагностики Т-клеточных лимфом кожи на основе оценки экспрессии TsPO (периферического бензодиазепинового рецептора) как маркера интенсивности пролиферации опухолевых клеток.
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.01.10
Автореферат диссертации по медицине на тему Совершенствование ранней диагностики Т-клеточных лимфом кожи на основе оценки экспрессии TsPO (периферического бензодиазепинового рецептора) как маркера интенсивности пролиферации опухолевых клеток.
4852219
Петренко Екатерина Валерьевна
«Совершенствование ранней диагностики Т-клеточных лимфом кожи на основе оценки экспрессии ТяРО (периферического бензодиазепинового рецептора) как маркера интенсивности пролиферации опухолевых клеток»
14.01.10 — кожные и венерические болезни 14.03.03 — патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва 2011
1 8 АВГ 2011
4852219
Работа выполнена в ГУ Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф.Владимирского.
Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор
Молочков Антон Владимирович
доктор медицинских наук
Рукша Татьяна Геннадьевна
Официальные оппоненты: член-корреспондент РАМН, доктор
медицинских наук, профессор
Литвицкий Петр Францевич
доктор медицинских наук, доцент Полеско Ирина Васильевна Ведущее учреждение: Московский Государственный
медико-стоматологический университет
Защита диссертации состоится « /¿¿¿^ГЛЁ/О^ 2011г. в /3 часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.040.10 при ГОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова Росздрава (119991, Москва ул. Трубецкая д.8, стр.2).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Первый МГМУ имени И. М. Сеченова Росздрава (117998, Москва ул. Нахимовский проспект, д.49).
Автореферат разослан « ^ » 2011г.
Ученый секретарь
Диссертационного Совета Д. 208.040.10
доктор медицинских наук, профессор С. И. Эрдес
Общая характеристика работы
Актуальность проблемы злокачественных лимфом кожи (3JTK) обусловлена как высокой частотой (в мире ежегодно регистрируется 0,3 случая на 10 тысяч населения) (Weinstock, Gardstein В., 1999(, так и сложностью ее ранней диагностики и лечения (Burg G., at al 2008).
Особенно высок уровень заболеваемости Т-клеточной лимфомой кожи (TKJ1K), доля которой в общей структуре злокачественных лимфом кожи достигает 60-65% (Самцов A.B., Белоусова И.Э 2006; Burg G., 2000).
Сложность установления диагноза J1K обусловлена полиморфизмом клинической картины, имитирующей различные хронические доброкачественные заболевания кожи. Начало развития большинства лимфом кожи нередко бывает медленным, и длительное время они клинически сходны с экземой, псориазом, псевдолимфомами, атопическим дерматитом и другими дерматозами, однако диагностика TKJ1K на ранних стадиях развития сложна не только для клиницистов, но и патоморфологов — из за не специфичности в этот период ее гистологических (включая отсутствие эпидермотропизма) и иммуногистохимических характеристик. В частности, не подтвердились, казавшиеся многообещающими данные о возможности раннего выявления Т- клеточных лимфом кожи по отрицательному окрашиванию Т-лимфоцитов опухолевого инфильтрата на иммуногистохимический маркер CD7 (Willemze R., et al 1998.).
Не дало желаемых результатов и молекулярно-биологическое исследование, направленное на выявление перестройки Т-клеточного рецептора (TCR), так как на начальной стадии элементы TKJIK демонстрируют моноклональную перестройку гена TCR лишь в 50% случаев. Более того, при некоторых доброкачественных дерматозах (например при красном плоском лишае, склероатрофическом лихене) лимфоцитарный инфильтрат также может быть представлен моноклональной популяцией Т-лимфоцитов (Citarella L., Massonc С, Kerl Н., Cerroni L. 2003).
Таким образом даже использование всей совокупности вышеперечисленных методов исследования не всегда обеспечивает
з
установление диагноза Т- клеточной лимфомы кожи на раннем сроке ее развития (в частности на фоне так называемых «прелимфом» кожи, таких как крупно- и мелкобляшечный парапсориаз), а также дифференциальной диагностики этого заболевания с доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями(В1Щ> в. 2005). В результате остается достаточно большое количество не диагностированных ЛК и зачастую между первыми клиническими проявлением и постановкой окончательного диагноза может пройти до 10 лет. Врач поликлинического звена может подозревать ЛК, но методами лабораторной диагностики диагноз подтверждается только через несколько лет. Вышеуказанное объясняет актуальность поиска новых эффективных методов диагностики.
В связи с этим, исходя из важной роли в развитии Т- клеточных лимфом кожи ультрафиолетового излучения, наше внимание было обращено к изучению функционирования белков клеток кожи, обладающих фоточувствительностью и иммуномодулирующим действием, а также принимающих участие в регуляции клеточной пролиферации и апоптоза. К группе таких белков относятся периферические бензодиазепиновые рецепторы (РВЛ (ТэРО). Их выраженная экспрессия в различных слоях кожи, способность регулировать пролиферацию клеток требуют дальнейшего изучения функционирования рецептора в коже в норме и при патологии, а также позволяет рассматривать периферический бензодиазепиновый рецептор как возможную терапевтическую мишень и маркер интенсивности клеточной пролиферации при злокачественных новообразованиях кожи (Сау18Ь М., 1999, БЮеЪпег Р.Е., 2001).
Учитывая значимую роль ТвРО в механизмах клеточной пролиферации и апоптоза, а также способность к структурным и функциональным изменениям данного белка, индуцируемым УФО, представляется перспективным дальнейшее изучение их участия в развитии лимфопролиферативных заболеваний, сопровождающихся нарушениями данных процессов. Цель исследования:
Изучить интенсивность экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора (ТбРО), РСМА и цитохрома Р450зсс в коже при Т-клеточной лимфоме кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи (парапсориазе) с целью установления роли ТэРО в этиопатогенезе Т-клеточных лимфом кожи, а также для использования этого показателя в дифференциальной диагностике между ними. Задачи исследования.
1. Оценить эффективность применяющегося в настоящее время комплекса диагностических мероприятий (клинических, морфологических и молекулярно-биологических) для дифференциальной диагностики Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи.
2. Определить интенсивность экспрессии ТэРО, РСИА и цитохрома Р450зсс в коже у больных Т-клеточной лимфомой кожи и доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями кожи (парапсориазом)
3. Оценить возможность использования экспрессии ТэРО, РСКА и цитохрома Р450зсс в дифференциальной диагностике Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи (парапсориаз) и разработать на основе полученных данных метод дифференциальной диагностики Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи.
4. Оценить клиническую эффективность включения метода определения интенсивности экспрессии ТбРО в комплекс диагностических мероприятий при дифференциальной диагностике Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи.
Научная новизна
1. В работе впервые дополнительно к клиническим, морфологическим и молекулярно-биологическим методам исследования было проведено определение уровня экспрессии ТбРО, РСЫА и цитохрома Р450зсс при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи.
2. Впервые оценена взаимосвязь между уровнем экспрессии ТэРО и интенсивностью клеточной пролиферации в очаге поражения у больных ТКЛК и доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями кожи.
3. Впервые определялась роль ТэРО, РСЫА и цитохрома Р4508СС в развитии лимфопролиферативных заболеваний.
4. Впервые разработан метод дифференциальной диагностики Т-клеточных лимфом кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи, основанный на уровне экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора.
Научно-практическая значимость работы
В работе получены данные, позволяющие оценить участие ТэРО, РСИА и цитохрома Р450всс в функционировании нормальной кожи, а также в развитии лимфопролиферативных заболеваний кожи. Доказано наличие корреляционной связи между уровнем экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора и интенсивностью клеточной пролиферации, что позволит использовать периферический бензодиазепиновый рецептор в качестве маркера выраженности пролиферативных процессов в опухолевых клетках Т-клеточной злокачественной лимфомы кожи, что может применяться как для дифференциальной диагностики с доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями кожи, так и для оценки биологического поведения опухоли и возможности появления рецидивов. Основные положения, выносимые на защиту
1. Использование комплекса современных исследований, включающее общепринятые на сегодняшний день клинические, морфологические и молекулярно-биологические методы не позволяет установить диагноз мелкобляшечного парапсориаза, крупнобляшечного парапсориаза и Т-клеточной лимфомы кожи у 100% пациентов.
2. Уровень экспрессии ТбРО в различных слоях кожи при ранних стадиях Т-клеточной лимфомы кожи достоверно отличается от такового при доброкачественных лимфопролиферативных новообразованиях кожи, что позволяет предположить роль
6
периферического бензодиазепинового рецептора в регуляции клеточной пролиферации и рассматривать его в качестве специфического маркера пролиферации при злокачественных лимфопролиферативных новообразованиях, в отличие от РСЫА, позволяющего оценить только скорость пролиферации в зависимости от скорости роста как злокачественных, так и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний.
3. Оценка уровня экспрессии ТбРО может рассматриваться как метод дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных новообразований.
4. Включение в комплекс общепринятых диагностических мероприятий (клинических, морфологических, молекулярно-биологических методов исследования) метода определения уровня экспрессии ТэРО повышает точность диагностики ТКЛК кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты исследования внедрены в отделении дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ им. М.Ф. Владимироского и в областном кожно-венерологический диспансере г.Калуги. Результаты используются в учебном процессе на кафедре дерматовенерологии и дерматоонкологии ФУВ ГУ МОНИКИ им. М.Ф.Владимироского Апробация работы
Основные материалы диссертации доложены на Заседании Московского областного общества дерматовенерологов в МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, сентябрь 2010г.
Апробация диссертационной работы состоялась на совместной научно-практической конференции кафедры и отделения дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ им. М. Ф. Владимироского (1 марта 2011г.).
Личное участие автора в получении научных результатов.
Автору принадлежит ведущая роль, в выборе программы и составлении плана исследования, наборе группы пациентов из 60 человек, сборе анамнеза и их обследования с целью уточнения диагноза, взятии и анализе биопсийного материала, статистической обработке, анализе и
интерпретации полученных данных на основе иммуногистохимического исследования. Автором подробно изучена современная литература по проблеме. Им также разработан алгоритм диагностики и дифференциальной диагностики Т-клеточных лимфом кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний. Совместно с научными руководителями сформулированы цели и задачи диссертации, обсуждены и сформулированы выводы и даны важные практические рекомендации. Публикации:
По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 в журналах рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертационных исследований. Структура и объем диссертации:
Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, раздела «материалы и методы», 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа иллюстрирована 23 рисунками, 11 таблицами и 5 схемами. Указатель литературы включает 137 работ, из них 26 отечественных и 111 зарубежных авторов. Содержание работы
Работа выполнена в отделение дерматовенерологии и дерматоонкологии Московского областного научно-исследовательского клинического института им. М.Ф.Владимирского. Гистологическое исследование проводилось в патологоанатомическом отделении МОНИКИ им. М.Ф.Владимирского. Иммуногистохимический анализ проводился в лаборатории, на базе кафедры патофизиологии Красноярской государственной медицинской академии Министерства здравоохранения и социального развития. Молекулярно-биологические исследования проводились на базе Российского онкологического научного центра им. H.H. Блохина.
Материалы и методы исследования:
Работа выполнена на основании обследования 60 человек, жителей Московской (50 человек) и Калужской (10 человек) областей.
Среди обследованных пациентов было 36 мужчин и 24 женщины, возраст пациентов варьировал от 29 до 76 лет (в среднем составлял 55,8±0,9 лет).
Группа с установленным диагнозом Т-клеточной лимфомы кожи, включала 30 человек, возраст в этой группе больных составлял от 29 до 76 лет в среднем 61,1±0,9 лет. Во второй группе было 30 пациентов с установленным диагнозом бляшечный парапсориаз, в этой группе возраст пациентов составлял от 29 до 68 в среднем 50,4±0,7 лет. При анализе соотношения полов никаких различий между пациентами обеих групп установлено не было. При ТКЛК соотношение мужчин и женщин составляло 1.5:1, по сравнению с группой больных парапсориазом - 1,3:1.
Большинство больных ТКЛК - 18 (60%) не могли назвать какую-либо причину возникновения заболевания, однако 8 (26,7%) указывали на частые эпизоды активной инсоляции в анамнезе, 1 (3,3 %) на контакт с радиоактивными элементами, 3 (10%) — на контакт с химическими веществами группы канцерогенов. Необходимо отметить, что в 12 из 30 случаев (40%) ТКЛК развилась на фоне длительно протекавших предшествующих дерматозов.
При парапсориазе большинство пациентов также не могло связать начало заболевания с какими либо факторами, 6 (20%) указывали на активную инсоляцию в анамнезе, 4 (13,3%) - на предшествующую острую вирусную инфекцию.
При появлении первых признаков заболевания к дерматологу обратились сами или были направлены только 26 (43,3%) больных обеих групп. Остальные 34 (56,7%) обратились сами или были направлены к дерматологу через 6-30 месяцев после возникновения первых признаков заболевания как правило, уже при прогрессировании болезни, распространении площади поражения, присоединении выраженного зуда и т.п.
При первом обращении диагноз лимфопролиферативного заболевания был установлен только 52 (86,7%) больным, в остальных случаях (13,3%) врачами были допущены диагностические ошибки. Вместо диагноза ТКЛК или парапсориаза ошибочно ставились диагнозы: экземы, атопического дерматита, розового лишая Жильбера, красного плоского лишая, болезни Дарье, и т. д. В целом, от начала заболевания
до установления правильного диагноза при Т-клеточной лимфоме кожи проходило от 5 месяцев до 6 лет (в среднем 3,1±0,2 года); при парапсориазе - от 3 месяцев до 2 лет (в среднем 1,7±0,6 года).
При обследовании пациентов 2 групп у 58 человек была выявлена сопутствующая патология, причем в большинстве случаев было зарегистрировано 2 и более сопутствующих заболевания у одного человека. В среднем на одного больного ТКЛК приходилось 1,7, а при парапсориазе - 1,5 сопутствующих заболеваний. В группе пациентов с диагнозом ТКЛК чаще всего регистрировались болезни систем кровообращения, при парапсориазе - желудочно кишечого тракта. Необходимо отметить значительно большую частоту аллергодерматозов в анамнезе больных ТКЛК.
Диагноз Т- клеточной лимфомы кожи и парапсориаза устанавливался на основании данных анамнеза, клинической картины, результатов гистологического исследования, лабораторных данных и методов функциональной диагностики, а также (в отдельных случаях) молекулярно-биологического метода. По показаниям больные были консультированы терапевтом, гастроэнтерологом, эндокринологом, стоматологом, окулистом, невропатологом, гинекологом, онкологом, иммунологом и другими специалистами. После проведения стандартных методов диагностики всем пациентам проводилось иммуногистохимическое исследование с антителами к ТэРО, РСИА и цитохрому Р4505СС.
Гистологический метод
Гистологический метод применялся для установления диагноза. Для осуществления патоморфологического исследования кожи проводилась инцизионная (аспирационная) биопсия ткани и обработка ее стандартными методами. Для проведения гистологического исследования брался участок кожи из зоны наибольших изменений и пограничный участок кожи, затем биоптаты кожи фиксировались в 10% нейтральном забуференном формалине с последующей заливкой в парафин. В дальнейшем изготавливались гистологические срезы толщиной 3-5 мкм. Производилась окраска гематоксилином и эозином. Готовые
гистологические препараты просматривались в светооптическом микроскопе при увеличении 100-400-600-900.
Метод определения клональности лимфоцитов с помощью ПЦР по реарранжировке генов Т-клеточного рецептора лимфоцитов Процесс ПЦР подразделяется на три этапа:
1. денатурации, во время которой происходит расплетание двойной спирали и расхождение нитей ДНК.
2. этапа отжига праймеров, во время которого специфические олигонуклеотиды присоединяются по принципу комплементарности к желаемым участкам ДНК.
3. стадии синтеза, при которой происходит комплементарное достраивание нитей ДНК.
Методика состоит из следующих наиболее важных этапов: 1.Выделение ДНК из биоптата пораженной кожи 2.Этап отжига 3. Анализ конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов. Концентрацию ДНК проверяли на спектрофотометре Beckman DU-64. Определение клональности проводили на основе анализа перестроек вариабельного региона гамма-цепи Т-клеточного рецептора (TCR). ПЦР проводили на автоматическом термоциклере (Perkin Elmer Cetus). Результаты реакции выявляли в 2% агарозном геле, окрашенном бромистым этидием.
Иммуногистохимическое исследование с антителами к
TsPO.
Данный метод использовался для определения уровня экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора. Исследование проводилось согласно стандартным протоколам. Первоначально срезы депарафинизировали, (с помощью инкубации в ксилоле и дегидратации в сменах спиртов),после проводилась демаскировка антигена с помощью системы Retrievagen (Novocastra) в течение 20 минут.. Затем гистологические срезы в течение 1 часа при температуре 25°С инкубировали с первичными моноклональными антителами к TsPO в разведении 1:300. В дальнейшем предметные стекла с образцами ткани трижды промывались в фосфатно-солевом растворе, после чего проводилась повторная инкубация с вторичными
моноклональными антителами в течение 10 минут. Для визуализации комплекса антиген-антитело использовались система детекции Ready-to-Use (Novocastra) и диаминобензидин (Novocastra) в качестве хромогена. В последующем срезы докрашивались гематоксилином. Подсчет положительно окрашенных клеток производился при увеличении х400. Оценивалось количество положительно окрашенных клеток на 100 опухолевых клеток, при исследованиях эпидермиса — на 100 клеток эпидермиса.
Иммуногистохимическое исследование с антителами к цитохрому P450scc и PCNA.
Исследование также проводилось согласно стандартным протоколам. Первоначально срезы депарафинизировали. Затем гистологические срезы в течение 1 часа при температуре 25°С инкубировали с первичными моноклональными антителами к цитохрому P450scc в разведении 1:1000, к PCNA(Novocastra, разведение 1:400). Оценка результатов иммуногистохимического анализа производилась с помощью микроскопа Olympus ВХ-41 с видеонасадкой Infinity 1 (Lumenera, Canada) Статистическая оценка результатов производилась с помощью Т-критерия Манна-Уитни. Оценивалось количество положительно окрашенных клеток на 100 опухолевых клеток, при исследованиях эпидермиса — на 100 клеток эпидермиса.
Методы статистической обработки данных.
Для статистической обработки данных использовались стандартные методы описательной и вариационной статистики.
Достоверность различий рассчитывалась с помощью метода Стьюдента для параметрических величин. В качестве достоверного критерия различий рассматривался р < 0,001. Статистическая обработка результатов проводилась на PC Intel Core Duo T5750, в среде Windows 7, с использованием программ MS Office 2007. Результаты исследования и их обсуждение:
Обследование больных для верификации диагноза заключалось в поэтапном диагностическом поиске. На I этапе проводилась ориентировочная клиническая дифференциальная диагностика между парапсориазом и TKJIK.
Табл. 1
Основные клинические критерии для установления диагноза доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи
Крупнобляшечный парапсориаз Мелкобляшечный парапсориаз тклк
Локализация Преимущественно туловище, бедра, в местах подверженных трению По ходу ребер В любой части тела
Цвет высыпаний От красно-синюшного до буровато-коричневого Желтовато-розовый Застойно-синюшные и фиолетовые тона
Размер очагов От 10 до 20-30 см. От 2 до 6 см. Различных размеров вплоть до эритродермии.
Крупнобляшечный парапсориаз Мелкобляшечный парапсориаз тклк
Очертания Неправильной формы Округлые или овальные Кольцевидные полициклические, иногда с просветлением в центральной части
Границы Нечеткие Нечеткие Четкие
Инфильтрация Невыраженная Невыраженная Выраженная
Шелушение Слабое слабое Выраженное
Регионарные лимфоузлы не увеличены не увеличены Увеличены
Зуд Не выражен Не выражен Выражен
Динамика заболевания Возможно увеличение инфильтрации, шелушения, появления признаков атрофии Стойкая клиническая картина в течение длительного времени Образование опухолевых элементов, изъязвление очагов
Общее состояние. Нормальное. Нормальное. Озноб, возможно повышение температуры, слабость, утомляемость
Основываясь только на анамнестических данных и данных клинической картины заболевания (табл. 1) мы смогли предположить диагноз Т -клеточной лимфомы кожи (грибовидный микоз) только у 5 человек с 3 стадией, и у 1 пациента со 2 стадией грибовидного микоза. Диагноз мелкобляшечного парапсориаза был предположен у 11 пациентов, крупнобляшечного парапсориаза - у 10 человек.
На II этапе нашего диагностического поиска всем пациентам проводилось патоморфологическое исследование. У 26 больных была выявлена совокупность критериев, позволяющих установить гистологический диагноз Т- клеточной лимфомы кожи I, П и III стадий (5 пациентов с 3 стадией, 11 со второй и 10 человек с 1 стадией грибовидного микоза). 11 пациентам гистологически был выставлен диагноз мелкобляшечного парапсориаза и 13 больным диагноз крупнобляшечного парапсориаза. У 10 человек окончательный диагноз по результатам гистологического исследования установить не удалось, определялись следующие гистологические признаки: - выраженный акантоз, митозы в эпидермисе, паракератоз, вакуольная дистрофия в базальных клетках, - гиперкератоз, пролиферация посткапиллярных венул верхней дермы, - полиморфный инфильтрат, спонгиоз. Данные патоморфологические признаки были не достаточны для установления окончательного диагноза.
На III этапе нашей работы, в тех случаях, когда гистологических данных не было достаточно для установления окончательного диагноза, пациентам проводилось определение клональности лимфоцитов с помощью ПЦР по реарранжировке генов Т-клеточного рецептора лимфоцитов. Из 10 человек с неуточнённым гистологически диагнозом Т-клеточная моноклональность по у-цепи была обнаружена у 7 человек, у 3 пациентов был выявлен поликлоналный патологический процесс.
На IV этапе диагностического поиска всем пациентам определялся уровень экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора с помощью иммуногистохимического исследования с антителами к ТвРО. Всего было исследовано 60 биопсий пораженной кожи, 50 с гистологически установленным диагнозом (из них 11 пациентов с мелкобляшечным парапсориазом, 13 с крупнобляшечным, и
26 человек с диагнозом ТКЛК), и 10 биопсий с гистологически не установленным диагнозом, однако у 7 из них отмечалась Т-клеточная моноклональность по у-цепи. Результаты исследования пациентов с гистологически установленным диагнозом ТКЛК и парапсориаза свидетельствовали о наличии диффузной экспрессии ТэРО в эпидермисе пациентов обоих групп и отсутствии существенных различий между ними. Однако уровень экспрессии ТбРО в клетках лимфоцитарного инфильтрата при Т-клеточной лимфоме кожи, был значительно выше, чем при парапсориазе (схема 1, табл. 2).
Схема 1
Уровни экспрессии ТэРО в различных слоях кожи при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных
заболеваниях
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
-■54,14
п 74.05
Дермальный инфильтрат, число ТвРО+ клеток на 100 клеток инфильтрата, %
тщиг
Эпидермис, число ТвРО+ клеток на 100 клеток эпидермиса, %
□ Доброкачественные лимфопролиферативные заболевания кожи Я Грибовидный микоз
Полученные нами данные могут косвенно свидетельствовать о
более высоком уровне экспрессии ТбРО в малигнизированных
лимфоцитах и дают возможность рассматривать периферический
бензодиазепиновый рецептор, как маркер злокачественных
лимфопролиферативных заболеваний, что может использоваться при
диагностике ТКЛК (схема 2).
При определении уровня экспрессии ТэРО на следующем этапе
работы, у 6 из 10 пациентов с неподтвержденным диагнозом (у 3 из
15
которых отмечался моноклональный тип пролиферации Т-лимфоцитов), уровень экспрессии ТбРО клеток достоверно не отличался, по сравнению с показателями уровня ТзРО при установленных клинически и гистологически, мелкобляшечном и крупнобляшечном парапсориазе. Это с высокой степенью вероятности позволило нам предположить диагноз парапсориаза.
В дальнейшем при определении уровня экспрессии ТбРО, у оставшихся 4 больных с моноклональным типом пролиферации Т-лимфоцитов при реакции ПЦР, уровень ТзРО положительных клеток оказался достоверно выше, по сравнению с показателями уровня ТэРО при установленных клинически и гистологически, мелкобляшечном и крупнобляшечном парапсориазе. Выявленные изменения позволили предположить диагноз Т-клеточной лимфомы кожи.
Схема 2
Алгоритм диагностического поиска при установлении диагнозов доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных
заболеваний
На следующем V этапе нашей работы мы определяли интенсивность клеточной пролиферации при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях с помощью PCNA (proliferating cell nuclear antigen) - ядерного антигена пролиферирующих клеток. В нашем исследовании интенсивность пролиферации клеток кожи, регистрируемая по экспрессии PCNA, была достоверно выше в коже больных доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями, чем при лимфомах кожи. Причем у части пациентов со злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями PCNA в коже не определялся вообще (схема 3, табл. 2).
Уровни экспрессии PCNA в различных слоях кожи при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных
заболеваниях
Схема 3
30
25-
■ 24,
15
1
20-
□ 5,8
■
¡§и
□Дермапьный инфильтрат, число РСЫА+ клеток на 100 клеток инфильтрата, %
аЭпидермис, число РСЫА+ клеток на 100 клеток эпидермиса,
5
00, НО
О
Доброкачественные Грибовидный микоз лимфопролиферативные заболевания кожи
Таблица 2
Уровни экспрессии ТэРО и PCNA рецептора в различных слоях кожи при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных
заболеваниях
Доброкачественные лимфопролиферативные заболевания кожи Грибовидный микоз
ТвРО* клеток Дермальный инфильтрат 24,05 54,14*
на 100 клеток % Эпидермис, 71,09 89,06
РСЛЧА+ клеток на 100 клеток % Дермальный инфильтрат 5,83 0 9**
Эпидермис 24,1
достоверность различий по сравнению с соответствующими показателями при доброкачественных лимфоцитарных новообразованиях кожи,
* а=0,057, ** - <х=0,02, *** - а=0,01
Такое изменение экспрессии РСИА мы связываем с возможным быстрым прогрессированием доброкачественных
лимфопролиферативных дерматозов, по сравнению с грибовидным микозом развитие которого зачастую происходит медленно. На VI этапе работы мы определяли уровень экспрессии цитохрома Р450зсс у больных с установленным диагнозом доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваний. Цитохром Р450зсс является митохондриальным ферментом, катализирующим непосредственное превращение холестерина, транспортируемого через наружную митохондриальную мембрану с участием ТэРО, в прегненолон - предшественника всех стероидных гормонов в клетке. Таким образом, показатели уровней цитохрома Р450зсс могут служить косвенным указанием на выраженность роли ТбРО как модулятора стероидогенеза. В результате исследования не было обнаружено достоверных различий
18
между уровнями данного цитохрома при исследуемых заболеваниях. Его уровень при лимфомах кожи составил 58,4, при доброкачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи — 47,3 на 100 клеток дермального инфильтрата, экспрессия в клетках эпидермиса также достоверно не отличалась (схема 4).
Схема 4
Уровни экспрессии цитохрома Р450ясс в различных слоях кожи при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных
заболеваниях
90 80 70 60 50 40 30 20
77,3
69,9 □ Доброкачественные лимфопролифератив ные заболевания кожи ■ Грибовидный микоз
58,4
47,3
1_
2_
Дермальный инфильтрат, Эпидермис, число цитохром
число цитохром Р4505СС+ Р450зсс+ клеток на 100
клеток на 100 клеток клеток эпидермиса, % инфильтрата, %
Полученные данные об экспрессии ТбРО и цитохрома Р450зсс при лимфопролиферативных заболеваниях дали возможность предположить наличие локального синтеза стероидных гормонов в коже при данных патологических процессах, однако одинаковые уровни экспрессии цитохрома Р450зсс при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях, позволяют высказаться в пользу того, что процесс локального стероидогенеза в коже, по всей вероятности, не оказывает значимого влияния на развитие лимфопролиферативных процессов. Таким образом, вероятные
изменения функционирования ТбРО при лимфопролиферативных заболеваниях кожи касаются, скорее всего, его роли как белка-транспортера холестерина, что ассоциировано с изменением уровня пролиферации клеток (Схема 5).
Схема 5.
Предполагаемая модель функционирования ТзРО в коже при лимфопролиферативных заболеваниях
КЛЕТОЧНАЯ ПРОЛИФЕРАЦИЯ Выводы:
1. При использовании комплекса современных исследований, включающего общепринятые на сегодняшний день клинические, морфологические и молекулярно-биологическое методики, диагноз мелкобляшечного парапсориаза был верифицирован у 100% пациентов, крупнобляшечного парапсориаза - у 84,2% пациентов, Т-клеточной лимфомы кожи — у 86,7% пациентов.
2. Уровень экспрессии ТбРО в дермальном инфильтрате при ранних стадиях Т-клеточной лимфомы кожи достоверно отличается от такового при доброкачественных лимфопролиферативных новообразованиях кожи (54,14% и 24,05% на 100 клеток инфильтрата соответственно, р<0,05), что позволяет
предположить его роль в регуляции клеточной пролиферации и рассматривать его в качестве специфического маркера пролиферации при злокачественных лимфопролиферативных новообразованиях, в отличии от PCNA, позволяющего оценить только скорость пролиферации в зависимости от скорости роста как злокачественных, так и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний.
3. Оценка уровня экспрессии TsPO может рассматриваться как метод дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных новообразований.
4. Включение в комплекс общепринятых диагностических мероприятий (клинических, морфологических, молекулярно-биологических методов исследования) метода определения уровня экспрессии TsPO позволило верифицировать диагноз у каждого из 60 обследованных пациентов
Практические рекомендации
1. Определение уровня экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора может быть включено в комплекс диагностических мероприятий для выявления TKJIK на ранних сроках заболевания.
2. TsPO может рассматриваться как дифференциально-диагностический маркер между доброкачественными и злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями.
3. Пациентов с высокими уровнями экспрессии TsPO и неподтвержденным гистологическим диагнозом необходимо оставлять под наблюдением, с обязательным посещением врача дерматоонколога не реже чем 2 раза в год и контролем гистологической картины по показаниям.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ:
1. Беликов А.Н., Молочков A.B., Петренко Е.В., Заболеваемость грибовидным микозом в Калужской области (( тезисы к материалам научных трудов II форума медицины и красоты, 24-26 ноября 2009г. Москва-2009, стр.24-26.
2. Кильдюшевский A.B., Молочков В.А., Ольшанский А.Я., Фомин А.М., Гордиевская М.С., Карзанов О.В., Петренко Е.В. Адаптивная иммунотерапия Т- клеточной лимфомы кожи на основе экстракорпорального фотофереза ((Российский журнал кожных и венерических болезней, 2010.-№1 С.4-10
3. Рукша Т. Г., Савченко И. А., Молочков А. В., Олисова О.Ю., Петренко Е. В. Определение цитохрома P450scc и PCNA у пациентов с лимфопролиферативными заболеваниями кожи (( Современные проблемы дерматовенерологии, иммунологии и врачебной косметологии, 2010.-№1 С.11-14
4. Рукша Т.Г., Молочков В.А., Петренко Е.В, Молочков A.B. Совершенствование подходов к диагностике Т-клеточной лимфомы кожи (( Научно-практическая конференция дерматовенерологов ЦФО «Актуальные вопросы дерматовенерологии и дерматоонкологии». Сборник статей. Москва 27-28 мая 2010г - С.147-149
5. Рукша Т.Г., Барбецкая Я.В., Петренко Е.В., Молочков A.B. Экспрессия внутриклеточного белка TsPO при лимфопролиферативных заболеваниях кожи ((Российский журнал кожных и венерических болезней, 2010-№3-С.7-10.
Список сокращений
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота
3JTK — злокачественные лимфомы кожи
ПЦР — полимеразная цепная реакция
TKJIK — Т-клеточные лимфомы кожи
УФО — ультрафиолетовое облучение
PBR — периферический бензодиазепиновый рецептор
PCNA — ядерный антиген пролиферирующих клеток
TCR — Т-клеточный рецептор
TsPO — периферический бензодиазепиновый рецептор
Петренко Екатерина Валерьевна
Совершенствование ранней диагностики Т-клеточных лнмфом кожи на основе оценки экспрессии ТэРО (периферического бензодиазеппнового рецептора) как маркера интенсивности пролиферации
опухолевых клеток.
Автореф. дисс. на сонскание учёной степени кандидата мед. наук. Подписано в печать 10.06.2011. Заказ № 1056 Формат 60x90(16. Усл. печ. л. 0,879. Тираж 100 экз. Типография ОАО "Типография стандартов" г. Калуга ул. Московская 234
Оглавление диссертации Петренко, Екатерина Валерьевна :: 2011 :: Москва
Введение
Глава 1 Обзор литературы
• Этиология и классификация Т-клеточных лимфом кожи.
• Т-клеточные лимфомы кожи
• Проблема дифференциальной диагностики ЛК с парапсориазом и псевдолимфомами кожи.
• Современные представления об этиопатогенезе лимфом кожи
• Диагностика лимфопролиферативных заболеваний
• Периферический бензодиазепиновый рецептор
• Ядерный антиген пролиферирующих клеток
• Цитохром Р450зсс
Глава 2. Материал и методы исследования
Глава 3. Дифференциальная диагностика ТКЛК и парапсориаза
Глава 4. Результаты собственных исследований
• Определение уровня ТвРО, при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи
• Определение уровня РСМА при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи
• Определение уровня цитохрома Р450зсс при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи
Глава 5. Определение уровня экспрессии ТбРО у пациентов с неуточненным диагнозом
Введение диссертации по теме "Кожные и венерические болезни", Петренко, Екатерина Валерьевна, автореферат
Проблема злокачественных новообразований является одной из важнейших и приоритетных проблем современной медицины как в связи с их высокой распространенностью, так и чрезвычайной сложностью диагностики и лечения /3/. В последние годы в мире ежегодно регистрируется до 10 млн новых случаев злокачественных новообразований; по прогнозам специалистов, в 2020г уровень заболеваемость повысится до 16 млн новых случаев в год /4/. В. России на учете состоят более 2,3 млн больных онкологическими заболеваниями. При этом злокачественные опухоли кожи в общей структуре злокачественных новообразований занимают третье ранговое место /9,25/. Что касается лимфом кожи, то интенсивный показатель заболеваемости ими в мире оценивается в 0,3 на 10 тыс населения /129/, при этом в последние годы нарастает частота среди заболевших лиц более молодого возраста /93,128,132/. В России также среди больных лимфомой кожи (ЛК) растет доля лиц зрелого и молодого возраста /6,11,12,23,24/.
Первое по распространенности место среди ЛК занимают Т-клеточные лимфомы кожи (ТКЛК), на их долю приходится от 60 до 65% всех первичных лимфом кожи /21, 45/, а грибовидный микоз (ГМ), доля которого среди ТКЛК составляет 85-90% ТКЛК, является ее самой распространенной формой /13/.
Цель исследования:
Изучить интенсивность экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора (ТвРО), РСЫА и цитохрома Р450зсс в коже при Т-клеточной лимфоме кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи (парапсориазе) с целью установления роли ТбРО в этиопатогенезе ТКЛК, а также для использования этого показателя в дифференциальной диагностике между ними.
Задачи исследования.
1. Оценить эффективность применяющегося в настоящее время комплекса диагностических мероприятий (клинических, морфологических и молекулярно-биологических) для дифференциальной диагностики Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи.
2. Определить интенсивность экспрессии ТэРО, РСЫА и цитохрома Р450бсс в коже у больных Т-клеточной лимфомой кожи и доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями кожи (парапсориазом).
3. Оценить возможность использования экспрессии ТвРО РСЫА и цитохрома Р450эсс в дифференциальной диагностике Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи (парапсориаз) и разработать на основе полученных данных метод дифференциальной диагностики Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи.
4. Оценить клиническую эффективность включения метода определения интенсивности экспрессии ТзРО в комплекс диагностических мероприятий при дифференциальной диагностике Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи.
Научная новизна
1. В работе впервые дополнительно к клиническим, морфологическим, молекулярно-биологическим методам исследования было проведено определение уровня экспрессии ТбРО, РСКА и цитохрома Р450бсс при доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных заболеваниях кожи.
2. Впервые оценена взаимосвязь между уровнем экспрессии ТбРО и интенсивностью клеточной пролиферации в очаге поражения у больных ТКЛК и доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями кожи.
3. Впервые определялась роль ТэРО ,РСЫА и цитохрома Р450зсс в развитии лимфопролиферативных заболеваний.
4. Впервые разработан метод дифференциальной диагностики ТКЛК и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний кожи, основанный на уровне экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора.
Научно-практическая значимость работы
В работе получены данные, позволяющие оценить участие ТбРО, РСЫА и цитохрома Р450бсс в функционировании нормальной кожи, а также в развитии лимфопролиферативных заболеваний кожи. Доказано наличие корреляционной связи между уровнем экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора и интенсивностью клеточной пролиферации, что позволит использовать периферический бензодиазепиновый рецептор в качестве маркера выраженности пролиферативных процессов в опухолевых клетках Т-клеточной злокачественной лимфомы кожи, что может применяться как для дифференциальной диагностики с ' доброкачественными лимфопролиферативными заболеваниями кожи, так и для оценки биологического поведения опухоли и возможности появления рецидивов.
Положения выносимые на защиту
1. Использование комплекса современных исследований, включающее общепринятые на сегодняшний день клинические, морфологические и молекулярно-биологические методы не позволяет установить диагноз мелкобляшечного парапсориаза, крупнобляшечного парапсориаза и Т-клеточной лимфомы кожи у 100% пациентов.
2. Уровень экспрессии ТэРО в различных слоях кожи при ранних стадиях Т-клеточной лимфомы кожи достоверно отличается от такового при доброкачественных лимфопролиферативных новообразованиях кожи, что позволяет предположить роль ТбРО в регуляции клеточной пролиферации и рассматривать его в качестве специфического маркера пролиферации при злокачественных лимфопролиферативных новообразованиях, в отличие от РСКА, позволяющего оценить только скорость пролиферации в зависимости от скорости роста как злокачественных, так и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний.
3. Оценка уровня экспрессии ТбРО может рассматриваться как метод дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных новообразований.
4. Включение в комплекс общепринятых диагностических мероприятий (клинических, морфологических, молекулярно-биологических методов исследования) метода определения уровня экспрессии ТэРО повышает точность диагностики Т-клеточной лимфомы кожи и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний.
Внедрение результатов исследования в практику
Результаты исследования внедрены в отделении дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ им. М.Ф.Владимироского и в областном кожно-венерологический диспансере г. Калуги. Результаты используются в учебном процессе на кафедре дерматовенерологии и дерматоонкологии ФУВ ГУ МОНИКИ им. М.Ф.Владимироского.
Апробация работы
Основные материалы диссертации доложены на Заседании Московского областного общества дерматовенерологов в МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, сентябрь 2010г.
Апробация диссертационной работы состоялась на совместной научно-практической конференции кафедры и отделения дерматовенерологии и дерматоонкологии МОНИКИ им. М.Ф.Владимироского (01 марта 2011г.).
Публикации: По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе 3 в журналах рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертационных исследований.
Заключение диссертационного исследования на тему "Совершенствование ранней диагностики Т-клеточных лимфом кожи на основе оценки экспрессии TsPO (периферического бензодиазепинового рецептора) как маркера интенсивности пролиферации опухолевых клеток."
Выводы:
1. При использовании комплекса современных исследований, включающего общепринятые на сегодняшний день клинические, морфологические и молекулярно-биологическое методики, диагноз мелкобляшечного парапсориаза был верифицирован у 100% пациентов, крупнобляшечного парапсориаза - у 84,2% пациентов, Т-клеточной лимфомы кожи - у 86,7% пациентов.
2. Уровень экспрессии ТбРО в дермальном инфильтрате при-ранних стадиях Т-клеточной лимфомы кожи достоверно отличается от такового при доброкачественных лимфопролиферативных новообразованиях кожи (54,14% и 24,05% на 100- клеток инфильтрата соответственно, р<0,05), что позволяет предположить его роль в регуляции клеточной пролиферации и рассматривать его в качестве специфического маркера пролиферации при злокачественных лимфопролиферативных новообразованиях, в отличии от РСЫА, позволяющего оценить только скорость пролиферации в зависимости от скорости роста как злокачественных, так и доброкачественных лимфопролиферативных заболеваний.
3. Оценка уровня экспрессии ТвРО может рассматриваться как метод дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных лимфопролиферативных новообразований.
4. Включение в комплекс общепринятых диагностических мероприятий (клинических, морфологических, молекулярно-биологических методов исследования) метода определения уровня экспрессии ТбРО позволило верифицировать диагноз у каждого из 60 обследованных пациентов
Практические рекомендации
1. Определение уровня экспрессии Т8РО может быть включено в комплекс диагностических мероприятий для выявления ТКЛК на ранних сроках заболевания.
2. ТбРО может рассматриваться как дифференциально-диагностический маркер между доброкачественными и злокачественными лимфопролиферативными заболеваниями.
3. Пациентов с высокими уровнями экспрессии ТэРО и неподтвержденным гистологическим диагнозом необходимо оставлять под наблюдением, с обязательным посещением врача дерматоонколога не реже чем 2 раза в год и контролем гистологической картины по показаниям.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Петренко, Екатерина Валерьевна
1. Белоусова И.Э., Самцов A.B. Особенности диагностики и лечения первичных лимфом кожи. // Медицина. Качество жизни. Болезни кожи №6, 2006г.
2. Владимиров В.В., Копьева Т.Н., Захарова О.Ю. Современное представление о бляшечном парапсориазе //Гемобластозы кожи (сборник)-М.,-1987.-С.67-72.
3. Галил-Оглы Г.А., Молочков В.А., Сергеев Ю.В. Дерматоонкология. // М., Медицина для всех. 2005г. С.481-620, 628-634.
4. Заридзе Д.Г. Эпидемиология, механизмы канцерогенеза и профилактика рака / Д.Г. Заридзе // Архив патол. 2002. - №2. - С.53-61.
5. Казаков Д.В., Кемпф В.,Самцов A.B., Бург Г., Злокачественные опухоли лимфоидной ткани с поражением кожи: современные принципы диагностики и краткая характеристика основных нозологических форм. Вестник дерматологии и венерологии 2002;2:16-21.
6. Королькова Т. Н. Иммунологическое исследование инфильтрата при опухолевой прогрессии у больных лимфомами кожи низкой степени злокачественности // Журн. дерматовенерологии и косметологии. 1997. №1. С. 19-24.
7. Лезвинская Е.М. Цитологическая диагностика злокачественных лимфом кожи, протекающих по типу эритродермий // автореф. дисс на соискание уч. ст. д.м.н.- М. 1997
8. Лезвинская Е.М, Вавилов A.M. Лимфопролеферативные опухоли кожи. Москва 2010 С 87-88
9. Молочков, В. А. Проблемы и перспективы развития дерматоонкологии /В.А. Молочков, A.M. Вавилов, A.B. Молочков // Рос. журн. кож. и вен.6ол.-2004.-№3.-С. 4-8.
10. Молочков, В.А. Иммуногистохимические особенности базально-клеточного и метатипического рака кожи / В.А. Молочков, Е.С. Снарская, Г.А. Франк и др. // Рос. журн. кожн. и вен. бол. — 2005. №2. - С.4-9.
11. Новикова JI. А., Бахметьева Т. М. Особенности структуры и лечения больных злокачественными лимфомами кожи // Дерматовенерология Сибири. Наука и практика: Тез. докл. науч.-практ. конф., 26-27 ноября 1998 г. Новокузнецк, 1998. С. 25.
12. Персина И. С. Клиническая морфология злокачественных лимфом кожи// Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1989: 30 с. 4.
13. Подцубная И.В. Неходжкинские лимфомы.// Клиническая онкогематология. Под.ред. М.А. Волковой. М: Медицина; 2001.С.336.
14. Потекаев Н. С., Самсонов В. А., Трофимова И. Б. Т-клеточные злокачественные лимфомы кожи: иммунобиология и патогенетическая терапия // VII Рос. съезд дерматологов и венерологов: Тез. докл. Казань, 1996. Ч. 2. С. 23-24.
15. Разнатовский И.М.Парапсориазы.-JI. Медицина 1977.-156с.
16. Разнотовский И.М. Мошкалова H.A., Муцинозная алопеция и лимфома кожи // Вестн. дерматол.-1987ю-№7.—С.35-40.
17. Рукша Т. Г., В. И. Прохоренков, А. Б. Салмина, Л. В. Труфанова, Е. И. Таксанова Л. Л. Петрова Апоптоз кератиноцитов и экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов при псориазе//Издательство «Медиа Сфера», 2005.
18. Рукша ТГ Клинико-морфофункинональное исследование интенсивности апоптоза и экспрессии периферического бензодиазепинового рецептора при злокачественных новообразованиях кожи// Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук 2007г.
19. Рукша Т.Г. Роль периферического бензодиазепинового рецептора в развитии злокачественных новообразований кожи// Сибирский онкологический журнал 2007 Приложение №2 стр. 95.
20. Рукша Т. Г. 2008. Изменение структуры периферического бензодиазепинового рецептора в клетках меланомы кожи после воздействия ультрафиолетовым излучением. Рос. онкол. журн. №6, С.22-24.
21. Самцов А.В. Белоусова И.Э. Клинические, гистологические и иммуногистохимические особенности лимфом кожи на современном этапе // Вестн. дерматол.-2006.-№ 1 -С.3-6 Burg G., 2000.
22. Тавелли Б., Шоу Дж. Опухоли кожи /Общая врачебная практика по Дж. Нобелю/Под ред. Дж.Нобеля/Пер. с англ.-М., Практика- С.749-755.
23. Трофимова И. Б. Т-клеточные злокачественные лимфомы кожи. Иммуно-фенотипические особенности и терапия: Автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1994.
24. Трофимова И. Б. Современные представления о диагностике, классификации и лечении лимфом кожи // Рус. мед. журн. 1997. Т. 5, №11. С. 704-708.
25. Хатырев, СА. Современные методы лечения плоскоклеточного рака кожи / СА. Хатырев, А.А. Погосян, Т.К. Харатишвили и др. // Вестн. дерматол. венерол. 2004. - №4. - С13-15.
26. Элинг Д.Л. Лейкемические и лимфоматозные инфильтраты кожи. В кн.: Секреты дерматологии. Под ред. Д.Е Фитцпатрика, Д.Л. Элинга. М- СПб: Бином- Невский диалект; 1999.C.357-67.
27. Ackerman А.В. If small plaque (digital) parapsoriasis is cutaneous Tcell lymphoma, even an «Abortive » jne, it must be mycosis fungoides //Arch. Dermatol.-1996,-Vol. 132.-P.562-566.
28. Amanatullah D. F., Zafonte В. Т., Pestell R. G. The'cell cycle in steroid hormone regulated proliferation and differentiation // Minerva Endocrinol. — 2002. — V. 27(1).—P. 7-20.
29. Andres P., Lepagney M.L., Bureau B. et al. Primary cutaneous lymphomas: a study of 37 cases. Int J Dermatol 1997;36:582-586.
30. Armstrong, B. K. (1997) Melanoma: childhood or lifelong sun exposure. In Epidemiology, Causes and Prevention of Skin Diseases. Blackwell Science Ltd. p.72-77.
31. Asadullah K, et al. Progression of mycosis fungoides is associated with increasing cutaneous expression of interleukin-10 mRNA. J. Invest. Dermatol. 1996;107:833-837.
32. Bernier C. CD 13 and TCR-clone: markers of early Mycosis fungoides // Acta Dermatovenerol.- 2007.-Vol.87-P.155-159.
33. Berti E.,Tomasini D., Vermeer M.N. Primary cutaneus CD8+positive epidermotropic cytotoxic T- cell lymphomas distinct clinicopathologic entity with an aggressive clinical behavior//Am. J. Pathol.-1999,- Vol. 155.-P.483-492.
34. Bono, F. Peripheral benzodiazepine receptor agonists exhibit potent antiapoptotic activities / F. Bono, I. Lamarche, V. Prabonnaud et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - V. 265,№2. - P. 457-461.
35. Bonvalet D., Dolan-Gohm K., Belaish S.- et al. Les différentes formes du parapsoriasis. Ann Dermatol Venereol 1977;104:18-25.
36. Bose, H.S. Rapid regulation of steroidogenesis by mitochondrial protein import/ H.S. Bose, V.R. Lingappa, W.L. Miller//Nature. 2002. - V.417. -R 87-91.
37. Bribes, E. Involvement of the peripheral benzodiazepine receptor in the development of cutaneous pathology in Mrl/Lpr mice / E. Bribes, S. Galiegue, B. Bourrie et al. // Immunol. Lett. 2003 - V. 85. - P. 13-18.
38. Britce S.L.,Jester J.D.,Freadnach M., Golitz L.E. Examination of cutaneus T-cell lymphoma for Human herpesvirus by using the polymerase cgain reaction//J.Cutan. Pathol.-1993.-Vol. 20.-P3047-309.
39. Burg G., Zwingers T., Staegemeir E. et al. Interrater and intrarater variabilities in the evaluation of cutaneous lymphoproliferative T-cell infiltrates: EORTC-Cutaneous Lym-phoma Project Group. // Derm. Clin. 1994. Vol. 12. P. 311— 314.
40. Burg G., Haffner A., Boni R. et al. New perspectives in experimental andclinical research for cutaneous lymphomas // Resent Results Cancer Res. 1995. Vol. 139. P. 225-237.
41. Burg G., Dummer R., Nestle F. et al. Cutaneous lymphomas consist of a spectrum of nosologically different entities including mycosis fungoides and small plaque parapsoriasis. Arch Dermatol 1996;132:567-57216.
42. Burg G., Atlas of cancer of the skin. // New York, Edinburg, London, Madrid, Melbourn, San Francisco, Tokio. -2000.
43. Burg G., Kempf W., Cozzio A. et al. WHO//EORTS classification of cutaneous lymphomas: histological and molecular aspects // J. Cutan. Pathol. 2005. -vol. 32-P. 647-674.
44. Burg G., Jaffe E.S., Willemze R. et al. Cutaneous diffuse large B-cell lymphoma / In: Pathology And Genetics of skin tumours/Ed. P.E.LeBoit et al. (Whorld Health Organization classification of tumours: 10)- IARC Press-Lyon-2006-P.198-199.
45. Camisa C., Aulisio A. Pustular mycosis fungoides //Cutis-1994.-Vol.54,-P.202-204.
46. Carmell., Fares F.A., Leschiner S., Scheruebl H., Weisinger G., Gavish M. // Biochem. Pharmacol. 1999. V. 58. N 2. P. 273.
47. Cerroni L., Zochlin N., Putz V., Kerl H. Infection by Borrelies Bergdorferi and cutaneous B-cell lymphoma // J. Cutan. Pathol.-1997.-Vol .24,-P.457-461.
48. Chan J.K., Sin V.C., Wong K.F. et al.Nononosal lymphoma expressing the natural killer cell marker CD56: a ckinicopathologic study of 49 cases of an ancommon aggressive neoplasm//Blood -1997.-Vol.89.-P.4501-4513.
49. Chelli, B. Peripheral-type benzodiazepine receptor ligands: mitochondrial permeability transition induction in rat cardiac tissue / B.Chellu A. Falleni, F. Salvetti et al. // Biochem. Pharmacol. 2001. - V.6L№6, - P. 695-705.
50. Citarella L., Massonc C, Kerl H., Cerroni L.// Am.J.Dermatopathol.-2003.-Vol.25.-P.463-465.
51. Clarki, G.D. Tranquillizers can block mitogenesis in 3T3 cells and induce differentiation in Friend cells / G.D. Clarke, P.J. Ryan // Nature. 1980.-V. 287.-P. 160-161.
52. Colozzal, M. Proliferative markers as prognostic and predictive tools in early breast cancer: where are we now? / M. Colozzal, E. Azambuja, F Cordoso et al. //Ann. Oncol.-2005- V. 16.-P. 1723-1739.
53. Cosentino, M. Diazepam-binding inhibitor-derived peptides induce intracellular calcium changes and modulate human neutrophil function / M. Cosentino, F. Marino, S. Cattaneo et al. // J. Leukoc. Biol. 2000. - V. 67,№5. - P. 637-643.
54. De Smedt T, et al. Effect of interleukin-10 on dendritic cell maturation and function. Eur. J. Immunol. 1997;27:1229-1235.
55. Decaudin, D. Peripheral benzodiazepine receptor ligands reverse apoptosis resistance of cancer cells in vitro and in vivo / D. Decaudin, M. Castedo, F. Nemati et al. // Cancer Res. 2002. - V. 62. - P. 1388-1393.
56. Delavoie, F. In vivo and in vitro peripheral-type benzodiazepine receptor polymerization: functional significance in drug ligand and cholesterol binding / F. Delavoie, H. Li, M. Hardwick, et al. // Biochemistry.- 2003. V. 42. -P. 4506-4519.
57. Dereure O, et al. Infrequent Fas mutations but no Bax or p53 mutations in early mycosis fungoides: a possible mechanism for the accumulation of malignant T lymphocytes in the skin. J. Invest. Dermatol. 2002.
58. Diamandidou E., Colome-Grimmer M., Fayad L. et al.//Blood-1999.-Vol.92.-Pl 150-1159.
59. Dummer R, H^ffner AC, Hess M, Burg G (1995) A rational approach to the therapy of cutaneous T-cell lymphomas. Onkologie 19:226-230.
60. Faderl, S. Expression profile of 11 proteins and their prognostic significance in patients with chronic lymphocytic leukemia / S. Faderl, M.J. Keating, K.A. Do et al. // Leukemia. 2002. - V. 16. - PJI045-1052.
61. Ferenczi K, et al. Increased CCR4 expression in cutaneous T cell lymphoma. J. Invest. Dermatol. 2002;119:1405-1410.
62. Foss F.M., Kuzel T.M. • Experimental therapies in the treatment of cutaneous T-cell lymphoma //Hematol.Oncol.Clin. North. Am.-1995.-Vol.9.-P.l 1271137.
63. French LE, et al. Impaired CD40L signaling is a cause of defective IL-12 and TNF-{alpha} production in Sezary syndrome: circumvention by hexameric soluble CD40L. Blood. 2005;105:219-225.
64. Gamier, M. In vitro reconstitution of a functional peripheral-type benzodiazepine receptor from mouse Leydig tumor cells / M. Gamier, A.B. Dimchev, N. Boujrad // Mol. Pharmacol. 1994. - V. 45. - P. 201-201.
65. Gavish, M. Enigma of the peripheral benzodiazepine receptor / M. Gavish, I. Bachman, R. Shoukrun et al. // Pharmacol. Rev. 1999. - V.51 ,№4. - P. -629-650.
66. Greene M.H. et al. Mycosis fungoidesL Epidemiologyc observation // Cancer Treat. Rep.-1979.-Vol.63.-P.597.
67. Hall, P.F. Cellular organization for steroidogenesis / P.F. Hall // Int. Rev. Cytol. 1984. - V. 86. - P. 53-95.
68. Hardwick, M. Peripheral-type benzodiazepine recptor (PBR) in human breast cancer / M. Hardwick, D. Fertikh, M. Culty et al. // Cancer Res. -1999. -V.59,№4. P. 831-842.
69. Hauet, T. Peripheral-type benzodiazepine receptor-mediated action of steroidogenic acute regulatory protein on cholesterol entry into Leydig cell mitochondria. / T. Hauet, Z.-X. Yao, H.S. Bose et al. // Mol. Endocrinol. -2005.-V. 19. -P.540-554.
70. Hirsch, J.D. Mitochondrial benzodiazepine receptors mediate inhibition of mitochondrial respiratory control / J.D. Hirsch, C.F. Beyer, L. Malkowitz et al. // Mol. Pharmacol. 1989. - V. 35. - P. 157-163.
71. Jamasaki M.,Unna K., Yaguchi H.et al. A case of angiocentric T-cell lymphoma presenting as lethal midline granulema//Dermatology-1995.-Vol.l91.-P.336-338.
72. Jayakumar, A.R. Effects on free radical generation by ligands of the peripheral benzodiazepine receptor in cultured neural cells / A.R. Jayakumar, K.S. Panicar, M.D. Norenberg // J. Neurochem. 2002. - V. 83,№5.-P. 1226-1234.
73. Kato, T. C-erbB-2 and PCNA as prognostic indicators of long-term survival in breast cancer /N. Kato, S. Kameoka, T. Kimura et al. // Anticancer Res. -2002. -V. 22. P. 1097-1103.
74. Kawahira, K. Immunohistochemical staining of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in malignant and nonmalignant skin diseases / K. Kawahira // Arch. Dermatol. Res. 1999. - V. 291. - P. 413-418.
75. Kazakov D.V., Burg G., Dummer R., Kempf W. Cutaneous lymphomas and pseudolymphomas: newly described entities. Recent Results Cancer Res 2002;160:283-293.
76. Krueger, K.E. Mitochondrial benzodiazepine receptors and the regulation of steroid biosynthesis / K.E. Krueger, V. Papadopoulos // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1992. - V.32. - P. 211-237.
77. Lacapere, J.J. Structural and functional study of reconstituted peripheral benzodiazepine receptor / J.J. Lacapere, F. Delavoie F., H: Li et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - V.284. - P. 536-641.
78. Lacapere, J.J. Peripheral-type benzodiazepine receptor: structure and function of a cholesterol-binding protein in steroid and bile biosynthesis / J.J. Lacapere, V. Papadopoulos // Steroids. 2003. - V.68. - P.569-585.
79. Lambert C., Everett M.A. The nosology of parapsoriasis. J Am Acad Dermatol 1981;5:373-395.
80. Lin, D. Role of steroidogenic acute regulatory protein in adrenal and gonadal steroidogenesis / D. Lin, T. Sugawara, J.F. Strauss III J.F. et al. // Science.-1995.-V.267.-P. 1828-1831.
81. Maaser. K. Overexpression of the peripheral benzodiazepine receptor is a relevant prognostic factor in stage III colorectal cancer / K. Maaser, P. Maaser, K Grabowski, A.P. Sutter al. //Clin. Cancer Res. 2002. -V. 8. -P.3205 - 3209.
82. Maloney, M.E. Pigmented basal cell carcinoma: investigation of 70 cases / M.E. Maloney, D.B. Jones, F.M. Sexton // J. Am. Acad. Dermatol. 1992.-V. 27(1).-P. 74-78.
83. Mao X, et al. Molecular cytogenetic analysis of cutaneous T-cell lymphomas: identification of common genetic alterations in Sezary syndrome and mycosis fungoides. Br. J. Dermatol. 2002;147:464-475.
84. Milewich, L., Steroid metabolism by epidermal keratinocytes / L.Milewich, C.B. Shaw, R.D. Sontheimer// Ann. NY Acad. Sci. 1988. V.548.P.66-89.
85. Morgan, J. Expression of the peripheral benzodiazepine receptor is decreased in skin cancers in comparison with normal skin / J. Morgan, A.R. Oseroff, R.T. Cheney // Br. J. Dermatol. 2004. - V. 151. - P. 846-856.
86. Nagatani T. Clinical and immunochistochemical analysis of skin T-cell lymphoma in Japan // J. Clin. Oncol. 1991. Vol. 21(6). P. 457-461.
87. O'Beime, G.B. Two subcellular locations for peripheral-type benzodiazepine acceptors in rat liver / G.B. O'Beime, M.J. Woods, D.C.Williams U Eur. J. Biochem. 1990. -V. 188.-P. 131-138.
88. Ohno Y., Yanagibashi K., Yonezawa Y., Ishiwatari S., MatsubaM. // Endocrinol. Jap. 1983. V. 30. N 3. P. 335.
89. Оке, B.O. Cell surface localization of the peripheral-type benzodiazepine receptor (PBR) in adrenal cortex / B.O. Оке, C.A. Suarez-Quian, J. Riond et al. // Mol. Cell Endocrinol. -1992. V. 87. - P. R1-R6.
90. Pabon JE, Bird JS, Li X, Huang ZH, Lei ZM, Sanfilippo JS, Yussman MA, Rao CV 1996 Human skin contains luteninizing hormone/chorionic gonadotropin receptors. J Clin Endocrinol Metab 81:2738-2741.
91. Papadopoulos V. Peripheral-type benzodiazepine/diazepam binding inhibitor receptor: biological role in steroidogenic cell function// Endocr. Rev. -1993.-V.14,- P.222-240.
92. Papadopoulos V., Amri H., Li H., Boujrad N., Vidic В., Gamier M. // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. N 51. P. 32129.
93. Papadopoulos, V. Structure and function of the peripheral benzodiazepine receptor in steroidogenic cells / V. Papadopoulos // Proc.Soc.Exp.Biol.Med. 1998. -V.217. - P. 130-142.
94. Pawlikowski, M. Effect of benzodiazepines on the proliferation of mouse spleen lymphocytes in vitro / M. Pawlikowski, K. Lyson, J. Kunert-Radek et al. // J.
95. Neural. Transm. 1988. - V. 73. - P. 161-166.
96. Pich, A. Prognostic relevance of cell proliferation in head and neck tumors / A. Pich, L. Chiusa, R. Navone // Ann. One. 2004. - V.15(9). - P. 13191329.
97. Pimphinelli N., Vallecchi C. Local orthovolt radiotherapy in primary cutaneous B-cell lymphoma //Skin Cancer-1999.-Vol.l4.-P.219-224.
98. Pimpinelli N, Olsen EA, Santucci M, et al. Defining early mucosis fungoides. // J Am Acad Dermatol 2005 - vol.53 - p. 1053-1063.
99. Privalle C. T., McNamara B.C., Dhariwal M.S., Jefcoate C.R. // Mol. Cell. Endocrinol. 1987. V. 53. P. 87.
100. Ross C., Tinsgaard P. Interferon treatment of cutaneous T-cell lymphoma //Eur J.Harmotol-1993 .-Vol.51 .-P.63-72.
101. Royds, J.A. Proliferating cell nuclear antigen immunostaining in keratoacanthoma and squamous cell carcinoma of the skin / J.A. Royds, T.J. Stephenson, P.B. Silcocks et al. //Pathologica. 1994. - V. 86. -P. 612-616.
102. Samman P. The natural history of parapsoriasis en plaques (chronic superficial dermatitis) and prereticulotic poikiloderma. Br J Dermatol 1972;87:405-411.
103. Schiller P.I., Flaig MJ., Puchta U. et al.//Arch.Dermatol. Res.-2000.-Vol.292.-P.568-569.
104. Schroder J.-M. Cytocin networks in the skin //J Invest. Dermatol.-1995.-Vol.105.-P.20-24.
105. Shimmeri J., Nenman W., Tanaka V. Lymphocyt interactions with endothelial cells //Immunology -1992.-Vol.l3.-P.106-112.
106. Simon M., Flaig M.J., King P., et al. Lage plaque parapsoriasis: clinical and genotypic correlation//J.Cutan. pathol.-2000.-Vol.27.-P.57-60.
107. Simpson, E.R. Regulation by ACTH of steroid hormone biosynthesis in the adrenal cortex / E.R. Simpson, M.R. Waterman // Can. J. Biochem. Cell Biol. -1983. -V. 61. P. 692-707.
108. Simoyama M. Diagnostic criteria and classification of clinical subtypes of adult T-cell leukemia- lymphoma: a report from the Lymphoma Stady Group(1984-1987)//Br.J. Haemoto.-1991 .-Vol.79.-P.428-437.
109. Slominski A, Ermak G, Mihm M 1996 ACTH receptor, CYP11A1, CYP17 and CYP21A2 genes are expressed in skin. J Clin Endocrinol Metab 81:2746-2749.
110. Slominski, A. Neuroendocrinology of the skin / A. Slominski, J. Wortsman // Endocr. Rev. 2000. - V. 21. - P. 457-487.
111. Snyder, S.H. The peripheral-type benzodiazepine receptor: A protein of mitochondrial outer membranes utilizing porphyrins as endogenous ligands / S.H. Snyder //FASEB J. 1987. - V. 1. - P. 282-288.
112. Sterry W. Thoughts about parapsoriasis. Dermatopathology 2000;6:1-3.15.• 116. Stocco, D.M. Regulation of the acute production of steroids in steroidogenic cells / D.M. Stocco // Endocr. Rev. 1996. - V. 17. - P. 221-224.
113. Stoebner, P.E. The expression of peripheral benzodiazepine receptors in human skin: the ralationship with epidermal cell differentiation / P.E. Stoebner, P. Carayon, G. Penarier et al. // Br. J. Dermatol. 1999.- - V. 140. -P. 1010-1016.
114. Stoebner, P.E. Transient protection by peripheral benzodiazepine receptors during the early events of ultraviolet light-induced apoptosis / P.E. Stoebner, P. Carayon, P. Casellas et al. // Cell Death Differ. 2001. - V. 8. ~P. 747753.
115. Toro JR, Beauty M, Sorbara L, Turner ML. Gamma-delta T-cell lymphoma of the skin: a clinical, microscopic and molecular study. Arch Dermatol 2000; 136: 1024-32.
116. Toro J.R., Liewehr D.J., Pabby N. Et al., Gamma-delta T-cellphenotype is associated with significantly decreased survival in cutaneous T-cell lymphoma//Blood 2003 .-Vol. 101 .-P.3407-3412.
117. Tsuji, T. Expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and apoptosis related antigen (LeY) in epithelial skin tumors. / T. Tsuji, & Kitajima, Y. Koashi //Am. J. Dermatopathol. 1998. - V, 20. - P. 164-169.
118. Yen A., McMichael, Kilkenny M.j Rotstein H. Mycosis fungoides: An Australian experience // Austral. J. of Dermatology. 1997. Vol. 38 (suppl.) S. 86-90.
119. Veenman L., Papadopoulos V., Gavish M. Channel-like functions of the 18-kDa translocator protein (TSPO): regulation of apoptosis and steroidogenesis as part of the host-defense response Curr Pharm Des, Jan 2007; 13(23): 2385-405.
120. Vowels BR, et al. Aberrant cytokine production by Sezary syndrome patients: cytokine secretion pattern resembles murine Th2 cells. J. Invest. Dermatol. 1992;99:90-94.
121. Walsh N. M., Prokopetz R. et al. Histopathology in erythroderma: review of a series of cases by multiple observers // J. Cutan-Pathol. 1994, Oct. Vol. 21(5). P. 419-423.
122. Weinstock M. A. Epigemiology of Mycosis fungoides // Semin. Dermatol. 1994. Vol. 13. P. 154-159.
123. Weinstock MA, Gardstein B. Twenty year trends in the reported incidence and mortality of mycosis fungoides. Am J. Public Health 1999;89:1240 -1244.130: WHO. Pathology and genetics of skin tumours, IARCPress, Lyon, 2006,355p.
124. Willemze R., de Graaff-Reitsma CB., Cnossen J. et al. Characterization of T-cell subpopulations in skin and peripheral blood of patients with cutaneous Tcell lymphomas and benaign inflammatory dermatosis //J.Invest.Dermatol.-1983.-V0I.8O.-P.6O-66.
125. Willemze R., Beljaards R.C. Spectrum of primary cutaneous CD30+ lymphoprolopherative disoders. A proposal for classification and guidelines for management and treatment //J.Am.Acad. Dermatol.-1993.-Vol.28.-P.973-980.
126. Willemze R.,Mejer C. Classification of cutaneous lymphoma: Crosstalk between pathologist and clinician//Current Diagnost. Pathology-1998.-Vol.5- P 23
127. Willemze R. Cutaneous T-cell lymphoma: epidemiology, etiology, and classification. Leuk Lymphoma 2003;44:Suppl 3:S49-S54.
128. Willemze R„ Jaffe E.S., Burg G. et al. WHO-EORTC classification for cutaneous lymphomas. Blood 2005;105:3768-3785.
129. Wysocka M, et al. Enhancement of the host immune responses in cutaneous T-cell lymphoma by CpG oligodeoxynucleotides and IL-15. Blood. 2004; 104:4142—4149.
130. Zackheim H.S., Amin S., Kashani-Sabet M., McMillan. Prognosis in cutaneous T-cell lymphoma by slin stage: long term servival in 489 hftients //J.Am.Acad. Dermatol.-1999.-Vol.40.-P.418-425.33.