Состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков при воздействии различных классов полициклических соединений

Черняк, Юрий Ильич

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков при воздействии различных классов полициклических соединений

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Черняк, Юрий Ильич Ангарск 2005 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков при воздействии различных классов полициклических соединений

На правах рукописи

ЧЕРНЯК Юрий Ильич

СОСТОЯНИЕ ПРОЦЕССОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ РАЗЛИЧНЫХ КЛАССОВ ПОЛИЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Иркутск — 2005

Работа выполнена в Ангарском филиале — НИИ медицины труда и экологии человека ГУ «Научный центр медицинской экологии Восточно-Сибирского научного центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук» и в НИИ биофизики Ангарской государственной технической академии Федерального агентства по образованию Министерства образования и науки Российской Федерации

Научный консультант:

академик РАМН

Колесников Сергей Иванович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Константинов Юрий Михайлович Хышиктуев Баир Сергеевич Явербаум Павел Моисеевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова

Защита состоится «2 » 2005 года в & часов на заседа-

нии диссертационного совета Д.001.054.01 при ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения Российской академии медицинских наук» по адресу: 664003, г. Иркутск, ул. Тимирязева, 16

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ «Восточно-Сибирский научный центр Сибирского отделения Российской академии медицинских наук»

Автореферат разослан « » НОЯБРЯ 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Шолохов Л. Ф.

ZocG-L 11№6G

Z267&

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Интенсивное загрязнение окружающей среды ксенобиотиками техногенного происхождения неизбежно порождает вопросы о том, в какой степени организм человека может адаптироваться к химическим нагрузкам, каковы при этом возможности организма и как их следует учитывать при регламентировании химических веществ, поиске методов диагностики и профилактики отравлений.

В процессе эволюции выработались определенные способы адаптации организма к действию ксенобиотиков (Арчаков А.И., 1983; Тиунов J1. А, 1995). Ведущую роль при этом играют метаболические механизмы, обезвреживающие липофильные токсические вещества экзогенного и эндогенного происхождения. Эти механизмы включают преимущественно три группы реакций: энзиматическую биотрансформацию ксенобиотиков при участии цитохром Р450-зависимых монооксигеназ (1-я фаза биотрансформации), конъюгацию реактивных метаболитов и гидрофильных соединений (2-я фаза биотрансформации) и антиоксищантную защиту, объединяющую антирадикальные и антипере кисные механизмы (Голиков С.Н. и со авт., 1986). Комплекс этих реакций, присущий всем живым организмам, рассматривается как универсальная биохимическая система естественной детоксика-ции. Нарушение согласованного процесса детоксикации является одним из общих механизмов токсичности и приводит к нарушению гомеостаза и развитию патологических процессов (Тиунов Л.А., 1995; Ляхович В. В. и со-авт., 1997). Принципиально, что в процессе функционирования системы возможно образование более реакционноспособных метаболитов по сравнению с исходными соединениями (Watkins Р.В., 1990), а также образование активных форм кислорода (Bast А., 1986; Kappus Н., 1993; Карузина И.И. и соавт., 1995; Lewis D.F.V., 2001). Результатом этих процессов могут быть, в частности, взаимодействия с ДНК, приводящие к мутациям (Parke D.V. et al., 1991), а также развитие окислительного стресса (Nebert D.W., Duffy J.J., 1997), являющегося основной причиной инактивации многих ферментов и повреждения внутриклеточных мембран (Тиунов Л.А., 1995). Существенно, что детоксикация и активация ксенобиотиков может происходить как на 1-й, так и на 2-й стадиях биотрансформации (Parke D.V., Obrebska-Parke M.J., 1987). Соотношение этих процессов зависит от активности изоформ ферментов биотрансформации, для которых конкретный ксенобиотик является субстратом (Гуляева Л.Ф. и соавт., 2000). Несмотря на широкий размах исследований, посвященных процессам детоксикации и пероксидации, в немногих работах названные процессы рассматривались как согласованно функционирующие звенья единой системы.

В полной мере вышеизложенное может быть отнесено к предельным полициклическим углеводородам. Данные тя^п™ ргшя т-т^ительно названного класса соединений в литературе отсутствую г.'ЧЙ» ЛМЭДННйИПфодг^иро-

БМ6ЛИ0ТЕКА

С.Пе

ОЭ юЛ '¿Uk 1 / *

вание представлений о биохимических механизмах их патогенного действия и разработку средств диагностики и профилактики интоксикаций.

С середины 90-х годов в связи с обострением проблем, связанных с воздействием на окружающую среду и человека стойких органических загрязнителей (Vallack H.W. et al., 1998), проводятся интенсивные изыскания, направленные на выявление эффективных биохимических маркеров воздействия диоксинов — особо опасных полициклических соединений (Birnbaum L.S., 1994). Одними из перспективных в этом плане являются исследования, связанные с феноменом индукции диоксинами продуктов суперсемейства генов цитохрома Р450 — CYP1A1, 1А2 и 1В1, обусловливающих активацию CYP-содержащих монооксигеназ в организме млекопитающих (Осташевский В.А и соавт., 1994; Clark G. et al., 1992; Spencer D L. et al., 1998, 1999; Masten S. et al, 1997,1998; Sibiryak D. et al., 2000; Grassman J et al, 1999,2000, 2002; Edwards T et al., 2001; Abraham К et al, 2002; Baccarelli A et al, 2004; Landi M.T. et al, 2003, 2005) Подобные разработки крайне важны, поскольку учитывают высокую межиндивидуальную вариабельность чувствительности к воздействию токсикантов и генетический полиморфизм ферментов биотрансформации ксенобиотиков (Grassman J. et al, 1998; Вавилин В.А, 2001).

Существенно, что в основе эффективного действия этой целостной системы лежат оптимальные соотношения составляющих ее компонентов Это открывает уникальные возможности для использования показателей, характеризующих состояние системы естественной детоксикации, на пути разработки подходов к методам диагностики, профилактики и терапии отравлений липофильными химическими соединениями, патогенные эффекты которых формируются за счет модификации механизмов эндогенного обезвреживай ия.

Вышеизложенное определило цель работы, заключающуюся в раскрытии закономерностей и механизмов биотрансформации ксенобиотиков в печени животных и человека при воздействии полициклических соединений для патогенетического обоснования методов диагностики, профилактики и терапии интоксикаций.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать экспериментальную модель интоксикации организма пожарных, вызванной воздействием содержащего диоксины комплекса токсических веществ (КТВ), на примере пожара на АО «Иркутсккабель».

2. Установить закономерности формирования первичных и отсроченных эффектов воздействия 2,3,7,8-тетрахлордибензо-/ьдиоксина (ТХДД) отдельно и совместно с компонентами КТВ на состояние системы биотрансформации ксенобиотиков в печени крыс и оценить возможность модифицирующего влияния КТВ на реализацию патогенных свойств ТХДД.

3. Изучить влияние предельных полициклических углеводородов (ППУ) на состояние системы биотрансформации липофильных ксено-

биотиков в печени животных в условиях in vitro и in vivo и оценить метаболизм ППУ в гидроксилирующей системе микросом печени.

4. Изучить в эксперименте на животных эффективность модификаторов микросомных монооксигеназ и антиоксидантов для профилактики и терапии интоксикаций ППУ.

5. Исследовать состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ и процессов пероксидации у лиц, контактирующих с предельными полициклическими углеводородами в производственных условиях.

6. Провести фармакокинетическую оценку активности цитохрома Р4501А2 и исследовать состояние 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков у пожарных, принимавших участие в тушении пожара на АО «Ир-кутсккабель» в 1992 г.

7. Патогенетически обосновать подходы к оценке воздействия диоксинов совместно с КТВ на организм пожарных для выделения групп риска развития отдаленных последствий их воздействия.

Научная новизна работы

Впервые показано, что компоненты комплекса токсических веществ, содержащего индукторы подсемейства CYP1A - ПАУ и классический ингибитор цитохрома Р450 — СО, в условиях раздельного и комбинированного 10-кратного воздействия не модифицировали патогенные свойства ТХДЦ, оцениваемые по активности CYP1A1 и CYP1A2 в микросомах печени экспериментальных животных ТХДД в условиях 20-кратного воздействия в дозе 0,1 мкг/кг вызывает активацию CYP1A в микросомах печени, сохраняющуюся в течение 11 месяцев.

Впервые получены данные о состоянии системы биотрансформации ксенобиотиков в печени экспериментальных животных, подвергнутых воздействию МЦП, тетрагидродициклопентадиена (ТГДЦПД) и пентацикло-декана (ПЦД). Показана возможность метаболизма изученных ППУ в полной гидроксилирующей системе микросом печени.

В специальных сериях опытов с модификаторами активности микросомных монооксигеназ и антиоксидантами впервые установлено, что метаболиты МЦП и ТГДЦПД менее, а ПЦД - более токсичны по сравнению с исходным соединением. Выявлен профилактический и лечебный эффект антиоксидантов, индукторов и ингибиторов микросомных монооксигеназ в условиях воздействия ППУ.

Впервые при обследовании персонала, контактирующего в производственных условиях с МЦП и ТГДЦПД, и в опытах на животных установлен сходный характер влияния ППУ на состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ (МОГС) и интенсивность процессов пероксидации экспериментальных животных и человека. ППУ оказывали разнонаправленное действие на состояние монооксигеназ печени и процессы пероксидации: МЦП угнетал функциональную активность МОГС при отсутствии изменений показателей процессов пероксидации, а ТГДЦПД индуцировал МОГС с последующей активацией процессов пероксидации.

Впервые использован антипирин в качестве маркера активности CYP1А2 в совокупности с определением содержания диоксинов у пожарных, подвергшихся в 1992 году воздействию содержащего диоксины комплекса токсических веществ, образовавшихся при пожаре Выявлены высокие уровни содержания диоксинов в организме, позволяющие рассматривать «шелеховских» пожарных как экспонированную диоксинами когорту Установлена связь между 3-гидроксиметилантипирином, характеризующим активность CYP1A2 метаболитом антипирина в моче, и суммарным ТВДпхдд/пхдф/пхб в сыворотке периферической крови, а также экспрессией диоксин чувствительных генов (AhR и CYP1A1).

Теоретическое и практическое значение работы

Результаты экспериментальных и клинических исследований определили значение системы биотрансформации ксенобиотиков при воздействии полициклических соединений, в значительной мере расширили представления о механизмах патогенеза и позволили обосновать подходы к изысканию методов диагностики, профилактики и терапии интоксикаций. Полученные результаты позволили установить связь между эффектами, обусловленными экспрессией диоксин чувствительных генов, с последующими системными и функциональными нарушениями у пожарных Это позволяет рассматривать активность цитохрома Р4501А2 (по результатам антипиринового теста) и экспрессию генов AhR и CYP1A1 как важные показатели для выделения групп риска по развитию отдаленных патогенных эффектов и оценки воздействия содержащего диоксины комплекса токсических веществ.

Полученные результаты использованы при подготовке пособия для врачей «Диагностика и медицинская реабилитация в отдаленном периоде профессиональной нейроинтоксикации у пожарных». Разработанные подходы оценки состояния 1-й и 2-й фаз биотрансформации ксенобиотиков в печени используются при проведении обследования пожарных в клинике АФ - НИИ медицины труда и экологии человека ГУ НЦМЭ ВСНЦ СО РАМН. Результаты обследования пожарных рекомендованы к использованию практическими врачами профильных лечебных учреждений для выработки тактики наблюдения за состоянием здоровья лиц с высоким содержанием диоксинов в организме и экспрессией генов CYP1A. Разработана и утверждена методика «Дидиклопентадиен Спектрофотометрический метод определения в моче» (утвержден Главным сан. врачом СССР, Per. № 12-91). Результаты исследований были использованы при подготовке материалов к обоснованию предельно допустимых концентраций двух ППУ в воздухе рабочей зоны (утверждены зам. главного Гос. сан. врача РФ, Per. № 3-93 и Per № 10-94).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Компоненты образовавшегося при пожаре комплекса токсических веществ существенно не модифицируют патогенное действие 2,3,7,8-тетрахлор-дибензо-/)-диоксина в условиях разработанной экспериментальной модели

2. Предельные полициклические углеводороды, тетрападродициклопен-тадиен и МЦП, сопоставимо воздействуют на состояние системы биотрансформации липофильных ксенобиотиков и процессы пероксидации животных и человека, при этом ТГДЦПД проявляет свойства индуктора фенобарбита-лового типа, а МЦП — ингибитора цитохром Р450-зависимых монооксигеназ

3. Патогенетически обоснована необходимость применения антиок-сидантов и модификаторов активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ для профилактики и лечения интоксикаций предельными полициклическими углеводородами.

4. Диоксины играют значимую роль в формировании синдромоком-плекса (токсической энцефалопатии с органическими расстройствами психики и сенсорной полиневропатией с вегетативными нарушениями конечностей) пожарных, принимавших участие в тушении пожара на АО «Ир-кутсккабель», а показатели экспрессии диоксин чувствительных генов и активность CYP1A2 являются маркерами для выделения групп риска по развитию отдаленных патогенных эффектов и оценки воздействия содержащего диоксины комплекса токсических веществ.

Апробация работы

Основные результаты работы доложены на Всесоюзной конференции «Цитохром Р450 и модификация макромолекул» (Ялта, 1989), Всесоюзной конференции «Токсикологические проблемы химических катастроф» (Ленинград, 1991), 7th International Conference «Biochemistry and Biophysics of Cytochrome P-450; Structure and Function, Biotechnological and Ecological Aspects» (Москва, 1991), Всероссийской конференции «Антигипоксанты и ак-топротекторы: итоги и перспективы» (Санкт-Петербург, 1994), 1-й Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии» (Санкт-Петербург, 1995), 14th, 15th European Workshop on Drug Metabolism (Париж, Франция, 1994; Йена, Германия, 1996), 3-й Российско-Американской встрече «Снижение опасности загрязнения окружающей среды диоксинами и защита здоровья населения» (Байкальск, 1998), Круглом столе по проблемам «шелеховского» пожара в Гарвардской Школе Общественного Здравоохранения (Бостон, США, 1999), Семинаре группы диоксинов отдела фармакокинетики Исследовательского Центра Агентства по охране окружающей среды США (Северная Каролина, США, 1999), Российской конференции с международным участием «Национальный план действий по экологически обоснованному управлению диоксинами/фуранами и диоксиноподоб-ными веществами» в рамках Проекта Программы ООН по окружающей среде и Центра международных проектов «Укрепление национального управления в области химических веществ в СНГ» (Санкт-Петербург, 2001), Всероссийской Конференции по проблеме стойких органических загрязнителей (Москва, 2002), 1-ми 2-м съездах токсикологов России (Москва, 1998 и 2003), Президиуме Восточно-Сибирского Научного Центра СО РАМН (Иркутск, 2004), 20-, 21-, 22-, 23-, 24- и 25th International Symposium on Halogenated

Environmental Organic Pollutants and POPs «Dioxin» (Монтерей, США, 2000; Кянджоу, Ю Корея, 2001; Барселона, Испания, 2002; Бостон, США, 2003; Берлин, Германия, 2004; Торонто, Канада, 2005), 6th Annual Pilot Research Project Symposium (Цинциннати, США, 2005), заседании экспертной комиссии диссертационного совета Д.001.054.01 (Иркутск, 2005)

Публикации

По материалам диссертации опубликована 61 печатная работа, в том числе 14 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ, 8 - в иностранных периодических изданиях, в двух монографиях, одном пособии для врачей и разделе монографии.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 250 страницах, иллюстрирована 47 таблицами и 20 рисунками, состоит из введения, шести глав, заключения, выводов, списка литературы из 310 источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В эксперименте объектом исследования являлись гомогенат печени, его микросомная и цитозольная фракции, моча животных, при обследовании людей — сыворотка и фракция лимфоцитов периферической крови, слюна и моча обследуемых.

Все исследования на животных проводились в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755) В экспериментах использовали белых беспородных крыс-самцов массой тела 150-200 г, выращенных в вивариях НИИ медицины труда и экологии человека и Филиала 5 ГНЦ-Институт биофизики МЗ РФ, находившихся на стандартном рационе питания.

Краткая характеристика основных серий экспериментов

1. Экспериментальные исследования с ТХДД

20-ти кратное воздействие ТХДД В работе использовали 2,3,7,8-тет-рахлордибензо-/?-диоксин фирмы «Экрос» (С-Петербург) Животные были разделены на три группы 1 — контрольная, 2 и 3 — получали ТХДД в дозах 0,1 и 1 мкг/кг, соответственно ТХДД вводили в 0,2 мл оливкового масла внутрибрюшинно 5 раз в неделю в течение месяца Животных обследовали через 1, 3, 6 и 11 месяцев после прекращения введения ТХДД

4-х кратное воздействие ТХДД. ТХДД вводили в дозе 1 мкг/кг, животных обследовали через 10, 30 и 90 суток после прекращения затравок.

Эксперимент с комплексом токсических веществ, содержащим ТХДД Животные были разделены на пять групп- 1 — контрольная, 2 и 3 — внутрибрюшинно получали ТХДД в дозах 0,02 и 0,2 мкг/кг веса тела в 0,2 мл оливкового масла соответственно. Четвертая группа животных внутрибрюшин-

но получала ТХДД в дозе 0,2 мкг/кг веса тела совместно с бенз(а)пиреном и бензантраценом в дозах 0,04 мг/кг веса тела, а затем подвергалась ингаляционному воздействию оксида углерода, винилхлорида и дибутилфталата в течение 4 часов в концентрациях 400 ± 48, 500 ± 57 и 500 ± 62 мг/м3, соответственно. Пятая группа животных подвергалась тому же воздействию, что и четвертая, за исключением ТХДД Крысы подвергались воздействию ТХД Д и комплекса токсических веществ 10-кратно, 5 раз в неделю в течение 2-х недель. Контрольные крысы получали эквивалентную дозу чистого оливкового масла. При создании экспериментальной модели интоксикации организма пожарных учитывались патогенные свойства копонентов КТВ. При выборе доз и концентраций токсикантов исходили из уровней и соотношений, которые образовывались на пожаре.

2. Экспериментальные исследования с ППУ

Работа выполнена на коммерческих образцах трех предельных полициклических углеводородов — МЦП (С10Н16), тетрагидродициклопентадиена (С10Н16) и пентациклодекана (С10Н12), имеющих широкий спектр народно-хозяйственного применения (Багрий Е.И., 1989; Кушнева В С., Горшкова Р.Б., 1999; Черняк Ю.И. и соавг., 1999).

Исследование влияния ППУ на состояние изучаемых систем и процессов в условиях in vitro. В качестве модельной системы выступала инкубационная смесь, содержащая ППУ в концентрациях от Ю-5 до 10~2 М и микросомы (5 мг белка) в 2 мл 0,1 М калий-фосфатного буфера рН 7,4. ППУ вносили в объеме ацетона, составляющего 1 % от общего объема смеси (Болдырев А.А., Мельгунов В.И., 1985). В контрольную пробу добавляли эквивалентное количество чистого ацетона. Инкубацию проводили в пробирках с притертыми пробками в течение 30 мин при 37 "С в условиях постоянного перемешивания.

Исследование влияния ППУ на состояние систем и процессов в условиях in vivo изучали в условиях однократного внутрижелудочного воздействия в растворе подсолнечного масла.

Исследование метаболизма ППУ в полной гидроксилирующей системе микросом печени Состав инкубационной смеси разрабатывали для каждого ППУ с учетом результатов опытов in vitro. Например, в опытах с МЦП реакционная смесь объемом 5 мл содержала: МЦП в конечной концентрации 5 х Ю-4 М, НАДФ-Н (2,5 мг на 1,5 мг микросомного белка), микросомы печени с содержанием 44 нмолей цитохрома Р450 в 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 7,4. Реакцию начинали добавлением НАДФ-Н в опытные пробы. Инкубацию проводили в течение 0,15, 30,60 и 120 минут (для МЦП и ТГДЦПД) и 0, 30 и 60 минут (для ПЦД) при 37 °С в условиях постоянного перемешивания, после чего реакцию останавливали добавлением 2 мл смеси, содержащей равные объемы 25 % ZnS04 и насыщенного раствора Ва(ОН)2. В опытах по исследованию метаболизма ПЦД использовали микросомы, выделенные от интактных и предварительно получавших в течение 3 суток фенобарбитал (80 мг/кг) и 20-метилхолантрен (20 мг/кг) животных.

Изучение влияния модификаторов микросомных монооксигеназ и анти-оксидантов на патогенные свойства ППУ. В качестве индукторов микросомных монооксигеназ использовали фенобарбитал и 20-метилхолантрен, ингибитора - диэтилдитиокарбамат натрия (ДТК), антиоксидантов - ионол, а-токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту, унитиол, >1-ацетилцистеин и аскотиол. Схемы введения и дозы названных препаратов подробно изложены в соответствующих разделах при описании полученных данных. Препараты вводили внутрибрюшинно в 1 мл оливкового масла (для липофиль-ных соединений), либо в 1 мл физиологического раствора. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 суток. Об эффективности используемых препаратов судили по количеству выживших животных.

Обследование персонала, контактирующего в производственных условиях с ППУ

В рамках НИР «Исследование состояния биохимических систем де-токсикации чужеродных соединений в печени лиц, контактирующих в производственных условиях с МЦП, ТГДЦПД и ДЦПД» (руководитель - к.м.н., с.н.с. Н И Портяная) проведено обследование 62 человек, имеющих контакт с МЦП (персонал был разделен на 4 группы, в зависимости от времени контакта с изучаемым углеводородом в течение рабочей смены), и 56 человек с - ТГДЦПД и ДЦПД. Контрольная группа для последних состояла из 26 женщин, сопоставимых с обследованными основной группы по возрасту, состоянию здоровья, месту работы.

Обследование пожарных, участвовавших в ликвидации пожара на АО «Иркутсккабель» в 1992 году

Первый этап обследования (1999—2002годы). Анализы у 196 пожарных проводились во время медицинского обследования в клинике НИИ медицины труда и экологии человека (главный врач - д.м.н О.Л. Лахман).

Второй этап обследования (2002—2005годы). Обследование 165 пожарных выполнено в рамках проекта «Эпидемиологическое исследование влияния воздействия продуктов горения, образовавшихся при пожаре в 1992 году на заводе «Иркутсккабель», на здоровье «шелеховских» пожарных», поддержанного грантом СЯОР11В1-2375-АМ-02 Американского фонда гражданских исследований и развития, «Программа грантов на проведение совместных исследований» (руководитель — к.б.н., с.н.с. Ю.И. Черняк).

Перед началом обследования с каждым пожарным было оформлено информированное согласие на участие в обследовании (Приказ Минздрава РФ от 19.06.2003).

В работе использовались следующие методы: 1. Выделение микросом печени методом дифференциального центрифугирования в 1,15 % растворе КС1 (Карузина И.И., Арчаков А.И., 1977) или в буфере, содержащем 250 мМ сахарозы, 1 мМ дигиотреишла, 0,5 мМ ЭДТА, 25 мМ КС1, 10 мМ Хепеса и 10 об % глицерина, рН 7,4 (БагйойеГапо М.е1а1,1996)

2. Содержание белка в гомогенате печени, в ее микросомной и цито-зодьной фракциях (Lowry О.Н. et al, 1951).

3. Определение количества цитохромов Р450 и b5 (Omura Т, Sato R, 1964).

4. Определение функциональной активности системы микросомных монооксигеназ по активности реакций N-деметилирования аминопирина (Nash Т, 1953; Портяная Н.И. идр, 1990) и/ьгидроксилирования анилина (LaDnB, 1971).

5. Определение каталитической активности CYP1A, CYP1A1 и CYP1A2 по скорости гидроксилирования 3,4-бенз(а)пирена, О-деалкилирования 7-этокси- и 7-метоксирезоруфина, соответственно (Nebert D, Gelboin Н, 1968; Santostefano М. et al, 1996).

6. Определение активности НАДФ-Н-цитохром Р450- и НАД-Н-ци-тохром Ь5-редуктаз с 2,6-дихлорфенолиндофенолом (2,6-ДХФИФ) (Dallner G, 1963).

7. Определение активности глутатион-8-трансферазы (с 1-хлор-2,4-динитробензолом) в микросомной и цитозольной фракциях гомогената печени (Habig W, Jakoby W, 1981).

8. Определение содержания глюкуронидов с карбазолом (Yuki Н, FislimanW.H, 1963), меркаптуровых кислот (Voegeli CJ, Burckart G.J, 1982; Welie R. et al, 1991) и сульфатов (Асатиани B.C., 1957; Портяная Н.И. и со-авт, 1995) в моче подопытных крыс и обследуемых лиц для оценки состояния 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков в печени.

9. Определение содержания восстановленного i духа-шона в крови пожарных, в гомогенатах печени, почек и легких животных с использованием 5,5'-дитио-бис-(2-нитробензойной кислоты) (Sedlak J, Lindsay R, 1968).

10. Интенсивность процессов ПОЛ в микросомах (серия опытов с ППУ) оценивали по содержанию ТБК-реактивных субстанций (Buege J.A, Aust S.D, 1978) и генерации супероксидных радикалов с использованием адреналина (Aust S, 1972).

11. Оксидативный стресс в гомогенате печени (серия опытов с ТХДД) оценивали по скорости восстановления цитохрома С (Slezak В. et al, 1999), по содержанию ТБК-реактивных субстанций (Slezak В. et al, 2000).

12 В гомогенате печени определяли содержание порфиринов с хлора-нилом (Birgelen A et al, 1996), в моче экспериментальных животных и пожарных определяли содержание копропорфиринов по унифицированному методу Соулсби в модификации Римингтона, количество 8-аминолевули-новой кислоты по реакции с /ьдиметиламинобензальдегидом и креатини-на (Меньшикова В. В, 1987).

13 Оценка in vivo в слюне персонала, контактирующего с ППУ, активности ферментов биотрансформации ксенобиотиков проводилось по фармакокинетике антипирина (Vesell Е, 1979; Dossing М et al, 1982; Семе-нюк А.В. и соавт, 1982; Заводник Л.Б. и соавт, 1989), интенсивности процессов пероксидации — методом Fe2+—Н202-ивдуЦируемой хемилюминесцен-ции (Переслегина И.А, 1989; Кузьмина Е.И, 1991; Хрипач Л.В, 2003).

14. В модельных опытах по изучению метаболизма ППУ и в моче обследованного персонала, контактирующего с ППУ в производственных условиях, определяли содержание МЦП (Москадынова Г.А., Минченко О.В., 1991), ТГДЦПД (Минченко О.В., 1991) и ДЦПД (Москадынова Г.А. и соает., 1991), ПОД (Орлова H.H., Боровская И.С., 1993).

15. Тонкослойная хроматография при изучении возможности метаболизма ПЦЦ в полной гидроксилирующей системе микросом печени крыс.

16. Высокоэффективная жидкостная хроматография антипирина и его метаболитов в моче пожарных (Teunissen М. et al., 1983; Рахманов И.А. и соавт., 1989, Chemyak Y.I. et al, 2005).

17. Анализ экспрессии генов AhR, CYP1A1 и CYP1B1 методом ПЦР в реальном режиме времени (Walker N.J., 2001; GrassmanJ.A. et al., 2002) с использованием RNAlater для стабилизации РНК.

18. Анализ количества диоксинов (7 полихлорированных дибензо-/>-диоксинов, 10 полихлорированных дибензофуранов и 12 полихлорированных бифенилов) в сыворотке крови пожарных в соответствии с протоколом С DC (Patterson et al, 1991).

19. Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 5.0 Результаты опытов in vitro обрабатывали с использованием критерия различия средних у выборок с попарно связанными вариантами. Расчеты фармакокинетичес-ких параметров производили по специально составленной программе. При сравнении трех групп использовали однофакторный дисперсионный анализ

— метод ANOVA Краскела-Уоллиса, при попарном сравнении групп - U-критерий Манна- Уитни с учетом поправки Бонферрони для коррекции уровня значимости р (Реброва О.Ю., 2003), критерий Колмогорова-Смирнова, критерий Вилкоксона для сопряженных пар наблюдений, а также коэффициенты корреляции Спирмена. Многофакторный регрессионный анализ проводился с использованием пакета прикладных программ SPSS 11.5.0.

Автор работы считает своим долгом выразить благодарность научному консультанту академику РАМН С.И. Колесникову за ценные советы при подготовке работы, постоянный интерес и поддержку проведенных исследований. Особая благодарность моему учителю, заведующему лабораторией токсикологической биохимии НИИ биофизики ATTA (ранее Филиала № 5 ГНЦ

- Институт биофизики МЗ РФ), Нине Ильиничне Портяной за годы плодотворного творческого сотрудничества. Автор благодарит сотрудников лаборатории биохимических исследований НИИ медицины труда и экологии человека — непосредственных участников этой большой работы — А П. Ме-ринову и H.A. Шульгину, а также всех сотрудников институтов и клиники, которые оказывали содействие и помощь в проведении исследований. Большая благодарность чл.-корр. РАМН B.C. Рукавишникову за приглашение в институт, позволившее работать по проблеме диоксинов, и.о. заведующего отдела Лимнологического института СО РАН А.Л. Верещагину за помощь в решении проблем с методом жидкостной хроматографии, д.х.н. Е.С. Бродс-

кому и к х н. А.А Шелепчикову (Институт проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН) за интересное сотрудничество при выполнении анализов на диоксины, д.м.н. В.В. Бенеманскому и к.м н. Г.Д. Хамуеву за помощь в проведении затравок животных диоксинами. Особая благодарность проф. Джин Грассман (Бруклинский колледж Городского Университета Нью-Йорка) за эффективное сотрудничество в рамках совместного проекта CRDF RBI -2375-AN-02, а также д м.н. В.М Прусакову (НИИ биофизики АГТА) и американским коллегам, Др -м Рассу Хаузеру, Ларисе Альтшуль и Дженни-фер Адиби (HSPH), Линде Бирнбаум (US ЕРА), Скотту Мастену (NIEHS) и др., за поддержку и полезные советы при работе с пожарными.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование состояние микросомных монооксигеназ в условиях

20-кратного воздействия ТХДД

Учитывая вышеизложенное, целью данного раздела исследований явилось изучение отдаленных эффектов ТХДД на состояние микросомных монооксигеназ печени крыс в условиях 20-кратного воздействия.

месяцы

- АЛ-■-АН- Д bs--X--Р450-•-БПГ

Рис. 1. Влияние ТХДД (20-кратно, доза 0,1 мкг/кг) на микросомные монооксигеназы печени крыс Результаты представлены в % к контролю, количество животных в каждой группе п = 6. АП - М-деметилаза аминопирина; АН - р-гидроксилаза анилина; БПГ - бензпиренгидроксилаза; Ь5 и Р450 - цитохромы Ь5 и Р450 * - р < 0,05,

»« _ р < о,01, *** - р < 0,001.

Из рисунка 1 следует, что воздействие диоксина в дозах 0,1 мкг/кг вызывало выраженную активацию бензпиренгвдроксилазы, характеризующую каталитическую активность цитохромов Р4501 А, и увеличение содержания цитохрома Ь5 в микросомах печени крыс. Наблюдалась четкая временная зависимость выраженности эффекта, проявляющаяся, прежде всего, в активации БПГ, которая сохранялась на протяжении всего опыта — 11 месяцев. Вместе с тем в указанных условиях воздействие ТХДД лишь однажды, спу-

стя 3 месяца после окончания затравки, вызывало активацию N-деметила-зы АП и р-гидроксилазы АН. На этом фоне не выявлено изменений содержания общего пула цитохрома Р450 и не наблюдалось сдвига в коротковолновую область спектра максимума поглощения комплекса восстановленного цитохрома с СО.

В целом результаты эксперимента находятся в согласии с данными многочисленных исследований, посвященных изучению влияния ТХДД на микросомные монооксигеназы печени Вместе с тем нами показано, что индукция БПГ, вызванная ТХД Д в условиях 20-кратного воздействия в дозе 0,1 мкг/кг, сохранялась в течение 11 месяцев (для крысы - это треть жизни).

Известно, что индукция семейства цитохромов Р4501А сопровождается образованием высокореакционных электрофильных метаболитов и активных форм кислорода. В условиях 20-кратного воздействия ТХДД на фоне индукции бензпиренгидроксилазы выявлено усиление генерации супероксидного радикала через 6 и 11 месяцев после завершения затравки.

Полученные данные о столь продолжительной и выраженной индукции микросомных монооксигеназ имеют принципиальное значение Процесс накопления диоксинов в окружающей среде, ряд последних инцидентов, сопровождавшихся выбросом или образованием диоксинов (Севезо, Южный Вьетнам, Уфа, Шелехов и др.) обусловливает необходимость установления степени реального контакта пострадавших с названными соединениями. Такую информацию, наряду с определением в биосубстратах уровней содержания диоксиноподобных соединений, могут существенно дополнять сведения о состоянии ферментов биотрансформации ксенобиотиков. Поэтому установление факта индукции цитохромов Р4501А в клетках организма может указывать на вероятность бывшего контакта с диоксинами. Такие данные заслуживают внимания и потому, что диоксины через индукцию Р450-зависимых монооксигеназ могут существенно усиливать действие канцерогенов (Клюев H.A. и соавт., 2001).

Исследование влияния ТХДД на состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков в печени крыс в условиях 4-кратного воздействия

В специальной серии опытов изучалось состояние основных систем биотрансформации ксенобиотиков в печени крыс в условиях 4-х кратного воздействия ТХДД.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что 4-х кратное введение ТХД Д в дозе 1 мкг/кг уже через 10 дней приводило к активации бензпиренгидроксилазы (в 6 раз), увеличению общего пула цитохрома Р450, активации реакций N-деметилирования аминопирина и р-гидроксилирования анилина, повышению содержания цитохрома Ь5. Отмеченные в первый срок обследования изменения состояния микросомных монооксигеназ сохранялись на протяжении всего времени наблюдения за подопытными животными (90 дней), хотя степень их выраженности постепенно снижалась.

В этих же условиях оценивали состояние 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков по содержанию глюкуроновой кислоты в гомогенате печени животных, продуктов основных реакций конъюгации в моче — глю-куронидов, меркаптуровых кислот и сульфатов.

Из рисунка 2 следует, что в изученных условиях в первые два срока обследования (через 10 и 30 дней) наблюдалось увеличение содержания меркаптуровых кислот в моче подопытных животных, что свидетельствовало об активации реакции конъюгации с БН-глутатионом. Через 90 дней после прекращения затравок содержание меркаптуровых кислот в моче снижалось практически вдвое, однако, это сопровождалось резким увеличением содержания сульфатов. Отметим, что уровень сульфатов в первый срок не отличался от контроля, а во второй - его повышение не было статистически значимым. На этом фоне уровень глюкуронадов был примерно одинаков, и только во второй срок обследования животных его повышение было значимо.

о а

к а> х

о 3 О

—♦—1 ---■- 2 —•—4 дни

Рис. 2. Влияние ТХДД (4-х кратно, доза 1 мкг/кг) на содержание в моче продуктов реакций конъюгации, а также глюкуроновой кислоты в гомогенате печени крыс 1 - меркаптуровые кислоты, 2 - сульфаты; 3 - глюкурониды (моча); 4 - глюкуро-новая кислота (гомогенат печени) Результаты представлены в % к контролю, количество животных в каждой группе п = 6. * - р < 0,05, ** - р < 0,01, *** - р < 0,001.

При этом в первые два срока обследования содержание глюкуроновой кислоты в гомогенате печени практически не отличалось от контроля (наблюдалась тенденция к ее снижению через 30 дней). Однако через 90 дней после завершения воздействия ТХДД содержание названного конъю-гирующего агента увеличивалось, и это происходило на фоне наметившейся тенденции к снижению глюкуронидов в моче подопытных животных

Таким образом, полученные данные могут быть проявлением «принципа дублирования», лежащего в основе функционирования типичных компенсаторно-приспособительных реакций, какими являются изученные реакции конъюгации (Саркисов Д.С. и соавт., 1987).

***

0 20 40 60 80 100

Исследование влияния ТХДД и содержащего его комплекса токсических веществ на состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков

Очевидно, что в реальных условиях современного химического производства или аварийной ситуации помимо диоксина человек одновременно подвергается воздействию целого ряда химических соединений Особенно это относится к пожарам, в процессе которых возможно образование десятков или сотен веществ. При пожаре на АО «Иркутсккабель» в 1992 году значительный вес имели следующие компоненты комплекса токсических веществ (КТВ): полициклические ароматические углеводороды (бенз(а)пирен и бензантрацен), а также оксид углерода, винилхлорид и ди-бутилфталат.

Целью данного раздела экспериментального исследования явилось изучение первичных и отсроченных эффектов ТХДД раздельно и совместно с КТВ на состояние микросомных монооксигеназ печени, а также оценка возможного модифицирующего действия КТВ на реализацию патогенных свойств диоксина.

контроль 0,02 мкг/кг О 2 мкг/кг О 2 мкг/кг+KTB КТВ □ -1ЕЛ-2 0-ЗЯ- И-5

Рис. 3. Первичные эффекты воздействия ТХДД и КТВ на микросомные монооксигена-зы печени крыс при их совместном и раздельном введении Приведены значения М ± m, п = 6 * - различия достоверны относительно контроля, * - относительно группы 2; * - относительно группы 3 (р < 0,05). 1, 2 - цитохром Ь5 и Р450, соответственно, данные представлены как нмоль/мг белка, 3 - активность бенз-пиренгидроксилазы, данные представлены как ед флуоресценции/мин/мг белка 4, 5 - этокси- и метоксирезоруфин-О-деалкилаза, соответственно, данные представлены как пмоль/мин/мг белка

Из рисунка 3 следует, что сразу после завершения затравки ТХДЦ и КТВ в изученных условиях оказывали выраженное воздействие на состояние монооксигеназ печени, что характеризовалось повышением содержания цитохромов Ь5 и Р450, а также значительным увеличением активности цитохромов Р450 подсемейства 1 А. Наиболее ярко это проявлялось на примере ЭРОД- и МРОД-активностей изучаемой системы, характеризующих активности CYP1A1 и CYP1A2, соответственно.

Спустя 3 месяца после окончания затравки отмечалась активация БПГ в группах животных, получавших ТХДЦ. На этом фоне не выявлено изменений содержания общего пула цитохрома Р450. Через 6 месяцев после прекращения затравок наблюдалось снижение содержания вышеназванного цитохрома у животных двух групп, получавших ТХДЦ в дозе 0,02 мкг/кг и ТХДЦ 0,2 мкг/ кг + КТВ, соответственно. В последней из названных групп эти изменения сопровождались тенденцией к снижению (р < 0,1) содержания цитохрома Ь5, статистически значимое уменьшение которого выявлено у животных, получавших только КТВ. В последний срок обследования выявлена активация БПГ и увеличение содержания цитохрома Ь5 в группе животных, получавших ТХДЦ в дозе 0,2 мкг/кг. У животных, получавших КТВ, увеличение содержания цитохрома Ь5 наблюдалось на фоне снижения содержания цитохрома Р450.

Обсуждая полученные результаты, отметим несколько моментов. Как и ожидалось, наиболее информативными показателями явились ЭРОД и МРОД. При этом наши данные для групп животных, получавших диоксин, хорошо согласуются с результатами исследований доза-активность ЭРОД (МРОД), выполненных в USEPA (Santostefano М J et al, 1996). Это, в свою очередь, свидетельствует о достижении одного из ключевых эффектов, по которому оценивается патогенное действие диоксина (WhítlockJ., 1999; De Vito M.J., Birnbaum L.S., 2001) В то же время нам удалось выявить активацию БПГ через 11 месяцев после окончания затравки диоксином в дозе 0,2 мкг/кг (суммарная доза ТХДД 2 мкг/кг), как это мы наблюдали ранее. При этом названный показатель оказался информативным во второй срок обследования даже при дозе 0,02 мкг/кг (суммарная доза ТХД Д 0,2 мкг). Выявленное в последние сроки обследования снижение содержания цитохрома Р450 может быть объяснено последствием длительной индукции гемопротеидов, которая может приводить к самоинактивации последних (Карузина И И и соавт , 1995).

Сопоставление результатов для групп, получавших ТХД Д в дозе 0,2 мкг/ кг раздельно и совместно с КТВ, указывает на то, что совместное воздействие токсикантов оказывало наибольшее влияние на содержание цитохрома Р450. Отмечено выраженное снижение содержания названного гемопро-теида в первые три срока обследования у крыс, получавших ТХДД совместно с КТВ, относительно группы животных, получавших только ТХДД. На этом фоне не наблюдалось каких-либо изменений активностей CYP1 А. Следует отметить, что индуцирующее влияние КТВ на микросомные моноок-сигеназы проявлялось только в первые сроки обследования (исключение — увеличение содержания цитохрома Ь5 в последний срок снятия показателей).

Совместное воздействие ТХДЦ и КТВ вызывало более продолжительную индукцию микросомных ферментов в печени экспериментальных животных по сравнению с таковыми, подвергнутыми воздействию только КТВ

В указанных условиях выявлены первичные эффекты воздействия ТХДД и КТВ (в условиях раздельного и совместного воздействия) на состояние 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков, что проявлялось в увеличении содержания глюкуронидов в гомогенате печени и активации цитозольной глутатион-8-трансферазы. При этом сравнение групп животных не обнаружило значимых отличий содержания в моче продуктов основных реакций конъюгации. В последующие сроки отмечены единичные изменения изучаемых показателей (только для групп животных, получавших диоксины). При этом дважды КТВ усиливал эффект ТХДД - повышение содержания сульфатов в моче и глюкуронидов в гомогенате печени через 3 и 6 месяцев после завершения затравки, соответственно

Исследование первичных и отсроченных эффектов ТХДД и КТВ на состояние процессов пероксидации в гомогенате печени и ее микросом-ной фракции выявило единичные изменения изученных показателей. Спустя 6 и 11 месяцев после прекращения воздействия у животных, получавших ТХДД + КТВ, выявлено увеличение содержания SH-глутатиона по сравнению с животными, получавшими только ТХДД в эквивалентной дозе Эти изменения отмечены на фоне тенденции к снижению содержания ТБК-реактивных субстанций в группе ТХДД+КТВ относительно ТХДД в течение всего эксперимента и были наиболее выражены в конце опыта (t = 2,09) Такие данные могут указывать на то, что комплекс соединений, вероятно, способен оказывать влияние на накопление конечных продуктов ПОЛ в условиях совместного воздействия с ТХДД Однако это предположение требует дополнительного экспериментального подтверждения.

Сопоставление полученных результатов для групп животных, получавших ТХДД отдельно и совместно с КТВ, в трех случаях выявило признаки влияния КТВ на состояние порфиринового обмена, обусловленное воздействием ТХДД. Это выражалось в увеличении уровня порфиринов печени, а также в снижении содержания копропорфиринов и 5-AJIK в моче через 6 и 11 месяцев после прекращения затравки, соответственно.

В целом полученные данные свидетельствуют о том, что содержащий ТХДЦ комплекс токсических веществ существенно не модифицировал патогенное действие диоксина, оцениваемое по активности цитохромов Р4501А. В то же время результаты экспериментов указывают на то, что в отдельных случаях компоненты комплекса были способны модифицировать влияние ТХДД на состояние других изученных систем и процессов.

Влияние ППУ на состояние монооксигеназной системы и процессы пероксидации в микросомах печени крыс в условиях in vitro и in vivo

Для понимания механизмов развития обозначенных выше эффектов необходимо детальное исследование состояния систем биотрансформации ксенобиотиков и связанных с ними процессов. Такой подход был реа-

лизован нами на примере исследования влияния на названные системы трех синтетических предельных полициклических углеводородов — МЦП, тетрагидродициклопентадиена и пентациклодекана.

Выяснению особенностей влияния изучаемых предельных полициклических углеводородов непосредственно на состояние монооксигеназной системы и процессы пероксидации в микросомах печени крыс были посвящены опыты in vitro.

Показано, что в широком диапазоне концентраций изучаемые соединения оказывали непосредственное действие на состояние микросомных мо-нооксигеназ Установлено, что наиболее выраженные изменения выявлены при воздействии углеводородов в наибольшей концентрации Ю-2 М. Наблюдалась четкая зависимость выраженности эффектов от концентрации веществ. Следует отметить, что МЦП угнетал активность системы в диапазоне всех изучаемых концентраций (10~5-10 2 М), а для ТГДЦПД и ПЦ Д границы ин-шбирования наблюдались при воздействии Ю-3 и Ю-4 М соответственно. Наиболее чувствительными явились показатели, характеризующие функциональную активность системы в целом — N-деметилирование аминопирина (АП) и/>-гидроксилирование анилина (АН). Факт угнетения активности системы в концентрации Ю-5 М свидетельствует о проявлении специфического действия МЦП. Существенно, что угнетение метаболизма АП и АН наблюдалось даже тогда, когда уровень цитохрома Р450 практически не отличался от контроля, и, таким образом, снижение активности микросомных монооксигеназ не могло бьггь связано с механизмами инактивации цитохрома Р450 в гидроксилазных реакциях (Карузина И.И. и соавт., 1995). Учитывая липотропные свойства изучаемых соединений, а также снижение активности редуктаз цитохромов Р450 и Ь5 (по данным для МЦП и ТГДЦПД), можно предположить вмешательство углеводородов в фосфолипидное окружение микросомальных ферментов и нарушение тем самым каталитически активной конформации цитохрома Р450.

Обращает внимание увеличение содержания цитохрома Ь5 в пробах с высоким содержанием углеводородов. Причем это увеличение отмечено на фоне снижения других показателей, характеризующих состояние микросомных монооксигеназ Возможные причины разнонаправленного влияния исследуемых соединений на цитохромы Р450 и Ь5, а также увеличение содержания последнего, по-видимому, можно связать с особенностями пространственного расположения названных цитохромов в мембране эндо-плазматического ретикулума. Оба фермента являются мембраносвязанными белками. Однако если цитохром Ь5 лишь меньшим по своим размерам доменом погружен в мембрану эндоплазматической сети (больший гидрофильный домен находится в полярной фазе), то цитохром Р450 может вообще находиться внутри липидного бислоя. Есть основания предполагать, что липофильность изучаемых веществ имела принципиальное значение для реализации данного эффекта В аналогичных условиях эксперимента нами установлено, что гидразин и метилгидразин (соединения с выраженными гидрофильными свойствами) в концентрации 10~3 М вызывали однонаправленное воздействие на оба цитохрома, которое выражалось в сни-

жении их содержания (Портяная Н.И. и соавт, 1994, 2005). Вероятно, изложенные выше особенности и предопределили поведение фермента при воздействии ГТПУ. Следует отметить, что цитохром Ь5 долгое время остается наименее изученным звеном микросомных монооксигеназ

В следующей серии опытов in vivo в условиях острого в/ж воздействия МЦП, ТГДЦПД и ПЦД было изучено состояние исследуемых систем и процессов, а для ПЦД выполнена попытка реализации системного подхода, позволяющего оценить состояние всех взаимосвязанных звеньев: цитох-ром-Р450 зависимых монооксигеназ (1-я фаза биотрансформации), процессов конъюгации (2-я фаза биотрансформации) и пероксидации

В условиях острого воздействия МЦП (8000 мг/кг) наблюдалось снижение показателей, характеризующих состояние микросомных монооксигеназ Исключение составил цитохром Ь5, содержание которого было увеличено к концу 3-х суток эксперимента. Воздействие ТГДЦПД в аналогичных условиях (8000 мг/кг), напротив, вызывало индукцию системы, которая выражалась в увеличении количества микросомного белка, содержания ци-тохрома Р450, а также в повышении скорости гидроксилирования субстратов 1-го и 2-го типа (АП и АН), активации НАДФ-Н-цитохром Р450 редук-тазы (табл. 1). Таким образом, в изученных условиях ТГДЦПД проявлял свойства индуктора фенобарбиталового (ФБ) типа.

Таблица 1

Состояние микросомной монооксигеназной системы печени крыс в условиях однократного воздействия ТГДЦПД (в/ж 8000 мг/кг)

Сроки обследования животных

Показатель 1 сутки 3 сутки

контроль опыт контроль опыт

Микросомный белок 5,70 ± 0,26 5,87 ± 0,30 4,80 ± 0,22 7,21 ± 0,23*

Содержание цитохрома Р450 0,54 + 0,03 0,87 + 0,04* 0,66 + 0,02 1,52 + 0,09*

N-деметилирование аминопирина 4,57 + 0,29 7,76 ±0,24* 6,08 + 0,31 15,05 + 1,07*

р-гидроксилирование анилина 0,63 ± 0,03 1,01 ± 0,05* 0,51 ±0,02 1,35 ±0,08*

Активность цитохром Р450-редуктазы 71,0 + 3,6 72,5 ±3,1 71,2 ±3,1 93,8 ± 5,3*

Примечание приведены величины М±т, достоверные отличия обозначены *, р < 0,05, п = 10-12 Показатели выражены как мг на мл микросомной суспензии, нмоль на мг белка, нмоль формальдегида в мин на мг белка, нмоль р-аминофенола в мин на мг белка, нмоль восстановленного 2,6-ДХФИФ в мин на мг белка, соответственно

В опытах с ПЦД (1000 мг/кг) была также выявлена его способность индуцировать систему микросомных монооксигеназ печени крыс, что выражалось в увеличении характеризующих ее показателей, особенно в 1-е и 3-й сутки после начала опыта. При этом факт увеличения содержания цитохрома Р450 и скорости гидроксилирования его субстратов на фоне повышения мик-

росомного белка (3 сутки) и активации редуктазы назван} того гемопротевда в следующий срок обследования (7 сутки), позволяет, видимо, отнести ПЦЦ в изученных условиях к индукторам ФБ-типа. Однако выраженность индуцирующего эффекта у ПЦЦ была значительно ниже, чем у ТГДЦПД

Таким образом, изучаемые углеводороды оказывали в сопоставимых условиях эксперимента различное влияние на состояние микросомной монооксигеназной системы. Особенно интересны в этом плане различия между МЦП и ТГДЦПД, поскольку эти углеводороды имеют одну эмпирическую формулу — С10Н16, но различное строение.

В изученных условиях ПЦД оказывал влияние на процессы конъюгации, что проявлялось в снижении содержания восстановленного глутатиона и глюкуроновой кислоты в гомогенате печени, которое сопровождалось активацией в микросомах печени глутатион-В-трансферазы, катализирующей реакции конъюгации с глутатионом. Параллельно была проведена оценка состояния 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков по содержанию в моче животных продуктов трех основных реакций конъюгации — глюкуронидов, меркаптуровых кислот и сульфатов Установлено, что выявленное снижение конъюгирующих агентов в гомогенате печени сопровождалось резким увеличением содержания в моче животных продуктов конъюгации с глюкуроновой кислотой и глутатионом. Содержание глюкуронидов в моче через сутки после затравки в 13,9 раз превышало их значение в контроле. Полученные результаты демонстрируют согласованность функционирования фаз биотрансформации ксенобиотиков. ПЦД, вступая в реакции гидроксилиро ван и я, катализируемые цитохромами Р450, индуцирует последние. В этих условиях одновременно индуцируется система конъюгации, обеспечивающая эффективное взаимодействие гвдроксилированных субстратов с конъюгирующими агентами, обеспечивая непосредственный процесс детоксикации.

В целом результаты опытов in vivo свидетельствуют о том, что в условиях проведенных экспериментов изучаемые углеводороды оказывали влияние на состояние всех звеньев системы биотрансформации липофильных ксенобиотиков и сопряженных с ними процессов.

Исследование метаболизма ППУ в полной гидроксилирующей

системе микросом печени крыс

Известно, что биотрансформация липофильных ксенобиотиков осуществляется при участии микросомных монооксигеназ, центральным звеном которых является цитохром Р450. Результаты опытов in vitro и in vivo свидетельствуют о том, что изучаемые предельные полициклические углеводороды оказывали влияние на состояние системы, однако не позволяют судить об их способности метаболизироваться при ее участии. Как показали наши опыты с гидразинами, липофильные соединения, не являющиеся субстратами для названной системы, также способны оказывать влияние на ее компоненты (Портяная Н.И. и соавт., 2005).

В специальной серии опытов была показана возможность метаболизма МЦП, ТГДЦПД и ПЦД в полной гидроксилирующей системе микросом печени крыс. Что касается МЦП, то нами установлена возможность его деметилирования в системе микросомных монооксигеназ, о чем свидетельствовало образование формальдегида (рис. 4). Установление возможности деметилирования МЦП при участии микросомных монооксигеназ, вероятно, объясняет высокую чувствительность N-деметилазы антипирина при воздействии данного ППУ в условиях in vitro. Оба субстрата могут конкурировать за активный центр изоформ цитохромов Р450, катализирующих данную реакцию.

время инкубации, мин

500 мкмоль МЦП в пробе —□—100 мкмоль МЦП в пробе

Рис. 4. Динамика накопления формальдегида в процессе деметилирования МЦП в микросомной монооксигеназной системе печени крыс Инкубационная смесь объемом 1 мл содержала МЦП в концентрациях 5 х 10~4 и 10 4 М, микросомы (5 мг белка), 40 мМ трис НС1 буфер рН 7,6, 16 мМ МдС12, 10 мМ надф'н Остановку реакции и определение образовавшегося формальдегида проводили как при оценке М-деметилазной активности аминопирина.

Учитывая специфику функционирования микросомных монооксигеназ, можно предположить, что метаболизм ТГДЦПД начинается с его гидро-ксилирования с образованием оксипроизводного углеводорода, которое подвергается дальнейшему окислению в данной системе, как это показано, например, для циклогексана (Караскевич Е.И. исоавт., 1989). Не исключено, что дальнейшее окисление оксипроизводных МЦП и ТГДЦПД будет сопровождаться разрывом циклов и образованием метаболитов с открытой цепью.

В серии опытов с ПЦД было использовано несколько видов микро-сом. Наиболее выраженные результаты были получены при использовании микросом крыс, предварительно получавших фенобарбитал. Полученные данные свидетельствовали о том, что в реакционных пробах в присутствии НАДФ-Н происходило снижение содержания ПЦД, которое составило 64,8 %

за первые 30 минут. При этом скорость метаболизма названного ППУ составляла 5,7 мкг/мин или 0,159 мкг/мин х нмоль цитохрома Р450.

Яркой демонстрацией возможности метаболизма ПЦЦ при участии микросомных монооксигеназ явились результаты тонкослойной хроматографии. Установлено, что в процессе инкубации микросом (особенно, ФБ-микросом) с ПЦЦ в присутствии НАДФ-Н в пробах наблюдалось уменьшение пятна ПЦЦ = 0,53 и образование пятен метаболитов со значениями = 0,4 и 0,47. Следует отметить еще один важный результат, полученный в ходе данного опыта. Предварительное введение животным ФБ ускоряло метаболизм ПЦЦ в микросомах печени, а, значит, усиливало синтез изоформ цитохрома Р450, участвующих в биотрансформации данного углеводорода. На основании полученных результатов можно полагать, что метаболизм ПЦЦ осуществляется преимущественно при участии изоформ цитохрома Р450 ФБ-типа (подсемейство СУР2В), в результате чего образуются гидроксилированные метаболиты, способные взаимодействовать в дальнейшем с конъюгиру-ющими агентами 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков.

Полученные данные имеют принципиальное значение, так как дают основания для рациональной регуляции метаболизма изучаемых соединений в целях снижения их токсического действия.

* Í

t»

t «

i t ! »

1 2 3 4 1 2 3 4

ABC Рис. 5. Хроматограммы на пластинках Silufol гексанового экстракта суспензии интак-тных (А), ФБ- (В) и МХ- микросом (С) печени крыс после инкубации с ПЦД в концентрации 5 х 10-4 М Система растворителей - этилацетат. гексан' бутанол-1 (8 12' 0,5) 1, 2, 3 - гексановые экстракты суспензии микросом с ПЦД через О, 30, 60 минут инкубации, соответственно; 4 - свидетель - ПЦД.

Такой подход к проблеме был реализован в экспериментах по исследованию эффективности модификаторов МОГС и антиоксидантов на выживаемость крыс, подвергнутых воздействию ППУ.

Изучение влияния модификаторов МОГС и антиоксидантов на токсические свойства ТГДЦПД

В предыдущих разделах работы было показано, что ТГДЦПД и ПЦД проявляли свойства индуктора микросомных монооксигеназ ФБ-типа. Такие данные позволяли предполагать, что предварительное введение ФБ будет сопровождаться синтезом изоформ цитохрома Р450, участвующих в метаболизме данных углеводородов, и ускорением их биотрансформации, как это было, например, в опытах с ПЦД. При этом можно было ожидать снижение числа погибших животных, подвергнутых воздействию ППУ. Однако необходимый эффект от предварительного введения ФБ был достигнут для ТГДЦПД (11000 мг/кг) и, что несколько неожиданно, для МЦП (7500 мг/кг). Предварительное введение ФБ предотвращало гибель животных, получавших названные углеводороды в средних смертельных дозах (табл. 2). Использование диэтилдитиокарбамата натрия (ингибитора микросомных монооксигеназ) по аналогичной схеме приводило к увеличению числа погибших животных. Такие данные свидетельствуют о том, что ТГДЦПД и МЦП более токсичны по сравнению с продуктами их биотрансформации.

Таблица 2

Профилактическая эффективность модификаторов микросомных монооксигеназ4 для животных, подвергнутых однократному внутрижелудочному воздействию ППУ3

Модификатор МОГС ППУ Кол-во животных в группе, опыт/контроль Число погибших животных, опыт/контроль

Фенобарбитал, 80 мг/кг МЦП 10/10 0/6

Фенобарбитал, 80 мг/кг ТГДЦПД 25/25 1/5

Диэтилдитиокарбамат N8, 250 мг/кг ПЦД 10/10 0/5

Примечание:А - ФБ и ДТК вводились в/бр ежедневно в течение 3-х дней в указанных дозах, после чего вводили ППУ в - ППУ вводили в дозе 7500, 11000 и 2000 мг/кг для МЦП, ТГДЦПД и ПЦД, соответственно.

В случае с ПЦД (2000 мг/кг) предварительное введение ДТК сопровождалось абсолютной выживаемостью животных В то же время предварительная ФБ-индукция не изменяла токсические характеристики данного углеводорода, а МХ-индукция несколько увеличивала число погибших животных по сравнению с контролем. Такие данные указывают на то, что метаболиты ПЦД более токсичны по сравнению с исходным соединением.

Известно, что между процессами биотрансформации и пероксидации существует тесная взаимосвязь. При этом последние играют значимую роль в реализации патогенного действия ксенобиотиков. Применение адекватных антиоксидантов при интоксикациях может рассматриваться как своеобразный фармакологический зонд, позволяющий оценить значимость оксида-тивных проявлений в механизме действия того или иного ксенобиотика (Тиунов Л.А, 1995). В соответствующих разделах работы была установлена спо-

собность изучаемых ППУ активировать процессы свободно-радикального окисления, которая определила целесообразность испытания антиоксидан-тов в условиях однократного воздействия ТГДЦПД, МЦП и ПЦЦ.

С этой целью были использованы различные лекарственные препараты и различные схемы их применения относительно времени воздействия изучаемыми углеводородами. В сериях опытов с МЦП (4000 мг/кг) лечебный эффект, позволяющий несколько снизить число погибших животных, удалось получить при введении а-токоферола в дозе 200 мг/кг через 20 мин после отравления. Использование комплекса, содержащего а-токоферол (200 мг/кг), аскорбиновую кислоту (50 мг/кг) и унитиол (5 мг/кг), было максимально эффективно при введении животным через 20 мин после воздействия ТГДЦПД в дозе 11000 мг/кг. Применение ионола (200 мг/кг за сутки, за 30 мин и спустя сутки о тносительно введения ПЦД в дозе 2000 мг/кг) значительно снижало количество погибших животных.

Нами было уделено особое внимание N-ацетилцистеину (АЦЦ) — метаболическому предшественнику восстановленного глутатиона, за счет которого может быть достигнуто увеличение уровня эндогенного SH-глута-тиона и повышение, таким образом, эффективности системы детоксикации и антиоксидантной защиты (Traber J et al., 1992). В специальной серии опытов нами установлено, что максимальная концентрация SH-групп у мышей, получавших АЦЦ в дозе 1000 мг/кг наблюдалась через 10 минут после введения и наиболее высокой была в легких и почках В опытах с ПЦД показано, что эффективность АЦЦ была сопоставима с таковой для а-токоферола. Имеются данные о том, что ббльшая эффективность АЦЦ может быть реализована в условиях его д лительного применения (Гонский Я.И. и соавт., 1995).

В целом результаты исследования эффективности модификаторов мик-росомных монооксигеназ и антиоксидантов на выживаемость крыс, подвергнутых острому отравлению полициклическими углеводородами, свидетельствуют о важной роли микросомных монооксигеназ и процессов перокси-дации в реализации патогенного действия изученных соединений.

Обследование персонала, контактирующего в условиях

производства с ППУ

Принимая во внимание исключительную роль цитохром Р450-зависи-мых монооксигеназ, как в метаболизме изучаемых углеводородов, так и в механизмах реализации их патогенного действия, становилась очевидной актуальность проведения исследования состояния основных систем детоксикации у людей, контактирующих с ними в производственных условиях.

С этой целью было проведено обследование 62 человек, контактирующих с МЦП, направленное на интегральную оценку состояния печеночных монооксигеназ (фармакокинетический подход), интенсивности процессов пероксидации, уровня содержания МЦП в организме. Персонал был разделен на 4 группы, в основе этого разделения лежало время контакта с изучаемым углеводородом в течение рабочей смены. Полученные данные

о наличии углеводорода в моче ряда обследованных из контрольной группы потребовали изменения принципа формирования групп.

Особый интерес представляло рассмотрение состояния изучаемых систем и процессов у лиц, контактирующих с МЦП, в зависимости от стажа работы на предприятии Обследованный персонал был разделен на две группы. Первую из них составили лица, проработавшие на предприятии до 15 лет (средний стаж составил 9,9 года) Во вторую группу вошли сотрудники со стажем более 15 лет (средний стаж на данном предприятии составил 26,6 года). Выявлено снижение активности детоксицирующей функции печени у лиц второй группы, что проявилось в увеличении периода полувыведения антипирина и снижении клиренса его элиминации. На этом фоне отмечалась тенденция к активации процессов пероксидации, на что указывали результаты хемшпоминесцентного анализа.

Таблица 3

Изменение изучаемых показателей А< в у лиц, контактирующих с МЦП, в зависимости от возраста и стажа

Возраст, | лет 1 Стаж работы, лет Т м Н С £ Н ^ 2 о 0 I, абс. ед. имп. за мин. Содержание МЦП в моче, мкг на мл

20-30 п = 3 8,67 ± 5,77 9,43 ± 5,32 80,11 ± 14,25 116,23 ± 49,78 105,0 ± 29,3 2104 ± 682 0,038 ± 0,024

31-40 п = 8 10,75 ± 3,62 11,43 ± 1,16 84,22 ± 9,28 85,71 ± 14,08 113,6 ± 40,4 2476 + 1027 0,019 ± 0,023

41-50 п = 8 21,88 ± 5,60 14,95 ± 3,05** 78,26 ± 17,05 61,27 ± 11,68** 110,2 ± 48,6 2495 ± 1250 0,030 + 0,023

51-60 п = 7 27,29 ± 11,14 14,73 ± 2,65** 72,83 ± 11,56 57,87 ± 14,87** 106,6 + 40,8 2431 ± 1000 0,041 ± 0,026

Примечание: приведены величины М ± вЭ, достоверные отличия с группой 1 обозначены *, с группой 2 - * при р < 0,05, п - число обследованных. А - приведены следующие фармакокинетические показатели (слюна): Т1/2 - период полувыведения, V, - кажущийся объем распределения, СЦ - клиренс элиминации АР в - приведены следующие показатели хемилюминесценции слюны- I - интенсивность ХЛ, £ - светосумма ХЛ

Объясняя возможные причины снижения активности МОГС у лиц со стажем работы более 15 лет, следует обратить внимание на два момента. Во-первых, выявленное снижение могло быть связано с возрастными особенностями изменений изучаемой системы. Имеются литературные данные (Вави-лин В.А., 2001) о наличии четкой отрицательной корреляции (г — —0,64) между клиренсом антипирина и возрастом у мужчин, которые в нашем случае представляли обследованный коллектив. С другой стороны, снижение активности МОГС могло быть следствием воздействия МЦП, поскольку в эксперименте на животных названный углеводород проявлял свойства ингибитора цитох-ром Р450-зависимых монооксигеназ. В связи с этим нами был предпринят

анализ зависимости полученных результатов от возраста и стажа для 26 некурящих мужчин, у которых были измерены все изучаемые показатели (табл. 3).

Возрастная специфика обследованных лиц выразилась в том, что 1-я группа (20-30 лет) состояла только из 3-х человек. Остальные сотрудники достаточно равномерно распределились по другим возрастным группам' 31—40 лет — 8 человек; 41—50 лет — 8 человек и 51—60 лет — 7 человек. Полученные данные демонстрируют существование взаимосвязи между возрастом и стажем с одной стороны и показателями, характеризующими состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ, с другой стороны. Примечательно, что снижение показателей, отражающих активность МОГС на фоне увеличения возраста-стажа, сопровождалось тенденцией (статистически не достоверно) к накоплению МЦП в моче обследованного персонала. Исключение составляет 1-я группа, в которую вошли лишь 3 человека, что не позволяет объективно трактовать полученные для нее данные.

Оценивая результаты корреляционного анализа можно судить о том, что связь стажа работы была также существенной, но менее выраженной по сравнению с возрастом Об этом свидетельствуют коэффициенты корреляции, которые для зависимости от возраста и стажа контакта с МЦП составляли 0,557 и 0,394, а для зависимости CL, —0,642 и -0,426, соответственно.

Таким образом, проведенное обследование указывает на наличие угнетения монооксигеназной системы печени обследованных с увеличением стажа работы, что позволяет рассматривать данные изменения как следствие влияния МЦП. При этом у обследованного контингента не удалось выявить значимых изменений показателей, характеризующих интенсивность перекисных процессов, оцененных методом Ре2+-Н202-индуцированной хемилюминесценции слюны. Принципиально, что угнетение цитохром Р450-зависимых монооксигеназ сопровождалось тенденцией (статистически не достоверно) к увеличению содержания МЦП в моче обследованных.

Результаты обследования персонала, контактирующего в условиях производства с ТГДЦПД и дициклопентадиеном (ДЦПД) представлены на таблице 4.

Выявлены существенные изменения изучаемых показателей у обследованного персонала относительно контрольной группы. Наиболее чувствительным показателем, характеризующим состояние монооксигеназ печени, явился объем кажущегося распределения антипирина. Известно, что увеличение названного показателя на фоне тенденции к возрастанию периода полувыведения можно трактовать как признак активации системы (Каркищенко H.H., Хоронько В.В., 1981). На этом фоне во всех группах выявлено увеличение содержания глюкуронидов в моче обследованных. Полученные результаты позволяют отметить два момента. Во-первых, такие данные являются подтверждением согласованного функционирования обеих фаз биотрансформации ксенобиотиков, а также подтверждают известный факт, что индукторы фенобарбиталового типа являются индукторами реакции конъюгации с глюкуроновой кислотой (Siest G et al., 1989). Во-

вторых, это свидетельствует о том, что конъюгация с глюкуроновой кислотой реально задействована в метаболизме ТГДЦПД

Таблица 4

Состояние изучаемых показателей А, В у обследованного персонала

в зависимости от преимущественного контакта с ТГДЦЩ Г иДЦПД

а с с >. а. у ¡5 к С > г X Л* о В £ X >х „вГОц ® о £ 2 1 « Я х о 1 X |нп 5 | 5 | Е - * 5 о ю га X X 5 в « с X м о о * о 1 я 2 1 $ Ш СГ 1- О ^ 2

Контроль 12,04 ± 3,42 50,5 ± 10,9 51,7 ± 18,7 0,24 ± 0,12 214 ± 59 4928 ± 1639 Не обнаружен

П = 26 п = 26 п = 26 п = 9 п = 19 п = 19 п = 9

Общая группа 13,82 ± 3,94 67,4 ± 14,8* 61,2 ± 23,4 0,49 ± 0,29* 265 ± 98 6331 ± 2602* 0,50 ± 0,70

п = 30 п = 30 п = 30 п = 32 п = 33 п = 33 п = 25

Группа 1 ТГДЦПД 13,76 ± 3,80 67,7 ± 13,4* 60,3 ± 15,9 0,49 ± 0,21* 247 ± 70 5881 ± 1975 0,62 + 0,83

П = 16 п = 16 п = 16 п = 18 п = 19 п = 19 п = 14

Группа 2 ТГДЦПД + дцпд 13,88 ± 4,27 67,1 ± 16,8* 62,3 ± 30,5 0,48 ± 0,34 290 ± 120* 6941 ± 3252* 0,35 ± 0,53

П = 14 П = 14 п = 14 п = 14 п = 14 п = 14 п = 11

Примечание: приведены величины М ± БО, достоверные отличия обозначены * при р < 0,05, п - число обследованных 4 - приведены следующие фармакокинетические показатели (слюна)' 1 - период полувыведения, V - кажущийся объем распределения, СЦ - клиренс элиминации АР в - приведены следующие показатели хемилюминесценции слюны' I - интенсивность ХЛ, £ - светосумма ХЛ

Результаты обследования свидетельствуют об активации процессов пе-роксвдации у лиц, контактирующих с ТГДЦПД и ДЦПД. Практически во всех обследованных группах, сформированных как по стажу работы, так и в зависимости от углеводорода, с которым имелся преимущественный контакт, выявлена активация названных процессов. При этом наибольшие изменения отмечены в группе со стажем работы 6-10 лет, а также среди лиц, имевших контакт с обоими углеводородами. Выявлена тенденция (статистически не достоверно) к снижению содержания ДЦПД в моче обследуемых в зависимости от стажа работы Можно предположить, что длительное индуцирующее действие данных углеводородов способствовало увеличению скорости биотрансформации названного углеводорода.

В целом результаты проведенных обследований свидетельствуют о влиянии изученных предельных полициклических углеводородов на состояние основных систем детоксикации чужеродных веществ и процессы пероксида-ции у персонала, длительно контактирующего с ними в условиях производства. При этом, как и в эксперименте, несмотря на принадлежность названных соединений к одному классу химических веществ, они оказывали разнонап-

равлешюе действие на состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ и процессов пероксвдации. В частности, если улиц, контактирующих с М ЦП, наблюдалось увеличение периода полувыведения и угнетение клиренса элиминации антипирина (угнетение функциональной активности МОГС) на фоне отсутствия изменений показателей процессов пероксвдации, то у персонала, подверженного воздействию ТГДЦПД и ДЦПД, отмечено увеличение объема кажущегося распределения и тенденция к возрастанию клиренса элиминации антипирина (индукция МОГС) при значительной активации реакции конъюгации с глюкуроновой кислотой и процессов пероксвдации

Полученные данные, подтверждающие результаты экспериментальных исследований, позволяют обоснованно подойти к вопросу профилактики последствий контакта работающих с ТГДЦПД и ДЦПД. Было бы чрезвычайно полезно, чтобы персонал, имеющий контакт с названными соединениями, получал антиоксиданты. Опыт эффективной реализации антиок-сидантной терапии на предприятиях имеет место и позволяет значительно снизить общую заболеваемость среди работающего на нем персонала (Иванов В.В., Тарских М.М., 1989; Кесова И Г., Цырлов И.Б., 1991). Наиболее предпочтительным будет применение с этими целями а-токоферола, аскорбиновой кислоты и унитиола, комплекс из которых был наиболее эффективен в опытах на животных, подвергнутых воздействию ТГДЦПД.

Ограниченное использование в профилактических целях модификаторов активности монооксигеназ печени (Богуш Т.А. и соавт., 2002), к сожалению, не позволяет рекомендовать их без дополнительных исследований для персонала, контактирующего с МЦП. Необходимо осуществлять контроль состояния МОГС, чтобы, по возможности, минимизировать контакт с ППУ для лиц, имеющих низкую активность системы (медленный метаболизм препарата). Это, в известной степени, защитит таких людей от большего угнетения функциональной активности детоксицирующей функции печени.

Установление возможной роли диоксинов в нарушениях здоровья

пожарных, участвовавших в ликвидации пожара на АО «Иркугсккабель»

В условиях реальных аварий или пожаров имеет место воздействие многокомпонентных комплексов, состав которых во время воздействия изучить не представляется возможным из-за широкого спектра образующихся соединений и аналитических возможностей лабораторий. При этом подходы к изучению системы могут быть продиктованы как информацией о составе смесей, предполагаемых вариантах синтеза из них других соединений, так и характером впоследствии выявляемых нарушений здоровья у людей, подвернувшихся их воздействию.

Это в полной мере относится к пожару на АО «Иркутсккабель» в г. Шелехов в 1992 году и участвовавшим в его ликвидации «шелеховским» пожарным. Присутствие в воздействовавшем на пожарных комплексе токсических веществ диоксинов обосновывает возможность проведения исследований спустя значительное время после названного события.

В 1999—2002 гг. проведено обследование когорты пожарных, участвовавших в ликвидации пожара на АО «Иркутсккабель» На этом этапе обследования пожарные были разделены на три группы, сформированные на основании проявления синдромов. Первую группу составили 17 человек, госпитализированных вскоре после пожара с симптомами острого отравления и последующим быстрым развитием синдромокомплекса. Вторую группу составили 120 пожарных: среди них были лица с симптомами острого отравления или без них, у которых синдромокомплекс проявился позднее; а также пожарные с симптомами острого отравления или без них, у которых синдромокомплекс вообще не был выявлен. Третью группу составили 59 пожарных, которые не принимали участие в ликвидации «шелеховского» пожара. =

Результаты обследования представлены в таблице 5, из которой следует, что у пожарных из первой группы выявлено достоверное увеличение 3-гидро-ксиметилантипирина (ЗНМАР), выраженного в % к сумме метаболитов анти- *

пирина, относительно второй и третьей (контрольной) групп. При этом 1-я группа достоверно отличалась от двух других групп характером распределения для названного показателя. На этом фоне выявлено снижение содержания 4-гидроксиантипирина (4НАР) в % к сумме метаболитов антипирина у пожарных 1-й группы по сравнению с пожарными из контрольной группы.

Таблица 5

Результаты антипиринового теста обследованных групп

Показатель Группа 1 <п = 17) Группа 2 (п = 120) Группа 3 (п = 59)

Сумма метаболитов АР1 48,00 ± 23,66 50,83 ± 22,40 49,63 ±21,17

NAP1 12,53 + 7,57 14,42 ±6,64 13,75 ±6,79

4НАР1 20,64 ±12,28 23,01 ±10,67 23,54 ± 11,22

ЗНМАР1 14,82 ±6,69 13,39 + 7,82 12,34 + 6,35

АР1 2,95 ± 1,40 3,57 + 1,92 3,65 ±3,59

NAP2 25,65 + 7,07 29,23 ± 7,99 28,27 ± 7,36

4НАР2 41,54 + Э^в*3 45,33 ±6,41 47,10 ±6,70

ЗНМАР2 32,82 ± 10,53R2R3A2A3 25,44 + 7,58 24,63 + 7,46

ЗНМАР2-кур3 32,34 ± 8,97 26,81 + 6,83 25,08 ± 7,64

<п = 13) (п = 57) (п = 39)

Примечание:1 М ± SD суммы метаболитов, NAP, 4НАР, ЗНМАР and АР в % к АР дозе;2 М ± SD NAP, 4НАР и ЗНМАР в % к сумме метаболитов, принятой за 100, ю относительно группы 2 и группы 3, соответственно р < 0,05, U-критерий Манна-Уитни; 12 u относительно группы 2 и группы 3, соответственно р < 0,05, X-тест Колмогорова-Смирнова, 3 только для курящих субъектов.

Учитывая, что в образовании ЗНМАР преимущественную роль играет CYP1А2, обнаруженный факт может свидетельствовать об активации в печени данной изоформы фермента. Поскольку вклад CYP1A2 в образование 4НАР составляет около 30 % (Pelkonen О. et al., 1998), можно предположить,

что падение содержания этого метаболита связано со снижением активности СУРЗА4(5) (вклад в образование 4НАР до 65 %). В целом такие данные могут бьггь связаны с тем, что 1 -я группа пожарных подверглась воздействию комплекса токсических веществ, содержащего диоксины. Отметим отсутствие различий между второй и третьей группами Данные для курящих субъектов (также представлены в таблице) свидетельствуют о том, что курение не всегда определяло в нашем случае увеличение показателей, характеризующих активность СУР1А2 Интересно, что активация СУР 1А2 у пожарных первой группы наблюдалась на фоне увеличения возраста

Спустя год после первого обследования в моче пожарных выявлено снижение содержания меркаптуровых кислот, которое сопровождалось увеличением содержания глюкуронидов (рис. 6). При этом наблюдалось снижение содержания восстановленного глутатиона в крови пожарных. В услови-л ях длительной индукции ферментов биотрансформации по мере истощения

запасов эндогенного глутатиона в реакциях конъюгации и антиперекисной защиты могло произойти торможение реакций глутатионовой конъюгации, что, в свою очередь, могло компенсаторно усилить другие реакции конъюгации, в частности, с глюкуроновой кислотой Снижение содержания БН-глута-тиона существенно подкрепляет обоснованность такого предположения.

Следует отметить, что ранее в эксперименте при изучении отсроченных эффектов ТХДД на состояние 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков в печени крыс мы наблюдали подобный эффект (рис 2) Увеличение содержания меркаптуровых кислот в первый срок обследования сменялось их выраженным снижением через 90 суток после прекращения затравки. На этом фоне увеличивалось содержание сульфатов, которое в первые сроки обследования существенно не отличалось от контроля.

Меркаптуровые Гпюкурониды Сульфаты БН-глутатион

КИГПОТЫ * — —— —■ -■ , ■!■■■■—- _—ч I

Г 0-1999-2000 в-2000-2001 | ]

_________Ь----------1____I

Рис. 6. Содержание меркаптуровых кислот, глюкуроновой кислоты и сульфатов в моче и восстановленного глутатиона в крови 72 пожарных, обследованных с интервалом в один год. Представлены значения М ± БЭ Меркаптуровые к-ты, ммоль БН-групп /моль креатинина; глюкурониды, г/сутки глюкуроновой к-ты; сульфаты, г/сутки; восстановленный глутатион, мкмоль/мп * - р < 0,05, Т-критерий Вилкоксона для сопряженных пар наблюдений

Для четырех из пяти пожарных группы 1 выявлена выраженная прямая корреляция (р < 0,01) между ЗНМАР (в % к сумме метаболитов антипирина в моче) и суммарным значением диоксинов в липидах сыворотки периферической крови (рис 7). Необходимо отметить, что у 13 пожарных из 2-й группы, для которых было проведено такое же обследование, такая корреляция не наблюдалась.

35 55 75 95

ТХДД/ТХДФ/ПХБ, пг/г липидов

Рис. 7. Зависимость ЗНМАР от уровня диоксинов, п = 4.

На втором этапе обследования (2003-2005 гг.) пожарные были разделены на четыре группы. В отличие от первого этапа вторая группа была разделена на две, в зависимости от развития синдромокомплекса.

Выполнены анализы на диоксины в образцах сыворотки крови 20 пожарных (по 5 человек из каждой группы). Принципиально, что все четыре группы не различались по возрасту, индексу массы тела и стажу работы пожарными. На рисунке 8 представлен относительный вклад ПХДД, ПХДФ и ПХБ в сыворотке крови каждого обследованного пожарного Как и предполагалось, удалось выявить высоко экспонированных диоксинами пожарных У 11 -ти из 20-ти пожарных суммарные токсические эквиваленты (TEQ) превышали 100 пг/г липидов. Из них у пяти пожарных TEQ были выше 200 пг/г липидов, а у 2-х превышали 400 пг/г липидов Средний уровень содержания диоксинов у обследованных пожарных составил 153 г/г липидов сыворотки крови Выявленные уровни превышают те, что наблюдаются при типичном воздействии окружающей среды в случаях ее загрязнения (OrloffK.J et al, 2001), но известны для профессионально экспонированных популяций (Sweeney М Н. et al., 1997—1998). У пожарного группы 3 (ID 71) обнаружен самый высокий уровень TEQ - 477 пг/г липидов, и при этом он продолжает работать

пожарным Следует отметить, что уровень диоксинов у пожарных 1-й группы был незначительно выше (статистически не достоверно), чем в других группах. При этом необходимо заметить, что пожарные этой группы давно (с 1993—1995 годов) не работают в качестве пожарных Содержание ПХДД у «шелеховских» пожарных (группы 1—3) было выше (р = 0,03), чем в контрольной группе - 99,5 (4,3-424,3) и 27,1 (0,3-98,7), соответственно Прошло более 11 лет, и реальный вклад пожара на кабельном заводе уже не может быть точно определен из-за снижения уровней диоксинов в сыворотке, которое было выявлено для нескольких пожарных (СЬегпуак У Г. с1 а1., 2001; Агшгоуа Т.К. й а!., 2003).

о Ч s с

S о

X £

500

400

300

200

100

ПХБ (верх) ПХДФ (середина) ПХДД (низ)

23 100 160 162 60

И 39 4 31 114 14373 150 33 71 38 152 51 156 157

Группа 1 Группа 2 Группа 3 Группа 4

Рис. 8. Содержание ПХДД, ПХДФ и ПХБ в сыворотке крови пожарных

Исследование метаболизма антипирина у «шелеховских» пожарных

В данном разделе представлены результаты обследования антипи-риновым тестом 158 пожарных и доказательство диоксин-зависимой индукции CYP1A2 у «шелеховских» пожарных.

В таблице 6 представлены данные о возрасте, наличии инвалидности и пропорциях курящих в четырех обследованных группах пожарных и когорте в целом. Обследованные пожарные групп 1 и 2 были старше, чем в группах 3 и 4 Пожарные в группах 1 и 2 в основном имеют инвалидность, в то время как обследованные в_группах 3 и 4 в настоящее время работа-

ют пожарными.

РОС. НАЦИОИДлЬИ'9 i БИБЛИОТЕКА G Петербург • «» M m

"*' Ц»' г*

Таблица 6

Характеристики обследованных пожарных

Название показателя Когорта п = 158 Группа 1 п = 15 Группа 2 п = 45 Группа 3 п = 53 Группа 4 п = 45 Р

Возраст, лет1 41,7 ±7,2 47,3 + 7,7 3'4 44,6 ±6,5 34 39,9 ±6,6 39,0 ±6,6 0,000*

Инвалидность (п. %) 56 (35 %) 13(87%) 41 (91 %) 2 (4 %) 0 (0 %) 0,000*

Курящие в настоящее время (п, %) 83 (52 %) 8 (53 %) 28 (42 %) 27 (53 %) 27 (60 %) > 0,05

Примечание: 1 М ± ЭО, * А1ЧО\/А Краскела-Уоллиса, р < 0,05; 34 относительно группы 3 и группы 4, соответственно: р < 0,0083, и-критерий Манна-Уитни с уметом поправки Бонферрони.

Исследование метаболизма антипирина у пожарных позволило установить, что отличия между группами курящих и некурящих пожарных (сравнение 4-х групп) были сопоставимы, что указывало на наличие эффекта, отличного от курения. Проведенный однофакторный дисперсионный анализ выявил групповые различия в метаболизме антипирина в сравниваемых группах для некурящих по трем показателям - ЗНМАР и сумме метаболитов (в % к принятой дозе АР), а также ЗНМАР (в % к сумме метаболитов АР). Следует отметить, что выявленные отличия у некурящих обусловила разница между группами 1 и 2, а также между группами 2 и 3 (рис. 9).

80 70 60 ■ 50 40 30 20 10 о

в в

МЮУА р = 0,001

АМОУА р = 0,030

ЗНМАР1

Группа 1 (п = 6) Группа 3 (п = 25)

Сум мест1

ЖСП/А р = 0,003

ЗНМАР2

□ Группа 2 (п = 26)

□ Группа 4 (п = 18)

Рис. 9. Процентное содержание метаболитов антипирина у некурящих пожарных 1 М ± ЭО суммы метаболитов и ЗНМАР в % к АР дозе;2 М ± Эй ЗНМАР в % к сумме метаболитов, принятой за 100, * * относительно группы 2 или группы 3, соответственно р < 0,0083, 11-критерий Манна-Уитни с учетом поправки Бонферрони

Принципиально, что в рамках этого этапа обследования обнаружены отличия для ЗНМАР, выраженному в абсолютных единицах Анализ результатов антипиринового теста в группах некурящих, позволил установить, что пожарные группы 2 имели самое низкое значение ЗНМАР, как в абсолютном, так и относительном представлении данных, а также характеризовались медленным метаболизмом тестового препарата. Причиной низкой пропорции СУР1А2-связанного метаболита у них по отношению к пожарным 1-й группы, у которых синдромокомплекс был диагностирован сразу же после пожара, могла явиться более высокая чувствительность пожарных группы 1 на воздействие диоксинов. Возможным объяснением различия с группой 3, пожарные которой участвовали в «шеле-ховском» пожаре, но не заболели, может быть больший возраст, а также признание того, что пожарные 3-й группы продолжают подвергаться воздействиям токсикантов, индуцирующих СУР1А2.

Таблица 7

Корреляция метаболитов антипирина и уровней диоксинов в липидах сыворотки пожарных

АР или Курение Уровни диоксинов в липидах сыворотки

метаболиты тхдд ПеХДД ПХДД ПХДФ ПХБ ТЕО

Как процент от общей дозы АР:

4НАР Нет -0,145 -0,093 -0,137 0,103 0,033 -0,123

Да -0,159 -0,053 -0,133 -0,140 -0,132 -0,039

ЗНМАР Нет -0,136 -0,242 -0,177 0,086 0,198 -0,042

Да 0,060 -0,279 0,013 0,256 0,444* 0,434*

АР Нет -0,173 -0,482* -0,385 -0,167 0,188 -0,119

Да 0,099 0,133 0,181 -0,069 -0,208 -0,012

Как процент от суммы метаболитов АР:

4НАР Нет -0,103 -0,062 -0,158 -0,006 -0,326 -0,274

Да -0,258 0,117 -0,158 -0,181 -0,490* -0,471*

ЗНМАР Нет 0,054 -0,143 -0,047 0,040 0,153 0,047

Да 0,115 -0,302 0,068 0,317 0,452* 0,443*

Примечание: приведены значения коэффициентов ранговой корреляции Спирмена для 24 курящих и 27 некурящих пожарных, * - р < 0,05

В таблице 7 представлены корреляции между метаболитами антипирина и уровнями диоксинов в липидах сыворотки 51-го пожарного, у которых такие измерения оказались возможными Отметим, что не было обнаружено значимых связей между диоксинами и образованием нор-

антипирина Существенной связью, обнаруженной у 27 некурящих пожарных, явилась отрицательная корреляция между процентным соотношением выведенного антипирина к его принятой дозе и пентахлор-дибензо-/ьдиоксином (ПеХДД) Среди конгенеров диоксина ПеХДД сопоставим с ТХДД по биологическому эффекту (TEF = 1) и обладает большим периодом полувыведения (до 16 лет) (Flesch-Janys et al., 1996). Это означало, что диоксины активировали CYP1A2, что сопровождалось ускоренным метаболизмом антипирина, а значит, уменьшением его содержания в моче ПХБ и суммарный токсический эквивалент (TEQ) у 24 курящих положительно коррелировали с образованием ЗНМАР (выраженном как в % от принятой дозы, так и в % к сумме метаболитов АП) и обратно - с 4НАР (в % к сумме метаболитов АП). Установление корреляций между ЗНМАР с ПХБ, а также с TEQ согласуется с индукцией CYP1A2, но их следует рассматривать как результат комбинированного действия диоксинов и курения. При этом необходимо отметить, что использование для хранения и транспортировки образцов крови, отобранной для анализа в 1998—2002 годах, полипропиленовых пробирок могло повысить уровни ПХБ и, следовательно, TEQ (Karmaus W., Riebow J.F., 2004).

Проблема исключения влияния возраста, индекса массы тела, курения и группы (на основании времени проявления синдромов), как независимых признаков, на связь между показателями антипиринового теста и основными конгенерами диоксинов была решена для 51 пожарного с помощью многофакторного регрессионного анализа (табл. 8). Результаты анализа указывают на то, что суммарный токсический эквивалент диоксинов является значимым прогностическим признаком для ЗНМАР как при абсолютном, так и относительном представлении данных: р = 0,026 и 0,034, соответственно. Обратная связь между 4НАР (выраженного как % от суммы метаболитов АР) с суммарным TEQ (р = 0,005) являлась следствием увеличения пропорции ЗНМАР в сумме метаболитов антипирина. При этом основные группы конгенеров диоксинов, ПХДД, ПХДФ и ПХБ, не оказывали значимого влияния на зависимые признаки, которыми выступали метаболиты тестового препарата. Единственным исключением явилась значимость ПХБ (с обратным знаком) для 4НАР, выраженного в % от суммы метаболитов антипирина.

В настоящем разделе представлены данные, характеризующие наличие связи между воздействием диоксинов, которое оценивалось по уровню их содержания в сыворотке крови и экспрессией диоксин-индуцируемых генов у «шелеховских» пожарных. Экспрессия генов определялась как косвенной оценкой активности CYP1A2 (AP-тест), так и измерением AhR, CYP1A1 и CYP1B1 методом ПЦР после обратной транскрипции в режиме реального времени.

Таблица 8

Параметры моделей, полученных с помощью множественного регрессионного анализа

Метаболиты в моче, % Диоксины Г Р Л2

ЗНМАР2 ТЕО 2,317 0,026 0,118

ЗНМАР1 ТЕС! 2,190 0,034 0,107

4НАР2 ПХБ -2,348 0,024 0,130

4НАР2 ТЕО -2,995 0,005 0,183

Примечание'1 ЗНМАР в % к АР дозе,2 4НАР или ЗНМАР в % к сумме метаболитов, принятой за 100 п = 51, Г*2 - коэффициенты множественной детерминации Прогностические признаки' группы диоксинов, возраст, индекс массы тела, курение, а также принадлежность (на основании времени проявления синдромов) к группе пожарных

Для 54 пожарных, у которых был проведен антипириновый тест и оценка экспрессии диоксин чувствительных генов показана высокая степень корреляции между абсолютным содержанием ЗНМАР и показателями генной экспрессии (табл. 9).

Таблица 9

Корреляция между маркерами эффекта диоксинов — показателями экспрессии диоксин чувствительных генов и активностью СУР1А2 (ЗНМАР)

Показатель экспрессии Маркер эффекта п = 54

г Р

АИЯ ЗНМАР1 0,295* 0,030

АИР? СУР1А1 0,401* 0,003

АИР СУР1В1 0,497* 0,000

СУР1А1 ЗНМАР1 0,395* 0,008

СУР1А1 СУР1В1 0,410* 0,002

СУР1В1 ЗНМАР1 0,267 0,051

Примечание: 1 ЗНМАР в % к АР дозе Приведены значения коэффициентов ранговой корреляции Спирмена, р < 0,05

Таким образом, нам удалось обнаружить не только связь между активностью СУР1А2 и суммарным уровнем диоксинов в периферической крови пожарных, но и связь активности этой диоксин чувствительной изоформы цитохрома Р450 с экспрессией АЫ1, играющего первостепенную роль в реализации токсичности диоксинов, а также с экспрессией СУР1А1, имеющего аналогичный СУР1А2 механизм индукции (ОгаБвшап.ГА. е1 а1., 1998).

Анализ результатов моделирования интоксикации комплексом токсических веществ и обследования пожарных позволяет выстроить последовательность событий между эффектами, непосредственно связанными с экспрессией диоксин чувствительных генов, с последующими системными и функциональными нарушениями у пожарных (рис. 10). Индукция Р4501А сопровождается активацией катаболизма важнейших эндогенных субстратов (гормонов, витаминов), нарушениями порфири-нового обмена, гомеостаза Са2+, накоплением реакционных метаболитов и активных форм кислорода, активацией ПОЛ. Обусловленная диоксином экспрессия Ah-рецептора вызывает активацию фосфорилирова-ния белков, нарушение процессов пролиферации и дифференцировки, демиелинизацию в ЦНС, оказывает влияние на апоптоз. Следствием перечисленных изменений являются, в частности, иммунодепрессивность, цитотоксичность, поражения центральной (энцефалопатии) и периферической (полиневропатии) нервной системы, сосудистые нарушения (Черняк Ю.И. и др., 2003). Ограниченная способность диоксинов к метаболизму приводит к его накоплению в организме и возможности реализации патогенных эффектов на здоровье. Имеются данные о том, что диоксины вызывают разнообразные стойкие субъективные и объективные неврологические расстройства, сформировавшиеся у пожарных (Епи-фанцев A.B. и др., 2003). При этом необходимо отметить, что в условиях воздействия комплекса токсических веществ диоксины значительно усиливают реализацию патогенных свойств многих классов химических соединений, например, полициклических ароматических углеводородов, а для реализации их собственных эффектов характерен длительный, иногда до нескольких лет, латентный период.

Таким образом, оценка активностей CYP1А дает важную информацию о степени возможного контакта с диоксинами, позволяет судить о взаимосвязи генетической предрасположенности системы (индуцибельности) с выраженностью патологического процесса и имеет важное прогностическое значение Совокупность таких данных является основанием для назначения лицам, контаминированным диоксинами, специализированной терапии для ускорения их элиминации из организма и снижения, таким образом, связанных с ними отсроченных эффектов.

В целом полученные материалы расширяют наши представления о механизмах патогенеза и позволяют определить пути к изысканию методов и средств медикаментозной профилактики, терапии и диагностики интоксикаций изученными полициклическими соединениями.

Диоксин (D)

ктв

I I

Активация фосфорилиро-вания белков

Активация транскрипции генов синтез белков CYP1A1, CYP1A2,

Повреждение ДНК-мутагенные и канцерогенные эффекты

Индукция изоформ Р450 и других

Нарушение функций гемзависимых структур и процессов

Нарушение процессов пролиферации и дифференцировки

Активация процессов биотрансформации, свободно-радикального окисления Образование

активных метаболитов, 02~. ОН, Н202

Нарушение дифференцировки В-клеток

Иммунодепрессивность, иммуномодулирующее действие

Энцефалопатии Полиневропатии Сосудистые нарушения

Рис. 10. Участие цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в механизме реализации патогенного действия комплекса токсических веществ и формирования отдаленных эффектов у пожарных D - диоксин, HPS 90 - молекула белка теплового шока, ХАР 2 - Х-ассоциированный белок, ДЧЭ - диоксинчувствительный элемент ДНК

выводы

1. Создана экспериментальная модель воздействия на организм животных и человека комплекса токсических веществ, составленного из образующихся при пожарах бенз(а)пирена, бензантрацена, оксида углерода, винилхлорида, дибутилфталата и 2,3,7,8-тетрахлордибензо-/?-диоксина.

2. Комплекс токсических веществ в условиях 10-кратного воздействия существенно не модифицировал патогенное действие диоксина. Показано, что введение ТХДД в суммарной дозе 2,0 мкг/кг вызывает активацию цитохрома Р4501А в микросомах печени крыс, сохраняющуюся в течение 11 месяцев.

3. Предельные полициклические углеводороды в условиях in vitro (в диапазоне концентраций от 10 2 до 10"5 М) и in vivo оказывали влияние на состояние обеих фаз биотрансформации ксенобиотиков и сопряженные с ними процессы пероксидации. Тетрагидродициклопентадиен и пентацик-лодекан проявляли свойства индуктора фенобарбиталового типа, а МЦП — ингибитора цитохром Р450-зависимых монооксигеназ печени. Изученные ППУ метаболизировались в полной гидроксилирующей системе микро-сом печени крыс, при этом выявлено N-деметилирование МЦП, а метаболизм ПЦЦ протекал при участии изоформ ФБ-типа (CYP2B) и реакции глюкуронидной конъюгации.

4. Применение в эксперименте на животных антиоксидантов, индукторов и ингибиторов микросомных монооксигеназ в качестве профилактических и лечебных средств в условиях воздействия ППУ позволило установить- а) метаболиты МЦП и ТГДЦПД менее, а ПЦД более токсичны по сравнению с исходным веществом; б) метаболизм всех ППУ сопровождается усилением генерации активных форм кислорода. Использование а-токоферола (для МЦП), ионола (для ПЦД) и комплекса, содержащего а-токоферол, аскорбиновую кислоту и унитиол (для ТГДЦПД), давало наилучший лечебный эффект для животных, подвергнутых однократному воздействию соответствующими соединениями.

5. МЦП и ТГДЦПД оказывали разнонаправленное действие на состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ (МОГС) и процессов пероксидации у персонала, длительно контактирующего с ними в условиях производства. МЦП угнетал функциональную активность МОГС при отсутствии изменений показателей процессов пероксидации, а ТГДЦПД вызывал индукцию МОГС на фоне активации конъюгации с глюкуроновой кислотой и процессов пероксидации.

6. Различия в метаболизме антипирина у пожарных связаны с активацией цитохрома Р4501А2 — изоформой фермента, индуцируемой диоксинами. Выявлена прямая связь между 3-гидроксиметилантипирином (преимущественно CYP1A2) в моче и уровнем диоксинов в организме пожарных, а также экспрессией AliR, CYP1A1 — диоксин чувствительных генов.

7. Разнонаправленные изменения показателей, характеризующих реакции конъюгации с глутатионом и глюкуроновой кислотой, в условиях дина-

мического обследования пожарных являются результатом истощения конъ-югирующих агентов, а снижение содержания в моче продуктов глутатионовой конъюгации — следствием наблюдаемой индукции цитохрома Р4501А2

8. Высокий уровень содержания диоксинов в организме пожарных (169 пг/г липидов сыворотки крови), принимавших участие в тушении пожара на АО «Иркутсккабель» в 1992 г., позволяет рассматривать последних как экспонированную диоксинами когорту. Пожарные же с высоким уровнем содержания диоксинов, либо активности цитохромов Р4501А, представляют группу риска по развитию отдаленных патогенных эффектов

9. Оценка состояния системы биотрансформации ксенобиотиков у е лиц, контактирующих с полициклическими углеводородами, позволяет судить о взаимосвязи генетически детерминированной индуцибельности ферментов с выраженностью патологического процесса и имеет важное про» гностическое значение.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Черняк Ю.И. Состояние микросомальной монооксигеназной системы печени крыс при воздействии углеводородов Microsomal monooxygenase system state of rat liver exposed to hydrocarbons / Ю.И Черняк, H И Портя-ная // Цитохром Р450 и модификация макромолекул- Тез докл. 5-й Всесо-юзн. конф., 10-15 ноября 1989 г. - Ялта, 1989. - С. 115-116.

2 Биохимические исследования в токсикологическом эксперименте /НИ. Портяная, Б.Г Осипенко, Г.А Москадынова, Ю.И. Черняки др. - Иркутск: Изд-во Иркут ун-та, 1990. - 216 с.

3 Черняк Ю.И. Состояние микросомальной монооксигеназной системы печени животных в условиях острого и хронического воздействия МЦП / Ю И. Черняк, Н.И Портяная // Бюлл. ИБФ. - 1990. - № 51. - С. 42-47

4. Черняк Ю.И. Комплексное исследование процессов детоксикации и пероксидации в микросомах печени крыс при оценке токсического действия полициклических углеводородов / Ю.И. Черняк, Н.И Портяная, JI.A. Тиунов // Токсикологические проблемы химических катастроф: Тез. докл. Всесоюзн. конф , 15—16 мая 1991 г. — JI., 1991. — С. 126.

5. ChernyakYI The state valuation of the detoxication systems and peroxidation processes in the liver microsomes of the rats with aim to valid the harmful exposure threshold levels of the limited polycyclic hydrocarbons /Y.I Chernyak, N.I. Portyanaya, L.A Tiunov// Biochemistry and Biophysics of Cytochrome P-450; Structure and Function, Biotechnological and Ecological Aspects' Abstracts of 7th Internat. conf, July 28-August 2, 1991 - Moscow, 1991. -P. 101.

6 Черняк Ю.И. О влиянии ТГДЦПД и МЦП на состояние монооксигеназной системы и процессов ПОЛ в микросомах печени крыс в условиях in vitro / Ю.И Черняк, Н.И. Портяная, Г.А. Москадынова// Бюлл ИБФ. -1991.-№ 53.-С. 45-50.

7 Черняк Ю И. О метаболизме ТГДЦПД и МЦГТ в микросомальной монооксигеназной системе печени крыс / Ю.И. Черняк, НИ. Портяная, О В. Минченко // Бюлл. ИБФ. - 1991 - № 53. - С. 50-52.

8 Chernyak Y.I Complex study on the detoxication processes in rat liver microsomes for the assessment of the toxical exposition to polycyclic hydrocarbons and of the method substantiation the prophylactic and experimental intoxication therapy / YI Chernyak, N.I Portyanaya, L.A. Tiunov // Microsomes and Drug Oxidations: Proceed of 9th Internat. Symp., Jerusalem, Israel, July 6—9, 1992: J. Basic. Clin. Physiol. Pharmacol. - 1992. - Vol. 3. - P. 273.

9 Черняк Ю.И. Метаболизм ТГДЦПД в организме животных и его влияние на процессы биотрансформации чужеродных веществ в печени / Ю.И Черняк, ЕД Ищенко, Б.Г. Осипенко //Токсикология, гигиена и проф-патология ТГДЦПД- Под ред. Л.Ф Глебовой, В.М Прусакова//Бюлл. ИБФ - 1993. - № 57-58. - С. 85-90

10. Черняк Ю И Исследование состояния биохимических систем де-токсикации чужеродных соединений в печени лиц, контактирующих в производственных условиях с предельными полициклическими углеводородами / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная // Современные проблемы и методические подходы изучения влияния факторов производственной и окружающей среды на здоровье человека: Тез докл. Всеросс. конф. - Ангарск, 1993. -С. 286-288.

11. Применение N-ацетилцистеина при отравлении гипоксическими ядами / В.А Баринов, Е.В Костюшов, Б Н. Галкин и др. // Антигипоксанты и актопротекторы итоги и перспективы: Тез. докл. Всеросс. конф , 1—3 марта 1994.-СПб., 1994.-С. 232.

12 Портяная Н.И. О влиянии гидразинов на процессы микросомаль-ного окисления и пероксидации липидов в печени крыс /НИ Портяная, Ю.И Черняк, ГА. Москадынова//Мед. труда и пром экология. - 1994 — № 3. -С. 29-34.

13. Chernyak Y.I. Investigation of the detoxication systems and lipid peroxidation in persons contacting with polycyclic hydrocarbons / Y.I. Chernyak, N.I Portyanaya, L.A. Tiunov // European 1SSX Workshop, Schluchsee, Germany, June 12-15,1994: ISSX Proceedings. - 1994. - Vol. 5. - P. 31.

14. Some issues of toxicokinetics of dicyclopentadiene / N.I. Portyanaya, Y.I Chernyak, O.V. Minchenko, N.A. Shulgina // European ISSX Workshop, Schluchsee, Germany, June 12-15,1994" ISSX Proceedings. - 1994. - Vol. 5. - P. 49.

15 Chernyak Y I. Study on the content of SH-groups in organs of animals after treatment N-acetylcysteine / Y.I. Chernyak, N.I. Portyanaya, LA Tiunov // Abstracts of 14th European Workshop on Drug Metabolism, Paris, France, July 4-8,1994. - P. 120.

16 Chernyak Y.I State of liver monooxygenases in persons contacting with limited polycyclic hydrocarbons / Y I. Chernyak // Microsomes and Dmg Oxidations- Abstracts of 10-th Internat. Symp., Toronto, Canada, July 18-21,1994. -P. 486.

17 Некоторые аспекты токсикокинетики дициклопентадиена / Н.И. Портяная, Ю И Черняк, О В Минченко, Н.А Шульгина//Токсикол весгн - 1995 - № 2. - С. 16-19

18. Chernyak Y [ Study on glutathione S-transferase activity in rat liver in acute ingalating intoxication with limited polycyclic hydrocarbons / YI Chernyak, N I Portyanaya // Internat 1SSX Workshop on Glutathione S-Transferases, Noordwijkerhout, The Netherlands, April 22-25,1995: ISSX Proceedings - 1995 -Vol. 7.-P. 53.

19 The effect of LPHC on peroxidation processes in animal organism / Y.I. Chernyak, N.I. Portyanaya, G.A. Moskadynova, L A. Tiunov // Abstracts of Eurotox'95, Praque, Czech Republic, August 27-30, 1995: Toxicol. Letters. - 1995. -Suppl. 1/78.-P. 25.

20 Chernyak Y I State of microsomal monooxygenases and peroxidation processes in rat liver under conditions of combined exposure of vinylchloride and dichloroethane / Y I. Chernyak, N.I. Portyanaya // Fourth Internat ISSX Meeting, Seattle, Washington USA, August 27-31,1995: ISSX Proceedings - 1995. -Vol. 8.-P. 193.

21. Токсикокинетические и метаболические аспекты дициклопентадиена /НИ Портяная, Ю И Черняк, О.В. Минченко, Н А. Шульгина // Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии: Тез. докл. 1-й Всеросс. конф, 21-23 ноября 1995 г - СПб., 1995. - Ч 1 - С 78.

22. Черняк Ю И. Исследование активности глутатион-8-трансферазы в печени крыс в условиях острого ингаляционного отравления предельным полициклическим углеводородом / Ю И. Черняк, Н.И. Портяная // Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии: Тез. докл 1-й Всеросс конф., 21-23 ноября 1995 г - СПб., 1995. - Ч. 1. - С 94

23 Черняк Ю.И. Об эффективности модификаторов МОГС и антиок-сидантов в условиях острой интоксикации предельным полициклическим углеводородом / Ю.И Черняк, Н И. Портяная, JI.A Тиунов // Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии: Тез докл 1 -й Всеросс. конф, 21-23 ноября 1995 г - СПб., 1995. - Ч. 1. - С 95.

24 Chernyak YI About the efficiency of antioxidants under conditions of acute intoxication with polyciclic hydrocarbons / Y.I. Chernyak, N I. Portyanaya // Abstracts of 15th European Workshop on Drug Metabolism, Jena, Germany, September 9-13, 1996' Exp. Toxicol. Pathol. - 1996. - Vol. 48 - N 5. - P 337.

25 Chernyak Y I. About some aspect of metabolism of limited polycyclic hydrocarbons / Y I. Chernyak // 6th European ISSX Meeting, Gothenburg, Sweden, June 30 - July 3,1997- ISSX Proceedings. - 1997. - Vol. 11. - P. 69.

26. Study of long-term effects of TCDD on the microsomal monooxygenases of rat liver / Y. Chernyak, N Portyanaya, V. Benemansky, A. Merinova // 5th International ISSX Meeting, Cairns, Australia, October 25-29, 1998: ISSX Proceedings. - 1998. - Vol. 13. - P. 140.

27 Черняк Ю И. Исследование отдаленных эффектов диоксина на состояние микросомных монооксигеназ печени крыс / Ю.И. Черняк,

Н.И. Портяная, В В. Бенеманский // Тез. докл. 1-го съезда токсикологов России, 17-20 ноября 1998 г. - М., 1998. - С. 261.

28 Портяная Н.И. Токсикокинетика и метаболизм пентациклодека-на/Н И. Портяная, Ю.И Черняк, Н А Шульгина//Тез докл. 1-го съезда токсикологов России, 17-20 ноября 1998 г. - М., 1998. - С. 307.

29 Влияние комплекса токсических веществ, включающего диокси-ноподобные соединения, на организм ликвидаторов пожара на заводе «Ир-кутсккабель» / О И. Потрохов, В.В. Бенеманский, О.А. Быцко и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 1998. - № 2 (8). - С. 62-66.

30. New aspects in study of long-term effects on phases I and II of biotransformations of xenobiotics of rat liver / Y. Chernyak, N. Portyanaya, N. Shulgina, A. Merinova// 7th European ISSX Meeting, Budapest, Hungary, August 22-26,1999: ISSX Proceedings. - 1999. - Vol. 14. - P. 40

31 Черняк Ю И. Токсикокинетика и метаболизм пентациклодекана / Ю.И. Черняк, Н.И Портяная, Н А Шульгина//Токсикол. вестн. — 1999. — №2.-С. 21-25.

32. Черняк Ю.И. К обоснованию способов профилактики и экспериментальной терапии острых интоксикаций МЦП / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная// Бюлл. ИБФ. - 1999. - № 61-62. - С. 72-82.

33 Chernyak Y. Study of long-term effects of TCDD on the microsomal monooxygenases of rat liver / Y. Chernyak, N Portyanaya // Organohalogen Compounds. - 1999. - Vol. 42. - P. 305-308.

34. Черняк Ю И. Месячная стажировка по проблеме СОЗ молодых российских ученых Северная Америка, 14 июня - 13 июля 1999 г. / Ю.И. Черняк // Токсикол. вестн. - 1999. - № 6. - С. 37.

35. Assessment of CYP1A2 enzyme activity using antipyrine as probetest in firefighters / Y. Chernyak, N. Portyanaya, S. Masten et al // DMW/ISSX Meeting, St. Andrews, Scotland, June 11-16,2000: Drug Met. Rev. - 2000. - Vol. 32. -SuppL 1. - P. 38.

36. Черняк Ю.И. Исследование отдаленных эффектов диоксина на состояние микросомных монооксигеназ печени крыс / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная, В.В Бенеманский // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2000. - № 3 (13). - С. 94-96.

37. Determination of cytochrome Р4501А2 (CYP1A2) enzyme activity using antipyrine as probe-test in «Shelekhov» firefighters / Y.I. Chernyak, N I Portyanaya, N.A Taranenko et al //Organohalogen Compounds. — 2000. — VoL 49.-P. 239-242.

38 Определение CYP1A2 энзиматической активности антипириновым тестом и уровней диоксинов у «шелеховских» пожарных / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная, А.П. Меринова и др. // Национальный план действий по экологически обоснованному управлению диоксинами/фуранами и диок-синоподобными веществами: Мат. Рос. конф. с международным участием, 9-13 июля 2001 г - СПб.: Изд-во ЮНЕП/ЦМП, 2001. - С. 256-259

39. CYP1A2 enzyme activity by antipyrine test and levels of dioxins in «shelekhov» firefighters / Y. Chernyak, N. Portyanaya, A. Merinova et al. // 6th

International ISSX Meeting, Munich, Germany, October 7-11, 2001: Drug Met Rev. - 2001. - Vol. 33. - Suppl. 1. - P. 72.

40 Черняк Ю.И. Комплексное изучение состояния процессов деток-сикации и пероксидации при воздействии ППУ / Ю.И. Черняк, Н.И Пор-тяная//Бюлл ВСНЦСОРАМН -2001 -№ 2(16). - С. 88-91.

41. Determination of CYP1А2 enzyme activity by anti pyrine test and levels of dioxins in «Shelekhov» firefighters / Y. Chernyak, A. Merinova, N. Taranenko et al. // Organolialogen Compounds. - 2001. - Vol. 53. - P. 415-418.

42. Определение энзиматической активности цитохрома Р4501А2 у «шелеховских» пожарных / Ю И. Черняк, Н И. Портяная, А П Меринова и др. //Токсикол. весгн. - 2002 - № 2. - С. 5-10.

43 Chernyak Y Study of short- and long-term TCDD effects and toxic compound mixture on the microsomal monooxygenases of rat liver / Y. Chernyak, A. Merinova, N. Portyanaya // Organolialogen Compounds - 2002. - Vol. 55. - P. 477-480.

44. CYP1A2 enzyme activity (anti pyrine test) in «shelekhov» firefighters / Y Chernyak, A. Merinova, N. Portyanaya et al. // Organohalogen Compounds. — 2002. - Vol. 55. - P. 449-452.

45 Изучение влияния ТХДЦ в условиях раздельного и совместного с комплексом токсических веществ воздействия на состояние порфирино-вого обмена экспериментальных животных / Н.И Портяная, Ю.И Черняк, И.В. Кудаева и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН - 2002. - № 3. - С. 125-128.

46. Черняк Ю И. Оценка активности CYP1A2 в качестве маркера эффекта возможного воздействия диоксинов / Ю И. Черняк, Д А Грассман, Н.И Портяная // Оценка риска для здоровья от неблагоприятных факторов окружающей среды' опыт, проблемы и пути их решения- Мат Всеросс. научно-практ. конф., 23-25 октября 2002 г. - Ангарск, 2002. - Ч. 1. - С. 89—92.

47. Юшков Г. Г. Проблемы экспериментальной токсикологии в свете концепции риска возникновения экзогенных химически обусловленных заболеваний человека / Г.Г. Юшков, Н.И. Портяная, Ю.И. Черняк // Оценка риска для здоровья от неблагоприятных факторов окружающей среды: опыт, проблемы и пути их решения: Мат. Всеросс научно-практ. конф., 23— 25 октября 2002 г. - Ангарск, 2002. - Ч. 1. - С. 100-102.

48. Гущина А.А. К состоянию антиоксидантной системы и процессов перекисного окисления липидов при воздействии полициклических углеводородов в условиях эксперимента / А.А. Гущина, Н И. Портяная, Ю.И. Черняк // Оценка риска для здоровья от неблагоприятных факторов окружающей среды: опыт, проблемы и пути их решения: Мат. Всеросс. научно-практ. конф., 23-25 октября 2002 г. - Ангарск, 2002. — Ч. 2. - С. 26-28.

49. Портяная Н.И. К состоянию липидного обмена у пожарных, принимавших участие в тушении пожара на АО «Иркутсккабель» / НИ. Портяная, Л.А. Бударина, Ю.И. Черняк// Бюлл. ВСНЦ СО РАМН - 2002. - № 3. -С. 100-103.

50. Черняк Ю.И. Активность CYP1A2 (АР-тест) у «шелеховских» пожарных / Ю.И. Черняк, Д.А. Грассман, Н.И. Портяная// Мат. Всеросс. конф.

по проблеме стойких органических загрязнителей, 28—29 октября 2002 г. — M.: Центр международных проектов, 2003. - С. 258-261.

51 Черняк Ю. И. Изучение первичных и отсроченных эффектов ТХДД и комплекса токсических веществ на микросомные монооксигеназы печени крыс/ Ю.И. Черняк, Н И. Портяная, А.П. Меринова// Токсикол. вести. -2003.-№6.-С. 34-39.

52. Оценка состояния 2-й фазы биотрансформации ксенобиотиков у пожарных, принимавших участие в тушении пожара на АО «Иркутскка-бель» / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная, H.A. Шульгина и др. // Мед. труда и пром. экология. - 2003. - № 3. — С. 39—42.

53. Итоги реализации областной программы «Медико-социальные мероприятия по ликвидации последствий пожара на ОАО «Иркутсккабель» / В.С Рукавишников, Л.И. Колесникова, М.Е. Кощеев и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2003. - № 2. - С. 10-16.

54. Определение активности CYP1A2 у пожарных в качестве маркера возможного воздействия диоксинов / Ю.И. Черняк, Д.А. Грассман, Н И. Портяная и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2003. - № 2. - С. 138-141.

55. Phase II xenobiotic biotransformation in the «shelekhov» firefighters / Y. Chernyak, N. Portyanaya, J. Grassman, N. Shulgina // Organohalogen Compounds. - 2003. - Vol. 65. - P. 195-198.

56. Черняк Ю.И. Оценка состояния системы биотрансформации ксенобиотиков (фаза I и И) у «шелеховских» пожарных / Ю.И. Черняк, Д.А. Грассман, Н.И. Портяная // Тез. докл. 2-го съезда токсикологов России, 10-13 ноября 2003 г. - М., 2003. - С. 285-286.

57. Диагностика и медицинская реабилитация в отдаленном периоде профессиональной нейроинтоксикации у пожарных: Пособие для врачей / В.Г Колесов, Г.М. Бодиенкова, В В. Бенеманский и др. - Иркутск: РИО ИГИУВа, 2004. — 36 с.

58. Оценка состояния фазы I биотрансформации ксенобиотиков у «шелеховских» пожарных / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная, Д.А. Грассман и др // Мат. 2-й Всеросс. конф. по проблемам диоксинов, 23—27 мая 2004 г. — Уфа, 2004.-С. 244-245.

59. Assessment of serum PCDD, PCDF and PCB levels in firefighters exposed to combustion products during the 1992 «Irkutskcable» factory fire in the city of Shelekhov, Russia / Y. Chernyak, J. Grassman, E. Brodsky et al. // Organohalogen Compounds. - 2004. - Vol. 66. - P. 2481-2487.

60. Биохимия гидразинов / Н.И. Портяная, B.B. Соколовский, Б.Г. Осипенко, Ю.И. Черняк и др. — Ангарск: Изд-во ATTA, 2005. — 81 с.

61. Antipyrine metabolism in firefighters participating in the 1992 «Irkutskcable» factory fire in Shelekhov, Russia / Y.I. Chernyak, J.A. Grassman, A P. Merinova et al. // Otganohalogen Compounds. - 2005. - Vol. 67. - P. 2422-2426.

Список использованных сокращений

АП - аминопирин

АН -анилин

АР - антипирин

АЦЦ - N-ацетилцистеин

БПГ - бензпиренгидроксилаза

ДПЦД - дициклопентадиен

ДТК - диэтилдитиокарбомат натрия 2,6-ДХФИФ - 2,6-дихлорфенолиндофенол

КТВ - комплекс токсических веществ

МОГС - монооксигеназная система

МРОД - метоксирезоруфин-О-деапкилаза

MX - метилхолантрен

МЦП - предельный полициклический углеводород

ПеХДД - пентахлордибензо-р-диоксин

ППУ - предельные полициклические углеводороды

ПХБ - полихлорированные бифенилы

ПХДД - полихлорированные дибензодиоксины

ПХДФ - полихлорированные дибензофураны

ПЦД - пентациклодекан

ТГДЦПД - тетрагидродициклопентадиен

ТХДД - 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин

ФБ - фенобарбитал

ЭРОД - этоксирезоруфин-О-деалкилаза

CYP - принятое в современной номенклатуре обозначение цитохрома Р450

4НАР - 4-гидроксиантипирин

ЗНМАР - 3-гидроксиметилантипирин

NAP - норантипирин

TEQ - суммарный токсический эквивалент

Подписано в печать 18 10.2005 Бумага офсетная. Формат 60x84'/,6. Гарнитура Тайме. Уел печ.л 2,0 _Тираж 100 экз. Заказ № 159-05._

РИО НЦ PBX ВСНЦ СО РАМН (Иркутск, ул Борцов Революции, 1 Тел 29-03-37 E-mail arleon@rol.ru)

№21528

РНБ Русский фонд

2006-4 22673

Оглавление диссертации Черняк, Юрий Ильич :: 2005 :: Ангарск

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Представления о биотрансформации ксенобиотиков (обзор литературы).

1.1. Цитохром Р450-зависимые монооксигеназы - 1 фаза биотрансформации ксенобиотиков.

1.2. Реакции конъюгации - 2-я фаза биотрансформации ксенобиотиков.

1.3. Система антирадикальной и антиперекисной защиты.

1.4. Роль процессов ПОЛ в метаболизме ксенобиотиков.

1.5. Влияние химических веществ на состояние систем биотрансформации в печени.

1.6. Цитохром Р450 и диоксиноподобные соединения.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Экспериментальное исследование влияния ТХДД на состояние изучаемых систем и процессов.

2.2. Экспериментальные исследования влияния ППУ на состояние изучаемых систем и процессов.

2.3. Обследование персонала, контактирующего в производственных условиях с ППУ.".

2.4. Обследование пожарных, участвовавших в ликвидации пожара на АО "Иркутсккабель" в 1992 году.

2.4.1. Краткая характеристика пожара и его влияния на здоровье пожарных

2.4.2. Методы обследования пожарных (1999-2002 годы).

2.4.3. Методы обследования пожарных (2002-2005 годы).

2.5. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Экспериментальное исследование влияния диоксинов и содержащего их комплекса токсических соединений на состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков.

3.1. Исследование состояние микросомных монооксигеназ в условиях воздействия ТХДД.

3.1.1. Исследование состояние микросомных монооксигеназ в условиях 20-кратного воздействия ТХДД.

3.1.2. Исследование состояния процессов пероксидации в условиях 20-кратного воздействия ТХДД.

3.1.3. Исследование влияния ТХДД на состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков в печени крыс в условиях 4-кратного воздействия.

3.2. Исследование влияния ТХДД и содержащего его комплекса токсических веществ на состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков.

3.2.1. Изучение первичных и отсроченных эффектов ТХДД и комплекса токсических веществ на микросомные монооксигеназы печени крыс.

3.2.2. Изучение первичных и отсроченных эффектов ТХДД и комплекса токсических веществ на состояние 2-ой фазы биотрансформации ксенобиотиков печени крыс.

3.2.3. Изучение первичных и отсроченных эффектов ТХДД и комплекса токсических веществ на состояние процессов пероксидации в печени крыс

3.2.4. Изучение первичных и отсроченных эффектов ТХДД и комплекса токсических веществ на состояние порфиринового обмена.

Глава 4. Изучение влияния предельных полициклических углеводородов на состояние системы биотрансформации липофильных ксенобиотиков в печени экспериментальных животных.

4.1. Изучение воздействия МЦП на системы биотрансформации ксенобиотиков в печени.

4.1.1. Влияние МЦП на состояние монооксигеназной системы и процессы пероксидации в микросомах печени крыс в условиях in vitro.

4.1.2. Влияние МЦП на состояние микросомных монооксигеназ печени крыс в условиях острого внутриже луд очного отравления.

4.1.3. Исследование возможности метаболизма МЦП в полной гидроксилирующей системе микросом печени крыс.

4.1.4. Влияние МЦП на состояние процессов пероксидации в печени крыс в условиях острого внутрижелудочного отравления.

4.1.5. Изучение влияния модификаторов микросомных монооксигеназ и антиоксидантов на токсические свойства МЦП.

4.2. Изучение воздействия ТГДЦПД на системы биотрансформации ксенобиотиков в печени.

4.2.1. Влияние ТГДЦПД на состояние монооксигеназной системы и процессы пероксидации в микросомах печени крыс в условиях in vitro.

4.2.2. Влияние ТГДЦПД на состояние микросомных монооксигеназ печени крыс в условиях острого внутрижелуд очного отравления.

4.2.3. Исследование возможности метаболизма ТГДЦПД в полной гидроксилирующей системе микросом печени крыс.

4.2.4. Изучение влияния модификаторов МОГС и антиоксидантов на токсические свойства ТГДЦПД.

4.3. Изучение воздействия ПЦД на системы биотрансформации ксенобиотиков в печени.

4.3.1. Влияние ПЦД на состояние монооксигеназной системы и процессы пероксидации в микросомах печени крыс в условиях in vitro.Ill

4.3.2. Влияние ПЦД на состояние микросомных монооксигеназ печени крыс в условиях острого внутрижелудочного отравления.

4.3.3. Влияние ПЦД на состояние системы конъюгации и процессов пероксидации в печени крыс в условиях острого внутрижелудочного отравления.

4.3.4. Исследование возможности метаболизма ПЦД в полной гидроксилирующей системе микросом печени крыс.

4.3.5. Исследование содержания продуктов основных реакций конъюгации в моче крыс в условиях острого внутрижелудочного отравления ПЦД.

4.3.6. Изучение влияния модификаторов МОГС и антиоксидантов на токсические свойства ПЦД.

Глава 5. Исследование состояния монооксигеназной системы и процессов пероксидации у сотрудников предприятий, контактирующих в производственных условиях с предельными полициклическими углеводородами.

5.1 Обследование персонала, контактирующего в производственных условиях с МЦП.

5.2. Обследование персонала, контактирующего в производственных условиях с ТГДЦПД и ДЦПД.

Глава 6. Установление возможной роли диоксинов в нарушениях здоровья пожарных, участвовавших в ликвидации пожара на АО "Иркутсккабель".

6.1. Обследование когорты "шелеховских" пожарных (1999-2002 годы).

6.1.1. Определение энзиматической активности цитохромаР4501А2 у "шелеховских" пожарных.

6.1.2. Оценка состояния 2-ой фазы биотрансформации ксенобиотиков у "шелеховских" пожарных.

6.1.3. Состояние порфиринового обмена у "шелеховских" пожарных.

6.2. Обследование когорты "шелеховских" пожарных (2002-2005 годы).

6.2.1. Определение уровней ПХДД, ПХДФ И ПХБ в сыворотке крови пожарных.

6.2.2. Исследование метаболизма антипирина у "шелеховских" пожарных

6.2.3. Связь между показателями метаболизма антипирина и экспрессией диоксин-индуцируемых генов у "шелеховских" пожарных.

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Черняк, Юрий Ильич, автореферат

Актуальность проблемы. Интенсивное загрязнение окружающей среды ксенобиотиками техногенного происхождения неизбежно порождает вопросы о том, в какой степени организм человека может адаптироваться к химическим нагрузкам, каковы при этом возможности организма и как их следует учитывать при регламентировании химических веществ, поиске методов диагностики и профилактики отравлений.

В процессе эволюции выработались определенные способы адаптации организма к действию ксенобиотиков [Арчаков А.И., 1983; Тиунов JI.A., 1995]. Ведущую роль при этом играют метаболические механизмы, обезвреживающие липофильные токсические вещества экзогенного и эндогенного происхождения. Эти механизмы включают преимущественно три группы реакций: энзиматическую биотрансформацию ксенобиотиков при участии цитохром Р450-зависимых монооксигеназ (1-я фаза биотрансформации), конъюгацию реактивных метаболитов и гидрофильных соединений (2-я фаза биотрансформации) и антиоксидантную защиту, объединяющую антирадикальные и антиперекисные механизмы [Голиков С.Н. и соавт., 1986]. Комплекс этих реакций, присущий всем живым организмам, рассматривается как универсальная биохимическая система естественной детоксикации. Нарушение согласованного процесса детоксикации является одним из общих механизмов токсичности и приводит к нарушению гомеостаза и развитию патологических процессов [Тиунов Л.А., 1995; Ляхович В.В. и соавт., 1997]. Принципиально, что в процессе функционирования системы возможно образование более реакционноспособных метаболитов по сравнению с исходными соединениями [Watkins Р.В., 1990], а также образование активных форм кислорода [Bast А., 1986; Kappus Н., 1993; Карузина И.И. и соавт., 1995; Lewis D.F.V., 2001]. Результатом этих процессов могут быть, в частности, взаимодействия с ДНК, приводящие к мутациям [Parke D.V. et al., 1991], а также развитие окислительного стресса [Nebert D.W., Duffy J.J., 1997], являющегося основной причиной инактивации многих ферментов и повреждения внутриклеточных мембран [Тиунов Л.А., 1995]. Существенно, что детоксикация и активация ксенобиотиков может происходить как на 1-ой, так и на 2-ой стадиях биотрансформации [Parke D.V., Obrebska-Parke M.J., 1987]. Соотношение этих процессов зависит от активности изоформ ферментов биотрансформации, для которых конкретный ксенобиотик является субстратом [Гуляева Л.Ф. и соавт., 2000]. Несмотря на широкий размах исследований, посвященных процессам детоксикации и пероксидации, в немногих работах названные процессы рассматривались как согласованно функционирующие звенья единой системы.

В полной мере вышеизложенное может быть отнесено к предельным полициклическим углеводородам. Данные такого рода относительно названного класса соединений в литературе отсутствуют, что затрудняет формирование представлений о биохимических механизмах их патогенного действия и разработку средств диагностики и профилактики интоксикаций.

С середины 90-х годов в связи с обострением проблем, связанных с воздействием на окружающую среду и человека стойких органических загрязнителей [Vallack H.W. et al., 1998], проводятся интенсивные изыскания, направленные на выявление эффективных биохимических маркеров воздействия диоксинов - особо опасных полициклических соединений [Birnbaum L.S., 1994]. Одними из перспективных в этом плане являются исследования, связанные с феноменом индукции диоксинами продуктов суперсемейства генов цитохрома Р450 - CYP1A1, 1А2 и 1В1, обусловливающих активацию CYP-содержащих монооксигеназ в организме млекопитающих [Осташевский В.А. и соавт., 1994; Clark G. et al., 1992; Spencer D.L. et al., 1998, 1999; Masten S. et al., 1997, 1998; Sibiryak D. et al., 2000; Grassman J. et al., 1999, 2000, 2002; Edwards T. et al., 2001; Abraham K. et al., 2002; Baccarelli A. et al., 2004; Landi M.T. et al., 2003, 2005]. Подобные разработки крайне важны, поскольку учитывают высокую межиндивидуальную вариабельность чувствительности к воздействию токсикантов и генетический полиморфизм ферментов биотрансформации ксенобиотиков [Grassman J. et al., 1998; Вавилин B.A., 2001].

Существенно, что в основе эффективного действия этой целостной системы лежат оптимальные соотношения составляющих ее компонентов. Это открывает уникальные возможности для использования показателей, характеризующих состояние системы естественной детоксикации, на пути разработки подходов к методам диагностики, профилактики и терапии отравлений липофильными химическими соединениями, патогенные эффекты которых формируются за счет модификации механизмов эндогенного обезвреживания.

Вышеизложенное определило цель настоящей работы, заключающуюся в раскрытии закономерностей и механизмов биотрансформации ксенобиотиков в печени животных и человека при воздействии полициклических соединений для патогенетического обоснования методов диагностики, профилактики и терапии интоксикаций.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

2. Установить закономерности формирования первичных и отсроченных эффектов воздействия 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина (ТХДД) отдельно и совместно с компонентами КТВ на состояние системы биотрансформации ксенобиотиков в печени крыс и оценить возможность модифицирующего влияния КТВ на реализацию патогенных свойств ТХДД.

3. Изучить влияние предельных полициклических углеводородов (ill ГУ) на состояние системы биотрансформации липофильных ксенобиотиков в печени животных в условиях in vitro и in vivo и оценить метаболизм ППУ в гидроксилирующей системе микросом печени.

6. Провести фармакокинетическую оценку активности цитохрома Р4501А2 и исследовать состояние 2-ой фазы биотрансформации ксенобиотиков у пожарных, принимавших участие в тушении пожара на АО "Иркутсккабель" в 1992 г.

Научная новизна работы. Впервые показано, что компоненты комплекса токсических веществ, содержащего индукторы подсемейства CYP1A - ПАУ и классический ингибитор цитохрома Р450 - СО, в условиях раздельного и комбинированного 10-кратного воздействия не модифицировали патогенные свойства ТХДД, оцениваемые по активности CYP1A1 и CYP1A2 в микросомах печени экспериментальных животных. ТХДД в условиях 20-кратного воздействия в дозе 0,1 мкг/кг вызывает активацию CYP1A в микросомах печени, сохраняющуюся в течение 11 месяцев.

Впервые получены данные о состоянии системы биотрансформации ксенобиотиков в печени экспериментальных животных, подвергнутых воздействию МЦП, тетрагидродициклопентадиена (ТГДЦПД) и пентациклодекана (ПЦД). Показана возможность метаболизма изученных ППУ в полной гидроксилирующей системе микросом печени.

Впервые при обследовании персонала, контактирующего в производственных условиях с МЦП и ТГДЦПД, и в опытах на животных установлен сходный характер влияния ППУ на состояние цитохром Р450-зависимых монооксигеназ (МОГС) и интенсивность процессов пероксидации экспериментальных животных и человека. ПОПУ оказывали разнонаправленное действие на состояние монооксигеназ печени и процессы пероксидации: МЦП угнетал функциональную активность МОГС при отсутствии изменений показателей процессов пероксидации, а ТГДЦПД индуцировал МОГС с последующей активацией процессов пероксидации.

Впервые использован антипирин в качестве маркера активности CYP1A2 в совокупности с определением содержания диоксинов у пожарных, подвергшихся в 1992 году воздействию содержащего диоксины комплекса токсических веществ, образовавшихся при пожаре. Выявлены высокие уровни содержания диоксинов в организме, позволяющие рассматривать "шелеховских" пожарных как экспонированную диоксинами когорту. Установлена связь между 3-гидроксиметилантипирином, характеризующим активность CYP1A2 метаболитом антипирина в моче, и суммарным TEQnxjxn/пхдФ/пхБ в сыворотке периферической крови, а также экспрессией диоксин чувствительных генов (AhR и CYP1А1).

Теоретическое и практическое значение работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований определили значение системы биотрансформации ксенобиотиков при воздействии полициклических соединений, в значительной мере расширили представления о механизмах патогенеза и позволили обосновать подходы к изысканию методов диагностики, профилактики и терапии интоксикаций. Полученные результаты позволили установить связь между эффектами, обусловленными экспрессией диоксин чувствительных генов, с последующими системными и функциональными нарушениями у пожарных. Это позволяет рассматривать активность цитохрома Р4501А2 (по результатам антипиринового теста) и экспрессию генов AhR и CYP1A1 как важные показатели для выделения групп риска по развитию отдаленных патогенных эффектов и оценки воздействия содержащего диоксины комплекса токсических веществ.

Полученные результаты использованы при подготовке пособия для врачей "Диагностика и медицинская реабилитация в отдаленном периоде профессиональной нейроинтоксикации у пожарных" - Иркутск: Изд-во РИО ИГИУВа, 2004. Разработанные подходы оценки состояния 1-ой и 2-ой фазы биотрансформации ксенобиотиков в печени используются при проведении обследования пожарных в клинике АФ - НИИ медицины труда и экологии человека ГУ НЦМЭ ВСНЦ СО РАМН. Результаты обследования пожарных рекомендованы к использованию практическими врачами профильных лечебных учреждений для выработки тактики наблюдения за состоянием здоровья лиц с высоким содержанием диоксинов в организме и экспрессией генов CYP1A. Разработана и утверждена методика "Дициклопентадиен. Спектрофотометрический метод определения в моче" (утвержден Главным сан. врачом СССР, Per. № 12-91). Результаты исследований были использованы при подготовке материалов к обоснованию предельно допустимых концентраций двух предельных полициклических углеводородов в воздухе рабочей зоны (утверждены зам. главного Гос. сан. врача РФ, Per. № 3-93 и Per. № 10-94).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Компоненты образовавшегося при пожаре комплекса токсических веществ существенно не модифицируют патогенное действие 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина в условиях разработанной экспериментальной модели.

2. Предельные полициклические углеводороды, тетрагидродицикло-пентадиен и МЦП, сопоставимо воздействуют на состояние системы биотрансформации липофильных ксенобиотиков и процессы пероксидации животных и человека, при этом ТГДЦПД проявляет свойства индуктора фенобарбиталового типа, а МЦП - ингибитора цитохром Р450-зависимых монооксигеназ.

3. Патогенетически обоснована необходимость применения антиоксидантов и модификаторов активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ для профилактики и лечения интоксикаций предельными полициклическими углеводородами.

4. Диоксины играют значимую роль в . формировании синдромокомплекса (токсической энцефалопатии с органическими расстройствами психики и сенсорной полиневропатией с вегетативными нарушениями конечностей) пожарных, принимавших участие в тушении пожара на АО "Иркутсккабель", а показатели экспрессии диоксин чувствительных генов и активность CYP1A2 являются маркерами для выделения групп риска по развитию отдаленных патогенных эффектов и оценки воздействия содержащего диоксины комплекса токсических веществ.

Апробация результатов исследований

Основные результаты работы доложены на Всесоюзной конференции "Цитохром Р450 и модификация макромолекул" (Ялта, 1989), Всесоюзной конференции "Токсикологические проблемы химических катастроф" (Ленинград, 1991), 7-ой International Conference "Biochemistry and Biophysics of Cytochrome P-450; Structure and Function, Biotechnological and Ecological

Aspects" (Москва, 1991), Всероссийской конференции "Антигипоксанты и актопротекторы: итоги и перспективы" (Санкт-Петербург, 1994), 1-ой Всероссийской конференции "Актуальные проблемы теоретической и прикладной токсикологии" (Санкт-Петербург, 1995), 14-ом и 15-ом European Workshop on Drug Metabolism (Париж, Франция, 1994; Йена, Германия, 1996), 3-ей Российско-Американской встрече "Снижение опасности загрязнения окружающей среды диоксинами и защита здоровья населения" (Байкальск, 1998), Круглом столе по проблемам "шелеховского" пожара в Гарвардской Школе Общественного Здравоохранения (Бостон, США, 1999), Семинаре группы диоксинов отдела фармакокинетики Исследовательского Центра Агентства по охране окружающей среды США (Северная Каролина, США, 1999), Российской конференции с международным участием "Национальный план действий по экологически обоснованному управлению диоксинами/фуранами и диоксиноподобными веществами" в рамках Проекта Программы ООН по окружающей среде и Центра международных проектов "Укрепление национального управления в области химических веществ в СНГ" (Санкт-Петербург, 2001), Всероссийской Конференции по проблеме стойких органических загрязнителей (Москва, 2002), 1-ом и 2-ом съездах токсикологов России (Москва, 1998 и 2003), Президиуме ВосточноСибирского Научного Центра СО РАМН (Иркутск, 2004), 20-, 21-, 22-, 23-, 24- и 25-ом International Symposium on Halogenated Environmental Organic Pollutants and POPs "Dioxin" (Монтерей, США, 2000; Кянджоу, Ю. Корея, 2001; Барселона, Испания, 2002; Бостон, США, 2003; Берлин, Германия, 2004; Торонто, Канада, 2005), 6-ом Annual Pilot Research Project Symposium (Цинциннати, США, 2005), заседании экспертной комиссии диссертационного совета Д.001.054.01 (Иркутск, 2005).

Публикации. По материалам диссертации опубликована 61 печатная работа, в том числе 14 в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования

РФ, 8 - в иностранных периодических изданиях, в двух монографиях, одном пособии для врачей и разделе в монографию.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 250 страницах, иллюстрирована 47 таблицами и 20 рисунками, состоит из введения, шести глав, заключения, выводов, списка литературы из 310 источников.

Заключение диссертационного исследования на тему "Состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков при воздействии различных классов полициклических соединений"

ВЫВОДЫ

3. Предельные полициклические углеводороды в условиях in vitro (в

2 5 • • диапазоне концентраций от 10" до 10" М) и in vivo оказывали влияние на состояние обеих фаз биотрансформации ксенобиотиков и сопряженные с ними процессы пероксидации. Тетрагидродициклопентадиен (ТГДЦПД) и пентациклодекан (ПЦД) проявляли свойства индуктора фенобарбиталового типа, а МЦП - ингибитора цитохром Р450-зависимых монооксигеназ печени. Изученные ППУ метаболизировались в полной гидроксилирующей системе микросом печени крыс, при этом выявлено N-деметилирование МЦП, а метаболизм ПЦД протекал при участии изоформ ФБ-типа (CYP2B) и реакции глюкуронидной конъюгации.

4. Применение в эксперименте на животных антиоксидантов, индукторов и ингибиторов микросомных монооксигеназ в качестве профилактических и лечебных средств в условиях воздействия ППУ позволило установить: а) метаболиты МЦП и ТГДЦПД менее, а ПЦД более токсичны по сравнению с исходным веществом; б) метаболизм всех ППУ сопровождается усилением генерации активных форм кислорода. Использование а-токоферола (для МЦП), ионола (для ПЦД) и комплекса, содержащего а-токоферол, аскорбиновую кислоту и унитиол (для ТГДЦПД), давало наилучший лечебный эффект для животных, подвергнутых однократному воздействию соответствующими соединениями.

6. Различия в метаболизме антипирина у пожарных связаны с активацией цитохрома Р4501А2 - изоформой фермента, индуцируемой диоксинами. Выявлена прямая связь между 3-гидроксиметилантипирином (преимущественно CYP1A2) в моче и уровнем диоксинов в организме пожарных, а также экспрессией AhR, CYP1A1 - диоксин чувствительных генов.

7. Разнонаправленные изменения показателей, характеризующих реакции конъюгации с глутатионом и глюкуроновой кислотой, в условиях динамического обследования пожарных являются результатом истощения конъюгирующих агентов, а снижение содержания в моче продуктов глутатионовой конъюгации - следствием наблюдаемой индукции цитохрома Р4501А2.

8. Высокий уровень содержания диоксинов в организме пожарных (169 пг/г липидов сыворотки крови), принимавших участие в тушении пожара на АО "Иркутсккабель" в 1992 г., позволяет рассматривать последних как экспонированную диоксинами когорту. Пожарные же с высоким уровнем содержания диоксинов, либо активности цитохромов Р4501А, представляют группу риска по развитию отдаленных патогенных эффектов.

9. Оценка состояния системы биотрансформации ксенобиотиков у лиц, контактирующих с полициклическими углеводородами, позволяет судить о взаимосвязи генетически детерминированной индуцибельности ферментов с выраженностью патологического процесса и имеет важное прогностическое значение.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Черняк, Юрий Ильич

1. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества / Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер. Л.: Наука, 1985. - 230 с.

2. Аксамитная И.А. О карбазоловом методе количественного определения глюкуроновой кислоты в моче / И.А. Аксамитная, В.В. Татарский // Лаб. дело. 1961. - № 6. - С. 21-24.

3. Амирова З.К. Ситуация с диоксинами в Республике Башкортостан // З.К. Амирова, Э.А. Круглов. Уфа: Изд-во "Реактив", 1998. - 115 с.

4. Арчаков А.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсикологии / А.И. Арчаков, В.В. Карузина // Вестн. АМН СССР. 1988. -№ 1. - С. 14-23.

5. Арчаков А.И. Микросомальное окисление / А.И. Арчаков. М.: Наука, 1975.-326 с.

6. Арчаков А.И. Модификация белков активным кислородом и их распад / А.И. Арчаков, И.М. Мохосоев // Биохимия. 1989. - Т. 54. - С. 179-186.

7. Арчаков А.И. Окислительная модификация цитохрома Р450 и других макромолекул в процессе их обновления / А.И. Арчаков, В.Г. Згода, И.И. Карузина // Вопр. мед. химии. 1998. Т. 44, Вып. 1. - С. 3-27.

8. Арчаков А.И. Оксигеназы биологических мембран. 37-е Баховское чтение /А.И. Арчаков. М.: Наука, 1982. - 56 с.

9. Афанасьев И.Б. Анион-радикал кислорода 02~ в химических и биохимических процессах / И.Б. Афанасьев // Усп. химии. 1979. - Т. 18, №6.-С. 977-1014.

10. Аширметов А.Х. Использование антипирина для оценки активности ферментов монооксигеназной системы печени. Обзор литературы / А.Х. Аширметов, М.Э. Краковский // Лаб. дело. 1990. - № 1.-С. 16-20.

11. Багрий Е.И. Адамантаны / Е.И. Багрий. М.: Наука, 1989. - 264 с.

12. Биохимия гидразинов / Н.И. Портяная, В.В. Соколовский, Б.Г. Осипенко, Г.А. Москадынова и др. Ангарск: Изд-во АГТА, 2005. - 81 с.

13. Биохимические исследования в токсикологическом эксперименте / Н.И. Портяная, Б.Г. Осипенко, Г.А. Москадынова, Н.К. Новохатский и др. Иркутск: Изд-во Иркут. ун-та, 1990. - 216 с.

14. Болдырев A.A. Na, К-АТФ-аза и ее биологическое значение / А.А. Болдырев, В.И. Мельгунов // Итоги науки и техники. Сер.: Биофизика.-М.: Изд-во ВИНИТИ, 1985.-Т. 17.-С. 5-109.

15. Витамин Е: иммунокоррегирующий эффект у больных бронхиальной астмой / К.Д. Плецистый, С.Б. Васипа, Т.В. Давыдова, В.Г. Фомина // Вопр. мед. химии. 1995. - № 4. - С. 33-36.

16. Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.: Наука, 1972.-252 с.

17. Владимиров Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Сер.: Биофизика. -М.: Изд-во ВИНИТИ, 1989. Т. 24. - 171 с.

18. Влияние фенобарбитала, ионола и сАМР на активность ферментов метаболизма глутатиона у грызунов / JI.C. Колесниченко, В.И.

19. Кулинский, Н.С. Манторова, JI.A. Шапиро // Укр. биохим. жури. 1990. -Т. 62, № 4. - С. 60-66.

20. Гены и ферменты системы метаболизма ксенобиотиков в онкопатологии / В.В. Ляхович, В.А. Вавилин, Н.И. Гуткина и др. // Вопр. мед. химии. 1997. - Т. 43, № 5. с. 330-338.

21. Голиков С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, И.В. Саноцкий, Л.А. Тиунов. Л.: Медицина, 1986. - 280 с.

22. Головенко Н.Я. Механизмы реакций метаболизма ксенобиотиков в биологических мембранах / Н.Я. Головенко. Киев: Наукова думка, 1981.-219с.

23. Головенко Н.Я. Сравнительная биохимия чужеродных соединений / Н.Я. Головенко, Т.Л. Карасева. Киев: Наукова думка, 1983. -200 с.

24. Головенко Н.Я. Уридиндифосфатглюкуронилтрансфераза / Н.Я. Головенко // Усп. совр. биологии. 1980. - Т. 89, № 3. - С. 360-377.

25. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени / Ю.И. Губский. Киев: Здоров'я, 1989. - 168 с.

26. Губский Ю.И. Химические катастрофы и экология / Ю.И. Губский, Б.Б. Долго-Сабуров, В.В. Храпак. Киев: Здоров'я, 1993. -224 с.

27. Гуляева Л.Ф. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков в химическом канцерогенезе: Аналит. обзор / Л.Ф. Гуляева, В.А. Вавилин, В.В. Ляхович. Новосибирск: Изд-во ГПНТБ СО РАН, 2000. - 85 с.

28. Дегтерев И.А. Ионол: распределение в организме, метаболизм и биологическое действие / И.А. Дегтерев, Г.Е. Заиков // Хим.-фармац. журн.- 1985. Т. 19, № 8. - С. 910-919.

29. Диагностика и медицинская реабилитация в отдаленном периоде профессиональной нейроинтоксикации у пожарных / В.Г. Колесов, Г.М. Бодиенкова, В.В. Бенеманский и др. Иркутск: Изд-во РИО ИГИУВа, 2004.-36 с.

30. Диоксины в России / Н.А. Клюев, Б.А. Курляндский, Б.А. Ревич, Б.Н. Филатов. М.: Изд-во ЮНЕП-ЦМП-РРПОХБВ, 2001. - 212 с.

31. Зборовская И.А. Антиоксидантная система организма, ее значение в метаболизме. Клинические аспекты / И.А. Зборовская, М.В. Банникова // Вестн. РАМН. 1995. - № 6. - С. 53-60.

32. Зинкевич Г.Д. Сульфаты в моче / Т.Д. Зинкевич // Биохимические методы исследования в клинике. Справочник. Под ред. А.А. Покровского.- М.: Медицина, 1969. С. 452-454.

33. Изучение влияния ТХДД в условиях раздельного и совместного с комплексом токсических веществ воздействия на состояние порфиринового обмена экспериментальных животных / Н.И. Портяная,

34. Ю.И. Черняк, И.В. Кудаева и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2002. - № 3. -С. 125-128.

35. Исследование информативных биохимических показателей в крови рабочих, контактирующих с ТГДЦПД в производственных условиях / Г.А. Москадынова, Н.И. Портяная, В.Г. Кутакова и др. // Бюлл. ИБФ. -1990.-№52.-С. 12-18.

36. Исследование ферментов монооксигеназного окисления в лимфоцитах и печени людей, подвергавшихся воздействию хлорфеноксигербицидов / В.А. Осташевский, К.Е. Герасимов, И.Б. Цырлов, B.C. Румак // Известия РАН. Сер. биол. 1994. - № 1. - С. 56-62.

37. Итоги реализации областной программы "Медико-социальные мероприятия по ликвидации последствий пожара на ОАО "Иркутсккабель" / B.C. Рукавишников, Л.И. Колесникова, М.Е. Кощеев и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН.-2003.-№2.-С. 10-16.

38. Каган В.Е. Проблемы анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов / В.Е. Каган, О.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко // Итоги науки и техники. Сер.: Биофизика. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1986. - Т. 18.-С. 42-51.

39. Каркищенко Н.Н. Основы клинической фармакологиии. Фармакокинетика / Н.Н. Каркищенко, В.В. Хоронько. Ростов-на-Дону: Изд-во Ростовского медицинского института, 1981. - 125 с.

40. Карузина И.И. Самоинактивация цитохрома Р-450 в каталитическом цикле / И.И. Карузина, Г.И. Бачманова, А.И. Арчаков // Вестн. РАМН. 1995. - № 2. - С. 17-29.

41. Катульский Ю.Н. Интегральная оценка состояния организма животных в токсиколого-гигиенических экспериментах / Ю.Н. Катульский // Гиг. и сан. 1986. - № 9. - С. 47-49.

42. Кесова И.Г. Оценка ферментного окисления производных пиразолона в печени у рабочих алюминиевого и химического производств / И.Г. Кесова, И.Б. Цырлов // Гиг. труда и проф. забол. 1991. - № 4. - С. 35-37.

43. Клинико-функциональная характеристика неблагоприятного действия комплекса токсических веществ на организм ликвидаторов пожара / О.И. Потрохов, Д.В. Долгих, В.П. Касьяновская, О.И. Шевченко // Мед. труда и пром. экология. 1997. - № 7. - С. 14-18.

44. Кобляков В.А. Импритинг цитохрома Р-450 и регуляция экспрессии его половых изоформ в печени крыс / В.А. Кобляков, Н.В. Попова, Л. Росси // Вопр. онкологии. 1990. - Т. 36, № 12. - С. 1418-1424.

45. Кобляков В.А. Цитохромы семейства Р-450 и их роль в активации проканцерогенов / В.А. Кобляков // Итоги науки и техники. Сер.: Биол. химия. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1990. - Т. 35. - 192 с.

46. Ковалев И.Е. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям / И.Е. Ковалев, О.Ю. Полевая. М: Наука, 1985. - 304 с.

47. Ковалев И.Е. Иммунотропные агенты как модуляторы цитохром Р-450-зависимого окисления лекарств / И.Е. Ковалев, Н.В. Шипулина // Хим.-фарм. журн. 1988. - Т. 22, № 1. - С. 5-20.

48. Ковалев И.Е. Иммунохимические механизмы адаптации организма к окружающей химической среде / И.Е. Ковалев, Н.В. Шипулина // Изв. АН СССР, Сер. Биол. 1992. - № 1. - С. 31 -41.

49. Колесников С.И. Импритинг действия токсикантов в эмбриогенезе / С.И. Колесников, А.В. Семенюк, С.В. Грачев. М.: Изд-во "Медицинское информационное агенство", 1999. - 263 с.

50. Количественное определение антипирина и его метаболитов в моче методом микроколоночной ВЭЖХ / И.А. Рахманов, А.В. Семенюк, Н.М. Слынько и др. // Хим.-фарм. журн. 1989. - № 3. - С. 351-354.

51. Кокаровцева М.Г. Взаимосвязь биотрансформации ацетилцистеина и его детоксицирующей способности / М.Г. Кокаровцева // Хим.-фармац. журн. 1979. - Т. 14, № 10. - С. 15-18.

52. Колесниченко JI.C. Глутатионтрансферазы / JI.C. Колесниченко, В.И. Кулинский // Усп. совр. биологии. 1989. - Т. 107, № 2. - С. 179-194.

53. Коррекция ацетилцистеином нарушений окислительных процессов / Я.И. Гонский, М.М. Корда, И.Н. Клищ, JI.C. Фира // Эксперим. и клин, фармакол. 1995. - Т. 58, № 6. - С. 64-66.

54. Кузьмина Е.И. Контроль эффективности и безопасности озонотерапии / Е.И. Кузьмина, О.В. Костина, А.А. Стручков. Нижний Новгород, 2004. -http://www.ozonetherapy.ws/Nov 89.html (18 февр. 2005).

55. Кузьмина Е.И. Определение перекисного окисления липидов в слюне. Инструментальная методика. / Е.И. Кузьмина. Нижний Новгород: Изд-во НИЦ "Биоавтоматика", 1991. - 6 с.

56. Кулинский В.И. Биологическая роль глутатиона / В.И. Кулинский, JI.C. Колесниченко // Усп. совр. биологии. 1990. - Т. 110, № 4.-С. 20-33.

57. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. / Под ред. В.В. Меньшикова. -М.: Медицина, 1987. С. 220-230.

58. Лакин К.М. Биотрансформация лекарственных веществ // К.М. Лакин, Ю.Ф. Крылов. М.: Медицина, 1981. - 344 с.

59. Лебедев А.А. Как создаются и действуют лекарства / А.А. Лебедев // Сорос, образ, журн. 1997. - № 10. - С. 91-97.

60. Лузина Н.Л. Антиоксидантная терапия альгоменореи как метод патогенетического воздействия / Н.Л. Лузина // Итоги и достижения научных исследований в гинекологии: Сб. научн. трудов. М., 1988. - С. 108-112.

61. Лукиенко П.И. Последствия индукции цитохромов Р-450 / П.И. Лукиенко, Л.Б. Заводник, М.И. Бушма // Эксперим. и клин, фармакол. -1995.-Т. 58, № i.-c. 68-73.

62. Лукьянова Л.Д. Кислород-зависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние / Л.Д. Лукьянова, Б.С. Балмуханов, А.Т. Уголев. М.: Наука, 1982. - 299 с.

63. Ляхович В.В. Индукция ферментов метаболизма ксенобиотиков / В.В. Ляхович, И.Б. Цырлов. Новосибирск: Наука, 1981. - 242 с.

64. Малета Ю.С. Непараметрические методы статистического анализа в биологии и медицине /Ю.С. Малета, В.В. Тарасов. М.: Изд-во МГУ, 1982.- 178 с.

65. Мембраны субклеточных органелл как источник супероксидных радикалов при ишемии печени / Л.С. Вартанян, Ю.Э. Рашба, Л.Г. Наглер и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1990. - № 6. - С. 550-552.

66. Метелица Д.И. Моделирование окислительно-восстановительных ферментов / Д.И. Метелица. Минск: Наука и техника, 1984. - 293 с.

67. Методические рекомендации по составлению проекта научного исследования / В.И. Кулаков, Е.М. Вихляева, И.С. Савельева, Ж.А. Городничева // Акуш. и гин. 2002. - № 4. - С. 48-52.

68. Метод оценки активности ферментов метаболизма лекарственных соединений / А.В. Семенюк, Л.И. Колесникова, В.Ю. Куликов и др. // Лаб. дело. 1982. -№ 10. - С. 31-33.

69. Микросомная монооксигеназная система живых организмов в биомониторинге окружающей среды: Аналит. обзор / Л.Ф. Гуляева, А.Ю. Гришанова, О.А. Громова, Н.Н. Слынько и др. Новосибирск: Изд-во ГПНТБ СО РАН, 1994. - 100 с.

70. Минченко О.В. Газохроматографический метод определения в моче ТГДЦПД / ИБФ, Инв. № 2280, Библ. АГТА. Ангарск, 1991. - 8 с.

71. Мишанов Л.Н. Токсикология диоксинов и родственных соединений / Л.Н. Мишанов // Диоксины суперэкотоксиканты XXI века. Проблемы. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1997. - Инф. вып. № 1. - С. 40-61.

72. Мишин В.М. Множественные формы цитохрома Р-450 / В.М. Мишин, В.В. Ляхович. Новосибирск: Наука, 1985. - 184 с.

73. Модификационные изменения альбумина в реакциях микросомального окисления / Г.Ф. Жирнов, В.В. Лисицина, Н.В. Шипулина и др. // Цитохром Р-450 и модификация макромолекул: Тез. докл. 5-ой Всесоюзной конф., 10-15 ноября 1989 г. Ялта, 1989. - С. 247.

74. Модификация апофермента цитохрома Р450 в процессе его окислительной самоинактивации в монооксигеназной реконструированной системе / В.Г. Згода, И.И. Карузина, О.В. Никитюк, А.И. Арчаков // Вопр. мед. химии. 1996. Т. 42, Вып. 3. - С. 203-210.

75. Москадынова Г.А, Минченко О.В, Черняк Ю.И. Дициклопентадиен. Спектрофотометрический метод определения в моче / ИБФ, Инв. № 647, Библ. АГТА. Ангарск, 1991. - 8 с.

76. Некоторые аспекты токсикокинетики дициклопентадиена / Н.И. Портяная, Ю.И. Черняк, О.В. Минченко, Н.А. Шульгина // Токсикол. вестн.- 1995.-№2.-С. 16-19.

77. Нефелометрическое определение серы // Биохимическая фотометрия. Под ред. B.C. Асатиани. М.: Изд-во АН СССР, 1957. - С. 649.

78. Об участии свободных активных форм кислорода в ферментативном перекисном окислении липидов в биомембранах / В.Е. Каган, Л.Л. Прилипко, В.М. Савов и др. // Биохимия. 1979. - Т. 44, № 3. -С. 482-489.

79. Основы медико-биологической оценки опасности диоксинов / B.C. Румак, С.П. Поздняков, Н.В. Умнова, В.В. Антонюк и др. // Диоксины суперэкотоксиканты XXI века. Медико-биологические проблемы. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1998. - Инф. вып. № 4. - 111 с.

80. Переслегина И.А. Активность антиоксидантных ферментов слюны здоровых детей / И.А. Переслегина // Лаб. дело. 1989. - № 11. - С. 20-23.

81. Половая дифференцировка функций печени / В.Б. Розен, Т.Д. Матарадзе, О.В. Смирнова, А.Н. Смирнов. М.: Медицина, 1991. - 326 с.

82. Портяная Н.И. О влиянии гидразинов на процессы микросомального окисления и пероксидации липидов в печени крыс / Н.И.

83. Портяная, Ю.И. Черняк, Г.А. Москадынова // Мед. труда и пром. экология. 1994. -№ 3. - С. 29-34.

84. Применение метода биохемилюминесценции в санитарно-токсикологических исследованиях / Г.Н. Красовский, В.И. Жуков, JI.A. Бондаренко, Т.С. Дергачева // Гиг. и сан. 1989. - № 11. - С. 35-39.

85. Ранчалис В.П. "Парадоксальное" действие тиоловых соединений / В.П. Ранчалис, Л.С. Бальчюнене // Вестн. РАМН. 1995. - № 1. - С. 4449.

86. Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. -М.: МедиаСфера, 2003. 312 с.

87. Ревич Б.А. Загрязнение окружающей среды и здоровье населения. Введение в экологическую эпидемиологию / Б.А. Ревич. М.: Изд-во МНЭПУ, 2001. - 264 с.

88. Репарация микросомальных мембран природными фосфолипидами / О.В. Добрынина, С.З. Шатина, B.JI. Мигушина, JI.B. Пономарева // Цитохром Р-450 и модификация макромолекул: Тез. докл. 5-ой Всесоюзной конф., 10-15 ноября 1989 г. Ялта, 1989. - С. 297.

89. Роль монооксигеназной системы в метаболизме и механизме действия некоторых пестицидов / Ю.С. Каган, Е.А. Ершова, О.Б. Леоненко и др. // Вестн. АМН СССР. 1988. - № 1. - С. 70-76.

90. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободно-радикальному окислению: Аналит. обзор

91. И.В. Сорокина, А.П. Крысин, Т.Б. Хлебников, B.C. Кобрин и др. -Новосибирск: Изд-во ГПНТБ СО РАН, 1997. 68 с.

92. Румак B.C. Методологические проблемы токсикометрии диоксинсодержащих воздействий внешней среды / B.C. Румак, С.П. Поздняков // Диоксины суперэкотоксиканты XXI века. Проблемы. М.: Изд-во ВИНИТИ, 1997. - Инф. вып. № 1. - С. 62-84.

93. Сибиряк С.В. Цитохром Р450 и иммунная система / С.В. Сибиряк, В.А. Вахитов, Н.Н. Курчатова. Уфа: Изд-во "Гилем", 2003. -211с.

94. Снижение токсичности и повышение эффективности противоопухолевой химиотерапии путем коррекции активности монооксигеназ печени: от эксперимента в клинику / Т.А. Богуш, Е.А. Богуш, Л.А. Дурнов, А.Б. Сыркин // Вестник РАМН. - 2002. - № 1. С. 3742.

95. Специфичность систем антиоксидантной защиты органов и тканей основа дифференцированной фармакотерапии антиоксидантами / В.Н. Бобырев, В.Ф. Почерняева, С.Г. Стародубцев и др. // Эксперим. и клин, фармакол. - 1994. - Т. 57, № 1. - С. 47-53.

96. Справочник по токсикологии и гигиеническим нормативам (ПДК) потенциально опасных химических веществ / Под ред. B.C. Кушневой, Р.Б. Горшковой. -М.: ИздАТ, 1999. 272 с.

97. Тирзин Г.Д. Синтетические антиоксиданты и антиканцерогенез / Г.Д. Тирзин, М.Ю. Лидак // Хим. фармац. журн. - 1985. - Т. 19, № 12. -С. 1415-1424.

98. Тиунов Л.А. Механизмы естественной детоксикации и антиоксидантной защиты / Л.А. Тиунов // Вестн. АМН СССР. 1995. - № З.-С. 9-13.

99. Тиунов Л.А. Некоторые вопросы молекулярной токсикологии / Л.А. Тиунов // Вестн. АМН СССР. 1991. - № 1. - С. 8-12.

100. Тиунов Л.А. Роль глутатиона в процессах детоксикации / Л.А. Тиунов, В.А. Иванова // Вестн. АМН СССР. 1988. - № 1. - С. 62-69.

101. Тиунов Л.А. Токсикология окиси углерода / Л.А. Тиунов, В.В. Кустов. М.: Медицина, 1980. - 288 с.

102. Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода / И. Фридович Свободные радикалы в биологии. Под ред. У. Прайора. -М.: Мир, 1979.-Т. 1.-С. 272-314.

103. Хрипач Л.В. Оксидантный статус организма и его роль в чувствительности генома к повреждающим факторам окружающей среды: Автореф. дисс. докт. биол. наук: 14.00.07, 03.00.02 / РАМН. Москва, 2003.-51 с.

104. Худолей В.В. Современные представления о метаболической активации канцерогенов и факторах, ее модифицирующих / В.В. Худолей, И.Г. Майорова // Усп. совр. биологии. 1988. - Т. 105, № 3. - С. 450-466.

105. Цырлов И.Б. Факторы, контролирующие индукцию множественных форм цитохрома Р-450 в печени / И.Б. Цырлов // Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза. Под ред. И.И. Гительзона. Новосибирск: Наука, 1987. - С. 130-144.

106. Цырлов И.Б. Хлорированные диоксины: биологический и медицинский аспекты / И.Б. Цырлов. Новосибирск: Изд-во ГПНТБ СО АН СССР, 1990.-210 с.

107. Черняк Ю.И. Комплексное изучение состояния процессов детоксикации и пероксидации при воздействии ППУ / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. 2001. - № 2 (16). - С. 88-91.

108. Черняк Ю.И. Токсикокинетика и метаболизм пентациклодекана / Ю.И. Черняк, Н.И. Портяная, Н.А. Шульгина // Токсикол. вестн. 1999. -№2. -С. 21-25.

109. Activation of chemically diverse procarcinogens by human cytochrome Р-450 1B1 / T. Shimada, C.L. Hayes, H. Yamazaki, S. Amin et al. // Cane. Res. 1996. - Vol. - 56. - P. 2979-2984.

110. A morbidity study of former pentachlorophenol-production workers / D.O. Hryhorczuk, W.H. Wallace, V. Persky, S. Furner et al. // Environ. Health Perspect. 1998. - Vol. 106, № 7. - P. 401-407.

111. Antipyrine as a probe for human oxidative drug metabolism: Identification of the cytochrome P450 enzymes catalyzing 4-hydroxyantipyrine, 3-hydroxymethylantipyrine, and norantipyrine formation / G. Engel, U.

112. Hofmann, H. Heidemann et al. // Clin. Pharmacol. Ther. 1996. - Vol. 59, № 6. -P. 613-623.

113. A simple method for determination of antipyrine clearance / M. Dossing, H.E. Poulsen, P.B. Andreasen, N. Tygstrup // Clin. Pharmacol. Ther. -1982. Vol. 32, № 3. - P. 392-396.

114. Age specific dioxin TEQ reference range / D.G. Patterson Jr., D. Patterson, R. Canady, L.-Y. Wong et al. // Organohalogen Compounds. 2004. -Vol. 66.-P. 2878-2883.

115. Alvares A.P. Stimulatory effects of poly chlorinated biphenyls (PCB) on cytochromes P-450 and P-448 midiated microsomal oxidations / A.P. Alvares // Microsomes and drug oxidations. -New York: Pergamon Press, 1977. P. 476-483.

116. Anders M.W. Novel glutathione-dependent bioactivation reactions / M.W. Anders // ISSX Proseed. 1994. - Vol. 6. - P. 18.

117. Animals models of human response to dioxins / J.A. Grassman, S.A. Masten, N.J. Walker, G.W. Lucier // Environ. Health Perspect. 1998. - Vol. 106, Suppl.2.-P. 761-775.

118. A proposed nomenclature system for the cytosolic sulfotransferase (SULT) superfamily / R.L. Blanchard, R.R. Freimuth, J. Buck et al. // Pharmacogen. 2004. - Vol. 14. - P. 199-211.

119. Aryl-hydrocarbon receptor-dependent pathway and toxic effects of TCDD in humans: a population-based study in Seveso, Italy / A. Baccarelli, A.C. Pesatori, S.A. Masten et al. // Toxicol. Lett. 2004. - Vol. 149. - P. 287293.

120. Austin C.C. Municipal firefighter exposure groups, time spent at fires and use of self-contained-breathing apparatus / C.C. Austin, G. Dussault, D.J. Ecobichon // Amer. J. Industr. Med. 2001. - Vol. 40. - P. 683-692.

121. Aust S.D. Evidence for superoxide generation by NADPH-cytochrome С reductase of rat liver microsomes / S.D. Aust, D.L. Roerig, T.C.

122. Pederson // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. - Vol.47, № 5. - P. 1133-1137.

123. Bast A. Is formation of reactive oxygen by cytochrome P450 perilous and predictable? / A. Bast // Trends Pharmacol. Sci. 1986. - Vol. 7. -P. 266-270.

124. Biology and function of the reversible sulfation pathway catalysed by human sulfotransferases and sulfatases / M.W. Coughtrie, S. Sharp, K. Maxwell, N.P. Innes // Chem. Biol. Interact. 1998. - Vol. 109. - P. 3-27.

125. Biomonitoring of chemical exposure among New York City firefighters responding to the World Trade Center fire and collapse / P. Edelman, J. Osterloh, J. Pirkle et al. // Environ. Health Perspect. -2003. Vol. 111, № 16.-P. 1906-1911.

126. Birnbaum L.S. Cancer and developmental exposure to endocrine disruptors /L.S. Birnbaum, S.E. Fenton // Environ. Health Perspect. 2003. -Vol. Ill, №4.-P. 389-394.

127. Birnbaum L.S. Developmental effects of dioxins and related endocrine disrupting chemicals / L.S. Birnbaum // Toxocol. Lett. 1995. - Vol. 82-83.-P. 743-750.

128. Birnbaum L.S. Non-carcinogenic effects of TCDD in animals / L.S. Birnbaum, J. Tuomisto // Food Addit. Contamin. 2000. - Vol. 17, № 4. - P. 275-288.

129. Birnbaum L.S. TEFs: a practical approach to a real-world problem / L.S. Birnbaum // Hum. Ecol. Risk Assess. 1999. - Vol. 5, № 1. - P. 13-24.

130. Birnbaum L.S. The mechanism of dioxin toxicity: relationship to risk assessment / L.S. Birnbaum // Environ. Health Perspect. 1994. - Vol. 102, Suppl. 9.-P. 157-167.

131. Birnbaum L.S. Use of toxic equivalency factors for risk assessment for dioxins and related compounds /L.S. Birnbaum, M.J. DeVito // Toxicology. 1995. - Vol. 105. - P. 391-401.

132. Boyd N. Biochemical mechanisms in chemical-induced injury: rols of metabolic activation / N. Boyd // Crit. Rev. Toxicol. 1980. - Vol. 7, № 2. -P. 103-176.

133. Bresnick E. The molecular biology of the induction of the gepatic mixed function oxidases / E. Bresnick // Pharm. Ther. 1978. - Vol. A2. - P. 319-335.

134. Bronchoalveolar lavage findings in firefighters / C.E. Bergstrom, A. Eklund, M. Skold, G. Tornling // Amer. J. of Industr. Med. 1997. - Vol. 32. -P. 332-336.

135. Buege J.A. Microsomal lipid peroxidation / J.A. Buege, S.D. Aust // Meth. Enzymol. 1978. - Vol. 52. - P. 302-310.

136. Cellular and molecular aspects of UDP-glucuronosyltransferases / G. Siest, S. Fournel-Gigleux, T. Magdalou et al. // Drug metabol. Rev. 1989. -Vol. 20, №2-4.-P. 721-731.

137. Cherhogolov A. Interaction of cytochrome b5 with mitochondrial cytochromes P450 / A. Cherhogolov, S. Usanov // J. Basic Clin. Physiol. Pharmacol. 1992. - Vol. 3. - P. 199.

138. Chernyak Y.I. Study of glutathione-S-transferase activity in rat liver in acute inhalating intoxication with limited poly cyclic hydrocarbons / Y.I. Chernyak, N.I. Portyanaya // ISSX Proceed. 1995. - Vol. 7. - P. 53.

139. Chlorinated dibenzo-p-dioxins, dibenzofiirans, and biphenyls / R. Neubert, L. Maskow, J. Webb, U. Muller et al. // Environ. Health Perspect. -1993.-Vol. 105.-P. 750-755.

140. Cohort of firemen, Shelekhovo, Russia. PCDD/Fs, PCBs and PBDEs in blood lipids / Z. Amirova, N. Matorova, E. Kruglov, O. Lakhman // Organohalogen Compounds. 2001. - Vol. 52. - P. 217-221.

141. Combustion of polyvinyl chloride an important source for the formation of PCDD/PCDF / W. Christmann, D. Kasiske, K.D. ICloppel et al. // Chemosphere. - 1989. - Vol. 19, № 1-6. - P. 387-392.

142. Comparisons of estimated human body burdens of dioxinlike chemicals and TCDD body burdens in experimentally exposed animals / M.J.

143. DeVito, L.S. Birnbaum, W.H. Farland, T.A. Gasiewicz // Environ. Health Perspect.-1995.-Vol. 103, №9.-P. 1564-1569.

144. Controlling persistent organic pollutants what next? / H.W. Vallack, D.J. Bakker, I. Brandt, E. Brostrom-Linden et al/ // Environ. Toxicol. Pharmacol. - 1998. - Vol. 6. - P. 143-175.

145. Coproporphyrinuria found in rural South Vietnamese exposed to Agent Orange / S. Poznyakov, V. Roumak, D. Papkovsky et al. // Organohalogen Compounds. 1992. - Vol.10. - P. 820-831.

146. Correlation between in vivo antipyrine metabolite formation and theophylline metabolism in rats / M.W.E. Teunissen, I.O.N. Brorens, H.J. De Langen et al. // Pharmacol. Res. 1986. - Vol. 3, № 3. - P. 156-160.

147. CYP1A1 and CYP1B1 genotypes, haplotypes, and TCDD-induced gene expression in subjects from Seveso, Italy / M.T. Landi, A.W. Bergen, A. Baccarelli, D.G. Patterson et al. // Toxicology. 2005. - Vol. 207. - P. 191202.

148. CYP1A2 expression in lymphocytes as a biomarker for hepatic sequestration / T. Edwards, N.J. Walker, S.A. Masten, D.L. Spencer et al. // Toxicologist. 2001. - Vol. 60. - P. 441.

149. Dallner G. Studies on the structural and enzymic organization of the membranous elements of liver microsomes / G. Dallner // Acta pathol. microbiol. scand. 1963. - Suppl. 166. - P. 24-25.

150. Denison M.S. The Ah receptor: a regulator of the biochemical and toxicological actions of structurally diverse chemicals /M.S. Denison, S. Heath-Pagliuso // Bull. Environ. Contam. Toxicol. 1998. - Vol. 61. - P. 557-568.

151. Determination of CYP1A2 enzyme activity by antipyrine test and levels of dioxins in "shelekhov" firefighters / Y. Chernyak, A. Merinova, N. Taranenko et al. // Organohalogen Compounds. 2001. - Vol. 53. - P. 415-418.

152. Determination of cytochrome P-448 activuty in biological tissues /

153. C.E. Phillipson, P.M. Godden, P.Y. Lum et al. // Biochem. J. 1984. - Vol. 221. -P. 81-83.

154. Determination of PCDFs and PCDDs in fire accidents and laboratory combustion tests involving PVC-containing materials / J. Theisen, W. Funcke, E. Balfanz, J. Konig // Chemosphere. 1989. - Vol. 19, № 1-6. - P. 423-428.

155. Development of chronic hepatic porphyria (porphyria cutanea tarda) with inherited uroporphyrinogen decarboxylase deficiency under exposure to dioxin / M. Doss, H. Sauer, R. von Tipermann, A.M. Colombi // Int. J. Biochem. 1984.-Vol. 16.-P. 369-373.

156. DeVito M.J. Dioxin: model chemicals for assessing receptor-mediated toxicity / M.J. DeVito, L.S. Birnbaum // Toxicology. 1995. - Vol. 102.-P. 115-123.

157. DeVito M. Interaction of dioxins with non-dioxin-like chemicals / M. DeVito, L.S. Birnbaum // Organohalogen Compounds. 2001. - Vol. 53. -P. 282-284.

158. Differential time-course and dose-response relationships of TCDD-induced CYP1B1, CYP1A1, and CYP1A2 proteins in rats /M.S. Santostefano,

159. D.G. Ross, U. Savas, C.R. Jefcoate et al. // Biochem. Biophys. Res. Comm. -1997.-Vol. 223.-P. 20-24.

160. Diliberto J.J. Role of CYP1A2 in hepatic sequestration of dioxin: studies using CYP1A2 knock-out-mice / J.J. Diliberto, D. Burgin, L.S. Birnbaum // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1997. - Vol. 236. - P. 431-433.

161. Dioxins and dibezofurans in the blood of workers and residents of industrial towns in the Irkutsk Region of Russian Siberia / A. Schecter, E. Grosheva, O. Papke et al. // Organohalogen Compounds. 1999. - Vol. 44. - P. 243-246.

162. Dioxin exposure in a residential community / K.J. Orloff, D. Hewitt, S. Metcalf et al // J. Exposure Anal. Environ. Epidem. 2001. - Vol. 11. - P. 352-358.

163. Dioxin levels in food from the U.S. with estimated daily intake / A. Schecter, O. Papke, M. Ball et al. // Organohalogen Compounds. 1993. - Vol. 13.-P. 97-100.

164. Dioxin revisited: developments since the 1997 IARC classification of dioxin as a human carcinogen / K. Steenland, P. Bertazzi, A. Baccarelli, M. Kogevinas // Environ. Health Perspect. 2004. - Vol. 112, № 13. - P. 12651268.

165. Does N-acetylcysteine protect against the toxic effects of combined chemotherapy in mouse? / J. Kolarovic, M. Mikov, A. Raskovic, V. Ristovski // Drug Met. Rev. 2005. - Vol. 37, Suppl. 1. - P. 58-59.

166. Dose-additive carcinogenicity of a defined mixture of "Dioxin-like compounds" / N.J. Walker, P.W. Crockett, A. Nyska, A.E. Brix et al. // Environ. Health Perspect. -2005. Vol. 113, № 1. - P. 43-48.

167. Dose-response relationships for polyhalogenated dioxins and dibenzofurans following subchronic treatment in mice / M.J. DeVito, J.J. Diliberto, D.G. Ross, M.G. Menache et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1997. -Vol. 147.-P. 267-280.

168. Elimination of polychlorinated dibenzo-p-dioxins and dibenzofurans in occupationally exposed persons / D. Flesch-Janys, H. Becher, P. Gurn, D. Jung et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 1996. - Vol. 47. - P. 363-378.

169. Evaluation of diabetes mellitus, serum glucose, and thyroid function among United States workers exposed to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin / G.M. Calvert, M.H. Sweeney, J. Deddens, D.K. Wall // Occup. Environ. Med. -1999. Vol 56. - P. 270-276.

170. Evidence of hepatic sequestration of dioxins in humans: An examination of tissue levels and CYP1A2 expression / J.A. Grassman, L.L. Needham, S.A. Masten et al. // Organohalogen Compounds. 2000. - Vol. 48. -P. 87-91.

171. Expression of cytochromes P450 1A1, 1A2 and 1B1 are correlated with dioxin levels in human liver / J.A. Grassman, L.L. Needham, S.A. Masten et al. // Organohalogen Compounds. 2002. - Vol. 59. - P. 183-187.

172. Farrell G.C. Accuracy and clinical utility of simplified tests of antipyrine metabolism / G.C. Farrell, L. Zaluzny // Br. J. Clin. Pharmac. 1984. -Vol. 18.-P. 559-565.

173. Fires at chemical plants. Are firemen a dioxin exposure risk group? / Z. Amirova, N. Matorova, E. Kruglov, E. Loshkina et al. // Organohalogen Compounds. 2003. - Vol. 64. - P. 199-202.

174. Fridovich J. The biology of oxygen radicals. The superoxide radical is an agent of oxigen toxicity: superoxide dismutases provide an important defense / J. Fridovich // Science. 1978. - Vol. 201, № 4359. - P. 850-875.

175. Garle M.J. Detection of reactive metabolites in vitro / M.J. Garle, J.R. Fry // Toxicology. 1989. - Vol. 54, № 1. - P. 101-110.

176. Geusau A. Blood kinetics in two patients severely contaminated with 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin / A. Geusau, О. Papke, K. Abraham // Organohalogen Compounds. 2002. - Vol. 55. - P. 297-298.

177. Grassman J. Determinants of ethoxyresorufm-O-deethylase (EROD) activity in human peripheral blood lymphocytes challenged in vitro with dioxin / J. Grassman, M.T. Landi, S. Masten // Organohalogen Compounds. 1999. -Vol. 44.-P. 375-379.

178. Grosheva E. Preliminary analysis of the levels of PCDDs and PCDFs in the blood of Irkutsk Region residents / E. Grosheva, N. Matorova, Z. Amirova // Organohalogen Compounds. 1999. - Vol. 44. - P. 115-117.

179. Guengerich F.P. Catalytic selectivity of human cytochrome P450 enzymes: relevance to drug metabolism and toxicity / F.P. Guengerich // Toxicol. Lett. 1994. - Vol. 70. - P. 133-138.

180. Habig W.H. Assays for differentiation of glutathione-S-transferases / W.H. Habig, W.B. Jakoby // Meth. Enzymol. 1981. - Vol.77. - P. 398-405.

181. Habig W.H. Glutathione-S-transferases. The first enzymatic step in mercapturic acid formation / W.H. Habig, M.J. Pabst, W.B. Jakoby // J. Biol. Chem. 1974. - Vol. 249, № 22. - P. 7130-7139.

182. Halliwell B. Free radicals and antioxidant protection: mechanisms and significance in toxicology and disease / B. Halliwell, J.M.C. Gutteridge // Hum. Toxicol. 1988. - Vol. 7, № 1. - P. 7-13.

183. Health and environmental consequences of the World Trade Center disaster / P.J. Landrigan, P.J. Lioy, G. Thurston, G. Berkowitz et al. // Environ. Health Perspect. 2004. - Vol. 112, № 6. - P. 731-739.

184. Hepatic function assessed (in rets) during chemotherapy with some anti-cancer drugs / I.D. Capel, M. Jenner, H.M. Dorrell, D.C. Williams // Clin. Chem. 1979. - Vol. 25, № 8. - P. 1381-1383.

185. Hooper К. The PBDEs: an emerging environmental challenge and another reason for breast-milk monitoring programs / K. Hooper, T.A. McDonald // Environ. Health Perspect. 2000. - Vol. 108, №. 5. - P.387-392.

186. Ikeguchi T. Experimental study on dioxins emission from open burning simulation of selected wastes / T. Ikeguchi, M. Tanaka // Organohalogen Compounds. 1999. - Vol. 41. - P. 507-510.

187. Induced sputum assessment in New York City firefighters exposed to Word Trade Center dust / E.M. Fireman, Y. Lerman, E. Ganor et al. // Environ. Health Perspect.-2004.-Vol. 112, № 15.-P. 1564-1569.

188. Induction of oxidative stress in brain tissue of mice after subchronic exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin / E.A. Hassoun, S.C. Wilt, M.J. DeVito, A. Van Birgelen et al. // Toxicol. Sciences. 1998. - Vol. 42. - P. 2327.

189. Induction of pulmonary CYP1A1 by nicotine / M.M. Iba, H. Scholl, J. Fung et al. // Xenobiotica. 1998. - Vol. 28, № 9. - P. 827-843.

190. Induction of P-450 in workers exposed to dioxin / W. Halperin, W. Kalow, M.H. Sweeney, B.G. Tang // Occup. Environ. Med. 1995. - Vol. 52. -P. 86-91.

191. Inhibition and induction of human cytochrome P450 (CYP) enzymes / O. Pelkonen, J. Maenpaa, P. Taavitsainen et al. // Xenobiotica. 1998. - Vol. 28, № 12.-P. 1203-1253.

192. Inhibition of human and rat CYP1A2 by TCDD and dioxin-like chemicals / D.S. Staskal, J.J. Diliberto, M.J. DeVito, L.S. Birnbaum // Toxicol. Sciences. 2005. - Vol. 84. - P.225-231.

193. Inhibition of uroporphyrinogen decarboxylase activity. The role of cytochrome Р-450-mediated uroporphyrinogen oxidation / R.W. Lambrecht, J.M. Jacobs, P.R. Sinclair, J.F. Sinclair // Biochem. J. 1990. - Vol. 269. - P. 437-441.

194. Intake of 2,3,7,8 chlorine substituted dioxins, furans, and planar PCBs from food in the Netherlands: median and distribution / R.M.C. Theelen, A.K.D. Liem, W. Slob, J.H. Van Wijnen // Chemosphere. 1993. - Vol. 27. - P. 1625-1635.

195. Integrated approach for evaluating species and interindividual differences in responsiveness to dioxins and structural analogs / G. Clark, A. Tritscher, D. Bell, G. Lucier // Environ. Health Perspect. 1992. - Vol. 98. - P. 125-132.

196. Inter-individual differences in the metabolism of environmental toxicants: cytochrome P450 1A2 as prototype // F.P. Guengerich, A. Parikh, R.J. Turesky, P.D. Josephy // Mutation Res. 1999. - Vol. 428. - P. 115-124.

197. In vivo modulation of total and mitochondrial glutathione in rat liver. Depletion by phorone and rescue by N-acetylcysteine / J. Traber, M. Suter, P. Walter, C. Richter // Biochem. Pharmacol. 1992. - Vol. 43, № 5. - P. 961-964.

198. Kappus H. Metabolic reactions: role of cytochrome P450 in the formation of reactive oxygen species / H. Kappus // Cytochrome P450. J. B. Schenkman and H. Griem, eds. Berlin: Springer-Verlag, 1993. - P. 145-154.

199. Kappus H. Toxic drug effect associated with oxygen metabolism redox cycling and lipid peroxydation / H. Kappus, H. Sies // Exper. 1981. -Vol. 32, № 12.-P. 1233-1241.

200. Karmaus W. Storage of serum in plastic and glass containers may alter the serum concentration of polychlorinated biphenyls / W. Karmaus, J.F. Riebow // Environ. Health Perspect. 2004. - Vol. 112, №. 6. - P.643-647.

201. Kitchin K.T. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin induction of aryl hydrocarbon hydroxylase in female rat liver. Evidence for de novo synthesis ofcytochrome P-448 / K.T. Kitchin, J.S. Woods // Mol. Pharmacol. 1978. - Vol. 14, №5. -P. 890-899.

202. Kretzschmar M. Regulation of hepatic glutathione metabolism and its role in gepatotoxicity / M. Kretzschmar // Exp. Toxic. Pathol. 1996. - Vol. 48, №5.-P. 439-446.

203. Kuthan H. A quantitative test for superoxide produced in biological systems / H. Kuthan, V. Ullrich, B.W. Estabrook // Biochem. J. 1982. - Vol. 203.-P. 551-558.

204. La Du B.M. Fundamentals of drug metabolism and drug disposition / B.M. La Du, L.G. Mandel, E.L. Way. Baltimore, 1971. - P. 570-572.

205. Levels of dioxins, dibenzofurans and selected other chlorinated organic compounds in food from Russia / A. Schecter, P. Furst, C. Furst et al. // Chemosphere. 1992. - Vol. 25. - P. 2009-2015.

206. Lewis D.F.V. Guide to cytochromes P450. Structure and function / D.F.V. Lewis. London and New York: Taylor & Francis, 2001. - 215 p.

207. Loft S. Antipyrine clearance in children from single saliva samples // Br. J. clin. Pharmac. 1985. - Vol. 19. - P. 698-700.

208. Lu A.Y.H. Multiplicity of mammalian microsomal cytochromes P-450 / A.Y.H. Lu, S.B. West // Pharmacol. Rev. 1980. - Vol. 31. - P. 277-295.

209. Mechanism of induction of cytochrome P-450 by phenobarbital / M. Adesnik, S. Bar-Nunt, F. Maschio et al. // J. Biol. Chem. 1981. - Vol. 256, № 20.-P. 10340-10345.

210. Mechanistically based markers of exposure and response to dioxin in occupationally exposed individuals / S.A. Masten, J.A. Grassman, X. Yang, C.R. Miller et al. // Organohalogen Compounds. 1997. - Vol. 34. - P. 80-85.

211. Milne A.M. Design and characterisation of isoform-specific anti-UGT antibodies / A.M. Milne, M.W.H. Coughtrie, B. Burchell // Drug Met. Rev. 2004. - Vol. 36, Suppl. 1. - P. 130.

212. Morris P.E. Significance of glutathione in lung disease and implications for therapy / P.E. Morris, G.R. Bernard // Am. J. Med. Scien. -1994.-Vol. 307, №2.-P. 121-127.

213. Moser G. A non-absorbable dietary fat substitute enhances elimination of persistent lipophilic contaminants in humans / G.A. Moser, M.S. McLachlan // Chemosphere. 1999. - Vol. 39, № 9. - P. 1513-1521.

214. Multiple forms of cytochrome P-450 in phenobarbital- and 3-methylcholanthrene-treated rats. Separation and spectral properties. / D. Ryan, A. Lu, S. West, W. Levin//J. Biol. Chem. 1975. - Vol. 250. - P. 2157-2163.

215. Nash T. Colorimetric estimation of formaldehyde by means of the Hantzsch reaction / T. Nash // Biochem. J. 1953. - Vol. 55. - P. 416-421.

216. Nebert D.W. Multiple forms of cytochrome P-450 and the importance of molecular biology and evolution / D.W. Nebert, H. Nebishi // Biochem. Pharmacol. 1982. - Vol. 31. - P. 2311 -2317.

217. Nebert D.W. Multiple forms of inducible drug-metabolizing enzymes: a reasonable mechanism by which any organism can cope with adversity / D.W. Nebert // Mol. Cell. Biochem. 1979. - Vol. 27, № 1. - P. 2746.

218. Nebert D.W. Role of the Ah receptor and the dioxin-inducible Ah. gene battery in tixicity, cancer, and signal trasduction / D.W. Nebert, A. Puga, V. Vasiliou // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1993. - Vol. 685. - P. 624-640.

219. Nebert D.W. Substrate-inducible microsomal hydroxilase in mammalian cell culture / D.W. Nebert, H.V. Gelboin // J. Biol. Chem. 1968. -Vol.243. - P.6242-6249.

220. Omura T. The carbon monoxide binding pigment of liver microsomes. 11. Solubilization, purification and properties / T. Omura, R. Sato // J.Biol. Chem. 1964. - Vol.239. - P.2379-2385.

221. Orrenius S. Mechanisms of drug toxicity and glutathione defence in liver / S. Orrenius // Abstract: 31 th Internat. Confgr. Physiol. Sci., July 9-14, 1989. Helsinki-Oulu, 1989. - P. 463.

222. Oxidative stress in female B6C3F1 mice following acute and subchronic exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) / B.P. Slezak, G.E. Hatch, M.J. DeVito, J.J. Diliberto et al. // Toxicol. Sciences. -2000.-Vol. 54.-P. 390-398.

223. Parke D.V. Biochemical mechanisms of chemical toxicity / D.V. Parke, M.J. Obrebska-Parke // Folia Med. Cracov. 1987. - Vol. 28, № 1-2. -P. 27-46.

224. Parke D.V. The role of cytochromes P450 in the detoxication and activation of drug and other chemicals / D.V. Parke, C. Ioannides, D.F.V. Lewis // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1991. - Vol. 69. - P. 537-549.

225. Park J.Y. Induction of cytochrome P4501A1 by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin or indolo(3,2-b)-carbazole is associated with oxidative DNA damage / J.Y. Park, M.K. Shigenaga, B.N. Ames // Proc. Natl. Acad. Sci. 1996. - Vol. 93. - P. 2322-2327.

226. Paternal concentrations of dioxin and sex ratio of offspring / P. Mocarelli, P.M. Gerthoux, E. Ferrari, D.G. Patterson et al. // Lancet. 2000. -Vol. 355.-P. 1858-1863.

227. Paulson G. Conjugation of foreign chemicals by animals / G. Paulson // Residue. Rev. 1979. - Vol. 70. - P. 32-72.

228. PCB congener profile in the serum of humans sonsuming Great Lakes fish / H.E.B. Humphrey, J.C. Gardiner, J.R. Pandya et al. // Environ. Health Perspect. 2000. - Vol. 108. - P. 167-172.

229. PCB exposure and in vivo CYP1A2 activity among native americans / E.F. Fitzgerald, S.A. Hwang, G. Lambert, M. Gomez et al. // Environ. Health Perspect. 2005. - Vol. 113, №. 3. - P.272-277.

230. PCDD/Fs and PCBs in human adipose tissue from the Irkutsk Oblast, Russia / E. Mamontova, A. Mamontov, E. Tarasova, M. McLachlan // Organohalogen Compounds. 1998. - Vol. 38. - P. 131-134.

231. Pelkonen O. Metabolism of polycyclic aromatic hydrocarbons: etiologic role in cancirogenesis / O. Pelkonen, D.W. Nebert // Pharmacol. Rev. -1982. Vol. 34, № 2. - P. 189-222.

232. Pendurthi U.R. Accumulation on the nuclear dioxin (Ah) receptor and transcriptional activation of the mouse Cypla-1 and Cypla-2 genes / U.R. Pendurthi, S.T. Okino, R.H. Tukey // Arch. Biochem. Biophys. 1993. - Vol. 306, № l.-P. 65-69.

233. Persistence of decreased T-helper cell function in industrial workers 20 years after exposure to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin / T. Tonn, C.

234. Esser, E.M. Schneider et al. // Enviorn. Health Perspect. 1996. - Vol. 104. -P. 422-426.

235. Pharmacokinetics of TCDD in veterans of Operation Ranch Hand: 10-year follow-up / J.E. Michalek, J.L. Pirkle, S.P. Caudill, R.C. Tripathi et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 1996. - Vol. 47. - P. 209-220.

236. Physiological modeling of a proposed mechanism of enzyme induction by TCDD / M.C. Konh, N.J. Walker, A.H. Kim, C.J. Portier // Toxicology. 2001. - Vol. 162. - P. 193-208.

237. Population-based studies of dioxin responsiveness: individual variation in CYP1A1 levels and relationship to dioxin body burden / S.A. Masten, J.A. Grassman, C.R. Miller et al. // Organohalogen Compounds. 1998. -Vol. 37.-P. 13-16.

238. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. Lowry, N. Rosebrough, A. Farr, R. Randall // J. Biol. Chem. 1951. - Vol. 193. - P. 265275.

239. Purification and characterisation of microsomal cytochrome P-450s / F.P. Guengerich, G.A. Dannan, S.T. Wright, M.W. Martin // Xenobiotica. -1982.-Vol. 12.-P. 701-716.

240. Quantitative analysis of CYP1B1 expression induced by 2,3,7,8 -tetrachlorodibenzo-p-dioxin in human lymphocytes / D.L. Spencer, S.A. Masten, K.M. Lanier et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 1998. - Vol. 8. - P. 139-146.

241. Rappe C. Sources of PCDDs and PCDFs. Introduction. Reactions, levels, patterns, profiles and trends / C.Rappe // Chemosphere. 1992. - Vol. 25, № 1-2.-P. 41-44.

242. Regulation of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced tumor promotion by 17p-estradiol in female Spraque-Dawley rats / M.E. Wyde, S.R. Eldridge, G.W. Lucier, N.J. Walker // Toxicol. Appl. Pharmacol. 2001. - Vol. 173.-P. 7-17.

243. Relationship of serum TCDD concentrations and age at exposure of female residents of Seveso, Italy / B. Eskenaszi, P. Mocarelly, M. Warner, L. Needham et al. // Environ. Health Perspect. 2004. - Vol. 112, №. 1. - P. 2227.

244. Ross D. Mechanistic toxicology: a radical perspective / D. Ross // J. Pharm. Pharmacol. 1989. - Vol. 41, № 8. - P. 505-511.

245. Ryan J.J. Human body burden of polychlorinated dibenzofurans associated with toxicity based on the Yusho and Yucheng incidents / J.J. Ryan, T.A. Gasiewicz, J.E. Jr. Brown // Fundam. Appl. Toxicol. 1990. - Vol. 15. -P. 722-731.

246. Safe S.H. Modulation of gene expression and endocrine response pathways by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related compounds / S.H. Safe // Pharmacol. Ther. 1995. - Vol. 67. - P. 247-281.

247. Sedlak J. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent / J. Sedlak, R.H. Lindsay // Analyt. Biochem. 1968. - Vol.25. - P. 192-205.

248. Serum concentrations of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-/?-dioxin and test results from selected residents of Seveso, Italy / P. Mocarelli, L.L. Needman, A. Marocchi, D.C.Jr. Patterson et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 1991. - Vol. 32.-P. 357-366.

249. Serum dioxin and diabetes mellitus in veterans of Operation Ranch Hand / G.L. Henriksen, N.S. Ketchum, J.E. Michalek, J.A. Swaby // Epidemiology. 1997. - Vol. 8. - P. 252-258.

250. Serum 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) levels and thyroid function in air force veterans of the Vietnam war / M. Pavuk, A.J. Schecter, F.Z. Akhtar, J.E. Michalek // Ann. Epidem. 2003. - Vol. 13, № 5. -P. 335-343.

251. Severe 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) intoxication: clinical and laboratory effects / A. Geusau, K. Abraham, K. Geissler et al. // Environ. Health Perspect. 2001. - Vol. 109, №. 8. - P. 865-869.

252. Severe 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) intoxication: insights into the measurement of hepatic cytochrome P450 1A2 induction / K. Abraham, A. Geusau, Y. Tosun, H. Helge et. al. // Clin. Pharmacol. Ther. -2002.-Vol. 72, №2.-P. 163-174.

253. Severe 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-/?-dioxin (TCDD) intoxication: kinetics and trials to enhance elimination in two patients / A. Geusau, S. Schmaldienst, K. Derfler, O. Papke et al. // Arch. Toxicol. 2002. - Vol. 76. -P. 316-325.

254. Sharer J.E. Identification of the human hepatic cytochrome P450 involved in the in vitro oxidation of antipyrine / J. E. Sharer, S.A. Wrighton // Drug Met. Disposit. 1996. - Vol. 24, № 4. - P. 487-494.

255. Siest Y. The enzymes of drug metabolism / Y. Siest, A. Batt, J.M. Ziegler // Lyon Pharmacent. 1978. - Vol. 29, № 5. - P. 347.

256. Simplified approaches to the determination of antipyrine pharmacokinetic parameters / J.M. Scavone, D.J. Greenblatt, G.T. Blyden et al. //Br. J. clin. Pharmac. 1988. - Vol. 25. - P. 695-699.

257. Slezak B.P. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-mediated oxidative stress in CYP1A2 knockout (CYP1A2 / -) mice / B.P. Slezak, J.J. Diliberto, L.S. Birnbaum // Biochem. Biophys. Res. Comm. - 1999. - Vol. 264. - P. 376379.

258. Synthesis of polybrominated diphenyl ethers and their capacity to induce CYP1A by the Ah receptor mediated pathway / G. Chen, A.D. Konstantinov, B.G. Chittim, E.M. Joyce et al. // Environ. Sci. Technol. 2001. -Vol. 35.-P. 3749-3756.

259. TCDD-mediated alterations in the AhR-dependent pathway in Seveso, Italy, 20 years after the accident / M.T. Landi, P.A. Bertazzi, A. Baccarelli, D. Consonni et al. // Carcinogenesis. 2003. - Vol. 24, № 4. -P.673-680.

260. Testa B. Inhibitors of cytochrome P-450 and their mechanism of activation / B. Testa, P. Jenner // Drug Met. Rev. 1981. - Vol. 12, № 1. - P. 1117.

261. Testa В. Mechanism of inhibition of xenobiotic-metabolizing enzymes / B. Testa // Xenobiotica. 1990. - Vol. 20. - P. 1129-1137.

262. Thalhofer S. N-acetylcystein als atidot / S. Thalhofer, C. Koppel, P. Dorow // Atemw.- Lungenkrkh. 1991. - J. 17, Suppl. 1. - S. 6-15.

263. The role conjugation reactions in detoxications / K.W. Bock, W. Lilienblum, G. Fischer et al. // Arch. Toxicol. Vol. 60, № 1. - P. 22-29.

264. The role of genetic polymorphisms in environmental health / S.N. Kelada, D.L. Eaton, S.S. Wang et al. // Environ. Health Perspect. 2003 . - Vol. Ill, № 8. - P. 1055-1064.

265. The toxicokinetics and metabolism of polychlorinated dibenzo-p-dioxins (PCDDs) and dibenzofurans (PCDFs) and their relevance for toxicity / M. Van den Berg, J. De Jongh, H. Poiger, J.R. Olson // Crit. Rev. Toxicol. -1994.-Vol. 24, № l.-P. 1-74.

266. The World Trade Center residents' respiratory health study: new-onset respiratory symptoms and pulmonary function / J. Reibman, S. Lin, Syni-An Hwang et al. // Environ. Health Perspect. 2005. - Vol. 113, № 4. - P.4061 411.

267. Thioether excretion in urine of applicators exposed to 1,3-dichloropropene: a comparison with urinary mercapturic acid excretion / R. Welie, C. Marrewijk, F. Wolff, N. Vermeulen // Brit. J. Industr. Med. 1991. -Vol.48. - P. 492-498.

268. Thor H. Metabolic activation and hepatotoxicity / H. Thor, P. Moldeus, S. Orrenius // Arch. Biochem. Biophys. 1979. - Vol. 192, № 2. - P. 405-413.

269. Tien M. Superoxide dependent lipid peroxidation / M. Tien, B.A. Svinger, S.D. Aust//Fed. Proceed. 1981. - Vol. 40, № 2. - P. 179-182.

270. Total serum testosterone and gonadotropins in workers exposed to dioxin / G.M. Egeland, M.H. Sweeney, M.A. Fingerhut, K.K. Wille et al. // Am. J. Epidemiol. 1994. - Vol. 139. - P. 272-281.

271. Toxic equivalency factors (TEFs) for PCBs, PCDDs, PCDFs for humans wildlife / M. Van den Berg, L. Birnbaum, A.T.C. Bosveld, B. Brunstrom et al. // Environ. Health Perspect. 1998. - Vol. 106. - P.775-792.

272. Uroporphyrinogen oxidation catalyzed by reconstituted cytochrome P4501A2 / R.W. Lambrecht, P.R. Sinclair, N. Gorman, J.F. Sinclair // Arch. Biochem. Biophys. -1992,- Vol. 294. P. 504-510.

273. Use of a PBPK model with dose-dependent elination rates predicts higher peak dioxin exposures than previously estimated / C. Emond, J.E. Michalek, L.S. Birnbaum, M.J. DeVito // Organohalogen Compounds. 2004. -Vol. 66.-P. 2655-2659.

274. Use of respiratory protection among responders at the World Trade Center site New York City, September 2001 / CDC and Prevention // MMWR. -2002.-Vol. 51.-P. 6-8.

275. Vessell E.S. The antipyrine test in clinical pharmacology: conceptions and misconceptions / E.S. Vessell // Clin. Pharmacol. Ther. 1979. -Vol. 26, №3.-P. 275-286.

276. Vezina C.M. Subchronic exposure to TCDD, PeCDF, PCB126, and PCB153: effect on hepatic gene expression / C.M. Vezina, N.J. Walker, J.R. Olson // Environ. Health Perspect. 2004. - Vol. 112, № 16. - P. 1636-1644.

277. Voegeli C.J. Determination of thioethers in urine / C.J. Voegeli, G.J. Burckart // Clin. Chem. 1982. - Vol.28, № 1. - P. 248-250.

278. Walker N.J. Real-time and quantitative PCR: applications to mechanism-based toxicology / N.J. Walker // J. Biochem. Mol. Toxicol. 2001. -Vol. 15, №3.-P. 121-127.

279. Watkins P.B. Role of cytochromes P450 in drug metabolism and hepatotoxicity / P.B. Watkins // Sem. Liver Disease. 1990. - Vol. 10. - P. 235250.

280. Whitlock J. P. Induction of cytochrome P4501A1 / J. P. Whitlock // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1999. - Vol. 39. - P. 103-125.

281. Whitlock J. P. Mechanistic aspects of dioxin action / J. P. Whitlock // Chem. Res. Toxicol. 1993. - Vol. 6. - P. 754-763.

282. Younes M. Glutathione-S-transferase activities in rat liver: effect of some factors influencing the metabolism of xenobiotics / M. Younes, R. Schlichting, C.P. Siegers // Pharmacol. Res. Commun. 1980. - Vol. 12, № 2. -P. 115-128.

283. Ziobro A. A comparison of the total antioxidant capacity of some human body fluids / A. Ziobro, G. Bartosz // Cell. Mol. Biol. Lett. 2003. -Vol. 8.-P. 415-418.

Автореферат диссертации по медицине на тему Состояние процессов биотрансформации ксенобиотиков при воздействии различных классов полициклических соединений

Оглавление диссертации Черняк, Юрий Ильич :: 2005 :: Ангарск

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Черняк, Юрий Ильич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Черняк, Юрий Ильич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций