Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Состояние окислительного метаболизма при пылевой патологии органов дыхания

Государственный комитет санитарно-эпидемиологического надзора Российской Федерации

Московский Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гигиены (1 д им. Ф.Ф. Эрисмана

'•'•"./ Мл»

На правах рукописи

МУРАВЛЕВА Лариса Евгеньевна

СОСТОЯНИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО МЕТАБОЛИЗМА ПРИ ПЫЛЕВОЙ ПАТОЛОГИИ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ

14.00.07- гигиена

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва 1995

Работа выполнена в Карагандинском государственном медицинском институте Министерства здравоохранения республики Казахстан Научные консультанты: Академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Б.Т.Всличковский Члсн-корр. HAH PK, доктор медицинских наук, профессор Б.Е. Алтынбеков Доктор медицинских наук, профессор Т.З.Ссйссмбсков

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор H.A. Павловская Доктор медицинских наук, профессор A.B. Рошин Доктор медицинских наук, профессор П.Н. Любченко

Ведущая организация: Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова

Защита состоится ге * с ¿1 ХЬ/ЭуС^ 1995 Г- в "_" часов

на заседании специализированного Совета Д.0&4.05.01. при Московском Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (141000, Московская область. г.Мытиши, ул. Ссмашко.2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского НИИ гигиены им.Ф.Ф.Эрисмана

Автореферат разослан "_"_ 1995 г.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор медицинских наук, профессор

А.А..Комарова

- 3 -ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Производственные процессы на современных предприятиях угледобывающей промышленности Центрального Казахстана обуславливают воздействие на организм шахтеров комп- ■ лекса вредных факторов производственной среды: высокий уровень запыленности, особенно в комбинации с повышенной загазованностью горных выработок,неблагоприятными метеоусловиями, шумом, вибрацией в сочетании с физическими нагрузками, нервно-эмоциональным напряжением, что снижает реактивность организма горнорабочих и., способствует формированию бронхолегочной патологии (Б. Е: Алтынбе-ков и соавт.,1988;1990). Ведущее место среди профессиональных заболеваний занимают пневмокониозы и хронические пылевые бронхиты (Б. Е. Алтынбеков и соавт.,1990; В.В.Милишникова и соавт.,1990). Они поражают самых квалифицированных рабочих в наиболее трудоспособном возрасте, нанося тем самым серьезный социально-экономический вред.

. Несмотря на то, что проблеме патогенеза пневмокониозов посвящено достаточно большое число экспериментальных и теоретических исследований (Г.М.Пичхадзе,1984; Б.Е.Алтынбеков.1988; Б. Т.Велич-ковский,1991,1994; Д. М.Джангозина, 1992; Busch et al.;1981, Kamal et al.,1989), первичные молекулярные и клеточные механизмы развития фиброзного процесса в легких при действии фиброгенных пылей остаются неясными.

Последнее время большое внимание уделяется изучению процессов окислительного метаболизма (ОМ) при действии фиброгенных пылей, особенно кварца и хризотиил-асбеста (Л.Г.Бабушкина и соавт., 1981,1982; О.Г.Архипова,1983; Б.Т.Величковский и соавт. .1979,1982, 1988; Н.С.Кислицина.1986-1988; В.А.Гусев, Е.В.Даниловская. 1987, 1989; Strivastanova et al.,1980; Kamal et al.,1989). Несмотря на интенсивное изучение состояния ОМ при действии высокофиброгенных пылей не сформулирована единая точка зрения о роли переписного окисления липидов и системы антиокси-дантной защиты (П0Л-А03) в механизмах цитотоксичности и фиброген-ности промышленных аэрозолей. Исследование реакций ПОЛ при силикозе позволило накопить значительное количество фактического материала и сформулировать ряд гипотез об участии процессов ПОЛ в развитии этого заболевания (А.И.Иванова и соавт.,1980; 0.Г.'Архипова, 1983; Л.Г.Коркина,Б.Т.Величковский, 1988; Ъ. Т. Величковс-кий,1994).

При действии пыли каменного угля этим процессам посвящены единичные исследования (Р.Н.Макарова. 1990; Г.С.Тухбатули-на.1990), что не позволяет создать целостную картину участия П0Л-А03 в патогенезе антракоза, причем не только из-за отсутствия достаточного количества фактического материала, но и вследствие лимитированного набора применяющихся методов исследования окислительного метаболизма. Необходимо отметить, что угольная пыль по своему физико-химическому составу резко отличается от кварца или асбеста, в связи с чем механизм ответной реакции ткани легких и всего организма может иметь свои особенности.

При антракозе не изучена скорость накопления, детоксикации и вывода метаболитов ПОЛ, эффективность функционирования и степень сопряженности ферментов антирадикальной и антиперекисной защиты, а также структурно-функциональное состояние биомембран. Между тем. изучение глубины и направленности нарушений в системе ПОЛ-АОЗ позволит определить препараты, способные корректировать процессы патологического окисления.

Самостоятельной проблемой является изучение состояния окислительного метаболизма при хронических пылевых бронхитах, поскольку подобного рода исследования практически не проводились. Актуальность изучения этой проблемы определяется широкой распространенностью этой формы пылевой патологии ( В. В. Милишникова и соавт.1988; В.Д.Алырщиков и соавт.,1990; Б.Т.Величковский,1994), а также высокой степенью ее осложненности и инвалидизации больных (С.К.Куанышбаев и соавт., 1990).

Подобного рода исследования целесообразно проводить при сопоставлении с динамикой нарушения ПОЛ-АОЗ при неспецифических заболеваниях бронхолегочной системы (острыми пневмониями, хроническими бронхитами). Оценка состояния ОМ, его выраженности и пролонгированное™ при различных нозологических формах неспецифических заболеваний легких различной этиологии позволит выделить общие и специфические закономерности, что является актуальной задачей для разработки диагностических и прогностических критериев, а также определить конкретные подходы к антиоксидантной терапии указанных заболеваний.

Цель исследования: изучить нарушение окислительного метаболизма у горнорабочих угольных шахт, оценить его патогенетическую значимость при развитии пылевой патологии органов дыхания, обосновать и разработать пути его патогенетической терапии.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние пылей каменного угля с различным петрографическим и микрокомпонентным составом на процессы окислительного

метаболизма и состояние биомембран эритроцитов, используя методы биологического моделирования.

2.Изучить состояние системы П0Л-А03 в процессе развития экспериментального антракоза.

3.Провести оценку влияния различных антиоксидантов на развитие фиброзного процесса и состояние окислительного метаболизма у крыс с экспериментальным антракозом.

4.Изучить особенности процессов П0Л-А03 у сталированных шахтеров. больных пневмокониозом, хроническим пылевым бронхитом и больных неспецифическими заболеваниями органов дыхания (пневмонии. хронические бронхиты).

5.Исследовать эффективность применения антиоксидантов при лечении больных профессиональными заболеваниями легких пылевой этиологии.

Научная новизна.

Впервые при профессиональных заболеваниях от воздействия угольной пыли использован комплекс биохимических и биофизических методов исследования процессов ПОЛ в различных биосредах, эффективности и сопряженности функционирования системы антиоксидантной и антирадикальной защиты, структурно-функционального состояния биомембран.;

Впервые дана характеристика состояния окислительного метаболизма у шахтеров, больных антракосиликозом и хроническим пылевым бронхитом в зависимости от стадий их развития. Глубокие нарушения перекисных процессов в сочетании с изменением ферментативного звена АОЗ и степени его сопряженности зарегистрированы уже у практически здоровых стажированных шахтеров при отсутствии клинических признаков заболевания и у горнорабочих с ранними проявлениями антракосиликоза (группа" К", код 0-1). Присоединение хронического пылевого бронхита усугубляет метаболические расстройства системы ПОЛ-АОЗ у шахтеров, больных антракосиликозом I стадии.

Впервые дана характеристика системы ПОЛ-АОЗ у шахтеров с хроническим пылевым бронхитом в фазе обострения и неполной ремиссии. Показана резкая интенсификация реакций ПОЛ на фоне изменения сопряженности ферментов АОЗ, нарушение проницаемости биомембран в фазе обострения ХПБ. Дисбаланс окислительного метаболизма сохраняется у больных на стадии клинико-лабораторной ремиссии и не нивелируется в результате проведения общепринятых лечебно-профилактических мероприятий.

Сопоставлением характера изменения окислительного метаболизма у больных с пылевой и неспецифической патологией органов дыхания (острые пневмонии, хронические бронхиты) показано, что при

общей направленности сдвигов со стороны ПОЛ, особенности выявленных нарушений зависят от конкретной нозологической формы заболевания.

Впервые в экспериментальных исследованиях выявлены особенности изменения в системе ПОЛ-АОЗ в легких и крови животных с моделью антракоза в динамике префибротической фазы. Модельными и экспериментальными исследованиями продемонстрировано отсутствие специфичности нарушения окислительного метаболизма в зависимости от петрографического и микрокомпонентного состава угольных пылей.

Впервые проведена экспериментальная апробация таких антиок-сидантов как аргинин, глутатион восстановленный, пробукол, нико-тинамид и биологически активное вещество, гаммаплант,с целью коррекции нарушения окислительного метаболизма и торможения фиброзо-образования при антракозе. Показано, что противофиброзный эффект указанных соединений находится в прямой взаимосвязи с их антиок-сидантными и регуляторными свойствами. Наиболее" позитивные результаты получены от применения аргинина,метионина, никотинамида и гаммапланта.

Впервые проведена клиническая апробация антиоксидантов е комплексном лечении шахтеров с ранними проявлениями антракосили-коза и больных хроническим пылевым бронхитом. Включение в комплекс лечебно-профилактических мероприятий антиоксидантов в средних дозировках позволило снизить напряженность в системе ПОЛ и стабилизировать показатели АОЗ. •

Сформулирована гипотеза участия нарушения окислительного метаболизма в патогенезе пневмокониоза от воздействия угольной пыли. Угольная пыль индуцирует структурные нарушения биомембран, первоначально белковых полимеров, что в совокупности с другим? факторами генерации АФК, провоцирует нарушение ОМ в легких, которое на ранних сроках запыления опережает изменение интегральны? показателей фиброгенеза. Одним из патогенетических факторов фиб-розообразования является эндогенный избыток перекисных соединений. связанный с нарушением сопряжения ключевых ферментов АОЗ. Нарушение окислительного метаболизма в крови развивается синхронно с таковым в легких и определяет генерализацию ПОЛ.

Практическая значимость работы. По материалам исследованш изданы методические рекомендации республиканского уровня: "Биохимические и иммунологические тесты ранних проявлений антракосили-коза" (1988) и "Антиоксиданты в клинике внутренних болезней1 (1992). Получены акты внедрения в медсанчасти ПО- Карагандауголь, в лаборатории функциональной диагностики и в клинике Институт;

гигиены и физиологии труда АН PK. на кафедрах терапии и пропедевтики внутренних болезней N 2 Карагандинского медицинского института.

Получено авторское свидетельство на изобретение "Способ диагностики антракосиликоза" (N 1522103 от 15 июля 1989 г.)

Издано 3 информационных листка:" Комплексное биофизическое, исследование сурфактантной системы легких" (1986 г.), "Биохимические способы ранней диагностики антракосиликоза шахтеров" (1987), внедренный в ПО Карагандауголь. и "Спектрофотометрическое определение продуктов перекисного окисления в моче" (1990), внедренный в ЦНИЛ и кафедре пропедевтики внутренних болезней N 2 КГМИ.

Методы исследования, усовершенствованные в процессе выполнения работы, внедрены в Научном центре региональных проблем питания (г. Алма-Ата), в ЦНИЛ. кафедре фтизиатрии КГМИ, в областной клинической больнице г.Караганды.

Результаты исследования используются при чтении лекций и проведения практических занятий на ряде кафедр КГМИ и Челябинского медицинского института.

В процессе выполнения диссертационной работы получено удостоверений на 12 рационализаторских предложений.

Апробация работы.Основные положения диссертации доложены на всесоюзной конференции "Здоровье и окружающая среда" (Алма-Ата, 1984), республиканской конференции "Состояние и пути снижения уровней загрязнения окружающей и производственной среды" (Караганда. 1985). на всесоюзном совещании по хемилюминесценции (Уфа, 1986).на всесоюзной конференции "Физиология экстремальных состояний и индивидуальная защита человека" (Москва, 1986), на республиканской конференции "Актуальные вопросы гигиены в условиях научно-технического прогресса"(Ташкент, 1987), на всесоюзных конференциях "Аэродисперсные системы и коагуляция аэрозолей" (Москва,1988), "Люминесцентный анализ в биологии и медицине и его аппаратурное обеспечение" (Рига,1989), на республиканских конференциях "Экологические проблемы Центрального Казахстана" (Караганда, 1989), "Актуальные проблемы охраны и укрепления здоровья населения Казахстана" (Алма-Ата, 1990), на III международной конференции "Экологическая патология и ее фармакокоррекция" (Чита, 1991), на V конференции биохимиков республик Средней Азии и Казахстана (Ташкент.1991), на научной конференции с международным участием "Региональные проблемы питания "(Алма-Ата. 1992). на региональной научно-практической конференции "Организация работы в диагностических центрах" (Караганда.1993), на международной конференции стран СНГ "Коррекция и управление функциональным состояни-

ем в процессе трудовой деятельности" (Караганда.1993), на I конгрессе пульмонологов" и аллергологов Центральной Азии (Ташкент. 1994), на совместном заседании проблемной комиссии "Гигиена", сотрудников профильных кафедр и НИЦ КГМИ (Караганда.1994).

Публикации: по материалам диссертационной работы опубликована монография " Роль перекисного окисления липидов и .антиокси-дантной защиты в развитии антракоза в эксперименте и клинике" (Алматы.1994), 20 статей, из них 3 информационных листка и 2 методические рекомендации республиканского уровня.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, глав "Обзора литературы". "Материалы и методы исследования". 5 глав собственных наблюдений, выводов, заключения по внедрению в практику. указателя литературы. Текст иллюстрирован 15 таблицами.100 рисунками, библиография включает 260 работ авторов стран СНГ и 84 работы зарубежных авторов.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1.Пыль каменного угля независимо от петрографического и микрокомпонентного состава индуцирует структурные повреждения биомембран и способствует нарушению окислительных процессов в эритроцитах.

2. У крыс с экспериментальным антракозом нарушение в системе ПОЛ-АОЗ в легких и крови опережает изменение параметров фиброзо-образования, причем степень интенсификации ПОЛ и дисфункции АОЗ зависит от сроков запыления.

3. Нарушение окислительного метаболизма установлено у практически здйровых шахтеров, степень дисбаланса системы ПОЛ-АОЗ у больных антракосиликозом зависит от стадии болезни.

4. Наиболее глубокие метаболические расстройства системы ПОЛ-АОЗ зарегистрированы у шахтеров с хроническим пылевым бронхитом, фазаДклинико-лабораторной ремиссии не сопровождается стабилизацией АОЗ'и снижением интенсивности ПОЛ.

5. Экспериментальная апробация антиоксидантов и гаммапланта показала возможность торможения фиброзообразования в легких, что сопровождалось ингибированием нарушения ПОЛ-АОЗ.

6. Включение в общепринятую терапию антиоксидантов у шахтеров с пылевой патологией органов дыхания результировалось снижением интенсивности нарушений окислительного метаболизма.

7.Сопоставление характера изменения окислительных процессов у больных с пылевой и неспецифической патологией органов дыхания показало наличие общих закономерностей и особенностей алгоритма нарушения ПОЛ-АОЗ. что позволило рекомендовать ряд биохимических тестов для диагностических и прогностических целей профессиональ-

- 9 -

ных заболеваний пылевой .этиологии.

МАТЕРИМЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Модельные исследования проводились путем инкубации интактных эри'тюцитов (1% взвесь) с различны® .по петрографическому и микрокомпонентному составу образцами пыли каменного угля в течение 24 часов. Контролем служила эритроцитарная взвесь, инкубированная в аналогичных условиях без шли.

Экспериментальные исследования проводились на беспородных 'i линейных крысах (Август) -самцах с исходным весом 130.-140 г. Л т получения экспериментального антракоза (ЗА) использовалась инт-* ратрахеальная модель (одноразовое введение 50 мг свежеобразованной каменного угля III-IY стадии метаморфизма в 1 мл стерильного физиологического раствора). Животным контрольной группы вводили 1 мл стерильного физиологического раствора. Первоначально определяли исходный уровень всех изучаемых показателей у интактных крыс. Животных забивали методом неполной декапитации под легким эфирным наркозом согласно "Правилам проведения работы с . использованием экспериментальных животных"'и "Международных рекомендаций по проведению медико-биологических исследований с использованием животных" (1985). Общее количество животных, использованное в экспериментальных исследованиях.-250.

В первой серки, эксперимента изучалась динамика изменения в системе П0Л-А03 и показатели фиброгенеза на ранних сроках развития ЗА: 10. 30 и 90 дней.

Второя_серия экспериментов была посвящена изучению ' влияния антиоксидантов (АО) и биологически активного вещества (БАВ)- гам-мапланта- на показатели фиброгенеза и состояние окислительных процессов у крыс при этих же сроках развития ЗА.

Крысы с ЗА.ежедневно получали из расчета на кг массы тела KI (5 мг); метионин и в сочетании с пиридоксином (25 мг и 0,08 мг). водный раствор глутаминовой кислоты (125 мг). нейтрализованной 0.1N раствором едкого чатрия: маслянный раствор витамина Е (0.2 мг на.крысу , а учитывя • его ежедневное поступление с кормом; общая доза составила 2,5 мг). И. наконец, отдельная группа 'животных ' с ЗА получала комплекс перечисленных препаратов в тех•же-концентрациях. Солянокислый L-аргинин, глутатион восстановленный- (GSH) и никотиначид вводили внутрижелудочно в физиологическим • растворе трижды в неделю, соответственно, в дозах 0,03 г, 0.008 г и 0.2 г на кг массы тела крыс с ЗА. Крахмальный раствор пробукола в физиологическом растворе крысам опытной группы также вводили внутрикелу-

дочно трижды в неделю в дозах 5 мг на кг массы тела. Гаммаплант (производства "Гамма В". Москва) вводили внутривенно трижды в течение всего эксперимента: сразу после запыления животных, через 30 и 60 дней в дозе 0,25 мг/кг.

О степени развития фиброгенеза судили по изменению массы влажных легких и трахеобронхиальных лимфатических узлов (ТБЛУ).а также по содержанию в гомогенате легочной ткани оксипролина (Л.И.Слуцкий, Н.Т.Шелектина,1958) и общих липидов (Го1сЬ,1965).

Морфологические исследования выполнялись на базе морфологической лаборатории НИЦ КГМИ ст.н.с. к.м.н. В.И.Медведевым и доцентом кафедры гистологии КГМИ В.Н.Бесковым. Препараты легких окрашивались гематоксилином- эозином и по ван Гизон.

Клинические наблюдения проводились на базе терапевтического отделения клиники Института гигиены и физиологии труда АН РК в течение 1984-1987 и 1990-94 гг. по договору о научно-практическом сотрудничестве. За указанный период было обследовано 350 горняков. Обследование больных, верификация диагнозов осуществлялись зав. отделением Л.А.Мажинской и врачем терапевтического отделения клиники А. Н. Ким.

Клиническая характеристика групп шахтеров с пылевой патологией органов дыхания проводилась на основании выкопировок из историй болезни. Корректность ее составления была подтверждена консультацией заведующего курсом профессиональных болезней КГМИ доцентом С. К. Куанышбаевым.

В группу больных с начальными проявлениями антракосиликоза (код 0-1) вошло 42 горняка. Средний возраст лиц этой группы 45.3 года, средний стан работы в подземных условиях - 18.9 года. По горным специальностям шахтеры подразделялись на горнорабочих основных профессиональных групп (ГРОЗ. ГРП. проходчики) - 54.8% и вспомогательных групп - 45.2%

Группу шахтеров с антракосиликозом 1 стадии составили 70 человек, в среднем возрасте 51 год. стаж работы в подземных условиях - 26.6 лет. По горным специальностям превалировали проходчи-.ки, ГРОЗ и ГРП (78.6 %). Клинико-функциональные признаки антракосиликоза включали эмфизему легких и легочную.недостаточность I степени (в 68 и 91% соответственно).

В группу шахтеров с антракосиликозом 1 стадии и хроническим пылевым бронхитом (ХПБ) в стадии неполной ремиссии вошло 24 человек. Средний возраст -56 лет. стаж работы подземных условиях -27.54 года, по горным специальностям превалировали ГРОЗ. ГРП. проходчики (54.2%). В группу больных антракосиликозом I стадии и хроническим пылевым обструктивным бронхитом в стадии обострения

вошло 15 человек. Средний возраст больных этой группы составил 57.9 лет, стаж работы в подземных условиях - 26,8 лет. По профессиональным характеристикам в эту группу вошли преимущественно ГРП, проходчики и ГРОЗ (73.3%). Клинико-функциональные признаки у лиц этой группы включали эмфизему легких (93.3 и 67%) и легочную недостаточность 1,'П степени (100%).

Шахтеры с ХПБ подразделялись на две подгруппы: больные с ХПБ в фазе обострения (29 чел.) и в фазе неполной ремиссии (62 чел.). Средний возраст больных соответственно составил 50.7 лет. Стаж работы в подземных условиях у лиц обоих групп составил 26 лет. По профессиональным категориям к группе больных ХПБ как фазе обострения. так и неполной ремиссии, преимущественно относились ГРОЗ, ГРП. проходчики, горные мастера, подземные электрослесаря и т.д. Клинико-функциональные признаки у всех больных ХПБ включали эмфизему легких, легочную недостаточность II и III стадий, легочное сердце, преимущественно в стадии декомпенсации (10.3% у больных с ХПБ в фазе обострения и у 3.2% .больных с ХПБ в фазе неполной ремиссии).

Группу сравнения составили шахтеры без заболеваний органов дыхания пылевой этиологии (39 чел.). Средний возраст стажированиях шахтеров составил 51.9 года, средний стаж работы в подземных условиях - 23.6 лет. Профессиональный состав был представлен главным образом ГРОЗ, проходчиками, ГРП, МГВМ. горными мастерами, крепильщиками и т.д.

Контрольную группу составили практически здоровые лица -первичные доноры (25 человек в-возрасте от 35 до 55 лет).не работающие в условиях повышенной пылевой нагрузки.

Кроме того, для больных с ХПБ группу сравнения составили лица с хроническим обструктивным бронхитом в стадии обострения (20 человек),с хроническим необструктивным бронхитом (10 человек) и больные с острой пневмонией (10 человек) мужского пола, в возрасте от 35 до 65 лет, не работающие в условиях повышенной пылевой нагрузки.Подбор больных осуществлялся ассистентом кафедры пропедевтики внутренних болезней N 1 Р.А.Бакеновой.

Шахтеры с ранними проявлениями антракосиликоза (11 человек) получали комплекс витаминов А (18000 МЕ ),Е (100 мг), аскорбиновую кислоту (100 мг х 3 раза), и аминокислоту метионин (0,5 г х 3 ' раза) в день в течение 12-15 дней на фоне обычных процедур,включающих УФО на грудную клетку, назначение отхаркивающих средств т.д. Шахтеры с ХПБ на фоне патогенетического лечения получали (6 человек) никотинамид (250 мг х 3 раза в день) в течение 10-12 дней, или (7 человек) метионин (0.5 г х 3 раза в день) и поливи-

таминные комплексы. Декамевит или Ундевид. (1 драже х 3 раза в день) в течение 10-12 дней. Исследование показателей системы ПОЛ-ЛОЗ проводилось до-назначения и после окончания приема АО.

Интенсивность процессов ПОЛ в различных объектах исследования оценивали по уровню его первичных, вторичных и конечных продуктов. Содержание диеновых коньюгат (ДК) в плазме крови определяли по методу В.Б.Гаврилова и М.И.Мишкорудной (1983), в эритроцитах - по В.Н.Ушкаловой и Г.Д.Кадочниковой (1987), в гомогенатах легких - по И. Д.Стальной (1977). Уровень вторичных продуктов ПОЛ: кетодиенов (КД) регистрировали в эритроцитах и гомогенатах легочной ткани по методу. В.Н.Ушкаловой и Г.Д.Кадочниковой (1987), а малонового диальдегида (МДА) - в плазме крови (по методу Э.Н.Ко-робейниковой,1989),в эритроцитах по М.С.Гончаренко и A.M.Латыпо-вой (1985), в тканях легких по методу В. А. Костюк и А. И. Потапович (1987), в моче - по модифицированному нами методу (Л.Е.Муравлева и соавт.,1990).

Для интегральной оценки суммарных первичных, вторичных и конечных продуктов - основания Шиффа (ШО) использовался методический прием Е.И.Львовской и соавт.(1991),

В плазме крови определяли активность глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназы (Г-6-ДГ) по методу И.А.Горошинской и соавт.(1984), ката-лазы (КАТ) - по-Aebl et al (1968).

АО-стг.тус.эритроцитов и гомогенатов легочной ткани оценивали как по индивидуальной активности ферментов, так и по изменению степени их сопряженности. Активность супероксиддсимутазы (СОД) в эритроцитах оценивали по Е.Е.Дубининой и соавт. (1983). Е.В.Макаренко (1988) . Г. И.Клебанову и соавт. (1990), в гомогенатах легочной ткани - по Г.И.Клебанову и соавт. (1990). Активность глутатионпе-роксидазы (ГПО) в эритроцитах определяли по С.Н.Власовой и соавт. (1990), глутатионредуктазы (ГР) - по В. Б. Кругликовой и Ц.М.Штутману (1976) в нашей модификации (Л.Е.Муравлева и соавт. ,1988),' -активность -ГПО и ГР в гомогенате легочной ткани оценивали по В. Б.Кругликовой и Ц.М.Штутману (1976). Активность КАТ в эритроцитах определяли по методу М.А. Королюк и соавт.(1988). Активность глутатион-Б-трансферазы (ГТ) в эритроцитах и гомогенатах легочной ткани оценивали соответственно по С.Н.Власовой и соавт. (1990) и Вааг (1981).

Для количественной оценки сопряженности ферментов АОЗ были расчитаны коэффициенты СОД / КАТ, СОД / ГПО и ГР/ГПО (Н.И.Осипова и соав.,1990, Е.Е.Ломоносова и соав..1992), для характеристики скорости замены липидов - МДАэр/ПГЭ (В.В.Банкова и соавт.1987).

Кроме того, в эритроцитах определяли активность аденозинде-

заминазы (АД) по Cronsteln et al.(1985) и пероксидазы (ПР) по О.Г.Архиповой (1988). а также устойчивость эритроцитов к перекис-ному гемолизу (ПГ) по Jager (1968) и уровень конечных продуктов протеолиза - средних молекул (СМЭ) - по А.Н.Ковалевскому и 0. Е.Нифантьеву (1989). В моче определялась каталазная активность по модифицированному нами методу (Л.Е.Муравлева и соав.,1988).

Биохимические исследования проводили с использованием реактивов фирм "Реанал" (Венгрия), "Sigma" (Швеция), а также отечественных реактивов марки "хч" и "осч".

Биофизические методы исследования включали в себя хемилюми-несцентный (ХЛ) анализ эритроцитов и гемоглобина, метод инфракрасной спектроскопии (ИК). электронный парамагнитный резонанс (ЭПР), газовую хроматографию и изучение зарядового баланса крови. Индуцированную ХЛ гемоглобина регистрировали по методу С. А. Дружиной и соавт.. (1978), эритроцитов - по В. И. Шестакову и соавт. (1982).

ИК-спектры препаратов мембран эритроцитов (полученных по методу Л.И.Апуховской и соавт.,1979) регистрировали на инфракрасном спектрометре ИКС-14А в ближней области от 1.8 до 9,0 мкМ. Измерение ЭПР-сигналов эритроцитов проводили на приборе PC 1360 с Мп в качестве бокового стандарта (исследование проведено совместно с ст.н.с.лаборатории электрофизики процессов горения ХМИ HAH PK. к.х.н. В.И.Ботовой).

Для исследования конечных продуктов ПОЛ- углеводородов гомологичного ряда алканов использовался неинвазивный метод газоабсорбционной спектроскопии на хроматографе ЛХМ 80М с пламенно-ионизационным детектором. Газовую пробу предварительно концентрировали (Л.Е.Муравлева и соавт.,1985). Исследования проводили совместно с н. лаборатории электрофизики процессов горения ХМИ HAH PK Л.П.Цой. Изучение поверхностного заряда эритроцитов (q) проводилось с в изотонической среде методом тепловой денатурации (А.Е.Громов и соав.1982).

Статистические характеристики полученных результатов, корреляционные и регрессионные соотношения расчитывались на персональном компьютере типа IBM PC 180386/40.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изменение окислительных процессов в эритроцитах при контакте с угольной пылью

Проведение модельных исследований и анализ их результатов

показало, что частицы угольной пыли оказывают сложное воздействие на структуру эритроцитарных мембран и течение окислительных процессов. При контакте эритроцитов с частицами пыли каменного угля выявлена сложная модификация структуры белковых молекул. Низкие концентрации угольной пыли приводят к увеличению доли бета-кон-формации, а высокие - к деполимеризации, увеличению доли неупорядоченной структуры, нарушению степени белок-липидных взаимодействий (по данным ИК-спектроскопии). Окислительная модификация была также установлена и для гемоглобина (по данным хемилюминометрии). Была обнаружена обратно пропорциональная зависимость между интенсивностью индуцированной хемилюминесценции гемоглобина и величинами навесок угольной пыли (с коэффициентом корреляции - 0.87). При этом аэрация среды инкубации индуцирует более выраженное изменение этого показателя.

Анализ параметров системы ПОЛ-АОЗ эритроцитов, инкубированных с образцами пылей каменного угля, отличающихся по петрографическому и микрокомпонетному составу, выявил достоверное изменение всего трех показателей: ШО.СМЭ и активности ГР. Расчет корреляционных зависимостей показал, что степень изменения параметров ПОЛ-АОЗ не зависит от содержания петрографических и минеральных компонентов угольных пылей.

Расчет степени сопряжения ферментов АОЗ выявил выраженное снижение коэффициента СОД/КАТ (от 28 до 35%, р < 0.05) при отсутствии изменения СОД/ГПО и резкое уменьшение коэффициента ГР/ГПО (1.5 -1.8 раз, р < 0.05) по сравнению с контролем. Это свидетельствует прежде всего о нарушении сопряжения двух центральных ферментных систем, утилизирующих супероксиданионы и пе-роксид водорода, а также цикла глутатиона.

Сопоставление результатов от двух независимых методов ( биохимического и биофизического) продемонстрировало единую начальную реакцию эритроцитов при контакте с угольной пылью, затрагивающую белковые компоненты биомембран. Следствием этого можно рассматривать нарушение степени белок-липидных взаимодействий, а результатом - активацию ПОЛ.

По нашему мнению, частицы угольной пыли индуцируют образование цепей окисления как за счет собственных перекисных радикалов (В. И.Баев,X.А. Саранчук, 1976), так и путем изменения внутриклеточного соотношения анти - и прооксидантов. Повышение уровня последних может быть следствием как образования и рекомбинации АФК (при участии двухвалентного железа), так и нарушения утилизации АФК и пероксидов из-за изменения сопряжения ферментных систем АОЗ.

Таким образом, полученные в модельных исследованиях результаты показали, что вне зависимости от петрографического и микрокомпонентного состава пыли каменного угля индуцируют нарушение ОМ, вызывают структурные повреждения биомембран эритроцитов, причем первоначально затрагиваются белки, что дало нам право рассматривать окислительную модификацию белков как превалирующий Фактор цитотоксического действия угольной пыли.

Изменение состояния системы П0Л-А03 в легких и крови крыс в процессе развития экспериментального антракоза.

В результате запыления крыс мелкодисперсной пылью каменного угля развивается сложный комплекс метаболических расстройств, опережающий по фактору времени изменение интегральных показателей развития фиброзного процесса.

Динамическое исследование показателей ПОЛ в легких запыленных животных (рис.1). проведенного на основе анализа уравнений параболической регрессии, продемонстрировало наличие экстремальной зависимости аккумуляции продуктов ПОЛ (ДК.МДА и ШО) в течение периода наблюдения. Обращает на себя внимание наличие только одного максимума экстремума, причем его достижение (по фактору времени) тождественно для ДК и МДА; для ШО он несколько смещен во времени, что можно объяснить дифференциацией образования продуктов ПОЛ в реакциях перекисного каскада.

Оценка системы АОЗ в тканях легких запыленных животных показала особенности..изменения активности ключевых ферментов АОЗ. Первоначальная индукция СОД. ГПО. ГТ сменяется спадом их активности (рис.2). Активность ГР в легких, снизившись уже на 10 сутки с момента запыления. сохранялась на этом уровне во все последующие сроки наблюдения.

Коэффициент отношения СОД / ГПО запыленных крыс достоверно превышал таковой у контрольной группы (в 1.6 раза, р < 0.01) только к 90 дню эксперимента, что свидетельствовало о сохранении сопряженности на ранних сроках с момента запыления и появление дисбаланса их активности к концу фазы префиброза. В тоже время коэффициент отношения ГР / ГПО в тканях легких запыленных животных достоверно отличался от аналогичного показателя контрольной группы во все анализируемые сроки (в 1.8 раза, на 10 и 30 дни и в 1.2 раза к 90 дню', р < 0.001).

Анализ состояния перекисных процессов в крови крыс с ЗА показал неоднозначное по временному фактору и количественным характеристикам изменение системы ПОЛ (табл.1). В плазме крови запы-

Сроки наблюдения, сут.

—Контроль Запыленне

Рнс.1 Зависимость изменения концентрации оснований Шиффа [ШО] в легких кры от сроков запыления ({). Приведены регрессионные соотношения икоэффициенл корреляции регрессионной апроксимации с эксперимекгаль-ными данными. [ШО]к

0.018 -1.28 юЛ + 1.85 М'6!2, г = 0.999 [ШО)о = 0.011 + 4.5 10"31 - 4.0 Ю"5!2, г = 0.9

Контроль Запыленне

Рнс.2 Зависимость изменения активности глутатионпероксидазы в легких крыс 01 сроков запыления (I). Приведены регрессионные соотношения икоэффициектъ корреляции регрессионной апроксимации с эксперкменталь-ными данными. [ГПО]к -

636 - 4.4 10"21 + 3.6 Ю"4!2, г = 0.94 [ГПО]о = 6.12 + 3.6 10"21 - 7.5 Ю"4!2 г = 0.84

ленных животных на 10 сутки эксперимента было зарегистрировано резкое увеличение уровня ДК, тогда как на 30 сутки отмечено преи-

Таблица 1.

Изменение содержания продуктов ПОЛ в крови крыс с моделью экспериментального антракоза (в % к соответствующему контролю)

Показатели, единицы измерения Сроки запыления: Г™»?« ,

10 дней (п=5) 30 дней (п=9) 90 дней (п=11)

ДК.пМ/мл плазмы + 587. б'" + 234.3"' + 290.9"'

ДК, усл. ед. /мл эр. + 221.2"' + 398.6"' + 337.5"'

МДА,пМ/мл плазмы + 8.8 + 442.4"* + 5. 1

МДА.мкМ/мл эр-тов + 388.7"' + 52.5' + 24.2'

ШО. усл. ед. + 147.7*" + 118.5"* - 21.6

КД. усл.ед. + 86.3* + 202.4"* + 138.85"*

Первичные продукты + 186.99"' + 105.2"* + 89.6'"

(эр-ты), усл.ед.

Вторичные продукты + 19.2* + 46.7* + 26.7*

(эр-ты), усл.ед.

КАТ плазмы [Н?0,1 10^ - 19.5 + 105.41"* — 14.9

КАТ,пМ Н2 02/мл эр- -9.5 + 332 *" + 185.9"'

тов/мин.

СОД, усл. ед. /мл + 64.14" + 127.8'" + 401.9'"

эр-тов /мин

пгэ.% + 173.6"' + 60.2* + 370.6'"

ГПО, ед. акт. / мл - 38.3* - 23.5' - 11.0

эр-тов /мин.

ГР. мкМ НАДФНг/мл + 36.45" - 72.0'" - 42.0'

эр-тов /мин

ГТ. мкМ 2.4 ДНХБ/ + 66.7" + 19.05* + 107.4"*

мл эр-тов / мин.

Примечание: * уровень достоверности различий с показателями интакт-ных крыс С - р < 0.05, " р < 0.01, - р < 0.001).

мущественное накопление МДА. В эритроцитах крови крыс последовательное увеличение содержания метаболитов ПОЛ по сравнению с

контролем также наблюдалось в динамике префибротической фазы.

Активация ПОЛ сопровождается дисбалансом ферментов АОЗ и изменением структурной целостности биомембран эритроцитов, о чем свидетельствует снижение их устойчивости к ПГ и увеличение активности КАТ в плазме крови. Расчет коэффициентов сопряженности ферментов АОЗ в эритроцитах показал разнофазность их изменения в динамике фазы префиброза. Выявлено снижение коэффициента СОД/КАТ (в 1.8 раз по сравнению с контролем, р < 0.01) во все анализируемые сроки; отношение СОД/ГПО прогрессивно нарастало с увеличением сроков запыления и достоверно превышало соответствующие значения контроля в 2.64 (10 дней), 2.95 (30 дней) и в 5.6 раз (90 дней). Коэффициент ГР/ГПО, увеличиваясь к 10 дню в 2.2 раза, в последующие сроки наблюдения был ниже значений контроля, соответственно.

- 18 -

В 2.73 (р < 0.01) и 1.54 (р < 0.05) раза.

Расчет корреляционных зависимостей показал. что между СОД/КАТ и ТБЛУ г= 0.86. между СОД/КАТ и оксипролином г = 0.87. между СОД/ГПО и ТБЛУ г- 0.99 и СОД/ГПО и оксипролином г= 0.99. Эти результаты безусловно свидетельствуют о взаимонаправленности изменения этих процессов в легких и крови крыс в динамике антракоза и позволяют рекомендовать применение коэффициентов сопряжения как одного из диагностических и прогностических критериев пневмокониоза при воздействии угольной пыли.

В качестве объяснения механизма воздействия пылей каменного угля на ;ÖM: при ' экспериментальном антракозе предложена гипотеза, в основу которой положены представления о ведущей роли нарушения сопряженности ферментных систем, результирующегося в сдвиге внутриклеточного баланса антиоксидант/прооксидант в сторону последнего (схема 1). Появление внутриклеточного энергодефицита и усиление протеолиза также способны усугублять нарушение ОМ. Развитие патобиохимических сдвигов в организме крыс в динамике фазы пре-фиброза происходит достаточно медленно и обладает своего рода куммулятивным эффектом, при этом длительная персистенция АФК и. особенно, пероксида водорода, стимулирует пролиферацию фиброблас-тов (Murrel et al.1990) и индуцирует образование коллагена.

Биохимические нарушения в крови также следует рассматривать как один из важных патогенетических факторов развития экспериментального антракоза. Развитие пероксидного стресса в эритроцитах и нарушение сопряженности ферментов АОЗ, окислительная модификация гемоглобина естественно влияет на транспортную функцию красных клеток (Bertram, Frans,1990; Hunt, Stocker, 1990). Кроме того, зарегистрированное нами снижение активности АД эритроцитов является индикатором вовлечения адениловых нуклеотидов в патобиохими-ческие механизмы, которые, с одной стороны, можно расценить как компенсаторные (аденозин способен инактивировать АФК (Cronsteln et al.,1985. Roberts et al..1985).но с другой - провоцировать дальнейшие метаболические пертурбации в эритроцитах, в частности, состояние энергодефицита (М.В.Биленко,1989). Повышение активности КАТ в плазме крови является индикатором изменения проницаемости биомембран (Е.Е.Дубинина,1992; 1993) В целом, нарушение ОМ эритроцитов способствует формированию гипоксии, которая, в свою очередь. является индуктором ПОЛ (Ф.3.Меерсон.1984; И. В. Биленко. 1989;- Екегlt et al..1991).

Интерпретация-полученных результатов не противоречит резуль-тататам других исследователей о процессах с участием АФК и ПОЛ в формировании пылевой патологии органов дыхания при действии высо-

Схема 1. Участие процессов ПОЛ-ЛОЗ ж иехавпиах рижнтт актрахом

еакопленив) (Активация^

ДКДЙМ I А03 )

~Т г

Нарушение^Л

[сопряжения А031

Сероксидный стресс) энергодефицит )

Нарушение метаоолизма НгСЬ и А8К у

(Меыбранодеструиция) (Окислительный стресс)

(ФИБРОЗ)-

(ОМБ Н^—^нергодефицит) 0"ипогоия)

/Генерализация*!^----

4 ПОП )

'.. - 20.-.

кофиброгенных пылей (0.Г.Архипова, 1983; Л. Г. Коркина, Б.Т.Велич-ковский.1988; Б.Т.Величковский,1994; - Busch et al. 1981;Isolds et al.,1983; Kamal et al.,1989), но демонстрирует отличия в характере течения окислительных процессов в динамике развития экспериментального антракоза от воздействия малофиброгенной пыли каменного угля, имеющие, на наш взгляд, определенную патогенетическую значимость.

Эти результаты позволили целенаправленно обосновать подход к подбору соединений, регулирующих не только реакции ОМ, но и влияющих на состояние метаболизма белков, липидов и энергетический потенциал клеток, с учетом длительного хронического характера развития экспериментального антракоза от воздействия пылей каменного угля.

Эффективность природных и синтетических антиоксидантов при экспериментальном антракозе.

Используемые нами АО по своей химической природе являются аминокислотами (метионин. глутаминовая кислота, аргинин), витаминами (витамин Е и производное никотиновой кислоты - никотинамид, пиридоксин), пептидами (глутатион восстановленный), синтетическими АО (пробукол). По механизму действия они являются антиоксидан-тами прямого и непрямого действия (В.И.Поливода и соавт. .1990, О.Н.Воскресенский,В.Н.Бобырев, 1993). Также использовались биологически активные-вещества - иодистый калий и гаммаплант.

Полученные результаты убедительно показали, что использование АО и БАВ сопровождается не только снижением интенсивности ПОЛ и нормализации АОЗ в. легких крыс с моделью экспериментального антракоза, но. и торможением фиброзообразования, что также является доказательством взаимосвязи между этими процессами. Судя по характеру ответной реакции ОМ, основной точкой приложения действия АО являлись легкие, а не кровь, поскольку в них наблюдались наиболее выраженные и однонаправленные позитивные сдвиги. Однако степень положительного влияния АО и БАВ на изучаемые параметры П0Л-А03 и фиброгенеза варьировала в зависимости от их химической природы (рис.3.4). Установлено, что наиболее выраженный позитивный эффект был получен при использовании гидрофильных АО непрямого действия: аргинина, метионина, никотинамида.а также гаммаплан-та. На наш взгляд, механизм их благоприятного действия обусловлен как характером развивающихся биохимических сдвигов при действии угольной пыли (первичное повреждение белковой фазы, быстрое развитие энергодефицита, активация ПОЛ), так и свойствами самих АО,

Контроль ~Г-плант ~Пробукол

' Ник.-амн ~~Запылен.

Рнс.З Активность каталазы [СТ] плазмы запыленных - крыс на фоне введения антиокскдантов и БАВ (I - сроки запыления).

[СТкр = 0.043 + 3.0 Ю"4» - 4.6 10"6Г2, г = 0.99

[СТ]р = 0.042 + 2.4 10"51 + 1.1 10"6Г2, г = 0.99

[СТ]п = 0.042 + 1.1 юЛ - 2.1 10*6Г2, г = 0.99

Сроки наблюдени«, суг.

Контроль ~~— Г-плант — Пробукол

~~Ннк.-амид ~""" Запиле».

Рис.4 Активность СОД [SOD] эритроцитов запыленных крыс на фоне введения антиокскдантов и БАВ (t • сроки запыления).

[SOD]gp = 9.6 - 11.8 10"Ч + 1.0 10"3Г2, г = 0.98

[SOD]p = 9.6 - 11.9 10'11 + 1.0 10'3f2, г = 0.99

[SOD]n = 9.6 - 9.4 10-1t + 6.4 10"4!"2, г = 0.87

причем в числе наиболее важных следует указать регуляторную и мембранопротективную функции, а также участие в процессах репарации (Е.Л.Мальцева и соавт.,1989, Н.А.Мулявко и соавт.,1991, Е. В. Виг1ак0Уа, 1991, ТоиаИ, 1988, 0ешр1е, 1990).

Изучение процессов ОМ в крови крыс с ЗА на фоне применения АО, показало неоднозначный характер его реакции. У крыс, получающих аргинин, в плазме крови резко возрастал уровень ДК и КАТ, превышая с высокой степенью достоверности аналогичные показатели у запыленных животных. К концу эксперимента содержание ДК и КАТ в плазме крови крыс снижалось до значений контроля.. В тоже время концентрационные колебания МДА минимальными по сравнению с контролем. СБН индуцировал синхронное накопление ДК и МДА 'в плазме крови запыленных животных, достигающее максимальных значений к окончанию эксперимента, тогда как активность КАТ за весь наблюдаемый период сохранялась на уровне контроля. Применение указанных препаратов показало достоверное снижение суммарных первичных и вторичных продуктов ПОЛ в эритроцитах запыленных животных.

Аргинин и СБН способствовали снижению активности СОД эритроцитов крови запыленных животных к 90 дню эксперимента (до значений контроля). Глутатцон индуцировал активность ГПО в эритроцитах запыленных животных на продолжении всего периода эксперимента.Активность ГПО в эритроцитах запыленных животных под влиянием аргинина в динамике наблюдения менялась экстремально: ее резкая индукция наблюдалась к концу эксперимента. Активность сопряженного с ГПО фермента ГР в эритроцитах крови запыленных животных под влиянием аргинина сохранялась практически на уровне контроля в течение всего периода наблюдения, тогда как у крыс, получающих глутатион, изменение ГР носило противофазный характер. В тоже время оба антиоксиданта способствовали последовательному снижению активности ГТ в эритроцитах, сопоставимому с таковым у запыленных животных.

В плазме крови запыленных животных АО и БАВ тормозили аккумуляцию МДА по сравнению с запыленными животными во все периоды наблюдения. Гаммаплант эффективно снижал уровень ДК в плазме крови по сравнению со значением контроля, тогда.как никотинамид, наоборот, стимулировал его образование. Анализ активности КАТ в плазме крови крыс показал, что пробукол индуцировал ее активацию, гаммаплант и никотинамид способствовали сохранению ее активности практически на уровне значений контроля.

В эритроцитах крови запыленных животных, получающих гаммаплант, зарегистрировано торможение накопления продуктов ПОЛ во всем периоде наблюдения. . Пробукол оказывал слабовыраженное позитивное

влияние на скорость накопления метаболитов ПОЛ в эритроцитах, причем для таких показателей как КД и суммарные вторичные продукты было зарегистрировано прогрессивное нарастание, превышающее таковое даже у крыс группы сравнения. Влияние никотинамида на процессы липопероксидации у запыленных животных показало иную картину ответной реакции со стороны ПОЛ. За исключением суммарных1 первичных продуктов, которые менялись синхронно независимо от вида АО и БАВ, для всех остальных изучаемых параметров ПОЛ зарегистрировано резкое увеличение их концентрации на ранних сроках с момента запыления и последующее снижение до значений контроля или ниже.

Введение АО и гаммапланта спосособствовало сохранению активности СОД в эритроцитах на уровне контроля, но при этом провоцировало последовательное нарастание КАТ, обратно пропорциональное срокам запыления, а также оказывало сложное модулирующее влияние на активность глутатионзависимых ферментов. Активность АД под действием АО и БАВ также прогрессивно снижалась по мере увеличения сроков эксперимента Применение гаммапланта и пробукола способствовало сохранению достаточно высокой устойчивости эритроцитов к ПГ. тогда как под влиянием никотинамида к 90 дню с момента запыления наблюдалось тенденция к снижению ПГЭ. Применение АО (особенно,К1 и глутаминовой кислоты) также способствовало увеличению устойчивости гемоглобина к воздействию перекиси водорода.

Таким образом, в крови под действием АО не наблюдалось отчетливого снижения или нормализации показателей системы П0Л-А03. По всей вероятности, этот феномен следует трактовать, исходя из того, что экзогенные АО в основном функционируют в "зоне максимального напряжения"- в Легких запыленных животных и способны не только регулировать процессы П0Л-А03, но и расходоваться в процессах репарации, при непосредственном контакте с АФК и СР, и т.д. АО могут индуцировать вымывание продуктов ПОЛ из легких в кровь с их последующей детоксикацией и элиминацией с мочой. Следует. тем не менее, отметить, что наиболее позитивные сдвиги в крови крыс с моделью экспериментального антракоза также зарегистрированы при применении аргинина, никотинамида. метионина и гаммапланта.

Патоморфологическое исследование легких крыс показало, что в целом, применение АО при развитии ЭА сопровождается опосредованным антисклеротическим действием, выраженность которого зависит от вида АО. На основании анализа патоморфологических изменений в легких установлено, что аргинин, метионин, иодистый калий, нико-тинамид и гаммаплант усиливают механизмы элиминации угольной пы-

ли. подавляют процесс разрастания соединительной ткани в легких и ослабляют перестройку его паренхимы, в результате чего у животных развивался слабовыраженный пневмокониоз. Такие проявления в легочной ткани можно расценить как хороший антиантракозный эффект. При использовании глутаминовой кислоты, глутатиона восстановленного и пробукола в легких крыс развивается умеренно выраженный антракоз. Применение токоферола, комплекса АО не оказывало позитивного действия на развивающийся пневмокониоз от воздействия угольной пыли.

Сопоставление полученных нами данных по экспериментальной апробации АО с результатами других авторов (с учетом конкретных фиброгенных пылей и условий наблюдения) показало определенное сходство позитивных процессов, достигнутое при использовании глутаминовой кислоты и иодистого калия при силикозе (Г. В. Ароно-ва, Б. А. Кацнельсон,1982;Г.В.Аронова и соавт.1988), метионина и пи-ридоксина и глутаминовой кислоты на фоне сбалансированной диеты при антракозе (Г.М.Пичхадзе,1984). Применение комплекса АО в условиях экспериментального силикоза, также как и в наших исследованиях, сопровождалось минимальным позитивным воздействием на процессы фиброгенеза и показатели ПОЛ (Л.Г.Бабушкина и соавт. 1982). Вместе с тем, было зарегистрировано и определенное различие между установленным в наших исследованиях слабым эффектом витамина Е и результатами других авторов (Л.Г.Бабушкина и соавт. 1981; Г.М.Пичхадзе,-1984;Н.С.Кислицина, Л.И.Привалова, 1987), показавших достаточно высокую степень его позитивнго влияния, хотя' эти отличия могут определяться как дозой витамина Е, так и длительностью и условиями его применения, а также моделью пневмоко-ниоза.

Следует отметить, что в большинстве АО являются достаточно распространенными и относительно недорогими веществами (за исключением гаммапланта и пробукола), тогда как эффект от их применения сопоставим с таковым при использовании дорогостоящих препаратов СОД. гиалуронидазы (A.B.Максименко и соавт..1992; A.B.Макси-менко,1993).

Подытоживая полученные результаты, можно заключить,что перспективность и актуальность применения АО при пневмокониозе от воздействия пылей каменного угля не вызывает сомнения, поскольку использование антиоксидантов не только позволяет добиться торможения нарушения ОМ, но и снизить скорость фиброзообразования, что расширяет возможности разработки новых подходов к профилактическим мероприятиям. Из всего набора анализируемых АО и БАВ наиболее перспективным при пневмокониозе от воздействия угольной пыли яв-

ляются аргинин, метионин и .никотинамид. Положительный результат, сопоставимый с таковым при длительном введении АО, зарегистрированный при 3-х кратном введении гаммапланта, является серьезной основой для дальнейшего изучения этого вещества и получения разрешения для его клинического применения.

Состояние системы П0Л-А03 у больных с хронической патологией органов дыхания пылевой этиологии.

Внедрение передовой техники и технологии, высокая степень механизации труда на предприятиях Карагандинского угольного бассейна привели к существенному изменению условий и характера труда горняков. Несмотря на проведение противопылевых мероприятий, остаточная запыленность горных выработок существенно превышает предельно допустимые значения (Б. Е. Алтынбеков, 1988; В. А. Ли, Б. Д. До-сов, 1990). Высокая степень запыления в горных выработках, тяжелый физический труд, неудовлетворительные микроклиматические условия создают предпосылки не только к увеличению заболеваемости с временной утратой трудоспособности, но и к развитию профессиональной легочной патологий" (Р.В.Борисенкова, 1986; Б. Е. Алтынбеков,1988; В.Д.Алырщиков.1990; С.Т.Сатеков и соавт.,1990). Болезни органов дыхания пылевой этиологии практически неизлечимы, что делает очень актуальной задачу их профилактики и ранней диагностики, так как перевод шахтеров с начальными проявлениями пневмокониозов на работу с менее вредными условиям труда позволит не только снизить социальную напряженность, связанную с профессиональными заболеваниями, но и уменьшить экономическую нагрузку на производство.

Согласно требованиям современной гигиенической науки (Г.И.Сидоренко, Р.В.Меркурьева. 1983; Р.В.Меркурьева и соавт.. 1986; Б. Т. Величковский,1983;1991), основанием для реализации этих задач является изучение молекулярных механизмов, участвующих в формировании ответной реакции организма на воздействие промышленных аэрозолей.

Проведенный анализ биохимических и биофизических процессов в различных биосредах шахтеров, больных и с ранними проявлениями антракосиликоза, ХПБ и у стажированных горняков показал наличие общих и специфических закономерностей наблюдаемых метаболических сдвигов.

Нарушение ОМ имеет место уже у стажированных шахтеров на фоне отсутствия каких-либо клинических проявлений пылевой патологии органов дыхания (таб.2). Накопление продуктов ПОЛ сопровождается изменением активности ферментов АОЗ и,самое главное, нарушением

степени их сопряженности. Последнее, на наш взгляд, лежит в основе патогенетических механизмов формирования пылевой патологии органов дыхания, так как детерминирует не только эндогенный баланс антиоксидантов/прооксидантов, но и определяет способность основных защитных систем легких противостоять хроническому воздействию свежеобразованной угольной пыли. Следует также отметить, что па-тохимические сдвиги сочетаются с изменением структурно-функциональной целостности мембран эритроцитов, о чем свидетельствуют результаты анализа хемилюминесценции и зарядового баланса последних (рис.56 и рис.5в), повышение активности в плазме крови мемб-раносвязанных ферментов КАТ и Г-6-ДГ и окислительная модификация

Таблица 2.

Показатели П0Л-А03 в крови здоровых шахтеров и с ранними проявлениями антракосиликоза (группа "К", код 0-1) (М + ш)

Показатели, единицы измерения ШШМ Сравниваемые группы:

Стажированные шахтеры Шахтеры группы "К" по Ansí Контроль (п = 25)

ДК.пМ /мл плазмы 2.46+ 0 .209* 2.6 + 0.262* 0.71 + 0.05

ДК, усл. ед. /мл эр. 105.9 + 6.279* 123.8 +7.548* 32.2 + 2. 80

МДА,пМ/мл плазмы 3.78 + 0.181 3.40 + 0.300 3.20 + 0.08

МДА,мкМ/мл/эр-тов 8.09 + 0.477' 9.03 + 0.584* 6.40 + 0.10

ШО, усл.ед. 0.114 + 0.009' 0.153 + 0.009* 0.069 + 0. 0023

КД. усл.ед. 19.72 + 1.379' 29.93 +4.09 * 7.0 + 0.20

Первичные продукты 0. 862 + 0. 026' 0. 84 ±0. 0525* 0.49 + 0.034

(эр-ты), усл.ед. Вторичные продукты

0.168 + 0.015* 0.178 + 0.018* 0.122 + 0.0163

(эр-ты), усл.ед.

КАТ плазмы [Н,0?] 10-] -с КАТ.нмоль Н20г/мл 0. 046+. 0. 0045* 0. 059+ 0. 0078* 0.012 + 0.001

0. 433+ 0.029 0.252+ 0.049 * 0.50 + 0.09

эр-тов /мин

СОД. усл.ед./мл 33.4 + 1.819* 48.9 + 3.141* 11.54 + 0.906

эр-тов /мин

ГПО, ед.акт./ мл 112.1+ 7.04 53.17+ 3.78 * 157.9 + 6.40

эр-тов /мин.

ГР, мкМ НАДФНг/мл 65. 22+ 3.88* 45.75+ 4.43* 103.6 + 1.10

эр-тов /мин

Г-6-ДГ,нмоль Г-6-Ф 3.27 + 0.418' 0.918 + 0.2 0.78 + 0.04

/мл плазмы/мин

АД, нмоль АД /мл 8.33 + 0.633* 5.58 + 0.996 5.49 + 0.256

эр-тов /мин

СОД /КАТ 90.63 + 7.87' 169.6 + 41.70* 23.08 + 0.659

ГР / ГПО 0. 656 + 0.051 1.01 + 0.124* 0.656 + 0.327

Примечание: ' уровень достоверности различий с показателями здоров! лиц (р< 0.05 и ниже).

гемоглобина (рис.5а). Кроме того, установлено изменение метаболизма адениловых нуклеотидов, что документируется увеличением активности АД.

Полученные нами данные и оезультаты доугих исследователей

- 27 -

ХЕИИЛЮНИНЕСЦЕНЦИЯ ГЕПОГЛОБИНЛ

Хсмилюминссцснция эритроцитов

/Л'Л 0АГ/ 0А1/

Суммарный электрический эаряЭ эритроцитов

— ЗЗоровые

шахтеры

1111111 - АпЭ! I стадии

|ЦТПТПГП1 — Ап31 I стадии '" " "' + ХБ

Рис. 5

- 2.8 -

(Г. М. Пичхадзе, 1984; Л. М. Джангозина, 1992; А. М. Байманова. 1993) позволили сделать заключение о развитии в организме стажированных шахтеров каскада метаболических расстройств, указывающих на формирование прёдпатологического состояния.

У шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза (табл.2) выявлена дальнейшая эскалация накопления вторичных и конечных продуктов ПОЛ в эритроцитах крови. Снижение уровня элиминации продуктов ПОЛ с мочой свидетельствует об их иной метаболической судьбе, связанной с генерализацией процессов липопероксидации в других органах и системах. Нарушение ОМ сопровождается изменением проницаемости мембран эритроцитов, что документируется увеличением активности КАТ в плазме крови и снижением устойчивости эритроцитов к ПГ.

Однако наиболее выраженные изменения в крови шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза установлены для системы АОЗ (по сравнению с аналогичными показателями стажированных шахтеров). Коэффициенты СОД/КАТ и СОД/ГПО указывают на серьезные нарушения сопряженности функционирования ферментных систем первой и второй линии АОЗ. Следствием этого является окислительная модификация гемоглобина, активация ПОЛ на мембранах эритроцитов и нарушение их зарядового баланса (рис.5), что может определять нарушение транспортной функции и реологических характеристик последних (И.Д.Спивак,1977; Э.М.Винарик,1981). Полученные нами результаты о глубоких нарушениях ОМ у шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза можно расценить как одно из доказательств предположения об участии АФК и других прооксидантов в механизмах формирования легочной недостаточности и эмфиземы, которые являются самыми распространенными осложнениями пневмокониозов и хронических пылевых бронхитов (Д.Н.Маянский, 1991; Б.Т.Величковский, 1994; Barnes, 1990). .............

Состояние системы П0Л-А03 в крови шахтеров, больных неосложенной формой антракосиликоза I стадии.(табл.3) менялось в меньшей степени по сравнению с таковым двух предыдущих групп.

В эритроцитах крови шахтеров, больных антракосиликозом, зарегистрировано резкое снижение активности СОД в сочетании с возрастанием активности КАТ, которые тем не менее значений контроля не достигали. Существенные изменения были установлены для ферментов метаболизма глутатиона: индукция ГПО при отчетливой тенденции к увеличению активности ГР в комбинации со снижением Г-6-ДГ. Зафиксировано увеличение устойчивости эритроцитов к ПГ.

Подобного рода направленность в изменении активности сопряженных ферментов АОЗ имеет адаптационную ориентацию, повышая ус-

тойчивость организма к развитию пероксидного стресса. Результатом является не только зафиксированное нами уменьшение уровня токсичных метаболитов ПОЛ в эритроцитах, но и защита гемоглобина от окислительной деструкции, что показало статистически значимое увеличение этого показателя по сравнению с предыдущей группой. Позитивные изменения отмечены и для суммарного электрического заряда эритроцитов, который увеличился практически в три раза по сравнению с таковым у шахтеров с ранними проявлениями антракоси-ликоза. •

Регистрация ИК-спектров препаратов мембран, эритроцитов крови

Таблица 3. •

Показатели П0Л-А03 в крови шахтеров, больных антракосилико-зом I стадии и в сочетании с хроническим пылевым бронхитом в фазе обострения и ремиссии (М_+ ш).

Показатели ПОЛ. единицы измерения

Антракосиликоз I стадии

без осложнений

ХПБ(обострен.) ХПБ (ремиссия)

ДК, нмоль/мл пл. ДК, усл.ед./мл эр. МДА. нмоль/мл пл. МДА, мкмоль/мл эр. ШО. усл.ед. КД. усл.ед. Первичные продукты (эр-ты), усл.ед. Вторичные продукты (эр-ты). усл.ед. КАТ.нмоль Нг02/мл эр-тов /мин СОД, усл.ед./мл эр-тов /мин ГПО. ед.акт./ мл эр-тов /мин. ГР. мкМ НАДФН2/мл эр-тов /мин Г-6-ДГ,нмоль Г-6-Ф /мл эр-тов /мин АД, нмоль АД /мл эр-тов /мин СОД /КАТ ГР / ГПО

2.8 + 0.225' 115.2 + 6.89 3.83 + 0.521 8.70 + 0.415 0. 108 + 0. 009 18.70 + 1. 259 0.84 + 0.037

0.139 + 0.009

0. 423+ 0. 025

24.3 + 1.163

101.4+ 8.54

49.56+ 4.02

2.99 + 0.43

5.6 +0.519

64.52 + 5.348 0.481 + 0.065

3.1 + 0.449' 168.4 +5.80' 6.28 + 0.769' 13.4 + 1.260' 0.15 + 0.013* 17.64 +1.700 0.89 +0.056

0.15 + 0.056

0.548+ 0.0154'

20.9 + 2.975

53.17+ 3.78 *

28.43+ 4.30 '

5. 668 ± 0. 556*

4.48 + 0.255

38.14 + 1.34* 0.53 + 0.079

2.6 + 70.4 + 3.60 + 7.50 + 0.088 + 7.6 + 0.71 +

0.102 +

0.56 ±

55.24 +

157. 9 +

29.72 +

3.27 +

4.55 ±

23.08 +

0.656 +

0.332 6.15* 0.214 0. 973* 0. 0015* 0. 984* 0.984

0.016'

0.02'

4 536'

6.40'

2.567*

0.642

0.284

0.984* 0. 045'

Примечание: ' уровень достоверности различий с показателями шахтеров,

больных антракосиликозом (ХПБ 0), р < 0.05 и ниже.

шахтеров с пылевой патологией органов дыхания показала, что в

мембранах эритроцитов шахтеров с ранними проявлениями антракоси-

ликоза наблюдаются нарушения конформации белков, выражающиеся в

увеличении доли неупорядоченной структуры и бета-конформации. и

изменение степени белок-липидных взаимодействий. В тоже время в

эритроцитах крови больнр антракосиликозом. существенно снижается

доля конформационных нарушений и несколько стабилизируется бе-лок-липиднь/ё взаимодействия.

По нашему мнению,отмеченные различия в биохимической картине крови у лиц группы "К" и больных антракосиликозом обусловлены совокупностью причин, одна из которых связана с социальными факторами, поскольку после диагносцирования последнего определенную категорию шахтеров переводят в менее вредные условия труда, снижая тем самым давление патогенного фактора.

Изучение состояния системы П0Л-А03 в крови шахтеров, больных антракосиликозом. с ХПБ в фазе обострения и ремиссии показало (табл.3), что при одновременном развитии антракосиликоза и ХПБ в стадии обострения наблюдалось накопление в плазме крови и эритроцитах больных метаболитов ПОЛ, причем количественные характеристики ряда показателей были выше среди таковых больных всех предыдущих групп. В тоже время наблюдается снижение элиминации ДК и МДА с мочой. Активация ПОЛ результируется и изменением проницаемости биомембран, о чем свидетельствует прогрессивное увеличение в плазме • крови активности мембраносвязанного фермента Г-6-ДГ и КАТ. Супрессия активности АД в эритроцитах может быть следствием .нарушения метаболизма адениловых нуклеотидов. но также это можно ■расценить и как своего рода маркер снижения иммунитета (Т.И.Пес-тина. Я. М. Соковкина,.1993) . . Одновременно выявлены серьезные изменения в сопряженных системах СОД/КАТ и ГР/Г-6-ДГ.

У шахтеров, больных антракосиликозом. и ХПБ в фазе ремиссии, в крови установлена тенденция к снижению интенсивности окислительных процессов. Это выражается в снижении уровня продуктов ПОЛ в эритроцитах, хотя эти показатели достоверно превышают таковые у здоровых лиц. В.тоже время анализ ферментативной активности в плазме крови и эритроцитах шахтеров этой группы не выявил существенных улучшений в функционировании сопряженных ферментных систем.

Таким образом, присоединение к антракосиликозу ХПБ в фазе обострения оказывает усугубляющее воздействие на процессы ПОЛ. способствуя аккумуляции его токсичных метаболитов, и выраженному дисбалансу ферментативного звена АОЗ. При достижении состояния ремиссии не выявлены какие-либо существенные сдвиги антиоксидант-ного статуса организма, что и создает предпосылки для повторного обострения заболевания.

Результаты исследования показателей, характеризующих степень развития пероксидного стресса в крови шахтеров с ХПБ. приведены в таблице 4. У больных ХПБ в фазе обострения в плазме крови и эритроцитах наблюдается резкая активация ПОЛ и усиление процессов

протеолиза. что документируется накоплением СМ в эритроцитах. При достижении фазы неполной ремиссии не наблюдается однозначной тенденции к снижению интенсивности ПОЛ Иными словами, нарушение окислительных процессов в крови при ХПБ остается стабильно высоким независимо от фазы обострения или ремиссии.

У больных с ХПБ в фазе обострения в плазме крови установлена возросшая активность КАТ и Г-6-ДГ по сравнению с таковой у стажи- ' рованных лиц. В тоже время в фазе неполной ремиссии активность

Таблица 4.

Показатели П0Л-А03 в крови шахтеров с хроническим обст-руктивным пылевым бронхитом в фазе обострения и неполной ремиссии (М + ш )

Показатели, единицы измерения Е:Ш Обследуемые группы шахтеров: ШШ":*

Стажированные шахтеры ХПБ обострение ХПБ н.ремиссия

ДК.пМ /мл плазмы 2. 4 + 0.219 2.97+ 0. 196 2.59 + 0. 176

ДК, усл. ед. /мл эр. 105.9 + 6.279 101.7 +6.454 100.90 + 1.772

МДА, пМ /мл плазмы 3. 78 + 0. 181 4.10 + 0. 167 3.70 + 0. 169

МДА.мкМ/мл эр-тов 8. 09 + 0.477 10.98+' С. 879 ' 9.92 + 0. 54*

ШО, усл.ед. 0. 114 + 0.0098 0.204 0.015* 0.202 + 0. 0137*

КД, усл.ед. 19.20 + 1.379 30.96 +2.965' 27.0 + 1. 613*

Первичные продукты 0. 86 + 0.026 0.89 + 0.06 0.81 + 0. 002

(эр-ты), усл.ед.

Вторичные продукты 0. 168 + 0.015 0.28 + 0. 028* 0.22 + 0. 013

(эр-ты). усл.ед.

КАТ.нмоль Н202/мл 0. 433+ 0.029 0.409+ 0.045 0.44 + 0. 022

эр-тов /мин

СОД. усл. ед./мл ЗС • 3 + 1.819 23.13+ 2.432* 32.2 + 1 658

эр-тов /мин

ГПО, ед.акт./ мл 112.2+ 7.04 44. 66+ 5.04* 53.2 + 2. 90*

эр-тов /мин.

ГР. мкМ НАДФН2/мл 65.22+ 3.88 60. 96+ 4.46 34.7 + 2. 504*

эр-тов /мин

Г-6-ДГ.нмоль Г-6-Ф 3. 27 + 0.418 11.81 н ь 0.618* 4.7 + 0. 792

/мл эр-тов /мин

АД, нмоль АД /мл 8. 33 + 0.633 4.12 н ь 0.36* 5. 14 + 0. 298*

эр-тов /мин

СОД /КАТ 9С .63 + 7.87 45.489 + 5.48* 72.2 + " 5. 63

ГР / ГПО 0. 657 ± 0.087 1.26 + 0.136* 0.66 + 0. 082

Примечание: ' уровень достоверности различий с показателями стажиро-ванных шахтеров С - р < 0.05 и ниже).

КАТ достоверно снижается,тогда как Г-6-ДГ, наоборот, продолжает прогрессивно нарастать что является показателем продолжающихся мембранодеструктивных процессов.

В эритроцитах крови больных с ХПБ в фазе обострения наблюдается дисбаланс ферментов АОЗ и нарушение степени их сопряжения, а также дефицит АД и снижение устойчивости эритроцитов к ПГ.

В фазе неполной ремиссии в эритроцитах крови установлена

нормализация активности АД при сохранении дисбаланса ферментативной активности системы АОЗ, что является маркером глубоких метаболических расстройств, которые не купируются при достижении кли-нико-рентгенологической ремиссии.

Таким образом, наиболее глубокие и стойкие метаболические расстройства, характерные для больных с ХПБ,совпадают с клинически более тяжелым течением заболевания, его неблагоприятными исходами в виде высокого процента осложнений, особенно со стороны сердечно-сосудистой системы, частой инвалидизации, сокращения продолжительности жизни.

Иными словами, изменение окислительного метаболизма выступает как один из механизмов снижения общей резистентности организма горняков в результате длительного действия комплекса негативных факторов прозводственной среды (В.В.Соколовский и соавт.1989). Стойкий окислительный стресс может выступать как одна из причин патохимических и патофизических сдвигов, лежащих в основе развития преморбидного состояния.

На начальных этапах формирования пылевой патологии органов дыхания ведущую роль играют факторы защиты от избытка АФК, главным образом, ферменты'АОЗ, нарушение сбалансированности которых определяет появление избытка оксидантов. стимулирующих фиброзооб-разование. Дисбаланс ферментных систем может определяться в данным случае как давлением пероксидного стресса, так и скоростью обновления ферментов АОЗ. т.е. совокупностью генетических и метаболических параметров. Это может детерминировать развитие заболевания далеко не у всех шахтеров, работающих в одинаково вредных условиях горнодобывающей промышленности.

Кроме того, АФК, CP и метаболиты ПОЛ при дисбалансе АОЗ как уже указывалось ранее, играют важную роль в механизмах нарушения микроциркуляции, развития обструкции, генезе бронхоспазма. изменения нормального функционирования системы местного иммунитета, снижения АО уровня бронхоальвеолярной слизи и сурфактанта (Н. Р.Палеев,1989; 1990; Г.Г.Кругликов,Б.Т. Величковский, 1990; Б. Т. Величковский, 1993; 1994; Fan tone et al..1982; Isolds et al.. 1983; Heffner et al..l989; Barnes,1990).

Естественно, что нарушения в системе ПОЛ-АОЗ не являются единственным патогенным фактором, определяющим возникновение и развитие пылевой патологии органов дыхания, но свободные радикалы и АФК участвуют непосредственно или опосредовано практически во всех патохимических реакциях и патофизиологических проявлении, зарегистрированных при антракозе. Можно сказать, что ОМ является связующим звеном различных патобиохимических и патофизиологичес-

ких процессов при пневмокониозах от воздействия угольной и других видов фиброгенных пылей.

Сравнительная оценка состояния системы ПОЛ-АОЗ в крови больных с НЗЛ (острые пневмонии, хронические бронхиты) показала, что ОП сопровождается активацией в системе ПОЛ, которая, однако, ограничивается преимущественно начальными стадиями что документируется накоплением характерных для них первичных и вторичных метаболитов ПОЛ в плазме крови и эритроцитах больных. Анализ состояния антиоксидантного статуса крови больных ОП показал незначительное отклонение от нормы КАТ. но при более 3-х кратном увеличении активности СОД при синхронном снижении устойчивости эритроцитов к ПГ и уменьшении активности АД. В целом, необходимо отметить. что на высоте клинических проявлений ОП в крови больных установленное нарушение в системе ПОЛ-АОЗ нельзя однозначно трактовать как развившийся пероксидный стресс, поскольку активация ПОЛ на данном этапе носит позитивный характер, связанный со снижением бактериальной-агрессии (М.В.Биленко, 1989).

Анализ состояния системы ПОЛ-АОЗ в крови и моче больных ХБ показал селективное увеличение в плазме крови ДК, тогда как в эритроцитах аккумулировались не только первичные продукты, но и основания Шиффа. Высокое содержание как ДК, так и МДА было зарегистрировано в моче больных ХБ. Оценка состояния ферментативного звена АОЗ крови больных ХП показала тенденцию к параллельному повышению активности СОД, КАТ, ПР при достоверном угнетении ГР и АД.

В тоже время у больных ХОБ в фазе обострения в плазме крови и эритроцитах при сохранении единой направленности изменения показателей ПОЛ наблюдается более выраженное накопление первичных продуктов (как индивидуальных так и суммарных) по сравнению не только с контролем, но и с таковыми у больных ХБ. Уровень оснований Шиффа также достоверно превышал значение контрольной группы, но не отличался от такового у больных с ХБ. Существенные отличия в активности ферментов крови больных ХОБ (по сравнению с предыдущей группой) были зарегистрированы только для ГР и АД, которая достоверно превысила значения контрольной группы.

Таким образом, полученные нами результаты при исследовании состояния ОН при заболеваниях легких пылевой и неспецифической этиологии показали наличие общих и специфических закономерностей течения окислительных процессов, имеющих определенную патогенетическую значимость.

В качестве дополнительных диагностических и прогностических критериев ранних проявлений антракосиликоза или обострения хронического пылевого бронхита предлагается определение активности СОД

и КАТ в эритроцитах с расчетом степени их сопряжения. Средние значения.коэффициентов СОД/КАТ у стажированных шахтеров равны 90.6, у лиц с ранними проявлениями антракосиликоза (группа "К", код 0-1) -196, у больных антракосиликозом I стадии,- 65. У шахтеров с ХПБ в фазе обострения этот коэффициент равен 73. в фазе неполной ремиссии - 45,- Диагностическая и прогностическая значимость рекомендованных критериев доказана результатами модельных и экспериментальных исследований, хорошо согласуется с ранее предложенным подходом к ранней диагностике антракосиликоза (Л.Е.Муравлева и соавт.,1989) и не противоречит общим принципам выбора биохимических критериев системы П0Л-А03 при диагностики пылевой патологии органов дыхания (Л.М.Безрукавникова, 1987; О.Г. Архипо-ва,1988; Born et al.,1986).

Сравнительное изучение эффективности антиоксидантов в лечении больных с патологией органов дыхания пылевой- этиологии.

В результате проведенного лечения установлено, что у шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза после курса АО: витамин А (18000МЕ), витамин Е (100мг), витамин С(300 мг) и метионин (1.5 г) в сутки в течение 12-15 дней на фоне общепринятой терапии дантов наблюдаются позитивные сдвиги в показателях ПОЛ (табл.5). Это документируется выраженным снижением его продуктов как в плазме крови, так и в эритроцитах. Установлено комбинированное изменение активности ферментов АОЗ: снижение активности СОД при параллельном увеличении КАТ. ГР и ГПО. Следствием этого является повышение сопряженности ферментных систем АОЗ и увеличение резистентности эритроцитов к ОС, что. в частности, доказывается возрастанием устойчивости эритроцитов к ПГ.

Результаты изучения состояния системы П0Л-А03 крови и мочи больных ХПБ после проведения общепринятого лечения показали,что патогенетическая терапия оказывает слабовыраженное положительное влияние на комплекс изучаемых показателей. Была зафиксирована тенденция к снижению уровня ДК. суммарных первичных продуктов и ОШ в эритроцитах. Для некоторых показателей (КД. вторичные продукты) был зарегистрирован количественный рост после проведения общепринятой терапии. Анализ состояния компонентов АОЗ в крови больных ХПБ не выявил существенных различий в активности СОД, КАТ, ГПО и ГР до и после лечения. Исключение составили такие показатели как ПГЭ и АД, которые возрастали после окончания лече-. ния. Однако, если для ПГЭ это является положительным фактором, то повышение активности АД является критерием нарушения не только

внутриклеточных регуляторных процессов, но также и предпосылкой к дальнейшей активизации генерации супероксидов в ксантиноксидазной системе.

Таким образом, у больных ХПБ в результате общепринятой терапии наблюдается тенденция к нормализации лабораторных показателей, но отсутствие положительных сдвигов в системе ПОЛ-АОЗ, на наш взгляд, является одним из факторов частых и длительных обост-' рений этого заболевания.

Включение никотинамида (750 мг ежесуточно) в лечебно-профилактический комплекс больных ХПБ результировалось позитивными изменениями системы ПОЛ крови и мочи (табл.6), что документируется как уменьшением уровня аккумуляции продуктов ПОЛ в крови больных. Одним из объяснений наблюдаемого эффекта может быть непосредственное взаимодействие никотинамида с продуктами ПОЛ, образующимися на стадии пропагации окислительной цепи (Г.З.Абакумов и со-авт..1988). Никотинамид способствовал нормализ'ации СОД, АД и ПГЭ в эритроцитах и стимулировал активность ГПО и ГР практически в два раза по сравнению с исходным уровнем. Из всего набора изучае-

Таблица 5.

Характеристика показателей ПОЛ -А03 в крови шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза до и после антиоксидантной терапии.

Показатели, единицы измерения

Шахтеры с ранними проявлениями антракосиликоза

До лечения (п = И)

После лечения (п « И)

Контроль (П = 25)

ДК.пМ/мл плазмы ДК. усл. ед. /мл эр. МДА.мкМ/мл эр-тов ШО. усл.ед. КД, усл.ед. Первичные продукты (эр-ты), усл.ед. Вторичные продукты (эр-ты), усл.ед. КАТ плазмы [Н202] 103 .с КАТ,пМ Н202/МЛ эр-тов/мин

СОД, усл. ед. /мл эр-тов /мин ПГЭ.%

ГПО. ед.акт./ мл эр-тов /мин. ГР, мкМ НАДФНг/мл эр-тов /мин

1.92+ 0.314* 132. 59 +_9. 4* 9.58 + 0.825* 0.161 + 0. 011* 40.58 + 6.82 * 0.854 + 0.072'

0.251 ± 0.025'

0.062 + 0.011'

0.24 + 0.042 '

52.12+ 4.505*

6.36 + 0.49** 54.47+ 6.208'

50.95+ 0.743'

1.35+ 0.345' 65.22 +7.43'* 7. 19 + 0.576* 0. 10 + 0.004** 22.39 +4.768'* 0.52 +0. 053 *

0.13 + 0.018 *

0.038+ 0.004'*

0.306 + 0. 05'*

25.22 + 4. 12'*

2.99 + 0.423* 102.8 +.14.6 *

79.85+ 6.20**

0.71 + 0.05 32. 2 + 2. 80 6.40 + 0. 10 0.069 ± 0.0023 7.0 + 0.20 0.49 + 0.034

0.122 ± 0.0163

(П = 10 ) 0.012 + 0.001

0.50 + 0.09

11.54 + 0.906

3.99 + 0.29 157.9 + 6.40

103.6 + 1.10

Примечание: '-уровень достоверности различий с показателями здоровых лиц.*-уровень достоверности различий по сравнению с группой до лечения (р< 0.05).

• •• ■ '. Таблица 6.

■ Характеристика "показателей П0Л/-А03 в крови больных хроническим пылевым бронхитом на фоне общепринятого лечения с включением'антиоксиданта никотинамида (М + ш)

Показатели,' единицы измерения

? Хронический пьшевой бронхит ШШ•

До лечения ■ (П = 12)

После лечения (п = 12)

Контроль = 25)

ДК, пМ/мл плазмы' ДК, усл.ед./мл эр, -МДА,мкМ/мл эр-тов-1110. усл. ед. КД„ усл.ед. (эритроциты) Первичные' продукты (эр-ты)-, усл.ед. ■ Вторичные продукты (эр-ты). усл.ед. КА.Т плазмы [Н?ОгЗ

КАТ. пМ • Н20г/мл • ■ эр-тов /мин СОД, усл. ед. /мл эр-тов /мин ПГЭ, %

ГПО. ед. акт. / мл эр-тов -/мин. ГР. мкМ НАДФН2/мл эр-тов /мин АД, нмоль АД /мл» эр-тов /мин

1.93+ 0.314* . 86..13 ±9.153 * 11-7.4 + 1.98 ' 0.168 + 0.012*. 28.63 + 7.09 *

0.872 + 0.042'

0.24 + 0.05*

0.038+ 0.0044'

0.509± 0.025

20.6 + 5.0.89'

7.29 + 0.157' 44.23+ 5.25.'*

44.16+ 6.09 '

4.40 + 0.407'

1.35+ 0.345'* 73.44 +7 .'234* 9.92 + 0.657* 0,063 + 0..016* 13.73 +3.959'*

0.622 + 0.09'*

0.095 +0.024'*

0.0.29+ 0.002'*

0.532+ 0.020

12.4 ± 2.777*

3.29 + 0.057* 88.82+ 9.77 '*

68.29+ 5.984'*

5.62 '+ 0.886*

0.71 + 32.2 + 6.40 + 0.069 + 7.0 +

0.49 +

0.122 +

0.012 +

0.50 +

11.54 +

3.99 + 0. 157.9 +

103.6 +

5.49 +

0.05 2.80 0.10 0.002с 0.20

0.034

0.0163

0.001

0.09

0.906

29

6.40 1.10 0.256

Поимечан .е: * Уровень достоверности различий с показателями здоро; лиц. *-уровень достоверности различий по сравнению с группой до ле ния (р < 0.05). • ..

мых показателей АОЗ позитивное воздействие никотинамида не установлено для каталазы в плазме, крови больных

Механизм положительного влияния никотинамида на состояние ОМ реализуете;., по нашему мнению, в двух направлениях. Одно из них. связано с непосредственным его взаимодействием с гидроперекисями липидов. позволяющим кнактивировать эти токсичные метаболиты ПОЛ и осуществлять бистрый вывод последних из организма. Более разнообразны регуляторные функции никотинамида. который оказывает влияние на тканевой и 'внутриклеточный баланс НАД* /НАДН* и НАДФ*/НАДФН"1,, регулирует активность дегидрогеназ, в том числе -Г-6-ДГ (В, Р. Сорока й соавт.1989). Вполне вероятно его регулятор-ное воздействие на активный центр ключевых, ферментов- АОЗ.

Таким образом, использование никотинамида оказывало благоп-. риятный эффект на течение окислительных процессов в. организме шахтеров, с ХПБ. . Позитивные .сдвиги в биохимическом профиле крови

совпадали с удовлетворительным клиническим исходом течения заболевания. По субъективным ощущениям и данным объективного обследования шахтеры, получающие в комплексе с патогенетической терапией никотинамид, выписывались из клиники в удовлетворительном состоянии, с хорошим самочувствием.

Сочетанное применение метионина (1,5 г ежесуточно) и поливитаминных комплексов (1 драже х 3 раза в день) на фоне патогенетической терапии больных ХПБ в течение 12-15 дней также результати-ровалось положительным воздействием на изучаемые показатели ПОЛ-АОЗ (табл.7). Следует отметить ровное уменьшение всех показателей ПОЛ и позитивные сдвиги ферментативного профиля крови больных: снижение активности КАТ в плазме крови и СОД в эритроцитах, увеличение КАТ. ГПО и ГР в эритроцитах при повышении устойчивости к ПГ.

В состав поливитаминных препаратов входят хорошо известные витамины - АО. а также витамины, для которых в последнее время установлены антиоксидантные свойства. В их числе следует назвать

Таблица 7.

Характеристиа показателей ПОЛ-АОЗ в крови больных хроническим пылевым бронхитом на фоне общепринятого лечения. ■ поливитаминных комплексов и метионина (М + ш)

Показатели, единицы измерения ;: ШМ Хронический пылевой бронхит ШШ.

До лечения (п = 12) После (п лечения = 12) Контроль (П = 25)

ДК.пМ /мл плазмы 2. 97+ 0.391* 2.06+ 0.282' 0. 71 + 0 05

ДК, усл. ед. /мл эр. 93 . 95 + 22.36* 66.89 +3.741" 32.2 + 2 80

МДА,пМ/мл плазмы 3. 91 + 0.504 2.94 + 0.205 3. 20 + 0 08

МДА.мкМ/мл эр-тов 12 .31 + 1.216* 8.49 + 0.471 * 6. 40 + 0 10

ШО, усл. ед. 0. 185 + 0.042' 0.118+ 0. 018' * 0. 069 + 0 0023

КД, усл. ед. 29 .74 + 3.462* 16.16 + 1.922" 7. 0 + 0 20

Первичные продукты 0. 87 + 0.089* 0.56 + 0.054** 0. 49 + 0. 034

(эр-ты). усл. ед.

Вторичные продукты 0. 271 + 0.046* 0.139 + 0.014* 0. 122 + 0. 0163

(эр-ты). усл.ед.

КАТплазмы [Н20,] 1<РмЬ -КАТ. пМ Нг 0г /мл 0. 051+ 0. 0049* 0.035+0.0054'* 0. 012 + 0. 001

0. 266+ 0.042 * 0.416+ 0. 0428* 0. 50 + 0. 09

эр-тов /мин

СОД, усл.ед./мл 29 ■ 9 ± 3.642 ' 17.2 + 1.584 * 11 .54 + 0. 906

эр-тов /мин ПГЭ.Х

8. 46 + 2.96 ' 3.53 + 0.594 * 3 .99 + 0. 29

ГПО. ед. акт. / мл 61 .41 + 12.407* 100. 0+ 9. 502** 157.9 + 6. 40

эр-тов /мин.

ГР. мкМ НАДФН2/мл 59 82+ 9.578 ' 77. 28+ 4.503 * 103.6 + 1. 10

эр-тов /мин

Примечание: '-уровень достоверности различий с показателями здоровых лиц.*- уровень достоверности различии с группой до лечения (р <0.05).

тиамин, рибофлавин, кобаламин, пиридоксин. Механизм их антиокси-дантного действия достаточно разнообразен. Показана их способность непосредственного взаимодействия с АФК и СР, а также с продуктами липопероксидации и окислительной деградации белков. Также весьма вероятно участие этих витаминов в регуляторных процессах репарации клеточных мембран, в изменении активности ферментов, в механизмах мембраностабилизации и т.д. (Н.К.Зенков и соавт.1989; В.Р.Сорока и соавт.1989; О.Н.Воскресенский,В.Н.Бобырев, 1993; И.И. Степуро. 1993; Е.В. Виг1акоуа, 1991; ИеШе е1 а1..'1991). В сочетании с метионином, который является не только специфическим перехватчиком супероксиданионов, но и предшественником СБН, применение поливитаминных комплексов не только скомпенсировало дефицит гидрофильного и гидрофобного звеньев АО статуса организма шахтеров с ХПБ, но и позволило получить благоприятный клинический эффект. Больные были выписаны.из стационара в удовлетворительном состоянии. была достигнута клинико-лабораторная ремиссия.

Таким образом, полученные нами результаты убедительно показали возможность коррекции нарушений со стороны системы ПОЛ-АОЗ у шахтеров с пылевой патологией органов дыхания при включении в комплекс лечебно-профилактических мероприятий веществ с антиокси-дантными свойствами. Их сравнительно низкая.экономическая себестоимость, пероральный путь поступления в организм позволяет широко рекомендовать их использование при лечении больных с пылевой патологией органов дыхания.

ВЫВОДЫ

1.Частицы свежеобразованной пыли каменного угля 1П-1У стадии метаморфизма независимо от петрографического и микрокомпонентного состава при контакте с эритроцитами способны индуцировать структурные нарушения биомембран, изменение окислительных процессов и сопряженность функционирования ключевых ферментов АОЗ.

2.При воздействии пыли каменного угля в легких и крови животных наблюдается синхронность нарушения окислительного метаболизма, опережающее развитие фиброзного процесса. В префибротичес-кой фазе аккумуляция продуктов ПОЛ в легких сопровождается активацией ферментов АОЗ, особенно, СОД и ГПО, но нарушение степени их сопряжения выявлялось к 90 дню запыления. В крови животных с экспериментальным антракозом максимальное накопление метаболитов ПОЛ наблюдалось на ранних сроках и сопровождалось дисбалансом системы АОЗ и мембранодеструктивными процессами.

3. В условиях экспериментального антракоза применение экзогенных антиоксидантов и гаммапланта результировалось снижением не только интенсивности ПОЛ в легких, но и торможением фиброзообра-зования. В тоже время реакция на введение антиоксидантов со стороны системы ПОЛ-АОЗ крови была менее однозначна и сопровождалась в ряде случаев интенсификацией ПОЛ в плазме крови.

4. Противофиброзный эффект от применения никотинамида,аргинина, метионина и гаммапланта сочетался с нормализацией процессов окислительного метаболизма в легких крыс с экспериментальным антракозом, при этом механизм их позитивного действия опросредован не только антиоксидантными, но и регуляторным свойствами.

5.У стажированных шахтеров зарегистрированное нарушение окислительного метаболизма в сочетании с процессами мембранодест-рукции является одним из механизмов, определяющим развитие пре-морбидного состояния. У шахтеров, больных антракосиликозом. степень дисбаланса системы ПОЛ-АОЗ зависит от стадии болезни. Наиболее глубокие метаболические расстройства системы ПОЛ-АОЗ, выявленные у больных хроническим пылевым бронхитом, сохранялись независимо от фазы его обострения или неполной ремиссии.

6. Установлены общие и специфические закономерности нарушения окислительного метаболизма в организме шахтеров с пылевой патологией органов дыхания и у больных неспецифическими заболеваниями легких (пневмонии, хронические бронхиты), обусловленные различиями в механизмах индукции ПОЛ, иной метаболической функцией продуктов ПОЛ и характером ответа со стороны АОЗ.

7. Использование антиоксидантов в комплексе лечебно-профилактических мероприятий хронического пылевого бронхита (никотинамид, метионин в сочетании с поливитаминными комплексами) результировалось снижением интенсификации ПОЛ и стабилизацией АОЗ, тогда как общепринятое лечение аналогичным эффектом не обладало. Применение комплекса витаминов (А.Е.С) и аминокислоты метионина также способствовало торможению интенсификации ПОЛ и повышению собственного антиоксидантного статуса организма шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза (код 0-1).

8. Сформулирована гипотеза участия нарушения окислительного метаболизма в патогенезе пневмокониоза от воздействия пылей каменного угля. Угольная пыль, сама являясь источником перекисных соединений, индуцирует структурные нарушения биомембран, причем первоначально белковых полимеров, что в совокупности с другими факторами генерации АФК, провоцирует развитие окислительного стресса. Одним из патогенетических факторов фиброзообразования является эндогенный избыток перекисных соединений, связанный с

нарушением сопряжения ключевых ферментов АОЗ. Нарушение окислительного метаболизма в крови, не только определяет генерализацию ПОЛ, но и является одной из причин развития дыхательной недостаточности.

9. Расчет коэффициента сопряжения СОД/КАТ, определение интенсивности индуцированной хемилюминесценции гемоглобина и активности супероксиддисмутазы можно рекомендовать как дополнительные критерии для диагностических и прогностических целей, а также для оценки эффективности проводимых лечебно-профилактических мероприятий. '

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫЙ ПО ТЕМЕ ДИССРЕТАЦИИ

1. Установка для регистрации хемилюминесценции // Спектроскопия и атмосферная оптика: Республ. сборник научных трудов - Караганда. 1983,- С. 84-88. (соавторы: Г. М. Пичхадзе. В. Е. Маловичко).

2.0 патогенном воздействии на организм пылевого загрязнения воздуха // Здоровье и окружающая среда: Мат.Всесоюзн.конф.- Алма-Ата, 1984.- С.153- 155 (Соавторы: Г.М.Пичхадзе, Л.А.Мажинская).

3. Индуцированная хемилюминесценция биологических мембран //Фотопревращение энергии в атомных и молекулярных системах: Республ. сборник научных трудов - Караганда. 1984. - С.99-103.

4.Устройство для концентрирования пробы в хроматографическом анализе //Лаб. дело- 1985.-N 1.-С.56-58.(соавторы: В.И.Якубовская, Л. П. Цой, Г. М. Пичхадзе, В. Р.Дайкер).

5. Состояние свободнорадикального окисления у крыс с моделью антракоза на фоне потребления ими дополнительных количеств пищевых и биологически активных веществ // Мат. 4-го Объед. съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана,- Чимкент, 1985.- T.I. - С.380-381.

6. Экспериментальное исследование биологически активных веществ при антракозе // Мат. 4-го Объед. съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана,- Чимкент, 1985,- T.I. - С.381-382 (соавторы: Г.М.Пичхадзе, С.П.Терехин, В.Р.Дайкер).

7.Влияние угольной пыли на окислительные процессы организма животных // Состояние и пути снижения уровней загрязнения окружающей и производственной среды: Тез.докл. республ. конф. - Караганда. 1985,- С.99 (соавтор- С.П.Терехин).

8. Влияние загрязнения производственной среды угольной пылью на свободнорадикальные процессы организма горняков //Состояние и пути снижения уровней загрязнения окружающей и производственной среды: Тез.докл. республ. конф. - Караганда. 1985,- С.112 (соавторы - Г.М.Пичхадзе, Л.А.Мажинская).

9.Биохимическая оценка влияния пищевых и биологически активных веществ на развитие экспериментального антракоза //Физико-химические аспекты питания -ВИНИТИ М..1985,- Библиограф. указ.Ы 7.-С. 165.

10. Применение хемилюминесцентного метода для ранней диагнос-

тики антракосиликоза // Тез. докл. Всесоюзн. совещания по хемилю-минесценции - Уфа. 1986.- С.69 (соавторы: Г.Н.Пичхадзе. Л.А.Ма-жинская).

И.Комплексное биофизическое исследование сурфактантной системы легких // Информ.л.- Карагандинский ЦНТИ.-1987,- N 107,- 4 с,(соавторы: И.А.Сереоровская, Г.А.Кецле, Л.В.Коваленко и др.).

12.Влияние длительных стрессорных нагрузок на развитие профессиональной патологии // Физиология экстремальных состояний и индивидуальная защита человека: Тез. докл. Всесоюзн. конф. _М.. 1986.-С. 227 (соавтор: Г. М. Пичхадзе).

13.Влияние пылевого загрязнения воздуха на активность К,Иа-АТФ-зы и зарядовый баланс крови // Ионный гомеостаз и влияние факторов внешней среды на жизнедеятельность клетки: Тез. докл. Всесоюзн.конф.-Иркутск. 1987.- С.130 (соавторы:Г.М.Пичхадзе. Л. А.Мажинская, В. И. корчин, М.И.Беккер).

14.Использование физико-химических методов для ранней диагностики антракосиликоза // Актуальные вопросы гигиены в условиях научно-технического прогресса: Тез. докл. республ. конф. -Ташкент.

1987.- С.62-63 (соавторы: Г.М.Пичхадзе. Л. А.Мажинская, В.И.Корчин, М. А.Беккер).

15.Биохимические способы ранней диагностики антракосиликоза шахтеров // Информ.л.-Карагандинский ЦНТИ.- 1987,- N 121.- 2 с. (соавторы: И.В.Щербакова, л.А.Мажинская, В.В.Брейдо, М.А.Беккер).

16.Основные патогенетические механизмы действия аэровзвесей пылевых частиц // Аэродисперсные системы и коагуляция аэрозолей: Тез. докл. Всесоюзн. конф. -М., 1988. - С. 119.

17.Биохимические и иммунологические тесты ранних проявлений антракосиликоза //Республ.методич. рекомендации - Караганда,

1988.-22 с. (соавторы:Д.М.Джангозина,Б.Д.Досов.И.В.Щербакова идр.).

18. Хемилюминесценция эритроцитов и гемоглобина при пневмоко-ниозе //Люминесцентный анализ в биологии и медицине и его аппаратурное обеспечение: Мат. Всесоюзн. конф.- Рига. 1989.- С.124-125.

19.Изменения сурфактантной системы легких и индуцированной хемилюминесценции легочных смывов после голодания и влияние на них альфа-токоферола //Пат. физиология и экспериментальная терапия - 1989.- N 2.- С.20 - 22 (соавтор: В.А.Дороватовский).

20.Состояние процессов перекисного окисления крови шахтеров, длительное время работающих в условиях высокой запыленности // Экологические проблемы Центрального Казахстана:Мат.республ.конф. -Караганда, 1989.-С.78-80 (соавторы: Л.А.Мажинская, Г.С.Тухбату-лина).

21.Окислительные процессы в организме шахтеров, работающих в условиях высокой запыленности //Актуальные проблемы охраны и укрепления здоровья населения Казахстана: Тез.докл. республ. научно-практической конф. - Алма-Ата, 1990.- С. 112-114 (соавторы: Г.С.Тухбатулина, Г.О.Жумабаева).

22. Способ диагностики антракосиликоза //А. С.СССР.N 15221-03.

1989. N42,- 8 с. (соавторы: Г. М. Пичхадзе, Л. А. Мажинская)..

24. Спектрофотометрическое определение продуктов перекисного окисления липидов в моче // Информ. л. Карагандинский ЦНТИ. 1990.-N 74.- 4 с. (соавторы: Б.К.Айтпаев. Е.А.Алимбаев, В.Б.Молотов-Лу-чанский и др.).

25.Сравнительное изучение окислительного метаболизма у белых крыс в-онтогенезе // Тез.докл. 10 Всесоюзн. совещания по эволюционной физиологии - Л.,1990.-С.347 (соавтор:В.И.Корчин).

26.Изучение состояния свободнорадикального окисления и анти-оксидантной защиты крови и мочи больных хроническим пылевым бронхитом // Гигиена труда и состояние здоровья рабочих горнодобываю-

щей и металлургической промышленности Казахской ССР: Рес-публ.сборник научных статей - Караганда. 1990,- С.78-79.

27.экзогенное действие некоторых химических и физических факторов. Сравнительное влияние альфа-токоферола и пробукола //Экологическая патология и ее фармакокоррекция: Тез. докл. III международн.конф. -Чита, 1991.- С.78-79 (соавторы: Т.3.Сейсембе-ков, В. И.Корчин, Б. К. Айтпаев и др.).

28. Характеристика состояния перекисного окисления липидов крови и мочи шахтеров, больных антракосиликозом //Мат. объединенного съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана -Алма-Ата, 1991.-Т. II.-С.179-181.

29. Сравнительное изучение особенностей перекисного окисления у шахтеров, больных антракосиликозом и силикозом // Мат. объединенного съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана -Алма-Ата, 1991.- Т.П. - С.208 -210 (соавторы: Т.3.Сейсембеков, С.К.Куанышбаев, Л. А. Мажинская и А.Н.Ким)

30. Перекисное окисление липидов в генезе неспецифических заболеваний легких и сахарного диабета и возможности его коррекции с помощью антиоксидантов //Тез.докл. V конф. биохимиков республик Средней Азии и Казахстана,- Ташкент, 1991,- С.97 (соавторы: В.И.Корчин. Т. 3. Сейсембеков. А.В.Цой и др.).

31. Витамины А,Е,С и метионин в комплексной терапии шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза //Региональные проблемы питания: Мат. научной конференции с международным участием - Алма-Ата. 1992. - С.132-133 (соавторы: Т.3.Сейсембеков, С.К.Куанышбаев, Л.А.Мажинская, А.Н.Ким).

32.Некоторые показатели свободнорадикального окисления у больных острой пневмонией // Здравоохранение Казахстана.-1992.- N 7.-С. 34-35 (соавторы: А.В.Цой, Б.С. Черкешева,Е. А. Зубкова, Л.В. Сос-новская).

33. Адаптивные изменения в системе антиоксидантной защиты при экспериментальном антракозе //Актуальные проблемы физиологии: Тез. докл. републ. съезда физиологов - Караганда. 1992.-Т.1.-С.130 (соавторы: Б. С. Черкешева, Е. А. Зубкова, Л. В. Сосновская).

34. Хемилюминесценция крови при неспецифической патологии органов дыхания //Флуоресцентные методы исследования и клинической диагностики: Тез.докл. IV Всесоюзн. совещания "Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение" - М., 1992.- С. 73 (соавторы: Б.Е.Алтынбеков, Т.3.сейсембеков).

35. Антиоксиданты в клинике внутренних болезней : методические рекомендации - Караганда. 1992,- 16 с. (соавторы: Т. 3.Сейсембеков. Б.К.Айтпаев, В.Б.Молотов-Лучанский и др.)

36. Показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в бронхоальвеолярных смывах крыс с экспериментальным антракозом // Физиологические и патологические аспекты патогенеза, клиники, диагностики и лечения заболеваний органов дыхания: Сб. науч. трудов- Алма-Ата,1992,- С.51-52 (соавторы: Е.А.Зубкова, Б. С. Черкешева).

37. Состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты крови при хронических бронхитах пылевой этиологии // Физиологические и патологические аспекты патогенеза, клиники, диагностики и лечения заболеваний органов дыхания: Сб. науч. трудов- Алма-Ата,1992.- С.53-55 (соавторы: Т.3.сейсембеков. С.К.Куанышбаев.Л.А.Мажинская и др.)

38. Использование некоторых параметров перекисного окисления липиДов как дополнительного критерия диагностики хронического пылевого бронхита //Организация работы в диагностических центрах:

тез.докл. научно-практической конф. - Караганда. 1993.- С.141.

39. Состояние свободнорадикального окисления при послеоперационных пневмониях в крови у больных перитонитом // Здравоохранение Казахстана - 1993,- N 3,- С.25 - 27 (соавторы: С.В.Лохвицкий. В. С. Донченко, В. В. Снисаренко).

40.Состояние системы антиоксидантной защиты у стажированных шахтеров и горняков с ранними проявлениями антракосиликоза //Коррекция и управление функциональным состоянием в процессе трудовой деятельности: Тез. докл. международной конф. стран СНГ - Караганда. 1993,- С. 120.

41.Использование витаминов для коррекции антиоксидантного статуса шахтеров с пылевой патологией органов дыхания //Коррекция и управление функциональным состоянием в процессе трудовой деятельности: Тез.докл. международной конф.стран СНГ - Караганда. 1993,- С.149 (соавторы:!.3.Сейсембеков. С.К.Куанышбаев, Б.Д.Досов и др.).

42. Процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантный статус при неспецифических заболеваниях легких // Тез. докл.I конгресса пульмонологов и аллергологов Центральной Азии - Ташкент, 1994.-С. 18 (соавторы: Р. А. Бакенова. Т.З. Сейсембеков).

43. Характеристика окислительных процессов в крови и моче стажированных шахтеров // Здравоохранение Казахстана - 1994.-N5.-0. 42 - 44.

44.Роль перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты в развитии антракоза в эксперименте и клинике (Деп. в Казго-сИНТИ 25.07.94. Регистрационный номер - 5174-Ка94,- 116 с.)

45. Сравнительная характеристика перекисных процессов у шахтеров. больных осложненным и неосложненным антракосиликозом // Актуальные проблемы клинической медицины: Респ. сб. науч.тр.- Караганда. 1994.- С. 419 - 424.

46.Использование антиоксидантов в комплексном лечении шахтеров с ранними проявлениями антракосиликоза //Актуальные проблемы клинической медицины: Респ. сб. науч. тр. - Караганда, 1994'. - С. 415 -419.