Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Апоптоз кератиноцитов и экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов у больных псориазом в зависимости от длительности заболевания

На правах рукописи

_---- с~\

: "Л ^ , г , ,

РУКША

- „ _ .. <-)-!П<"!

—• ' - - ^ « 4 ¿, Ь

ТАТЬЯНА ГЕННАДЬЕВНА

Апоптоз кератинодитов и экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов у больных псориазом в зависимости от длительности заболевания

14.00.11 - Кожные и венерические болезни 14.00.16 - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2003

Работа выполнена в Красноярской государственной медицинской академии.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Прохоренков В.И. Салмина А.Б.

Позднякова О.Н. Начаров Ю.В.

Ведущая организация: Иркутский государственный медицинский университет

Защита состоится • 200 О г. в ■/V часов на заседании

-200 0\ '

диссертационного совета К ^08.062.63 в Новосибирской государственной медицинской академии (630091, Россия, Новосибирск, Красный проспект, 52).

С диссертацией можно ознакомиться в научно-медицинской библиотеке Новосибирской государственной медицинской академии (630091, Россия, Новосибирск, Красный проспект, 52).

Автореферат разослан «_»_200_

г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

Решетникова Т.Б.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемны Псориаз является широко распространенным кожным заболеванием, частота встречаемости которого в некоторых странах составляет до 3-4% населения. Патологический процесс при псориазе носит полиорганный характер и не ограничивается исключительным поражением кожи. Помимо тяжести соматического характера, поражения кожных покровов приносят больным проблемы психоэмоционального и социального плана.

К сожалению, до сих пор остаются невыясненными некоторые аспекты патогенеза данного заболевания, что существенно снижает эффективность его лечения. Несмотря на многочисленные исследования морфологических и иммунологических основ патогенеза псориаза [Бутусова H.H., 1990, Гришко Т.Н., 1992, Маркушева Л.И, 1997, Самцов A.B., 1997, Криницына Ю.М., 1998, Адаскевич В.П., 2000, Молочков В.А., 2001, Папонов В.Д., 2001, Кунгуров Н.В., 2002, Baadsgaard О., 1990, Travers J., 1999, Gilhar А., 2002, Gottlieb А., 2002], характер нарушения структуры и функциональной активности клеток кожи, а также особенности реализации иммунопатологических реакций остаются недостаточно изученными.

Известно, что в эпидермисе при псориазе происходят изменения процессов пролиферации и дифференцировки клеток [Мордовцев В.Н., 1992, Адаскевич В.П., 2000, Новиков А.И., 2003, Суханова Н.М., 2003]. При этом изменяется выраженность запрограммированной клеточной гибели - апоптоза. Данные об интенсивности апоптоза при псориазе немногочисленны и носят противоречивый характер [Heenen М., 1998, Laporte M., 2000, Fukuya Y., 2002, Yamamoto T., 2003]. Кроме того, не сформированы четкие представления о механизмах нарушения апоптоза кератиноцитов при псориазе. Известно, что псориатические кератиноциты устойчивы к индукторам апоптоза, а также определено, что в стадию регресса псориатического процесса резистентность клеток к апоптозу меняется [Wrone-Smith Т., 1997]. Это подразумевает возможность направленного воздействия на механизм запрограммированной клеточной гибели кератиноцитов с целью достижения терапевтического эффекта при псориазе, однако отсутствие данных о клеточных белках, изменение экспрессии или активности которых ассоциировано с нарушением развития апоптоза, не позволяет разработать наиболее эффективные подходы к лечению псориаза.

Важным событием в развитии апоптоза является нарушение целостности митохондрий, формирование мегаканалов (MPT - mitochondria permeability transition роге) в участках контакта внутренней и наружной митохондриальных мембран и появление митохондриального содержимого в цитоплазме, что

приводит к активации специфического каскада протеолитических реакций и генерации свободных радикалов [Crompton M., 1999]. Ключевая роль митохондрий в генезе апоптоза, процессах пролиферации и дифференцировки позволяет рассматривать белки митохондриальной локализации (прежде всего, входящие в состав МРТ) в качестве маркеров выраженности патологических состояний, связанных с нарушением апоптоза, а также в роли «мишеней» терапевтического воздействия.

К числу такого рода белков относятся сравнительно недавно идентифицированные и интенсивно изучаемые периферические бензодиазепиновые рецепторы, которые экспрессируются в клетках различных тканей, принимая непосредственное участие в формировании MPT [Costantini Р., 2000]. Лиганды периферических бензодиазепиновых рецепторов обладают биологической активностью (регуляция транспорта холестерина в митохондрии, регуляция внутриклеточного гомеостаза кальция, модуляция дыхательной активности митохондрий) и, как было продемонстрировано в некоторых клетках, могут играть роль в развитии апоптоза и регуляции клеточной пролиферации [Bono F., 1999, Beinlich А., 2000, Decaudin D., 2002]. Вместе с тем, существуют лишь единичные данные об экспрессии периферических рецепторов в кератиноцитах эпидермиса [Stoebner Р., 1998], а ее изменения при псориазе не описаны.

Известно, что периферические бензодиазепиновые рецепторы экспрессируются в антигенпрезентирующих клетках и участвуют в регуляции процессов фагоцитоза и хемотаксиса [Finnerty M., 1991, Cosentino M., 2000]. С учетом роли антигенной нагрузки организма в инициации и прогрессии псориаза [Travers J., 1999], перспективным представляется изучение особенностей функциональной активности антигенпрезентирующих клеток при псориазе, а также возможность ее модуляции агонистами периферических бензодиазепиновых рецепторов.

Цель работы

Исследовать взаимосвязь между клиническими проявлениями и интенсивностью запрограммированной клеточной гибели кератиноцитов и экспрессией периферических бензодиазепиновых рецепторов в клетках эпидермиса и нейтрофилах периферической крови больных псориазом для разработки патогенетического обоснования новых методов лечения.

Задачи исследования

1. Оценить уровень апоптоза кератиноцитов у больных псориазом с длительностью заболевания до 10 и от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования и регресса заболевания, а также корреляцию этого параметра с митотической активностью кератиноцитов, степенью лимфоцитарной инфильтрации эпидермиса и клинической стадией заболевания.

2. Выявить уровень экспрессии в коже и нейтрофилах периферической крови периферических бензодиазепиновых рецепторов у больных псориазом с длительностью заболевания до 10 и от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования и регресса заболевания.

3. Оценить функциональную активность нейтрофилов периферической крови и изучить модулирующий эффект лигандов периферических бензодиазепиновых рецепторов в отношении функциональной активности нейтрофилов периферической крови у больных псориазом с длительностью заболевания до 10 и от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования и регресса заболевания.

4. Доказать патогенетически обоснованность возможность применения лекарственных препаратов, действие которых направлено на модуляцию апоптоза и экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов для лечения псориаза.

Научная новизна

1. Впервые показано, что у больных с длительностью заболевания менее 10 лет отмечается более интенсивное возрастание уровня апоптоза в стадию регресса, что коррелирует с более быстрым регрессом клинических проявлений, по сравнению с больными с длительностью заболевания от 11 до 20 лет.

2. Впервые установлена корреляция между уровнем апоптотических кератиноцитов и лимфоцитов в эпидермисе больных псориазом (г=-0,90).

3. Впервые обнаружено увеличение экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов в коже больных псориазом в стадии прогрессирования заболевания и снижение данного показателя в стадию регресса, что коррелирует с уровнем апоптоза в кератиноцитах; помимо этого, идентифицирована субклеточная и интрадермальная локализация периферических бензодиазепиновых рецепторов.

4. Впервые выявлено, что экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов у больных псориазом в нейтрофилах периферической крови

остается неизмененной по сравнению со здоровыми людьми как в стадию прогрессирования, так и регрессса заболевания.

5. Впервые выявлено, что функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных псориазом с различной длительностью заболевания значительно превышает показатели у здоровых людей, как в стадию прогрессирования, так и в стадию регресса; активность периферических бензодиазепиновых рецепторов в нейтрофилах периферической крови у больных псориазом модулируется их лигандами -ОВ1 и диазепамом.

Практическая значимость работы.

1. Уровень апоптоза кератиноцитов и изменение его динамики в эпидермисе больных псориазом являются адекватным маркером интенсивности патологического процесса и терапевтической мишенью при данном заболевании.

2. Выявлено непосредственное участие апоптоз-ассоциированного белка -периферического бензодиазепинового рецептора в патогенезе псориаза, что позволяет рассматривать его в качестве маркера для диагностики и прогноза течения заболевания, а также степени выраженности патологических изменений в коже больных псориазом и эффективности проводимой терапии.

3. Дано патогенетическое обоснование применения лекарственных препаратов, модулирующих апоптоз и экспрессию периферических бензодиазепиновых рецепторов кератиноцитов для лечения псориаза.

4. Полученные данные позволяют разрабатывать новые патогенетически обоснованные подходы к лечению псориаза у больных с различной длительностью заболевания.

Положения, выносимые на защиту

1. Для стадии прогрессирования заболевания характерно торможение апоптоза кератиноцитов и увеличение экспрессии в них периферических бензодиазепиновых рецепторов, что сопровождается лимфоцитарной инфильтрацией эпидермиса.

2. В стадию рессирования заболевания происходит интенсификация апоптоза кератиноцитов и снижение экспрессии в них периферических бензодиазепиновых рецепторов.

3. Для псориаза характерно повышение функциональной активности нейтрофилов периферической крови вне зависимости от стадии течения

б

патологического процесса, что свидетельствует о персистентой активности антигенпрезентирующих клеток у больных псориазом.

4. Лиганды периферических бензодиазепиновых рецепторов обладают выраженным модулирующим эффектом в отношении нейтрофилов периферической крови при псориазе.

5. У больных псориазом с длительностью заболевания менее 10 лет наблюдается более выраженная динамика регресса как клинических, так и морфологических изменений (апоптоз кератиноцитов, уровень лимфоцитарной инфильтрации, экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов) на фоне проводимой терапии по сравнению с больными с длительностью заболевания от 11 до 20 лет.

Внедрение результатов исследования.

Результаты, полученные в ходе диссертационного исследования, внедрены в практику в краевой клинической больницы №1, ООО "Лаборатория иммунохимических методов исследования", межкафедральной научно-исследовательской биохимической лаборатории КрасГМА, а также используются при чтении лекций и проведении практических занятий и семинаров у студентов КрасГМА, врачей-курсантов ФУВ.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на IX и X Международном российско-японском симпозиумах (Канадзава, 2001, Якутск, 2003), научно-практической конференции "Современные аспекты биологии и медицины" (Томск, 2002), краевой конференции дерматовенерологов, посвященной 60-летию кафедры кожных и венерических болезней КрасГМА (Красноярск, 2003), заседании Красноярского краевого общества дерматовенерологов (2000), заседании кафедры биохимии с курсом медицинской химии Красноярской государственной медицинской академии (2002), совместном заседании проблемных комиссий «Теоретические проблемы медицины» и «Кожные и венерические болезни» Красноярской государственной медицинской академии (2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 печатных

работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах текста, состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы. Работа содержит 14 фотографий, 8 рисунков, 19 таблиц.

Библиографический список включает 203 источника, из которых 51 отечественных и 152 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В исследовании принимали участие больные с диагнозом «Вульгарный псориаз», проходившие стационарное лечение в Красноярском краевом кожновенерологическом диспансере, и здоровые добровольцы, составившие контрольную группу, соответствующие по возрасту и полу.

Выделены 2 группы пациентов и контрольная группа:

• группа 1 - больные псориазом с длительностью заболевания до 10 лет (п=95): подгруппа 1.1 - больные в стадию прогрессирования заболевания; подгруппа 1.2 - больные в стадию регресса;

• группа 2 - больные с длительностью заболевания от 11 до 20 лет (п-95): подгруппа 2.1 - больные в стадию прогрессирования заболевания; подгруппа 2.2 - больные в стадию регресса;

• группа 3 - группа контроля (п=23).

Клинические, биохимические, морфологические исследования проведены на кафедре биохимии КрасГМА, в Красноярском кожновенерологическом диспансере, морфологическом отделе ЦНИЛ, морфологической межкафедральной лаборатории КрасГМА, а также в лаборатории вирусологии НИИ Севера СО РАМН и представлены в Табл. 1.

Клинический метод исследования пациентов заключался в общеклиническом и дерматологическом осмотрах. Учитывались данные анамнеза, наследственность, перенесенные ранее и сопутствующие заболевания.

Среди пациентов 50% составляли мужчины, 50% - женщины. Средний возраст пациентов составил 34,2±5,7 лет. 14% больных указывали на наличие псориаза у близких родственников. У 11% больных регистрировалось поражение опорно-двигательного аппарата, заболевания желудочно-кишечного тракта встречались у 20% больных. У 68% больных обострения возникали в осенне-зимнее время, 34% больных отмечали возникновение высыпаний после эмоционального стресса, 16% больных - после интенсивного приема алкоголя.

Изучение кожного статуса включало в себя визуальную оценку псориатических высыпаний, их распространенность, интенсивность, локализацию, характер поражения придатков кожи. Для клинической оценки состояния кожи использовался международный индекс РАБ!.

Таблица 1.

Диагностический спектр и полнота обследований пациентов и группы контроля

Метод исследования Количество обследованных Относительный показатель

пациентов (группы 1.1, 1.2, в%

2.1, 2.2) и группы контроля

1.1; 1.2 2.1; 2.2 3 1.1; 1.2 2.1; 2.2 3

Общеклинический 95 95 23 100 100 100

осмотр

Дерматологический 95 95 23 100 100 100

осмотр

Определение индекса PASI 95 95 23 100 100 100

Общие клинические 95 95 23 100 100 100

анализы (гемограмма, общий анализ мочи)

Биохимические 95 95 - 100 100 -

анализы (АЛТ, ACT,

1ЦФ, глюкоза крови, билирубин, мочевина,

креатннин)

Морфометрические 8 8 8 8,4 8,4 34,8

исследования кожи

Иммуногистохимия 16 16 16 16,8 16,8 70

образцов кожи (в т.ч. TUNEL)

Иммуноцитохимия ПМЯЛ 15 15 15 15,8 15,8 65,2

периферической крови

Спонтанная и 95 95 15 100 100 65,2

индуцированная ХЛ ПМЯЛ

периферической крови

Спонтанная и 15 15 15 15,8 15,8 65,2

индуцированная ХЛ ПМЯЛ

периферической крови при инкубации с DBI

Спонтанная и 15 15 15 15,8 15,8 65,2

индуцированная ХЛ ПМЯЛ

периферической крови при инкубации с

диазепамом

Больные получали традиционную десенсибилизирующую терапию: гемодез 200,0 внутривенно капельно через день № 5, тиосульфат натрия 30 % 10 мл внутривенно № Ю, глюконат кальция 10 % 5 мл внутримышечно № 10. Внутрь - метионин 0,25 х 3 раза в день в течение 20 дней, масляный раствор витамина D 1000 ME х 3 раза в день - 20 дней. Наружно - мазь "Элоком" 1 раз в день.

Схема исследований образцов кожи и клеток периферической крови приведена на Рис. 1.

Оценка морфометричсских показателей состояния эпидермиса производилась после окраски срезов кожи (толщиной до 5 мкм) гематоксилином и эозином.

Подсчет апоптотически измененных кератиноцитов проводили по отношению ко всем морфологически различимым кератиноцитам, выражая их содержание в промилле [Мяделец О.Д., 1995]. Митотически активные кератиноциты определяли на 1000 базальных кератиноцитов. Толщину эпидермиса определяли с помощью окуляр-микрометра. Количество внутриэпидермальных лимфоцитов определяли в процентах по отношению ко всем различимым кератиноцитам.

Детекция апоптоза с использованием метода TUNEL осуществлялась с помощью набора ApopTag Peroxidase Kit S7100 ApopTag (Manual Intergen Company, USA). Процедура выполнена на депарафинизированных срезах с предварительной обработкой протеиназой К, согласно протоколу производителя, с последующей докраской гематоксилином. В качестве хромогена использован диаминобензидин.

Подсчет TUNEL-положительных кератиноцитов производился при помощи световой микроскопии (увеличение х 400). Площадь TUNEL-положительных клеток оценивалась по отношению к общей площади эпидермиса в поле зрения. Для оценки результатов использовалась компьютерная программа "Видео Тест-Мастер Морфология VT-4" для автоматического обсчета морфологического материала.

Определение экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов (ПБР) в эпидермисе проведено согласно стандартному иммуногистохимическому протоколу [Brown D., 1996]. Моноклональные антитела к ПБР были любезно предоставлены профессором V. Papadopoulos (George Town University, USA). В качестве вторичных антител использована система детекции Super Stain System (HRP) - DAB (IDLabs Inc., Canada).

Подсчет ПБР+ кератиноцитов производился при увеличении х400. Их площадь оценивалась по отношению к общей площади эпидермиса в поле

зрения. Для оценки результатов использовалась компьютерная программа "Видео Тест-Мастер Морфология VT-4" для автоматического обсчета морфологического материала.

Для определения экспрессии ПБР в нейтрофилах периферической крови венозную кровь у больных псориазом и у здоровых людей забирали в количестве 15 мл между 8 и 9 часами утра, натощак, добавляли 80 ЕД гепарина. Лейкоцитарный супернатант после осаждения переносили в чистые центрифужные пробирки и трижды отмывали в растворе Хенкса по 5 минут при 1500 об/мин. После этого приготавливали тонкий мазок суспензии лейкоцитов и окрашивали его согласно протоколу иммуноцитохимического исследования [Эллиниди В.П., 2002]. Количество ПБР+ клеток оценивалось на 100 нейтрофилов.

Исследование спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови проводили у больных псориазом и у здоровых людей, для чего забирали венозную кровь в количестве 15 мл между 8 и 9 часами утра, натощак, добавляли 80 ЕД гепарина. Лейкоцитарный супернатант после осаждения переносили в чистые центрифужные пробирки и трижды отмывали в растворе Хенкса по 5 минут при 1500 об/мин. После третьего центрифугирования удаляли супернатант, оставшиеся клетки разводили раствором Хенкса до концентрации 1 млн/мл. Состав реакционной смеси: 100 мкл люминола, 400 мкл раствора Хенкса (380 мкл в случае индуцированной хемилюминесценции с добавлением 20 мкл зимозана), 400 мкл клеток. Производилась оценка спонтанной и индуцированной хемилюминесценции в течение 90 минут на 36-канальном хемилюминесцентном анализаторе «CL 3604» (СКТБ «Наука», г. Красноярск). Регистрация результатов и управление хемилюминесцентным анализатором осуществлялись через микроЭВМ IBM/PC/AT. Определялись следующие параметры хемилюминесценции: время выхода на максимум (Tmax), максимальное значение (Imax), площадь кривой (S).

В отдельных сериях экспериментов исследование спонтанной и индуцированной хемилюминесценции производилось на фоне инкубации клеток с DBI (Sigma) (раствор в концентрации 10 нМ, 100 нМ) и диазепамом (Polfa Tarchomin S.A.) (раствор в концентрации 10 нМ, 10 мкМ).

Статистическая обработка результатов исследований проведена с использованием критерия W Уилкоксона, критерия Т Манна-Уитни для непараметрических показателей, коэффициента ранговой корреляции Спирмена [Гланц, С., 1998].

Рис. 1. Схема исследований образцов кожи и периферической крови.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Клиническая характеристика больных псориазом с длительностью заболевания менее 10 лет и от 11 до 20 лет

У всех больных (п=180) в стадию прогрессирования отмечались характерные распространенные папулезные элементы ярко-розового цвета величиной 1-10 мм, покрытые рыхлыми белыми чешуйками. Некоторые элементы в результате периферического роста и слияния отдельных папул образовывали бляшки, диаметром до 7-8 см, преимущественно в области локтевых и коленных суставов. Патологический процесс затрагивал кожу верхних и нижних конечностей, область туловища, волосистой части головы, выявлялось специфическое поражение ногтевых пластинок - симптом "наперстка", "масляного пятна". Определялся положительный симптом псориатической триады. Достоверных отличий клинических проявлений по индексу РАБ1 у больных в стадию прогрессирования с различной длительностью заболевания выявлено не было. В соответствии с показателями индекса РАБ1 в стадию регресса у больных с длительностью течения заболевания от 11 до 20 лет отмечалось менее интенсивное снижение клинических проявлений, чем у больных с длительностью заболевания до 10 лет. Данные динамики индекса РА81 на фоне проводимой терапии показаны в Табл.2.

Таблица 2.

Показатели индекса РАБ! у исследуемых больных

Больные с длительностью заболевания до 10 лет п=95 Больные с длительностью заболевания 11-20 лет п=95

Ст. ирогрессир. Ст. регрессир. Ст. прогресснр. Ст. регрессир.

16,8± 0,9 баллов 2,3±0,2 балла** 16,4±1,8 балла 6,5±1,1 балла**

Достоверность по сравнению с показателями до лечения: ** Р<0,05.

Апоптоз кератиноцнтов и морфометрические показатели состояния эпидермиса у больных псориазом

Гистологические изменения пораженной кожи больных в прогрессирующей стадии соответствовали характерной картине, наблюдаемой

при псориазе. В эпидермисе - выраженный равномерный акантоз с папилломатозом. Паракератоз, диффузный гиперкератоз. Зернистый слой был выражен неравномерно, в большей части отсутствовал. В шиповатом слое -межклеточный отек. Надсосочковая зона истончена, отек коллагеновых волокон сосочкового слоя дермы. Капилляры расширены, извитые, эндотелий набухший. Периваскулярно - очаговые умеренные инфильтраты из лимфоцитов и нейтрофилов с экзоцитозом клеток инфильтрата в эпидермис. В стадии регрессии псориаза сохранялся незначительный межсосочковый акантоз, снижалась интенсивность паракератоза. Начинал появляться зернистый слой. Гипертрофия и отек сосочкового слоя дермы были менее выражены. Вокруг сосудов отмечались единичные клеточные элементы.

В эпидермисе здоровой кожи (контрольная группа) митотическая активность кератиноцитов составила 3,8±1,30/00. Митотическая активность кератиноцитов больных псориазом в прогрессирующей стадии была значительно увеличена. Достоверных различий между группами больных с различной длительностью заболевания не отмечалось. В стадии регрессии заболевания уровень митотически делящихся клеток снижался, не достигая, однако, значений контрольной группы (Табл.3).

Таблица 3.

Митотическая активность кератиноцитов эпидермиса у больных псориазом с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и регресса заболевания

Стадия прогрессирования п=8 Стадия регресса п=8 Контроль п=8

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Митотическая активность кератиноцитов, '00 99,6* 113* 19,1*'** 23,1*'** 3,8

Здесь и далее: достоверность по сравнению с контролем: * Р<0,05,

достоверность по сравнению с показателями до лечения: ** Р<0,05, Статистический анализ произведен с использованием Т критерия Манна-Уитни.

Уровень лимфоцитарной инфильтрации эпидермиса возрастал у больных псориазом в стадии прогрессирования заболевания, причем достоверно более

интенсивно в группе больных с длительностью заболевания до 10 лет. В стадии регрессии количество интраэпидермальных лимфоцитов было ниже уровня контрольной группы у больных с длительностью заболевания менее 10 лет, и в пределах значений контрольной группы у больных с длительностью заболевания от 11 до 20 лет (Табл. 4).

Таблица 4.

Количество виутриэпндермальных лимфоцитов у больных псориазом с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и регресса заболевания

Стадия прогрессирования п=8 Стадия регресса п=8 Контроль п=8

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Внутри-эпидемальн. лимфоциты, % 12,7* 8,3* j -j^ ** 1,7** 3,2

Толщина эпидермиса в группе больных с длительностью заболевания до 10 лет в период прогрессирования составляла 272 мкм, на фоне терапии снижалась до 165 мкм, не достигая уровня контрольной группы - 75 мкм (Табл. 5). У больных с длительностью заболевания от 11 до 20 лет в стадии прогрессирования толщина эпидермиса была 130 мкм, в стадию регресса - 121 мкм.

Таблица 5.

Толщина эпидермиса у больных псориазом с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и регресса заболевания

Стадия прогрессирования п=8 Стадия регресса п=8 Контроль п=8

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Толщина эпидермиса, мкм 272* 130* 165* 121* 75

При анализе количества и интраэпидермальной локализации кератиноцитов с морфологическими признаками апоптоза (бесструктурная, слабоокрашенная цитоплазма, гипербазофильные, плотные, иногда "зубчатого" вида или вогнутой формы ядра, отсутствие ядрышка) было обнаружено, что в здоровом эпидермисе (контрольная группа) уровень апоптоза кератиноцитов составил 57°/оо- У больных обеих групп отмечалось достоверное снижение количества апоптотических кератиноцитов эпидермиса по сравнению с контролем, причем более интенсивно у пациентов с длительностью заболевания менее 10 лет. На фоне проводимой терапии доля апоптотически измененных кератиноцитов возрастала, практически приближаясь к уровню контрольной группы у больных с длительностью заболевания от 11 до 20 лет. У больных с длительностью заболевания менее 10 лет уровень апоптоза в стадию регресса превышал показатели контрольной группы. (Табл. 6). Между апоптозом кератиноцитов и митотической активностью клеток, а также между уровнем лимфоцитарной инфильтрации эпидермиса и апоптозом кератиноцитов у больных псориазом во всех исследуемых группах была обнаружена сильная степень связи (г=-0,84 и г = -0,90, соответственно).

Таблица 6.

Апоптоз кератиноцитов у больных псориазом с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и регресса заболевания

Стадия прогрессирования, п=8 Стадия регресса, п=8 Контроль п=8

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Апоптотические кератиноциты, '00 12,3* 16,4* 106,5*'** 76,7** 57

Известно, что наиболее достоверным из существующих способов детекции апоптоза в ткани является визуализация межнуклеосомной фрагментации ДНК с помощью метода TUNEL. Как и при морфометрическом анализе эпидермиса, TUNEL+ клетки идентифицировались преимущественно в базальном слое (Рис.2). При использовании этого метода было обнаружено достоверное снижение количества TUNEL+ кератиноцитов в эпидермисе больных псориазом в стадии прогрессии заболевания (Рис. 3). В стадии регрессии апоптоз кератиноцитов увеличивался и практически достигал контрольного уровня (Табл. 7).

Таблица 7.

Количество апоптотических кератиноцитов эпидермиса, выявленных методом TUNEL, у больных псориазом с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и регресса

заболевания

Стадия прогрессирования, п=8 Стадия регресса, п=8 Контроль п=8

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Площадь TUNEL+ клеток, мкм2 17* 11,5* 69,7** 46,8** 56,2

Таким образом, было обнаружено, что запрограммированная гибель кератиноцитов у больных псориазом до лечения снижается по сравнению с контролем в 4 раза, митотическая активность возрастает в 30 раз, уровень лимфоцитарной инфильтрации возрастает в 4 раза, однако эти показатели демонстрируют выраженную тенденцию к нормализации (и даже достигают уровня контроля) под действием десенсибилизирующей терапии и при достижении ремиссии, особенно у больных с длительностью заболевания до 10 лет.

Рис.2. Апоптоз кератиноцитов в здоровой коже (апоптотические кератиноциты окрашены в черный цвет; окуляр х 15, объектив х40)

Рис. 3. Апоптоз кератиноцитов эпидермиса у больных псориазом в стадии прогрессии заболевания(апоптотические кератиноциты окрашены в черный цвет; окуляр х15, объектив х40)

При этом на фоне увеличения уровня апоптоза кератиноцитов клинически отмечался регресс проявлений псориаза - уменьшалось количество патологических элементов сыпи, снижалась интенсивность эритемы в области высыпаний, уменьшался уровень инфильтрации, зуд. Таким образом, интенсификация апоптоза в эпидермисе и снижение уровня лимфоцитарной инфильтрации приводят к регрессу патологического процесса. Следовательно, регистрация апоптоза кератиноцитов пораженных участков может являться адекватным маркером эффективности терапии при псориазе.

Обращает на себя внимание обратная зависимость между уровнем интраэпидермальных лимфоцитов и степенью выраженности апоптоза в коже: сокращению числа апоптотических кератиноцитов соответствует пропорциональное увеличение количества внутриэпидермальных лимфоцитов. Установлено, что апоптоз снижен достоверно сильнее в группе пациентов с длительностью заболевания до 10 лет, в этой же группе больных происходит достоверно более интенсивная инфильтрация лимфоцитами эпидермиса. Известно, что количество внутриэпидермальных лимфоцитов подвержено динамическим изменениям, и степень лимфоцитарной инфильтрации эпидермиса, как правило, определяет выраженность иммунопатологических процессов. Вероятно, увеличение числа лимфоцитов в эпидермисе может способствовать подавлению апоптоза кератиноцитов за счет локальной продукции лимфокинов с антиапоптотической активностью. Таким образом, обнаруженное соотношение между уровнем апоптотических кератиноцитов и количеством внутриэпидермальных лимфоцитов подчеркивает более активный характер течения заболевания у пациентов с длительностью течения псориаза до 10 лет.

Экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов в коже у больных псориазом

В здоровой коже (контрольная группа) экспрессия ПБР отмечалась в фибробластах, сальных железах и периваскулярно в сосочковом слое дермы. В эпидермисе ПБР+ клетки выявлялись гомогенно во всех слоях эпидермиса. Экспрессия ПБР регистрировалась преимущественно перинуклеарно и в ядре. Не было выявлено экспрессии ПБР на цитоплазматической мембране кератиноцитов (Рис.4).

В коже больных псориазом локализация ПБР также была перинуклеарной и в ядре. В стадии прогрессирования экспрессия ПБР в эпидермисе значительно возрастала, причем ПБР+ клетки регистрировались также во всех слоях

эпидермиса, однако интенсивность окраски была выше (Рис. 5). Не было отмечено достоверных различий между экспрессией ПБР у больных с длительностью заболевания до 10 лет и от 11 до 20 лет.

В стадии регрессии псориаза ПБР+ клетки регистрировались диффузно во всем эпидермисе, количество ПБР+ кератиноцитов было достоверно ниже уровня контроля в группе больных с анамнезом псориаза до 10 лет, и достигало показателей группы контроля у пациентов с длительностью заболевания от 11 до 20 лет (Табл. 8).

Таблица 8.

Экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов в эпидермисе у больных псориазом с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и регресса

Стадия прогрессирования, п=8 Стадия регресса, п=8 Контроль п=8

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Площадь ПБР+ клеток, мкм2 278,0* 263,0* 32,4*' ** 120,9** 150,0

Рис. 4. Экспрессия ПБР в Рис. 5. Экспрессия ПБР в здоровой коже. ПБР+ клетки эпидермисе больных псориазом в окрашены в черный цвет (окуляр стадии профессии заболевания, х 15, объектив х40). ПБР+ клетки окрашены в черный

цвет (окуляр х 15, объектив х40).

Обнаружено, что экспрессия ПБР в кератиноцитах эпидермиса была достоверно выше в обеих группах больных псориазом до начала лечения. Отмечалась преобладающая перинуклеарная локализация ПБР в клетках эпидермиса. При этом не было отмечено локализации ПБР на плазматической мембране эпителиоцитов, что согласуется с данными Stoebner Р. и соавт. [1998].

Несмотря на то, что локализация ПБР в клетках различной природы изначально ассоциировалась с митохондриями [Woods М., 1996], в настоящее время известно, что эти рецепторы могут присутствовать в различных клеточных органеллах и в ядре. К сожалению, нет точных данных о связи тех или иных функций ПБР с их различной локализацией, однако, Hardwick М. и соавт. [1999] регистрировали корреляцию экспрессии ПБР с клеточной пролиферацией, и наблюдали выраженную экспрессию ПБР в ядре, в пероксисомах и на плазматической мембране при "самом агрессивном" типе рака молочной железы. Обнаружение увеличенной экспрессии ПБР в кератиноцитах в прогрессирующей стадии псориаза на фоне подавленного апоптоза и интенсивной митотической активности кератиноцитов свидетельствует о взаимосвязи экспрессии (с преимущественно немитохондриальной локализацией) ПБР и клеточной пролиферации кератиноцитов. Между уровнем экспрессии ПБР и интенсивностью апоптоза в кератиноцитах больных псориазом всех исследуемых групп обнаружена сильная отрицательная корреляционная связь (г= -0,81), в контрольной группе г=-0,95.

Представляется весьма вероятной роль ПБР в транспорте холестерина в митохондрии кератиноцитов (по аналогии с функционированием ПБР в других клетках [Papadopoulos V., 1993]), что может прямо или косвенно влиять как на пролиферацию клеток, так и на их чувствительность к действию апоптогенных стимулов [Marsch-Ziegler U., 1982, Lescano-De-Souza А., 1999].

Известно, что при псориазе отмечено повышение содержания холестерина в клетках как в области высыпаний, так и в непораженной коже [Фортинская Е.С., 1995, Vignale R., 1983]. Известно также, что у людей, страдающих псориазом, отмечается снижение уровня липопротеинов высокой плотности [Reynoso-von Drateln С., 2003]. У женщин, больных псориазом, концентрация липопротеинов высокой плотности коррелирует с частотой ремиссий [Кешилева З.Б., 1990]. Это указывает на нарушения липидного, в частности, холестеринового, обмена при псориазе. По-видимому, одним из компонентов патогенеза заболевания является увеличение экспрессии ПБР в кератиноцитах эпидермиса, изменение внутриклеточного транспорта холестерина и опосредованная этим стимуляция пролиферации клеток.

Стоит заметить, что из холестерина в коже под действием ультрафиолетовых лучей синтезируется витамин D3 (холекальциферол), который обладает способностью регулировать пролиферацию и дифференцировку клеток, а также индуцировать апоптоз, модулируя активность клеточных белков: рецепторы инсулиноподобного фактора роста и фактора некроза опухоли-a, группа белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 и Fas рецептор [Osborne J.E., 2002].

С учетом этого, возможно, что ПБР принимают участие в регуляции синтеза витамина Di из холестерина в коже и таким образом осуществляют свое воздействие на функционирование клеток эпидермиса, в том числе их чувствительность к действию апоптогенных стимулов, например, в рамках церамид-опопсредованного механизма апоптоза. Нельзя исключить и митохондриальную локализацию ПБР в кератиноцитах (при условии перинуклеарного расположения митохондрий), тем более, что Stoebner Р. и соавт. [1998] выявили методом конфокальной микроскопии в здоровой коже преимущественное расположение ПБР в митохондриях.

Гак, Beinlich А. и соавт. [2000] установили, что уровень ПБР в клетках рака молочной железы зависит от количества митохондрий и максимален при высокой митотической активности клеток. Повышение экспрессии ПБР в кератиноцитах у больных псориазом указывает на наличие митохондриальной дисфунции при этом заболевании. Известно, что в стадию регрессирования этого заболевания ультрамикроскопически в кератиноцитах выявляются митохондрии с признаками деструкции крист [Криницына Ю.М., 2001], а препараты, модулирующие функционирование митохондрий (дитранол, циклоспорин А), обладают терапевтическим эффектом при псориазе [Lemasters J.J., 1999, Bos J.D., 1999].

Таким образом, при псориазе отмечается значительное увеличение экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов в кератиноцитах эпидермиса, что происходит на фоне снижения интенсивности процессов запрограммированной клеточной гибели этих клеток. Обнаружение обратной зависимости между экспрессией ПБР в кератиноцитах и уровнем апоптоза подтверждает роль ПБР в регуляции запрограммированной клеточной гибели и снижении чувствительности этих клеток к действию эндогенных апоптогенных факторов при псориазе.

Экспрессия ПБР в нейтрофилах периферической крови у больных псориазом

При иммуноцитохимическом исследовании лейкоцитов периферической крови было обнаружено, что экспрессия ПБР определялась практически во всей популяции нейтрофилов как у здоровых людей, так и в группах больных псориазом вне зависимости от длительности течения заболевания или стадии патологического процесса (Табл. 9). Периферические бензодиазепиновые рецепторы определялись на цитоплазматической мембране и во внутриклеточных элементах.

Таблица 9.

Экспрессия ПБР в нейтрофилах периферической крови у больных с различной длительностью заболевания в стадию прогрессирования и

регресса

Стадия прогрессирования, п=15 Стадия регресса, п=15 Контроль п=15

Длительность заболевания 0-10 лет 11-20 лет 0-10 лет 11-20 лет

Уровень экспрессии, % 95,6 97,0 98,2 98,0 97,0

Необходимо отметить, что в отличие от экспрессии ПБР в коже, где отмечалась преимущественная перинуклеарная их локализация, в нейтрофилах, помимо ядер, четко визуализировались ПБР на плазматической мембране и в цитоплазме (вероятно, на внутриклеточных органеллах) (Рис. 6).

Таким образом, экспрессия ПБР в нейтрофилах периферической крови у больных псориазом не изменена по сравнению с уровнем здоровых людей, и не отражает характера течения заболевания.

Рис. 6. Экспрессия ПБР в нейтрофилах периферической крови больного псориазом. ПБР+ клетки окрашены в черный цвет (окуляр х15, объектив х40).

Функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных псориазом

Псориаз является заболеванием, в патогенезе которого важную роль играет антигенная нагрузка организма и сопутствующая активация иммунокомпетентных клеток [Travers J., 1999]. Одной из наиболее важных характеристик функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов является способность к развитию «дыхательного взрыва» и продукции активных форм кислорода при контакте с антигеном. Для выявления способности фагоцитирующих клеток к «дыхательному взрыву» был использован метод регистрации спонтанной и зимозан-индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови.

У больных псориазом отмечалось достоверное увеличение спонтанной и индуцированной хемилюминесценции. После достижения стадии регрессии заболевания индуцированная, но не спонтанная хемилюминесценция демонстрировала тенденцию к нормализации у больных обеих групп (Рис. 7).

Ранее было показано, что активность лигандов ПБР в фагоцитирующих клетках ассоциирована с модуляцией процессов фагоцитоза и хемотаксиса [Woods M., 1996]. Для идентификации возможного участия периферических бензодиазепиновых рецепторов в регуляции функциональной активности нейтрофилов у больных псориазом проводилась инкубация клеток в присутствии DBI, являющегося эндогенным лигандом ПБР [Papadopoulos V., 1998].

Инкубация с DBI в дозе 10 и 100 нмоль в течение 90 минут не приводила к изменению интенсивности «дыхательного взрыва» нейтрофилов периферической крови в контрольной группе. Однако при инкубации с DBI (10

нмоль, 90 мин) нейгрофилов периферической крови больных псориазом в стадии прогрессии было отмечено достоверное увеличение показателя площади кривой спонтанной хемилюминесценции (Б). Выраженность ответа нейтрофилов на действие ОВ1 в этой дозе не менялась при достижении ремиссии заболевания. При увеличении дозы агониста до 100 нмоль эффект нивелировался (Рис. 8).

□ Б спонт Н Б индуцир

3

4

5

Рис. 7. Площадь кривой спонтанной и зимозан-индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови, 5.

1- больные псориазом с давностью заболевания менее 10 лет (до лечения)

2- больные псориазом с давностью заболевания менее 10 лет (после лечения)

3- больные псориазом с давностью заболевания 11-20 лет (до лечения)

4- больные псориазом с давностью заболевания 11-20 лет (после лечения)

5- контрольная группа

* - достоверно по отношению к показателям контрольной группы

Инкубация нейтрофилов периферической крови с лекарственным препаратом "Диазепам", имеющим аффинность к ПБР [РарабороЫоэ V., 1993], в концентрации 10 мкмоль приводила к достоверному увеличению спонтанной хемилюминесценции в контроле. Кроме того, в отличие от эффектов ОВ1, этот препарат вызывал снижение параметров, характеризующих спонтанную и индуцированную хемилюминесценцию во всех группах больных (Рис. 9).

Таким образом, диазепам оказывает действие, отличающееся от эффектов ВВ1, в отношении функциональной активности нейтрофилов периферической крови у здоровых людей и у больных псориазом.

Несмотря на отсутствие видимых изменений экспрессии ПБР в нейтрофилах периферической крови, обнаруженные эффекты агонистов периферических бензодиазепиновых рецепторов в антигенпрезентирующих клетках крови при псориазе подтверждают возможную роль эндогенных лигандов этих рецепторов в регуляции иммунологических механизмов развития псориаза.

1.00 0.80 о.бо 4-п

0.40 0.20 0.00

□ исходная

□ 10 нмоль

□ 100 нмоль

Рис. 8. Площадь кривой спонтанной хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови, Б спонт., при инкубации с БВ1 (10, 100 нмоль, 90 мин).

1- больные псориазом с давностью заболевания менее 10 лет (до лечения)

2- больные псориазом с давностью заболевания менее 10 лет (после лечения)

3- больные псориазом с давностью заболевания 11-20 лет (до лечения)

4- больные псориазом с давностью заболевания 11-20 лет (после лечения)

5- контрольная группа

** - достоверно по отношению к показаниям без инкубации с лигандом ПБР

□ исходная

□ 10 нмоль

□ 10 мкмоль

Рис. 9. Площадь кривой спонтанной хемилюминесенции нейтрофилов периферической крови, Б спонт., при инкубации с диазепамом (100 нмоль, 10 мкмоль, 90 мин).

1 - больные псориазом с давностью заболевания менее 10 лет (до лечения)

2- больные псориазом с давностью заболевания менее 10 лет (после лечения)

3- больные псориазом с давностью заболевания 11-20 лет (до лечения)

4- больные псориазом с давностью заболевания 11-20 лет (после лечения)

5- контрольная группа

** - достоверно по отношению к показаниям без инкубации с лигандом ПБР

Интересно, что нейтрофилы периферической крови демонстрировали принципиально различный ответ на действие двух лигандов ГТБР - эндогенного (DBI) и экзогенного (диазепама). DBI в концентрации 10 нмоль стимулировал спонтанную и индуцированную хемилюминесценцию нейтрофилов периферической крови у больных псориазом вне зависимости от длительности и стадии заболевания. Отмечалось достоверное повышение показателя S -площади кривой хемилюминесценции. В то же время, DBI не изменял значений показателя площади кривой и снижал время выхода на максимальное значение как при спонтанной, так и при индуцированной хемилюминесценции в группе здоровых людей. Диазепам (10 мкмоль) приводил к снижению спонтанной и индуцированной ХЛ у больных, также вне зависимости от стадии и длительности заболевания. При воздействии диазепамом снижалось максимальное значение кривой хемилюминесценции. В группе контроля инкубация нейтрофилов с диазепамом приводила, напротив, к повышению спонтанной хемилюминесценции и повышению максимального значения кривой.

То есть, селективный лиганд ПБР DBI обладал индуцирующим эффектом в отношении хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови у больных псориазом, но не у здоровых людей. Диазепам оказывал ингибирующее влияние на нейтрофилы больных псориазом, но не здоровых людей. Таким образом, тестирование лекарственного препарата in vitro продемонстрировало отсутствие его селективного эффекта в отношении ПБР. Кроме того, полученные данные могут свидетельствовать о некоторых конформационных изменениях в молекуле ПБР нейтрофилов периферической крови, что влияет на связывание лигандов, при развитии патологического процесса.

Следовательно, псориаз характеризуется изменением экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов в клетках кожи и их функциональной активности в нейтрофилах периферической крови. Велика вероятность изменения функциональной активности ПБР и в кератиноцитах, с учетом полученных данных об отрицательной корреляции между интенсивностью апоптоза клеток кожи и экспрессией в них ПБР. Это подразумевает их участие в регуляции процессов пролиферации и апоптоза в коже и, тем самым, непосредственное участие в патогенезе псориаза. ПБР могут быть привлекательной терапевтической «мишенью» для модуляции жизнедеятельности ПБР-экспрессирующих клеток и воздействия на течение патологического процесса. Более того, экспрессия ПБР в кератиноцитах

является маркером интенсивности пролиферативных реакций и супрессии апоптоза в коже и, тем самым, прогноза течения заболевания.

Таким образом, в период выраженных клинических проявлений, характерных для стадии прогрессирования псориаза, происходит снижение уровня апоптоза кератиноцитов и повышение экспрессии ПБР. На фоне увеличения апоптоза кератиноцитов и снижения экспрессии ПБР происходит регресс заболевания. Функциональная активность ПБР нейтрофилов периферической крови модулируется лигандами ПБР, что позволяет их рассматривать как потенциально новый подход к терапии псориаза.

ВЫВОДЫ:

1. При псориазе в стадию прогрессирования регистрируется значительное снижение количества апоптотических кератиноцитов в участках пораженного эпидермиса как у больных псориазом с длительностью менее 10 лет, так и с длительностью заболевания от 11 до 20 лет, тогда как стадия регресса характеризуется увеличением этого параметра, при этом уровень апоптоза кератиноцитов у больных с длительностью заболевания до 10 лет превышает показатели контрольной группы, а у больных с длительностью заболевания от 11 до 20 лет соответствует показателям контрольной группы. Количество апоптотических кератиноцитов при псориазе коррелирует с уровнем лимфоцитарной инфильтрации (г= -0,90) и митотической активностью кератиноцитов (г= -0,84).

2. Для стадии прогрессирования псориаза характерно достоверное увеличение уровня экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов в клетках всех слоев эпидермиса, с преимущественно ядерной и перинуклеарной локализацией, вне зависимости от длительности течения заболевания, тогда как достижение регресса сопровождается снижением экспрессии до уровня здоровых людей у больных с длительностью заболевания от 11 до 20 лет и ниже показателей группы здоровых людей у больных с длительностью заболевания до 10 лет. Между апоптозом кератиноцитов и уровнем экспрессии ПБР прослеживается отрицательная корреляция как у больных псориазом, так и в группе контроля.

Вне зависимости от стадии процесса, при псориазе не происходит изменение экспрессии или субклеточной локализации периферических бензодиазепиновых рецепторов в нейтрофилах периферической крови больных псориазом.

3. В стадии прогрессирования псориаза отмечается увеличение спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофилов периферической крови, тогда как в стадию регресса заболевания происходит снижение этих показателей, не достигающее уровня контроля; при этом функциональная активность нейтрофилов периферической крови, оцениваемая по интенсивности «респираторного взрыва», у больных псориазом стимулируется DBI, но не диазепамом.

4. Индукция апоптоза кератиноцитов путем модуляции активности и экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов является патогенетически обоснованным подходом к терапии псориаза.

Практические рекомендации

1. Метод TUNEL может быть рекомендован к применению для оценки выраженности апоптоза в коже больных псориазом.

2. Регистрация экспрессии периферических бензодиазепиновых рецепторов в кератиноцитах может быть использована в качестве маркера степени выраженности патологического процесса при псориазе.

3. Необходимо учитывать выявленные особенности клинических и морфологических проявлений у больных с различной длительностью заболевания для коррекции проводимой терапии.

4. Хемилюминесценция нейтрофилов периферической крови у больных псориазом является скрининг-тестом для определения эффективности лекарственных препаратов in vitro.

Список основных работ, опубликованных но теме диссертации

1. Prokhorenkov V.l., Ruksha T.G., Egorova A.B., Gaidash A.A. Alterations in keratinocytes apoptosis in patients with psoriasis // Сборник тезисов IX Международного Симпозиума Российско-Японского Медицинского Обмена. - Канадзава, 2001. - С. 210.

2. Прохоренков В.И., Рукша Т.Г., Егорова А.Б., Гайдаш A.A. Морфологические особенности состояния эпидермиса у больных псориазом // Сборник тезисов городской научно-практической конференции, посвященной 40-летию Центральной научно-исследовательской лаборатории. - Томск, 2002. - С. 5859.

3. Прохоренков В.И., Рукша Т.Г., Салмина А.Б., Горбунов Н.С., Труфанова JI.B., Таксанова Е.И. Применение метода TUNEL для оценки выраженности апоптоза кератиноцитов в коже больных псориазом // Сборник научных

трудов "Актуальные проблемы морфологии". - Красноярск, 2003. - С.174-176.

4. Прохоренков В.И., Рукша Т.Г., Антонова С.К., Климова А.Д., Салмина А.Б. Экспрессия периферических бензодиазепиновых рецепторов и апоптоз кератиноцитов эпидермиса у больных псориазом // Сборник тезисов X Международного Симпозиума Российско-Японского Медицинского Обмена. - Якутск, 2003. - С. 690-691.

5. Рукша Т.Г., Салмина А.Б., Прохоренков В.И., Гайдаш A.A., Климова А.Д., Антонова С.К., Горбунов Н.С. Апоптоз и пролиферация кератиноцитов у больных псориазом с различной давностью заболевания // Клин, дерматология и венерология. - 2003. - С. 60-62.

6. Салмина А.Б., Рукша Т.Г., Савченко A.A., Труфанова JI.B. Исследование фагоцитарной активиости нейтрофилов у больных псориазом // Материалы краевой научно-практической конференции, посвященной 60-летию кафедры дерматовенерологии КГМА. - 2003. - С. 304-307.

Список сокращений

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ПБР - периферические бензодиазепиновые рецепторы

ПМЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

ХЛ - хемилюминесценция

DBI - ингибитор связывания диазепама

МРТ - митохондриальные поры

PASI - индекс оценки тяжести клинических проявлений при псориазе TUNEL - terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling - метод регистрации апоптоза, основанный на детекции фрагментов ДНК