Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Иммунологический фенотип и пролиферативная активность неопластических лимфоцитов при В-клеточном хроническом лимфолейкозе

Ыинистерство здравоохранения СССР

Ордена Трудового Красного Знамени научно-иссчедоватедьсхий институт онкологии имени профессора Н.Ы. Петрова

На правах рукописи УДК 616-006.446-036-097:616.155.32

КАРЯГИН Игорь Евгеньевич

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ ФЕНОТИП И ПРОЛИ-ФЕРАТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕОПЛАСТИЧЕСКИХ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ В-КЛЕТОЧНОМ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФ0ЛЕЙК03Е

14.00.14. - онкология

14.00.29. - гематология и переливание крова

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Санкт-Петербург - 1992

Работа выполнена на отделении миелотрансплантации и гематологии научно-исследовательского института онкологии имени профессора H.H. Петрова Минздрава СССР и на кафедре внутренних болезней № I хШИ имени академика И.П. Павлова.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Б.В. АФАНАСЬЕВ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор К.ii. АДЦУЛКАДЬ1Р0В (специальность 14.00.29).

доктор медицинских наук В.К. ГУРКАШ (специальность 14.00Л4.).

Ведущее учреждение: Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова.

Защита диссертации состоится " " -__ 1У92 года

в час на заседании специализированного совета K.074.3Ö.01

Научно-исследовательского института онкологии им. профессора Н.Н, Петрова Минздрава СССР (18У&46, Санкт Петербург»Песочный-2, ул. Ленинградская, 68),

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан *.•".• 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета

доктор медицинских наук Е.В. ДЕШН

СЕДАЯ XAPAOTERICTHKA РАБОТ* t •

Актуальность пдоблшн. Известно, что онкологические заболевания зашагает одно из первых мест в качестве причин смерти. По данным ЬОЗ, ао многих странах мира наблюдаете* рост заболеваемости раком я, в частности, лейкозами, что заставляет иск&ть ковне пути в изучении проблем их возникновения, развития л патогенетической терапии.

Хронический лкы:$эяейкоэ и лимфеки заникаот значительное место среди опухолей кроветворной TKanu(fi-<;dcrici/?.Davey ,1у8ir).

Уточнение клеточной природа л га/фо гго о л иэер ат и з нзж заболеваний необходимо для понимания возможных механизмов их развития, оценки влита хя проводимой в настоящее время шгтостатическо}; терапии, а также для разработки более эффехтииаа методов лечения. Благодаря современна достикештаг плеторой иммунологии разработавч. концепция о функциональной гетерогенности химфэот*-тоа человека. К настоящему времени установлено, что пояя>.зл>т~ дее число случаев хроничесгого лимфолеяяоза и л^гуои связно с избирательной пролиферацией В-ли!«фоистов (Цвейбах A.C., 137Уг,). Однако, интенсивность прогрессирования патологического процесса к ответ на цятостатэтескуя терапкв у больных В-»:че-точхшм хроническим лямфолейкозом гесьма различны. Это обстоятельство и современные дагашэ о <&уша:исйальной гетерогенности нормальных В-льтлфоцитсв деют? актуальным более детальное изучение хейкозинх клеток при дайной патология современные ИАИуИОЛОГИЧеСКЛМИ метода«?!.

Б опубликованных до настоящего времени работах по изучена» лимфоцитов при В-ч«еточном 'хреническои лкмфолейкезе ггояуче-к» данные о субпопуляхшгх неопластаческ-.к клеток, несущих разлнч-

ные мембранные маркеры (E.H. Злобина и др., 1У87; C.B. Никуль-шин и др., 1УЭ1; ^апеззу et ai. , 1У81). Эти результаты достаточно разноречивы. Не получено пока однозначного ответа на вопрос о связи между экспрессией определенных иммунологических маркеров и прогрессированием патологического процесса или особенностями клинического течения (А.Ю. Барышников и др., 1У8Уг.).

С другой стороны имеются убедительные данные о корреляции между уровнем пролиферативной активности опухолевых клеток у больных В-ХЛЛ и прогрессированием заболевания (В.II. Котельников, 1.У89; ,!н»и,сл5ь : ,//<7s5om , 1У80). Поэтому изучение иммунологического фенотипа и пролиферативной активности лимфоцитов у больные В-кяеточным хроническим лимфолейкозом является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования.

Цеаыо настоящей работы явилась комплексная сценка иммунологических и пролиферативных свойств опухолевых клеток в периферической крови больных B-клеточным хроническим лимфолейкозом с учетом клинико-геыатологических особенностей заболевания. В соответствии с поставленной цеяью наш решались саедухздие задачи:

X. Характеристика иммунологического фенотипа лимфоцитов периферической крова больных В-клеточныи хронический лимфолейкозом.

2. Изучение спонтанной пролиферативной активности опухолевых клеток ¡h viiro при В-кдеточном хроническом лимфолейкозе.

3. Исследование изменения пролкферативной активности дефицитов у больна* В—и л £.. т очный хроническим лкмфолсйкозом при воздействии ростовых и митогеюшх факторов.

4. Анализ возко-сшх корреляций между имцунааогасесхкк фенотипом к пролл'Д^ратиотгми сзойствами опухолешх клеток В-клеточного хро^гчесхого яимфолейкоза.

Научная нов:;"':-.. Проведено комплексное исследование пролифератйяяол активности и иммунологического фенотипа лжлро-цитов крови у больно Б-клеточкым хроническим лимфг.,гйг:озом. При помощи панели отечественных мононлопаяъкгх антител выявлена знач;-:тельк.?.л гетерогезиоегь опухолевых клеток го акспресст?»: большинства опредзляемкх маркероз. Отмечены различия в азмен?-•лш уровня спонтанной пролкф?ратявной активности клеток Б~ХЛ£ в гфоцессз культивирования ¡п у>±го . Впергае- з отечезтзенкых исследопалиях выцелекы группы больных В-ХЛЛ, достсверлс разли-чевзпхея по »«току призкг-чу.

Показано разнообразие прояиферативного ответа лимфоцитов крови у больных В-кяеточнкы хроническим лг-мфолейкоэсм при куяьтивировекяи »> 4ib.ro с ростовкми и ьштогеняши факторами.

Установлена связь ненцу изменением пролиф-'ративиой аятив-иости иеопяастичесяих лимфоцитов в процессе культивировать !И у/Нго % наличием пролиферативиого ответа на воздействие ростовых а мнтогенкых факторов. Теа самым указано на воздохнув роль клеточных медиаторов при В-клеточном хронической лимфо-лейкозе»

Ваяалеяа корреляция мваду различиями в шмунологвческом фенотипе деШсоэных клеток и динамикой юг прояяферг.тивной активное*:-! з процессе культивирования т ч<±го

Научно-поактическое значение. Настоящая работа обосновывает на клеточном уровне представление о гетерогенности В-клеточного хронического лиыфолейкоэа. Эти данные могут быть использованы в качестве возможных критериев дифференциальной диагностики в рамках В-ХМ и, может быть, уточнения классификации. Проведенный анализ реактивности лимфоцитов крови при В-клеточном хроническом аимфолойкозе на ростовые и митогенные факторы, выделение случаев заболевания, различающихся не только по экспрессии на опухолевых клетках ряда активакционных и дифференцировочных маркеров, но и по пролиферативным свойствам клеток, дает основание для дифференцированного подхода в разработке новых, более аффективных методов лечения.

Показана высокая информативность изучения пролиферативнкх характеристик лейкозных клеток у-Нгс и их иммунологического фенотипа у одних к тех ке больных, что может быть использовано в дальнейших научных и клинических исследованиях лимфопроли-фератиЕных заболеваний.

Внедрение. Результаты исследования внедрены в практику Санкт-Петербургской областной клинической больницы и городской больницы }?- 31 г .Санкт-Петербурга в качества метода исследования больных хроническим лимфолейкозом.

Апробация работы. Результаты работы представлены на конференцию "Злокачественные лимфоыы. Диагностика, клиника, лечение" (Санкт-Петербург, 1УУ1).

По теме диссертации опубликовано 3 научных работы.

Объем работы. Диссертация изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из яведзния, списка сокращений, шести глав, выводов и списка литературы, включающего '¿99 отечественных и иностргепдос источников. Раоота иллюстрирована J.6 рисунками и ¿7 тасшшшли.

объекты .и методы исследивши

Объекты исследования. Б исследование ьша включена периферическая кровь ЬУ Сольных Ь-кдеточнкм хроническим лимфолеЛ-козон.

Выделение клеток. Клетки монопуклеарной фракции кроги (МФК) выделяла из гепараниаировг'.й-.оЯ крови путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-верографин по методу So-u-v Q96S";.

Идентификация поверхгосгаш: маркеров и антигенов.

1

Няетхг., обладающие поверхностными (5./^ ) иммуноглобулинами, выявляли по методу Ве^ром^в i 1974) с помощью кроличьей сыворотки против глойулкиоа чеяорека, меченной флюоресцеином (Институт эпидемиологии и микроОкологии жени Н.Ф. Гамалеи, Москва). Клетки, несущие ЕМ-рецептор, идентифицировали в реакция спонтанного розеткоооразовання с эритроцитами мши. Комп-лементзазисимые (ЕАС) розетки определяли по моцифицированноыу методу Rcss eta?. (1973) v.Mende? et a?.( 1973), а качество комплемента использовали свежую мышиную сыворотку, разведенную 1 : 10 (для выявления С-^рецепторов) или сзежуп человеческую сыворотку АВ1>Ей (+), разведенную I : 40 (лля выявления прей»

с

мущественно Cgt рецепторов). Лимфоциты, образующие спонтанные (¿) розетки с эритроцитами оарана, определяли по методу Рап^е-С (1974). Исследование поверхностных антигенов производилось в тесте непрямой иммунофлюоресценции со следующими моноклональ-ными антителами (ЫКА) : ЖО-1 - направлены к детерминантам HLA-DP; Ши-40 - к антигену Pfb-1 лимфоидных предшественников, плазматических клеток и активированных '1-лимфоцитов, ИКО-44 к антигену СПС; ИКи-бО - к антигену CDId; ШО-3 - к антигену активированных В-лимфоцитоз человека; /ЗЮ-Ю к дифференцировоч-ному антигену Ь-лимфоцитов; ЛБ-21 - к антигену CDZ1; Jïïl - к антигену CDb; ЛТ7 - к антигену CD7 и Ш'в - к антигену CDd (Антитела серии йКи представлены лабораторией клеточной иммунологии БОНД г. Москвы; антитела серии JÏÏ' представлены институтом Иммунологии г. Москвы; серии ШО - институтом проилем онкологии г. Киева).

Культивирование клеток проводили в планшетах для иммунологических реакций в концентрации 11>° клеток/мл в среде РРаЦ -1640 с ¿00 J глютамина к 10% сыворотки человека АВ1У, инакти-вированной при tô°C 30 мин. Уценка уровня пролиферативной ак-

3

тивности МФК осуществлялась по интенсивности включения К тими-дина в синтезируемую ДНК ( Н. Линг, 197а и Ever son était ±973) с регистрацией результатов на жидкостном сцинтиляяционном счетчике (регистрация CPià) (Е.Д. Киселева и .др., l2do). Спонтанную пролиферативную активность liiK сравнивали с уровнем пролиферации при культивировании с 12-тетрадеканоилфорбол -13. ацетатом (ТФА) ( S i'g ». а., США), фитогемагглютинином-а4 (ФГА-Ю {Ca(":'iochetn , Швейцария) и рекоыбинантным интерлейкином-2 СИЛ-id) человека iCagiîochenu США).

Обогащение популяции В-,-слсток проводили з ряде ¿лутаез перец культивироэ&шеи путьи удаления фракции првлпмдадос клеток, Т-лпмфсцитарной популяции с использованием реателга Б-розеткообразовагис« ( Ггб'{-.с>с1 , ХУ72, 7с^ I , 1УД>) к реакции лигкеа остакшксл Т-клеток в реакции с ¡'¿гЛ СРЗ к СС7 с посдедушим добавление« комплемента (^ьечей г1-зоро?к« человехк АРЛУЕ'Ь +),

РЕЗУЛЬТАТ К СБСУг'ДЕНЖ,

Иммунологический фенотип спууолс клг ток В-клето'-шого чоонич'. ского лку-фояейкоза.

В-кйрточ:1яй ХЛЛ был устлн'-лсн у зс«.т с9 е-олый*.

:;а осноэални экспр? с с на С^с/-(СЮ и ЕМ-реиептороэ на Сотлей чле-д'и хлета: .ТЖ (а средни- состойте-генно М- и а Е-рсцептсра - только на Х,6-и,3> лзе-гсУ 40 ?« '£ -олыыт (У®;) опгйг'ялля. ирс-уе того,2 /е ¿¿К:.' оиеякм на 56- 'К клэток Но гпбпюдгш* достоверной а:сспрссс!я« Т-кяс/ос/е« антигенов» шкзляемж: ОД. ЛТ7 (С£>7), ЛГВ(СГВ), £-и>-44 (СЛс).

Более низкое процентное содержание Т-люфвдтов, сглязля-е-уьс: с помецьа Е-розотск в &Ш обслздозшг-т иояьких 3~XiJ.ii яо сравнения о литератур^'» дакга»<к (5,о£ I 4 Ь,у~ !,££} (А„С. Лзейбзх, 1У7У} объясняйся лреведекжг хым отбором бозгьтх с содержанием лейкоцитов к периферической кровп о-юпо ¿ио х IV"/я и вияз,- ,%.~о показано, что доля кетреисфог-:мрозгя-ннх кяегок з 2й£ больных В-ХЛл уменьшаетел с роете« лейкоцитоза (АС. ЦвеЙбггс, 1978),

Татскм образом, преобледгшт-е число клето:с -грози обследо-занньлс йопьтп ;<дл сбладаит теми пли икьм: паргметрши В»кле?ок,

с очень незначительной долей Т-кяеток.

Это позволило нам оценивать в дальнейшем иммунологический фенотип опухолевых клеток периферической крови больных В-ХЛЛ по данным исследования Ш>К.

Выявленное нами преобладание экспрессии CR2 над СEl (54 - 3,U и 7,Ь - p<0,Ui) соответствует данным литера-

туры и наряду с определением ЕМ-оепепторов на большей части U2?K является отличительным признаком В-ХЛЛ от неходънинс ких лимфом (A.C. Цвейбах, Е.И. Гольдман, 1978; P.C. Самойлова, 19Уиа; Hiks etoC.* 1935).

В тесте непрямой иммунофяюоресценЦии выявлена гетерогенность экспрессии всех определяемых маркеров. Хотя линией не ограниченные • антигены (Н£.А-?Р, CDi8, Р/ТЗ—1) определяли на клетках большинства или всех больны*, различия в проценте меченных клеток были значительными (таблица 1). Выявлен более высокий процент клеток, несущих маркер EFB-1 у больных с длительностью заболевания менее 5 лет (клиническая группа 1)(60-11%) по сравнении с больными В-ХЛЛ более 5 лет .(клиническая группа 2) Ш~11%) (р< 0,05), Различий в экспрессии HIA-rPP и СPLQ у больных с разной длительностью заболевания не выкалено. Данных о корреляции в определении антигенов Н£А-2Р, CPW и РСБ~1 не получено (г<и,3 между всеми группки).

Наиболее выраженные различия иммунологического фенотипа леккозкых клеток В-ХЛЛ выявлены при определении антигена ИПО-З, имеющего в норме ограниченную экспрессия на стадии В-иммуно-бластов и ИПО-IU (В-клеточшй антиген, не определяющийся только на поздней стадии активации В-лшфоцитов) (С.П. Сидоренко и.др., 1990).

Таблица I

Иммунологический фенотип ¿Ш больных В-ХЛЛ по данным теста непрямой иммунофлюоресценции

Антитело Антиген Основная Относительное Среднее число Пределы кодеба

клеточная число больных на клеток, экспрес- ниЯ клеток,

специфичность клетках которых сирушич антиген экспрессирующи

определяли антиген {%) антиген

ИК0-4и РРВ-1 Линией иг ог- Уи ¿>7,1- 10,6 21 + 98

ИКО-би СО 18 раниченные .ассо- 100 84,91 2.4 . 6У + У4

ИКО-1 циированный с В-клеткаии 100 61.,* 27 45 * 100

ИКС-4 СО 1С Т-клетки,субпопу« 0 - -

ЛТ-1 С 0 5 ляция й-клеток -0 60. 6± 3.5 24 4 8У

ипо-з Антиген активированных В-лимфоцитов человека 51 49,1- 6,9 26 + 74

Ш0~'О Дифферснциро Субпопуляции вочный е.чти- ¿-клеток ген В-лиыфо-цитоа 4У 58,4^ 4.7 26 4 91

ЛБ-21 С 0 21 25 62.25± ш.1 48 4 91

ЛГ-7 СО 7 Т клетки и -

ЛГ-8 сов Субпопуляция Т-кльток и -

Экспрессия этих маркеров на Ш>К больных В-ХЛЛ носила реципро-ктный характер. Б 23 случаях с фенотипом Ш0-3+ ИПО-lü" по сравнении с 22 больными, клетки которых имели фенотип ИПО-З" ¡Ш0-хи+, была меньше популяция клеток, несущих Ei-рецептор и CD5 антиген (р< и,05) (Рис.1). У больных с экспрессией СР5 менее чем на 7i$ клеток УФК наблюдали более высокое содержание клеток, несущих ЕМ (69,6% по сравнения с 35,Oi 6,7%\ (рС0,05).

В случаях Ш0-3+ ИП0-10" была так же тенденция к более низкой экспрессии Cgciрецептора (Рис. I), что соответствует литературным данным о определении CD5 антигена только у тех больных В-ХМ, неопластические В-личфоциты которых несли рецептор (A.B. Филатов и др., 1У89).

Более низкая экспрессия Ed-рецептора в случаях определения ИПО-3 антигена согласуется с литературными данными о более высоком уровне фенотипической диф$еренцировки Eii~- клеток при 'В-ХЛЛ (G.A. Дуговская, E.H. Злобина, 1У88).

Таким образом, у 23 из 4Ь больных В-ХЛЛ (51%) выявлена субпопуляция B-клеток, обладающая иммунологическим фенотипом, характерным для конечных стадий антигензависимой дифференциров-ки В-лимфоцитов»

Спонтанная про лифе, ративная активность неепластических

лимфоцитов больных В-ХЛЛ.

В целях контроля определяли уровень пролифера-* ивной активности МФК у четырех доноров. Он составил в среднем i579ij.8,5 х хО^расп/мин через 4 часа культивирования />•> viiro и достоверно не изменялся через 72 и 144 часа, что соответствует литературным данным (Е.П. Киселева и др., 1985).

Рис1. Изменение спонтанной пролиферативной активности Ж больных В-ХЛЛ при культивировании in vitro .

А - случаи со снижением спонтанной пролиферации к ?2 часом культивирования (группа А)

В - без снижения спонтанной пролиферации к 72 часам (группа В^;

Дт- с увеличением пролкферативной активности при культивировании клеток до 144 часов;

к.у- без изменения пролиферетивной активности - "--" - ,*

Bj- со снижением пролиферрдда при культивировании клеток до 144ч; B.j- без изменения пролиферации - "--"--"

Ц - пролиферативная активность через 72 часа культивирования; Q - пролиферативная активность через 144 часа культивировэягя; Черта сверху - уровень спонтанной пролиферации через 4 часа культивирования (Min^),

о i;

По оси ординат - включение 1Г-тимидина (расп/мин х Ю1").

Средний уровень спонтанной пролиферативной активности опухолевых клеток 58 больных В-ХЛЛ через 4 часа культивирования составил ЗЬб4±335,7хЮ6 расп/мин и превысил уровень пролиферативной активности Ш>К доноров (р < 0,и1).

По характеру динамики спонтанной пролиферации в течение 72 часов культивирования ¡и у(1гст сравнению с исходным её уровнем (4 часа культивирования) в одних и тех ее случаях, исследуемые больные были раздельны на 2 группы (Рис. I). У 36 больней группы А (61$ всех обследованных к 72 часам культивирования клеток т \zitra уровень пролиферации снижался по по сравнения с исходны?.! в 3 раза и более и составил 743^47,8x10^ расп/мин. У 22 больных, объединенных в группу В(38!?) проли-■феративная активность 1ЙК достоверно не изменялась, сохраняясь

высокой в течение 72 часов культивирования (в среднем 3357^

£

2У1 х 1и расп/мин). Уровень спонтанной. пролиферации через 4 часа культивирования у больных группы А несколько выше, чем у больных группы.Б (Рис. I) (р ^ и,05).

У Зи из 36 больных (83^0 со синением спонтанной клеточной пролиферации через 72 часа (группа А), в дальнейшем, к 144 часам культивирования, происходило повышение уровня пролиферативной активности (вариант А^ Рис. I) (р<и,0Ь).

У 14 из 22 больных группы В (64/?) уровень спонтанной пролиферации М$К через 144 часа культивирования снижался по сравнению с её уровнем через 72 часа (р<0,05) (■ вариант В^ Рис. 1). В остальных случаях при культивировании ¡ЭК до 144 часов достоверных изменений клеточной пролиферации по сравнению с 72 часами не было (варианты А 2 и В 2 Рис. 1).

ladлипа 2.

Пролиферативный ответ опухол'вых клеток больных В-ХЛЛ на митогеинж и ростовыг- факторы при культивировании !r vitro ЧЧ и 144 часа.

Изм-ш к'»:е спонтанной пролиферации

| Нооли^р ративный оув«'7- пли культувклогании с фактором

"I—

/') V'/r/'C

Онлжеиие через 72 часа (группа А)

! 17/27 ¡7/2? ¡3/27 |__633 26Й J IK

Без динамики через 72часа

(Группа Б}

5/8 и/5

¿3/27 { 0/27

О/б ¡3/3 : 0/6; 0/3 11U№

12/13 11/13 Ш _7,7 ^

О/ 1л

w' lo i 46е?

f

¿ГА

■I"

4/27 i 24/27 ! и/27 j 3/27

Ш

IL< J. _________________

и/б ju/3 ! (¡/111 1/3 ; u/Il] 0/3

133?;

0/8

4/5 p/8|1/b 6OT 38« ¡2(ft

0/iJj u/11 I

7/ i j

с

L'lii

! i/13 j 7.7

t/i 3

I1/III2A iw* I

7/13

U/i.

i 8/8 j 0/7

UiCfti

зв.ь % l ь; %

0/8;U/7

U/8 ¡7/7

! iw

Б каждой клетке: Цифры над чертой - через 72 часа кухь?к<шроденшг. Под чертой - через 144 часа.

Слева и справа от вертикальной линии варианты изменемия спонтанной пролиферации через 144 часа

А1 11 А2* Й1 и й2 'С!'!• соответственно для групп А и В.

f - увеличение пролифбративной хетигяоети на to4? и более по сравнения со спонтанной в те же- сроки культивирования ] ~ снижение - " -;

„— - огз динамики, а числит«'л». - число больных с указанным луолн^грагивим отй» том

6 знаке на?< nf ~ число ог'сл» до ванных больнкг.

14

Таблица 3.

Изменение: уровня клеточной пролиферации «Ш больных В-ХЛЛ при культивировании !п ^¡Ьги в течение 72 и 144 часов с различными концентрациями ТФА, ФГА и ИЛ-2.

Изменение уровня клеточ-] ной пролиферации по сра-ЕНСП5ПЗ со ' спонтанной ! (р<0,и5)

ш-г

Концентрация фактора в культуральной среде_

ТМ ФГА

32ед/мл : 3,2еп/кл I №1и) : Ики)и)

,32ец/мл ! бинг/мл ,5нг/мл ,2и К1 /мл

г.МКГ

/МЛ ; 1,киШи'/Ш

шшии) ; (ТФА 50) (ТФА 5) (ФГА 60) (ФГА 20)' (ФГА 5)

Повышение

через 72 часа

14/40 35 £

14/ЗЕ

Ш

1/16

20/40 Ж

18/40 17/40

- 42.5

11/26

422_

16/40

40%

через 144 часа

5/27

18,ей'

3/23 13«

о/г:

9/27 33?.

9/18

Ь0/О

5/27

70 ^ X О , и/ц

Бес дина-'

МИКИ

Понижение

через 11"часа

14/40

31

\ через '144 часа

18/27

10/ЗЬ 28.6%

12/22"

11/16 20/40 : НАС) 18/40 69% 50% , 27% 451

"12/13 20/23 , 23/23" 18/27"

10/26 39Й

19/40 47.

9/18

22/27

чэрэз 72 часа 12/40 1 Ж 11/35 31?, 4/15 Ш 0/40 ; П/40 1 27Й и ? 5/40 12.5 ии/л . 5/26 • 19;' ОХ , ыл> 5/40 то с;»' К » «-'/о

через 144 часа 1 4/27 ! ш 10/22 ш 1/13 7,7% 0/23 : 0/23 - " 1 _____ -

Цифра над чортой - число случаен е. указанным изменением кле-. очной пролиферации.

Цифра под чертой - число случаев культивирования клеток с указанной концентрацией футора

Ирояи-'Ьг.патчвныа ответ опухилгвнх кл^хок^юльныт Б-Х/Л на митогсьныо.и ростовиг 5ак"ош.

Угеличснис пролифс-ратквиоЯ актизности опухолезых клеток (на 5055 я более по сравнении с уровнем спонтанной прелпфкраиии) при культивировании с рекембкнантнш ИЛ-2 было обнаружено у 22 из 40 бопын-г (5555) (р< 0,и5). Ео ессх случаях увеличегая уровня пролифйррг.ии ЙНС больнглге В-ХЛЛ при действии ИЛ-2 кабиэт-цали сшясение спонтанной пролиферации по сравнении исходной в эти не срок-.! кульливнроЕания (см. тебя. 2.}. Однако, у 1и больных группы А (со снижением спонтанной пролиферации через 72 часа хультизирэяанкя) не обнаружил;: увеличения клеточной лрезиферагки з отпет на ИЛ-2. У 19 из 40 о.1еяедоэз?кыч бояьшгх ими выявлено акгибируддое ХШШ-& Ш-Я на уроечнь пролиферация ШЙС, У больнкг группы А ежгхекне пролиферации г.пу/.олечьпг ютсгс:: в ответ на ИЛ-2 н^л.здали значительно pe-.se, чей у безьихх группы В. Обнаружена аналогичная спг^ь.меж^ пролкф-зратиЕНШ ответом клеток ¡¿Ж на деЯетгие ТФА к М'А я лзменлнезд спонгелной пролиферации к исток при культивирования т ¡/¡¿го у тех ш бсдьнкгс (таблица 2)..

Ваязлг.ка гетерогенность изменения урошл пролиферации клеток больных Е-ХЛЛ на различные хегцентрец:ш ИЛ2~, ФГА и ТоА в культуралшой среде (таблица 2).

У 5 больных сопостап-гкли пролиферативнкй отпет обогащенной В-кяеточиой популяции с исходной 1Ш> при гсультивироазяии с ИЛ-2, ФГА и Т<М з течение 72 и 144 часов. Пролкфоретигнел активность МФК и обогащенной популяции В-клетоя сольных В—/ЛЛ изменялась рдинаково во всех случаях, культивирования .'»- Ьго с Т<М, в 4 из 5 случаев культивирования с МЛ~2 я а 4 из 5 случаеэ -

ib

с ФГА. Таким образом, не получено убедительных данных о влиянии незначительной примеси Т-клгток на пролиферативный ответ МФК больных В-ХЛЛ при культивировании с использованными факторами.

Корреляционный анализ. Оценивали длительность заболевания менее или более 5 лет (I и П клинические группы соответственно); снижение уровня спонтанной пролиферации кле.ок в течение 72 часов культивирования /и vilro (группа А) или сохранение прежнего уровня пролиферативной активности (группа В); иммунологический фенотип опухолевых клеток Ш0~3+ ИПО-iu" или ИПО-З" ИЛО-Д)*. Не выявлено корреляции между длительностью заболевания и изменением спонтанной пролиферации МФК itn vitro (Х*%=2,7), а так же -между длительностью заболевания и иммунологическим фенотипом опухолевых клеток (C=U,25±0,I4; Х^=2,8). Установлена

■ о

корреляционная зависимость с вероятностью (X =6,8) между экспрессией антигенов ИПО-3, ИПО-IU и изменением спонтанной пролиферации Ж у больных В-ХЛЛ (С = 0,41 - 0,12; С> 3»-).

В случаях с иммунологическим фенотипом ИШ-З" ИП0-10"1" и снижением спонтанной пролиферации в течение 72 часов культивирования чаще наблюдали увеличение клеточной пролиферации при культивировании с рекомбиналтным ИЕ-2 и митогенными факторами ТФА и ФГА. Опухолевые клетки В-ХЛЛ гетерогенны по способности и типу ответа на пролиферативные сигналы. Увеличение пролиферативной активности лейкозных клеток больных В-ХЛЛ на ИЛ-2 вероятно связано с наличием функционально активного рецептора для ИЛ-2 на опухолевых клетках при этой патологии, что соответствует ■данным литературы (.Ra.spdd.ori et а£, 1УУ0). Ингибирующий эффект ИЛ-2 можно объяснить. возможной аутокринной его ролью.

Практические пекомеидялии.

Б клинических исследования* может найти применение использованная нами панель отечественных коноклональньос антител, которая позволила но только идентифицировать Ь-клеточнкй заои-акт хронического лимфолейкоза, но и выделить группу больных с различным уровнем фсиотипической дифферениировкк лейкозых клеток.

Показана высокая информативность изучения проляфератизюк характеристик ояухол<гшх клеток 1л VI {го и их иммунологического фенотипа у одних и тех же больных, что может ьыть использовано а дальнейших неследованиях лимфопролиферативкых заоолевгиий.

Учитывая данные о клиническом применении кятерлейкчнь-.-при Б-клетсмом хроническом лимфиггейкозе, представляется ной выявленная гетерогенность прояиферативного ответа «етск мшонуклеарной фракции больных В-кяеточным хроническим л;тмфо-лейкоэом ка этот ростоьой фактор ¡и ^гс . Проведенные в настоящей работе тесты по влияния интерлейтоша-2 на пролифепа-тивную активность лейкозгагс клеток могут быть использованы в клинических исследованиях персн применением />> у/Ур жтерлей-хина-2 и других ростовых факторов.

Данные, полученные в работе, свидетельствует о необходимости индивидуального подхода при применении ростовых факторов с лечебной целью у больных В-ХЛЛ.

выводы

1. В-клеточный хронический яимфолейкоз гетерогенен по экспрессии на опухолевых клетках дифференцировочных маркеров. В периферической крови значительной части обследованньпс больных (Ь2%) выявлена субпопуляция неопяастических лимфоцитов с иммунологическим фенотипом, характерным для конечных стадий В-клеточной дифференцировки. У оставшейся части больных (48%) уровень фенотипической дифференцировки лейкозных клеток был более низким.

2. Пролиферативная активность трансформированных лимфоцитов у больных В-клеточным хроническим лимфолейкозом по разному изменяется в процессе культивирования in vitro . Выявлены группы больных со снижением спонтанной пролиферации через 72 часа культивирования (64%) и с сохранением высокого её уровня через 72 часа (36%).

3. Снижение спонтанной пролиферативной активности клеток Б-кле-точнсго хронического лимфолейкоза в процессе культивирования коррелирует с более частым увеличением пролиферации з присутствии ростовых и митогенных факторов и определенным иммунологические фенотипом. Ингибирушее влияние интерлейкина-2 и митогенных факторов, напротив, чаще наблюдали у больных с сохранением высокого уровня спонтанной пролиферации в те ке сроки кулЬТИЕированияо

4. Статистически достоверная зависимость между концентрацией используемых митогенных факторов,интерлейкина-2 и пролифератив-ным ответом опухолевых клеток больных В-клеточным хронических! лимфолейкозом отсутствует (р<С0,05).

5. Корреляции между иммунологическими характеристиками опухолевых клеток, длительность» и стадией заболевания (С=0,25^0,14) не выявлено.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ МССЕРГАЦИИ

1. И.Я. Каждан, A.C. Цвейбах, И.Е. Карягин. Индукция некоторых признаков дифференцированного Т-члеточцого фенотипа у бласткых клеток больных остркы лшлфоблас^-ным лсйкозоц //Цитология. - 1S88. - X б - с.745-750.

2. А.С, Цгзйбах, И.Я. Каадаи, A.B. Филатов, И.Е. Карягин, Б.В. Афанасьев, Г.Е. Аркадьева, H.A. Алексеев. Влияние интерлейкина-2 на пролиферативную актиппосгь бластов

и экспресс!® некотор'зс Т-клеточных маркеров у больных острым лиыфобластшт'д лейкозе.',- /Дер.арх. - хУШ. - ','Ь - с. 24-29.

3. И.£. Карягад, Б.В. /:са:шсьез, A.C. Цвейбах. Иммунологические маркеры и пролифератишая активность лимфоид-яых клеток периферической дрови при ¿-клеточном хроническом яимфолейкозе: 1езисы докладов конференции "Злокачественные лкмфомы. Диагностика, клиника, леч«шкз"» i>-6 дек. 1У91г., Санкт-Петербург // Сгакт-Оетерсург, IS91. - с. 16-17.